CN117305145A - 一种在高盐条件下有效降解苯系物与烷烃的菌株及其获取方法和应用 - Google Patents

一种在高盐条件下有效降解苯系物与烷烃的菌株及其获取方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种在高盐条件下有效降解苯系物与烷烃的菌株及其获取方法和应用，所述菌株命名为SJBP16，其保藏编号为CCTCCNo.M2020780。菌株的获取方法包括以下步骤：采集被石油污染的土壤作为微生物源；制备含碳源的液体无机盐培养基，调pH值至7.0‑7.4，高温灭菌；将土壤在超净台下接种到液体无机盐培养基中，在恒温摇床中进行富集培养；重复培养多次后，在固体无机盐培养基平板上反复划线培养直至分离出单菌株，将单菌株接种入上述液体无机盐培养基内驯化；重复上述划线、分离、驯化操作3‑5次即可。本发明菌株具有高盐条件下高效降解苯系物与石油烃物质的特性，可应用于含这些石油污染物的土壤环境修复。

Description

一种在高盐条件下有效降解苯系物与烷烃的菌株及其获取方 法和应用
技术领域
本发明涉及环境工程和微生物工程技术领域，特别涉及一种在高盐条件下有效降解苯系物与烷烃的菌株及其获取方法和应用。
背景技术
石油污染是指石油开采、运输、装卸、加工和使用过程中，由于泄漏和排放石油引起的污染。石油污染一方面是由于石油污染物在被太阳紫外线照射后，发生物理化学反应，生成光化学烟雾，污染大气环境，同时产生致癌物和温室效应，破坏臭氧层。另一方面，石油污染物会进入水体或土壤，造成土壤盐碱化与毒化，导致土壤破坏和废毁；而且石油中的苯系物、烃类与芳烃类化合物具有强烈的致畸、致癌和致突变效应，且具有生物累积效应，可通过食物链进入生物体与人体，威胁生物和人类健康。因此，研究石油污染的控制与修复问题越来越受到各国政府与研究者的重视。
目前，石油污染土壤的修复方法主要包括物理法、化学法及生物法。自上世纪80年代以来，石油污染土壤的生物修复技术越来越引起人们的关注，也取得了很大进步。生物修复是利用生物的生命代谢活动减少土壤环境中有毒有害物的浓度，使污染土壤恢复到健康状态的过程。比较而言，生物法具有物理法和化学法不可比拟的优势。首先是生物法的处理费用低，其处理成本大约只有物化方法的三分之一；其次是生物法的修复操作简单，可实现原位修复；再次，生物法修复对环境的二次污染小。目前，治理石油烃类污染土壤的生物修复技术主要有两类：一类是微生物修复技术，按修复的地点又可分为原位生物修复和异位生物修复；另一类是植物修复法。由于微生物资源丰富、易于培养、对环境的耐受性较强，因此，微生物修复是生物修复中的主要方法，具有广阔的应用前景。微生物修复石油污染环境的核心是从环境中筛选或富集可高效稳定降解石油污染物的功能菌株。由于苯系物和烃类(饱和烃、芳烃)是石油污染物的主要组分，因此筛选鉴定对这两类化合物具有降解效能的菌株，即有可能实现石油污染土壤的有效修复。同时，由于石油污染的土壤往往存在着易板结、高盐碱等问题，这也就要求应用于实际石油污染土壤修复的微生物要对高盐等条件具有一定的适应性。
发明内容
针对上述问题，本发明的目的是：提供一种在高盐条件下有效降解苯系物与烷烃的菌株及其获取方法和应用，该香茅醇假单胞菌可在高盐环境中，稳定高效地分解苯系物与长链烷烃，可用于土壤环境中石油污染物的生物降解与环境修复。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
本发明公开了一种在高盐条件下有效降解苯系物与烷烃的菌株，命名为SJBP16，其保藏编号为CCTCCNo.M2020780。
优选地，所述菌株的16SrDNA片段的序列如SEQIDNO.1所示。
本发明公开了一种在高盐条件下有效降解苯系物与烷烃的菌株的获取方法，包括以下步骤：
采集被石油污染的土壤作为微生物源；
制备含碳源的液体无机盐培养基，调pH值至7.0-7.4，高温灭菌；
将石油污染的土壤样品在超净台下接种到液体无机盐培养基中，在恒温摇床中进行富集培养；
重复培养多次后，在固体无机盐培养基平板上反复划线培养，直至分离出单菌株，再将单菌株接种入上述液体无机盐培养基内驯化；重复上述划线、分离、驯化操作3-5次，获得纯的香茅醇假单胞菌，命名为SJBP16，其保藏编号为CCTCCNo.M2020780。
优选地，所述碳源为烷烃或苯系物，所述苯系物为二甲苯或甲苯；当碳源为烷烃时，所述液体无机盐培养基中烷烃的浓度为500mg/L-2g/L；当碳源为二甲苯时，所述液体无机盐培养基中二甲苯的浓度为10mg/L-50mg/L；当碳源为甲苯时，所述液体无机盐培养基中甲苯的浓度为10mg/L-50mg/L。
优选地，所述液体无机盐培养基的无机成分及浓度如下：K2HPO4，1g/L；KH2PO4，2.25g/L；NaCl，2.0g/L；(NH4)2HPO4，1g/L；MgCl2·6H2O，25mg/L；FeCl3，0.3mg/L；CaCl2，2.5mg/L；KNO3，1.25g/L。
优选地，所述高温灭菌的条件为：121℃灭菌15-20min。
优选地，所述调pH值至7.0-7.4为采用盐酸调pH值至7.0-7.4。
优选地，所述将石油污染的土壤样品在超净台下接种到液体无机盐培养基中，在恒温摇床中进行富集培养的具体过程如下：
待高温灭菌后的液体无机盐培养基温度降低至25-30℃后，将土壤按照5W/V％的接种量在超净台下接种，在28℃、180-200rpm的恒温摇床培养箱中进行富集培养14-16天。
本发明公开了一种在高盐条件下有效降解苯系物与烷烃的菌株的应用，用于高盐环境中石油类污染物的分解与去除，其中，所述的菌株，命名为SJBP16，其保藏编号为CCTCCNo.M2020780。
优选地，所述石油类污染物包括苯系物和/或烷烃，其中，苯系物为二甲苯、甲苯中的一种或两种；烷烃为C16－C18的烷烃。
优选地，所述高盐环境为含氯化钠的环境且氯化钠的浓度不低于2.0g/L。
本发明的有益效果在于：
本发明的菌株(香茅醇假单胞菌SJBP16)可在高达50mg/L的苯系物(二甲苯或甲苯)为唯一碳源的培养基中正常生长，可耐受2.0g/L的高盐环境。48小时内能将10mg/L的二甲苯完全分解，72小时可完全分解20mg/L的二甲苯；七天对50mg/L的二甲苯分解率超过70％。
本发明的香茅醇假单胞菌SJBP16可在高达2g/L的长链烷烃为唯一碳源的培养基中正常生长，可耐受2.0g/L的高盐环境。48小时内能将500mg/L的C18烷烃完全分解，72小时可完全分解1g/L的C18烷烃；七天对2g/L的C18烷烃分解率超过70％。
综上所述：由于本发明的香茅醇假单胞菌SJBP16菌株具有高盐条件下高效降解苯系物与石油烃物质的特性，可应用于含这些石油污染物的土壤环境修复。本发明与现已发现的石油降解菌株相比，其降解效率显著提高，降解周期明显缩短，环境适应性更好。
本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。本发明的目的和其他优点可通过在说明书、权利要求书以及附图中所指出的结构来实现和获得。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明的香茅醇假单胞菌SJBP16菌株的平板划线图；
图2为本发明的香茅醇假单胞菌SJBP16菌株以不同浓度的C16烷为单一碳源时菌株的生长曲线，其中，■100mg/L；●250mg/L；▲500mg/L；▼1g/L；◆2g/L；
图3为本发明的香茅醇假单胞菌SJBP16菌株以不同浓度的C18烷为单一碳源时菌株的生长曲线，其中，■100mg/L；●250mg/L；▲500mg/L；▼1g/L；◆2g/L；
图4为本发明的香茅醇假单胞菌SJBP16菌株以不同浓度的二甲苯为单一碳源时菌株的生长曲线，其中，■10mg/L；●20mg/L；▲50mg/L；
图5为本发明的香茅醇假单胞菌SJBP16菌株以不同浓度的甲苯为单一碳源时菌株的生长曲线，其中，■10mg/L；●20mg/L；▲50mg/L；
图6为本发明的香茅醇假单胞菌SJBP16菌株对不同浓度的的正十八烷的降解曲线，其中，●500mg/L；▲1g/L；▼2g/L；
图7为本发明的香茅醇假单胞菌SJBP16菌株对不同浓度的二甲苯的降解曲线，其中，■10mg/L；●20mg/L；▲50mg/L。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地说明，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明所提供的香茅醇假单胞菌SJBP16来源于某炼油厂的石油污染土壤中，经过人工富集、筛分及纯化所得。SJBP16菌落呈圆形，***，菌落呈浅黄色，半透明，革兰氏染色阴性，直或弯的杆菌，单个或成对，无芽胞，好氧，30℃下生长良好。经对该菌株的16SrDNA的鉴定与序列分析，表明该菌株为香茅醇假单胞菌(Pseudomonascitronellolis)。该香茅醇假单胞菌SJBP16菌株已于2020年11月27日在中国典型培养物保藏中心(地址：湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山)保藏，登记入册编号为CCTCCNo.M2020780。
下面结合实施例对本发明作进一步的描述，但本发明的实施不局限于此。
一、香茅醇假单胞菌(Pseudomonascitronellolis)SJBP16菌株的获取与保藏
采集某炼油厂的石油污染土壤作为微生物源，冷藏运回实验室。制备含有500mg/L烷烃或50mg/L二甲苯或50mg/L甲苯的200mL液体无机盐培养基，按照5W/V％(5W/V％即为土壤的质量占液体无机盐培养基体积的百分比为5％)的土壤接种量接种于含有100mL液体无机盐培养基的500mL三角瓶中，具体地，所述液体无机盐培养基的无机成分及浓度如下：K2HPO4，1g/L；KH2PO4，2.25g/L；NaCl，2.0g/L；(NH4)2HPO4，1g/L；MgCl2·6H2O，25mg/L；FeCl3，0.3mg/L；CaCl2，2.5mg/L；KNO3，1.25g/L，用盐酸调pH值为7.0-7.4，高压灭菌锅121℃灭菌15-20min，待培养基温度降低到28℃左右(25-30℃)时，在超净台下接种；土壤接种后在28℃、200rpm(此处转速在180-200rpm均可)的恒温摇床培养箱中进行富集培养15天(此处时间在14-16天均可)。重复培养五次后，在固体无机盐培养基平板(固体无机盐培养基为上述液体无机盐培养基+20.0g/L琼脂)上反复划线培养，直至分离出单菌株。之后再将菌株接种入上述液体无机盐培养基内驯化，上述操作(划线、分离、驯化)重复多次，得到纯化的可降解石油类物质的SJBP16菌株，平板划线图如图1所示。SJBP16菌落呈圆形，***，菌落呈浅黄色，半透明，革兰氏染色阴性，直或弯的杆菌，单个或成对，无芽孢，好氧，30℃下生长良好。经对该菌株的16SrDNA的鉴定与序列分析，表明该菌株为香茅醇假单胞菌(Pseudomonascitronellolis)。该香茅醇假单胞菌SJBP16菌株已于2020年11月27日在中国典型培养物保藏中心(地址：湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山)保藏，登记入册编号为CCTCCNo.M2020780。
二、香茅醇假单胞菌(Pseudomonascitronellolis)SJBP16菌株的鉴定
将分离出的SJBP16菌株进行16SrDNA序列的扩增、序列测定与数据库比对。利用基因组提取试剂盒(TIANGEN，北京)提取SJBP16菌株的基因组DNA，之后，利用16SrDNA片段扩增与检测试剂盒(Takara，大连)扩增该菌株的16SrDNA片段并测定序列。SJBP16菌株的16SrDNA序列如SEQIDNO.1所示。与NCBI数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)比对，表明该SJBP16菌株为香茅醇假单胞菌Pseudomonascitronellolis，菌株为无芽孢杆菌，单个，属革兰氏阴性菌，好氧，化能异养。
SEQIDNO.1
1GACGTCAATCTCGTGGTACCGTCCCCTTGCGGTTAGACTAGCTACTTCTGGAGCAACCCACTCCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGTGACATTCTGATTCACGATTACTAGCGATTCCGACTTCACGCAGTCGAGTTGCAGACTGCGATCCGGACTACGATCGGTTTTCTGGGATTAGCTCCACCTCGCGGCTTGGCAACCCTCTGTACCGACCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCTGGCCGTAAGGGCCATGATGACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTCCTTAGAGTGCCCACCTTAACGTGCTGGTAACTAAGGACAAGGGTTGCGCTCGTTACGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGCCATGCAGCACCTGTGTTCCGATTCCCGAAGGGCACTCCCGCATCTCTGCAGGATTCCGGACATGTCAAGACCAGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCATTTGAGTTTTAACCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGTCGACTTATCGCGTTAGCTGCGCCACTAAGATCTCAAGGATCCCAACGGCTAGTCGACATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGCACCTCAGTGTCAGTATCAGTCCAGGCGGTCGCCTTCGCCACTGGTGTTCCTTCCTATATCTACGCATTTCACCGCTACACAGGAAATTCCACCACCCTCTACCGTACTCTAGTCAGGCAGTTATGGATGCAGTTCCCAGGTTGAGCCCGGGGATTTCACATCTCATCTTACCAAACCACCTACGCGCGCTTTACGCCCAGTAATTCCGATTAACGCTTGCACCCTTCGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGAAGTTAGCCAGATGCTTATTCTGTTGGTAACGTCAAAACAGCAAGGTATTAACTTACTGCCCTTCCTCCCAACTTAAAGTGCTTTACAATCCGAAGACCTTCTTCACACACGCGGCATGACTGGATCAGGCTTTCGCCCATTGTCCAATATTCCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGAACGAGTCTCAGTTCCAGTGTGACTGATCATCCTCTCAGACCAGTTACGGATCGTCGCCTAGGTGAGCCATTACCCCACCTACTAGCTAATCCGACCTAGGCTCATCTGATAGCGTGAGGTCCGAAGATCCCCCACTTTCTCCCGTAGGACGTATGCGGTATTAGCGCTCCTTTCGGAACGTTGTCCCCCACTACCAGGCAGATTCCTAGGCATTACTCACCCGTCCGCCGCTGAATCCGGGAGCAAGCTCCCTCATCCGCTCGACTGCATGGTAGCTGCCGCACCCTA 1439
三、香茅醇假单胞菌(Pseudomonascitronellolis)SJBP16菌株对苯系物与长链烷烃的降解能力
(1)香茅醇假单胞菌(Pseudomonascitronellolis)SJBP16菌株对苯系物的降解能力
将PseudomonascitronellolisSJBP16菌株划固体无机盐培养基平板，30℃过夜培养。挑取单克隆，分别接种于以10mg/L-50mg/L的苯系物(甲苯、二甲苯)为唯一碳源的500ml液体无机盐培养基(所述液体无机盐培养基的无机成分及浓度如下：K2HPO4，1g/L；KH2PO4，2.25g/L；NaCl，2.0g/L；(NH4)2HPO4，1g/L；MgCl2·6H2O，25mg/L；FeCl3，0.3mg/L；CaCl2，2.5mg/L；KNO3，1.25g/L。)中，28℃，200rpm恒温振荡培养箱中培养7天。采集不同时间点的2个3ml平行样品。
一个样品利用紫外分光光度仪(UV-2100spectrophotometer，Unic)测定600nm吸光度值用以表示微生物生长情况，结果如图4至图5所示，图4为本发明的香茅醇假单胞菌SJBP16菌株以不同浓度的二甲苯为单一碳源时菌株的生长曲线，其中，■10mg/L；●20mg/L；▲50mg/L；图5为本发明的香茅醇假单胞菌SJBP16菌株以不同浓度的甲苯为单一碳源时菌株的生长曲线，其中，■10mg/L；●20mg/L；▲50mg/L。
另一个样品中加入1/6体积正己烷(HPLC纯)混匀，超声5min，3000g离心5min，取上层有机相；重复两次，合并萃取液。加入无水Na2SO4混合，加内标正十五烷(终浓度100ng/μL)后定容到3mL。采用气相色谱(GC，Agilent6850)测定苯系物与石油烃浓度，色谱柱为DB-5MScapillary柱(0.25mm×30m×0.25μm)。不同石油类物质(苯系物)的浓度测定结果如图7所示，图7为本发明的香茅醇假单胞菌SJBP16菌株对不同浓度的二甲苯的降解曲线，其中，■10mg/L；●20mg/L；▲50mg/L。
从图4和图5的生长曲线和图7的降解曲线可以看出：
本发明的菌株SJBP16可在高达50mg/L的苯系物(二甲苯或甲苯)为唯一碳源且含2.0g/L的氯化钠的液体无机盐培养基中正常生长。该菌株可在48小时内将10mg/L的二甲苯完全分解，72小时可完全分解20mg/L的二甲苯；七天对50mg/L的二甲苯分解率超过70％。
(2)香茅醇假单胞菌(Pseudomonascitronellolis)SJBP16菌株对长链烷烃的降解能力
将PseudomonascitronellolisSJBP16菌株划固体无机盐培养基平板，30℃过夜培养。挑取单克隆，分别接种于以500mg/L-2g/L的长链烷烃(C16烷、C18烷)为唯一碳源的500ml液体无机盐培养基(所述液体无机盐培养基的无机成分及浓度如下：K2HPO4，1g/L；KH2PO4，2.25g/L；NaCl，2.0g/L；(NH4)2HPO4，1g/L；MgCl2·6H2O，25mg/L；FeCl3，0.3mg/L；CaCl2，2.5mg/L；KNO3，1.25g/L。)中，28℃，200rpm恒温振荡培养箱中培养7天。采集不同时间点的2个3ml平行样品。
一个样品利用紫外分光光度仪(UV-2100spectrophotometer，Unic)测定600nm吸光度值用以表示微生物生长情况，结果如图2至图3所示，图2为本发明的香茅醇假单胞菌SJBP16菌株以不同浓度的C16烷为单一碳源时菌株的生长曲线，其中，■100mg/L；●250mg/L；▲500mg/L；▼1g/L；◆2g/L；图3为本发明的香茅醇假单胞菌SJBP16菌株以不同浓度的C18烷为单一碳源时菌株的生长曲线，其中，■100mg/L；●250mg/L；▲500mg/L；▼1g/L；◆2g/L。
另一个样品中加入1/6体积正己烷(HPLC纯)混匀，超声5min，3000g离心5min，取上层有机相；重复两次，合并萃取液。加入无水Na2SO4混合，加内标正十五烷(终浓度100ng/μL)后定容到3mL。采用气相色谱(GC，Agilent6850)测定长链烷烃(C18烷)浓度，色谱柱为DB-5MScapillary柱(0.25mm×30m×0.25μm)。不同石油类物质(长链烷烃)的浓度测定结果如图6所示，图6为本发明的香茅醇假单胞菌SJBP16菌株对不同浓度的的正十八烷的降解曲线，其中，●500mg/L；▲1g/L；▼2g/L。
从图2和图3的生长曲线和图6的降解曲线可以看出：
本发明的菌株SJBP16可在高达2g/L的长链烷烃为唯一碳源且含2.0g/L的氯化钠的培养基中正常生长。48小时内能将500mg/L的C18烷烃完全分解，72小时可完全分解1g/L的C18烷烃；七天对2g/L的C18烷烃分解率超过70％。
尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
序列表
<110> 中国石油集团安全环保技术研究院
<120> 一种在高盐条件下有效降解苯系物与烷烃的菌株及其获取方法和应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1439
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
gacgtcaatc tcgtggtacc gtccccttgc ggttagacta gctacttctg gagcaaccca 60
ctcccatggt gtgacgggcg gtgtgtacaa ggcccgggaa cgtattcacc gtgacattct 120
gattcacgat tactagcgat tccgacttca cgcagtcgag ttgcagactg cgatccggac 180
tacgatcggt tttctgggat tagctccacc tcgcggcttg gcaaccctct gtaccgacca 240
ttgtagcacg tgtgtagccc tggccgtaag ggccatgatg acttgacgtc atccccacct 300
tcctccggtt tgtcaccggc agtctcctta gagtgcccac cttaacgtgc tggtaactaa 360
ggacaagggt tgcgctcgtt acgggactta acccaacatc tcacgacacg agctgacgac 420
agccatgcag cacctgtgtt ccgattcccg aagggcactc ccgcatctct gcaggattcc 480
ggacatgtca agaccaggta aggttcttcg cgttgcttcg aattaaacca catgctccac 540
cgcttgtgcg ggcccccgtc aattcatttg agttttaacc ttgcggccgt actccccagg 600
cggtcgactt atcgcgttag ctgcgccact aagatctcaa ggatcccaac ggctagtcga 660
catcgtttac ggcgtggact accagggtat ctaatcctgt ttgctcccca cgctttcgca 720
cctcagtgtc agtatcagtc caggcggtcg ccttcgccac tggtgttcct tcctatatct 780
acgcatttca ccgctacaca ggaaattcca ccaccctcta ccgtactcta gtcaggcagt 840
tatggatgca gttcccaggt tgagcccggg gatttcacat ctcatcttac caaaccacct 900
acgcgcgctt tacgcccagt aattccgatt aacgcttgca cccttcgtat taccgcggct 960
gctggcacga agttagccag atgcttattc tgttggtaac gtcaaaacag caaggtatta 1020
acttactgcc cttcctccca acttaaagtg ctttacaatc cgaagacctt cttcacacac 1080
gcggcatgac tggatcaggc tttcgcccat tgtccaatat tccccactgc tgcctcccgt 1140
aggagtctgg aacgagtctc agttccagtg tgactgatca tcctctcaga ccagttacgg 1200
atcgtcgcct aggtgagcca ttaccccacc tactagctaa tccgacctag gctcatctga 1260
tagcgtgagg tccgaagatc ccccactttc tcccgtagga cgtatgcggt attagcgctc 1320
ctttcggaac gttgtccccc actaccaggc agattcctag gcattactca cccgtccgcc 1380
gctgaatccg ggagcaagct ccctcatccg ctcgactgca tggtagctgc cgcacccta 1439

Claims (11)

1.一种在高盐条件下有效降解苯系物与烷烃的菌株，其特征在于，命名为SJBP16，其保藏编号为CCTCCNo.M2020780。
2.根据权利要求1所述的一种在高盐条件下有效降解苯系物与烷烃的菌株，其特征在于，所述菌株的16SrDNA片段的序列如SEQ ID NO.1所示。
3.一种在高盐条件下有效降解苯系物与烷烃的菌株的获取方法，其特征在于，包括以下步骤：
采集被石油污染的土壤作为微生物源；
制备含碳源的液体无机盐培养基，调pH值至7.0-7.4，高温灭菌；
将石油污染的土壤样品在超净台下接种到液体无机盐培养基中，在恒温摇床中进行富集培养；
重复培养多次后，在固体无机盐培养基平板上反复划线培养，直至分离出单菌株，再将单菌株接种入上述液体无机盐培养基内驯化；重复上述划线、分离、驯化操作3-5次，获得纯的香茅醇假单胞菌，命名为SJBP16，其保藏编号为CCTCCNo.M2020780。
4.根据权利要求3所述的一种在高盐条件下有效降解苯系物与烷烃的菌株的获取方法，其特征在于，所述碳源为烷烃或苯系物，所述苯系物为二甲苯或甲苯；当碳源为烷烃时，所述液体无机盐培养基中烷烃的浓度为500mg/L-2g/L；当碳源为二甲苯时，所述液体无机盐培养基中二甲苯的浓度为10mg/L-50mg/L；当碳源为甲苯时，所述液体无机盐培养基中甲苯的浓度为10mg/L-50mg/L。
5.根据权利要求3所述的一种在高盐条件下有效降解苯系物与烷烃的菌株的获取方法，其特征在于，所述液体无机盐培养基的无机成分及浓度如下：K2HPO4，1g/L；KH2PO4，2.25g/L；NaCl，2.0g/L；(NH4)2HPO4，1g/L；MgCl2·6H2O，25mg/L；FeCl3，0.3mg/L；CaCl2，2.5mg/L；KNO3，1.25g/L。
6.根据权利要求3所述的一种在高盐条件下有效降解苯系物与烷烃的菌株的获取方法，其特征在于，所述高温灭菌的条件为：121℃灭菌15-20min。
7.根据权利要求3所述的一种在高盐条件下有效降解苯系物与烷烃的菌株的获取方法，其特征在于，所述调pH值至7.0-7.4为采用盐酸调pH值至7.0-7.4。
8.根据权利要求3所述的一种在高盐条件下有效降解苯系物与烷烃的菌株的获取方法，其特征在于，所述将石油污染的土壤样品在超净台下接种到液体无机盐培养基中，在恒温摇床中进行富集培养的具体过程如下：
待高温灭菌后的液体无机盐培养基温度降低至25-30℃后，将土壤按照5W/V％的接种量在超净台下接种，在28℃、180-200rpm的恒温摇床培养箱中进行富集培养14-16天。
9.一种在高盐条件下有效降解苯系物与烷烃的菌株的应用，其特征在于，用于高盐环境中石油类污染物的分解与去除，其中，所述的菌株，命名为SJBP16，其保藏编号为CCTCCNo.M2020780。
10.根据权利要求9所述的一种在高盐条件下有效降解苯系物与烷烃的菌株的应用，其特征在于，所述石油类污染物包括苯系物和/或烷烃，其中，苯系物为二甲苯、甲苯中的一种或两种；烷烃为C16－C18的烷烃。
11.根据权利要求9所述的一种在高盐条件下有效降解苯系物与烷烃的菌株的应用，其特征在于，所述高盐环境为含氯化钠的环境且氯化钠的浓度不低于2.0g/L。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN118028181A (zh) * 2024-04-11 2024-05-14 克拉玛依市三达检测分析有限责任公司 微生物固定化菌剂及其制备方法和应用

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