CN117083283A - 用于癌症治疗的联合疗法 - Google Patents

用于癌症治疗的联合疗法 Download PDF

Info

Publication number
CN117083283A
CN117083283A CN202180093091.6A CN202180093091A CN117083283A CN 117083283 A CN117083283 A CN 117083283A CN 202180093091 A CN202180093091 A CN 202180093091A CN 117083283 A CN117083283 A CN 117083283A
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound
formula
cancer
inhibitor
administered
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202180093091.6A
Other languages
English (en)
Inventor
莱努斯·马丁
莱斯利·哈里斯·布雷尔
罗伯特·菲尔德·舒梅克
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yirui Shikang Pharmaceutical Research And Development Co
Original Assignee
Yirui Shikang Pharmaceutical Research And Development Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yirui Shikang Pharmaceutical Research And Development Co filed Critical Yirui Shikang Pharmaceutical Research And Development Co
Priority claimed from PCT/US2021/062921 external-priority patent/WO2022125967A2/en
Publication of CN117083283A publication Critical patent/CN117083283A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Abstract

本公开提供了用SHP2抑制剂诸如式I化合物与FGFR抑制剂、B‑Raf抑制剂、MEK抑制剂或MET抑制剂的联合疗法来治疗癌症的方法。

Description

用于癌症治疗的联合疗法
交叉引用
本申请要求2020年12月11日提交的美国临时专利申请第63/124,663号；2020年12月11日提交的美国临时专利申请第63/124,667号；2020年12月11日提交的美国临时专利申请第63/124,671号；和2020年12月11日提交的美国临时专利申请第63/124,674号的权益；每个专利都通过引用整体并入本文。
背景技术
Src同源-2磷酸酶(SHP2)是一种在各种组织和细胞类型中广泛表达的非受体蛋白磷酸酶(参见综述：Tajan M等人,Eur J Med Genet 2016 58(10):509-25；Grossmann KS等人,Adv Cancer Res 2010 106:53-89)。SHP2由位于其NH2末端的两个Src同源2(N-SH2和C-SH2)结构域、催化性PTP(蛋白酪氨酸磷酸酶)结构域和具有调节特性的C末端尾构成。在基态下，SH2结构域与PTP结构域之间的分子间相互作用阻止底物进入催化口袋，使SHP2保持为封闭的自抑制构象。响应于刺激，带有磷-酪氨酸基序的SHP2激活蛋白结合至SH2结构域，导致活性位点暴露和SHP2的酶促激活。
发明内容
本文公开的实施方案总体上涉及与利用SHP2抑制剂结合FGFR抑制剂、B-Raf抑制剂、MEK抑制剂或MET抑制剂来治疗癌症的联合疗法相关(包括同时提供意想不到的程度的协同作用)的组合物和方法。
SHP2在基本细胞功能方面起重要作用，包括增殖、分化、细胞周期维持和运动。通过对其相关联的信号传导分子进行去磷酸化，SHP2响应于广泛的生长因子、细胞因子和激素而调节多种细胞内信号传导通路。SHP2参与的细胞信号传导过程包括RAS-MAPK(丝裂原激活的蛋白激酶)、PI3K(磷酸肌醇3-激酶)-AKT和JAK-STAT通路。
SHP2在该通路上也发挥信号增强作用，作用于RTK的下游和RAS的上游。一种常见的抗性机制涉及RTK的激活，RTK的激活刺激MAPK信号传导的再激活。RTK激活经由直接结合并通过衔接蛋白募集SHP2。这些相互作用导致SHP2从封闭(无活性)构象转变为开放(活性)构象。SHP2是RAS信号传导再激活的重要促进因素，其在原发性和继发性抗性中绕过药物抑制。SHP2的抑制实现全面削弱上游RTK信号传导的效果，所述信号传导通常驱动致癌信号传导和适应性肿瘤逃逸(参见Prahallad,A.等人Cell Reports 12,1978-1985(2015)；ChenYN,Nature 535,148-152(2016))，这些文献的所有教导(包括但不限于所有方法、化合物、组合物、数据等)通过引用整体并入本文以供与本文的任意实施方案和公开内容中一起使用。
成纤维细胞生长因子受体(FGFR)与成纤维细胞生长因子蛋白质家族的成员结合，还影响RAS上游的RAS-MAPK信号转导通路。从多个角度靶向信号转导通路并经由SHP2潜在地改善Ras上游的反馈环路的机会提供开发采用联合疗法的方法的机会。本公开提供此类方法，同时提供意想不到的程度的协同作用。
RAS-MAPK信号转导通路包括Raf蛋白家族。该家族包括由三种相关激酶(A-、B-和C-Raf)构成，这些激酶充当Ras的下游效应物。B-Raf特别是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，其激活MAP激酶/ERK信号传导通路。众所周知，组成型活性B-Raf突变体通过过度向细胞发送信号使其生长而导致癌症。例如，激活B-Raf V600E激酶突变发生在约7％的人类恶性肿瘤和约50-60％的黑色素瘤中。
RAS-MAPK信号转导通路还包括MEK1和MEK2。MEKl和MEK2是双功能丝氨酸/苏氨酸和酪氨酸蛋白激酶，也称为MAP激酶激酶。MEK在RAS调节的RAF-MEK-ERK信号传导通路(将信号从生长因子受体传递到细胞核的通路)中发挥关键作用，以尤其调节细胞增殖、分化、存活和侵袭。
最后，细胞外MET(或c-MET)作为关键蛋白酪氨酸激酶，在RAS-MAPK信号转导通路的上游发挥作用。从多个角度靶向信号转导通路并经由SHP2潜在地改善Ras上游的反馈环路的机会提供开发采用联合疗法的方法的机会。本文公开的实施方案提供此类方法，同时提供意想不到的程度的协同作用。
在第一方面，本公开提供一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和FGFR抑制剂。在一些实施方案中，对象中的FGFR是组成型活性的。在一些实施方案中，癌症为肺癌。在一些实施方案中，癌症为肝细胞癌。在一些实施方案中，癌症为胆管癌。在一些实施方案中，癌症为胰腺导管腺癌(PDAC)。在一些实施方案中，抑制剂选自厄达替尼(erdafitinib)、AZD4547、Ly2874455、CH5183284、NVP-BGJ398、INCB054828、罗加替尼(rogaratinib)、PRN1371、TAS-120、BLU-554、H3B-6527和FGF401。在一些实施方案中，FGFR抑制剂为厄达替尼。在一些实施方案中，FGFR抑制剂为佩米替尼(pemigatinib)、英菲格拉替尼(infigratinib)、多韦替尼(dovitinib)、帕纳替尼(ponatinib)、尼达尼布(nintedanib)和非索替尼(fisogatinib)。在一些实施方案中，所述方法包括施用第三MAPK通路抑制剂。在一些实施方案中，施用为口服。在一些实施方案中，式I的化合物的给药量在每天20mg至400mg的范围内。在一些实施方案中，FGFR抑制剂的给药量在每天1mg至500mg的范围内。
在第二方面，本公开提供一种治疗对象的肝癌的方法，所述方法包括向所述对象口服联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和厄达替尼。在一些实施方案中，式I的化合物每天施用一次或两次。在一些实施方案中，厄达替尼每天施用一次或两次。在一些实施方案中，对象为人。
在第三方面，本公开提供一种试剂盒，所述试剂盒包含式I的化合物或其药学上可接受的盐和FGFR抑制剂。在一些实施方案中，式I的化合物和FGFR抑制剂在单独的包装中。在一些实施方案中，所述试剂盒进一步包含将试剂盒的内容物施用于对象以用于癌症治疗的说明书。在一些实施方案中，FGFR抑制剂为厄达替尼、AZD4547、Ly2874455、CH5183284、NVP-BGJ398、INCB054828、罗加替尼、PRN1371、TAS-120、BLU-554、H3B-6527、FGF401、佩米替尼、英菲格拉替尼、多韦替尼、帕纳替尼、尼达尼布和非索替尼中的一种或多种。
在第四方面，本公开提供一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和具有1类突变的B-Raf蛋白的抑制剂。在一些实施方案中，1类突变为V600E。在一些实施方案中，癌症为结直肠癌。在一些实施方案中，癌症为黑色素瘤。在一些实施方案中，癌症为甲状腺癌。在一些实施方案中，癌症为胰腺导管腺癌(PDAC)。在一些实施方案中，抑制剂选自康奈非尼(encorafenib)、维莫非尼(vemurafenib)、达拉菲尼(dabrafenib)、索拉非尼(sorafenib)和瑞格拉非尼(regorafenib)。在一些实施方案中，抑制剂为康奈非尼。在一些实施方案中，抑制剂为维莫非尼。在一些实施方案中，抑制剂为达拉菲尼。在一些实施方案中，抑制剂为索拉非尼。在一些实施方案中，抑制剂为瑞格拉非尼。在一些实施方案中，所述方法包括施用第三MAPK通路抑制剂。在一些实施方案中，施用为口服。在一些实施方案中，式I的化合物的给药量在每天20mg至400mg的范围内。在一些实施方案中，B-Raf抑制剂的给药量在1mg至500mg的范围内。
在另一方面，本公开提供一种治疗对象的结直肠癌的方法，所述方法包括向所述对象口服联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和B-Raf抑制剂康奈非尼。在一些实施方案中，式I的化合物每天施用一次或两次。在一些实施方案中，康奈非尼每天施用一次或两次。在一些实施方案中，对象为人。
在另一方面，本公开提供一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和康奈非尼。
在另一方面，本公开提供一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和维莫非尼。
在另一方面，本公开提供一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和达拉菲尼。
在另一方面，本公开提供一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和索拉非尼。
在另一方面，本公开提供一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和瑞格拉非尼。
在本文所述方法的各种实施方案中，癌症为结直肠癌。在一些实施方案中，癌症为甲状腺癌。在一些实施方案中，癌症为黑色素瘤。在一些实施方案中，癌症为胰腺导管腺癌(PDAC)。在一些实施方案中，B-Raf抑制剂的给药量小于用B-Raf抑制剂进行单一疗法所需的给药量。在一些实施方案中，式I的化合物的给药量小于用式I的化合物进行单一疗法所需的给药量。
在另一方面，本公开提供一种抑制细胞群体中的ERK1/2磷酸化的方法，所述方法包括使细胞群体与式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和瑞格拉非尼组合接触。在一些实施方案中，式I的化合物的浓度在1nM至500nM的范围内。在一些实施方案中，康奈非尼的浓度在10nM至20nM的范围内。
在另一方面，本公开提供一种试剂盒，所述试剂盒包含式I的化合物或其药学上可接受的盐和B-Raf抑制剂。在一些实施方案中，式I的化合物和B-Raf抑制剂在单独的包装中。在一些实施方案中，所述试剂盒进一步包含将试剂盒的内容物施用于对象以用于癌症治疗的说明书。在一些实施方案中，B-Raf抑制剂为康奈非尼、维莫非尼、达拉菲尼、索拉非尼和瑞格拉非尼中的一种或多种。
在另一方面，本公开提供一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和MEK抑制剂。在一些实施方案中，MEK抑制剂选择性地抑制MEK1或选择性地抑制MEK2或选择性地抑制MEK1和MEK2二者。在一些实施方案中，癌症为转移性的。在一些实施方案中，癌症为结直肠癌。在一些实施方案中，癌症为黑色素瘤。在一些实施方案中，癌症为肺癌。在一些实施方案中，癌症为胰腺癌。在一些实施方案中，癌症为乳腺癌。在一些实施方案中，癌症为胰腺导管腺癌(PDAC)。在一些实施方案中，MEK抑制剂选自曲美替尼(trametinib)、考比替尼(cobimetinib)、贝美替尼(binimetinib)、PD-0325901、司美替尼(selumetinib)和CI-1040。在一些实施方案中，MEK抑制剂为曲美替尼。在一些实施方案中，MEK抑制剂为考比替尼。在一些实施方案中，MEK抑制剂为贝美替尼。在一些实施方案中，MEK抑制剂为PD-325901。在一些实施方案中，MEK抑制剂为CI-1040。在一些实施方案中，所述方法包括施用另一种MAPK通路抑制剂。在一些实施方案中，施用为口服。在一些实施方案中，式I的化合物的给药量在每天20mg至400mg的范围内。在一些实施方案中，MEK抑制剂的给药量在每天1mg至500mg的范围内。
在另一方面，本公开提供一种治疗对象的癌症的方法，所述方法包括向所述对象口服联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和MEK抑制剂贝美替尼或曲美替尼。在一些实施方案中，式I的化合物每天施用一次或两次。在一些实施方案中，贝美替尼或曲美替尼每天施用一次或两次。在一些实施方案中，对象为人。
在另一方面，本公开提供一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和贝美替尼。
在另一方面，本公开提供一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和曲美替尼。
在本文所述方法的各种实施方案中，癌症为结直肠癌。在一些实施方案中，癌症为肺癌。在一些实施方案中，癌症为黑色素瘤。在一些实施方案中，MEK抑制剂的给药量小于用MEK抑制剂进行单一疗法所需的给药量。在一些实施方案中，式I的化合物的给药量小于用式I的化合物进行单一疗法所需的给药量。
在另一方面，本公开提供一种抑制ERK1/2磷酸化的方法，所述方法包括使细胞群体与式I或其药学上可接受的盐：
和贝美替尼或曲美替尼组合接触。在一些实施方案中，式I的化合物的浓度在1nM至1,000nM的范围内。在一些实施方案中，MEK抑制剂的浓度在10nM至500nM的范围内。
在另一方面，本公开提供一种试剂盒，所述试剂盒包含式I的化合物或其药学上可接受的盐和MEK抑制剂。在一些实施方案中，式I的化合物和MEK抑制剂在单独的包装中。在一些实施方案中，所述试剂盒进一步包含将试剂盒的内容物施用于对象以用于癌症治疗的说明书。在一些实施方案中，MEK抑制剂为曲美替尼或贝美替尼中的一种或多种。
在另一方面，本公开提供一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和MET抑制剂。在一些实施方案中，MET抑制剂也是ALK抑制剂、ROS1抑制剂或二者。在一些实施方案中，癌症为非小细胞肺癌。在一些实施方案中，癌症为胃癌。在一些实施方案中，癌症为胃腺癌。在一些实施方案中，癌症为胰腺导管腺癌(PDAC)。在一些实施方案中，MET抑制剂选自克唑替尼(crizotinib)、特泊替尼(tepotinib)、赛沃替尼(savolitinib)、卡博替尼(cabozantinib)和替万替尼(tivantinib)。在一些实施方案中，MET抑制剂为克唑替尼。在一些实施方案中，MET抑制剂为特泊替尼。在一些实施方案中，抑制剂为赛沃替尼。在一些实施方案中，抑制剂为卡博替尼。在一些实施方案中，抑制剂为替万替尼。在一些实施方案中，所述方法包括施用第三MAPK通路抑制剂。在一些实施方案中，施用为口服。在一些实施方案中，式I的化合物的给药量在每天10mg至500mg的范围内。在一些实施方案中，抑制剂的给药量在每天20mg至400mg的范围内。
在另一方面，本公开提供一种治疗对象的胃癌的方法，所述方法包括向所述对象口服联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和克唑替尼。在一些实施方案中，式I的化合物每天施用一次或两次。在一些实施方案中，克唑替尼每天施用一次或两次。在一些实施方案中，对象为人。
在最终方面，本公开提供一种试剂盒，所述试剂盒包含式I的化合物或其药学上可接受的盐和MET抑制剂。在一些实施方案中，式I的化合物和MET抑制剂在单独的包装中。在一些实施方案中，所述试剂盒进一步包含将试剂盒的内容物施用于对象以用于癌症治疗的说明书。在一些实施方案中，MET抑制剂为克唑替尼、特泊替尼、赛沃替尼、卡博替尼和替万替尼中的一种或多种。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐被配制成药物组合物。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐被配制成口服组合物。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用一次或两次。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐历经连续28天的周期施用。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐以约10mg至约140mg的量一天施用一次。
在一些实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐一天施用一次持续3周的周期，包括施用所述化合物2周，接着不施用所述化合物1周。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用一次持续4周的周期，包括施用所述化合物3周，接着不施用所述化合物1周。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐历经6周的时间段施用。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐历经8周的时间段施用。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一周施用3次。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐在一周的第1天、第3天和第5天施用。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一周施用4次。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐施用3周的周期，包括施用所述化合物2周，接着不施用所述化合物1周。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐施用4周的周期，包括施用所述化合物3周，接着不施用所述化合物1周。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用两次，每周两天。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐历经8周的时间段施用。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐在每周的第1天和第2天施用。
在一些实施方案中，癌症选自肺癌、胃癌、肝癌、结肠癌、肾癌、乳腺癌、胰腺癌、胰腺导管腺癌(PDAC)、幼年型粒单核细胞白血病、神经母细胞瘤(neurolastoma)、黑色素瘤和急性髓性白血病。
附图说明
本发明的新颖特征在所附权利要求中详细地阐述。通过参考以下阐述其中利用了本发明的原理的说明性实施方案的详细描述以及附图，将获得对本发明的特征和优点的更好理解，在附图中：
图1A示出表明式I的化合物和FGFR抑制剂厄达替尼的组合表现出体外协同作用的数据。该数据表明在式I的化合物和厄达替尼的组合中存在显著程度的协同作用。
图1B示出使用式I的化合物和厄达替尼的组合在Hep3B癌细胞系中的协同作用数据。该数据表明在式I的化合物和厄达替尼的组合中存在显著程度的协同作用。
图2示出在肝癌CDX模型KATO III中，用单独的式I的化合物、单独的厄达替尼以及式I的化合物和厄达替尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。
图3示出在FGFR2扩增的胃癌CDX SNU-16中，用单独的式I的化合物、单独的厄达替尼以及式I的化合物和厄达替尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。
图4示出在FGF19-FGFR4依赖性肝癌CDX模型Huh-7中，用单独的式I的化合物、单独的厄达替尼以及式I的化合物和厄达替尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。
图5示出表明式I的化合物和康奈非尼的组合表现出跨多个BRAF V600E突变细胞的协同作用的数据。
图6示出使用式I的化合物和BRAF抑制剂康奈非尼的组合在RKO BRAFV600E CRC细胞系中的协同作用数据。该数据表明在式I的化合物和康奈非尼的组合中存在显著程度的协同作用。
图7示出使用式I的化合物和BRAF抑制剂康奈非尼的组合在WiDr BRAFV600E CRC细胞系中的协同作用数据。该数据表明在式I的化合物和康奈非尼的组合中存在显著程度的协同作用。
图8示出使用式I的化合物和BRAF抑制剂康奈非尼的组合在HT29 BRAFV600E CRC细胞系中的协同作用数据。该数据表明在式I的化合物和康奈非尼的组合中存在显著程度的协同作用。
图9A示出表明对RKO结直肠癌细胞系中ERK1/2磷酸化的协同抑制的凝胶。图9A表明使用式I的化合物和康奈非尼的组合对pERK1/2的稳健降低。
图9B示出表明对WiDr结直肠癌细胞系中ERK1/2磷酸化的稳健抑制的凝胶。图9B表明使用式I的化合物和康奈非尼的组合对pERK1/2的稳健降低。
图9C示出单独的式I的化合物或式I的化合物与康奈非尼组合在RKO结直肠癌细胞系中的抗增殖效果图。图9C表明式I的化合物和康奈非尼的组合增加了式I的化合物的抑制活性。
图9D示出式I的化合物或式I的化合物与康奈非尼组合在WiDr结直肠癌细胞系中的抗增殖效果图。图9D表明式I的化合物和康奈非尼的组合增加了式I的化合物的抑制活性。
图10A示出比较利用下列组合在RKO结直肠癌细胞系中对ERK1/2磷酸化的协同抑制的凝胶：式I的化合物+康奈非尼；TNO155+康奈非尼；和RMC-4550+康奈非尼，表明SHP2抑制剂式I的化合物和康奈非尼的组合对ERK1/2磷酸化的抑制是最有效的。
图10B示出在1.对照；2.(式I的化合物)；3.康奈非尼；和4.(式I的化合物)+康奈非尼情况下，作为对照的百分比的pERK的条形图，表明SHP2抑制剂式I的化合物和康奈非尼的组合对ERK1/2磷酸化的抑制是最有效的。
图10C示出在1.对照；2.TNO155；3.康奈非尼；和4.TNO155+康奈非尼情况下，作为对照的百分比的pERK的条形图，表明SHP2抑制剂式I的化合物和康奈非尼的组合对ERK1/2磷酸化的抑制是最有效的。
图10D示出在1.对照；2.RMC-4550；3.康奈非尼；和4.RMC-4550+康奈非尼情况下，作为对照的百分比的pERK的条形图，表明SHP2抑制剂式I的化合物和康奈非尼的组合对ERK1/2磷酸化的抑制是最有效的。
图11示出在BRAFV600E突变CRC PDX模型CR0029中，用单独的式I的化合物、单独的康奈非尼以及式I的化合物和康奈非尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。
图12示出在BRAFV600E突变CRC PDX模型CR004中，用单独的式I的化合物、单独的康奈非尼以及式I的化合物和康奈非尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。
图13示出在BRAFV600E突变CRC CDX模型WiDr中，用单独的式I的化合物、单独的康奈非尼以及式I的化合物和康奈非尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。
图14示出在BRAFV600E突变CRC CDX模型HT-29中，用单独的式I的化合物、单独的康奈非尼以及式I的化合物和康奈非尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。
图15示出在BRAFV600E突变甲状腺癌CDX模型BHT-101中，用单独的式I的化合物、单独的康奈非尼以及式I的化合物和康奈非尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。
图16示出在BRAFV600E突变CRC CDX模型RKO中，用单独的式I的化合物、单独的康奈非尼以及式I的化合物和康奈非尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。
图17A示出使用式I的化合物和曲美替尼的组合在NCI-H508癌细胞系中的协同作用数据。
图17B示出使用式I的化合物和贝美替尼的组合在NCI-H508癌细胞系中的协同作用数据。
图17C为使用式I的化合物和曲美替尼的组合在NCI-H1666癌细胞系中的图示协同作用数据。
图17D示出使用式I的化合物和贝美替尼的组合在NCI-H1666癌细胞系中的协同作用数据。
图18A示出使用式I的化合物和曲美替尼的组合在MeWo癌细胞系中的协同作用数据。
图18B示出使用式I的化合物和贝美替尼的组合在MeWo癌细胞系中的协同作用数据。
图18C示出使用式I的化合物和曲美替尼的组合在NCI-H1838癌细胞系中的协同作用数据。
图18D示出使用式I的化合物和贝美替尼的组合在NCI-H1838癌细胞系中的协同作用数据。
图19A示出用单独的和与贝美替尼组合的式I化合物处理的NCI-H508细胞中活性百分比相对于抑制剂浓度(log M)的图。用单独的和与贝美替尼组合的式I化合物处理的NCI-H508细胞的表列IC50数据。
图19B示出用单独的和与贝美替尼组合的式I化合物处理的MeWo细胞中活性百分比相对于抑制剂浓度(log M)的图。用单独的和与贝美替尼组合的式I化合物处理的MeWo细胞的表列IC50数据。
图20A示出表明对NCI-H508癌细胞系中ERK1/2磷酸化的协同抑制的蛋白质印迹凝胶。
图20B示出图20A的蛋白质印迹的条形图量化。
图20C示出表明对MeWo(NF1 LoF)癌细胞系中ERK1/2磷酸化的协同抑制的蛋白质印迹凝胶。
图20D示出图20C的蛋白质印迹的条形图量化。
图21A示出使用式I的化合物和曲美替尼的组合在NCI-H2009(KRAS G12A)癌细胞系中的协同作用数据。
图21B示出使用式I的化合物和曲美替尼的组合在LS513(KRAS G12D)癌细胞系中的协同作用数据。
图21C示出使用式I的化合物和曲美替尼的组合在A549(KRAS G12S)癌细胞系中的协同作用数据。
图21D示出使用式I的化合物和曲美替尼的组合在NCI-H727(KRAS G12V)癌细胞系中的协同作用数据。
图22A示出使用式I的化合物和贝美替尼的组合在NCI-H2009(KRAS G12A)癌细胞系中的协同作用数据。
图22B示出使用式I的化合物和贝美替尼的组合在LS513(KRAS G12D)癌细胞系中的协同作用数据。
图22C示出使用式I的化合物和贝美替尼的组合在A549(KRAS G12S)癌细胞系中的协同作用数据。
图22D示出使用式I的化合物和贝美替尼的组合在NCI-H727(KRAS G12V)癌细胞系中的协同作用数据。
图23A示出用单独的和与曲美替尼的组合的式I化合物处理的LS513(KRAS G12D)细胞中活性百分比相对于抑制剂浓度(log M)的图。
图23B示出用单独的和与曲美替尼的组合的式I化合物处理的NCI-H2009(KRASG12D)细胞中活性百分比相对于抑制剂浓度(log M)的图。用单独的和与曲美替尼的组合的式I化合物处理的NCI-H508细胞的表列数据。
图23C示出CTG活性百分比的条形图，其表明单独的式I或曲美替尼对细胞生存力的影响最小。总之，该数据表明，式I的化合物和MEK抑制剂的组合对BRAF III类、NF1 LoF和KRAS G12X突变癌症中的癌细胞生存力提供协同抑制。
图24示出在NF1 LoF突变黑色素瘤CDX模型MeWo中，用单独的式I的化合物、单独的曲美替尼以及式I的化合物和曲美替尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。
图25示出在NF1 LoF突变黑色素瘤CDX模型MeWo中，用单独的式I的化合物、单独的贝美替尼以及式I的化合物和贝美替尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。
图26示出在BRAF III类突变CRC CDX模型NCI-H508中，用单独的式I的化合物、单独的曲美替尼以及式I的化合物和曲美替尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。
图27示出在NF1 LoF突变NSCLC CDX模型NCI-H1838中，用单独的式I的化合物、单独的曲美替尼以及式I的化合物和曲美替尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。
图28A示出使用式I的化合物和克唑替尼的组合在Hs746T癌细胞系中的协同作用数据。
图28B示出使用式I的化合物和克唑替尼的组合在MKN-45癌细胞系中的协同作用数据。
图28C示出使用式I的化合物和克唑替尼的组合在EBC-1癌细胞系中的协同作用数据。
图29示出在c-MET扩增的胃癌CDX模型SNU-5中，用单独的式I的化合物、单独的克唑替尼以及式I的化合物和克唑替尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。
图30示出在c-MET扩增的NSCLC CDX模型NCI-H1993中，用单独的式I的化合物、单独的克唑替尼以及式I的化合物和克唑替尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。
具体实施方式
I.综述
本公开提供治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和FGFR抑制剂。下面的实例表明此种组合的意想不到的协同作用。本文公开的采用式I的化合物或其药学上可接受的盐的联合疗法，与和FGFR抑制剂组合使用的替代性SHP2抑制剂的组合相比，可表现出更好的结果。此外，式I的SHP2抑制剂和FGFR抑制剂的组合提供允许使用在单一疗法中单独使用的任一药剂的较低剂量的方法，这可帮助减少潜在的副作用。特别地，联合疗法可在表达突变的癌细胞中为有效的，所述突变包括但不限于FGFR4突变以及FGFR的扩增表达。
在第一方面，本公开提供一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和FGFR抑制剂。在一些实施方案中，对象中的FGFR是组成型活性的。在一些实施方案中，癌症为肺癌。在一些实施方案中，癌症为肝细胞癌。在一些实施方案中，癌症为胆管癌。在一些实施方案中，癌症为胰腺导管腺癌(PDAC)。在一些实施方案中，抑制剂选自厄达替尼、AZD4547、Ly2874455、CH5183284、NVP-BGJ398、INCB054828、罗加替尼、PRN1371、TAS-120、BLU-554、H3B-6527和FGF401。在一些实施方案中，FGFR抑制剂为厄达替尼。在一些实施方案中，FGFR抑制剂为佩米替尼、英菲格拉替尼、多韦替尼、帕纳替尼、尼达尼布和非索替尼。在一些实施方案中，所述方法包括施用第三MAPK通路抑制剂。在一些实施方案中，施用为口服。在一些实施方案中，式I的化合物的给药量在每天20mg至400mg的范围内。在一些实施方案中，FGFR抑制剂的给药量在每天1mg至500mg的范围内。
在第二方面，本公开提供一种治疗对象的肝癌的方法，所述方法包括向所述对象口服联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和厄达替尼。在一些实施方案中，式I的化合物每天施用一次或两次。在一些实施方案中，厄达替尼每天施用一次或两次。在一些实施方案中，对象为人。
在第三方面，本公开提供一种试剂盒，所述试剂盒包含式I的化合物或其药学上可接受的盐和FGFR抑制剂。在一些实施方案中，式I的化合物和FGFR抑制剂在单独的包装中。在一些实施方案中，试剂盒进一步包含将试剂盒的内容物施用于对象以用于癌症治疗的说明书。在一些实施方案中，FGFR抑制剂为厄达替尼、AZD4547、Ly2874455、CH5183284、NVP-BGJ398、INCB054828、罗加替尼、PRN1371、TAS-120、BLU-554、H3B-6527、FGF401、佩米替尼、英菲格拉替尼、多韦替尼、帕纳替尼、尼达尼布和非索替尼中的一种或多种。
在第四方面，本公开提供一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和具有1类突变的B-Raf蛋白的抑制剂。在一些实施方案中，1类突变为V600E。在一些实施方案中，癌症为结直肠癌。在一些实施方案中，癌症为黑色素瘤。在一些实施方案中，癌症为甲状腺癌。在一些实施方案中，癌症为胰腺导管腺癌(PDAC)。在一些实施方案中，抑制剂选自康奈非尼、维莫非尼、达拉菲尼、索拉非尼和瑞格拉非尼。在一些实施方案中，抑制剂为康奈非尼。在一些实施方案中，抑制剂为维莫非尼。在一些实施方案中，抑制剂为达拉菲尼。在一些实施方案中，抑制剂为索拉非尼。在一些实施方案中，抑制剂为瑞格拉非尼。在一些实施方案中，所述方法包括施用第三MAPK通路抑制剂。在一些实施方案中，施用为口服。在一些实施方案中，式I的化合物的给药量在每天20mg至400mg的范围内。在一些实施方案中，B-Raf抑制剂的给药量在1mg至500mg的范围内。
本公开提供治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和1类突变B-Raf的抑制剂。下面的实例表明此种组合的意想不到的显著协同作用。本文公开的采用式I的化合物或其药学上可接受的盐的联合疗法，与和1类突变B-Raf的抑制剂组合使用的替代性SHP2抑制剂的组合相比，可表现出更好的结果。此外，式I的SHP2抑制剂和1类突变的B-Raf抑制剂的组合提供允许使用在单一疗法中单独使用的任一药剂的较低剂量的方法，这可帮助减少潜在的副作用。特别地，联合疗法可在表达BRAF V600E突变的癌细胞中为有效的。
在第四方面，本公开提供一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和具有1类突变的B-Raf蛋白的抑制剂。在一些实施方案中，1类突变为V600E。在一些实施方案中，癌症为结直肠癌。在一些实施方案中，癌症为黑色素瘤。在一些实施方案中，癌症为甲状腺癌。在一些实施方案中，癌症为胰腺导管腺癌(PDAC)。在一些实施方案中，抑制剂选自康奈非尼、维莫非尼、达拉菲尼、索拉非尼和瑞格拉非尼。在一些实施方案中，抑制剂为康奈非尼。在一些实施方案中，抑制剂为维莫非尼。在一些实施方案中，抑制剂为达拉菲尼。在一些实施方案中，抑制剂为索拉非尼。在一些实施方案中，抑制剂为瑞格拉非尼。在一些实施方案中，所述方法包括施用第三MAPK通路抑制剂。在一些实施方案中，施用为口服。在一些实施方案中，式I的化合物的给药量在每天20mg至400mg的范围内。在一些实施方案中，B-Raf抑制剂的给药量在1mg至500mg的范围内。
在另一方面，本公开提供一种治疗对象的结直肠癌的方法，所述方法包括向所述对象口服联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和B-Raf抑制剂康奈非尼。在一些实施方案中，式I的化合物每天施用一次或两次。在一些实施方案中，康奈非尼每天施用一次或两次。在一些实施方案中，对象为人。
在另一方面，本公开提供一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和康奈非尼。
在另一方面，本公开提供一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和维莫非尼。
在另一方面，本公开提供一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和达拉菲尼。
在另一方面，本公开提供一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和索拉非尼。
在另一方面，本公开提供一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和瑞格拉非尼。
在本文所述方法的各种实施方案中，癌症为结直肠癌。在一些实施方案中，癌症为甲状腺癌。在一些实施方案中，癌症为黑色素瘤。在一些实施方案中，癌症为胰腺导管腺癌(PDAC)。在一些实施方案中，B-Raf抑制剂的给药量小于用B-Raf抑制剂进行单一疗法所需的给药量。在一些实施方案中，式I的化合物的给药量小于用式I的化合物进行单一疗法所需的给药量。
在另一方面，本公开提供一种抑制细胞群体中的ERK1/2磷酸化的方法，所述方法包括使细胞群体与式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和瑞格拉非尼组合接触。在一些实施方案中，式I的化合物的浓度在1nM至500nM的范围内。在一些实施方案中，康奈非尼的浓度在10nM至20nM的范围内。
在另一方面，本公开提供一种试剂盒，所述试剂盒包含式I的化合物或其药学上可接受的盐和B-Raf抑制剂。在一些实施方案中，式I的化合物和B-Raf抑制剂在单独的包装中。在一些实施方案中，所述试剂盒进一步包含将试剂盒的内容物施用于对象以用于癌症治疗的说明书。在一些实施方案中，B-Raf抑制剂为康奈非尼、维莫非尼、达拉菲尼、索拉非尼和瑞格拉非尼中的一种或多种。
本发明实施方案提供治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
/>
和MEK抑制剂。下面的实例表明此种组合的意想不到的协同作用。本文公开的采用式I的化合物或其药学上可接受的盐的联合疗法，与和MEK抑制剂组合使用的替代性SHP2抑制剂的组合相比，可表现出更好的结果。此外，式I的SHP2抑制剂和MEK抑制剂的组合提供允许使用在单一疗法中单独使用的任一药剂的较低剂量的方法，这可帮助减少潜在的副作用。特别地，联合疗法可在表达突变的癌细胞中为有效的，所述突变包括但不限于III类B-raf突变和KRAS G12X突变。
在另一方面，本公开提供一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和MEK抑制剂。在一些实施方案中，MEK抑制剂选择性地抑制MEK1或选择性地抑制MEK2或选择性地抑制MEK1和MEK2二者。在一些实施方案中，癌症为转移性的。在一些实施方案中，癌症为结直肠癌。在一些实施方案中，癌症为黑色素瘤。在一些实施方案中，癌症为肺癌。在一些实施方案中，癌症为胰腺癌。在一些实施方案中，癌症为乳腺癌。在一些实施方案中，癌症为胰腺导管腺癌(PDAC)。在一些实施方案中，MEK抑制剂选自曲美替尼、考比替尼、贝美替尼、PD-0325901、司美替尼和CI-1040。在一些实施方案中，MEK抑制剂为曲美替尼。在一些实施方案中，MEK抑制剂为考比替尼。在一些实施方案中，MEK抑制剂为贝美替尼。在一些实施方案中，MEK抑制剂为PD-325901。在一些实施方案中，MEK抑制剂为CI-1040。在一些实施方案中，所述方法包括施用另一种MAPK通路抑制剂。在一些实施方案中，施用为口服。在一些实施方案中，式I的化合物的给药量在每天20mg至400mg的范围内。在一些实施方案中，MEK抑制剂的给药量在每天1mg至500mg的范围内。
在另一方面，本公开提供一种治疗对象的癌症的方法，所述方法包括向所述对象口服联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和MEK抑制剂贝美替尼或曲美替尼。在一些实施方案中，式I的化合物每天施用一次或两次。在一些实施方案中，贝美替尼或曲美替尼每天施用一次或两次。在一些实施方案中，对象为人。
在另一方面，本公开提供一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和贝美替尼。
在另一方面，本公开提供一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和曲美替尼。
在本文所述方法的各种实施方案中，癌症为结直肠癌。在一些实施方案中，癌症为肺癌。在一些实施方案中，癌症为黑色素瘤。在一些实施方案中，癌症为胰腺导管腺癌(PDAC)。在一些实施方案中，MEK抑制剂的给药量小于用MEK抑制剂进行单一疗法所需的给药量。在一些实施方案中，式I的化合物的给药量小于用式I的化合物进行单一疗法所需的给药量。
在另一方面，本公开提供一种抑制ERK1/2磷酸化的方法，所述方法包括使细胞群体与式I或其药学上可接受的盐：
和贝美替尼或曲美替尼组合接触。在一些实施方案中，式I的化合物的浓度在1nM至1,000nM的范围内。在一些实施方案中，MEK抑制剂的浓度在10nM至500nM的范围内。
在另一方面，本公开提供一种试剂盒，所述试剂盒包含式I的化合物或其药学上可接受的盐和MEK抑制剂。在一些实施方案中，式I的化合物和MEK抑制剂在单独的包装中。在一些实施方案中，所述试剂盒进一步包含将试剂盒的内容物施用于对象以用于癌症治疗的说明书。在一些实施方案中，MEK抑制剂为曲美替尼或贝美替尼中的一种或多种。
本公开提供治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和MET抑制剂。下面的实例表明此种组合的意想不到的协同作用。本文公开的采用式I的化合物或其药学上可接受的盐的联合疗法，与和MET抑制剂组合使用的替代性SHP2抑制剂的组合相比，可表现出更好的结果。此外，式I的SHP2抑制剂和MET抑制剂的组合提供允许使用在单一疗法中单独使用的任一药剂的较低剂量的方法，这可帮助减少潜在的副作用。特别地，联合疗法可在表达MET异常突变的癌细胞中为有效的。
在另一方面，本公开提供一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和MET抑制剂。在一些实施方案中，MET抑制剂也是ALK抑制剂、ROS1抑制剂或二者。在一些实施方案中，癌症为非小细胞肺癌。在一些实施方案中，癌症为胃癌。在一些实施方案中，癌症为胃腺癌。在一些实施方案中，癌症为胰腺导管腺癌(PDAC)。在一些实施方案中，MET抑制剂选自克唑替尼、特泊替尼、赛沃替尼、卡博替尼和替万替尼。在一些实施方案中，MET抑制剂为克唑替尼。在一些实施方案中，MET抑制剂为特泊替尼。在一些实施方案中，抑制剂为赛沃替尼。在一些实施方案中，抑制剂为卡博替尼。在一些实施方案中，抑制剂为替万替尼。在一些实施方案中，所述方法包括施用第三MAPK通路抑制剂。在一些实施方案中，施用为口服。在一些实施方案中，式I的化合物的给药量在每天10mg至500mg的范围内。在一些实施方案中，抑制剂的给药量在每天20mg至400mg的范围内。
在另一方面，本公开提供一种治疗对象的胃癌的方法，所述方法包括向所述对象口服联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和克唑替尼。在一些实施方案中，式I的化合物每天施用一次或两次。在一些实施方案中，克唑替尼每天施用一次或两次。在一些实施方案中，对象为人。
在最终方面，本公开提供一种试剂盒，所述试剂盒包含式I的化合物或其药学上可接受的盐和MET抑制剂。在一些实施方案中，式I的化合物和MET抑制剂在单独的包装中。在一些实施方案中，所述试剂盒进一步包含将试剂盒的内容物施用于对象以用于癌症治疗的说明书。在一些实施方案中，MET抑制剂为克唑替尼、特泊替尼、赛沃替尼、卡博替尼和替万替尼中的一种或多种。
因此，此类治疗适合使用伴随式诊断来帮助进行恰当的患者群体选择。本领域技术人员将认识到这些和其他优点。
II.定义
除非另外特别指出，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与这些实施方案所针对领域的普通技术人员通常理解的相同含义。此外，与本文描述的方法或材料类似或等同的任何方法或材料可用于实践本文的实施方案。出于本文公开的实施方案的目的，对以下术语进行定义。
如本文所用，“一个”、“一种”或“该”不仅包括具有一个成员的方面，而且还包括具有多于一个成员的方面。例如，除非上下文另外明确指出，否则单数形式一个”、“一种”或“该”包括复数指示物。因此，例如，提及“一个细胞”包括多个此类细胞，且提及“所述药剂”包括提及本领域技术人员已知的一种或多种药剂等等。
“药学上可接受的赋形剂”是指帮助向对象施用活性剂和由对象吸收的物质。可用于本发明实施方案的药物赋形剂包括但不限于结合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、表面活性剂、包衣、甜味剂、调味剂和着色剂。本领域技术人员将认识到，其他药物赋形剂在本发明实施方案中也是有用的。
“治疗”是指成功治疗或改善损伤、病理或病况的任何迹象，包括任何客观或主观参数，诸如减轻；缓解；症状的减轻或使损伤、病理或病况对患者来说更易耐受；退化或衰退的速率减慢；使退化的终点衰弱更少；改善患者的身体或精神健康。症状的治疗或改善可基于客观或主观参数；包括身体检查、神经精神检查和/或精神评估的结果。
“施用”指口服施用、作为栓剂施用、局部接触、肠胃外施用、静脉内施用、腹膜内施用、肌内施用、病变内施用、鼻内施用或皮下施用、鞘内施用或向对象植入缓释装置，例如微量渗透泵。在本文公开的联合疗法的上下文中，施用可在不同时间或同时或基本上同时进行。
“治疗有效量”是指其施用后产生治疗效果的剂量。确切的剂量将取决于治疗的目的，并且将由本领域技术人员使用已知技术确定(参见例如，Lieberman,PharmaceuticalDosage Forms(1-3卷,1992)；Lloyd,The Art,Science and Technology ofPharmaceutical Compounding(1999)；Pickar,Dosage Calculations(1999)；和Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第20版,2003,Gennaro编辑,Lippincott,Williams&Wilkins)。在致敏细胞中，治疗有效剂量通常可低于非致敏细胞的常规治疗有效剂量。
“抑制”和“抑制剂”是指部分或完全阻断或禁止特定行为或功能的化合物或部分或完全阻断或禁止特定行为或功能的方法。
“癌症”指在哺乳动物(例如，人类)中发现的所有类型的癌症、赘生物或恶性肿瘤，包括但不限于白血病、淋巴瘤、癌和肉瘤。可用本文提供的化合物或方法治疗的示例性癌症包括脑癌、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、***癌、结直肠癌、胰腺癌、髓母细胞瘤、黑色素瘤、***、胃癌、卵巢癌、肺癌、头癌、霍奇金病和非霍奇金淋巴瘤。可用本文提供的化合物或方法治疗的示例性癌症包括甲状腺癌、内分泌***癌、脑癌、乳腺癌、***、结肠癌、头颈癌、肝癌、肾癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、直肠癌、胃癌和子宫癌。另外的实例包括甲状腺癌、胆管癌、胰腺腺癌、皮肤黑色素瘤、结肠腺癌、直肠腺癌、胃腺癌、食道癌、头颈部鳞状细胞癌、乳腺浸润性癌、肺腺癌、肺鳞状细胞癌、非小细胞肺癌、间皮瘤、多发性骨髓瘤、神经母细胞瘤、神经胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、卵巢癌、横纹肌肉瘤、原发性血小板增多症、原发性巨球蛋白血症、原发性脑肿瘤、恶性胰腺胰岛素瘤、恶性类癌、膀胱癌、癌前皮肤病变、睾丸癌、甲状腺癌、神经母细胞瘤、食道癌、泌尿生殖道癌、恶性高钙血症、子宫内膜癌、肾上腺皮质癌、内分泌或外分泌胰腺肿瘤、甲状腺髓样癌、甲状腺髓样癌、黑色素瘤、结直肠癌、***状甲状腺癌、肝细胞癌、胰腺导管腺癌(PDAC)或***癌。
“FGFR抑制剂”是指任何野生型FGFR或FGFR突变体的抑制剂。FGFR突变包括但不限于单核苷酸多态性、外显子***和缺失、多体性等。突变和抑制剂的具体实例包括但不限于，FGFR1基因拷贝增益、FGFR1基因扩增、FGFR2基因拷贝增益、FGFR2基因扩增、FGFR3基因拷贝增益、FGFR3基因扩增、FGFR4基因拷贝增益、FGFR4基因扩增、FGFR1 T141R、FGFR1R445W、FGFR1 N546K、FGFR1K656E、FGFR1 G818R、FGFR2 S252W、FGFR2 P253R、FGFR2 A315T、FGFR2 D336N、FGFR2 Y375C、FGFR2 C382R、FGFR2 V395D、FGFR2D471N、FGFR2 I547V、FGFR2N549K、FGFR2 N549Y、FGFR2 K659E、FGFR3 S131L、FGFR3 R248C、FGFR3 S249C、FGFR3G370C、FGFR3S371C、FGFR3 Y373C、FGFR3 G380R、FGFR3 R399C、FGFR3 E627K、FGFR3 K650E、FGFR3 K650M、FGFR3 V677I、FGFR3 D785Y、FGFR4R183S、FGFR4 R394Q、FGFR4 D425N、FGFR4V510L、FGFR4 R610H和FGFR融合(例如，FGFR3-TACC3、FGFR2-TACC3、FGFR2-NPM1、FGFR2-TACC2、FGFR2-BICC1、FGFR2-C10orf68、FGFR3-JAKMIP1、FGFR2-KIAA1598、FGFR2-NCALD、FGFR2-NOL4、FGFR1-NTM、FGFR2-PPAPDC1A、FGFR3-TNIP2和FGFR3-WHSC1)。在一些实施方案中，以上列出的突变形式中的一种或多种可从本文阐述的实施方案中具体排除，包括但不限于任何方法、试剂盒和物质组合物等。抑制剂包括但不限于厄达替尼、佩米替尼、英菲格拉替尼、多韦替尼、帕纳替尼、尼达尼布和非索替尼。在一些实施方案中，以上列出的突变形式中的一种或多种可从本文阐述的实施方案中具体排除，包括但不限于任何方法、试剂盒和物质组合物等。
“1类突变B-Raf”或“具有1类突变的B-Raf蛋白”通常指在V600(缬氨酸600)处偏离野生型B-Raf蛋白的任何突变。特别地，此类突变B-Raf蛋白包括包含V600E突变在内的突变。其他1类BRAF突变包括但不限于V600K、V600D、V600L、V600M和V600R。在一些实施方案中，以上列出的突变中的一种或多种可从本文阐述的实施方案中具体排除，包括但不限于任何方法、试剂盒和物质组合物。
“MEK抑制剂”通常指选择性地抑制MEK1或MEK2或同时抑制MEK1和MEK2二者的任何抑制剂。抑制剂的实例包括但不限于曲美替尼、考比替尼、贝美替尼、PD-0325901、司美替尼和CI-1040。
“MET抑制剂”是指任何野生型MET或MET突变体的抑制剂。MET突变包括但不限于单核苷酸多态性、外显子***和缺失、多体性等。突变和抑制剂的具体实例包括但不限于MET基因拷贝增益、MET基因扩增、MET E34K、MET H150Y、MET E168D、MET L269V、MET L299F、METS323G、MET M362T、MET N375S、MET C385Y、MET R970C、MET R988C、MET P1009S、METT1010I、MET S1058P、MET外显子14跳过突变、MET外显子14剪接变体、MET A1108S、METV1110I、MET H1112R、MET H1112L、MET H1112I、MET HJ1124D、MET G1137V、MET M1149T、METT1191I、MET V1206L、MET L1213V、MET D1228V、MET Y1230C、MET Y1230H、MET Y1230D、METY1235D、MET V1238I、MET D1246N、MET Y1248C、MET Y1248D、MET Y1248H、MET K1262R、METM1268T、MET M1268I和MET V1312I。在一些实施方案中，本段和本文别处列出的突变形式中的一种或多种可从本文阐述的实施方案中具体排除，包括但不限于任何方法、试剂盒和物质组合物等。抑制剂的实例包括但不限于克唑替尼、卡马替尼(capmatinib)、特泊替尼、赛沃替尼、替万替尼、卡博替尼、福瑞替尼(foretinib)、埃万妥单抗(amivantamab)、奥那妥组单抗(onartuzumab)、依玛妥珠单抗(emibetuzumab)和非拉妥组单抗(ficlatuzumab)。在一些实施方案中，本段和本文别处列出的抑制剂中的一种或多种可从本文阐述的实施方案中具体排除，包括但不限于任何方法、试剂盒和物质组合物等。
“对象”指患有或易患可通过施用本文提供的药物组合物来治疗的疾病或病况的活生物体。非限制性实例包括人类、其他哺乳动物、牛、大鼠、小鼠、狗、猴、山羊、绵羊、奶牛、鹿、马以及其他非哺乳动物。在一些实施方案中，患者是人。
III.给药方法
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐被配制成药物组合物。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐被配制成口服组合物。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用一次或两次。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用一次。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用两次。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐历经连续28天的周期施用。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐以约10mg至约140mg的量一天施用一次。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用一次持续3周的周期，包括施用化合物2周，接着不施用化合物1周。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用一次持续4周的周期，包括施用化合物3周，接着不施用化合物1周。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐历经6周的时间段施用。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐历经8周的时间段施用。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一周施用3次。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐在一周的第1天、第3天和第5天施用。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一周施用4次。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐施用3周的周期，包括施用化合物2周，接着不施用化合物1周。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐施用4周的周期，包括施用化合物3周，接着不施用化合物1周。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用两次，每周两天。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐历经8周的时间段施用。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐在每周的第1天和第2天施用。
在一些实施方案中，癌症选自肺癌、胃癌、肝癌、结肠癌、肾癌、乳腺癌、胰腺癌、幼年型粒单核细胞白血病、神经母细胞瘤、黑色素瘤和急性髓性白血病。在一些实施方案中，癌症为胰腺导管腺癌(PDAC)。
IV.联合方法
在一些实施方案中，所述方法包括施用第三MAPK通路抑制剂。不受理论的束缚，癌细胞中MAPK信号传导的抑制可导致PD-L1表达的下调，并增加癌细胞被免疫***检测到的可能性。此类第三MAPK通路抑制剂可基于MAPK通路中蛋白质的其他突变。在一些实施方案中，可采用任何MAPK通路抑制剂，包括靶向K-Ras、N-Ras、H-Ras、PDGFRA、PDGFRB、MET、FGFR、ALK、ROS1、TRKA、TRKB、TRKC、EGFR、IGF1R、GRB2、SOS、ARAF、BRAF、RAF1、MEK1、MEK2、c-Myc、CDK4、CDK6、CDK2、ERK1和ERK2的那些。MEK抑制剂的非限制性实例包括曲美替尼、考比替尼、贝美替尼、PD-0325901、司美替尼和CI-1040。示例性的MAPK通路抑制剂包括但不限于阿法替尼(afatinib)、奥希替尼(osimertinib)、埃罗替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)、拉帕替尼(lapatinib)、来那替尼(neratinib)、达克替尼(dacomitinib)、凡德他尼(vandetanib)、西妥昔单抗(cetuximab)、帕尼单抗(panitumumab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、耐昔妥珠单抗(necitumumab)、曲美替尼、贝美替尼、考比替尼、司美替尼、优立替尼(ulixertinib)、LTT462和LY3214996。在一些实施方案中，本段和本文别处列出的抑制剂中的一种或多种可从本文阐述的实施方案中的一种或多种中具体排除，包括但不限于任何方法、试剂盒和物质组合物等。
本文公开的方法可与其他化疗剂组合。此类药剂的实例可见于V.T.Devita和S.Hellman(编辑)的Cancer Principles and Practice of Oncology，第6版(2001年2月15日)，Lippincott Williams&Wilkins Publishers；所述文献的所有教导(包括但不限于所有方法、化合物、组合物、数据等)通过引用整体并入本文，与本文的任意实施方案和公开内容一起使用。本领域普通技术人员将能够基于药物和所涉及疾病的具体特征来辨别哪些药剂的组合将是有用的。
在一些实施方案中，所述方法可包括共同施用至少一种细胞毒性剂。如本文所用，术语“细胞毒性剂”是指抑制或阻止细胞功能和/或导致细胞死亡或破坏的物质。细胞毒性剂包括但不限于放射性同位素(例如，At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素)；化疗剂；生长抑制剂；酶及其片段，诸如溶核酶；和毒素，诸如细菌、真菌、植物或动物来源的小分子毒素或酶活性毒素，包括其片段和/或变体。
细胞毒性剂的实例可选自抗微管剂、铂配位络合物、烷化剂、抗生素、拓扑异构酶II抑制剂、抗代谢物、拓扑异构酶I抑制剂、激素和激素类似物、信号转导通路抑制剂、非受体酪氨酸激酶血管生成抑制剂、免疫治疗剂、促凋亡剂、LDH-A抑制剂；脂肪酸生物合成的抑制剂；细胞周期信号传导抑制剂；HDAC抑制剂、蛋白酶体抑制剂；和癌症代谢抑制剂。
化疗剂包括可用于癌症治疗的化学化合物。化疗剂的实例包括埃罗替尼(Genentech/OSIPharm.)、硼替佐米(/>MillenniumPharm.)、双硫仑、表没食子儿茶素没食子酸酯、盐孢菌素A(salinosporamide A)、卡非佐米(carfilzomib)、17-AAG(格尔德霉素)、根赤壳菌素(radicicol)、乳酸脱氢酶A(LDH-A)、氟维司群(/>AstraZeneca)、舒尼替尼(sunitinib)(/>Pfizer/Sugen)、来曲唑(/>Novartis)、甲磺酸伊马替尼(/>Novartis)、菲那舒那(finasunate)(/>Novartis)、奥沙利铂(/>Sanofi)、5-FU(5-氟尿嘧啶)、甲酰四氢叶酸、雷帕霉素(Sirolimus，/>Wyeth)、拉帕替尼(/>GSK572016，Glaxo Smith Kline)、洛那法尼(SCH66336)、索拉非尼(/>Bayer Labs)、吉非替尼(/>AstraZeneca)、AG1478、烷化剂诸如噻替派和/>环磷酰胺；烷基磺酸盐，诸如白消安、胺丙磺酯和哌泊舒凡；氮杂环丙烷，诸如苯佐替派、卡巴醌、美妥替哌和乌瑞替派；乙烯亚胺和甲基蜜胺，包括六甲蜜胺、三亚乙基密胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基密胺；乙酰精宁(尤其是布拉它辛和拉它辛酮)；喜树碱(包括拓扑替康和伊立替康)；苔藓抑素；卡利他汀；CC 1065(包括其阿多来新、卡折来新和比折来新合成类似物)；念珠藻素(特别是念珠藻素1和念珠藻素8)；肾上腺皮质类固醇(包括***和***龙)；醋酸环丙孕酮；5-α-还原酶，包括非那雄胺和度他雄胺)；伏立诺他、罗米地平、帕比司他、丙戊酸、莫西司他、多拉司他汀；阿地白介素、滑石粉倍癌霉素(包括合成类似物，KW-2189和CB1-TM1)；五加素；水鬼蕉碱；匍枝珊瑚醇；海绵抑制素；氮芥，诸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、二氯甲基二乙胺、氮芥氧化物盐酸盐、美法仑、新恩比兴、苯芥胆甾醇、泼尼氮芥、曲磷胺、乌拉莫司汀；亚硝基脲，诸如卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫司丁、尼莫司汀和雷莫司汀；抗生素，诸如烯二炔抗生素(例如，卡奇霉素，尤其是卡奇霉素γ1I和卡奇霉素ω1I(Angew Chem.Intl.Ed.Engl.1994 33:183-186)；达内霉素，包括达内霉素A；二膦酸盐，诸如氯膦酸盐；埃斯培拉霉素；以及新制癌菌素发色团和相关的色蛋白烯二炔抗生素发色团)、阿克拉霉素、放线菌素、氨茴霉素、重氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C、卡拉比星、洋红霉素、嗜癌菌素、色霉素、放线菌素D、道诺霉素、地托比星、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、/>(多柔比星)、吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉-多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素诸如丝裂霉素C、麦考酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、培洛霉素、甲基丝裂霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链霉黑素、链脲菌素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢物，诸如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、曲美沙特；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，诸如安西他滨、阿扎胞苷、6氮尿苷、卡莫氟、阿糖孢苷、二脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷；雄性激素，诸如卡普睾酮、丙酸屈他雄酮、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯；抗肾上腺素类，诸如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂，诸如甲酰四氢叶酸；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基酮戊二酸；恩尿嘧啶；安吖啶；阿莫司汀；比生群；依达曲沙；地磷酰胺；地美可辛；地吖醌；依洛尼塞；依利醋铵；埃博霉素；乙环氧啶；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；罗尼达宁；美登木素生物碱，诸如美登素和安丝菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；二胺硝吖啶；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；鬼臼酸；2-乙基酰肼；甲基苄肼；/>多糖复合体(JHS Natural Products,Eugene,Oreg.)；雷佐生；根瘤菌素；西唑呋喃；锗螺胺；细格孢氮杂酸；三亚胺醌；2,2',2”-三氯三乙胺；单端孢霉烯族毒素类(尤其是T-2毒素、疣孢菌素A、杆孢菌素A和蛇形菌素)；尿烷；长春地辛；达卡巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；加西托新；***糖苷(“Ara-C”)；环磷酰胺；噻替派；紫杉烷类，例如TAXOL(紫杉醇；Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)、/>(不含克列莫佛)、紫杉醇的白蛋白工程化纳米颗粒制剂(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,Ill.)以及/>(多烯紫杉醇、多西他赛；Sanofi-Aventis)；苯丁酸氮芥；/>(吉西他滨)；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物，诸如顺铂和卡铂；长春花碱；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；(长春瑞滨)；诺消灵(novantrone)；替尼泊苷；依达曲沙；道诺霉素；氨基蝶呤；卡培他滨/>伊班膦酸盐；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视黄醇，诸如视黄酸；以及上述任一种物质的药学上可接受的盐、酸和衍生物。
化疗剂还包括(i)用于调节或抑制激素对肿瘤作用的抗激素剂，诸如抗***和选择性***受体调节剂(SERM)，包括例如他莫西芬(包括柠檬酸他莫西芬)、雷洛昔芬、屈洛昔芬、艾多昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、可莫昔芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮和/>(柠檬酸托米芬)；(ii)抑制调节肾上腺中***产生的芳香酶的芳香酶抑制剂，例如4(5)-咪唑、氨鲁米特、/>(醋酸甲地孕酮)、/>(依西美坦；Pfizer)、福美司坦、法曲唑、(伏氯唑)、/>(来曲唑；Novartis)和/>(阿那曲唑；AstraZeneca)；(iii)抗雄激素，诸如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；布舍瑞林、曲普瑞林(tripterelin)、醋酸甲羟孕酮、己烯雌酚、普雷马林、氟***、全反式维甲酸、芬维A胺以及曲沙他滨(1,3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；(iv)蛋白激酶抑制剂；(v)脂质激酶抑制剂；(vi)反义寡核苷酸，特别是那些抑制与异常细胞增殖有关的信号传导通路中的基因表达的反义寡核苷酸，诸如例如PKC-α、Ralf和H-Ras；(vii)核酶，诸如VEGF表达抑制剂(例如，/>)和HER2表达抑制剂；(viii)疫苗，诸如基因疗法疫苗，例如/>和/>rIL-2；拓扑异构酶1抑制剂，诸如/>rmRH；和(ix)上述任一种物质的药学上可接受的盐、酸和衍生物。
化疗剂还包括抗体，诸如阿仑单抗(Campath)、贝伐单抗(Genentech)；西妥昔单抗(/>Imclone)；帕尼单抗(/>Amgen)、利妥昔单抗(/>Genentech/Biogen Idec)、帕妥珠单抗(/>2C4，Genentech)、曲妥珠单抗(/>Genentech)、托西莫单抗(Bexxar，Corixia)和抗体药物缀合物吉妥珠单抗奥佐米星(/>Wyeth)。作为与本发明化合物组合的药剂的具有治疗潜力的其他人源化单克隆抗体包括：阿泊珠单抗(apolizumab)、阿塞珠单抗(aselizumab)、阿特利珠单抗(atlizumab)、巴匹珠单抗(bapineuzumab)、比伐珠单抗美沙胆碱(bivatuzumab mertansine)、坎妥珠单抗美沙胆碱(cantuzumab mertansine)、西利珠单抗(cedelizumab)、塞妥珠单抗(certolizumabpegol)、西弗斯妥单抗(cidfusituzumab)、西妥珠单抗(cidtuzumab)、达克利珠单抗(daclizumab)、依库丽单抗(eculizumab)、依法利珠单抗(efalizumab)、依帕珠单抗(epratuzumab)、厄利珠单抗(erlizumab)、泛维珠单抗(felvizumab)、芳妥珠单抗(fontolizumab)、吉妥珠单抗奥佐米星(gemtuzumab ozogamicin)、奥英妥珠单抗(inotuzumab ozogamicin)、伊匹单抗(ipilimumab)、拉贝珠单抗(labetuzumab)、林妥珠单抗(lintuzumab)、马妥珠单抗(matuzumab)、美泊利单抗(mepolizumab)、莫维珠单抗(motavizumab)、莫妥珠单抗(motovizumab)、那他珠单抗(natalizumab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、诺洛维珠单抗(nolovizumab)、奴马维珠单抗(numavizumab)、奥瑞珠单抗(ocrelizumab)、奥马珠单抗(omalizumab)、帕利珠单抗(palivizumab)、帕考珠单抗(pascolizumab)、培福妥珠单抗(pecfusituzumab)、培土珠单抗(pectuzumab)、培克珠单抗(pexelizumab)、雷利珠单抗(ralivizumab)、兰尼单抗(ranibizumab)、瑞替珠单抗(reslivizumab)、瑞利珠单抗(reslizumab)、resyvizumab、罗维珠单抗(rovelizumab)、卢利珠单抗(ruplizumab)、西罗珠单抗(sibrotuzumab)、西利珠单抗(siplizumab)、索土珠单抗(sontuzumab)、替坦他珠单抗(tacatuzumab tetraxetan)、他度珠单抗(tadocizumab)、他利珠单抗(talizumab)、替非珠单抗(tefibazumab)、托珠单抗(tocilizumab)、托利珠单抗(toralizumab)、西莫白介素单抗(tucotuzumab celmoleukin)、妥库西珠单抗(tucusituzumab)、乌马维珠单抗(umavizumab)、乌珠单抗(urtoxazumab)、优特克单抗(ustekinumab)、维西珠单抗(visilizumab)和作为经基因修饰以识别白细胞介素-12p40蛋白的重组纯人类序列全长IgG1λ抗体的抗白细胞介素-12(ABT-874/J695Wyeth Researchand Abbott Laboratories)。
化疗剂还包括“EGFR抑制剂”，它指与EGFR或其突变形式结合或以其他方式直接相互作用，并阻止或降低其信号传导活性的化合物，且替代地称为“EGFR拮抗剂”。此类药剂的实例包括结合至EGFR的抗体和小分子。结合至EGFR的抗体的实例包括MAb 579(ATCC CRLHB 8506)、MAb 455(ATCC CRL HB8507)、MAb 225(ATCC CRL 8508)、MAb 528(ATCC CRL8509)(参见美国专利第4,943,533号，Mendelsohn等人)及其变体，诸如嵌合体225(C225或西妥昔单抗；)和重塑人225(H225)(参见WO 96/40210，Imclone SystemsInc.)；IMC-11F8，全人EGFR靶向抗体(Imclone)；结合II型突变EGFR的抗体(美国专利第5,212,290号)；如美国专利第5,891,996号中描述的结合EGFR的人源化和嵌合抗体；以及结合EGFR的人抗体，诸如ABX-EGF或帕尼单抗(参见WO98/50433，Abgenix/Amgen)；EMD 55900(Stragliotto等人Eur.J.Cancer 32A:636-640(1996))；EMD7200(马妥珠单抗(matuzumab))，针对EGFR的人源化EGFR抗体，其与EGF和TGF-α竞争EGFR结合(EMD/Merck)；人EGFR抗体，HuMax-EGFR(GenMab)；全人抗体，称为E1.1、E2.4、E2.5、E6.2、E6.4、E2.11、E6.3和E7.6.3并描述在US 6,235,883中；MDX-447(Medarex Inc)；和mAb 806或人源化mAb806(Johns等人，J.Biol.Chem.279(29):30375-30384(2004))。抗EGFR抗体可与细胞毒性剂缀合，从而产生免疫缀合物(参见例如，EP659,439A2,Merck Patent GmbH)。EGFR拮抗剂包括小分子，诸如在美国专利第5,616,582号、第5,457,105号、第5,475,001号、第5,654,307号、第5,679,683号、第6,084,095号、第6,265,410号、第6,455,534号、第6,521,620号、第6,596,726号、第6,713,484号、第5,770,599号、第6,140,332号、第5,866,572号、第6,399,602号、第6,344,459号、第6,602,863号、第6,391,874号、第6,344,455号、第5,760,041号、第6,002,008号和第5,747,498号以及下列PCT公开中描述的化合物：WO98/14451、WO98/50038、WO99/09016和WO99/24037。具体的小分子EGFR拮抗剂包括OSI-774(CP-358774，埃罗替尼，Genentech/OSIPharmaceuticals)；PD 183805(CI 1033，2-丙烯酰胺，N-[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-7-[3-(4-吗啉基)丙氧基]-6-喹唑啉基]-二盐酸盐，PfizerInc.)；ZD1839，吉非替尼/>4-(3'-氯-4'-氟苯胺基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉，AstraZeneca)；ZM 105180((6-氨基-4-(3-甲基苯基氨基)-喹唑啉，Zeneca)；BIBX-1382(N8-(3-氯-4-氟-苯基)-N2-(1-甲基-哌啶-4-基)-嘧啶并[5,4-d]嘧啶-2,8-二胺，Boehringer Ingelheim)；PKI-166((R)-4-[4-[(1-苯乙基)氨基]-1H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基]-苯酚)；(R)-6-(4-羟基苯基)-4-[(1-苯乙基)氨基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶)；CL-387785(N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺)；EKB-569(N-[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺)(Wyeth)；AG1478(Pfizer)；AG1571(SU 5271；Pfizer)；双重EGFR/HER2酪氨酸激酶抑制剂，诸如拉帕替尼(/>GSK572016或N-[3-氯-4-[(3氟苯基)甲氧基]苯基]-6[5[[[2甲基磺酰基]乙基]氨基]甲基]-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺)。上述参考文献中的每一者的所有教导(包括但不限于所有方法、化合物、组合物、数据等)通过引用整体并入本文，与本文的任意实施方案和公开内容一起使用。
化疗剂还包括“酪氨酸激酶抑制剂”，包括前述段落中提到的EGFR靶向药物；小分子HER2酪氨酸激酶抑制剂，诸如购自Takeda的TAK165；CP-724,714，ErbB2受体酪氨酸激酶的口服选择性抑制剂(Pfizer和OSI)；双HER抑制剂，诸如EKB-569(购自Wyeth)，其优先结合EGFR但抑制HER2和EGFR二者过度表达的细胞；拉帕替尼(GSK572016；购自Glaxo-SmithKline)，口服HER2和EGFR酪氨酸激酶抑制剂；PKI-166(购自Novartis)；泛HER抑制剂诸如卡奈替尼(CI-1033；Pharmacia)；Raf-1抑制剂，诸如购自ISIS Pharmaceuticals的抑制Raf-1信号传导的反义剂ISIS-5132；非HER靶向TK抑制剂，诸如甲磺酸伊马替尼(购自Glaxo SmithKline)；多靶向酪氨酸激酶抑制剂，诸如舒尼替尼(购自Pfizer)；VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂，诸如瓦他拉尼(PTK787/ZK222584，购自Novartis/Schering AG)；MAPK细胞外调节激酶I抑制剂CI-1040(购自Pharmacia)；喹唑啉，诸如PD 153035，4-(3-氯苯胺基)喹唑啉；吡啶并嘧啶；嘧啶并嘧啶类；吡咯并嘧啶，诸如CGP 59326、CGP 60261和CGP 62706；吡唑并嘧啶，4-(苯基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶；姜黄素(二阿魏酰甲烷，4,5-双(4-氟苯胺基)邻苯二甲酰亚胺)；含有硝基噻吩部分的酪氨酸；PD-0183805(Warner-Lamber)；反义分子(例如，那些与编码HER的核酸结合的分子)；喹喔啉(美国专利第5,804,396号)；胰蛋白酶(美国专利第5,804,396号)；ZD6474(Astra Zeneca)；PTK-787(Novartis/Schering AG)；泛HER抑制剂，诸如CI-1033(Pfizer)；Affinitac(ISIS 3521；ISIS/Lilly)；甲磺酸伊马替尼/>PKI166(Novartis)；GW2016(Glaxo SmithKline)；CI-1033(Pfizer)；EKB-569(Wyeth)；塞马西尼(Pfizer)；ZD6474(AstraZeneca)；PTK-787(Novartis/Schering AG)；INC-1C11(Imclone)、雷帕霉素(sirolimus，/>)；或者如下列专利公开中任一者中所描述的：美国专利号第5,804,396号；WO 1999/09016(American Cyanamid)；WO 1998/43960(American Cyanamid)；WO 1997/38983(Warner Lambert)；WO 1999/06378(WarnerLambert)；WO 1999/06396(Warner Lambert)；WO 1996/30347(Pfizer,Inc)；WO 1996/33978(Zeneca)；WO 1996/3397(Zeneca)和WO 1996/33980(Zeneca)。上述参考文献中的每一者的所有教导(包括但不限于所有方法、化合物、组合物、数据等)通过引用整体并入本文，与本文的任意实施方案和公开内容一起使用。
化疗剂还包括***、干扰素、秋水仙碱、氯苯氨啶、环孢菌素、两性霉素、甲硝唑、阿仑单抗、阿利维A酸、别嘌呤醇、氨磷汀、三氧化砷、天冬酰胺酶、活BCG、贝伐单抗、蓓萨罗丁、克拉屈滨、氯法拉滨、达贝泊汀α、地尼白介素、右雷佐生、依泊汀α、厄洛替尼、非格司亭、醋酸组氨瑞林、替伊莫单抗、干扰素α-2a、干扰素α-2b、来那度胺、左旋咪唑、美司钠、甲氧沙林、诺龙、尼拉拉滨、诺非妥莫单抗、奥普瑞白介素、帕利夫明、氨羟二磷酸二钠、培加酶、培加帕加司、培非格司亭、培美曲塞二钠、普卡霉素、卟吩姆钠、奎纳克林、拉布立酶、沙格司亭、替莫唑胺、VM-26、6-TG、托瑞米芬、维甲酸、ATRA、戊柔比星、唑来膦酸盐和唑来磷酸及其药学上可接受的盐。
化疗剂还包括氢化可的松、醋酸氢化可的松、醋酸可的松、新戊酸替可的松、曲安奈德、去炎松醇、莫米松、安西奈德、布***、***、醋酸氟轻松、氟轻松醋酸酯、倍他米松、倍他米松磷酸钠、***、***磷酸钠、氟考龙、氢化可的松-17-丁酸酯、氢化可的松-17-戊酸酯、阿可罗米松二丙酸酯、戊酸倍他米松、二丙酸倍他米松、泼尼卡酯、氯倍他松-17-丁酸酯、氯倍他索-17-丙酸酯、氟考龙己酸酯、氟考龙新戊酸酯和醋酸氟泼尼定；免疫选择性抗炎肽(ImSAID)，诸如苯基丙氨酸-谷氨酰胺-甘氨酸(FEG)及其D-异构体形式(feG)(IMULAN BioTherapeutics，LLC)；抗风湿药物，诸如咪唑硫嘌呤、环孢素(环孢霉素A)、D-青霉胺、金盐、羟化氯喹、来氟米特米诺环素、柳氮磺胺吡啶、肿瘤坏死因子α(TNFα)阻断剂诸如依那西普(Enbrel)、英夫利昔单抗(Remicade)、阿达木单抗(Humira)、塞妥珠单抗(Cimzia)、戈利木单抗(Simponi)、白细胞介素1(IL-1)阻断剂诸如阿那白滞素(Kineret)、T细胞共刺激阻断剂如阿巴西普(Orencia)、白细胞介素6(IL-6)阻断剂诸如托珠单抗白细胞介素13(IL-13)阻断剂诸如来瑞组单抗；干扰素α(IFN)阻断剂，诸如隆利组单抗；β7整联蛋白阻断剂，诸如rhuMAbβ7；IgE通路阻断剂，诸如抗M1素；分泌型同源三聚体LTa3和膜结合异源三聚体LTa1/β2阻断剂，诸如抗淋巴毒素α(LTa)；放射性同位素(例如，At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素)；其他研究药剂，诸如硫铂(thioplatin)、PS-341、丁酸苯酯、ET-18-OCH3或法尼基转移酶抑制剂(L-739749、L-744832)；多元酚，诸如槲皮苷、白藜芦醇、白皮杉醇、表没食子儿茶素没食子酸酯、茶黄素、黄烷醇、原花青素、白桦脂酸及其衍生物；自噬抑制剂，诸如氯喹；δ-9-四氢***酚(屈***酚，/>)；β-拉帕醌；拉帕醇；秋水仙碱；白桦酸；乙酰喜树碱、东莨菪碱和9-氨基喜树碱)；鬼臼毒素；替加氟/>蓓萨罗丁二膦酸盐，诸如氯膦酸盐(例如，/>或/>)、依替膦酸盐/>NE-58095、唑来膦酸/唑来膦酸盐/>阿仑膦酸盐/>帕米膦酸盐/>替鲁膦酸盐或利塞膦酸盐/>和表皮生长因子受体(EGF-R)；疫苗，诸如/>疫苗；哌立福辛、COX-2抑制剂(例如，塞来昔布或依托考昔)、蛋白酶体抑制剂(例如，PS341)；CCI-779；替吡法尼(R11577)；奥拉非尼(orafenib)，ABT510；Bcl-2抑制剂，诸如奥利默森纳/>匹克生琼；法尼基转移酶抑制剂，诸如洛那法尼(SCH 6636，SARASARTM)；以及上述任一种物质的药学上可接受的盐、酸或衍生物；以及上述两种或更多种物质的组合，诸如CHOP，环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和***龙联合疗法的缩写；以及FOLFOX，奥沙利铂(ELOXATINTM)与5-FU和甲酰四氢叶酸组合的治疗方案的缩写。
化疗剂还包括具有镇痛、退热和抗炎作用的非类固醇抗炎药。NSAID包括环加氧酶的非选择性抑制剂。NSAID的具体实例包括阿司匹林，丙酸衍生物诸如布洛芬、非诺洛芬、酮洛芬、氟比洛芬、奥沙普秦和萘普生，乙酸衍生物诸如吲哚美辛、舒林酸、依托度酸、双氯芬酸，烯醇酸衍生物诸如吡罗昔康、美洛昔康、替诺昔康、屈昔康、氯诺昔康和伊索昔康，芬那酸衍生物诸如甲芬那酸、甲氯芬那酸、氟芬那酸、托芬那酸和COX-2抑制剂诸如塞来昔布、依托考昔、罗美昔布、帕瑞考昔、罗非考昔和伐地考昔。NSAID可用于病况的症状缓解，病况为诸如类风湿性关节炎、骨关节炎、炎性关节病、强直性脊柱炎、银屑病关节炎、赖特综合征、急性痛风、痛经、骨转移疼痛、头痛和偏头痛、术后疼痛、炎症和组织损伤引起的轻度至中度疼痛、发热、肠梗阻和肾绞痛。
在某些实施方案中，化疗剂包括但不限于多柔比星、***、长春新碱、环磷酰胺、氟尿嘧啶、拓扑替康、干扰素、铂衍生物、紫杉烷(例如，紫杉醇、多西紫杉醇)、长春花生物碱(例如，长春花碱)、蒽环霉素(例如，多柔比星)、表鬼臼毒素(例如，依托泊苷)、顺铂、mTOR抑制剂(例如，雷帕霉素)、甲氨蝶呤、放线菌素D、尾海兔素10、秋水仙碱、曲美沙特、氯苯氨啶、环孢霉素、道诺霉素、替尼泊苷、两性霉素、烷化剂(例如，苯丁酸氮芥)、5-氟尿嘧啶、喜树碱、顺铂、甲硝唑和甲磺酸伊马替尼等。在其他实施方案中，本文公开的化合物与生物药剂诸如贝伐单抗或帕尼单抗联合施用。
在某些实施方案中，本文公开的化合物或其药学上可接受的组合物与抗增殖剂或化疗剂联合施用，所述抗增殖剂或化疗剂选自以下中的任一种或多种：阿巴瑞克、阿地白介素、阿仑单抗、阿利维A酸、别嘌呤醇、六甲蜜胺、氨磷汀、阿那曲唑、三氧化砷、门冬酰胺酶、阿扎胞苷、活BCG、贝伐单抗、氟尿嘧啶、蓓萨罗丁、博莱霉素、硼替佐米、白消安、卡普睾酮、卡培他滨、喜树碱、卡铂、卡莫司汀、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥、克拉屈滨、氯法拉滨、环磷酰胺、阿糖胞苷、放线菌素D、达贝泊汀α、道诺霉素、地尼白介素、右丙亚胺、多西紫杉醇、多柔比星(中性)、盐酸多柔比星、丙酸屈他雄酮、表柔比星、依泊汀α、厄洛替尼、雌莫司汀、磷酸依托泊苷、依托泊苷、依西美坦、非格司亭、氟尿苷、氟达拉滨、氟维司群、吉非替尼、吉西他滨、吉妥珠单抗、醋酸戈舍瑞林、醋酸组氨瑞林、羟基脲、替伊莫单抗、伊达比星、异环磷酰胺、甲磺酸伊马替尼、干扰素α-2a、干扰素α-2b、伊立替康、来那度胺、来曲唑、甲酰四氢叶酸、醋酸亮丙瑞林、左旋咪唑、洛莫司丁、醋酸甲地孕酮、美法仑、巯基嘌呤、6-MP、美司钠、甲氨喋呤、甲氧沙林、丝裂霉素C、米托坦、米托蒽醌、诺龙、尼拉拉滨、诺非妥莫单抗、奥普瑞白介素、奥沙利铂、紫杉醇、帕利夫明、帕米膦酸盐、培加酶、培门冬酶、聚乙二醇非格司亭、培美曲塞二钠、喷司他丁、哌泊溴烷、普卡霉素、卟吩姆钠、甲基苄肼、奎纳克林、拉布立酶、利妥昔单抗、沙格司亭、索拉非尼、链脲菌素、苹果酸舒尼替尼、滑石粉、他莫西芬、替莫唑胺、替尼泊苷、VM-26、睾内酯、硫鸟嘌呤、6-TG、噻替派、拓扑替康、托瑞米芬、托西莫单抗、曲妥珠单抗、维甲酸、ATRA、乌拉莫司汀、戊柔比星、长春花碱、长春新碱、长春瑞滨、唑来膦酸盐或唑来膦酸。
在一些实施方案中，式I的化合物的给药量可以是治疗癌症的任何合适的量。例如，给药量可以是1mg体重至500mg之间的每日剂量。作为另一个实例，每日剂量可以在约20mg至400mg的范围内(或其间的任何子范围或子值，包括端点)。在一些实施方案中，式I的化合物的给药量范围可以是10mg至300mg。在一些实施方案中，式I的化合物的给药量范围可以是10mg至100mg。在一些实施方案中，式I的化合物的给药量范围可以是5mg至50mg。每日剂量可通过在一天内施用单次施用的剂量(例如，QD)或经由多次施用(例如BID、TID、QID等)以提供每日总剂量来实现。在一些实施方案中，MEK抑制剂的给药量是任何合适的量。例如，它可以是每天1mg至500mg范围内的量(或其间的任何子范围或子值，包括端点)。MEK抑制剂的给药量可与任何给定的MEK抑制剂的批准给药量相同或更少，并且可以取决于给定的适应症。在一些实施方案中，曲美替尼可以在约1mg至约10mg范围内的剂量施用，每天一次。例如，曲美替尼被批准为每天一次2mg。它还被批准减少剂量，如1.5mg QD和1mg QD。在一些实施方案中，贝美替尼可以在约30mg至约100mg范围内的剂量施用。例如，贝美替尼被批准为45mg剂量，每天两次。贝美替尼也被批准减少剂量，诸如约30mg BID。应理解，上面列举的范围中的每一个可包括其中的任何子范围或子点，包括端点在内。应理解，上面列举的范围中的每一个可包括其中的任何子范围或子点，包括端点在内。成年人的常用剂量范围通常为5mg至2g/天。以离散单位提供的片剂或其他剂型可方便地含有一定量的一种或多种化合物，所述化合物在该剂量或其倍数下是有效的，例如，含有5mg至500mg，通常约10mg至200mg的单位。可与载剂材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将根据所治疗的宿主和特定施用方式而变化。在一些实施方案中，施用为口服。
在一些实施方案中，提供治疗对象的结直肠癌和NSCLC癌的方法，所述方法包括向所述对象口服联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐和曲美替尼或贝美替尼。在一些实施方案中，式I的化合物每天施用一次或两次。在一些实施方案中，曲美替尼或贝美替尼可每天施用一次或两次。例如，药物可如本文所述共同施用。
在一些实施方案中，对象为人。在一些实施方案中，对象是除人以外的哺乳动物，诸如灵长类动物、啮齿类动物、狗、猫或其他小动物。
在一些实施方案中，提供抑制ERK1/2磷酸化的方法，所述方法包括使细胞群体与式I或其药学上可接受的盐和曲美替尼或贝美替尼组合接触。在一些实施方案中，式I的化合物的浓度在1nm至1微摩尔或1nm至500nM或1nM至20nM的范围内。在一些实施方案中，曲美替尼或贝美替尼的浓度在10nM至1微摩尔、或10nM至500nM的范围内。
组合物
本文公开的式I的化合物可以作为盐存在。本发明实施方案包括此类盐，其可以是药学上可接受的盐。适用的盐形式的实例包括盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、甲磺酸盐、硝酸盐、马来酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、酒石酸盐(例如(+)-酒石酸盐、(-)-酒石酸盐或其混合物，包括外消旋混合物)、琥珀酸盐、苯甲酸盐和与氨基酸诸如谷氨酸的盐。这些盐可通过本领域技术人员已知的方法制备。还包括碱加成盐，诸如钠盐、钾盐、钙盐、铵盐、有机氨基盐或镁盐或类似的盐。当本发明实施方案的化合物含有相对碱性的官能团时，酸加成盐可通过使此类化合物的中性形式与足够量的所需酸(纯酸或在合适的惰性溶剂中)接触来获得。可接受的酸加成盐的实例包括衍生自无机酸如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸等的那些盐，以及衍生自有机酸如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等的盐。还包括氨基酸诸如精氨酸等的盐，以及有机酸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸等的盐。本发明实施方案的某些特定化合物包含碱性和酸性官能团二者，这使得所述化合物能够被转化成碱或酸加成盐。
其他盐包括在本发明实施方案的方法中使用的化合物的酸或碱盐。药学上可接受的盐的说明性实例是无机酸(盐酸、氢溴酸、磷酸等)盐、有机酸(乙酸、丙酸、谷氨酸、柠檬酸等)盐和季铵(甲基碘、乙基碘等)盐。应当理解，药学上可接受的盐是无毒的。关于合适的药学上可接受的盐的其他信息可见于Remington's Pharmaceutical Sciences，第17版，MackPublishing Company,Easton,Pa.,1985中，其所有教导(包括但不限于所有方法、化合物、组合物、数据等)通过引用整体并入本文，与本文的任意实施方案和公开内容一起使用。
药学上可接受的盐包括活性化合物的盐，其用相对无毒的酸或碱制备，这取决于在本文所描述的化合物上发现的特定取代基。当本发明实施方案的化合物含有相对酸性的官能团时，碱加成盐可通过使此类化合物的中性形式与足够量的所需碱(纯碱或在合适的惰性溶剂中)接触来获得。药学上可接受的碱加成盐的实例包括钠盐、钾盐、钙盐、铵盐、有机氨基盐或镁盐或类似的盐。当本发明实施方案的化合物含有相对碱性的官能团时，酸加成盐可通过使此类化合物的中性形式与足够量的所需酸(纯酸或在合适的惰性溶剂中)接触来获得。药学上可接受的酸加成盐的实例包括衍生自无机酸如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸等的那些盐，以及衍生自相对无毒的有机酸如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等的盐。还包括氨基酸诸如精氨酸等的盐，以及有机酸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸等的盐(参见例如，Berge等人，"Pharmaceutical Salts",Journal of Pharmaceutical Science,1977,66,1-19)，其所有教导(包括但不限于所有方法、化合物、组合物、数据等)通过引用整体并入本文，与本文的任意实施方案和公开内容一起使用。本发明实施方案的某些特定化合物包含碱性和酸性官能团二者，这使得所述化合物能够被转化成碱或酸加成盐。
化合物的中性形式优选通过使盐与碱或酸接触并以常规方式分离母体化合物来再生。化合物的母体形式在某些物理性质(诸如在极性溶剂中的溶解度)上不同于各种盐形式。
本发明实施方案的某些化合物可以非溶剂化形式以及溶剂化形式存在，包括水合形式。通常，溶剂化形式等同于非溶剂化形式，并且囊括在本发明实施方案的范围内。本发明实施例的某些化合物可以多种结晶或非晶形式存在。一般来说，所有物理形式对于本发明实施方案所设想的用途都是等同的，并且都旨在落入本发明实施方案的范围内。
本发明实施方案的某些化合物具有不对称碳原子(光学中心)或双键；在绝对立体化学方面，氨基酸的对映异构体、外消旋体、非对映异构体、互变异构体、几何异构体、立体异构形式可被定义为(R)-或(S)-或定义为(D)-或(L)-，且单个异构体都囊括在本发明实施方案的范围内。本发明实施方案的化合物不包括本领域已知的太不稳定而无法合成和/或分离的那些化合物。本发明实施方案意味着包括外消旋和光学纯形式的化合物。光学活性(R)-和(S)-或(D)-和(L)-异构体可使用手性合成子或手性试剂来制备，或者使用常规技术来拆分。
除非另外说明，否则本发明实施方案的化合物还可在构成此类化合物的原子中的一个或多个处含有非自然比例的原子同位素。例如，本发明实施方案的化合物可用放射性或稳定同位素标记，诸如例如氘(2H)、氚(3H)、碘-125(125I)、氟-18(18F)、氮-15(15N)、氧-17(17O)、氧-18(18O)、碳-13(13C)或碳-14(14C)。本发明实施方案的化合物的所有同位素变型，无论是否是放射性的，都囊括在本发明实施方案的范围内。
除了盐形式，本发明实施方案还提供前药形式的化合物。本文所描述的化合物的前药是在生理条件下容易发生化学变化以提供本发明实施方案的化合物的那些化合物。此外，前药可在离体环境中通过化学或生物化学方法转化为本发明实施方案的化合物。例如，当与合适的酶或化学试剂一起放置在透皮贴剂储库中时，前药可以缓慢转化为本发明实施方案的化合物。
在一些实施方案中，提供了包含式I的化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。在一些实施方案中，药物组合物被配置为口服片剂制剂。
本发明实施方案的化合物可以多种口服、肠胃外和局部剂型制备和施用。口服制剂包括适合患者摄食的片剂、丸剂、粉剂、糖衣丸、胶囊、液体、锭剂、凝胶、糖浆、浆剂、混悬剂等。本发明实施方案的化合物也可通过注射，即静脉内、肌内、皮内、皮下、十二指肠内或腹膜内注射来施用。此外，本文所描述的化合物可通过吸入，例如鼻内吸入施用。此外，本发明实施方案的化合物可经皮施用。本文公开的式I的化合物也可通过眼内、***内和直肠内途径施用，包括栓剂、吹入剂、粉剂和气雾剂配方(对于类固醇吸入剂的实例，参见Rohatagi,J.Clin.Pharmacol.35:1187-1193,1995；Tjwa,Ann.Allergy AsthmaImmunol.75:107-111,1995)，所述参考文献的所有教导(包括但不限于所有方法、化合物、组合物、数据等)通过引用整体并入本文，与本文的任意实施方案和公开内容一起使用。因此，本发明实施方案还提供了药物组合物，所述药物组合物包含一种或多种药学上可接受的载剂和/或赋形剂以及式I的化合物或式I的化合物的药学上可接受的盐。
为了从本发明实施方案的化合物制备药物组合物，药学上可接受的载剂可以是固体或液体。固体形式的制剂包括粉剂、片剂、丸剂、胶囊、扁囊剂、栓剂和可分散颗粒。固体载剂可以是一种或多种物质，其也可以用作稀释剂、调味剂、表面活性剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或封装材料。关于配制和施用技术的细节很好地描述于科学和专利文献中，参见，例如，Remington's Pharmaceutical Sciences，Maack Publishing Co，Easton PA(“Remington's”)的最新版本，所述文献的所有教导(包括但不限于所有方法、化合物、组合物、数据等)通过引用整体并入本文，与本文的任意实施方案和公开内容一起使用。
在粉剂中，载剂是细分的固体，其与细分的活性组分混合。在片剂中，活性组分与具有必需粘合性质的载剂和所需附加赋形剂以合适的比例混合，并被压制成所需形状和大小。
粉剂、胶囊和片剂优选地含有5％或10％至70％的活性化合物。合适的载剂是碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。术语“制剂”旨在包括活性化合物与作为载剂的囊封材料的配方，从而提供胶囊，其中含有或不含有其他赋形剂的活性组分被载剂包围，从而与其缔合。类似地，包括扁囊剂和锭剂。片剂、粉剂、胶囊、丸剂、扁囊剂和锭剂可用作适于口服施用的固体剂型。
合适的固体赋形剂是碳水化合物或蛋白质填充剂，包括但不限于糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；来自玉米、小麦、大米、马铃薯或其他植物的淀粉；纤维素，诸如甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素或羧甲基纤维素钠；和树胶，包括***树胶和黄蓍胶；以及蛋白质诸如明胶和胶原蛋白。如果需要，可加入崩解剂或增溶剂，诸如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、海藻酸或其盐，诸如海藻酸钠。
糖衣丸芯提供有合适的包衣，诸如浓缩糖溶液，其还可含有***树胶、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、卡波普凝胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。可以向片剂或糖衣丸包衣中加入染料物或颜料，用于产品识别或表征活性化合物的量(即剂量)。本文公开的药物制剂也可口服使用，例如使用由明胶制成的推入配合胶囊，以及由明胶和包衣诸如甘油或山梨醇制成的软密封胶囊。推入配合胶囊可含有与填充剂或粘合剂诸如乳糖或淀粉、润滑剂诸如滑石粉或硬脂酸镁以及任选地稳定剂混合的式I的化合物。在软胶囊中，式I的化合物可溶解或悬浮在合适的液体中，诸如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇，有或没有稳定剂。
液体形式的制剂包括溶液、悬浮液和乳液，例如水或水/丙二醇溶液。对于肠胃外注射，液体制剂可在聚乙二醇水溶液中配制为溶液。
适于口服使用的水溶液可通过将活性组分溶解在水中并根据需要加入合适的着色剂、调味剂、稳定剂和增稠剂来制备。适用于口服使用的水性悬浮液可通过将细分的活性组分分散在具有以下物质的水中来制备：粘性材料，诸如天然或合成树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和***树胶，和分散剂或湿润剂，诸如天然磷脂(例如卵磷脂)、环氧烷与脂肪酸的缩合产物(例如，聚氧乙烯硬脂酸酯)、环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(例如，十七亚乙基氧基鲸蜡醇)、环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物(例如，聚氧乙烯山梨醇单油酸酯)或者环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(例如，聚氧乙烯山梨聚糖单油酸酯)。水性悬浮液还可含有一种或多种防腐剂诸如对羟基苯甲酸乙酯或正丙酯、一种或多种着色剂、一种或多种调味剂和一种或多种甜味剂诸如蔗糖、阿斯巴甜或糖精。配方可针对渗透压进行调整。
还包括固体形式的制剂，其旨在在使用前不久被转化为用于口服施用的液体形式的制剂。此类液体形式包括溶液、悬浮液和乳液。除了活性组分之外，这些制剂可含有着色剂、调味剂、稳定剂、缓冲剂、人工和天然甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等。
油悬浮液可通过将式I的化合物悬浮在植物油诸如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油中，或溶解在矿物油诸如液体石蜡；或者这些的混合物中来配制。油悬浮液可含有增稠剂，诸如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可加入甜味剂以提供可口的口服制剂，诸如甘油、山梨醇或蔗糖。这些制剂可通过添加抗氧化剂诸如抗坏血酸来保存。作为可注射的油载体的实例，参见Minto,J.Pharmacol.Exp.Ther.281:93-102,1997，所述参考文献的所有教导(包括但不限于所有方法、化合物、组合物、数据等)通过引用整体并入本文，与本文的任意实施方案和公开内容一起使用。本文公开的药物制剂也可以是水包油乳液的形式。油相可以是如上所述的植物油或矿物油，或其混合物。合适的乳化剂包括天然树胶，诸如***树胶和黄蓍胶，天然磷脂诸如大豆卵磷脂，衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯诸如山梨聚糖单油酸酯，以及这些偏酯与环氧乙烷的缩合产物，诸如聚氧乙烯山梨聚糖单油酸酯。乳剂还可含有甜味剂和调味剂，如在糖浆和酏剂的制剂中。此类制剂还可含有缓和剂、防腐剂或着色剂。
本文公开的式I的化合物的药物制剂可以盐的形式提供，并且可与碱形成，即阳离子盐，诸如碱金属和碱土金属盐，诸如钠、锂、钾、钙、镁，以及铵盐诸如铵、三甲基-铵、二乙基胺和三-(羟甲基)-甲基-铵盐。
药物制剂优选为单位剂型。在此类形式中，制剂被细分成含有适量活性组分的单位剂量。单位剂型可以是包装制剂，该包装含有离散量的制剂，诸如包装片剂、胶囊和小瓶或安瓶中的粉剂。此外，单位剂型可以是胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂本身，或者其可以是适当数量的包装形式的这些药剂中的任一种。
根据特定的应用和活性组分的效力，单位剂量制剂中活性组分的量可从0.1mg至10000mg，更典型地从1.0mg至1000mg，最典型地从10mg至500mg进行变化或调整。如果需要，所述组合物还可含有其他相容治疗剂。
剂量方案还考虑了本领域熟知的药代动力学参数，即吸收率、生物利用度、代谢、清除率等(参见，例如，Hidalgo-Aragones(1996)J.Steroid Biochem.Mol.Biol.58:611-617；Groning(1996)Pharmazie51:337-341；Fotherby(1996)Contraception 54:59-69；Johnson(1995)J.Pharm.Sci.84:1144-1146；Rohatagi(1995)Pharmazie 50:610-613；Brophy(1983)Eur.J.Clin.Pharmacol.24:103-108；最新的Remington’s,见上文；上述参考文献中的每一者的所有教导(包括但不限于所有方法、化合物、组合物、数据等)通过引用整体并入本文，与本文的任意实施方案和公开内容一起使用)。现有技术允许临床医生针对每个个体患者、GR和/或MR调节剂以及所治疗的疾病或病况确定剂量方案。
式I的化合物制剂的单次或多次施用可根据患者所需和耐受的剂量和频率来施用。所述制剂应提供足够量的活性剂以有效治疗疾病状态。因此，在一个实施方案中，用于口服施用式I的化合物的药物制剂的每日剂量为约0.5至约30mg/千克体重/天，包括其中的所有子范围和子值，包括端点在内。在替代的实施方案中，使用的剂量为约1mg至约20mg/kg患者体重/天。与口服施用相比，可使用较低的剂量，特别是当将药物施用于解剖学上隐蔽的部位，诸如脑脊液(CSF)空间，进入血流、体腔或器官的内腔时。局部施用可使用显著更高的剂量。用于制备用于肠胃外施用的包含式I的化合物的制剂的实际方法是本领域技术人员已知的或显而易见的，并且更详细地描述于出版物诸如Remington's中，见上文。还参见Nieman,In"Receptor Mediated Antisteroid Action,"Agarwal等人编辑,De Gruyter,New York(1987)，所述参考文献的所有教导(包括但不限于所有方法、化合物、组合物、数据等)通过引用整体并入本文，与本文的任意实施方案和公开内容一起使用。
在一些实施方案中，共同施用包括在第二活性剂的0.5、1、2、4、6、8、10、12、16、20或24小时内(或24小时时间段内的任何子时间范围或子时间值)施用一种活性剂。共同施用包括同时、近似同时(例如，在彼此的约1、5、10、15、20或30分钟(或例如0-30分钟的任何子时间范围或子时间值)内)或以任何顺序依次施用两种活性剂。在一些实施方案中，共同施用可通过共同配制来实现，即制备包含两种活性剂的单一药物组合物。在一些实施方案中，活性剂可单独配制。在一些实施方案中，活性剂和/或辅助剂可彼此连接或缀合。例如，可同时施用至少一个施用剂量的药物。例如，可在彼此的几分钟或小于一小时内施用至少一个施用剂量的药物。例如，可在不同的时间，但在同一天或不同的几天施用至少一个施用剂量的药物。
在将包含本文公开的式I的化合物的药物组合物在一种或多种可接受的载剂中配制后，可将其放置在合适的容器中并贴上标签用于指定病况的治疗。对于式I的化合物的施用，此类标签将包括例如关于施用量、施用频率和施用方法的说明书。
药物给药量
当然，本文化合物的剂量方案将根据已知因素而变化，诸如特定药剂的药效学特征及其施用方式和途径；受体的物种、年龄、性别、健康状况、医疗条件和体重；症状的性质和程度；同期治疗的种类；治疗的频率；施用途径、患者的肾功能和肝功能以及所需效果。临床医师可确定预防、对抗或阻止疾病或病症发展所需的药物的有效量并对此开处方。
作为一般指导，当用于指示效果时，每种活性成分的每日口服剂量将在约0.001至约1000mg/kg体重之间，优选地在约0.01至约100mg/kg体重/天之间，并且最优选地在约0.1至约20mg/kg/天之间。在一些实施方案中，式(I)的化合物可以约10mg/天至约200mg/天的剂量施用。在一些实施方案中，式(I)的化合物可以约10mg/天、20mg/天、30mg/天、40mg/天、50mg/天、60mg/天、70mg/天、80mg/天、90mg/天、100mg/天、110mg/天、120mg/天、130mg/天、140mg/天、150mg/天、160mg/天、170mg/天、180mg/天、190mg/天或200mg/天的剂量施用。剂量可以是所述范围内的任何值或子范围。
取决于患者的病况和预期的治疗效果，治疗剂的给药频率可以变化，例如从每天一次到每天六次。也就是说，给药频率可以是QD，即每天一次，BID，即每天两次；TID，即每天三次；QID，即每天四次；每天五次，或者每天六次。在另一个实施方案中，给药频率可以是BIW，即每周两次，TIW，即一周三次，或QIW，即一周四次。
取决于患者的病况和预期的治疗效果，治疗周期可具有不施用治疗剂的一段时间。如本文所用，“间隔施用”是指治疗剂施用后紧接着为空白日或空白周。例如，治疗周期可以是3周长，包括2周治疗剂的给药，随后1周不施用治疗剂。在一些实施方案中，治疗周期为4周长，包括3周给药，随后1周不施用治疗剂。
如本文所用，术语“治疗周期”是指施用治疗剂的预定时间段。通常，在每个治疗周期结束时对患者进行检查，以评估疗法的效果。
在一个实施方案中，治疗周期中的每一个具有约3或更多天。在另一个实施方案中，治疗周期中的每一个具有约3天至约60天。在另一个实施方案中，治疗周期中的每一个具有约5天至约50天。在另一个实施方案中，治疗周期中的每一个具有约7天至约28天。在另一个实施方案中，治疗周期中的每一个具有28天。在一个实施方案中，治疗周期具有约29天。在另一个实施方案中，治疗周期具有约30天。在另一个实施方案中，治疗周期具有约31天。在另一个实施方案中，治疗周期具有约一个月的治疗周期。在另一个实施方案中，治疗周期是从3周到8周的任何时间长度。在另一个实施方案中，治疗周期是从3周到6周的任何时间长度。在又一个实施方案中，治疗周期为3周。在另一个实施方案中，治疗周期为一个月。在另一个实施方案中，治疗周期为4周。在另一个实施方案中，治疗周期为5周。在另一个实施方案中，治疗周期为6周。在另一个实施方案中，治疗周期为7周。在另一个实施方案中，治疗周期为8周。治疗周期的持续时间可包括所述范围内的任何值或子范围，包括端点。
如本文所用，术语“共同施用”或“共施用”是指以协同方式一起施用(a)另外的治疗剂和(b)式(I)的化合物或其盐、溶剂化物、酯和/或前药。例如，共同施用可以是同时施用、顺序施用、重叠施用、间隔施用、连续施用或其组合。
在一些实施方案中，式(I)的化合物的给药方案是在连续28天的周期中每天一次。在一些实施方案中，式(I)的化合物的每天一次给药方案可以是但不限于20mg/天、30mg/天、40mg/天、50mg/天、60mg/天。式(I)的化合物可施用20mg至60mg的任何剂量，一天一次。剂量可以是所述范围内的任何值或子范围。
在一些实施方案中，式(I)的化合物的给药方案是在连续28天的周期中每天两次。在一些实施方案中，式(I)的化合物的每天两次给药方案可以是但不限于10mg/天、20mg/天、30mg/天、40mg/天、50mg/天、60mg/天、70mg/天、80mg/天、90mg/天、100mg/天。式(I)的化合物可施用20mg至80mg的任何剂量，一天两次。在一些实施方案中，式(I)的化合物可施用10mg/天至100mg/天的任何剂量。剂量可以是所述范围内的任何值或子范围。
在一些实施方案中，式(I)的化合物的给药方案可以是在6周的时间段内，每天一次，每天20mg至60mg的任何剂量，持续两周，然后中断一周(例如2周给药，1周停止)。在一些实施方案中，式(I)的化合物的给药方案可以是在6周的时间段内，每天两次，10mg至100mg的任何剂量，每天两次，持续两周，然后中断一周(例如2周给药，1周停止)。
在一些实施方案中，式(I)的化合物的给药方案可以是在8周的时间段内，每天一次，每天20mg至60mg的任何剂量，持续三周，然后中断一周(例如3周给药，1周停止)。在一些实施方案中，式(I)的化合物的给药方案可以是在8周的时间段内，每天两次，10mg至100mg的任何剂量，一天两次，持续三周，然后中断一周(例如8周给药，1周停止)。
在一些实施方案中，式(I)的化合物的给药方案可以是在每周的第1天和第2天每天两次，持续8周。在一些实施方案中，式(I)的化合物的给药量可以是，但不限于10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg、100mg。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用一次持续3周的周期，包括施用化合物2周，接着不施用化合物1周。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用一次持续4周的周期，包括施用化合物3周，接着不施用化合物1周。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐历经6周的时间段施用。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐历经8周的时间段施用。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一周施用3次。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐在一周的第1天、第3天和第5天施用。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一周施用4次。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐施用3周的周期，包括施用化合物2周，接着不施用化合物1周。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐施用4周的周期，包括施用化合物3周，接着不施用化合物1周。
在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用两次，每周两天。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐历经8周的时间段施用。在一些实施方案中，式I的化合物或其药学上可接受的盐在每周的第1天和第2天施用。
当一周多次施用式I的化合物时，剂量可在该周内的任一天或几天的组合中施用。例如，每周施用三次可以包括在以下时间施用：第1、第3天和第5天；第1天、第2天和第3天；第1天、第3天和第5天；等等。每周施用两天可以包括在以下时间施用：第1天和第2天；第1天和第3天；第1天和第4天；第1天和第5天；第1天和第6天；第1天和第7天；等等。
试剂盒和产品
本公开的一些实施方案涉及包含式I的化合物和/或至少一种FGFR抑制剂的试剂盒和产品。例如，试剂盒或产品可包括含有式I的化合物的包装或容器。此类试剂盒和产品可进一步包括产品插页或标签，其具有批准的药物施用和适应症信息，包括如何使用式I的化合物结合单独提供的FGFR抑制剂。试剂盒可用于本文所述的治疗癌症的方法中。
在一些方面，试剂盒或产品可包含式I的化合物和至少一种FGFR抑制剂。在一些实施方案中，FGFR抑制剂为例如厄达替尼。此类试剂盒可包括一个或多个容器或包装，其将一种或两种组合药物一起包含在单个容器和/或包装中，或者包含在单独的包装/容器中。在一些情况下，这两种药物分开包裹，但包含在单个包装、容器或盒子中。此类试剂盒和产品可进一步包括产品插页或标签，其具有批准的药物施用和适应症信息，包括如何使用式I的化合物结合FGFR抑制剂。试剂盒可用于本文所述的治疗癌症的方法中。
本公开的一些实施方案涉及包含式1的化合物和/或至少一种B-Raf抑制剂的试剂盒和产品。例如，试剂盒或产品可包括含有式I的化合物的包装或容器。此类试剂盒和产品可进一步包括产品插页或标签，其具有批准的药物施用和适应症信息，包括如何使用式1的化合物结合单独提供的B-Raf抑制剂。试剂盒可用于本文所述的治疗癌症的方法中。
在一些方面，试剂盒或产品可包含式1的化合物和至少一种B-Raf抑制剂。在一些实施方案中，B-Raf抑制剂为例如康奈非尼。此类试剂盒可包括一个或多个容器或包装，其将一种或两种组合药物一起包含在单个容器和/或包装中，或者包含在单独的包装/容器中。在一些情况下，这两种药物分开包裹，但包含在单个包装、容器或盒子中。此类试剂盒和产品可进一步包括产品插页或标签，其具有批准的药物施用和适应症信息，包括如何使用式1的化合物结合B-Raf抑制剂。试剂盒可用于本文所述的治疗癌症的方法中。
本公开的一些实施方案涉及包含式I的化合物和/或至少一种MEK抑制剂的试剂盒和产品。例如，试剂盒或产品可包括含有式I的化合物的包装或容器。此类试剂盒和产品可进一步包括产品插页或标签，其具有批准的药物施用和适应症信息，包括如何使用式1的化合物联合单独提供的MEK抑制剂。试剂盒可用于本文所述的治疗癌症的方法中。
在一些方面，试剂盒或产品可包含式1的化合物和至少一种MEK抑制剂。在一些实施方案中，MEK抑制剂为例如曲美替尼或贝美替尼。此类试剂盒可包括一个或多个容器或包装，其将一种或两种组合药物一起包含在单个容器和/或包装中，或者包含在单独的包装/容器中。在一些情况下，这两种药物分开包裹，但包含在单个包装、容器或盒子中。此类试剂盒和产品可进一步包括产品插页或标签，其具有批准的药物施用和适应症信息，包括如何使用式1的化合物结合MEK抑制剂。试剂盒可用于本文所述的治疗癌症的方法中。
本公开的一些实施方案涉及包含式I的化合物和/或至少一种MET抑制剂的试剂盒和产品。例如，试剂盒或产品可包括含有式I的化合物的包装或容器。此类试剂盒和产品可进一步包括产品插页或标签，其具有批准的药物施用和适应症信息，包括如何使用式I的化合物结合单独提供的MET抑制剂。试剂盒可用于本文所述的治疗癌症的方法中。
在一些方面，试剂盒或产品可包含式I的化合物和至少一种MET抑制剂。在一些实施方案中，MET抑制剂为例如克唑替尼、特泊替尼、赛沃替尼、卡博替尼或替万替尼。此类试剂盒可包括一个或多个容器或包装，其将一种或两种组合药物一起包含在单个容器和/或包装中，或者包含在单独的包装/容器中。在一些情况下，这两种药物分开包裹，但包含在单个包装、容器或盒子中。此类试剂盒和产品可进一步包括产品插页或标签，其具有批准的药物施用和适应症信息，包括如何使用式I的化合物结合MET抑制剂。试剂盒可用于本文所述的治疗癌症的方法中。
实施例
实施例1-式I的化合物和FGFR抑制剂的协同组合
本实施例证明式I的化合物与FGFR抑制剂的协同组合。
联合细胞增殖测定
将细胞(每孔2000个细胞)铺板在100μl细胞培养基中的96孔板上。通过使用TecanD300e数字分配器组合矩阵方案，用式I的化合物和浓度从0至10μM变化的厄达替尼处理细胞。在第5天，加入50μl的CellTiter-Glo(CTG)试剂(Promega)，并且将板在温和摇动条件下孵育10分钟。孵育10分钟后，根据供应商的说明书(Promega)确定发光信号，并且使用Combenefit软件通过标准HSA模型产生组合数据。组合协同作用在结果表中用正数表示。负数代表组合的拮抗作用。
结果
图1A-1B示出表明式I的化合物和FGFR抑制剂厄达替尼的组合表现出体外协同作用的数据。图1A示出使用式I的化合物和厄达替尼的组合在Hep3B癌细胞系中的3D图形协同作用数据。图1B示出使用式I的化合物和厄达替尼的组合在JHH-7癌细胞系中的3D图形协同作用数据。
图1A和图1B示出表明式I的化合物和FGFR抑制剂厄达替尼的组合表现出体外协同作用的数据。图1A示出使用式I的化合物和厄达替尼的组合在Hep3B癌细胞系中的协同作用数据。图1B示出使用式I的化合物和厄达替尼的组合在JHH-7癌细胞系中的协同作用数据。
实施例2-在FGFR2扩增的肝癌CDX模型KATO III中，式I的化合物和厄达替尼的联合疗法
材料
在小鼠中的整个28天施用中，制备载体/对照制品，即在去离子水中的100mM乙酸，将pH调节至4.8-5.0，并在环境条件下储存。
将式I的化合物的测试制品每周在100mM乙酸缓冲液的载体中新鲜制备，并在环境条件下储存。将组合药剂厄达替尼在20％HP-β-CD的载体中制备，并在2-8℃下储存。
雌性Balb/c裸鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司(Beijing VitalRiver Laboratory Animal Technology Co.,Ltd.)。小鼠在植入时为6-8周龄。根据IACUC方案，在开始任何实验之前，将小鼠置于动物饲养设施的无特定病原(SPF)环境中，并使其适应新环境至少3天。
本研究中与动物处理、护理和治疗相关的所有程序均根据无锡AppTec机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准的指南进行。在研究过程中，动物的护理和使用按照实验动物护理评估和认证协会(AAALAC)的规定进行。此外，在无锡AppTec进行的这项研究的所有部分都遵守研究负责人批准的研究方案和适用的标准操作程序(SOP)。
异种移植模型的制备
KATO-III细胞系是具有FGFR扩增的人肝癌细胞。KATO-III细胞系购自ATCC(HTB-103TM)。使用注射器将含有5×106个肿瘤细胞的与50％Matrigel混合的200μL细胞悬浮液皮下植入小鼠的右侧胁腹。当皮下植入后肿瘤体积达到220mm3的平均值时，将荷瘤小鼠随机分成不同的组，每组8只小鼠。随机分组日期表示为治疗第0天。
治疗
随机分组后第二天开始治疗。治疗开始日期表示为治疗第1天。通过口服施用载体对照溶液、10mg/kg BID的单独的式I的化合物和10mg/kg QD的单独的厄达替尼对小鼠给药。另一组接受式I的化合物和厄达替尼的联合治疗，其中式I的化合物的给药量为10mg/kgBID，并且厄达替尼的给药量为10mg/kg QD。给药体积为5mL/kg，并且BID方案的间隔为8小时。在联合组中，厄达替尼在第一次BID剂量的式I的化合物后一小时给药。按照研究方案中的定义，研究在治疗第28天终止。
结果
图2示出在肝癌CDX模型KATO III中，用单独的式I的化合物、单独的厄达替尼以及式I的化合物和厄达替尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。在对照组和治疗组中没有观察到显著的体重变化。
结论
如图2所示，在FGFR2扩增的肝癌CDX模型KATO III中，相对于单独用式I的化合物治疗或单独用厄达替尼治疗，式I的化合物和厄达替尼的组合展示出优越的肿瘤生长抑制。
实施例3-在FGFR2扩增的胃癌CDX SNU-16中，式I的化合物和厄达替尼的联合疗法
材料
在小鼠中的整个28天施用中，制备载体/对照制品，即在去离子水中的100mM乙酸，将pH调节至4.8-5.0，并在环境条件下储存。
将式I的化合物的测试制品每周在100mM乙酸缓冲液的载体中新鲜制备，并在环境条件下储存。将组合药剂厄达替尼每周在20％HP-β-CD的载体中新鲜制备，并在2-8℃下储存。
雌性Balb/c裸鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。小鼠在植入时为6-8周龄。根据IACUC方案，在开始任何实验之前，将小鼠置于动物饲养设施的无特定病原(SPF)环境中，并使其适应新环境至少3天。
本研究中与动物处理、护理和治疗相关的所有程序均根据无锡AppTec机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准的指南进行。在研究过程中，动物的护理和使用按照实验动物护理评估和认证协会(AAALAC)的规定进行。此外，在无锡AppTec进行这项研究的所有部分并且遵守研究负责人批准的研究方案和适用的标准操作程序(SOP)。
异种移植模型的制备
SNU16细胞系是具有FGFR扩增的人胃癌细胞。SNU16细胞系购自ATCC(CRL-1420TM)。使用注射器将含有5×106个肿瘤细胞的与50％Matrigel混合的200μL细胞悬浮液皮下植入小鼠的右侧胁腹。当皮下植入后肿瘤体积达到180mm3的平均值时，将荷瘤小鼠随机分成不同的组，每组8只小鼠。随机分组日期表示为治疗第0天。
治疗
随机分组当天开始治疗。治疗开始日期表示为治疗第0天。通过口服施用载体对照溶液、10mg/kg BID的单独的式I的化合物、30mg/kg QD的单独的式I的化合物和10mg/kg QD的单独的厄达替尼对小鼠给药。另外两组接受式I的化合物和厄达替尼的联合治疗，其中一组接受10mg/kg BID的式I的化合物和10mg/kg QD的厄达替尼，而另一组接受30mg/kg QD的式I的化合物和10mg/kg QD的厄达替尼。每种化合物的给药体积为5mL/kg，并且BID方案的间隔为8小时。在联合组中，厄达替尼在式I的化合物QD给药或第一次BID剂量的式I的化合物后进行一次给药。按照研究方案中的定义，研究在治疗第28天终止。
结果
图3显示在FGFR2扩增的胃癌CDX模型SNU-16中，用单独的式I的化合物、单独的厄达替尼以及式I的化合物和厄达替尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。在对照组和治疗组中没有观察到显著的体重变化。
结论
如图3所示，在FGFR2扩增的胃癌CDX模型SNU-16中，相对于单独用式I的化合物治疗或单独用厄达替尼治疗，式I的化合物和厄达替尼的组合展示出优越的肿瘤生长抑制。
实施例4-在FGF19-FDFR4依赖性肝癌CDX模型Huh-7中，式I的化合物和厄达替尼的联合疗法
材料
将式I的化合物的测试制品每周在100mM乙酸缓冲液的载体中新鲜制备，并在环境条件下储存。将组合药剂厄达替尼每周在20％HP-β-CD的载体中新鲜制备，并在2-8℃下储存。
雌性Balb/c裸鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。小鼠在植入时为6-8周龄。根据IACUC方案，在开始任何实验之前，将小鼠置于动物饲养设施的无特定病原(SPF)环境中，并使其适应新环境至少3天。
异种移植模型的制备
Huh-7细胞系是具有FGFR过表达的人肝癌细胞。Huh-7细胞系购自日本研究生物资源细胞库(Japanese Collection of Research Bioresources Cell Bank)(JCRB细胞库，JCRB0403)。将Huh-7细胞在含有杜氏改良Eagle培养基(Dulbecco's Modified EagleMedium，DMEM)加上10％胎牛血清(FBS)和1％抗生素-抗真菌剂(AA)的培养基中，在37℃下，在空气中5％CO2的气氛中培养。将培养基每2至3天更换一次，并通过胰蛋白酶-EDTA以80-90％的汇合度对肿瘤细胞进行常规传代培养。收获处于指数生长期的细胞并进行计数用于接种。将Huh-7肿瘤细胞皮下植入小鼠中。使用注射器将含有5×106个肿瘤细胞的与50％Matrigel混合的200μL细胞悬浮液皮下植入小鼠的右侧胁腹。当肿瘤体积达到约500～1000mm3时，收获肿瘤碎片(15-30mm3)，然后用18g套管针皮下植入小鼠右侧胁腹。每天监测动物健康和肿瘤生长。当肿瘤可触及并可测量时，通过卡尺测量肿瘤体积，一周两次。当皮下植入后肿瘤体积达到146mm3的平均值时，将荷瘤小鼠随机分成不同的组，每组8只小鼠。随机分组日期表示为治疗第0天。
治疗
随机分组后第二天开始治疗。治疗开始日期表示为治疗第1天。通过对单一疗法治疗组口服施用载体对照溶液、10mg/kg BID的单独的式I的化合物、30mg/kg QD的单独的式I的化合物和10mg/kg QD的单独的厄达替尼对小鼠给药。另外两组接受式I的化合物和厄达替尼的联合治疗，其中一组用10mg/kg BID的式I的化合物和10mg/kg QD的厄达替尼给药，而另一组用30mg/kg QD的式I的化合物和10mg/kg QD的厄达替尼给药。每种化合物的给药体积为5mL/kg，并且BID方案的间隔为8小时。在联合组中，厄达替尼在式I的化合物QD给药后一小时或在第一次BID剂量的式I的化合物后一小时给药。研究在治疗第21天终止。
结果
图4示出在FGF19-FGFR4依赖性肝癌CDX模型Huh-7中，用单独的式I的化合物、单独的厄达替尼以及式I的化合物和厄达替尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。在对照组和治疗组中没有观察到显著的体重变化。
结论
如图4所示，在FGF19-FGFR4依赖性肝癌CDX模型Huh-7中，相对于单独用式I的化合物治疗或单独用厄达替尼治疗，式I的化合物和厄达替尼的组合展示出优越的肿瘤生长抑制。
实施例5-式I的化合物和1类突变B-Raf蛋白抑制剂的体外协同组合
细胞增殖测定
将细胞(每孔2000个细胞)铺板在100μl细胞培养基中的96孔板上，并用单独的式I的化合物或式I的化合物和固定浓度的康奈非尼进行处理。在第5天，加入50μl的CellTiter-Glo(CTG)试剂(Promega)，并且将板在温和摇动条件下孵育10分钟。孵育10分钟后，根据供应商的说明书(Promega)确定发光信号，并且使用Prism GraphPad绘制图表。
联合细胞增殖测定
将细胞(每孔2000个细胞)铺板在100μl细胞培养基中的96孔板上。通过使用TecanD300e数字分配器组合矩阵方案，用式I的化合物和浓度从0至10μM变化的康奈非尼处理细胞。在第5天，加入50μl的CellTiter-Glo(CTG)试剂(Promega)，并且将板在温和摇动条件下孵育10分钟。孵育10分钟后，根据供应商的说明书(Promega)确定发光信号，并且使用Combenefit软件通过标准HSA模型产生组合数据。组合协同作用在结果表中用正数表示。负数代表组合的拮抗作用。
pERK和ERK的蛋白质印迹
用化合物处理细胞4小时。处理后，用具有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的ThermoFisher RIPA裂解缓冲液在冰上将细胞裂解10分钟。用微型离心机将细胞在4°下离心10分钟。将上清液转移到预冷的微型离心管中，并且使用BCA法测量裂解物的蛋白质浓度。使用等量蛋白质的细胞裂解物上清液进行针对pERK和总ERK的免疫印迹。
结果
图5示出表明式I的化合物和康奈非尼的组合表现出跨多个BRAF V600E突变细胞的协同作用的数据。
图6示出使用式I的化合物和BRAF抑制剂康奈非尼的组合在RKO BRAFV600E CRC细胞系中的协同作用数据。该数据表明在式I的化合物和康奈非尼的组合中存在显著程度的协同作用。
图7示出使用式I的化合物和BRAF抑制剂康奈非尼的组合在WiDr BRAFV600E CRC细胞系中的协同作用数据。该数据表明在式I的化合物和康奈非尼的组合中存在显著程度的协同作用。
图8示出使用式I的化合物和BRAF抑制剂康奈非尼的组合在HT29 BRAFV600E CRC细胞系中的协同作用数据。该数据表明在式I的化合物和康奈非尼的组合中存在显著程度的协同作用。
图9A示出表明对RKO结直肠癌细胞系中ERK1/2磷酸化的稳健抑制的凝胶。图9B示出表明对WiDr结直肠癌细胞系中ERK1/2磷酸化的稳健抑制的凝胶。图9C示出单独的式I的化合物或式I的化合物与康奈非尼组合在RKO结直肠癌细胞系中的抗增殖效果图。图9D示出式I的化合物或式I的化合物与康奈非尼组合在WiDr结直肠癌细胞系中的抗增殖效果图。图9A-9B表明使用式I的化合物和康奈非尼的组合对pERK1/2的稳健抑制。图9C-9D表明式I的化合物和康奈非尼的组合增加了式I的化合物的抑制活性。
图10A-10D示出SHP2抑制剂与康奈非尼的组合在RKO结直肠癌细胞系中的功效的比较研究。图10A示出比较利用下列组合在RKO结直肠癌细胞系中对ERK1/2磷酸化的抑制的凝胶：式I的化合物+康奈非尼；TNO155+康奈非尼；和RMC-4550+康奈非尼。图10B示出在1.对照；2.(式I的化合物)；3.康奈非尼；和4.(式I的化合物)+康奈非尼情况下，占对照百分比的pERK的条形图。图10C示出在1.对照；2.TNO155；3.康奈非尼；和4.TNO155+康奈非尼情况下，占对照百分比的pERK的条形图。图10D示出在1.对照；2.RMC-4550；3.康奈非尼；和4.RMC-4550+康奈非尼情况下，占对照百分比的pERK的条形图。如图10A-10D中所示，SHP2抑制剂式I的化合物和康奈非尼的组合对ERK1/2磷酸化的抑制是最有效的。
实施例6-在BRAFV600E突变CRC PDX模型CR0029中，式I的化合物和康奈非尼的联合疗法
材料
在小鼠中的整个28天施用中，制备载体/对照制品，即在去离子水中的100mM乙酸，将pH调节至4.8-5.0，并在环境条件下储存。
将式I的化合物的测试制品每周在100mM乙酸缓冲液的载体中新鲜制备，并在环境条件下储存。将组合药剂康奈非尼每周在0.5％CMC和0.5％Tween 80的载体中新鲜制备，并在2-8℃下储存。
雌性Balb/c裸鼠购自斯贝福(北京)实验动物技术有限公司(SPF(Beijing)Laboratory Animal Technology Co,Ltd.)。小鼠在植入时为7-9周龄。根据IACUC方案，在开始任何实验之前，将小鼠置于动物饲养设施的无特定病原(SPF)环境中，并使其适应新环境至少3天。
本研究中与动物处理、护理和治疗相关的所有程序均根据Crown Bioscience(中国太仓)机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准的指南进行。在研究过程中，动物的护理和使用按照实验动物护理评估和认证协会(AAALAC)的规定进行。此外，在CrownBioscience(中国太仓)进行的这项研究的所有部分都遵守研究负责人批准的研究方案和适用的标准操作程序(SOP)
异种移植模型的制备
CR0029 PDX模型是在CrownBio针对临床前疗效研究而建立的。该PDX模型衍生自中国女性CRC患者。通过RNA测序和外显子组测序二者均证实了PDX模型CR0029中的BRAFV600E突变。用适当的外科擦洗液和碘伏在右侧胁腹上清洁小鼠皮肤。使用18g套管针将从PDX模型收获的肿瘤碎片(直径2-3mm)皮下植入雌性Balb/c裸鼠的右侧胁腹。
每天监测动物健康和肿瘤生长。当肿瘤可触及并可测量时，通过卡尺测量肿瘤体积，一周两次。当肿瘤体积达到接近141mm3的平均值(范围为110-176mm3)时，将荷瘤小鼠随机分成7个不同的组，每组8只小鼠。随机分组日期表示为治疗第0天。
治疗
随机分组当天开始治疗。治疗开始日期表示为治疗第0天。通过口服施用载体对照溶液、10mg/kg BID的单独的式I的化合物和90mg/kg QD的单独的康奈非尼对小鼠给药。另一组接受联合治疗，其中式I的化合物的给药量为10mg/kg BID，并且康奈非尼的给药量为90mg/kg QD。每种化合物的给药体积为5mL/kg，并且BID方案的间隔为8小时。在联合组中，康奈非尼在进行式I的化合物给药后一小时给药。按照研究方案中的定义，研究在治疗第28天终止。
结果
图11示出在BRAFV600E突变CRC PDX模型CR0029中，用单独的式I的化合物、单独的康奈非尼以及式I的化合物和康奈非尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。在对照组和治疗组中没有观察到显著的体重变化。
结论
如图11所示，在BRAFV600E突变CRC PDX模型CR0029中，相对于单独用式I的化合物治疗或单独用康奈非尼治疗，式I的化合物和康奈非尼的组合展示出优越的肿瘤生长抑制。
实施例7-在BRAFV600E突变CRC PDX模型CR004中，式I的化合物和康奈非尼的联合疗法
材料
在小鼠中的整个28天施用中，制备载体/对照制品，即在去离子水中的100mM乙酸，将pH调节至4.8-5.0，并在环境条件下储存。
将式I的化合物的测试制品每周在100mM乙酸缓冲液的载体中新鲜制备，并在环境条件下储存。将组合药剂康奈非尼每周在0.5％CMC和0.5％Tween 80的载体中新鲜制备，并在2-8℃下储存。
雌性Balb/c裸鼠购自斯贝福(北京)实验动物技术有限公司。小鼠在植入时为9-11周龄。根据IACUC方案，在开始任何实验之前，将小鼠置于动物饲养设施的无特定病原(SPF)环境中，并使其适应新环境至少3天。
本研究中与动物处理、护理和治疗相关的所有程序均根据Crown Bioscience(中国北京)机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准的指南进行。在研究过程中，动物的护理和使用按照实验动物护理评估和认证协会(AAALAC)的规定进行。此外，在CrownBioscience(中国北京)进行的这项研究的所有部分都遵守研究负责人批准的研究方案和适用的标准操作程序(SOP)。
PDX的制备
CR0004 PDX模型是在CrownBio针对临床前疗效研究而建立的。该PDX模型衍生自73岁中国男性CRC患者。通过RNA测序和外显子组测序二者均证实了PDX模型CR0004中的BRAFV600E突变。用适当的外科擦洗液和碘伏在右侧胁腹上清洁小鼠皮肤。使用18g套管针将从PDX模型收获的肿瘤碎片(直径2-3mm)皮下植入雌性Balb/c裸鼠的右侧胁腹。当平均肿瘤大小达到141mm3(范围为121-180mm3)时，将荷瘤小鼠随机分成6个研究组，每组8只小鼠。
治疗
随机分组当天开始治疗。治疗开始日期表示为治疗第0天。通过口服施用载体对照溶液、10mg/kg BID的单独的式I的化合物和90mg/kg QD的单独的康奈非尼对小鼠给药。另一组接受联合治疗，其中式I的化合物的给药量为10mg/kg BID，并且康奈非尼的给药量为90mg/kg QD。每种化合物的给药体积为5mL/kg，并且BID方案的间隔为8小时。在联合组中，康奈非尼在进行式I的化合物给药后一小时给药。按照研究方案中的定义，研究在治疗第28天终止。
结果
图12示出在BRAFV600E突变CRC PDX模型CR004中，用单独的式I的化合物、单独的康奈非尼以及式I的化合物和康奈非尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。在对照组和治疗组中没有观察到显著的体重变化。
结论
如图12所示，在BRAFV600E突变CRC PDX模型CR004中，相对于单独用式I的化合物治疗或单独用康奈非尼治疗，式I的化合物和康奈非尼的组合展示出优越的肿瘤生长抑制。
实施例8-在BRAFV600E突变CRC CDX模型WiDr中，式I的化合物和康奈非尼的联合疗法
材料
在小鼠中的整个28天施用中，制备载体/对照制品，即在去离子水中的100mM乙酸，将pH调节至4.8-5.0，并在环境条件下储存。
将式I的化合物的测试制品每周在100mM乙酸缓冲液的载体中新鲜制备，并在环境条件下储存。将组合药剂康奈非尼每周在0.5％CMC和0.5％Tween 80的载体中新鲜制备，并在2-8℃下储存。
雌性Balb/c裸鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。小鼠在植入时为6-8周龄。根据IACUC方案，在开始任何实验之前，将小鼠置于动物饲养设施的无特定病原(SPF)环境中，并使其适应新环境至少3天。
本研究中与动物处理、护理和治疗相关的所有程序均根据无锡AppTec机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准的指南进行。在研究过程中，动物的护理和使用按照实验动物护理评估和认证协会(AAALAC)的规定进行。此外，在无锡AppTec进行的这项研究的所有部分都遵守研究负责人批准的研究方案和适用的标准操作程序(SOP)。
异种移植模型的制备
WiDr是一种拥有BRAFV600E突变的人类CRC肿瘤细胞系。WiDr细胞系购自欧洲认证细胞培养物保藏中心(European Collection of Authenticated Cell Cultures)(ECACC，85111501)。将WiDr细胞在含有EMEM(EBSS)加上10％胎牛血清(FBS)、2mM谷氨酰胺并补充有1％非必需氨基酸(NEAA)的培养基中，在37℃下，在空气中5％CO2的气氛中培养。将培养基每2至3天更换一次，并通过胰蛋白酶-EDTA以80-90％的汇合度对肿瘤细胞进行常规传代培养。收获处于指数生长期的细胞并进行计数用于接种。
将WiDr肿瘤细胞皮下植入小鼠中。使用注射器将含有5×106个肿瘤细胞的200μL细胞悬浮液皮下植入小鼠的右侧胁腹。每天监测动物健康和肿瘤生长。当肿瘤可触及并可测量时，通过卡尺测量肿瘤体积，一周两次。当肿瘤体积达到189mm3的平均值(范围为139-240mm3)时，将荷瘤小鼠随机分成不同的组，每组8只小鼠。随机分组日期表示为治疗第0天。
治疗
随机分组当天开始治疗。治疗开始日期表示为治疗第0天。通过口服施用载体对照溶液、10mg/kg BID的单独的式I的化合物、30mg/kg QD的单独的式I的化合物和90mg/kg QD的单独的康奈非尼对小鼠给药。另外两组接受式I的化合物和康奈非尼的联合治疗，其中第一组用10mg/kg BID的式I的化合物和90mg/kg QD的康奈非尼给药，而第二组用30mg/kg QD的式I的化合物和90mg/kg QD的康奈非尼给药。式I的化合物和康奈非尼的给药体积为5mL/kg，并且BID方案的间隔为8小时。在联合组中，康奈非尼在进行式1的化合物QD给药后一小时给药。按照研究方案中的定义，研究在治疗第28天终止。
结果
图13示出在BRAFV600E突变CRC CDX模型WiDr中，用单独的式I的化合物、单独的康奈非尼以及式I的化合物和康奈非尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。在对照组和治疗组中没有观察到显著的体重变化。
结论
如图13所示，在BRAFV600E突变CRC CDX模型WiDr中，相对于单独用式I的化合物治疗或单独用康奈非尼治疗，式I的化合物和康奈非尼的组合展示出优越的肿瘤生长抑制。
实施例9-在BRAFV600E突变CRC CDX模型HT-29中，式I的化合物和康奈非尼的联合疗法
材料
在小鼠中的整个28天施用中，制备载体/对照制品，即在去离子水中的100mM乙酸，将pH调节至4.8-5.0，并在环境条件下储存。
将式1的测试制品每周在100mM乙酸缓冲液的载体中新鲜制备，并在环境条件下储存。将组合药剂康奈非尼每周在0.5％CMC和0.5％Tween 80的载体中新鲜制备，并在2-8℃下储存。
雌性Balb/c裸鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。在开始任何实验之前，将小鼠置于动物饲养设施的无特定病原(SPF)环境中，并使其适应新环境至少3天。小鼠在植入时为6-8周龄。
本研究中与动物处理、护理和治疗相关的所有程序均根据GenenDesign机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准的方案和指南进行。动物设施和程序是根据实验动物护理和使用指南(NRC，2011)的标准操作，并得到了实验动物护理评估和认证协会(AAALAC)的认可。具体来说，在GenenDesign进行的这项研究的所有部分都符合IACUC审查和批准的研究方案以及适用的标准操作程序(SOP)。
异种移植模型的制备
HT-29是一种拥有BRAFV600E突变的人类CRC肿瘤细胞系。HT-29细胞系购自美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)(CRL-2577TM)。将HT-29细胞在加上10％胎牛血清(FBS)的McCoy的5a培养基中，在37℃下，在空气中5％CO2的气氛中培养。将培养基每2至3天更换一次，并通过胰蛋白酶-EDTA以80-90％的汇合度对肿瘤细胞进行常规传代培养。收获处于指数生长期的细胞并进行计数用于接种。
将HT-29肿瘤细胞皮下植入小鼠中。使用注射器将含有2×106个肿瘤细胞的与50％Matrigel混合的200μL细胞悬浮液皮下植入小鼠的右侧胁腹。每天监测动物健康和肿瘤生长。当肿瘤可触及并可测量时，通过卡尺测量肿瘤体积，一周两次。当肿瘤体积达到接近200mm3的平均值(范围为146-259mm3)时，将荷瘤小鼠随机分成不同的组，每组8只小鼠。随机分组日期表示为治疗第0天。
治疗
随机分组当天开始治疗。治疗开始日期表示为治疗第0天。通过口服施用载体对照溶液、10mg/kg BID的单独的式I的化合物、30mg/kg QD的单独的式I的化合物和90mg/kg QD的单独的康奈非尼对小鼠给药。另外两组接受式I的化合物和康奈非尼的联合治疗，其中第一组用10mg/kg BID的式I的化合物和90mg/kg QD的康奈非尼给药，而第二组用30mg/kg QD的式I的化合物和90mg/kg QD的康奈非尼给药。每种化合物的给药体积为5mL/kg，并且BID方案的间隔为8小时。在联合组中，康奈非尼在进行式I的化合物给药后一小时给药。按照研究方案中的定义，研究在治疗第28天终止。
结果
图14示出在BRAFV600E突变CRC CDX模型HT-29中，用单独的式I的化合物、单独的康奈非尼以及式I的化合物和康奈非尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。在对照组和治疗组中没有观察到显著的体重变化。
结论
如图14所示，在BRAFV600E突变CRC CDX模型HT-29中，相对于单独用式I的化合物治疗或单独用康奈非尼治疗，式I的化合物和康奈非尼的组合展示出优越的肿瘤生长抑制。
实施例10-在BRAFV600E突变甲状腺癌CDX模型BHT-101中，式I的化合物和康奈非尼的联合疗法
材料
在小鼠中的整个20天施用中，制备载体/对照制品，即在去离子水中的100mM乙酸，将pH调节至4.8-5.0，并在环境条件下储存。
将式I的化合物的测试制品每周在100mM乙酸缓冲液的载体中新鲜制备，并在环境条件下储存。将组合药剂康奈非尼每周在0.5％CMC和0.5％Tween 80的载体中新鲜制备，并在2-8℃下储存。
雌性Balb/c裸鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。在开始任何实验之前，将小鼠置于动物饲养设施的无特定病原(SPF)环境中，并使其适应新环境至少3天。小鼠在植入时为6-8周龄。
本研究中与动物处理、护理和治疗相关的所有程序均根据GenenDesign机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准的方案和指南进行。动物设施和程序是根据实验动物护理和使用指南(NRC，2011)的标准操作，并得到了实验动物护理评估和认证协会(AAALAC)的认可。具体来说，在GenenDesign进行的这项研究的所有部分都符合IACUC审查和批准的研究方案以及适用的标准操作程序(SOP)。
异种移植模型的制备
BHT-101是一种拥有BRAFV600E突变的人类甲状腺癌细胞系。BHT-101细胞系购自中国科学院细胞库(Cell Bank of Chinese Academy of Sciences)(最初购自DSMZ-德国微生物和细胞培养物保藏有限公司(DSMZ-German Collection of Microorganisms andCell Cultures GmbH))。将BHT-101细胞在含有20％胎牛血清(FBS)并补充有1x Glutamax溶液和1mM丙酮酸钠的DMEM培养基中，在37℃下，在空气中5％CO2的气氛中培养。将培养基每2至3天更换一次，并通过胰蛋白酶-EDTA以80-90％的汇合度对肿瘤细胞进行常规传代培养。收获处于指数生长期的细胞并进行计数用于接种。
将BHT-101肿瘤细胞皮下植入小鼠中。使用注射器将含有2×106个肿瘤细胞的与50％Matrigel混合的200μL细胞悬浮液皮下植入小鼠的右侧胁腹。每天监测动物健康和肿瘤生长。当肿瘤可触及并可测量时，通过卡尺测量肿瘤体积，一周两次。当肿瘤体积达到190mm3的平均值(范围为146-258mm3)时，将荷瘤小鼠随机分成不同的组，每组8只小鼠。随机分组日期表示为治疗第0天。
治疗
随机分组当天开始治疗。治疗开始日期表示为治疗第0天。通过口服施用载体对照溶液、10mg/kg BID的单独的式I的化合物、30mg/kg QD的单独的式I的化合物和90mg/kg QD的单独的康奈非尼对小鼠给药。另外两组接受式I的化合物和康奈非尼的联合治疗，其中第一组用10mg/kg BID的式I的化合物和90mg/kg QD的康奈非尼给药，而第二组用30mg/kg QD的式I的化合物和90mg/kg QD的康奈非尼给药。每种化合物的给药体积为5mL/kg，并且BID方案的间隔为8小时。在联合组中，康奈非尼在进行式I的化合物给药后一小时给药。由于肿瘤快速生长，研究在治疗第20天终止，这早于研究方案中定义的最初终止日。在治疗第20天，载体对照组中的一半肿瘤超过了根据IACUC方案得到的肿瘤体积阈值(2,000mm3)。
结果
图15示出在BRAFV600E突变甲状腺癌CDX模型BHT-101中，用单独的式I的化合物、单独的康奈非尼以及式I的化合物和康奈非尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。在对照组和治疗组中没有观察到显著的体重变化。
结论
如图15所示，在BRAFV600E突变甲状腺癌CDX模型BHT-101中，相对于单独用式I的化合物治疗或单独用康奈非尼治疗，式I的化合物和康奈非尼的组合展示出优越的肿瘤生长抑制。
实施例11-在BRAFV600E突变CRC CDX模型RKO中，式I的化合物和康奈非尼的联合疗法
材料
在小鼠中的整个16天施用中，制备载体/对照制品，即在去离子水中的100mM乙酸，将pH调节至4.8-5.0，并在环境条件下储存。
将式1的测试制品每周在100mM乙酸缓冲液的载体中新鲜制备，并在环境条件下储存。将组合药剂康奈非尼每周在0.5％CMC和0.5％Tween 80的载体中新鲜制备，并在2-8℃下储存。
雌性Balb/c裸鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。在开始任何实验之前，将小鼠置于动物饲养设施的无特定病原(SPF)环境中，并使其适应新环境至少3天。小鼠在植入时为6-8周龄。
本研究中与动物处理、护理和治疗相关的所有程序均根据GenenDesign机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准的方案和指南进行。动物设施和程序是根据实验动物护理和使用指南(NRC，2011)的标准操作，并得到了实验动物护理评估和认证协会(AAALAC)的认可。具体来说，在GenenDesign进行的这项研究的所有部分都符合IACUC审查和批准的研究方案以及适用的标准操作程序(SOP)。
异种移植模型的制备
RKO是一种拥有BRAFV600E突变的人类CRC肿瘤细胞系。RKO细胞系购自美国典型培养物保藏中心(CRL-2577TM)。将RKO细胞在含有MEM加上10％胎牛血清(FBS)并补充有非必需氨基酸的培养基中，在37℃下，在空气中5％CO2的气氛中培养。将培养基每2至3天更换一次，并通过胰蛋白酶-EDTA以80-90％的汇合度对肿瘤细胞进行常规传代培养。收获处于指数生长期的细胞并进行计数用于接种。
将RKO肿瘤细胞皮下植入小鼠中。使用注射器将含有2×106个肿瘤细胞的与50％Matrigel混合的200μL细胞悬浮液皮下植入小鼠的右侧胁腹。每天监测动物健康和肿瘤生长。当肿瘤可触及并可测量时，通过卡尺测量肿瘤体积，一周两次。当肿瘤体积达到217mm3的平均值(范围为163-262mm3)时，将荷瘤小鼠随机分成不同的组，每组8只小鼠。随机分组日期表示为治疗第0天。
治疗
随机分组当天开始治疗。治疗开始日期表示为治疗第0天。通过口服施用载体对照溶液、10mg/kg BID的单独的式I的化合物、30mg/kg QD的单独的式I的化合物和90mg/kg QD的单独的康奈非尼对小鼠给药。另外两组接受式I的化合物的联合治疗，其中第一组用10mg/kg BID的式I的化合物和90mg/kg QD的康奈非尼给药，而第二组用30mg/kg QD的式I的化合物和90mg/kg QD的康奈非尼给药。每种化合物的给药体积为5mL/kg，并且BID方案的间隔为8小时。在联合组中，康奈非尼在进行式I的化合物QD剂量的给药后一小时给药。由于肿瘤快速生长，研究在治疗第16天终止，这早于研究方案中定义的最初终止日。在治疗第16天，载体对照组中的大部分肿瘤超过了根据IACUC方案得到的肿瘤体积阈值(2,000mm3)。
结果
图16示出在BRAFV600E突变CRC CDX模型RKO中，用单独的式I的化合物、单独的康奈非尼以及式I的化合物和康奈非尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。在对照组和治疗组中没有观察到显著的体重变化。
结论
如图16所示，在BRAFV600E突变CRC CDX模型RKO中，相对于单独用式I的化合物治疗或单独用康奈非尼治疗，式I的化合物和康奈非尼的组合展示出优越的肿瘤生长抑制。
实施例12-式I的化合物和MEK抑制剂的协同组合
本实施例证明式I的化合物与MEK抑制剂的协同组合。
细胞增殖测定
将细胞(每孔2000个细胞)铺板在100μl细胞培养基中的96孔板上，并用单独的式I的化合物或式I的化合物和固定浓度的曲美替尼或贝美替尼进行处理。在第5天，加入50μl的CellTiter-Glo(CTG)试剂(Promega)，并且将板在温和摇动条件下孵育10分钟。孵育10分钟后，根据供应商的说明书(Promega)确定发光信号，并且使用Prism GraphPad绘制图表。
联合细胞增殖测定
将细胞(每孔2000个细胞)铺板在100μl细胞培养基中的96孔板上。通过使用TecanD300e数字分配器组合矩阵方案，用式I的化合物和浓度从0至10μM变化的曲美替尼或贝美替尼处理细胞。在第5天，加入50μl的CellTiter-Glo(CTG)试剂(Promega)，并且将板在温和摇动条件下孵育10分钟。孵育10分钟后，根据供应商的说明书(Promega)确定发光信号，并且使用Combenefit软件通过标准HSA模型产生组合数据。组合协同作用在结果表中用正数表示。负数代表组合的拮抗作用。
pERK和ERK的蛋白质印迹
用化合物处理NCI-H508细胞4小时。处理后，用具有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的Thermo Fisher RIPA裂解缓冲液在冰上将细胞裂解10分钟。用微型离心机将细胞在4°下离心10分钟。将上清液转移到预冷的微型离心管中，并且使用BCA法测量裂解物的蛋白质浓度。使用等量蛋白质的细胞裂解物上清液进行针对pERK和总ERK的免疫印迹。
用化合物处理MeWo细胞4小时。处理后，用具有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的ThermoFisher RIPA裂解缓冲液在冰上将细胞裂解10分钟。用微型离心机将细胞在4°下离心10分钟。将上清液转移到预冷的微型离心管中，并且使用BCA法测量裂解物的蛋白质浓度。使用等量蛋白质的细胞裂解物上清液进行针对pERK和总ERK的免疫印迹。
结果
图17A示出使用式I的化合物和曲美替尼的组合在NCI-H508癌细胞系中的协同作用数据。图17B示出使用式I的化合物和贝美替尼的组合在NCI-H508癌细胞系中的协同作用数据。图17C为使用式I的化合物和曲美替尼的组合在NCI-H1666癌细胞系中的图示协同作用数据。图17D示出使用式I的化合物和贝美替尼的组合在NCI-H1666癌细胞系中的协同作用数据。
图18A示出使用式I的化合物和曲美替尼的组合在MeWo癌细胞系中的协同作用数据。图18B示出使用式I的化合物和贝美替尼的组合在MeWo癌细胞系中的协同作用数据。图18C示出使用式I的化合物和曲美替尼的组合在NCI-H1838癌细胞系中的协同作用数据。图18D示出使用式I的化合物和贝美替尼的组合在NCI-H1838癌细胞系中的协同作用数据。
图19A示出用单独的和与贝美替尼的组合的式I化合物处理的NCI-H508细胞中活性百分比相对于抑制剂浓度(log M)的图。用单独的和与贝美替尼的组合的式I化合物处理的NCI-H508细胞的表列IC50数据。图19B示出用单独的和与贝美替尼的组合的式I化合物处理的MeWo细胞中活性百分比相对于抑制剂浓度(log M)的图。用单独的和与贝美替尼的组合的式I化合物处理的MeWo细胞的表列IC50数据。
图20A示出表明对NCI-H508癌细胞系中ERK1/2磷酸化的协同抑制的蛋白质印迹凝胶。图20B示出图20A的蛋白质印迹的条形图量化。图20C示出表明对MeWo(NF1 LoF)癌细胞系中ERK1/2磷酸化的协同抑制的蛋白质印迹凝胶。图20D示出图20C的蛋白质印迹的条形图量化。
图21A示出使用式I的化合物和曲美替尼的组合在NCI-H2009(KRAS G12A)癌细胞系中的协同作用数据。图21B示出使用式I的化合物和曲美替尼的组合在LS513(KRAS G12D)癌细胞系中的协同作用数据。图21C示出使用式I的化合物和曲美替尼的组合在A549(KRASG12S)癌细胞系中的协同作用数据。图21D示出使用式I的化合物和曲美替尼的组合在NCI-H727(KRAS G12V)癌细胞系中的协同作用数据。
图22A示出使用式I的化合物和贝美替尼的组合在NCI-H2009(KRAS G12A)癌细胞系中的协同作用数据。图22B示出使用式I的化合物和贝美替尼的组合在LS513(KRAS G12D)癌细胞系中的协同作用数据。图22C示出使用式I的化合物和贝美替尼的组合在A549(KRASG12S)癌细胞系中的协同作用数据。图22D示出使用式I的化合物和贝美替尼的组合在NCI-H727(KRAS G12V)癌细胞系中的协同作用数据。
图23A示出用单独的和与曲美替尼的组合的式I化合物处理的LS513(KRAS G12D)细胞中活性百分比相对于抑制剂浓度(log M)的图。图23B示出用单独的和与曲美替尼的组合的式I化合物处理的NCI-H2009(KRAS G12D)细胞中活性百分比相对于抑制剂浓度(logM)的图。用单独的和与曲美替尼的组合的式I化合物处理的NCI-H508细胞的表列数据。图23C示出CTG活性百分比的条形图，其表明单独的式I或曲美替尼对细胞生存力的影响最小。总之，该数据表明，式I的化合物和MEK抑制剂的组合对BRAF III类、NF1 LoF和KRAS G12X突变癌症中的癌细胞生存力提供协同抑制。
实施例13-在NF1 LoF突变黑色素瘤CDX模型MeWo中，式I的化合物和曲美替尼的联合疗法
材料
在小鼠中的整个28天施用中，制备载体/对照制品，即在去离子水中的100mM乙酸，将pH调节至4.8-5.0，并在环境条件下储存。
将式I的化合物的测试制品每周在100mM乙酸缓冲液的载体中新鲜制备，并在环境条件下储存。将组合药剂曲美替尼每周在0.5％HPMC和0.2％Tween 80的载体中新鲜制备，并在环境条件下储存。
雌性Balb/c裸鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。小鼠在植入时为6-8周龄。根据IACUC方案，在开始任何实验之前，将小鼠置于动物饲养设施的无特定病原(SPF)环境中，并使其适应新环境至少3天。
本研究中与动物处理、护理和治疗相关的所有程序均根据无锡AppTec机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准的指南进行。在研究过程中，动物的护理和使用按照实验动物护理评估和认证协会(AAALAC)的规定进行。此外，在无锡AppTec进行的这项研究的所有部分都遵守研究负责人批准的研究方案和适用的标准操作程序(SOP)。
异种移植模型的制备
MeWo是一种拥有NF1 Q1336*突变的人类黑色素瘤细胞系。MeWo细胞系购自美国典型培养物保藏中心(HTB-65TM)。将MeWo细胞在含有最小必需培养基(MEM)加上10％胎牛血清(FBS)、1％非必需氨基酸(NEAA)和1％抗生素-抗真菌剂(AA)的培养基中，在37℃下，在空气中5％CO2的气氛中培养。将培养基每2至3天更换一次，并通过胰蛋白酶-EDTA以80-90％的汇合度对肿瘤细胞进行常规传代培养。收获处于指数生长期的细胞并进行计数用于接种。
将MeWo肿瘤细胞皮下植入小鼠中。使用注射器将含有5×106个肿瘤细胞的与50％Matrigel混合的200μL细胞悬浮液皮下植入小鼠的右侧胁腹。每天监测动物健康和肿瘤生长。当肿瘤可触及并可测量时，通过卡尺测量肿瘤体积，一周两次。当肿瘤体积达到191mm3的平均值(范围为150-242mm3)时，将荷瘤小鼠随机分成不同的组，每组8只小鼠。随机分组日期表示为治疗第0天。
治疗
随机分组后第二天开始治疗。治疗开始日期表示为治疗第1天。通过口服施用载体对照、10mg/kg/剂量BID的单独的式I的化合物、30mg/kg QD的单独的式I的化合物和0.4mg/kg QD的单独的曲美替尼对小鼠给药。两组接受式I的化合物和曲美替尼的联合治疗，其中一组用10mg/kg/剂量BID的式I的化合物给药，而另一组用30mg/kg QD的式I的化合物给药。两个联合组均用0.4mg/kg QD的曲美替尼给药。给药体积为5mL/kg，并且BID方案的间隔为8小时。在联合组中，曲美替尼在进行式I的化合物BID或QD方案的第一剂量后一小时给药。
结果
图24示出在NF1 LoF突变黑色素瘤CDX模型MeWo中，用单独的式I的化合物、单独的曲美替尼以及式I的化合物和曲美替尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。在对照组和治疗组中没有观察到显著的体重变化。
结论
如图24所示，在NF1 LoF突变黑色素瘤CDX模型MeWo中，相对于单独用式I的化合物治疗或单独用曲美替尼治疗，式I的化合物和曲美替尼的组合展示出优越的肿瘤生长抑制。
实施例14-在NF1 LoF突变黑色素瘤CDX模型MeWo中，式I的化合物和贝美替尼的联合疗法
材料
在小鼠中的整个28天施用中，制备载体/对照制品，即在去离子水中的100mM乙酸，将pH调节至4.8-5.0，并在环境条件下储存。
将式I的化合物的测试制品每周在100mM乙酸缓冲液的载体中新鲜制备，并在环境条件下储存。将组合药剂贝美替尼每周在1.0％MC和0.5％Tween 80的载体中新鲜制备，并在2-8℃下储存。
雌性Balb/c裸鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。小鼠在植入时为6-8周龄。根据IACUC方案，在开始任何实验之前，将小鼠置于动物饲养设施的无特定病原(SPF)环境中，并使其适应新环境至少3天。
本研究中与动物处理、护理和治疗相关的所有程序均根据GenenDesign机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准的指南进行。在研究过程中，动物的护理和使用按照实验动物护理评估和认证协会(AAALAC)的规定进行。此外，在GenenDesign进行的这项研究的所有部分都遵守研究负责人批准的研究方案和适用的标准操作程序(SOP)。
异种移植模型的制备
MeWo是一种拥有NF1 Q1336*突变的人类黑色素瘤细胞系。MeWo细胞系购自美国典型培养物保藏中心(HTB-65TM)。将MeWo细胞在含有最小必需培养基(MEM)加上10％胎牛血清(FBS)、1％非必需氨基酸(NEAA)和1％抗生素-抗真菌剂(AA)的培养基中，在37℃下，在空气中5％CO2的气氛中培养。将培养基每2至3天更换一次，并通过胰蛋白酶-EDTA以80-90％的汇合度对肿瘤细胞进行常规传代培养。收获处于指数生长期的细胞并进行计数用于接种。
将MeWo肿瘤细胞皮下植入小鼠中。简单来说，使用注射器将含有5×106个肿瘤细胞的与50％Matrigel混合的200μL细胞悬浮液皮下植入小鼠的右侧胁腹。每天监测动物健康和肿瘤生长。当肿瘤可触及并可测量时，通过卡尺测量肿瘤体积，一周两次。当肿瘤体积达到195mm3的平均值(范围为141-267mm3)时，将荷瘤小鼠随机分成不同的组，每组8只小鼠。随机分组日期表示为治疗第0天。
治疗
随机分组后第二天开始治疗。治疗开始日期表示为治疗第1天。通过口服施用载体对照溶液、15mg/kg QD的单独的式I的化合物、30mg/kg QD的单独的式I的化合物、6mg/kgBID的单独的贝美替尼和9mg/kg/剂量BID的单独的贝美替尼对小鼠给药。另外两组接受式I的化合物和贝美替尼的联合治疗，其中一组用15mg/kg QD的式I的化合物和6mg/kg BID的贝美替尼给药，而另一组用15mg/kg QD的式I的化合物和9mg/kg/剂量BID的贝美替尼给药。给药体积为5mL/kg，并且BID方案的间隔为8小时。在联合组中，贝美替尼在进行式I的化合物QD剂量后一小时给药。按照研究方案中的定义，研究在治疗第28天终止。
结果
图25示出在NF1 LoF突变黑色素瘤CDX模型MeWo中，用单独的式I的化合物、单独的贝美替尼以及式I的化合物和贝美替尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。在对照组和治疗组中没有观察到显著的体重变化。
结论
如图25所示，在NF1 LoF突变黑色素瘤CDX模型MeWo中，相对于单独用式I的化合物治疗或单独用贝美替尼治疗，式I的化合物和贝美替尼的组合展示出优越的肿瘤生长抑制。
实施例15-在BRAF III类突变CRC CDX模型NCI-H508中，式I的化合物和贝美替尼的联合疗法
材料
在小鼠中的整个28天施用中，制备载体/对照制品，即在去离子水中的100mM乙酸，将pH调节至4.8-5.0，并在环境条件下储存。
将式I的化合物的测试制品每周在100mM乙酸缓冲液的载体中新鲜制备，并在环境条件下储存。将组合药剂曲美替尼每周在0.5％HPMC和0.2％Tween 80的载体中新鲜制备，并在环境条件下储存。
雌性Balb/c裸鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。小鼠在植入时为6-8周龄。根据IACUC方案，在开始任何实验之前，将小鼠置于动物饲养设施的无特定病原(SPF)环境中，并使其适应新环境至少3天。
本研究中与动物处理、护理和治疗相关的所有程序均根据无锡AppTec机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准的指南进行。在研究过程中，动物的护理和使用按照实验动物护理评估和认证协会(AAALAC)的规定进行。此外，在无锡AppTec进行的这项研究的所有部分都遵守研究负责人批准的研究方案和适用的标准操作程序(SOP)。
异种移植模型的制备
NCI-H508是一种拥有BRAF III类突变(BRAF G596R)的人类CRC细胞系。NCI-H508细胞系购自美国典型培养物保藏中心(CCL-253TM)。将NCI-H508细胞在含有RPMI-1640加上10％胎牛血清(FBS)和1％抗生素-抗真菌剂(AA)的培养基中，在37℃下，在空气中5％CO2的气氛中培养。将培养基每2至3天更换一次，并通过胰蛋白酶-EDTA以80-90％的汇合度对肿瘤细胞进行常规传代培养。收获处于指数生长期的细胞并进行计数用于接种。
将NCI-H508肿瘤细胞皮下植入小鼠中。简单来说，使用注射器将含有10×106个肿瘤细胞的与50％Matrigel混合的200μL细胞悬浮液皮下植入小鼠的右侧胁腹。每天监测动物健康和肿瘤生长。当肿瘤可触及并可测量时，通过卡尺测量肿瘤体积，一周两次。当肿瘤体积达到182mm3的平均值(范围为108-287mm3)时，将荷瘤小鼠随机分成不同的组，每组8只小鼠。随机分组日期表示为治疗第0天。
治疗
随机分组后第二天开始治疗。治疗开始日期表示为治疗第1天。通过口服施用载体对照、10mg/kg BID的单独的式I的化合物、30mg/kg QD的单独的式I的化合物和0.4mg/kgQD的单独的曲美替尼对小鼠给药。两组接受式I的化合物和曲美替尼的联合治疗，其中一组用10mg/kg BID的式I的化合物和0.4mg/kg QD的曲美替尼给药，而另一组用式I的化合物30mg/kg QD和0.4mg/kg QD的曲美替尼给药。给药体积为5mL/kg，并且BID方案的间隔为8小时。在联合组中，曲美替尼在进行式的化合物BID或QD给药的第一剂量后一小时给药。
结果
图26示出在BRAF III类突变CRC CDX模型NCI-H508中，用单独的式I的化合物、单独的曲美替尼以及式I的化合物和曲美替尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。在对照组和治疗组中没有观察到显著的体重变化。
结论
如图26所示，在BRAF III类突变CRC CDX模型NCI-H508中，相对于单独用式I的化合物治疗或单独用曲美替尼治疗，式I的化合物和曲美替尼的组合展示出优越的肿瘤生长抑制。
实施例16-在NF1 LoF突变NSCLC CDX模型NCI-H1838中，式I的化合物和曲美替尼的联合疗法
材料
在小鼠中的整个28天施用中，制备载体/对照制品，即在去离子水中的100mM乙酸，将pH调节至4.8-5.0，并在环境条件下储存。
将式I的化合物的测试制品每周在100mM乙酸缓冲液的载体中新鲜制备，并在环境条件下储存。将组合药剂曲美替尼每周在0.5％HPMC和0.2％Tween 80的载体中新鲜制备，并在环境条件下储存。
雌性SCID Beige小鼠(Cat#405)购自北京维通利华实验动物技术有限公司。小鼠在植入时为6-8周龄。根据IACUC方案，在开始任何实验之前，将小鼠置于动物饲养设施的无特定病原(SPF)环境中，并使其适应新环境至少3天。
本研究中与动物处理、护理和治疗相关的所有程序均根据无锡AppTec机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准的指南进行。在研究过程中，动物的护理和使用按照实验动物护理评估和认证协会(AAALAC)的规定进行。此外，在无锡AppTec进行这项研究的所有部分并且遵守研究负责人批准的研究方案和适用的标准操作程序(SOP)。
异种移植模型的制备
NCI-H1838是一种拥有NF1LOF突变NF1 N184fs的人类肺腺癌细胞系。NCI-H1838细胞系购自美国典型培养物保藏中心(CRL-5899TM)。将NCI-H1838细胞在含有RPMI-1640加上10％胎牛血清(FBS)和1％抗生素-抗真菌剂(AA)的培养基中，在37℃下，在空气中5％CO2的气氛中培养。将培养基每2至3天更换一次，并通过胰蛋白酶-EDTA以80-90％的汇合度对肿瘤细胞进行常规传代培养。收获处于指数生长期的细胞并进行计数用于接种。
将NCI-H1838肿瘤细胞皮下植入小鼠中。简单来说，使用注射器将含有10×106个肿瘤细胞的与50％Matrigel混合的200μL细胞悬浮液皮下植入小鼠的右侧胁腹。每天监测动物健康和肿瘤生长。当肿瘤可触及并可测量时，通过卡尺测量肿瘤体积，一周两次。当肿瘤体积达到254mm3的平均值(范围为149-503mm3)时，将荷瘤小鼠随机分成不同的组，每组8只小鼠。随机分组日期表示为治疗第0天。
治疗
随机分组后第二天开始治疗。治疗开始日期表示为治疗第1天。通过口服施用载体对照、10mg/kg BID的单独的式I的化合物、30mg/kg QD的单独的式I的化合物和0.4mg/kgQD的单独的曲美替尼对小鼠给药。两组接受式I的化合物和曲美替尼的联合治疗，其中一组用10mg/kg BID的式I的化合物和0.4mg/kg QD的曲美替尼给药，而另一组用30mg/kg QD的式I的化合物和0.4mg/kg QD的曲美替尼给药。给药体积为5mL/kg，并且BID方案的间隔为8小时。在联合组中，曲美替尼在进行式I的化合物剂量或QD给药的第一剂量后一小时给药。
结果
图27示出在NF1 LoF突变NSCLC CDX模型NCI-H1838中，用单独的式I的化合物、单独的曲美替尼以及式I的化合物和曲美替尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。在对照组和治疗组中没有观察到显著的体重变化。
结论
如图27所示，在NF1 LoF突变NSCLC CDX模型NCI-H1838中，相对于单独用式I的化合物治疗或单独用曲美替尼治疗，式I的化合物和曲美替尼的组合展示出优越的肿瘤生长抑制。
实施例17-式I的化合物和MET抑制剂的协同组合
联合细胞增殖测定
将细胞(每孔2000个细胞)铺板在100μl细胞培养基中的96孔板上。通过使用TecanD300e数字分配器组合矩阵方案，用式I的化合物和浓度从0至10μM变化的克唑替尼处理细胞。在第5天，加入50μl的CellTiter-Glo(CTG)试剂(Promega)，并且将板在温和摇动条件下孵育10分钟。孵育10分钟后，根据供应商的说明书(Promega)确定发光信号，并且使用Combenefit软件通过标准HSA模型产生组合数据。组合协同作用在结果表中用正数表示。负数代表组合的拮抗作用。
结果
图28A示出使用式I的化合物和克唑替尼的组合在Hs746T癌细胞系中的协同作用数据。图28B示出使用式I的化合物和克唑替尼的组合在MKN-45癌细胞系中的协同作用数据。图28C示出使用式I的化合物和克唑替尼的组合在EBC-1癌细胞系中的协同作用数据。
实施例18-在c-MET扩增的胃癌CDX模型SNU-5中，式I的化合物和克唑替尼的联合疗法
材料
在小鼠中的整个28天施用中，制备载体/对照制品，即在去离子水中的100mM乙酸，将pH调节至4.8-5.0，并在环境条件下储存。
将式I的化合物的测试制品每周在100mM乙酸缓冲液的载体中新鲜制备，并在环境条件下储存。将组合药剂克唑替尼在0.5％甲基纤维素的载体中制备，并在2-8℃下储存。
雌性Balb/c裸鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。小鼠在植入时为6-8周龄。根据IACUC方案，在开始任何实验之前，将小鼠置于动物饲养设施的无特定病原(SPF)环境中，并使其适应新环境至少3天。本研究中与动物处理、护理和治疗相关的所有程序均根据无锡AppTec机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准的指南进行。在研究过程中，动物的护理和使用按照实验动物护理评估和认证协会(AAALAC)的规定进行。此外，在无锡AppTec进行的这项研究的所有部分都遵守研究负责人批准的研究方案和适用的标准操作程序(SOP)。
异种移植模型的制备
SNU-5是c-MET扩增的胃癌细胞系。SNU-5细胞系购自美国典型培养物保藏中心(CRL-5973TM)。将SNU-5细胞在含有IMDM(Iscove改良杜氏培养基(Iscove'sModified Dulbecco's Medium))加上20％胎牛血清(FBS)和1％抗生素-抗真菌剂(AA)的培养基中，在37℃下，在空气中5％CO2的气氛中培养。将培养基每2至3天更换一次，并通过胰蛋白酶-EDTA以80-90％的汇合度对肿瘤细胞进行常规传代培养。收获处于指数生长期的细胞并进行计数用于接种。将SNU-5肿瘤细胞(第13代)皮下植入小鼠中。使用注射器将含有10×106个肿瘤细胞的200μL细胞悬浮液皮下植入小鼠的右侧胁腹。每天监测动物健康和肿瘤生长。当肿瘤可触及并可测量时，通过卡尺测量肿瘤体积，一周两次。当在皮下植入后第34天，肿瘤体积达到227mm3的平均值时，将荷瘤小鼠随机分成不同的组，每组8只小鼠。随机分组日期表示为治疗第0天。
治疗
随机分组后第二天开始治疗。治疗开始日期表示为治疗第1天。通过口服施用载体对照溶液、10mg/kg BID的单独的式I的化合物、30mg/kg QD的单独的式I的化合物和50mg/kg BID的单独的克唑替尼对小鼠给药。另外两组接受式I的化合物和克唑替尼的联合治疗，其中一组用5mg/kg BID的式I的化合物和50mg/kg BID的克唑替尼的组合给药，而另一组用15mg/kg QD的式I的化合物和50mg/kg BID的克唑替尼的组合给药。给药体积为5mL/kg，并且BID方案的间隔为8小时。在联合组中，克唑替尼在式I的化合物QD给药后或BID剂量方案的第一剂量后一小时给药。按照研究方案中的定义，研究在治疗第28天终止。
结果
图29示出在c-MET扩增的胃癌CDX模型SNU-5中，用单独的式I的化合物、单独的克唑替尼以及式I的化合物和克唑替尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。在对照组和治疗组中没有观察到显著的体重变化。
结论
如图29所示，在c-MET扩增的胃癌CDX模型SNU-5中，相对于单独用式I的化合物治疗或单独用克唑替尼治疗，式I的化合物和克唑替尼的组合展示出优越的肿瘤生长抑制。
实施例19-在c-MET扩增的NSCLC CDX模型NCI-H1993中，式I的化合物和克唑替尼的联合疗法
材料
在小鼠中的整个28天施用中，制备载体/对照制品，即在去离子水中的100mM乙酸，将pH调节至4.8-5.0，并在环境条件下储存。
将式I的化合物的测试制品每周在100mM乙酸缓冲液的载体中新鲜制备，并在环境条件下储存。将组合药剂克唑替尼在0.5％甲基纤维素的载体中制备，并在2-8℃下储存。
雌性Balb/c裸鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。小鼠在植入时为6-8周龄。根据IACUC方案，在开始任何实验之前，将小鼠置于动物饲养设施的无特定病原(SPF)环境中，并使其适应新环境至少3天。本研究中与动物处理、护理和治疗相关的所有程序均根据无锡AppTec机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准的指南进行。在研究过程中，动物的护理和使用按照实验动物护理评估和认证协会(AAALAC)的规定进行。此外，在无锡AppTec进行的这项研究的所有部分都遵守研究负责人批准的研究方案和适用的标准操作程序(SOP)。
异种移植模型的制备
NCI-H1993是c-MET扩增的NSCLC细胞系。NCI-H1993细胞系购自美国典型培养物保藏中心(CRL-5909TM)。将NCI-H1993细胞在含有RPMI-1640加上10％胎牛血清(FBS)和1％抗生素-抗真菌剂(AA)的培养基中，在37℃下，在空气中5％CO2的气氛中培养。将培养基每2至3天更换一次，并通过胰蛋白酶-EDTA以80-90％的汇合度对肿瘤细胞进行常规传代培养。收获处于指数生长期的细胞并进行计数用于接种。将NCI-H1993肿瘤细胞(第13代)皮下植入小鼠中。使用注射器将含有5×106个肿瘤细胞的与50％Matrigel混合的200μL细胞悬浮液皮下植入小鼠的右侧胁腹。每天监测动物健康和肿瘤生长。当肿瘤可触及并可测量时，通过卡尺测量肿瘤体积，一周两次。当在皮下植入后第10天，肿瘤体积达到201mm3的平均值时，将荷瘤小鼠随机分成不同的组，每组8只小鼠。随机分组日期表示为治疗第0天。
治疗
随机分组后第二天开始治疗。治疗开始日期表示为治疗第1天。通过口服施用载体对照溶液、10mg/kg BID的单独的式I的化合物、30mg/kg QD的单独的式I的化合物和50mg/kg BID的单独的克唑替尼对小鼠给药。另一组接受5mg/kg BID的式I的化合物和50mg/kgBID的克唑替尼的联合治疗。给药体积为5mL/kg，并且BID方案的间隔为8小时。在联合组中，克唑替尼在进行式I的化合物BID给药的第一剂量后一小时给药。按照研究方案中的定义，研究在治疗第28天终止。
结果
图30示出在c-MET扩增的NSCLC CDX模型NCI-H1993中，用单独的式I的化合物、单独的克唑替尼以及式I的化合物和克唑替尼的组合治疗一段时间的肿瘤体积的图。在对照组和治疗组中没有观察到显著的体重变化。
结论
如图30所示，在c-MET扩增的NSCLC CDX模型NCI-H1993中，相对于单独用式I的化合物治疗或单独用克唑替尼治疗，式I的化合物和克唑替尼的组合展示出优越的肿瘤生长抑制。
尽管为清楚理解的目的，已经通过图示和实施例的方式详细描述了前述实施方案，但是本领域技术人员将会理解，在所附权利要求的范围内可以实施某些改变和修改。此外，本文提供的每篇参考文献都通过引用整体并入，如同每篇参考文献都通过引用单独并入一样。当本申请与本文提供的参考文献之间存在冲突时，以本申请为准。

Claims (139)

1.一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和FGFR抑制剂。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述对象中的FGFR是组成型活性的。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述癌症为肺癌。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述癌症为肝细胞癌。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述癌症为胆管癌。
6.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述癌症为胰腺导管腺癌(PDAC)。
7.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述抑制剂选自厄达替尼、AZD4547、Ly2874455、CH5183284、NVP-BGJ398、INCB054828、罗加替尼、PRN1371、TAS-120、BLU-554、H3B-6527和FGF401。
8.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述FGFR抑制剂为厄达替尼。
9.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述FGFR抑制剂为佩米替尼、英菲格拉替尼、多韦替尼、帕纳替尼、尼达尼布和非索替尼。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述方法包括施用第三MAPK通路抑制剂。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述施用为口服。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述式I的化合物的给药量在每天20mg至400mg的范围内。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述FGFR抑制剂的给药量在每天1mg至500mg的范围内。
14.一种治疗对象的肝癌的方法，所述方法包括向所述对象口服联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和厄达替尼。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述式I的化合物每天施用一次或两次。
16.根据权利要求14或15所述的方法，其中厄达替尼每天施用一次或两次。
17.根据权利要求14所述的方法，其中所述对象为人。
18.一种试剂盒，所述试剂盒包含式I的化合物或其药学上可接受的盐和FGFR抑制剂。
19.根据权利要求18所述的试剂盒，其中所述式I的化合物和所述FGFR抑制剂在单独的包装中。
20.根据权利要求18或19所述的试剂盒，其中所述试剂盒进一步包含将所述试剂盒的内容物施用于对象以用于癌症治疗的说明书。
21.根据权利要求18至20中任一项所述的试剂盒，其中所述FGFR抑制剂为厄达替尼、AZD4547、Ly2874455、CH5183284、NVP-BGJ398、INCB054828、罗加替尼、PRN1371、TAS-120、BLU-554、H3B-6527、FGF401、佩米替尼、英菲格拉替尼、多韦替尼、帕纳替尼、尼达尼布和非索替尼中的一种或多种。
22.一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和具有1类突变的B-Raf蛋白的抑制剂。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述1类突变为V600E。
24.根据权利要求22或23所述的方法，其中所述癌症为结直肠癌。
25.根据权利要求22或23所述的方法，其中所述癌症为黑色素瘤。
26.根据权利要求22或23所述的方法，其中所述癌症为甲状腺癌。
27.根据权利要求22或23所述的方法，其中所述癌症为胰腺导管腺癌(PDAC)。
28.根据权利要求22至27中任一项所述的方法，其中所述抑制剂选自康奈非尼、维莫非尼、达拉菲尼、索拉非尼和瑞格拉非尼。
29.根据权利要求22至27中任一项所述的方法，其中所述抑制剂为康奈非尼。
30.根据权利要求22至27中任一项所述的方法，其中所述抑制剂为维莫非尼。
31.根据权利要求22至27中任一项所述的方法，其中所述抑制剂为达拉菲尼。
32.根据权利要求22至27中任一项所述的方法，其中所述抑制剂为索拉非尼。
33.根据权利要求22至27中任一项所述的方法，其中所述抑制剂为瑞格拉非尼。
34.根据权利要求22至33中任一项所述的方法，其中所述方法包括施用第三MAPK通路抑制剂。
35.根据权利要求22至34中任一项所述的方法，其中所述施用为口服。
36.根据权利要求22至35中任一项所述的方法，其中所述式I的化合物的给药量在每天20mg至400mg的范围内。
37.根据权利要求22至36中任一项所述的方法，其中所述B-Raf抑制剂的给药量在1mg至500mg的范围内。
38.一种治疗对象的结直肠癌的方法，所述方法包括向所述对象口服联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和B-Raf抑制剂康奈非尼。
39.根据权利要求38所述的方法，其中所述式I的化合物每天施用一次或两次。
40.根据权利要求38或39所述的方法，其中康奈非尼每天施用一次或两次。
41.根据权利要求38至40中任一项所述的方法，其中所述对象为人。
42.一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和康奈非尼。
43.一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和维莫非尼。
44.一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和达拉菲尼。
45.一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和索拉非尼。
46.一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和瑞格拉非尼。
47.根据权利要求42至46中任一项所述的方法，其中所述癌症为结直肠癌。
48.根据权利要求42至46中任一项所述的方法，其中所述癌症为甲状腺癌。
49.根据权利要求42至46中任一项所述的方法，其中所述癌症为黑色素瘤。
50.根据权利要求42至46中任一项所述的方法，其中所述癌症为胰腺导管腺癌(PDAC)。
51.根据权利要求22至50中任一项所述的方法，其中所述B-Raf抑制剂的给药量小于用所述B-Raf抑制剂进行单一疗法所需的给药量。
52.根据权利要求22至51中任一项所述的方法，其中所述式I的化合物的给药量小于用所述式I的化合物进行单一疗法所需的给药量。
53.一种抑制细胞群体中的ERK1/2磷酸化的方法，所述方法包括使细胞群体与式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和瑞格拉非尼组合接触。
54.根据权利要求53所述的方法，其中所述式I的化合物的浓度在1nM至500nM的范围内。
55.根据权利要求53或54所述的方法，其中康奈非尼的浓度在10nM至20nM的范围内。
56.一种试剂盒，所述试剂盒包含式I的化合物或其药学上可接受的盐和B-Raf抑制剂。
57.根据权利要求56所述的试剂盒，其中所述式I的化合物和所述B-Raf抑制剂在单独的包装中。
58.根据权利要求56或57所述的试剂盒，其中所述试剂盒进一步包含将所述试剂盒的内容物施用于对象以用于癌症治疗的说明书。
59.根据权利要求56至58中任一项所述的试剂盒，其中所述B-Raf抑制剂是康奈非尼、维莫非尼、达拉菲尼、索拉非尼和瑞格拉非尼中的一种或多种。
60.一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和MEK抑制剂。
61.根据权利要求60所述的方法，其中所述MEK抑制剂选择性地抑制MEK1或选择性地抑制MEK2或选择性地抑制MEK1和MEK2二者。
62.根据权利要求60所述的方法，其中所述癌症为转移性的。
63.根据权利要求60至62中任一项所述的方法，其中所述癌症为结直肠癌。
64.根据权利要求60至62中任一项所述的方法，其中所述癌症为黑色素瘤。
65.根据权利要求60至62中任一项所述的方法，其中所述癌症为肺癌。
66.根据权利要求60至62中任一项所述的方法，其中所述癌症为胰腺癌。
67.根据权利要求60至62中任一项所述的方法，其中所述癌症为乳腺癌。
68.根据权利要求60至62中任一项所述的方法，其中所述癌症为胰腺导管腺癌(PDAC)。
69.根据权利要求60至68中任一项所述的方法，其中所述MEK抑制剂选自曲美替尼、考比替尼、贝美替尼、PD-0325901、司美替尼和CI-1040。
70.根据权利要求60至68中任一项所述的方法，其中所述MEK抑制剂为曲美替尼。
71.根据权利要求60至68中任一项所述的方法，其中所述MEK抑制剂为考比替尼。
72.根据权利要求60至68中任一项所述的方法，其中所述MEK抑制剂为贝美替尼。
73.根据权利要求60至68中任一项所述的方法，其中所述MEK抑制剂为PD-325901。
74.根据权利要求60至68中任一项所述的方法，其中所述MEK抑制剂为CI-1040。
75.根据权利要求60至74中任一项所述的方法，其中所述方法包括施用另一种MAPK通路抑制剂。
76.根据权利要求60至75中任一项所述的方法，其中所述施用为口服。
77.根据权利要求60至76中任一项所述的方法，其中所述式I的化合物的给药量在每天20mg至400mg的范围内。
78.根据权利要求60至77中任一项所述的方法，其中所述MEK抑制剂的给药量在每天1mg至500mg的范围内。
79.一种治疗对象的癌症的方法，所述方法包括向所述对象口服联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和MEK抑制剂贝美替尼或曲美替尼。
80.根据权利要求79所述的方法，其中所述式I的化合物每天施用一次或两次。
81.根据权利要求79或80所述的方法，其中贝美替尼或曲美替尼每天施用一次或两次。
82.根据权利要求79至81中任一项所述的方法，其中所述对象为人。
83.一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和贝美替尼。
84.一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和曲美替尼。
85.根据权利要求83或84所述的方法，其中所述癌症为结直肠癌。
86.根据权利要求83或84所述的方法，其中所述癌症为肺癌。
87.根据权利要求83或84所述的方法，其中所述癌症为黑色素瘤。
88.根据权利要求83或84所述的方法，其中所述癌症为胰腺导管腺癌(PDAC)。
89.根据权利要求60至88中任一项所述的方法，其中所述MEK抑制剂的给药量小于用所述MEK抑制剂进行单一疗法所需的给药量。
90.根据权利要求60至89中任一项所述的方法，其中所述式I的化合物的给药量小于用所述式I的化合物进行单一疗法所需的给药量。
91.一种抑制ERK1/2磷酸化的方法，所述方法包括使细胞群体与式I或其药学上可接受的盐：
和贝美替尼或曲美替尼组合接触。
92.根据权利要求91所述的方法，其中所述式I的化合物的浓度在1nM至1,000nM的范围内。
93.根据权利要求91或92所述的方法，其中MEK抑制剂的浓度在10nM至500nM的范围内。
94.一种试剂盒，所述试剂盒包含式I的化合物或其药学上可接受的盐和MEK抑制剂。
95.根据权利要求94所述的试剂盒，其中所述式I的化合物和所述MEK抑制剂在单独的包装中。
96.根据权利要求94或95所述的试剂盒，其中所述试剂盒进一步包含将所述试剂盒的内容物施用于对象以用于癌症治疗的说明书。
97.根据权利要求94至96中任一项所述的试剂盒，其中所述MEK抑制剂为曲美替尼或贝美替尼中的一种或多种。
98.一种治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和MET抑制剂。
99.根据权利要求98所述的方法，其中所述MET抑制剂也是ALK抑制剂、ROS1抑制剂或二者。
100.根据权利要求98或99所述的方法，其中所述癌症为非小细胞肺癌。
101.根据权利要求98或99所述的方法，其中所述癌症为胃癌。
102.根据权利要求98或99所述的方法，其中所述癌症为胃腺癌。
103.根据权利要求98或99所述的方法，其中所述癌症为胰腺导管腺癌(PDAC)。
104.根据权利要求98至103中任一项所述的方法，其中所述MET抑制剂选自克唑替尼、特泊替尼、赛沃替尼、卡博替尼和替万替尼。
105.根据权利要求98至103中任一项所述的方法，其中所述MET抑制剂为克唑替尼。
106.根据权利要求98至103中任一项所述的方法，其中所述MET抑制剂为特泊替尼。
107.根据权利要求98至103中任一项所述的方法，其中所述MET抑制剂为赛沃替尼。
108.根据权利要求98至103中任一项所述的方法，其中所述MET抑制剂为卡博替尼。
109.根据权利要求98至103中任一项所述的方法，其中所述MET抑制剂为替万替尼。
110.根据权利要求98至109中任一项所述的方法，其中所述方法包括施用第三MAPK通路抑制剂。
111.根据权利要求98至110中任一项所述的方法，其中所述施用为口服。
112.根据权利要求98至111中任一项所述的方法，其中所述式I的化合物的给药量在每天10mg至500mg的范围内。
113.根据权利要求98至112中任一项所述的方法，其中所述抑制剂的给药量在每天20mg至400mg的范围内。
114.一种治疗对象的胃癌的方法，所述方法包括向所述对象口服联合施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐：
和克唑替尼。
115.根据权利要求114所述的方法，其中所述式I的化合物每天施用一次或两次。
116.根据权利要求114或115所述的方法，其中克唑替尼每天施用一次或两次。
117.根据权利要求114至116中任一项所述的方法，其中所述对象为人。
118.一种试剂盒，所述试剂盒包含式I的化合物或其药学上可接受的盐和MET抑制剂。
119.根据权利要求118所述的试剂盒，其中所述式I的化合物和所述MET抑制剂在单独的包装中。
120.根据权利要求118或119所述的试剂盒，其中所述试剂盒进一步包含将所述试剂盒的内容物施用于对象以用于癌症治疗的说明书。
121.根据权利要求118至120中任一项所述的试剂盒，其中所述MET抑制剂是克唑替尼、特泊替尼、赛沃替尼、卡博替尼和替万替尼中的一种或多种。
122.根据权利要求1至121中任一项所述的方法，其中所述式I的化合物或其药学上可接受的盐被配制成药物组合物。
123.根据权利要求1至122中任一项所述的方法，其中所述式I的化合物或其药学上可接受的盐被配制成口服组合物。
124.根据权利要求1至123中任一项所述的方法，其中所述式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用一次或两次。
125.根据权利要求1至124中任一项所述的方法，其中所述式I的化合物或其药学上可接受的盐历经连续28天的周期施用。
126.根据权利要求1至125中任一项所述的方法，其中所述式I的化合物或其药学上可接受的盐以约10mg至约140mg的量一天施用一次。
127.根据权利要求1至126中任一项所述的方法，其中所述式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用一次持续3周的周期，包括施用所述化合物2周，接着不施用所述化合物1周。
128.根据权利要求1至126中任一项所述的方法，其中所述式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用一次持续4周的周期，包括施用所述化合物3周，接着不施用所述化合物1周。
129.根据权利要求1至128中任一项所述的方法，其中所述式I的化合物或其药学上可接受的盐历经6周的时间段施用。
130.根据权利要求1至128中任一项所述的方法，其中所述式I的化合物或其药学上可接受的盐历经8周的时间段施用。
131.根据权利要求1至130中任一项所述的方法，其中所述式I的化合物或其药学上可接受的盐一周施用3次。
132.根据权利要求131所述的方法，其中所述式I的化合物或其药学上可接受的盐在一周的第1天、第3天和第5天施用。
133.根据权利要求1至132中任一项所述的方法，其中所述式I的化合物或其药学上可接受的盐一周施用4次。
134.根据权利要求133所述的方法，其中所述式I的化合物或其药学上可接受的盐施用3周的周期，包括施用所述化合物2周，接着不施用所述化合物1周。
135.根据权利要求133所述的方法，其中所述式I的化合物或其药学上可接受的盐施用4周的周期，包括施用所述化合物3周，接着不施用所述化合物1周。
136.根据权利要求1至125中任一项所述的方法，其中所述式I的化合物或其药学上可接受的盐一天施用两次，每周两天。
137.根据权利要求1至126中任一项所述的方法，其中所述式I的化合物或其药学上可接受的盐历经8周的时间段施用。
138.根据权利要求136或137所述的方法，其中所述式I的化合物或其药学上可接受的盐在每周的第1天和第2天施用。
139.根据权利要求1至138中任一项所述的方法，其中所述癌症选自肺癌、胃癌、肝癌、结肠癌、肾癌、乳腺癌、胰腺癌、胰腺导管腺癌(PDAC)、幼年型粒单核细胞白血病、神经母细胞瘤、黑色素瘤和急性髓性白血病。
CN202180093091.6A 2020-12-11 2021-12-10 用于癌症治疗的联合疗法 Pending CN117083283A (zh)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063124674P 2020-12-11 2020-12-11
US63/124,663 2020-12-11
US63/124,667 2020-12-11
US63/124,671 2020-12-11
US63/124,674 2020-12-11
PCT/US2021/062921 WO2022125967A2 (en) 2020-12-11 2021-12-10 Combination therapies for the treatment of cancer

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN117083283A true CN117083283A (zh) 2023-11-17

Family

ID=88702861

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202180093091.6A Pending CN117083283A (zh) 2020-12-11 2021-12-10 用于癌症治疗的联合疗法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN117083283A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2020147570A (ja) 抗ｈｅｒ２抗体−薬剤コンジュゲートと化学療法剤の併用及び使用方法
AU2023203751A1 (en) Pharmaceutical combination comprising tno155 and ribociclib
AU2011290818B2 (en) Combination anti - cancer therapy
US20120128670A1 (en) mTOR INHIBITOR AND ANGIOGENESIS INHIBITOR COMBINATION THERAPY
JP2019070012A (ja) Ｔｏｒキナーゼ阻害剤組み合わせ療法を使用して癌を治療する方法
RU2717570C2 (ru) Синергистические комбинации ауристана
RU2739992C2 (ru) Композиции апилимода и способы их применения в лечении колоректального рака
JP2023553534A (ja) 癌の処置のための併用療法
AU2011290857A1 (en) Novel combination therapy for the treatment of cancer
US20240058352A1 (en) Combination therapies for the treatment of cancer
US20240050441A1 (en) Combination therapies for the treatment of cancer
WO2022271966A1 (en) Shp2 and cdk4/6 inhibitors combination therapies for the treatment of cancer
EP4358965A1 (en) Erk1/2 and shp2 inhibitors combination therapy
US20230233567A1 (en) Belvarafenib for use in cancer treatment
CN117083283A (zh) 用于癌症治疗的联合疗法
CN117120449A (zh) 用于癌症治疗的联合疗法
CN117098537A (zh) 用于癌症治疗的联合疗法
WO2022271919A1 (en) Erk1/2 or shp2 inhibitors and flt3 inhibitors combination therapy
RU2813111C2 (ru) Фармацевтическая комбинация, содержащая tno155 и рибоциклиб

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination