CN117180158B - 一种抗衰组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种抗衰组合物及其制备方法和应用，属于化妆品的技术领域。本发明通过黄精多糖提取物、蓝莓提取物和枸杞提取物混合发酵产物配合虾青素具备相互协同，其强抗氧化性可通过其强大的自由基清除能力经多种机制发挥功效，可以直接或间接影响调控黑色素的合成。本发明中所述抗衰组合物包括脂质体和脂质体内的活性组分，所述活性组分含有虾青素和混合发酵物，所述混合发酵物以黄精多糖提取物、蓝莓提取物和枸杞提取物为原料经植物乳杆菌和黑曲霉发酵所得。
Description
技术领域
本发明属于化妆品的技术领域，涉及一种抗衰组合物及其制备方法和应用。
背景技术
随着生活水平的提高，人们对皮肤护理的重视程度越来越高，因此对肌肤养和抗衰老化妆品的需求也越来越大。然而，皮肤的老化是一个复杂的过程，与皮肤的超微结构和生物化学有关，可以分为来自内部和外部的老化过程。内源性老化是随着年龄增长而发生的，受个体的遗传因素、生活方式、疾病以及力等因素的影响。而外源性老化则主要受到外部环境因素的影响，比如活性氧、紫外线照射和自由基等，它们会逐渐累积并导致胶原蛋白和细胞基质的降解。这两种类型的老化都会在皮肤和细胞水平上表现出来。
肌肤的衰老一般表现在多个方面，包括表皮层水合作用减弱、屏障功能下降、氧化作用增加、DNA损伤、修复能下降、免疫力减弱、色素沉着、角质化等。甚至在真皮和表皮接触的部分，皮肤也会出现老化迹象，例如真皮层的炎症和微循环问题等，这些都会导致肌肤老化。
黄精是一种来自百合科植物滇黄精等植物的中药材，黄精含有丰富的多糖类物质、皂苷、黄酮、等营养元素，其中多糖是其主要生物活性成粉。黄精多糖是黄精的一类活性物质，具有抗氧化、延缓衰老、保湿等多种功效，已应用在中药、食品、化妆品等行业。
中国对枸杞功能的传统定义：补肝肾、益精气、长肌肉、改善面色、明目安神、祛风治虚、延年益寿、坚筋骨之功效。随着现代科学的发展，科学家们利用先进的科技揭示了枸杞有效性的物质基础。发现它含黄酮、枸杞酸、牛磺酸、甜菜碱还有类胡萝卜素、低聚糖、高分子糖肽、维生素：B1、B2、C和E、蛋白质、脂肪、氨基酸、粗纤维以及微量元素等。枸杞中的枸杞多糖是其重要的有效成份，枸杞多糖(LBP)含微量元素和氨基酸，是由六种单糖Ara、Clc、Gal、Man、Xyl和Rha组成。具有增强免疫、抗肿瘤、降血脂、抗血栓、抗衰老等功效。
发明内容
本发明的目的在于提供一种抗衰组合物及其制备方法和应用，本发明通过黄精多糖提取物、蓝莓提取物和枸杞提取物混合发酵产物配合虾青素具备相互协同，其强抗氧化性可通过其强大的自由基清除能力经多种机制发挥功效，可以直接或间接影响调控黑色素的合成。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
一种抗衰组合物，所述抗衰组合物包括脂质体和脂质体内的活性组分，所述活性组分含有虾青素和混合发酵物，所述混合发酵物以黄精多糖提取物、蓝莓提取物和枸杞提取物为原料经植物乳杆菌和黑曲霉发酵所得。
作为本发明的一种优选技术方案，所述活性组分的制备方法包括以下步骤：
1)黄精多糖提取物、蓝莓提取物和枸杞提取物紫外线灭菌后，得到底液；按照2％接种量将菌体浓度为107cfu/mL的植物乳杆菌加入至底液中，发酵后，得到发酵A液；
2)将按照6％接种量将菌体浓度为106cfu/mL的黑曲霉接种加入到发酵A液中，混合均匀后，加热发酵、离心后取上清液，得到发酵B液；
3)向雨生红球藻加入柠檬酸溶液和发酵B液混合均匀后，降温并进行超声破碎，固液分离取液体后，得到活性组分。
作为本发明的一种优选技术方案，在步骤1)中，所述黄精多糖提取物、蓝莓提取物和枸杞提取物的质量比为2：0.2-0.3：0.3-0.5；所述发酵的条件为在无氧的环境下发酵6-8h；其中，蓝莓提取物购于西安四叶草生物科技有限公司；黄精多糖提取物和枸杞提取物均购于宝鸡六盘韵生物科技有限公司；本发明的植物乳杆菌FEED8，CGMCC No.15029；本发明的黑曲霉为黑曲霉CGMCC 3.3927；本发明的雨生红球藻购自云南爱尔发生物技术股份有限公司。
进一步地，黄精多糖提取物富含多种生物活性成分，其中的多糖是其主要活性成分。多糖具有一定的抗氧化活性，黄精多糖具有较强的自由基清除能力，它能够捕捉并中和细胞内和细胞外的自由基，减少自由基对细胞的氧化损伤，并且可通过促进细胞内抗氧化酶的活性，如超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等，进而增强抗氧化防御***，减少氧化损伤；黄精多糖还具有一定的抗炎活性，能够抑制炎性因子的产生，减轻细胞的炎症反应，进而降低由炎症引发的氧化应激。
进一步地，蓝莓提取物富含花青素、类黄酮、多酚等生物活性成分，它们是蓝莓抗氧化作用的主要成分。花青素和类黄酮具有强抗氧化活性，能够捕捉和去除细胞中的自由基，防止细胞受到氧化损伤。蓝莓提取物中的花青素通过抑制氧化酶类的活性(如酪氨酸酶、酪氨酸酸化酶等)，能够阻断信号传导链条，减少细胞内ROS的产生，达到抗氧化的效果。
进一步地，枸杞提取物富含多个生物活性成分，枸杞提取物中的多糖可以增强SOD和GSH-Px等抗氧化酶的活性，促进细胞内抗氧化酶的产生，增强自身抗氧化能力。枸杞提取物中的多种成分如多糖、多酚化合物等能够捕获和中和自由基，减少自由基对细胞和组织的损伤。枸杞提取物中的活性成分可以有效抑制细胞膜上脂质过氧化反应，维持细胞膜完整性，减少脂质过氧化产物的生成，保护细胞免受氧化损伤。
进一步地，虾青素是一种天然的类胡萝卜素，具有强抗氧化和抑制黑色素合成的作用。虾青素可通过捕捉自由基，减少氧化应激、防止细胞的氧化损伤。其分子结构中的多个共轭双键赋予其较强的抗氧化能力，可以有效中和活性氧自由基，抑制氧化过程的进行；虾青素通过抗氧化作用和减少氧化应激进而抑制黑色素生成的过程，从而降低黑色素合成的程度，减轻皮肤色素沉着。
进一步地，本发明通过植物乳杆菌和黑曲霉组合协同发酵黄精多糖提取物、蓝莓提取物和枸杞提取物，通过植物乳杆菌进行发酵，其产物具备较强抗氧化性能，接着黑曲霉进一步对植物乳杆菌发酵产物进行二次发酵，二次发酵具备强抗氧化性能和抑制黑色素合成性能的多肽，能够增强皮肤成纤维细胞的增殖并且具有抑制黑色素的合成和提高人体皮肤DPPH自由基清除能力。
进一步地，黄精多糖提取物、蓝莓提取物和枸杞提取物通过发酵产生的寡糖、多肽物质在制备虾青素的过程中，提高虾青素的浸出率的同时，上述组分还可以通过自装结合增强相互之间的稳定性，利于提供持续性的DPPH自由基清除能力和ROS清除率能力。
作为本发明的一种优选技术方案，在步骤2)中，所述加热发酵的条件为在30-40℃温度、在转速120-150r/min搅拌下、发酵15-20h；所述离心的条件为在转速4000-4500r/min、离心10-15min。
作为本发明的一种优选技术方案，在步骤3)中，所述雨生红球藻、发酵B液和柠檬酸溶液的质量比为1：1.8-2.0：15；所述柠檬酸溶液的质量浓度为0.2-0.3％，所述超声破碎的条件为在20-25℃下、边搅拌边超声破碎30min、搅拌转速为30-50r/min、避光浸取24-30h。
一种抗衰组合物的制备方法，包括以下步骤：
S1、将大豆卵磷脂和胆固醇溶于无水乙醇并倒入容器中，超声混合后蒸发分散，得到脂质体；
S2、将混合发酵物预热后，加入至含脂质体的容器中，加热至脂质体水化后，超声震荡后，过0.45μm的微孔滤膜，通过离心洗涤，冷冻干燥后，得到抗衰组合物。
作为本发明的一种优选技术方案，在步骤S1中，所述大豆卵磷脂和胆固醇的质量比4∶1；所述超声混合的时间为20-30min；所述蒸发分散的条件为在30-35℃下、转速为30-50r/min下蒸发分散。
作为本发明的一种优选技术方案，在步骤S2中，所述预热的温度为50-55℃；所述超声震荡的时间为3-6min。
本发明公开了一种抗衰组合物的的应用，所述抗衰组合物按质量分数3-5％应用于化妆品、护肤品或洗护用品中。
本发明的有益效果：
本发明通过黄精多糖提取物、蓝莓提取物和枸杞提取物混合发酵产物配合虾青素具备相互协同，其强抗氧化性可通过其强大的自由基清除能力经多种机制发挥功效，可以直接或间接影响调控黑色素的合成。
具体实施方式
为更进一步阐述本发明为实现预定发明目的所采取的技术手段及功效，以下结合实施例，对依据本发明的具体实施方式、结构、特征及其功效，详细说明如下。
实施例1
所述活性组分的制备方法包括以下步骤：
1)黄精多糖提取物、蓝莓提取物和枸杞提取物紫外线灭菌后，得到底液；按照2％接种量将菌体浓度为107cfu/mL的植物乳杆菌加入至底液中，发酵后，得到发酵A液；其中，所述黄精多糖提取物、蓝莓提取物和枸杞提取物的质量比为2：0.2：0.3；所述发酵的条件为在无氧的环境下发酵6h；
2)将按照6％接种量将菌体浓度为106cfu/mL的黑曲霉接种加入到发酵A液中，混合均匀后，加热发酵、离心后取上清液，得到发酵B液；其中，所述加热发酵的条件为在30℃温度、在转速120r/min搅拌下、发酵15h；所述离心的条件为在转速4000r/min、离心10min；
3)向雨生红球藻加入柠檬酸溶液和发酵B液混合均匀后，降温并进行超声破碎，固液分离取液体后，得到活性组分；其中，所述雨生红球藻、发酵B液和柠檬酸溶液的质量比为1：1.8：15；所述柠檬酸溶液的质量浓度为0.2％，所述超声破碎的条件为在20℃下、边搅拌边超声破碎30min、搅拌转速为30r/min、避光浸取24h。
一种抗衰组合物的制备方法包括以下步骤：
S1、将大豆卵磷脂和胆固醇溶于无水乙醇并倒入容器中，超声混合后蒸发分散，得到脂质体；其中，所述大豆卵磷脂和胆固醇的质量比4∶1；所述超声混合的时间为20min；所述蒸发分散的条件为在30℃下、转速为30r/min下蒸发分散；
S2、将混合发酵物预热后，加入至含脂质体的容器中，加热至脂质体水化后，超声震荡后，过0.45μm的微孔滤膜，通过离心洗涤，冷冻干燥后，得到抗衰组合物；其中，所述预热的温度为50℃；所述超声震荡的时间为3min。
所述抗衰组合物按质量分数3％应用于化妆品、护肤品或洗护用品中。
实施例2
所述活性组分的制备方法包括以下步骤：
1)黄精多糖提取物、蓝莓提取物和枸杞提取物紫外线灭菌后，得到底液；按照2％接种量将菌体浓度为107cfu/mL的植物乳杆菌加入至底液中，发酵后，得到发酵A液；其中，所述黄精多糖提取物、蓝莓提取物和枸杞提取物的质量比为2：0.25：0.4；所述发酵的条件为在无氧的环境下发酵7h；
2)将按照6％接种量将菌体浓度为106cfu/mL的黑曲霉接种加入到发酵A液中，混合均匀后，加热发酵、离心后取上清液，得到发酵B液；其中，所述加热发酵的条件为在35℃温度、在转速135r/min搅拌下、发酵18h；所述离心的条件为在转速4200r/min、离心13min；
3)向雨生红球藻加入柠檬酸溶液和发酵B液混合均匀后，降温并进行超声破碎，固液分离取液体后，得到活性组分；其中，所述雨生红球藻、发酵B液和柠檬酸溶液的质量比为1：1.9：15；所述柠檬酸溶液的质量浓度为0.25％，所述超声破碎的条件为在22.5℃下、边搅拌边超声破碎30min、搅拌转速为40r/min、避光浸取27h。
一种抗衰组合物的制备方法包括以下步骤：
S1、将大豆卵磷脂和胆固醇溶于无水乙醇并倒入容器中，超声混合后蒸发分散，得到脂质体；其中，所述大豆卵磷脂和胆固醇的质量比4∶1；所述超声混合的时间为25min；所述蒸发分散的条件为在32.5℃下、转速为40r/min下蒸发分散；
S2、将混合发酵物预热后，加入至含脂质体的容器中，加热至脂质体水化后，超声震荡后，过0.45μm的微孔滤膜，通过离心洗涤，冷冻干燥后，得到抗衰组合物；其中，所述预热的温度为52.5℃；所述超声震荡的时间为4min。
所述抗衰组合物按质量分数4％应用于化妆品、护肤品或洗护用品中。
实施例3
所述活性组分的制备方法包括以下步骤：
1)黄精多糖提取物、蓝莓提取物和枸杞提取物紫外线灭菌后，得到底液；按照2％接种量将菌体浓度为107cfu/mL的植物乳杆菌加入至底液中，发酵后，得到发酵A液；其中，所述黄精多糖提取物、蓝莓提取物和枸杞提取物的质量比为2：0.3：0.5；所述发酵的条件为在无氧的环境下发酵8h；
2)将按照6％接种量将菌体浓度为106cfu/mL的黑曲霉接种加入到发酵A液中，混合均匀后，加热发酵、离心后取上清液，得到发酵B液；其中，所述加热发酵的条件为在40℃温度、在转速150r/min搅拌下、发酵20h；所述离心的条件为在转速4500r/min、离心15min；
3)向雨生红球藻加入柠檬酸溶液和发酵B液混合均匀后，降温并进行超声破碎，固液分离取液体后，得到活性组分；其中，所述雨生红球藻、发酵B液和柠檬酸溶液的质量比为1：2.0：15；所述柠檬酸溶液的质量浓度为0.3％，所述超声破碎的条件为在25℃下、边搅拌边超声破碎30min、搅拌转速为50r/min、避光浸取30h。
一种抗衰组合物的制备方法包括以下步骤：
S1、将大豆卵磷脂和胆固醇溶于无水乙醇并倒入容器中，超声混合后蒸发分散，得到脂质体；其中，所述大豆卵磷脂和胆固醇的质量比4∶1；所述超声混合的时间为30min；所述蒸发分散的条件为在35℃下、转速为50r/min下蒸发分散；
S2、将混合发酵物预热后，加入至含脂质体的容器中，加热至脂质体水化后，超声震荡后，过0.45μm的微孔滤膜，通过离心洗涤，冷冻干燥后，得到抗衰组合物；其中，所述预热的温度为55℃；所述超声震荡的时间为6min。
所述抗衰组合物按质量分数5％应用于化妆品、护肤品或洗护用品中。
对比例1
与实施例2相比，不同之处在于，对比例1不使用黄精多糖提取物，且蓝莓提取物和枸杞提取物的质量比为0.25：0.4，其余组分、制备步骤和参数均一致。
对比例2
与实施例2相比，不同之处在于，对比例2不使用蓝莓提取物，黄精多糖提取物和枸杞提取物的质量比为2：0.4，其余组分、制备步骤和参数均一致。
对比例3
与实施例2相比，不同之处在于，对比例3不使用枸杞提取物，黄精多糖提取物和蓝莓提取物的质量比为2：0.25，其余组分、制备步骤和参数均一致。
对比例4
与实施例2相比，不同之处在于，不使用植物乳杆菌进行发酵，其余组分、制备步骤和参数均一致。
对比例5
与实施例2相比，不同之处在于，不使用黑曲霉进行发酵，其余组分、制备步骤和参数均一致。
对比例6
与实施例2相比，不同之处在于步骤3)中发酵B液的加入顺序，其余组分、制备步骤和参数均一致。
步骤3)向雨生红球藻加入柠檬酸溶液混合均匀后，降温并进行超声破碎，固液分离取液体后，加入发酵B液搅拌混合后，得到活性组分；其中，所述雨生红球藻、发酵B液和柠檬酸溶液的质量比为1：1.9：15；所述柠檬酸溶液的质量浓度为0.25％，所述超声破碎的条件为在22.5℃下、边搅拌边超声破碎30min、搅拌转速为40r/min、避光浸取27h。
1.清除DPPH自由基的实验
在10mL比色管中依次加入4.0mLDPPH溶液和待测样品(实施例1-3、对比例1-6)，再加无水乙醇至刻度，混匀立即用1cm比色皿在517nm波长处测吸光值(A)，吸光值记为Ai，再在室温避光条件下放置30min后测吸光值，记为Aj，空白对照为只加DPPH乙醇溶液，其吸光度值记为Ac，按下式计算DPPH自由基清除率K(％)；
K＝[1-(Ai-Aj)/Ac]*100％；
实验重复3次取平均值，检测结果如表1所示。
2.细胞抗氧化功效评价实验
首先分别以无血清DMEM培养液配制浓度0.5％的样品溶液(实施例1-3、对比例1-6)，0.22μm滤膜过滤除菌，然后配制二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)探针溶液：按0.375uLDCFH-DA:1mLPBS比例稀释。取处于对数生长期的HaCaT细胞，以1×105个/mL密度接种于12孔培养板，选用其中的9孔，每孔2mL细胞悬液，置于二氧化碳培养箱37℃、5％CO2常规培养24h。模型组和实验组UVA用2000μW/cm2的强度照射1h，UVB用700μW/cm2的强度照射3min，正常对照组不照射。照射完成后弃去旧培养液，实验组加入样品溶液，模型组和正常对照组加入无血清DMEM培养液，每孔均为2mL，继续培养16h后，弃去全部培养液，用PBS洗两遍。每孔加入1.5mLDCFH-DA溶液，放入37℃细胞培养箱中继续孵育30min，每隔5min混匀一次使探针充分结合。弃去探针，用预热的无血清培养基洗两遍，每孔加入1mL无血清培养基37℃孵育10min。PBS洗一遍后，胰酶消化细胞，PBS洗两遍，300μLPBS重悬，用流式细胞仪双通道检测(上机前细胞100目滤网过滤)，FL1-H通道，每个样品收集10000个细胞。
ROS清除率＝(模型组-实验组)/模型组×100％；
各样品实验结果如表1所示。
表1
从表1测试结果可知，实施例1-3与对比例1-6相比，本发明实施例1-3制得的抗衰组合物对DPPH自由基清除率和ROS清除率显著优于对比例1-6。分析可知，黄精多糖提取物、蓝莓提取物和枸杞提取物混合发酵产物配合虾青素具备相互协同，其强抗氧化性可通过其强大的自由基清除能力经多种机制发挥功效，可以直接或间接影响调控黑色素的合成。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭示如上，然而并非用以限定本发明，任何本领域技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述揭示的技术内容做出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简介修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (7)
1.一种抗衰组合物，其特征在于，所述抗衰组合物包括脂质体和脂质体内的活性组分，所述活性组分含有虾青素和混合发酵物，所述混合发酵物以黄精多糖提取物、蓝莓提取物和枸杞提取物为原料经植物乳杆菌和黑曲霉发酵所得；所述脂质体的制备由大豆卵磷脂和胆固醇溶于无水乙醇并倒入容器中，超声混合后蒸发分散后所得；
其中，所述活性组分的制备方法包括以下步骤：
1）黄精多糖提取物、蓝莓提取物和枸杞提取物紫外线灭菌后，得到底液；按照2％接种量将菌体浓度为107cfu/mL的植物乳杆菌加入至底液中，发酵后，得到发酵A液；所述黄精多糖提取物、蓝莓提取物和枸杞提取物的质量比为2：0.2-0.3：0.3-0.5；所述发酵的条件为在无氧的环境下发酵6-8h；
2）将按照6％接种量将菌体浓度为106cfu/mL的黑曲霉接种加入到发酵A液中，混合均匀后，加热发酵、离心后取上清液，得到发酵B液；所述加热发酵的条件为在30-40℃温度、在转速120-150r/min搅拌下、发酵15-20h；
3）向雨生红球藻加入柠檬酸溶液和发酵B液混合均匀后，降温并进行超声破碎，固液分离取液体后，得到活性组分；所述雨生红球藻、发酵B液和柠檬酸溶液的质量比为1：1.8-2.0：15。
2.根据权利要求1所述的一种抗衰组合物，其特征在于：在步骤2）中，所述离心的条件为在转速4000-4500r/min、离心10-15min。
3.根据权利要求1所述的一种抗衰组合物，其特征在于：在步骤3）中，所述柠檬酸溶液的质量浓度为0.2-0.3%，所述超声破碎的条件为在20-25℃下、边搅拌边超声破碎30min、搅拌转速为30-50r/min、避光浸取24-30h。
4.一种如权利要求1-3任一项所述的抗衰组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
S1、将大豆卵磷脂和胆固醇溶于无水乙醇并倒入容器中，超声混合后蒸发分散，得到脂质体；
S2、将混合发酵物预热后，加入至含脂质体的容器中，加热至脂质体水化后，超声震荡后，过0.45μm的微孔滤膜，通过离心洗涤，冷冻干燥后，得到抗衰组合物。
5.根据权利要求4所述的一种抗衰组合物的制备方法，其特征在于：在步骤S1中，所述大豆卵磷脂和胆固醇的质量比4∶1；所述超声混合的时间为20-30min；所述蒸发分散的条件为在30-35℃下、转速为30-50r/min下蒸发分散。
6.根据权利要求4所述的一种抗衰组合物的制备方法，其特征在于：在步骤S2中，所述预热的温度为50-55℃；所述超声震荡的时间为3-6min。
7.一种如权利要求1-3任一项所述的抗衰组合物的应用，其特征在于：所述抗衰组合物按质量分数3-5%应用于化妆品中。
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