CN117298085A - 托品酸及其衍生物在制备免疫与炎症相关疾病治疗药物中的医药用途 - Google Patents

托品酸及其衍生物在制备免疫与炎症相关疾病治疗药物中的医药用途 Download PDF

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CN117298085A CN202311318843.1A CN202311318843A CN117298085A CN 117298085 A CN117298085 A CN 117298085A CN 202311318843 A CN202311318843 A CN 202311318843A CN 117298085 A CN117298085 A CN 117298085A
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Abstract

本发明属于医药技术领域，具体涉及托品酸及其衍生物在制备治疗免疫和炎症相关疾病药物中的用途及治疗免疫和炎症相关疾病的药物。所述的托品酸及其衍生物为式I‑IV化合物或其药学上可接受的盐，以及所述的式I‑IV化合物或其药学上可接受的盐的溶剂化合物、对映异构体、非对映异构体、互变异构体或其任意比例的混合物，包括外消旋混合物。动物试验显示，托品酸及其衍生物具有广谱免疫调节、抗炎和镇痛作用，对众多免疫及炎症相关疾病动物模型的病理学指标具有明显改善作用，能够调节异常的免疫反应趋于正常，并发挥良好的抗炎、镇痛效果，可适应不同疾病程度、不同类型免疫及炎症相关疾病患者，能够在产业上应用。

Description

托品酸及其衍生物在制备免疫与炎症相关疾病治疗药物中的 医药用途
本申请是申请日为2023年03月08日、申请号为202310217736.3、发明名称为“托品酸及其衍生物在制备免疫与炎症相关疾病治疗药物中的医药用途”的发明专利申请的分案申请。
技术领域
本发明属于医药技术领域，尤其涉及托品酸及其衍生物在制备免疫与炎症相关疾病治疗药物中的用途，以及治疗免疫炎症相关疾病的药物。
背景技术
免疫性疾病是一大类以局部或全身性异常炎症免疫反应为特征的疾病，主要包括超敏反应、免疫缺陷病及自身免疫病等。涉及I型超敏反应如青霉素过敏反应、药物引起的药疹、季节、花粉或尘埃引起的过敏性鼻炎、咽喉炎、结膜炎、支气管哮喘、湿疹及荨麻疹等；II型超敏反应如新生儿溶血反应、药物引起的溶血性贫血和再生障碍性贫血；III型超敏反应如肾小球肾炎。IV型超敏反应如结核病、梅毒等。与感染有关的支气管炎或肺炎、胃肠道炎、子***、中耳炎、扁桃体炎、脓疖、鼻窦炎、脓肿或肉芽肿、败血症、脓毒血症、心肌炎、脑膜炎、骨关节炎、胸膜炎、胆囊炎、骨髓炎、***炎、尿道炎、膀胱炎、肛肠炎、甲沟炎和毛囊炎等。自身免疫性疾病如肝炎、***性红斑狼疮、脊柱炎、类风湿性关节炎、肾炎、糖尿病、胰腺炎、肠炎、风湿性心脏病、肺炎、硬皮病、血管炎、天疱疮、皮肌炎、混合性***病、自身免疫性溶血性贫血及自身免疫性甲状腺炎等。据估计，免疫性疾病发病呈逐年上升趋势，其中全球约有7.6％～9.4％的人群患有各种类型的自身免疫性疾病，该病难以治愈，大多数患者需要长期甚至终身服药，且部分疾病病情凶险，如狼疮肾病，严重影响患者生活质量，威胁患者生命安全。大约5000万美国人(约占总人口的1/5)患有自身免疫性疾病，其中约75％的患者为女性。免疫性疾病已经成为除心血管疾病和癌症外第三大慢性病。中国目前虽然尚无确切的发病数据，但患者人群在逐年增加。
免疫性疾病的治疗包括两个目标，一是症状缓解和功能维持，二是延缓组织损害进程。目前，治疗免疫性疾病药物主要分为非甾体抗炎药(NSAIDs)、甾体抗炎药(SAIDs)、改善病情抗风湿药(DMARDs)、生物制剂及天然药物。NSAIDs是治疗自身免疫病的常用药物，能有效减轻患者临床症状和体征，消除局部炎症反应，但是该类药不能控制疾病的进展，其共有的不良反应包括中枢神经***症状、心血管损害、胃肠道症状、造血***改变、肝肾功能不全、哮喘和皮肤药疹等。SAIDs具有较强抗炎作用和免疫抑制作用，阻止炎症细胞向炎症部位聚集，抑制炎性因子释放，抑制TB淋巴细胞增殖和分泌，该类药物不良反应多，停药后会复发，目前临床多与其他免疫抑制剂联合使用。DMARDs广泛应用于自身免疫病慢性肾病、移植排斥反应及肿瘤等的治疗，虽然传统DMARDs化学结构和作用机制不尽相同，但临床药效学特征相似，即起效慢，用药数周或数月后，症状和体征逐渐减轻，长时间连续服药可获得比较稳定的疗效，主要不良反应包括胃肠道反应、骨髓抑制、感染及肝肾损害等。生物制剂通过阻断关键炎症细胞因子或细胞表面分子而发挥治疗作用，如靶向IL-1、IL-6、TNF-α和IL-17的单克隆抗体、抗CD20单抗、B淋巴细胞刺激因子(BAFF)抑制剂、T细胞抑制剂、整合素单克隆抗体及选择性黏附分子抑制剂等，该类药物多数处于临床试验阶段，少数已上市应用，不良反应多且较为严重，个别药物因严重不良反应而被禁用。用于治疗免疫性疾病的天然药物包括苷类和生物碱，苷类药物如白芍总苷、人参总苷、绞股蓝总苷、黄芪甲苷、雷公藤总苷及三七总皂苷等，生物碱类如青藤碱、川乌总碱、槐果碱及雷公藤新碱等，该类药物不良反应较少，多具有抗炎、镇痛和免疫抑制作用，但临床治疗疾病针对性不强，效果不佳。随着对免疫性疾病病理机制的深入阐明和新药物靶点的发现，治疗炎症免疫病的药物除了NSAIDs、SAIDs、传统DMARDs外，靶向小分子药物，如Tofacitinib、Baricitinib、Upatacitinib及Filgotinib等也被研发应用于临床，这些药物疗效确切，但也存在胃肠道症状、免疫抑制、骨髓抑制、感染、新生肿瘤等不良反应。因此研发具有免疫调节和抗炎作用且不损害机体生理功能的小分子药物是治疗免疫及炎症相关病的主要策略和方向。
综上，免疫及炎症相关疾病患者群体庞大，治疗药物或方法种类虽然很多，但疗效有限，常需要长期、反复甚至终身接受治疗，有些药物虽取得一时疗效，但短期复发率高，多数药物常常受其自身固有的毒性及选择性的制约，***及局部的各种不良反应不可避免。针对上述问题，目前迫切需要开发起效快、疗程短、用量小、不良反应小、复发率低、价格低及使用方便的治疗药物，同时应兼顾外用、口服及注射等药物剂型的开发，以适应不同疾病程度、不同类型的患者。本发明前期经大量的动物实验研究，筛选并明确了托品酸(DL-TropicAcid，别名2-苯基-3-羟基丙酸)及其衍生物治疗免疫和炎症相关疾病的有效性。托品酸是合成阿托品的中间体，原料价格低廉，目前尚未见托品酸及其衍生物防治免疫和炎症相关疾病的报道。
发明内容
本发明一方面提供托品酸及其衍生物、其药学上可接受的盐、溶剂化合物、对映异构体、非对映异构体、互变异构体或其任意比例的混合物在制备预防和/或治疗免疫和炎症相关疾病中的用途，所述托品酸及其衍生物具有以下式A所示的结构：
其中，R1-R5各自独立地选自-H、-OH或者C1-C6的烷氧基。
在一个实施方案中，R1-R5各自独立的选自-H或-OH。
在一个实施方案中，R1和R5选自-H，R2-R4各自独立的选自-H或-OH。
在一个实施方案中，R1和R5选自-H，R2-R4中有两个或三个选自-OH，其余的选自-H。
在一个实施方案中，R1-R5中至少有两个选自-OH。
在一个实施方案中，R1-R5中有两个或三个选自-OH。
在一个实施方案中，R2-R4中有两个或三个选自-OH。
在一个实施方案中，所述托品酸及其衍生物选自以下式I-式IV所示化合物：
其中，式I为托品酸(DL-Tropic Acid)，式II为4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸(4-Hydroxy-α-(hydroxymethyl)benzeneacetic acid)，式III为3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸(3,4-Dihydroxy-α-(hydroxymethyl)benzeneacetic acid)和式IV为3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸(3,4,5-Trihydroxy-α-(hydroxymethyl)benzeneacetic acid)。
本发明所述托品酸及其衍生物具有免疫调节、抗炎和镇痛作用，对众多免疫及炎症相关疾病动物模型的病理学指标具有明显改善作用，能够调节异常的免疫反应趋于正常，并发挥良好的抗炎、镇痛效果。
在一个实施方案中，所述免疫和炎症相关疾病选自过敏性鼻炎、支气管炎、支气管哮喘、咽喉炎、结膜炎、湿疹、荨麻疹、湿疹、新生儿溶血反应、溶血性贫血、再生障碍性贫血、肾炎、结核病、梅毒、肺炎(包括新冠)、胃肠道炎、子***、中耳炎、败血症、脓毒血症、心肌炎、脑膜炎、扁桃体炎、鼻窦炎、胸膜炎、胆囊炎、骨髓炎、***炎、尿道炎、膀胱炎、肛肠炎、甲沟炎和毛囊炎、骨关节炎、肝炎、***性红斑狼疮、脊柱炎、类风湿性关节炎、糖尿病、胰腺炎、肠炎、风湿性心脏病、血管炎、硬皮病、天疱疮、皮肌炎、混合性***病及甲状腺炎中的一种或几种。
本发明第二个方面提供一种免疫和炎症相关疾病预防和/或治疗药物，该免疫和炎症相关疾病治疗药物中含有托品酸及其衍生物、其药学上可接受的盐、溶剂化合物、对映异构体、非对映异构体、互变异构体或其任意比例的混合物。
本发明所提供的预防和/或治疗免疫和炎症相关疾病的药物具有广谱免疫调节、抗炎及镇痛作用，效果显著。
在一个实施方案中，所述托品酸及其衍生物、其药学上可接受的盐、溶剂化合物、对映异构体、非对映异构体、互变异构体或其任意比例的混合物在本发明所述药物中作为活性成分。优选的，其作为主要活性成分；更优选的，其作为唯一活性成分。
上述用途和药物中，托品酸及其衍生物、其药学上可接受的盐、溶剂化合物、对映异构体、非对映异构体、互变异构体或其任意比例的混合物可以与药学上可接受的载体或者辅料制备成药物剂型外用药、口服给药或注射给药。
因此，本发明中，所述药物可以是外用药、口服药或者注射药。
本发明中，所述药物可以包含药学上可接受的载体或者辅料。所述药物可制成各种常规的固体剂型、液体剂型或半固体剂型，固体剂型如颗粒剂、片剂或胶囊剂等，液体剂型如喷雾剂及注射剂，半固体剂型如乳膏等。在一个方面中，所述药物的剂型可以是：散剂、片剂、包衣片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂、混悬剂、注射剂、喷雾剂、鼻用剂、气雾剂、粉雾剂、洗剂、搽剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂、凝胶剂、贴剂等。
本发明中，术语“药学上可接受的载体或者辅料”包括任何和所有的溶剂、共溶剂、分散介质、包衣材料、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如抗菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、稀释剂、助流剂、造粒剂、崩解剂、增稠剂、增粘剂、润滑剂、防结块剂、保湿剂、湿润剂、螯合剂、塑化剂、染料、矫味剂等和其组合，这是本领域技术人员所熟知的(例如参见Remington’s Pharmaceutical Sciences,19thEd.MackPrinting Company,1995；上海医药工业研究院等编著，药用辅料应用技术(第二版)，中国医药科技出版社，2002年；各国药用辅料标准对比手册1～3册，国家药典委员会编著，中国医药科技出版社，2016年；药用辅料手册，R.C.罗(Raymond C Rowe)，P.J.舍斯基(Paul J Sheskey)，P.J.韦勒(Paul J Weller)编，郑俊民主译，化学工业出版社，2005年等)。除了与活性成分不相容的载体和辅料外，在治疗或药物组合物中考虑使用任何常规载体和辅料。
例如，作为固体剂型中，所述药学上可接受的载体或者辅料可以包括以下至少一种：(a)填充剂例如淀粉、玉米淀粉、变性淀粉、可压性淀粉、乳糖、一水乳糖、微晶纤维素、环糊精、山梨醇、甘露醇、磷酸钙、氨基酸等；(b)粘合剂，例如淀粉浆、胶化淀粉、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、羟丙甲纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、低取代羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、海藻酸盐等；(c)保湿剂，例如甘油；(d)崩解剂，例如干淀粉、变性淀粉、羧甲淀粉纳、低取代羟丙基纤维素、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、微晶纤维素、泡腾崩解剂、交联聚乙烯吡咯烷酮等；(e)溶液阻滞剂，例如石蜡；(f)吸收促进剂，例如季铵化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸收剂，例如高岭土和膨润土；(i)润滑剂，例如滑石、硬脂酸、硬脂酸镁或钙、微粉硅胶、氢化蓖麻油和固体聚乙二醇、聚乙二醇4000-20000、十二烷基硫酸镁等。
本发明中，所述药物适用对象可以为人或其他恒温动物。当适用对像为人时，托品酸及其衍生物的单一或混合用量优选为1mg/kg·d～50mg/kg.d，进一步优选为10mg/kg·d～20mg/kg.d。化合物、药物组合物的治疗有效量是取决于个体的物种、体重、年龄及个体情况、被治疗的疾病或其严重程度。具备常用技能的医师、临床医师或兽医可以容易决定预防、治疗或抑制疾病发展过程中所需各活性成分的有效量。
本发明还提供一种式A所示的化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化合物、对映异构体、非对映异构体、互变异构体或其任意比例的混合物：
其中，R1-R5各自独立地选自-H或-OH；
条件是，R1-R5中至少有两个选自-OH。
在一个实施方案中，R1-R5中有两个或三个选自-OH。
在一个实施方案中，R2-R4中有两个或三个选自-OH。
在一个实施方案中，所述化合物选自以下式III-式IV所示化合物：
本发明化合物的药学上可接受的盐包括其碱加成盐和酸加成盐。优选地，所述碱加成盐选自钠盐、钾盐、钙盐、锂盐、镁盐、锌盐、铵盐、四甲基铵盐、四乙基铵盐、三乙胺盐、三甲基铵盐、乙胺盐、二乙醇胺盐、精氨酸盐或赖氨酸盐；所述酸加成盐，选自乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、三氟乙酸盐、马来酸盐等有机酸盐，以及盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐等无机酸盐。游离形式的本发明化合物可以被转化为盐形式的相应化合物；并且反之亦然。游离形式或盐形式和溶剂化物形式的本发明化合物可以被转化为非溶剂化物形式的游离形式或盐形式的相应化合物；并且反之亦然。
本发明化合物还包含其溶剂化物形式，其是指一个或多个溶剂分子与本发明化合物所形成的缔合物。形成溶剂化物的溶剂包括，但并不限于，水，异丙醇，乙醇，甲醇，二甲亚砜，乙酸乙酯，乙酸，氨基乙醇。
本发明化合物可以以异构体以及其混合物的形式存在；例如互变异构体、光学异构体、对映异构体、非对映异构体。本发明化合物可以例如包含不对称碳原子，并因此可以对映异构体或非对映异构体及其混合物的形式存在，例如以外消旋物的形式。本发明化合物可以以(R)-、(S)-或(R，S)-构型存在，优选在化合物的特定位置上为(R)-或(S)-构型。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)本发明首次发现托品酸及其衍生物可以明显改善免疫和炎症相关疾病动物模型的病理指标；
(2)托品酸及其衍生物可调节异常的免疫反应趋于正常，并发挥良好的抗炎、镇痛效果
(3)托品酸及其衍生物作为治疗免疫和炎症相关疾病的主要成分，与现有药物相比，具有毒性低，起效快、疗程短、用量小、复发率低及使用方便等优点，并且兼顾了外用、口服及注射等剂型，可适应不同疾病程度、不同类型的免疫病和炎症病患者；
(4)经过结构修饰得到的托品酸衍生物化合物3和4在免疫与炎症相关疾病的治疗上具有比托品酸更佳显著的治疗效果；
(5)本发明所使用的托品酸和托品酸衍生物易于获取和合成，价格低廉，性质稳定，便于保存和运输，适合在产业上应用。
附图说明
图1.式III化合物的1H-NMR谱图
图2.式III化合物的13C-NMR谱图
图3.式IV化合物的1H-NMR谱图
图4.式IV化合物的13C-NMR谱图
图5.托品酸及其衍生物对自身免疫性肝炎小鼠模型肝组织病理的影响(x200)
图6.托品酸及其衍生物对自身免疫性肝炎小鼠模型脾组织病理的影响(x200)
图7.托品酸及其衍生物对新冠寒湿疫小鼠模型肺组织病理的影响(x200)
图8.各组大鼠治疗前后踝关节及足爪形态学差异对比观察
图9.各组大鼠关节指数及肿胀度变化趋势对比(n＝6，)。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：式III化合物(3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸)的制备
1.合成工艺
冰水浴条件下，取3,4-二甲氧基苯乙酸1.96g(10mmol,1.0eq.)于100mL Schlenk瓶中，氮气保护条件下，加入无水DCM 20mL，保持低温条件下缓慢滴加二氯亚砜1.8mL(25mmol,2.5eq)，将体系转移至室温，搅拌2h。40℃减压除去溶剂及过量氯化亚砜。随后向体系中加入甲醇20mL室温搅拌过夜，减压蒸馏除去溶剂得3,4-二甲氧基苯乙酸甲酯1.50g。
室温条件下，取化合物3,4-二甲氧基苯乙酸甲酯1.0g(4.76mmol,1.0eq.)于100mLSchlenk瓶中，加入多聚甲醛0.171g(5.71mmol,1.2eq.)，及DMSO 5mL，氮气保护条件下，向体系中加入催化量甲醇钠0.0257g(0.476mmol,10mol％)，体系保持室温搅拌过夜。后处理将反应转移至100mL水中，EtOAc萃取水层3×20mL，合并有机相后，再水洗干燥，减压浓缩后柱分离纯化，得3,4-二甲氧基-α-(羟甲基)苯乙酸甲酯0.90g。
取3,4-二甲氧基-α-(羟甲基)苯乙酸甲酯0.6g(2.5mmol,1.0eq.)于20mL Schlenk瓶中，室温条件下向体系中缓慢加入溴化氢溶液(40％)2mL，加热回流反应过夜。后处理将反应体系转移至50mL水中，DCM萃取水层3×20mL，合并有机相后，再水洗干燥，减压浓缩后柱分离纯化，得3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸0.35g。
2.结构鉴定
3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸为白色结晶性粉末，易溶于甲醇，可溶于水。1H-NMR(400MHz,CD3OD)见图1，δH(ppm)3.63(2H,m,CH2),3.99(1H,m,CH),6.50(1H,dd,J＝2.0,8.0Hz,Ph-H),7.04(1H,d,J＝8.0Hz,Ph-H),7.09(1H,d,J＝2.0Hz,Ph-H)；13C-NMR(400MHz,CD3OD)见图2，δC(ppm)55.9(CH),65.2(CH2),114.3(CH),116.4(CH),123.9(CH),127.2(C),145.3(C),146.0(C),176.2(C＝O)。
实施例2：式IV化合物(3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸)的制备
1.合成工艺
冰水浴条件下，取3,4,5-三甲氧基苯乙酸2.26g(10mmol,1.0eq.)于100mLSchlenk瓶中，氮气保护条件下，加入无水DCM 20mL，保持低温条件下缓慢滴加二氯亚砜1.8mL(25mmol,2.5eq)，将体系转移至室温，搅拌2h。40℃减压除去溶剂及过量氯化亚砜。随后向体系中加入甲醇20mL室温搅拌过夜，减压蒸馏除去溶剂得3,4,5-三甲氧基苯乙酸甲酯1.65g。
室温条件下，取化合物3,4,5-三甲氧基苯乙酸甲酯1.5g(6.25mmol,1.0eq.)于100mL Schlenk瓶中，加入多聚甲醛0.224g(7.50mmol,1.2eq.)，及DMSO 5mL，氮气保护条件下，向体系中加入催化量甲醇钠0.0338g(0.625mmol,10mol％)，体系保持室温搅拌过夜。后处理将反应转移至100mL水中，EtOAc萃取水层3×20mL，合并有机相后，再水洗干燥，减压浓缩后柱分离纯化，得3,4,5-三甲氧基-α-(羟甲基)苯乙酸甲酯1.17g。
取3,4,5-三甲氧基-α-(羟甲基)苯乙酸甲酯1.0g(3.70mmol,1.0eq.)于20mLSchlenk瓶中，室温条件下向体系中缓慢加入溴化氢溶液(40％)2mL，加热回流反应过夜。后处理将反应体系转移至50mL水中，DCM萃取水层3×20mL，合并有机相后，再水洗干燥，减压浓缩后柱分离纯化，得3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸0.69g。
2.结构鉴定
3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸为白色结晶性粉末，易溶于甲醇，可溶于水。1H-NMR(400MHz,CD3OD)见图3，δH(ppm)3.63(2H,m,CH2),3.99(1H,m,CH),6.10(2H,s,Ph-H)；13C-NMR(400MHz,CD3OD)见图4，δC(ppm)55.9(CH),65.2(CH2),106.8(2×CH),131.0(C),131.3(C),146.2(2×C),176.2(C＝O)。
实施例3：托品酸及其衍生物对免疫抑制小鼠模型的作用研究
1.动物分组、造模及给药
取雄性KM种小鼠110只，随机分为11组，每组10只，分别为空白对照组、模型组、阳性药物组、托品酸高剂量组(A)、托品酸低剂量组(B)、4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(C)、4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(D)、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(E)、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(F)、3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(G)和3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(H)。除空白对照组小鼠不做任何处理外，其余各组试验小鼠于实验开始时1～3d腹腔注射环磷酰胺80mg/kg.d，建立免疫抑制小鼠模型。各组同时进行给药，每天给药2次，分组和给药方案详见表1，连续治疗14d。
表1.动物分组及给药信息表(n＝10)
2.指标检测
小鼠末次给药后禁食12h，以10％水合氯醛腹腔注射麻醉，称量体重，解剖，心脏取血后立即分离脾脏和胸腺，用滤纸吸干脏器表面血污后称重，计算脾脏指数和胸腺指数，脏器指数＝脏器湿重(g)/体重(g)×100％。取小鼠血于离心管内，以2800r/min低温(4℃)离心10min，收集血清，-20℃保存备用。用酶联免疫吸附检测试剂盒测定血清中IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-α和IgG的水平及活性。
3.实验结果与讨论
脾脏及胸腺指数可以直观的反映机体免疫功能的强弱，与空白对照组相比，模型组胸腺和脾脏指数显著下降(P<0.01)，给药托品酸及其衍生物治疗两周后，各剂量组脾脏及胸腺指数均显著增加(P<0.05或P<0.01)，且呈剂量依赖性，高剂量组使脾脏和胸腺指数增加并趋于正常。表明托品酸及其衍生物可明显改善环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠的免疫器官指数。IL-4对于B细胞、T细胞、肥大细胞、巨噬细胞和造细胞都有免疫调节作用，能够诱导IgG和Ig E的产生，与模型组比较，托品酸及其衍生物各剂量组小鼠血清IL-4含量均有所增加(P<0.01)，且高剂量组IL-4水平增加并趋于正常。IL-10能抑制NK细胞活性，干扰NK细胞和巨噬细胞产生细胞因子，与模型组相比，托品酸及其衍生物组小鼠血清IL-10含量明显降低(P<0.05或P<0.01)，高剂量组使IL-4水平降低并趋于正常。与模型组相比，托品酸及其衍生物组TNF-α的水平显著增加(P<0.05或P<0.01)，因此，托品酸及其衍生物可刺激TNF-α分泌，TNF-α分泌后诱导巨噬细胞活性和杀伤功能增强，使得巨噬细胞促进机体免疫应答。与模型组相比，托品酸及其衍生物组小鼠血清IgG质量浓度较模型组显著增加(P<0.05或P<0.01)，高剂量组使IgG水平增加并趋于正常。化合物1与2相比，治疗效果无显著性差异(P>0.05)。与化合物1和2相比，化合物3和4具有更佳的治疗效果(P<0.05或P<0.01)。托品酸及其衍生物对免疫抑制小鼠模型脏器指数和血清免疫指标的影响如表2所示。综上表明，托品酸及其衍生物对环磷酰胺所致免疫功能的抑制有一定的调节作用。
表2.托品酸及其衍生物对免疫抑制小鼠模型脏器指数和血清免疫指标的影响(n＝10，)
注：与空白对照组比较，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。
实施例4：托品酸及其衍生物对脾淋巴细胞增殖的作用研究
1.细胞模型制备、分组及给药
小鼠脱颈椎处死后，以75％乙醇中全身消毒，无菌条件下取出脾脏，制备脾淋巴细胞，用RPMI-1640培养液重悬细胞，计数调整细胞浓度为1×107个/ml。加100μL细胞悬液于96孔板中。每孔加丝裂原ConA使其终浓度为5μg/ml，每孔加100μL托品酸及其衍生物，包括托品酸高剂量组(A)、托品酸低剂量组(B)、4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(C)、4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(D)、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(E)、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(F)、3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(G)和3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(H)，空白对照组加100μL RPMI-1640培养液，阳性对照加100μL含环磷酰胺的RPMI-1640培养液，每组设3个复孔，分组及给药信息详见表3，37℃，5％CO2培养44小时后，每孔加5mg/mLMTT 10μL，继续培养4小时。
表3.细胞分组及给药信息表(n＝9)
2.指标检测
细胞培养结束后，1000r/min离心，弃上清，每孔加入DMSO 200μL振荡10min溶解，置于酶标仪，在波长492nm处测OD值。实验平行进行3次。脾淋巴细胞增殖抑制率＝(ConA模型对照平均OD值-给药组平均OD值)/ConA模型对照平均OD值。
3.实验结果与讨论
如表4所示，各个托品酸及其衍生物组均无细胞毒性，且均对ConA所致的脾细胞增殖具有不同程度的免疫抑制作用，与模型组相比，各托品酸及其衍生物组OD值显著降低(P<0.01)，高剂量组抑制率可达39.8％～44.5％。化合物1与2相比，作用无显著性差异(P>0.05)。与化合物1和2相比，化合物3和4作用更加显著(P<0.01)。
表4.托品酸及其衍生物对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响(n＝9，)
分组 药物浓度(μg/mL) OD值 抑制率(％)
模型 — 0.6155±0.0076 0
阳性药 20 0.3394±0.0087** 44.8578
A 40 0.3648±0.0105** 40.7311
B 10 0.5037±0.0093** 18.1641
C 40 0.3704±0.0084** 39.8213
D 10 0.4925±0.0113** 19.9838
E 40 0.3415±0.0072** 44.5167
F 10 0.4696±0.0116** 23.7043
G 40 0.3431±0.0096** 44.2567
H 10 0.4752±0.0108** 22.7945
注：与模型组比较，**P<0.01。
实施例5：托品酸及其衍生物对迟发超敏反应的作用研究
1.动物分组、造模及给药
取雄性KM种小鼠(6～7周，22.0±2.0g)110只，随机分为11组，每组10只，分别为空白对照组、模型组、阳性药物组、托品酸高剂量组(A)、托品酸低剂量组(B)、4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(C)、4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(D)、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(E)、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(F)、3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(G)和3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(H)，给药第1天各组小鼠腹部除毛约1.0cm×2.0cm大小区域，涂抹50μL 1％的2,4-二硝基氟苯(DNFB)(用丙酮-橄榄油溶解，丙酮∶橄榄油＝3∶1)，正常组腹部涂抹50μL丙酮-橄榄油(3:1)，致敏当天给药，连续7天，每天2次，给药第2天再涂抹1次加强致敏。各组同步进行给药，分组和给药方案详见表5。
表5.动物分组及给药信息表(n＝10)
分组 给药方案
空白 灌胃0.2mL生理盐水
模型 灌胃0.2mL生理盐水+1％的DNFB50μL
阳性药 ***20mg/kg.d+1％的DNFB50μL
A 灌胃托品酸40mg/kg.d+1％的DNFB50μL
B 灌胃托品酸20mg/kg.d+1％的DNFB50μL
C 灌胃4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸40mg/kg.d+1％的DNFB50μL
D 灌胃4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸20mg/kg.d+1％的DNFB50μL
E 灌胃3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸40mg/kg.d+1％的DNFB50μL
F 灌胃3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸20mg/kg.d+1％的DNFB50μL
G 灌胃3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸40mg/kg.d+1％的DNFB50μL
H 灌胃3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸20mg/kg.d+1％的DNFB50μL
2.指标检测
末次给药30min后，用1％的DNFB 10μL涂于每只小鼠右耳前后两面。24h后称体重，10％水合氯醛腹腔注射(0.1mL/10g)麻醉后，摘眼球取血后脱颈椎处死小鼠，分别剪下双耳，用8mm打孔器在相同部位打下圆耳片，精密称重。血液离心取上清，按照酶联免疫吸附检测试剂盒测定血清中IFN-γ的含量。耳肿胀度＝右耳质量-左耳质量；肿胀抑制率＝(模型组平均肿胀度－给药组平均肿胀度)/模型组平均肿胀度×100％。
3.实验结果与讨论
迟发超敏反应是一种依赖T细胞免疫反应模型，是Th1细胞介导的***反应，Th1主要分泌INF-γ，参与细胞免疫及迟发型超敏性炎症的发生，其主要特征是致敏机体在抗原攻击部位出现迟发型炎症反应。DNCB是一种半抗原，将其稀释后涂抹腹壁皮肤与皮肤蛋白结合成完全抗原，进而刺激T淋巴细胞增殖成致敏淋巴细胞，7d后再将其涂抹于耳部，使局部产生迟发型超敏反应。如表6所示，与模型组比较，托品酸及其衍生物组均明显减轻迟发型超敏反应小鼠耳肿胀度(P<0.05或P<0.01)，并显著抑制迟发型超敏反应小鼠血清INF-γ含量的升高(P<0.05或P<0.01)，呈剂量依赖性，高剂量组可使小鼠耳及血清INF-γ趋于正常。化合物1与2相比，作用无显著性差异(P>0.05)。与化合物1和2相比，化合物3和4作用更佳(P<0.05)。表明托品酸及其衍生物对迟发性超敏反应具有调节作用，抑制血清INF-γ含量升高可能是其作用机制。
表6.托品酸及其衍生物对小鼠迟发超敏反应的影响(n＝10，)
分组 耳肿胀度(mg) 耳肿胀抑制率(％) IFN-γ(μg/mL)
空白 1.68±0.25 — 152.58±13.87
模型 10.56±2.63## — 187.82±14.41##
阳性药 2.87±0.81** 72.83 163.37±12.15*
A 4.11±1.02** 61.08 167.22±13.03**
B 6.57±1.88* 47.23 172.12±14.11*
C 4.19±1.04** 60.32 166.94±10.23**
D 6.50±2.17* 47.88 171.14±11.18*
E 2.95±0.96** 72.09 155.24±11.20**
F 5.21±2.05** 50.65 168.19±13.51*
G 2.81±0.77** 73.41 154.26±10.54**
H 5.23±1.89** 50.48 167.20±12.71*
注：空白对照组比较，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。
实施例6：托品酸及其衍生物的抗炎作用研究
1.动物分组、造模及给药
取KM种小鼠(6～7周，22.0±2.0g)110只，雌雄各半，随机分为11组，每组10只，分别为空白对照组、模型组、阳性药物组、托品酸高剂量组(A)、托品酸低剂量组(B)、4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(C)、4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(D)、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(E)、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(F)、3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(G)和3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(H)，各组同时进行给药，分组和给药方案详见表7，每天给药2次，连续灌胃7天，末次给药1h后，除正常对照组外其余各组小鼠于右耳两面均匀涂二甲苯40μL致炎。
表7.动物分组及给药信息表(n＝10)
2.指标检测
致炎1h后以10％水合氯醛腹腔注射麻醉，脱颈处死，沿耳廓边缘剪下双耳，用手动8mm打耳器在双耳相同部位打下圆形耳片，分别精密称重，计算耳肿胀度和肿胀抑制率。耳肿胀度＝右耳质量-左耳质量；肿胀抑制率＝(模型组平均肿胀度－给药组平均肿胀度)/模型组平均肿胀度×100％。
3.实验结果与讨论
如表8所示，与模型对照组比较，托品酸及其衍生物组均能显著降低二甲苯致小鼠的耳肿胀程度(P<0.01)，其中托品酸及其衍生物高剂量组肿胀抑制率可达70.34％～74.31％。化合物1与2相比，肿胀抑制效果差异不明显。与化合物1和2相比，化合物3和4高低剂量组均具有更佳肿胀抑制效果。综上结果表明，托品酸及其衍生物对二甲苯所致小鼠耳肿胀模型具有明显的抗炎作用。
表8.托品酸及其衍生物对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(n＝10，)
注：与空白对照组比较，##P<0.01；与模型组比较，**P<0.01。
实施例7：托品酸及其衍生物的镇痛作用研究
1.动物分组、造模及给药
取KM种小鼠(5～6周，22.0±2.0g)100只，雌雄各半，随机分为10组，每组10只，分别为空白对照组、模型组、阳性药物组、托品酸高剂量组(A)、托品酸低剂量组(B)、4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(C)、4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(D)、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(E)、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(F)、3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(G)和3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(H)，各组同时进行给药，每天给药2次，连续灌胃7天，分组和给药方案详见表9，除正常对照组外，其余组小鼠于末次给药2h后腹腔注射0.6％10mL/kg冰醋酸建立疼痛模型。
表9.动物分组及给药信息表(n＝10)
分组 给药方案
模型 灌胃0.2mL生理盐水+腹腔注射0.6％10mL/kg冰醋酸
阳性药 阿司匹林肠溶片400mg/kg.d+腹腔注射0.6％10mL/kg冰醋酸
A 灌胃托品酸40mg/kg.d+腹腔注射0.6％10mL/kg冰醋酸
B 灌胃托品酸20mg/kg.d+腹腔注射0.6％10mL/kg冰醋酸
C 灌胃4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸40mg/kg.d+腹腔注射0.6％10mL/kg冰醋酸
D 灌胃4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸20mg/kg.d+腹腔注射0.6％10mL/kg冰醋酸
E 灌胃3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸40mg/kg.d+腹腔注射0.6％10mL/kg冰醋酸
F 灌胃3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸20mg/kg.d+腹腔注射0.6％10mL/kg冰醋酸
G 灌胃3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸40mg/kg.d+腹腔注射0.6％10mL/kg冰醋酸
H 灌胃3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸20mg/kg.d+腹腔注射0.6％10mL/kg冰醋酸
2.指标检测
疼痛模型建立后，观察并记录小鼠出现扭体反应的潜伏时间及20min内各组小鼠的扭体次数，计算镇痛率。镇痛率＝(模型组平均扭体次数-给药组平均扭体次数)/模型对照组平均扭体次数×100％。
3.实验结果与讨论
如表10所示，与模型对照组比较，托品酸及其衍生物组均能明显延长醋酸致小鼠扭体反应的潜伏时间(P<0.05或P<0.01)，并显著降低扭体次数(P<0.01)，其中托品酸及其衍生物高剂量组镇痛率可达55.26～58.79％。化合物1与2相比，镇痛效果差异不明显。与化合物1和2相比，化合物3和4具有更佳的镇痛效果。因此，托品酸及其衍生物具有明显的外周性镇痛作用。
表10.托品酸及其衍生物对对醋酸致小鼠扭体反应的影响(n＝10，)
分组 潜伏时间(s) 扭体次数 镇痛率(％)
模型 5.49±0.88 45.50±6.31** —
阳性药 8.64±1.03** 13.22±3.88** 70.94
A 8.55±0.92** 20.36±5.74** 55.26
B 6.42±0.75* 24.63±6.84** 45.86
C 8.37±1.10** 20.60±4.57** 54.72
D 6.56±0.84* 24.59±5.25** 45.95
E 8.87±1.06** 19.04±3.63** 58.15
F 7.15±0.97* 23.19±4.91** 49.04
G 8.94±1.12** 18.75±3.39** 58.79
H 7.21±0.94* 23.29±5.95** 48.81
注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。
实施例8：托品酸及其衍生物对自身免疫性肝炎小鼠模型的作用研究
1.动物造模、分组及给药
取正常雄性KM种小鼠(6～7周，22.0±2.0g)肝组织，按1:9(g/mL)比例加入生理盐水，用组织研磨器充分研磨(-4℃)成组织匀浆后，离心10分钟(2500rpm,4℃)，取上清液，得到同基因肝抗原。将同基因肝抗原按1:1(v/v)比例加入完全弗氏佐剂，混合均匀，使其充分乳化，得到免疫剂(临用时制备)。
取110只雄性KM种小鼠(6～7周，22±2g)，随机分为11组，每组10只，分别为空白对照组、模型组、阳性药物组、托品酸高剂量组(A)、托品酸低剂量组(B)、4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(C)、4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(D)、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(E)、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(F)、3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(G)和3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(G)，除空白对照组小鼠外，其他各组小鼠均腹腔注射1mL/只免疫剂，完成第一次免疫。7天后进行二次免疫，得到自身免疫性肝炎小鼠模型。空白对照组小鼠同时间腹腔注射1mL/只生理盐水。造模结束当天开始灌胃给药，每天2次，连续治疗14天，分组和给药方案详见表11。
表11.动物分组及给药信息表(n＝10)
2.指标检测
末次给药后，禁食12小时，各组小鼠以10％水合氯醛腹腔注射(0.1mL/10g)麻醉后，解剖，心脏取血后进行生理盐水灌流、多聚甲醛固定，取肝脏和脾脏组织，于4％多聚甲醛浸泡固定24h。血液离心10分钟(3000rpm,4℃)，取血清，按照试剂盒的说明书对血清中肝功能相关指标乳酸脱氢酶(LDH)、谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的活性以及总胆红素(TBIL)的含量进行检测；肝脏和脾脏组织石蜡包埋，切4μm厚的切片，常规HE染色，封片，光镜下观察组织病理学改变情况。
3.实验结果与讨论
肝功能检测：如表12所示，模型组小鼠血清中LDH、ALT、AST活性升高，TBIL含量明显升高(P<0.01)。当肝组织损伤或肝细胞坏死时，血清中LDH、ALT和AST活性升高，而TBIL含量升高是肝损伤的敏感指标，直接反映了肝细胞损伤坏死的程度、肝脏的解毒和代谢功能。与模型组比较，给药托品酸及其衍生物2周后，血清中的LDH、ALT、AST活性及TBIL含量均下降(P<0.05或P<0.01)，且呈剂量依赖性。化合物1与2相比，治疗效果无显著性差异(P>0.05)。与化合物1和2相比，化合物3和4具有更佳的治疗效果(P<0.05)。因此，托品酸及其衍生物可以改善自身免疫性肝炎模型小鼠的肝功能。
表12.托品酸及其衍生物对自身免疫性肝炎小鼠模型肝功能的影响(n＝10，)
/>
注：与空白对照组比较，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。
组织病理学检测：如图5所示，模型组小鼠肝脏中可见大量的炎症因子浸润，细胞边界模糊、肝细胞水肿变性、细胞核固缩、部分细胞溶解性坏死及细胞脂肪变性引起的空泡化。给药托品酸及其衍生物后，上述部分病理指标均有明显改善，尤其可以观察到在坏死肝细胞周围出现再生肝细胞修复肝损伤，其特点是细胞体积大，细胞核大染色深，且大多具有双核。如图6所示，在模型组小鼠脾脏中，出现与免疫活化有关的滤泡性增生性病变，进而生发中心增多变大，可以看到红髓与白髓的面积比值下降，白髓与红髓内的泡沫样巨噬细胞增多，系腹腔注射免疫剂后，脾脏中发生大量淋巴细胞转化现象，B细胞增生并转化为浆细胞，脾滤泡生长中心扩大而出现大量浆细胞，使抗体生成增加，体液免疫作用增强；红髓中的血管内存在血浆，增生的巨噬细胞破坏红髓小动脉内的血浆红细胞，导致红髓内的脾索大量充血。给药托品酸及其衍生物后，上述免疫激活病理指标明显改善。表明托品酸及其衍生物可能通过提高识别抗原的功能调节免疫活性，起到治疗自身免疫性肝炎的作用。
实施例9：托品酸及其衍生物对新冠寒湿疫小鼠模型的作用研究
1.动物造模、分组及给药
取110只雄性KM种小鼠(6～7周，22.0±2.0)，随机分为11组，每组10只，分别为空白对照组、模型组、阳性药物组、托品酸高剂量组(A)、托品酸低剂量组(B)、4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(C)、4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(D)、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(E)、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(F)、3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(G)和3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(G)，各组每天给药2次，连续给药7天。给药3天后，除空白对照组小鼠外，其他各组小鼠均腹腔注射5mg/kg脂多糖生理盐水溶液，然后置于人工气候箱中，控制温度为4.0±2.0℃、湿度为90.0±3.0％的环境中进行寒湿刺激造模，每天8h，连续4天，造成新冠寒湿疫小鼠模型。分组和给药方案详见表13。
表13.动物分组及给药信息表(n＝10)
分组 给药方案
空白 灌胃0.2mL生理盐水
模型 灌胃0.2mL生理盐水+腹腔注射5mg/kg脂多糖
阳性药 灌胃***2mg/kg.d+腹腔注射5mg/kg脂多糖
A 灌胃托品酸40mg/kg.d+腹腔注射5mg/kg脂多糖
B 灌胃托品酸20mg/kg.d+腹腔注射5mg/kg脂多糖
C 灌胃4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸40mg/kg.d+腹腔注射5mg/kg脂多糖
D 灌胃4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸20mg/kg.d+腹腔注射5mg/kg脂多糖
E 灌胃3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸40mg/kg.d+腹腔注射5mg/kg脂多糖
F 灌胃3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸20mg/kg.d+腹腔注射5mg/kg脂多糖
G 灌胃3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸40mg/kg.d+腹腔注射5mg/kg脂多糖
H 灌胃3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸20mg/kg.d+腹腔注射5mg/kg脂多糖
2.指标检测
末次给药结束后，禁食12小时，10％水合氯醛腹腔注射(0.1mL/10g)麻醉后，生理盐水灌流，取肺组织，一部分液氮速冻，-80℃冰箱保存备用，一部分置于4％多聚甲醛中固定备用。取冷冻保存的小鼠组织50mg，加800μL PBS进行匀浆，以2800r/min低温(4℃)离心10min，收集血清，用酶联免疫吸附检测试剂盒测定肺组织中炎症因子IL-6、IL-10、IFN-γ和TNF-α的水平。取固定后的肺组织经石蜡包埋，切4μm厚的切片，常规HE染色，封片，光镜下观察组织病理学改变情况。
3.实验结果与讨论
炎症因子检测：如表14所示，与空白对照组相比，模型组小鼠肺组织TNF-α、IFN-γ、IL-6水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)，IL-10水平显著降低(P<0.01)，给药托品酸及其衍生物治疗7天，TNF-α、IFN-γ、IL-6水平均显著下降(P<0.05或P<0.01)，IL-10水平显著升高(P<0.05或P<0.01)，且呈剂量依赖性，高剂量组使肺组织炎症因子降低并趋于正常。化合物1与2相比，治疗效果无显著性差异(P>0.05)。与化合物1和2相比，化合物3和4具有更佳的治疗效果(P<0.05)。因此，托品酸及其衍生物可以改善新冠寒湿疫小鼠模型的炎症反应。
表14.托品酸及其衍生物对新冠寒湿疫小鼠模型肺组织炎症因子的影响(n＝10，)
注：与空白对照组比较，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。
组织病理学检测：如图7所示，正常组小鼠的肺组织结构完整，无渗出液，肺泡间隔正常；而模型组组小鼠肺泡支架塌陷，肺组织结构紊乱，肺泡间隔增厚程度明显，且肺组织间质水肿和炎性浸润的现象严重，给药托品酸及其衍生物后，上述部分病理指标均有明显改善。化合物1与2相比，治疗效果无明显差异。与化合物1和2相比，化合物3和4具有更佳的治疗效果。表明托品酸及其衍生物可能通调节免疫并抑制炎症反应发挥对新冠寒湿疫小鼠模型的治疗作用。
实施例10：托品酸及其衍生物对再生障碍性贫血小鼠模型的作用研究
1.动物造模、分组及给药
取66只雄性SD大鼠(7～8周，200.0±20.0g)，随机分为11组，每组6只，分别为空白对照组、模型组、阳性药物组、托品酸高剂量组(A)、托品酸低剂量组(B)、4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(C)、4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(D)、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(E)、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(F)、3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(G)和3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(G)，除空白对照组小鼠外，其余各组在第1天和第4天皮下注射2％乙酰苯肼(Ap)生理盐水溶液20mg.kg，第4天乙酰苯肼注射2h后，以及第5～7天腹腔注射环磷酰胺(Cy)生理盐水溶液20mg.kg，建立再生障碍性贫血动物模型，各给药组大鼠均采用尾静脉注射，每日1次，连续给药14d。分组和给药方案详见表15。
表15.动物分组及给药信息表(n＝6)
2.指标检测
大鼠末次给药1h后，10％水合氯醛腹腔注射麻醉，心脏取血于抗凝管中备用，取胸腺和脾脏称质量。上述抗凝管中全血中加入溶血剂，采用全自动血细胞分析仪，检测外周血细胞数量，主要包括外周血中白细胞计数(WBC)、红细胞计数(RBC)、血红蛋白(HGB)和血小板计数(PLT)等4项指标变化。计算脾脏指数和胸腺指数，脏器指数＝脏器湿重(g)/体重(g)×100％。
3.实验结果与讨论
如表16所示，与正常组比较，模型组WBC、RBC、HGB和PLT水平均明显下降(P<0.01)；与模型组比较，在给予托品酸及其衍生物治疗14d后，各项指标水平均升高(P<0.05或P<0.01)，且呈剂量依赖性。模型组与正常组相比，脾脏指数显著升高，胸腺指数显著降低(P<0.01)，在给予托品酸及其衍生物治疗14d后，脾脏指数和胸腺指数趋于正常(P<0.05或P<0.01)。化合物1与2相比，治疗效果无显著性差异(P>0.05)。与化合物1和2相比，化合物3和4具有更佳治疗效果(P<0.05或P<0.01)。因此，托品酸及其衍生物可以通过其免疫调节作用来改善大鼠模型的再生障碍性贫血，从而恢复其造血干细胞功能。
表16.托品酸及其衍生物对再生障碍性贫血模型免疫脏器指数和外周血象的影响(n＝6，)
注：与空白对照组比较，##P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。
实施例11：托品酸及其衍生物对类风湿性关节炎模型大鼠的作用研究
1.动物造模、分组及给药
免疫乳化剂的制备：取牛II型胶原(CII)溶液7ml置小烧杯中，低温下1500r/min磁力搅拌，取完全弗氏佐剂(CFA)溶液7ml，缓慢加入到CII溶液中，待CFA溶液全部加完后继续搅拌约30min，至乳剂滴在水上不散开，得到初次免疫乳化剂。以不完全弗氏佐剂(IFA)替代CFA，采用相同的制备方法得到二次免疫乳化剂。免疫乳化剂均在临用时制备。
类风湿性关节炎模型(CIA)的制备：取100只雄性SD大鼠(7～8周，200.0±20.0g)，在大鼠尾根部皮下注射初次免疫乳化剂0.2ml，在初次免疫后第8天，在大鼠尾根部皮下注射0.1ml的二次免疫乳化剂完成加强免疫，空白对照组使用同样方法注射生理盐水。加强免疫14天后进行关节炎指数(AI)评分，评分规则如下：0分为无肿胀和红斑；1分为踝关节出现红斑和轻度肿胀；2分为踝关节到跖关节或掌关节出现红斑和轻度肿胀；3分为踝关节到跖趾关节或掌关节出现红斑和中度肿胀；4分为踝关节到趾关节出现红斑和重度肿胀。以2个脚爪的评分之和作为每只大鼠的关节评分，AI评分≥4表明该模型构建成功，将没有关节肿胀迹象的动物移出。
分组给药：取空白对照组大鼠6只和60只CIA模型大鼠，CIA模型大鼠随机分为10组，每组6只，分别为模型组、阳性药物组、托品酸高剂量组(A)、托品酸低剂量组(B)、4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(C)、4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(D)、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(E)、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(F)、3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(G)和3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(G)，各组同时灌胃相应药物，每天2次，连续治疗4周，分组和给药方案详见表17。
表17.动物分组及给药信息表(n＝6)
2.指标检测
治疗结束后，对比观察各组大鼠治疗前后踝关节及足爪形态学差异。按照上述AI评分方法，每周对各组大鼠关节炎的状况进行一次评分。用足容积排水法同步测定大鼠踝关节及以下的体积变化，并计算关节肿胀程度。关节肿胀度＝(造模后容积-造模前容积)/造模前容积×100％。
3.实验结果与讨论
如图8所示，大鼠在造模后，足跖趾容积增加明显，各造模组大鼠关节红肿，足爪僵硬蜷缩，无法正常行走，给予托品酸及其衍生物治疗4周后，低剂量组大鼠关节轻度红肿，其余各治疗组大鼠关节红肿消退、状态良好。化合物1与2相比，治疗效果无明显差异。与化合物1和2相比，化合物3和4具有更佳治疗效果。如图9所示，与模型组比较，托品酸及其衍生物治疗组AI评分逐渐降低，治疗第3周开始差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；与模型组比较，给药托品酸及其衍生物治疗2周后，大鼠关节肿胀度开始降低，给药4周后，大鼠关节肿胀度显著降低。化合物1与2相比，各个周次治疗效果无显著性差异(P>0.05)。与化合物1和2相比，给药3周后，化合物3和4高剂量组大鼠AI评分和关节肿胀度降低更为显著(P<0.05)，具有更佳治疗效果。综上表明，托品酸及其衍生物对类风湿关节炎大鼠模型有明显的治疗作用。
实施例11：托品酸及其衍生物对过敏性鼻炎小鼠模型的作用研究
1.动物造模、分组及给药
取110只雄性BABL/c种小鼠(5～6周，20.0±2.0g)，随机分为11组，每组10只，分别为空白对照组、模型组、阳性药物组、托品酸高剂量组(A)、托品酸低剂量组(B)、4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(C)、4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(D)、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(E)、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(F)、3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(G)和3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(G)，除空白对照组小鼠外，其他各组小鼠于实验第1、7、14天腹腔注射混悬致敏剂(含0.50mg/mL OVA和0.50mg/mLAl(OH)3)每只小鼠200uL，为基础致敏；第15～28天各组灌胃相应的药物；在实验第22～28天，以4％OVA溶液滴入小鼠鼻腔进行激发，每侧鼻腔20μL，即建立变应性鼻炎模型，空白对照组在基础致敏和激发环节给予同体积的生理盐水。分组和给药方案详见表18。
表18.动物分组及给药信息表(n＝10)
分组 给药方案
空白 灌胃0.2mL生理盐水
模型 基础致敏+灌胃0.2mL生理盐水+激发
阳性药 基础致敏+灌胃***20mg/kg.d+激发
A 基础致敏+灌胃托品酸40mg/kg.d+激发
B 基础致敏+灌胃托品酸20mg/kg.d+激发
C 基础致敏+灌胃4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸40mg/kg.d+激发
D 基础致敏+灌胃4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸20mg/kg.d+激发
E 基础致敏+灌胃3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸40mg/kg.d+激发
F 基础致敏+灌胃3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸20mg/kg.d+激发
G 基础致敏+灌胃3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸40mg/kg.d+激发
H 基础致敏+灌胃3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸20mg/kg.d+激发
2.指标检测
末次滴鼻激发后，观察并记录30min内各组小鼠挠鼻及喷嚏次数。
3.实验结果与讨论
如表19所示，与空白组比较，模型组小鼠喷嚏次数与挠鼻次数显著增加(P<0.01)，表明过敏性鼻炎模型造模成功。与模型组比较，托品酸及其衍生物组可显著减少小鼠喷嚏次数(P<0.01)和挠鼻次数(P<0.05或P<0.01)，且呈剂量依赖性。化合物1与2相比，治疗效果无显著性差异(P>0.05)。与化合物1和2相比，化合物3和4具有更佳治疗效果(P<0.05)。表明托品酸及其衍生物对过敏性鼻炎小鼠模型具有明显的治疗作用。
表19.托品酸及其衍生物对过敏性鼻炎小鼠模型挠鼻及喷嚏次数的影响(n＝10，)/>
注：与空白对照组比较，##P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。
实施例12：托品酸及其衍生物对膜性肾炎模型大鼠的作用研究
1.动物造模、分组及给药
膜性肾炎模型的复制：取阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)100mg溶解于生理盐水15mL中，与不完全弗氏佐剂等体积混合并充分乳化。取100只雄性SD大鼠(7～8周，200±20g)，取乳化剂1mL，在每只大鼠的双侧腋下、腹股沟作多点皮下注射，隔日1次，共3次，完成预免疫。预免疫1周后，每只大鼠按照16mg/kg尾静脉注射C-BSA生理盐水溶液，每周3次，连续4周，完成正式免疫。用代谢笼收集大鼠24h尿液进行尿蛋白检测，24h尿蛋白(24h UPro)量>20mg视为膜性肾炎模型复制成功，移除模型复制失败大鼠。空白对照组大鼠以同样的方法同步注射等容积生理盐水。
分组给药：取空白对照组大鼠6只和60只膜性肾炎模型大鼠，膜性肾炎模型大鼠随机分为10组，每组6只，分别为模型组、阳性药物组、托品酸高剂量组(A)、托品酸低剂量组(B)、4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(C)、4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(D)、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(E)、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(F)、3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸高剂量组(G)和3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸低剂量组(G)，各组同时灌胃相应药物，每天2次，连续治疗4周，分组和给药方案详见表11。
表20.动物分组及给药信息表(n＝6)
2.指标检测
一般状况观察：末次给药后，对各组大鼠的毛发、精神状态、体重、摄食、大便二便等进行对比观察评价药物的治疗作用。
尿蛋白定量及血清生化的检测：收集大鼠24h尿液，采用大鼠ELISA试剂盒测定尿蛋白浓度；大鼠麻醉，收集血清，用全自动生化分析仪测定血清总蛋白(TP)、血清白蛋白(Alb)、血清肌酐(Scr)、血清尿素氮(BUN)等指标水平。
3.实验结果与讨论
一般状况观察：各组大鼠一般状况正常组大鼠活动正常，反应灵敏，毛色光亮，饮食正常，体质量增加；模型组大鼠精神和毛发光泽度均较差，毛发脱落，摄食减少，尿量增多，大便稀，个别大鼠腹部皮下水肿。托品酸及其衍生物组大鼠的精神状态、毛发、饮食、二便等情况均有明显改善。
尿蛋白及血清生化的定量检测：如表21所示，与正常组比较，模型组大鼠出现显著升高的蛋白尿，血清Scr和BUN(P<0.01)，血清TP、Alb水平显著降低(P<0.01)；给药托品酸及其衍生物治疗4周后，大鼠24h尿蛋白量均显著降低(P<0.01)，血清TP和Alb水平显著升高(P<0.05或P<0.01)，并趋于正常；与正常组相比，模型组血清Scr和BUN水平显著升高(P<0.01)，托品酸及其衍生物治疗4周后，血清Scr和BUN水平均有不同程度降低(P<0.05或P<0.01)，并趋于正常。化合物1与2相比，治疗效果无显著性差异(P>0.05)。与化合物1和2相比，化合物3和4具有更佳治疗效果(P<0.05)。因此，托品酸及其衍生物具有改善或恢复膜性肾炎大鼠模型肾功能的作用。
表21.托品酸及其衍生物对膜性肾炎大鼠模型肾功能的影响(n＝6，)/>
注：与空白对照组比较，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。
实施例13：托品酸及其衍生物片剂的制备
处方见表2。按处方1取原料药(托品酸)及辅料(乳糖、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、微粉硅胶、硬脂酸镁和纯化水)，将托品酸、乳糖、微晶纤维素和聚乙烯吡咯烷酮加入到湿法制粒机中，用纯化水作为润湿剂进行湿法制粒，经过湿整粒、干燥和干整粒后得到干颗粒，将交联羧甲基纤维素钠、微粉硅胶和硬脂酸镁加入到干颗粒中混合均匀后，用压片机将混合均匀的物料进行压片，即得到托品酸片。分别取处方2、3和4原料药和辅料，按照与上述相同工艺方法，分别制备得到4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸片、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸片和3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸片。
表22.托品酸及其衍生物片剂处方
物料名称 处方1(g) 处方2(g) 处方3(g) 处方4(g)
托品酸 200 — — —
4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸 — 200 — —
3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸 — — 200 —
3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸 — — — 200
乳糖 980 980 980 980
微晶纤维素 700 700 700 700
聚乙烯吡咯烷酮 160 160 160 160
交联羧甲基纤维素钠 80 80 80 80
微粉硅胶 20 20 20 20
硬脂酸镁 20 20 20 20
纯化水 340 340 340 340
实施例14：托品酸及其衍生物包衣片剂的制备
处方见表3。按处方5取原料药(托品酸)及辅料(乳糖、微晶纤维素、羟丙甲纤维素、十二烷基硫酸钠、羧甲淀粉钠、微粉硅胶、硬脂酸镁、薄膜包衣预混剂和纯化水)，将十二烷基硫酸钠加入到纯化水中搅拌使其溶解，将托品酸、乳糖、微晶纤维素和羟丙甲纤维素加入到湿法制粒机中，用十二烷基硫酸钠的水溶液作为润湿剂进行湿法制粒，经过湿整粒、干燥和干整粒后得到干颗粒，将羧甲淀粉钠、微粉硅胶和硬脂酸镁加入到干颗粒中混合均匀后，用压片机将混合均匀的物料进行压片，即得到托品酸的素片。将薄膜包衣机预混剂加入到纯化水中，持续搅拌1小时以上，制得薄膜包衣液，然后在包衣机中对制得的素片进行包衣，即得到托品酸包衣片。分别取处方6、7和8原料药和辅料，按照与上述相同工艺方法，分别制备得到4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸包衣片、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸包衣片和3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸包衣片。
表23.托品酸及其衍生物包衣片剂处方
物料名称 处方5(g) 处方6(g) 处方7(g) 处方8(g)
托品酸 100 — — —
4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸 — 100 — —
3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸 — — 100 —
3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸 — — — 100
乳糖 960 960 960 960
微晶纤维素 600 600 600 600
羟丙甲纤维素 200 200 200 200
十二烷基硫酸钠 20 20 20 20
羧甲淀粉钠 80 80 80 80
微粉硅胶 20 20 20 20
硬脂酸镁 20 20 20 20
纯化水 320 320 320 320
薄膜包衣预混剂 80 80 80 80
纯化水(薄膜包衣用) 667 667 667 667
实施例15：托品酸及其衍生物喷雾剂I的制备
处方见表4。按处方9取原料药(托品酸)及辅料(聚乙烯吡咯烷酮K30、丙二醇单辛酸酯、羟苯乙酯、泊洛沙姆、二叔丁基对甲酚(BHT)、1N氢氧化钠溶液、乙醇和水)，将原料药、聚乙烯吡咯烷酮K30、丙二醇单辛酸酯、羟苯乙酯、BHT加入到乙醇中，搅拌使其完全溶解；将泊洛沙姆加入到适量水中溶解；然后将泊洛沙姆水溶液加入到上述混合物料的醇溶液中，用1N氢氧化钠溶液调节pH值至3～8的范围内；用水加至200ml，即得喷雾剂溶液；将溶液灌装至喷雾瓶中，即得到托品酸喷雾剂I。分别取处方10、11和12原料药和辅料，按照与上述相同工艺方法，分别制备得到4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸喷雾剂I、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸喷雾剂I和3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸喷雾剂I。
表24.托品酸及其衍生物喷雾剂I处方
物料名称 处方9 处方10 处方11 处方12
托品酸 4.0g — — —
4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸 — 4.0g — —
3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸 — — 4.0g —
3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸 — — — 4.0g
聚乙烯吡咯烷酮K30 8.0g 8.0g 8.0g 8.0g
丙二醇单辛酸酯 15.0g 15.0g 15.0g 15.0g
羟苯乙酯 0.2g 0.2g 0.2g 0.2g
泊洛沙姆 1.0g 1.0g 1.0g 1.0g
二叔丁基对甲酚(BHT) 0.5g 0.5g 0.5g 0.5g
1N氢氧化钠溶液 适量 适量 适量 适量
乙醇 80g 80g 80g 80g
水 加至200ml 加至200ml 加至200ml 加至200ml
实施例16：托品酸及其衍生物喷雾剂II的制备
处方见表5。按处方13取原料药(托品酸)及辅料(羟丙基纤维素、丙二醇单辛酸酯、羟苯乙酯、乙醇、水)，将原料药、羟丙基纤维素、丙二醇单辛酸酯、羟苯乙酯加入到乙醇中，搅拌使其完全溶解，用水加至200ml，即得喷雾剂溶液；将溶液灌装至喷雾瓶中，即得到托品酸喷雾剂II。分别取处方14、15和16原料药和辅料，按照与上述相同工艺方法，分别制备得到4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸喷雾剂II、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸喷雾剂II和3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸喷雾剂II。
表25.托品酸及其衍生物喷雾剂II处方
物料名称 处方13 处方14 处方15 处方16
托品酸 2.0g — — —
4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸 — 2.0g — —
3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸 — — 2.0g —
3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸 — — — 2.0g
羟丙基纤维素 6g 6g 6g 6g
丙二醇单辛酸酯 20g 20g 20g 20g
羟苯乙酯 0.2g 0.2g 0.2g 0.2g
乙醇 100g 100g 100g 100g
水 加至200ml 加至200ml 加至200ml 加至200ml
实施例17：托品酸及其衍生物注射剂I的制备
处方见表6。按处方17取原料药(托品酸)及辅料(氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、泊洛沙姆、亚硫酸氢钠和注射用水)，将原料药和泊洛沙姆加入到注射用水中溶解，然后将氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠和亚硫酸氢钠加入到上述溶液中溶解，最后用水加至100mL，即得注射剂溶液；将上述注射剂溶液灌装至相应容积的安瓿瓶或西林瓶中，即得到托品酸注射剂I。分别取处方18、19和20原料药和辅料，按照与上述相同工艺方法，分别制备得到4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸注射剂I、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸注射剂I和3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸注射剂I。
表26.托品酸及其衍生物注射剂I处方
物料名称 处方17 处方18 处方19 处方20
托品酸 1.0g — — —
4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸 — 1.0g — —
3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸 — — 1.0g —
3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸 — — — 1.0g
氯化钠 0.85g 0.85g 0.85g 0.85g
磷酸氢二钠 0.21g 0.21g 0.21g 0.21g
磷酸二氢钠 1.6mg 1.6mg 1.6mg 1.6mg
泊洛沙姆 0.5g 0.5g 0.5g 0.5g
亚硫酸氢钠 0.1g 0.1g 0.1g 0.1g
注射用水 加至100mL 加至100mL 加至100mL 加至100mL
实施例18：托品酸及其衍生物注射剂II的制备
处方见表7。按处方21取原料药(托品酸)及辅料(氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、吐温80、注射用水)，将原料药和吐温80加入到注射用水中溶解，然后将氯化钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠加入到上述溶液中溶解，最后用水加至100mL，即得注射剂溶液；将上述注射剂溶液灌装至相应容积的安瓿瓶或西林瓶中，即得到托品酸注射剂II。分别取处方22、23和24原料药和辅料，按照与上述相同工艺方法，分别制备得到4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸注射剂II、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸注射剂II和3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸注射剂II。
表27.托品酸及其衍生物注射剂II处方
物料名称 处方21 处方22 处方23 处方24
托品酸 0.5g — — —
4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸 — 0.5g — —
3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸 — — 0.5g —
3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸 — — — 0.5g
氯化钠 0.85g 0.85g 0.85g 0.85g
磷酸氢二钠 0.21g 0.21g 0.21g 0.21g
磷酸二氢钠 1.6mg 1.6mg 1.6mg 1.6mg
吐温80 0.3g 0.3g 0.3g 0.3g
注射用水 加至100ml 加至100ml 加至100ml 加至100ml
实施例19：托品酸及其衍生物乳膏I的制备
处方见表8。按处方25取原料药(托品酸)及辅料(白凡士林、十六醇、吐温80、二乙二醇单***、羟苯乙酯、BHT、丙二醇、柠檬酸/柠檬酸钠和水)，制备工艺如下：(1)原料药溶解：称取丙二醇，加入原料药，40～50℃搅拌溶解：(2)油相制备：称取白凡士林、十六醇、羟苯乙酯和BHT，升温至60～80℃，搅拌溶解，将溶解的原料药缓慢加入，继续搅拌，混合均匀，备用；(3)水相制备：称取纯化水，加入吐温80和二乙二醇单***，升温至60～80℃，柠檬酸/柠檬酸钠调节pH值，搅拌溶解备用；(4)乳化：将水相缓慢加入油相中，保持70℃，均质、继续搅拌30min以上；(5)成膏：降温，停止加热，继续搅拌，逐步降至室温并冷却成膏，灌装。即得托品酸乳膏I。分别取处方26、27和28原料药和辅料，按照与上述相同工艺方法，分别制备得到4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸乳膏I、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸乳膏I和3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸乳膏I。
表28.托品酸及其衍生物乳膏I处方
实施例20：托品酸及其衍生物乳膏II的制备
处方见表9。按处方29取原料药(托品酸)及辅料(白凡士林、十六醇、泊洛沙姆407、丙二醇单辛酸酯、苯甲酸钠、BHA、丙二醇、冰醋酸/醋酸钠和水)，制备工艺如下：(1)原料药溶解：称取丙二醇，加入原料药，40～50℃搅拌溶解；(2)油相制备：称取白凡士林、十六醇、丙二醇单辛酸酯和BHA，升温至60～80℃，搅拌溶解，将溶解的原料药缓慢加入，继续搅拌，混合均匀，备用；(3)水相制备：称取纯化水，加入泊洛沙姆407和苯甲酸钠，升温至60～80℃，冰醋酸/醋酸钠调节pH值，搅拌溶解备用；(4)乳化：将水相缓慢加入油相中，保持70℃，均质、继续搅拌30min以上；(5)成膏：降温，停止加热，继续搅拌，逐步降至室温并冷却成膏，灌装。即得托品酸乳膏II。分别取处方30、31和32原料药和辅料，按照与上述相同工艺方法，分别制备得到4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸乳膏I、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸乳膏I和3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸乳膏II。
表29.托品酸及其衍生物乳膏II处方
物料名称 处方29 处方30 处方31 处方32
托品酸 8g — — —
4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸 — 8g — —
3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸 — — 8g —
3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸 — — — 8g
白凡士林 20g 20g 20g 20g
十六醇 40g 40g 40g 40g
泊洛沙姆407 10g 10g 10g 10g
丙二醇单辛酸酯 20g 20g 20g 20g
苯甲酸钠 1g 1g 1g 1g
BHA 0.4g 0.4g 0.4g 0.4g
丙二醇 20g 20g 20g 20g
冰醋酸/醋酸钠 适量 适量 适量 适量
水 加至200g 加至200g 加至200g 加至200g
实施例21：托品酸及其衍生物鼻用制剂I的制备
处方见表30。按处方33取原料药(托品酸)及辅料(山梨醇、柠檬酸/柠檬酸钠、苯甲酸钠及纯化水)，制备工艺如下：将山梨醇加入到纯化水中溶解，然后将原料药和苯甲酸钠加入到上述溶液中溶解，用柠檬酸/柠檬酸钠调节pH值至4.0～6.5的范围内，用纯化水加至100ml，即得鼻用制剂溶液，最后将溶液灌装至滴瓶或喷雾瓶中，即得到托品酸鼻用制剂I。分别取处方34、35和36原料药和辅料，按照与上述相同工艺方法，分别制备得到4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸乳膏I、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸乳膏I和3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸鼻用制剂I。
表30.托品酸及其衍生物鼻用制剂I处方
物料名称 处方33 处方34 处方35 处方36
托品酸 0.5g — — —
4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸 — 0.5g — —
3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸 — — 0.5g —
3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸 — — — 0.5g
山梨醇 4.8g 4.8g 4.8g 4.8g
柠檬酸/柠檬酸钠 适量 适量 适量 适量
苯甲酸钠 0.15g 0.15g 0.15g 0.15g
纯化水 加至100mL 加至100mL 加至100mL 加至100mL
实施例22：托品酸及其衍生物鼻用制剂II的制备
处方见表31。按处方37取原料药(托品酸)及辅料(氯化钠、羟丙甲纤维素、吐温80、焦亚硫酸钠、乙二胺四乙酸钠、1N氢氧化钠溶液、苯扎氯铵及纯化水)，制备工艺如下：将羟丙甲纤维素加入到纯化水，持续搅拌使其完全溶解，将氯化钠和吐温80加入到羟丙甲纤维素溶液中溶解，然后将原料药、焦亚硫酸钠、乙二胺四乙酸钠和苯扎氯铵加入到上述溶液中溶解，用1N氢氧化钠溶液调节pH值至4.5～6.5的范围内，用纯化水加至100ml，即得鼻用制剂溶液，最后将溶液灌装至滴瓶或喷雾瓶中，即得到托品酸鼻用制剂II。分别取处方38、39和40原料药和辅料，按照与上述相同工艺方法，分别制备得到4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸乳膏I、3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸乳膏I和3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸鼻用制剂II。
表31.托品酸及其衍生物鼻用制剂II处方
物料名称 处方37 处方38 处方39 处方40
托品酸 2g — — —
4-羟基-α-(羟甲基)苯乙酸 — 2g — —
3,4-二羟基-α-(羟甲基)苯乙酸 — — 2g —
3,4,5-三羟基-α-(羟甲基)苯乙酸 — — — 2g
氯化钠 0.8g 0.8g 0.8g 0.8g
羟丙甲纤维素 3g 3g 3g 3g
吐温80 0.3g 0.3g 0.3g 0.3g
焦亚硫酸钠 0.2g 0.2g 0.2g 0.2g
乙二胺四乙酸钠 0.2g 0.2g 0.2g 0.2g
1N氢氧化钠溶液 适量 适量 适量 适量
苯扎氯铵 0.02g 0.02g 0.02g 0.02g
纯化水 加至100mL 加至100mL 加至100mL 加至100mL
以上描述了本发明优选实施方式，然其并非用以限定本发明。本领域技术人员对在此公开的实施方案可进行并不偏离本发明范畴和精神的改进和变化。

Claims (9)

1.托品酸及其衍生物、其药学上可接受的盐、溶剂化合物、对映异构体、非对映异构体、互变异构体或其任意比例的混合物在制备预防和/或治疗免疫与炎症相关疾病药物中的用途，所述托品酸及其衍生物具有以下式A所示的结构：
其中，R1-R5各自独立地选自-H、-OH或者C1-C6的烷氧基；
所述的免疫与炎症相关疾病包括：过敏性鼻炎、支气管炎、支气管哮喘、咽喉炎、结膜炎、新生儿溶血反应、溶血性贫血、再生障碍性贫血、肾炎、结核病、梅毒、肺炎(包括新冠)、胃肠道炎、子***、中耳炎、败血症、脓毒血症、心肌炎、脑膜炎、扁桃体炎、鼻窦炎、胸膜炎、胆囊炎、骨髓炎、***炎、尿道炎、膀胱炎、肛肠炎、甲沟炎和毛囊炎、骨关节炎、肝炎、***性红斑狼疮、脊柱炎、类风湿性关节炎、糖尿病、胰腺炎、肠炎、风湿性心脏病、血管炎、硬皮病、天疱疮、皮肌炎、混合性***病及甲状腺炎中的一种或几种。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的免疫与炎症相关疾病包括：过敏性鼻炎、再生障碍性贫血、膜性肾炎、新冠、自身免疫性肝炎、类风湿性关节炎中的一种或几种。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，R1-R5各自独立的选自-H或-OH。
4.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述托品酸及其衍生物选自以下式I-式IV所示化合物：
5.一种免疫与炎症相关疾病预防和/或治疗药物，该免疫与炎症相关疾病治疗药物中含有权利要求1-4中任一项所述的托品酸及其衍生物、其药学上可接受的盐、溶剂化合物、对映异构体、非对映异构体、互变异构体或其任意比例的混合物；
所述的免疫与炎症相关疾病包括：过敏性鼻炎、支气管炎、支气管哮喘、咽喉炎、结膜炎、新生儿溶血反应、溶血性贫血、再生障碍性贫血、肾炎、结核病、梅毒、肺炎(包括新冠)、胃肠道炎、子***、中耳炎、败血症、脓毒血症、心肌炎、脑膜炎、扁桃体炎、鼻窦炎、胸膜炎、胆囊炎、骨髓炎、***炎、尿道炎、膀胱炎、肛肠炎、甲沟炎和毛囊炎、骨关节炎、肝炎、***性红斑狼疮、脊柱炎、类风湿性关节炎、糖尿病、胰腺炎、肠炎、风湿性心脏病、血管炎、硬皮病、天疱疮、皮肌炎、混合性***病及甲状腺炎中的一种或几种。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述的免疫与炎症相关疾病包括：过敏性鼻炎、再生障碍性贫血、膜性肾炎、新冠、自身免疫性肝炎、类风湿性关节炎中的一种或几种。
7.根据权利要求1-4任一项所述的用途或者根据权利要求5或6所述的药物，其特征在于，所述药物是外用药、口服药或者注射药。
8.根据权利要求1-4任一项所述的用途或者根据权利要求5或6所述的药物，其特征在于，所述药物还包含药学上可接受的载体或者辅料。
9.根据权利要求1-4任一项所述的用途或者根据权利要求5或6所述的药物，其特征在于，所述药物为固体剂型、液体剂型或半固体剂型，优选的，所述药物的剂型是：散剂、片剂、包衣片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂、混悬剂、注射剂、喷雾剂、鼻用剂、气雾剂、粉雾剂、洗剂、搽剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂、凝胶剂、贴剂。
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US5389677B1 (en) * 1986-12-23 1997-07-15 Tristrata Inc Method of treating wrinkles using glycalic acid
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