CN117064881B - 硝唑尼特在制备抗mcr-1和ndm-5阳性菌株增效剂中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了硝唑尼特在制备抗MCR‑1和NDM‑5阳性菌株抗菌增效剂中的应用，涉及药物用途领域。本发明发现在联合药敏试验中，硝唑尼特与多粘菌素E对MCR‑1和MCR‑1&NDM‑5阳性菌有明显的协同作用(FICI≤0.25)；硝唑尼特与美罗培南对NDM‑5和MCR‑1&NDM‑5阳性菌有协同作用(FICI≤0.5)；而硝唑尼特分别与多粘菌素E或美罗培南联用对不含MCR‑1或NDM‑5的菌株无协同作用(FICI＞0.5)，表明硝唑尼特与多粘菌素E或美罗培南联用对含MCR‑1或NDM‑5酶的菌具有良好的协同抑菌作用。
Description
技术领域
本发明涉及药物用途领域，特别是涉及硝唑尼特在制备抗MCR-1和NDM-5阳性菌株增效剂中的应用。
背景技术
细菌耐药问题日趋严重，其中，产碳青霉烯酶(NDM)的碳青霉烯耐药肠杆菌(CRE)和携带mcr的多黏菌素耐药菌以及日益增加的多重耐药菌的出现，使碳青霉烯类抗生素和多黏菌素等防线级抗菌药逐渐失去活性，给(兽)医学临床和食品安全领域均造成极大威胁，已引起全球关注。研发创新型抗生素以应对耐药菌的难度大、周期长、经济成本高，因此，通过筛选抗菌药佐剂以恢复现有抗菌药活性的新药研发策略则显得更为经济有效。目前，虽已报道有些化合物可作为NDM或MCR阳性菌的增效剂，但尚无有效的能同时抗NDM和MCR菌株的增效剂，而临床中分离的很多耐药菌株会同时携带NDM和MCR。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了硝唑尼特在制备抗MCR-1和NDM-5阳性菌株增效剂中的应用。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
本发明提供了硝唑尼特在制备MCR-1和NDM-5阳性菌株抗菌增效剂中的应用。
本发明还提供了硝唑尼特(Nitazoxanide，NTZ)联合抗生素在制备MCR-1和NDM-5阳性菌株抗菌增效剂中的应用；
所述抗生素包括多黏菌素E(Colistin，CL.E)或美罗培南(Meropenem，MER)。
优选的，所述硝唑尼特与多黏菌素E的质量比为128:1。
优选的，所述硝唑尼特与美罗培南的质量比为4:1。
本发明还提供了硝唑尼特联合抗生素在制备对细菌细胞的协同氧化损伤药物中的应用；
所述抗生素包括多黏菌素E或美罗培南。
本发明还提供了硝唑尼特联合多黏菌素E在增强细胞内膜通透性中的应用。
本发明的有益效果为：
(1)本发明发现在联合药敏试验中，硝唑尼特与多粘菌素E对MCR-1和MCR-1&NDM-5阳性菌有明显的协同作用(FICI≤0.25)；硝唑尼特与美罗培南对NDM-5和MCR-1&NDM-5阳性菌有协同作用(FICI≤0.5)；而硝唑尼特与多粘菌素E或美罗培南联用对不含MCR-1或NDM-5的菌株无协同作用(FICI＞0.5)，表明硝唑尼特与多粘菌素E或美罗培南联用对含MCR-1或NDM-5酶的菌具有良好的协同抑菌作用。
(2)本发明发现在时间-杀菌曲线试验中，培养24h后，各联合用药组菌落计数均大于其他组2log10 CFU/mL，说明硝唑尼特与多粘菌素E或美罗培南联合用药随着时间变化具有明显的杀菌作用。
(3)本发明发现在硝唑尼特与多黏菌素E或美罗培南联合作用对总抗氧化能力(ROS)的影响试验中，硝唑尼特与多粘菌素E或美罗培南联合使用对MCR-1、NDM-5以及MCR-1&NDM-5阳性菌具有协同氧化损伤作用，其中联合用药比单独用药的氧化损伤作用更加明显(ROS水平显著上升)。在生产中，可以降低多黏菌素E、美罗培南和硝唑尼特的单独使用量，获得较强的氧化损伤作用，降低生产中抗菌药物的大量使用以及诱导耐药菌产生和传播的风险。
(4)本发明发现在硝唑尼特与多黏菌素E或美罗培南联合作用对细菌内外膜的通透性影响试验中，硝唑尼特单药对MCR-1、NDM-5以及MCR-1和NDM-5阳性菌内外膜的通透性无明显影响，但是硝唑尼特与多粘菌素E联用明显增强细胞内膜通透性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为硝唑尼特与美罗培南对MCR-1和NDM-5阳性鸡源大肠杆菌联合用药热图；
图2为硝唑尼特与多黏菌素E对MCR-1和NDM-5阳性鸡源大肠杆菌联合用药热图；
图3为硝唑尼特与美罗培南对不含MCR-1或NDM-5鸡源大肠杆菌联合用药热图；
图4为硝唑尼特与多黏菌素E对不含MCR-1或NDM-5鸡源大肠杆菌联合用药热图；
图5为硝唑尼特与美罗培南对MCR-1和NDM-5阳性鸡源大肠杆菌时间-杀菌曲线；
图6为硝唑尼特与多黏菌素E对MCR-1和NDM-5阳性鸡源大肠杆菌时间-杀菌曲线；
图7为硝唑尼特与美罗培南对不含MCR-1或NDM-5鸡源大肠杆菌时间-杀菌曲线；
图8为硝唑尼特与多黏菌素E对不含MCR-1或NDM-5鸡源大肠杆菌时间-杀菌曲线；
图9为硝唑尼特对MCR-1和NDM-5阳性鸡源大肠杆菌ROS水平的影响；
图10为硝唑尼特与美罗培南联合对MCR-1和NDM-5阳性鸡源大肠杆菌ROS水平的影响；
图11为硝唑尼特与多黏菌素E联合对MCR-1和NDM-5阳性鸡源大肠杆菌ROS水平的影响；
图12为硝唑尼特对MCR-1和NDM-5阳性鸡源大肠杆菌外膜的影响；
图13为硝唑尼特与美罗培南联合对MCR-1和NDM-5阳性鸡源大肠杆菌外膜的影响；
图14为硝唑尼特与多黏菌素E联合对MCR-1和NDM-5阳性鸡源大肠杆菌外膜的影响；
图15为硝唑尼特对MCR-1和NDM-5阳性鸡源大肠杆菌内膜的影响；
图16为硝唑尼特与美罗培南联合对MCR-1和NDM-5阳性鸡源大肠杆菌内膜的影响；
图17为硝唑尼特与多黏菌素E联合对MCR-1和NDM-5阳性鸡源大肠杆菌内膜的影响。
具体实施方式
本发明提供了硝唑尼特在制备抗MCR-1和NDM-5阳性菌株增效剂中的应用。本发明对所述增效剂的种类没有特殊限定，采用硝唑尼特在医学上可接受的即可。本发明对所述增效剂中硝唑尼特的含量没有特殊限定。
本发明还提供了硝唑尼特联合抗生素在制备抗MCR-1和NDM-5阳性菌株增效剂中的应用；所述抗生素包括多黏菌素E或美罗培南。本发明对所述增效剂的种类没有特殊限定，采用硝唑尼特和抗生素在医学上可接受的即可。在本发明中，所述硝唑尼特与多黏菌素E的质量比优选为128:1。在本发明中，所述硝唑尼特与美罗培南的质量比优选为4:1。
本发明还提供了硝唑尼特联合抗生素在制备对细菌细胞的协同氧化损伤药物中的应用；所述抗生素包括多黏菌素E或美罗培南。本发明对所述抑制剂的种类没有特殊限定，采用硝唑尼特和抗生素在医学上可接受的即可。在本发明中，所述硝唑尼特与多黏菌素E的质量比优选为128:1。在本发明中，所述硝唑尼特与美罗培南的质量比优选为4:1。
本发明还提供了硝唑尼特联合多黏菌素E在增强细胞内膜通透性中的应用。在本发明中，所述硝唑尼特与多黏菌素E的质量比优选为128:1。
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
硝唑尼特与多黏菌素E或美罗培南的联合药敏试验。
本实施例研究了：
(1)硝唑尼特与多黏菌素E对MCR-1鸡源大肠杆菌的联合抑菌作用；
(2)硝唑尼特与美罗培南对NDM-5鸡源大肠杆菌的联合抑菌作用；
(3)硝唑尼特与多黏菌素E或美罗培南对MCR-1&NDM-5鸡源大肠杆菌的联合抑菌作用；
(4)硝唑尼特与多黏菌素E或美罗培南对不含MCR-1或NDM-5鸡源大肠杆菌的联合抑菌作用。
步骤如下：采用棋盘微量稀释法以各药对应菌种的4、2、1、1/2、1/4、1/8、1/16×MIC浓度在96孔反应板上分别按纵列和横列进行联合。先将培养至OD600＝0.5(对数期)的菌液按体积比1:1000加入MH肉汤中，8×8中第2-8列加入100μL菌液，第1列加入180μL菌液，向第1列第1孔加入20μL浓度为32μg/mL多黏菌素E或1024μg/mL美罗培南，第1列其他孔加入20μL浓度为16μg/mL多黏菌素E或512μg/mL美罗培南，倍比稀释至第7列；然后向第一排加入80μL菌液和20μL浓度为1024μg/mL硝唑尼特，倍比稀释至第7排；37℃孵育18～20h后观察结果，试验重复三次。第8排为抗生素单药，第8列为硝唑尼特单药，第8排、列交叉孔为菌液组的阳性对照。
以FICI的计算结果作为联合药敏试验的判断依据。FICI＝FICa+FICb＝MICab/MICa+MICba/MICb，其中MICa，MICb分别是a和b单独用药时的MIC值，MICab和MICba分别是a和b联合用药时a药的MIC值和b药的MIC值。药物协同性的评价标准：FICI≤0.5，协同作用；0.5<FICI≤1，相加作用；1<FICI≤2，无关作用；FICI>2，拮抗作用。结果见图1-4。
从图1中可以看出，硝唑尼特浓度为256μg/mL，美罗培南浓度为64μg/mL联合作用下对MCR-1和NDM-5阳性鸡源大肠杆菌具有协同抑菌作用。从图2中可以看出，硝唑尼特浓度为128μg/mL，多黏菌素E浓度为1μg/mL联合作用下对MCR-1和NDM-5阳性鸡源大肠杆菌具有协同抑菌作用。从图3中可以看出，FICI＞0.5，硝唑尼特与美罗培南对不含MCR-1或NDM-5鸡源大肠杆菌无协同抑菌作用。从图4中可以看出，FICI＞0.5，硝唑尼特与多黏菌素E对不含MCR-1或NDM-5鸡源大肠杆菌无协同抑菌作用。
实施例2
硝唑尼特与多黏菌素E或美罗培南联合用药时间-杀菌曲线。
本实施例研究了硝唑尼特联合用药对MCR-1、NDM-5以及MCR-1和NDM-5阳性菌菌落计数。
具体步骤如下：
(1)将生长至对数期的菌液分为四组(空白对照组、抗生素单药组1/4×MIC、硝唑尼特单药组1/4×MIC、联合用药组1/4×MIC抗生素+1/4×MIC硝唑尼特)，37℃摇床孵育。
(2)分别在0h、4h、8h、12h、24h的时间点取样进行计数。方法如下：取6支2mL的EP管，依次编号10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6，向6支EP管中均加入900μL无菌PBS，在上述时间点取样100μL菌液加入到10-1管中，依次倍比稀释到10-6管，然后将每个稀释度的菌液取20μL滴在LB平板上，用一次性涂布棒均匀地涂布，重复涂3个，每个平板做好编号及稀释度标记。待菌液渗入到培养基表层内后，将平板于37℃恒温培养箱中倒置培养24h后进行计数。
(3)取菌落数在30～300的平板进行计数，算出同一稀释度的三个平板上的平均菌落数，根据平均菌落数计算菌液浓度。原菌液浓度(CFU/mL)＝平均菌落数×稀释度×50。协同作用定义为在24h联合用药比单药中最有效的药物载菌量减少≥2log10 CFU/mL。结果见图5-8。
从图5中可以看出，硝唑尼特和美罗培南联合用药组与其他组相比载菌量减少超过2log10 CFU/mL，对含有MCR-1和NDM-5阳性的鸡源大肠杆菌具有联合杀菌作用。从图6中可以看出，硝唑尼特和多黏菌素E联合用药组与其他组相比载菌量减少超过2log10 CFU/mL，对含有MCR-1和NDM-5阳性的鸡源大肠杆菌具有联合杀菌作用。从图7中可以看出，硝唑尼特和美罗培南联合用药组与其他组相比载菌量减少不超过2log10 CFU/mL，对不含MCR-1和NDM-5阳性的鸡源大肠杆菌不具有联合杀菌作用。从图8中可以看出，硝唑尼特和多黏菌素E联合用药组与其他组相比载菌量减少不超过2log10 CFU/mL，对不含MCR-1和NDM-5阳性的鸡源大肠杆菌不具有联合杀菌作用。
实施例3
硝唑尼特与多黏菌素E或美罗培南联合作用对总抗氧化能力(ROS)的影响。
本实施例研究了硝唑尼特联合用药对MCR-1、NDM-5以及MCR-1和NDM-5阳性菌ROS的影响。
具体方法如下：
(1)将生长至对数期的菌液与10μM DCFH-DA在37℃黑暗中培养约30min。
(2)用PBS(pH＝7.4)清洗混合***两次，以去除未能进入到细菌中的探针。
(3)将装载探针的菌悬液进行不同药物组合的处理(空白对照组、抗生素单药组1/4×MIC、硝唑尼特单药组1/4×MIC、联合用药组1/4×MIC抗生素+1/4×MIC硝唑尼特)。
(4)37℃孵育1h后酶标仪测量荧光强度，激发波长为488nm，发射波长为525nm。每个样品平行设定3个重复孔，各组间显著性差异采用SPSS19.0软件进行单因素方差分析(one-wayANOVA)。结果见图9-11。
从图9中可以看出，在硝唑尼特的处理下，DCFH-DA荧光强度显著上升，MCR-1和NDM-5阳性鸡源大肠杆菌细胞的ROS水平显著上升。从图10中可以看出，在硝唑尼特和美罗培南的联合处理下，DCFH-DA荧光强度显著上升，MCR-1和NDM-5阳性鸡源大肠杆菌细胞的ROS水平显著上升。从图11中可以看出，在硝唑尼特和多黏菌素E的联合处理下，DCFH-DA荧光强度显著上升，MCR-1和NDM-5阳性鸡源大肠杆菌细胞的ROS水平显著上升。
实施例4
硝唑尼特与多黏菌素E或美罗培南联合作用对细菌内外膜的影响。
本实施例研究了硝唑尼特联合用药对MCR-1、NDM-5以及MCR-1和NDM-5阳性菌内膜和外膜的完整性影响。
方法如下：
(1)将生长至对数期的菌液12000rpm离心2min，洗涤并重悬于PBS缓冲液中，调OD600＝0.5。
(2)向重悬菌液中加入终浓度为10μM的NPN染料(外膜探针)/10μM的PI染料(内膜探针)，并于37℃恒温培养箱中孵育30min；
(3)然后加入不同药物试验组(空白对照组、抗生素单药组1/4×MIC、硝唑尼特单药组1/4×MIC、联合用药组1/4×MIC抗生素+1/4×MIC硝唑尼特)，于37℃恒温培养箱中继续孵育30min。随后加入200μL荧光探针装载的菌液于96孔黑色酶标板中，立即测定荧光强度。
(4)PI染料：激发波长为535nm，发射波长为615nm。NPN染料：激发波长为350nm，发射波长为420nm。每个样品平行设定3个重复孔，各组间显著性差异采用SPSS19.0软件进行单因素方差分析(one-wayANOVA)。结果见图12-17。
从图12中可以看出，在硝唑尼特的处理下，NPN荧光强度无显著变化，硝唑尼特对MCR-1和NDM-5阳性鸡源大肠杆菌外膜无影响。从图13中可以看出，在硝唑尼特和美罗培南的联合处理下，NPN荧光强度无显著变化，硝唑尼特对MCR-1和NDM-5阳性鸡源大肠杆菌外膜无影响。从图14中可以看出，在硝唑尼特和多黏菌素E的联合处理下，NPN荧光强度无显著变化，硝唑尼特对MCR-1和NDM-5阳性鸡源大肠杆菌外膜无影响。从图15中可以看出，在硝唑尼特的处理下，PI荧光强度显著上升，硝唑尼特对MCR-1和NDM-5阳性鸡源大肠杆菌内膜有影响。从图16中可以看出，在硝唑尼特和美罗培南的联合处理下，PI荧光强度显著上升，硝唑尼特对MCR-1和NDM-5阳性鸡源大肠杆菌内膜有影响。从图17中可以看出，在硝唑尼特和多黏菌素E的联合处理下，PI荧光强度无显著变化，硝唑尼特对MCR-1和NDM-5阳性鸡源大肠杆菌内膜无影响。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。
Claims (1)
1.硝唑尼特联合美罗培南在制备抗NDM-5阳性菌株增效剂中的应用；
所述硝唑尼特与美罗培南的质量比为4:1。
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| CN116585309A (zh) * | 2023-05-18 | 2023-08-15 | 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心) | 硝唑尼特及衍生物在制备多粘菌素抗菌增效剂中的应用、药物组合物及杀菌方法 |
Non-Patent Citations (1)
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|---|
| In Vitro Activities of 15 Antimicrobial Agents against 110 Toxigenic Clostridium difficile Clinical Isolates Collected from 1983 to 2004;David W. Hecht等;ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY;第51卷(第8期);摘要 * |
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