CN117256832A - 一种罗汉果甜苷的制备方法及其应用 - Google Patents

一种罗汉果甜苷的制备方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种罗汉果甜苷的制备方法及其应用，所述制备方法包括以下步骤：S1.30℃～90℃充分加热罗汉果的水提液，得到粗提液；S2.对步骤S1所得粗提液进行脱色；S3.用大孔吸附树脂对步骤S2所得脱色液进行纯化，以乙醇作为洗脱液，分段收集；S4.浓缩。本发明仅需提取一次便可获得原料中绝大部分的罗汉果苷，并且无需使用其他有机溶剂提高提取率，操作简便，成本低，可用于食品的工业化生产和加工。本发明提供的含有罗汉果甜苷和酶解罗汉果甜苷，与蔗糖的口感高度相近，可作为代替蔗糖的甜味剂进行使用，且适用于不同类型的食品，可以满足市场及企业的不同生产需求。

Description

一种罗汉果甜苷的制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及食品领域品原料及添加剂，具体地，涉及一种罗汉果甜苷的制备方法及其应用。
背景技术
甜味是人类基本味觉之一，甘甜是无数人无法抗拒的幸福滋味。食物中能提供甜感的物质有营养型甜味剂和非营养型甜味剂。营养型甜味剂包括白砂糖、果葡糖浆、结晶果糖等；非营养型甜味剂分为合成甜味剂和天然甜味剂，合成甜味剂包括三氯蔗糖、安赛蜜、阿斯巴甜等；天然甜味剂包括甜菊糖苷、罗汉果甜苷等。填充型甜味剂既能提供固形物口感，能量值又较低，多为糖醇，包括赤藓糖醇、木糖醇、麦芽糖醇等。
非营养型甜味剂普遍热值较低或无热值，能有效减少因过量摄取糖而引起的心脑血管疾病及龋齿等疾病。此外，非营养型甜味剂也可以满足一些不宜食用蔗糖的病患者对甜味的要求，特别是一些具有糖代谢异常的人群。为了满足消费者降低糖摄入量的健康需求，非营养型甜味剂逐步取代营养型甜味原料。但是合成甜味剂的安全及稳定性问题使其在应用时受到一定程度的限制，比如糖精有一定毒性，是一种潜在的致癌物质，已被许多国家禁用或限用。而传统的天然甜味剂比如甜菊糖苷和甜茶苷普遍具有较明显的苦涩味及浓厚的植物风味，前甜不足，后甜过长，消费者的接受度不高。
天然甜味剂的制备工艺包括植物提取和生物转化。由药食两用的罗汉果中制备的天然甜味剂是理想的蔗糖替代品，不仅高甜度及低热量，而且具有增强免疫、抗疲劳及降糖等功效，食用后不被人体吸收，能有效降低能量物质的摄入。然而现有技术中使用罗汉果制备天然甜味剂，存在产物有杂味、产物流失、产品不稳定、成本过高、经济价值低等问题。
发明内容
为了解决现有技术中天然甜味剂在制备工艺复杂以及口感缺失方面存在的问题，本发明提供一种罗汉果甜苷的制备方法及其应用，通过优化天然甜味剂的制备工艺及不同甜味原料的复配技术，提升甜味剂整体口感，使其在口感上相较于类似产品更为接近蔗糖。
本发明的第一个目的是提供一种制备罗汉果甜苷的方法。
本发明的第二个目的是提供上述的方法制得的罗汉果甜苷。
本发明的第三个目的是提供上述罗汉果甜苷作为甜味剂在食品制作和/或加工中的应用。
本发明的第四个目的是提供一种酶解罗汉果甜苷的方法。
本发明的第五个目的是提供上述方法制得的产物。
本发明的第六个目的是提供上述产物作为甜味剂在食品制作和/或加工中的应用。
本发明的第七个目的是提供一种甜味剂。
为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：
本发明通过调整提取工艺物料及参数，通过分段提取法获得了其中甜感纯正的罗汉果甜苷。之后采用复配技术对原料的异味(苦涩味，甘草味等)及甜感进行了优化。
本发明在脱色脱味及富集阶段通过感官评测寻找甜感最佳的罗汉果苷提取液，最终选出的提取液甜感纯正不含杂味，方便快捷，可直接用于后续产品的开发。其余阶段的提取液可通过循环加工富集高品质提取液，或再加工进行其他应用。
一种制备罗汉果甜苷的方法，包括以下步骤：
S1.30℃～90℃充分加热罗汉果的水提液，得到粗提液；
S2.用大孔离子交换树脂对步骤S1所得粗提液进行脱色，用水进行洗脱，测定洗脱液的甜度，以甜度低于1％(w/v)蔗糖水溶液为洗脱终点，收集所得洗脱液，即得到脱色液；
S3.用大孔吸附树脂对步骤S2所得脱色液进行纯化，用50％(v/v)～90％(v/v)乙醇进行洗脱，分段收集洗脱液，即得到纯化液；所述分段收集的方法为：按照0.2个柱体积～0.5个柱体积为1份，收集自洗脱开始起的第5份～第8份洗脱液；
S4.对步骤S3所得纯化液进行浓缩，即得到罗汉果甜苷。
本发明对罗汉果原料的品种、来源和加工工艺没有特殊限定，罗汉果的加工工艺包括但不限于冻干、风干和烘烤。
冻干罗汉果，其果皮易于移除，相较于鲜罗汉果及烘烤罗汉果，既解决了普通鲜罗汉果无法长期保存及原料种植周期的问题，也解决了烘烤罗汉果存在异味重，对脱色工艺负担大的问题。提取原料保留罗汉果苷含量最高且杂质相对较少的果仁。
优选地，所述罗汉果为冻干罗汉果。
优选地，步骤S1中，所述罗汉果的水提液由罗汉果粉末的水溶液经过20KHz～100KHz超声处理10min～20min得到。
更优选地，步骤S1中，所述超声的方法为：40KHz超声处理10min。
更优选地，步骤S1中，所述罗汉果粉末的制备方法为：将罗汉果去除果壳后，粉碎，过筛。
进一步优选地，步骤S1中，所述罗汉果粉末的制备方法为：将罗汉果去除果壳后，经过破壁机粉碎，过200目筛。
更优选地，步骤S1中，所述含有罗汉果粉末的水溶液中，罗汉果粉末与水的料液比为1:(10～20)。
更优选地，步骤S1中，所述含有罗汉果粉末的水溶液中，罗汉果粉末与水的料液比为1:15。
优选地，步骤S1中，30～90℃加热60～120min。
更优选地，步骤S1中，30℃加热90min。
优选地，步骤S1中，所述加热的方法为水浴加热。
更优选地，步骤S1中，所述加热的过程中还需要搅拌，搅拌速率为200rpm～300rpm。
进一步优选地，步骤S1中，所述加热的过程中还需要搅拌，搅拌速率为200rpm。
优选地，步骤S1中，加热结束后还需要进行离心，所述离心的方法为：6000rpm～10000rpm离心5min～10min。
更优选地，步骤S1中，所述离心的方法为：10000rpm离心10min。
优选地，步骤S2中，所述大孔离子交换树脂为D280大孔阴离子交换树脂、LSA-700大孔阴离子交换树脂或D941大孔阴离子交换树脂中的任意一种。
更优选地，步骤S2中，所述大孔离子交换树脂为D280树脂。
优选地，步骤S2中，所述脱色包括进料和洗脱。
更优选地，步骤S2中，所述脱色的进料流速为2mL/min～4mL/min。
进一步优选地，步骤S2中，所述脱色的进料流速为3mL/min。
更优选地，步骤S2中，所述洗脱为用2个柱体积的纯化水以2mL/min～4mL/min的流速冲洗大孔离子交换树脂，按照GB 8270-1999中测定甜度的方法制备1％(w/v)蔗糖水溶液，依据GB/T 16291.2 2010培训并筛选感官评价人员，以1％(w/v)蔗糖水溶液为标准溶液，所得洗脱液经感官评价人员感官评测，直至流出液1的甜度低于所述标准溶液即为洗脱终点，收集所得洗脱液，即得到脱色液。
进一步优选地，步骤S2中，所述洗脱为用2个柱体积的纯化水以3mL/min的流速冲洗大孔离子交换树脂，按照GB 8270-1999中测定甜度的方法制备1％(w/v)蔗糖水溶液，依据GB/T 16291.2 2010培训并筛选感官评价人员，以1％(w/v)蔗糖水溶液为标准溶液，所得洗脱液经感官评价人员感官评测，直至流出液1的甜度低于所述标准溶液即为洗脱终点，收集所得洗脱液，即得到脱色液。
优选地，步骤S3中，所述大孔吸附树脂为D101树脂、AB-8树脂或D941树脂中的任意一种。
更优选地，步骤S3中，所述大孔吸附树脂为D101树脂。
优选地，步骤S3中，在洗脱前，用2个柱体积的纯化水以2mL/min～4mL/min的流速冲洗大孔吸附树脂。
优选地，步骤S3中，以75％(v/v)乙醇作为洗脱液。
优选地，步骤S3中，所述分段收集洗脱液的方法为：按照0.32个柱体积为1份，收集自洗脱开始起的第6份洗脱液。
优选地，步骤S3中，所述浓缩的方法为真空减压浓缩。
优选地，步骤S3中，所述浓缩的方法为水浴60℃、0.098Mpa真空减压旋蒸，直至蒸干。
任一上述方法制得的罗汉果甜苷也应在本发明的保护范围之内。
任一上述方法制得的罗汉果甜苷作为甜味剂在食品制作和/或加工中的应用也应在本发明的保护范围之内。
优选地，所述食品为饮品。
更优选地，所述饮品为茶水。
本发明采用酶解技术对罗汉果甜苷进行异味修饰并采用复配工艺将不同成分混合，彼此产生协同作用，从而在甜味展现的完整过程中使口感更为接近蔗糖，特别是罗汉果甜苷特有的清凉感，涩感及拖尾感得到了显著改善。
一种酶解罗汉果甜苷的方法，将麦芽糊精和所述的罗汉果甜苷充分混合均匀，所得混合物经糖基转移酶充分酶解。
优选地，所述罗汉果甜苷与麦芽糊精的质量比为1：(1～3)。
更优选地，所述罗汉果甜苷与麦芽糊精的质量比为1：2。
优选地，所述罗汉果甜苷与糖基转移酶的质量体积比为1g:(0.01～0.02)mL。
更优选地，所述充分酶解的方法为：将罗汉果甜苷与麦芽糊精按照质量比为1：(1～3)充分混合，所得混合物按照罗汉果甜苷与糖基转移酶按照质量体积比1g:(0.01～0.02)mL的充分混合，于50℃～60℃反应100min～150min。
进一步优选地，所述充分反应的方法为：将上述的罗汉果甜苷与麦芽糊精按照质量比为1：2充分混合，所得混合物按照罗汉果甜苷与糖基转移酶1g:0.0125mL的质量体积比充分混合，60℃反应120min。
更优选地，所述糖基转移酶为天野酶制品公司(Amano Enzyme Inc)上海分公司的ɑ-Amylase G“Amano”L液体酶，EINECS NO.232-565-6。
进一步优选地，所述罗汉果甜苷与ɑ-Amylase G“Amano”L液体酶的质量体积比为1g:0.0125mL。
更进一步优选地，所述充分酶解的方法为：将所述罗汉果甜苷与麦芽糊精按照质量比为1：(1～3)充分混合，所得混合物按照罗汉果甜苷与ɑ-Amylase G“Amano”L液体酶按照质量体积比为1g:(0.01～0.02)mL充分混合，于50℃～60℃反应100min～150min。
最优选地，所述充分反应的方法为：将所述罗汉果甜苷与麦芽糊精按照质量比为1：2充分混合，所得混合物按照罗汉果甜苷与ɑ-Amylase G“Amano”L液体酶按照质量体积比为1g:0.0125mL充分混合，60℃反应120min。
优选地，所述方法还包括加热灭活糖基转移酶。
更优选地，所述加热灭活的方法为80℃～95℃加热10min～20min。
进一步优选地，所述加热灭活的方法为90℃加热10min。
任一上述方法制得的产物也应在本发明的保护范围之内。
任一上述方法制得的产物作为甜味剂在食品制作和/或加工中的应用也应在本发明的保护范围之内。
优选地，所述食品为饮品。
更优选地，所述饮品为椰乳。
进一步优选地，所述椰乳为无糖椰乳。
一种甜味剂，包含任一上述的罗汉果甜苷和/或任一上述方法制得的产物。
优选地，所述甜味剂还包含索马甜、赤藓糖醇或***糖中的任意一种。
更优选地，所述甜味剂由任一上述方法制得的产物和***糖组成。
进一步优选地，所述甜味剂由1重量份～10重量份任一上述方法制得的产物和1重量份～500重量份***糖组成。
更进一步优选地，所述甜味剂由1重量份～10重量份任一上述方法制得的产物方法制得的产物和300重量份～400重量份***糖组成。
更进一步优选地，所述甜味剂由1重量份上述的罗汉果甜苷和300重量份～400重量份***糖组成。
最优选地，所述甜味剂由1重量份任一方法制得的产物和333.3重量份的***糖组成。
上述甜味剂在食品制造和/或食品加工中的应用也应在本发明的保护范围之内。
优选地，所述食品为饮品。
更优选地，所述饮品为椰乳。
进一步优选地，所述椰乳为无糖椰乳。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明仅需提取一次便可获得原料中绝大部分的罗汉果苷，并且无需使用其他有机溶剂提高提取率，操作简便，成本低，可用于食品的工业化生产和加工。
本发明提供的含有罗汉果甜苷和酶解罗汉果甜苷，与蔗糖的口感高度相近，可作为代替蔗糖的甜味剂进行使用，且适用于不同类型的食品，可以满足市场及企业的不同生产需求。
附图说明
图1为罗汉果甜苷用作甜味剂的感官评价结果。
图2为含有罗汉果甜苷的组合物用作甜味剂的感官评价结果。
具体实施方式
下面结合说明书附图及具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。本发明实施例中所涉及的1个柱体积相当于125mL。
实施例1一种制备罗汉果甜苷的方法
1、原料预处理
选取干罗汉果原料，移除果壳，取10g使用破壁机粉碎，过200目筛，即获得粉末状原料。
2、提取
将步骤1获得的粉末状原料与纯水混合，料液比为1:15；超声提取预处理10min，超声频率40KHz。
随后放入已预热至30℃的水浴锅中进行搅拌提取90min，搅拌的转速为200rpm。
使用离心机，10000rpm离心10min，收集上清液，即获得粗提液。
3、脱色
使用含D280大孔阴离子交换树脂的层析柱进行脱色处理，进料流速控制为3mL/min；进料完毕后，使用2个柱体积的纯水以3mL/min冲洗D280树脂。
按照GB 8270-1999中测定甜度的方法制备1％(w/v)蔗糖水溶液；依据GB/T16291.2 2010培训并筛选感官评价人员，以1％(w/v)蔗糖水溶液为标准溶液，所得洗脱液经评价员感官评测，直至水洗液的甜度低于1％(w/v)蔗糖水溶液即为洗脱终点。
收集水洗液即获得脱色提取液。
4、纯化
将步骤3获得的脱色提取液通过D101大孔吸附树脂进行纯化，进料流速控制为3mL/min；进料完毕后，使用2个柱体积的纯水以3mL/min冲洗D101树脂，使用75％(v/v)乙醇进行洗脱，从加入75％(v/v)乙醇开始，按照每0.32个柱体积为一个阶段，分阶段收集洗脱液，共收集8个阶段的洗脱液。
5、浓缩
将步骤4收集的8份洗脱液，分别在水浴60℃、0.098Mpa进行真空减压浓缩旋蒸，直至蒸干，收集得到8份浓缩物。
6、甜感测定
依据GB/T 16291.2 2010培训并筛选感官评价人员，品尝包括但不限于市售甜菊糖苷、赤藓糖醇、罗汉果苷和***糖等甜味剂单体样品在等甜于10％(w/v)蔗糖溶液时的感官特征，并筛选出针对主流甜味剂描述较为常见的特征词库，如甜感、苦味感、涩味感、清凉感、青草味感和金属感及拖尾感(甜味在口腔中的弥留感)等感官描述。
用40mL纯水分别溶解上一步得到8份浓缩物，按照GB 8270-1999中测定甜度的方法制备10％(w/v)蔗糖水溶液；以10％(w/v)蔗糖水溶液为标准溶液，评价分段收集的8份浓缩液的甜感和异味感，具体判定标准如下：
甜感判定：经感官评价人员评价，待测液的甜度明显低于10％(w/v)蔗糖水且接近RO水，则判定甜感为无甜味；经感官评价人员评价，待测液的甜度接近或等于10％(w/v)蔗糖水，则判定甜感为微甜；经感官评价人员评价，待测液的明显高于10％(w/v)蔗糖水，则判定甜感为非常甜；
异味感判定：经感官评价人员评价，待测液接近RO水无明显异味感，则判定异味感为无异味；经感官评价人员评价，待测液有轻微的苦涩、清凉或青草等异味，则判定异味感为异味轻；经感官评价人员评价，待测液有明显的苦涩、清凉或青草等异味，则判定异味感为异味重。
8份浓缩液的甜感及异味感的测定结果如表1所示。
表1实施例1浓缩液的甜感及异味感的测定结果
结果表明，8份浓缩液中甜感最好的是第6份浓缩液，即来自分阶段收集的第6个阶段(201mL～240mL)的洗脱液，作为本实施例最终获得的罗汉果甜苷。
实施例2一种制备罗汉果甜苷的方法
1、原料预处理
与实施例1的步骤1相同。
2、提取
将步骤1获得的粉末状原料与纯水混合，料液比为1:15；超声提取预处理15min，超声频率40KHz。
随后放入已预热至90℃的水浴锅中进行搅拌提取120min，搅拌的转速为200rpm。
使用离心机，10000rpm离心10min，收集上清液，即获得粗提液。
3、脱色
使用含D280大孔阴离子交换树脂的层析柱进行脱色处理，进料流速控制为3mL/min；进料完毕后，使用2个柱体积的纯化水以3mL/min冲洗D280树脂。
按照实施例1的步骤3评测水洗液的甜度，直至水洗液无甜味为冲洗终点。
收集水洗液即获得脱色提取液。
4、纯化
将步骤3获得的脱色提取液通过D101大孔吸附树脂进行纯化，进料流速控制为3mL/min；进料完毕后，使用2个柱体积的纯化水以4mL/min冲洗D101树脂，使用75％(v/v)乙醇对D101树脂进行洗脱，从加入75％(v/v)乙醇开始，按照每0.4个柱体积为一个阶段，分阶段收集洗脱液，共收集6个阶段的洗脱液。
5、浓缩
按照实施例1的步骤5对6份洗脱液进行浓缩，得到6份浓缩物。
6、甜感测定
按照实施例1的步骤6测定6份浓缩液的甜感和异味感，结果如表2所示。
表2实施例2浓缩液的甜感及异味感的测定结果
结果表明，6份浓缩液中甜感最好的是第5份浓缩液，即来自分阶段收集的第5个阶段(201mL～250mL)的洗脱液，作为本实施例最终获得的罗汉果甜苷。
实施例3一种制备罗汉果甜苷的方法
1、原料预处理
与实施例1的步骤1相同。
2、提取
将步骤1获得的粉末状原料与纯水混合，料液比为1:20；超声提取预处理20min，超声频率80KHz。
随后放入已预热至30℃的水浴锅中进行搅拌提取60min，搅拌的转速为200rpm。
使用离心机，10000rpm离心10min，收集上清液，即获得粗提液。
3、脱色
使用含D280大孔阴离子交换树脂的层析柱进行脱色处理，进料流速控制为4mL/min；进料完毕后，使用2个柱体积的纯化水以4mL/min冲洗D280树脂。
按照实施例1的步骤3评测水洗液的甜度，直至水洗液无甜味为冲洗终点。
收集水洗液即获得脱色提取液。
4、纯化
将步骤3获得的脱色提取液通过AB-8大孔吸附树脂进行纯化，进料流速控制为4mL/min；进料完毕后，使用2个柱体积的纯化水以2mL/min冲洗AB-8树脂，使用75％(v/v)乙醇对AB-8树脂进行洗脱，从加入75％(v/v)乙醇开始，按照每0.24个柱体积为一个阶段，分阶段收集洗脱液，共收集10个阶段的洗脱液。
5、浓缩
按照实施例1的步骤5对10份洗脱液进行浓缩，得到10份浓缩物。
6、甜感测定
按照实施例1的步骤6测定10份浓缩液的甜感和异味感，结果如表3所示。
表3实施例3浓缩液的甜感及异味感的测定结果
结果表明，10份浓缩液中甜感最好的是第8份浓缩液，即来自分阶段收集的第8个阶段(211mL～240mL)的洗脱液，作为本实施例最终获得的罗汉果甜苷。
实施例4一种制备罗汉果甜苷的方法
1、原料预处理
与实施例1的步骤1相同。
2、提取
将步骤1获得的粉末状原料与纯水混合，料液比为1:10；超声提取预处理20min，超声频率40KHz。
随后放入已预热至60℃的水浴锅中进行搅拌提取120min，搅拌的转速为200rpm。
使用离心机，10000rpm离心10min，收集上清液，即获得粗提液。
3、脱色
使用含LSA-700大孔阴离子交换树脂的层析柱进行脱色处理，进料流速控制为3mL/min；进料完毕后，使用2个柱体积的纯化水以3mL/min冲洗LSA-700树脂。
按照实施例1的步骤3评测水洗液的甜度，直至水洗液无甜味为冲洗终点。
收集水洗液即获得脱色提取液。
4、纯化
将步骤3获得的脱色提取液通过AB-8大孔吸附树脂进行纯化，进料流速控制为3mL/min；进料完毕后，使用2个柱体积的纯化水以2mL/min冲洗AB-8树脂，使用90％(v/v)乙醇对AB-8树脂进行洗脱，从加入90％(v/v)乙醇开始，按照每0.24个柱体积为一个阶段，分阶段收集洗脱液，共收集10个阶段的洗脱液。
5、浓缩
按照实施例1的步骤5对10份洗脱液进行浓缩，得到10份浓缩物。
6、甜感测定
按照实施例1的步骤6测定10份浓缩液的甜感和异味感，结果如表4所示。
表4实施例4浓缩液的甜感及异味感的测定结果
结果表明，10份浓缩液中甜感最好的是第8份浓缩液，即来自分阶段收集的第8个阶段(211mL～240mL)的洗脱液，作为本实施例最终获得的罗汉果甜苷。
实施例5一种制备罗汉果甜苷的方法
1、原料预处理
与实施例1的步骤1相同。
2、提取
将步骤1获得的粉末状原料与纯水混合，料液比为1:15；超声提取预处理10min，超声频率40KHz。
随后放入已预热至60℃的水浴锅中进行搅拌提取120min，搅拌的转速为200rpm。
使用离心机，10000rpm离心10min，收集上清液，即获得粗提液。
3、脱色
使用含D941大孔阴离子交换树脂的层析柱进行脱色处理，进料流速控制为3mL/min；进料完毕后，使用2个柱体积的纯化水以3mL/min冲洗D941树脂。
按照实施例1的步骤3评测水洗液的甜度，直至水洗液无甜味为冲洗终点。
收集水洗液即获得脱色提取液。
4、纯化
将步骤3获得的脱色提取液通过ADS-7大孔吸附树脂进行纯化，进料流速控制为3mL/min；进料完毕后，使用2个柱体积的纯化水以3mL/min冲洗ADS-7树脂，使用75％(v/v)乙醇对ADS-7树脂进行洗脱，从加入75％(v/v)乙醇开始，按照每0.32个柱体积为一个阶段，分阶段收集洗脱液，共收集8个阶段的洗脱液。
5、浓缩
按照实施例1的步骤5对8份洗脱液进行浓缩，得到8份浓缩物。
6、甜感测定
按照实施例1的步骤6测定8份浓缩液的甜感和异味感，结果如表5所示。
表5实施例5浓缩液的甜感及异味感的测定结果
结果表明，8份浓缩液中甜感最好的是第6份浓缩液，即来自分阶段收集的第6个阶段(201mL～240mL)的洗脱液，作为本实施例最终获得的罗汉果甜苷。
应用例1罗汉果甜苷用作甜味剂
一、实验方法
1、甜味剂的甜度标定
以实施例1制得的罗汉果甜苷以及市售罗汉果提取物(罗汉果甜苷V50，CAS号：88901-36-4)和甜菊糖苷RA97％(CAS号：58543-16-1)作为待测甜味剂，以10％(w/v)的蔗糖水溶液在20℃时的甜度作为对照(记为“甜度为1.0”)，按照实施例1中步骤6进行感官评价测定，对待测甜味剂进行感官评价和甜度评估，根据结果标定待测甜味剂在纯水中的添加量，具体情况如表6所示。
表6应用例1的甜度标定情况
2、待测产品制备
将茶叶和沸水按照(w/v)1：50浸泡5min，得到茶水溶液。
根据表6所示的甜度标定结果，向茶水溶液中加入0.04％(w/v)实施例1制得的罗汉果甜苷，充分混合均匀，即得到待测产品1，向茶水溶液中加入0.05％(w/v)市售罗汉果提取物(罗汉果甜苷V50，CAS号：88901-36-4)，充分混合均匀，即得到待测产品2；向茶水溶液中加入0.05％(w/v)甜菊糖苷RA97％(CAS号：58543-16-1)，充分混合均匀，即得到待测产品3；向茶水溶液中加入10％(w/v)蔗糖(CAS号：57-50-1)，充分混合均匀，即得到对照产品。
3、感官评价
根据GB/T 16291.1&2 2010的规定，培训和选拔感官评价人员，以对照产品为标准对待测产品1～5进行甜度及异味感的感官评价。
评价标准如下：
甜感：最低为0分，最高为15分；
苦味感：最低为0分，最高为15分；
青草感：最低为0分，最高为15分；
清凉感：最低为0分，最高为15分；
涩味感：最低为0分，最高为15分；
以上待测产品进行感官评价时，采用一段长为15厘米的直线作为标度尺，标度尺左端表示评价特征“没有或最小”，标度尺右端表示评价特征“最强或最大”，各被试样品之间互相比对筛选出主要特征并用标度尺标注其强度。适用于茶水的特征为甜感，苦味感，青草味感，清凉感及涩感。
二、实验结果
表7应用例1的感官评价结果
如表7所示和图1所示，采用本发明实施例1的方法，通过分段收集获得的罗汉果甜苷用作甜味剂添加入茶水中，在甜感上更为接近蔗糖，对比其他待测产品，在涩苦及青草感也有不同程度的减弱，并且新增了一种令人愉悦的类似蜜糖的独特风味。
实施例6一种罗汉果甜苷的酶解方法
本实施例提供的酶解方法适用于实施例1～5任一所述方法或本领域常规方法制备的罗汉果甜苷。
以本发明实施例1制得的罗汉果甜苷为例，具体的操作步骤如下：
1、原料预处理
将实施例1制得的罗汉果甜苷与麦芽糊精(CAS号：9050-36-6)按照质量比1：2充分混合溶解，即获得酶解原料。
2、酶解
按照罗汉果甜苷与糖基转移酶＝1g:0.0125mL的质量体积比，向步骤1获得的酶解原料中添加糖基转移酶(即天野酶制品公司(Amano Enzyme Inc)上海分公司的ɑ-AmylaseG“Amano”L液体酶)，在温度60℃的水浴锅中酶解120min，即获得酶解产物。
3、灭活
将步骤2获得的酶解产物置于90℃水浴锅中10min，使糖基转移酶充分灭活，即获得酶解的罗汉果甜苷。
实施例7一种罗汉果甜苷的酶解方法
本实施例提供的酶解方法适用于实施例1～5任一所述方法或本领域常规方法制备的罗汉果甜苷。
以本发明实施例1制得的罗汉果甜苷为例，具体的操作步骤与实施例6基本相同，区别仅在于：
步骤1中，将实施例1制得的罗汉果甜苷与麦芽糊精(CAS号：9050-36-6)按照质量比1：3充分混合溶解；步骤2中，罗汉果甜苷与糖基转移酶(即天野酶制品公司(AmanoEnzyme Inc)上海分公司的ɑ-Amylase G“Amano”L液体酶)按1:0.05的质量体积比混合进行酶解；温度50℃，反应时间240min；步骤3中，将步骤2获得的酶解产物置于90℃水浴锅中20min。
应用例2含有罗汉果甜苷的组合物用作复配甜味剂
一、实验方法
本发明提供的酶解的罗汉果甜苷可与常规市购的甜味剂(如索马甜(CAS号：71396-29-7)、赤藓糖醇(CAS号：149-32-6)和***糖(CAS号：147-81-9))进行复配，以下以***糖(CAS号：147-81-9)为例，提供一种含有罗汉果甜苷的组合物及其用作复配甜味剂的具体用途。
1、复配甜味剂的制备
分别以本发明实施例6制得的酶解罗汉果甜苷作为主料，以***糖(CAS号：147-81-9)作为辅料，按照主料与辅料的质量比为1：333.3混合均匀，即得到复配甜味剂1(含实施例6制得的酶解罗汉果甜苷)。
2、复配甜味剂的甜度标定
以无糖椰乳为测试基质，以复配甜味剂1、实施例1制得的罗汉果甜苷、以及市售罗汉果提取物(罗汉果甜苷V50，CAS号：88901-36-4)和甜菊糖苷RA97％(CAS号：58543-16-1)作为待测甜味剂，以5％(w/v)的蔗糖水溶液在20℃时经评价员感官测定甜度为0.5作为对照，按照应用例1中的步骤1进行甜度标定，具体情况如表8所示。
表8应用例2的甜度标定情况
3、待测产品制备
根据表8所示的甜度标定结果，向无糖椰乳中加入4.012％(w/v)复配甜味剂1，充分混合均匀，即得到待测产品1；向无糖椰乳中加入0.02％(w/v)实施例1罗汉果甜苷，充分混合均匀，即得到待测产品2；向无糖椰乳中加入0.025％(w/v)市售罗汉果提取物(罗汉果甜苷V50，88901-36-4)，充分混合均匀，即得到待测产品3；向无糖椰乳中加入0.025％(w/v)甜菊糖苷RA97％(58543-16-1)，充分混合均匀，即得到待测产品4；向无糖椰乳中加入5％(w/v)蔗糖(CAS号：57-50-1)，充分混合均匀，即得到对照产品。
4、感官评价
按照应用例1中的“感官评价”方法，以本应用例的对照产品为标准，对本应用例的待测产品1～5进行甜度及异味感的感官评价。
二、实验结果
表9应用例2的感官评价结果
如表9所示和图2所示，对比其他待测产品，采用本发明实施例6的方法酶解的罗汉果甜苷与***糖复配的组合物(复配甜味剂1)对拖尾感、清凉感涩感及苦味感均产生了显著修饰作用，弥补了部分口感缺失，使其在甜味展现的完整过程中口感更为接近蔗糖。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，对于本领域的普通技术人员来说，在上述说明及思路的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种制备罗汉果甜苷的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.30℃～90℃充分加热罗汉果的水提液，得到粗提液；
S2.用大孔离子交换树脂对步骤S1所得粗提液进行脱色，用水进行洗脱，测定洗脱液的甜度，以甜度低于1％(w/v)蔗糖水溶液为洗脱终点，收集所得洗脱液，即得到脱色液；
S3.用大孔吸附树脂对步骤S2所得脱色液进行纯化，用50％(v/v)～90％(v/v)乙醇进行洗脱，分段收集洗脱液，即得到纯化液；所述分段收集的方法为：按照0.2个柱体积～0.5个柱体积为1份，收集自洗脱开始起的第5份～第8份洗脱液；
S4.对步骤S3所得纯化液进行浓缩，即得到罗汉果甜苷。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中，30℃～90℃加热60～120min。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中，所述罗汉果的水提液由罗汉果粉末的水溶液经过20KHz～100KHz超声处理10min～20min得到。
4.权利要求1～3任一所述方法制得的罗汉果甜苷。
5.权利要求4所述罗汉果甜苷作为甜味剂在食品制作和/或加工中的应用。
6.一种酶解罗汉果甜苷的方法，其特征在于，将麦芽糊精和权利要求4所述的罗汉果甜苷充分混合均匀，所得混合物经糖基转移酶充分酶解。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述麦芽糊精和权利要求4所述的罗汉果甜苷质量比为1：(1～3)。
8.权利要求6～7任一所述方法制得的产物。
9.权利要求8所述产物作为甜味剂在食品制作和/或加工中的应用。
10.一种甜味剂，其特征在于，包含权利要求4所述的罗汉果甜苷和/或权利要求8所述的产物。
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