CN117050174B - 针对再生胰岛衍生蛋白3a的抗体组合以及包含其的检测试剂盒 - Google Patents

针对再生胰岛衍生蛋白3a的抗体组合以及包含其的检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种可用于基于ELISA检测再生胰岛衍生蛋白3A（REG3A）的抗体组合。本发明提供的抗体组合中的每个抗体均能够以高亲和力特异性结合REG3A，且可形成双抗体夹心模式，从而能够对人REG3A进行定性和定量检测。相应地，本发明还提供一种包含所述抗体组合的ELISA检测试剂盒。

Description

针对再生胰岛衍生蛋白3A的抗体组合以及包含其的检测试 剂盒
技术领域
本发明涉及生物检测领域，具体而言，本发明涉及一种可用于检测生物学样本中REG3A的抗体组合以及包含其的试剂盒。
背景技术
再生胰岛衍生蛋白3A（Regenerating islet-derived protein III-alpha，REG3A）属于REG蛋白家族，是一种分泌型的钙依赖型凝集素蛋白。REG3A的分子量为19kDa，全长175个氨基酸，包括信号肽（1-26aa）、前肽（27-37aa）、C型凝集素样结构域（47-173aa）。
已知REG3A在抗炎、抗菌、细胞增殖、细胞凋亡、组织修复等中具有多种作用。在人体多种组织中可见REG3A表达，包括胰腺、小肠、肝脏、皮肤和胃肠道等。但是，这种蛋白在健康组织（包括胰腺和皮肤）中检测到的水平很低，而在组织损伤中则高表达。近来越来越多的证据表明糖尿病、炎症性肠病（IBD）和癌症患者中具有不同程度的REG3A表达。也正因为此，针对REG3A与不同疾病类型之间的关联性已经开展了大量研究。已有研究表明，REG3A的mRNA/protein表达在胃、肠、胰腺的炎症或癌症中以及IBD炎症性肠病中均显著升高，由此REG3A具有重要的临床检测意义。
双抗体夹心ELISA具有操作简单、高效、可靠、适用于大批样本快速筛选的优势，尤其基于单克隆抗体的双夹心ELISA较基于多克隆抗体更稳定，特异性更强。因此，可以尝试针对生物学样本（诸如血清）中REG3A，开发能够特异性结合REG3A且使其得到有效检测的抗体或抗体组合，从而用于制备可定性或定量检测生物学样本中REG3A存在或浓度的检测或诊断试剂。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种能够以高灵敏和特异性检测血清中REG3A存在或浓度的新型试剂与方法。
具体地，本发明的目的是提供一种靶向再生胰岛衍生蛋白3A（REG3A）不同表位的抗体组合，该抗体组合中的每个抗体需以高亲和力和特异性结合人REG3A，且可形成双抗体夹心模式，从而能够对REG3A进行定性和定量检测。
基于上述抗体组合，本发明的另一个目的是提供包含所述抗体组合的ELISA试剂盒，例如双抗体夹心ELISA试剂盒，用于待测样本中REG3A的定性和定量检测。
本发明的技术方案如下。
一方面，本发明提供一种抗体组合，所述抗体组合包括：
(i)抗体1，所述抗体1包含重链（HC）和轻链（LC），其中所述重链包含SEQ ID NO. 5所示的重链CDR1（H-CDR1）、SEQ ID NO. 6所示的重链CDR2（H-CDR2）和SEQ ID NO. 7所示的重链CDR3（H-CDR3），所述轻链包含SEQ ID NO. 11所示的轻链CDR1（L-CDR1）、SEQ ID NO.12所示的轻链CDR2（L-CDR2）和SEQ ID NO. 13所示的轻链CDR3（L-CDR3）；和
(ii)抗体2，所述抗体2包含重链（HC）和轻链（LC），其中所述重链包含SEQ ID NO.17所示的重链CDR1（H-CDR1）、SEQ ID NO. 18所示的重链CDR2（H-CDR2）和SEQ ID NO. 19所示的重链CDR3（H-CDR3），所述轻链包含SEQ ID NO. 23所示的轻链CDR1（L-CDR1）、SEQ IDNO. 24所示的轻链CDR2（L-CDR2）和SEQ ID NO. 25所示的轻链CDR3（L-CDR3）。
在本发明的上下文中，所述抗体1和抗体2是能够特异性结合再生胰岛衍生蛋白3A（REG3A）的结合剂。
优选地，所述抗体1的重链包含重链可变区（VH），轻链包含轻链可变区（VL），并且所述抗体1的重链可变区包含SEQ ID NO. 8所示的氨基酸序列，轻链可变区包含SEQ IDNO. 14所示的氨基酸序列；和/或，所述抗体2的重链包含重链可变区（VH），轻链包含轻链可变区（VL），并且所述抗体2的重链可变区包含SEQ ID NO. 20所示的氨基酸序列，轻链可变区包含SEQ ID NO. 26所示的氨基酸序列。
优选地，所述抗体1和抗体2选自鼠抗体、嵌合抗体和人源化抗体。优选地，所述抗体1和抗体2选自单克隆抗体、Fab、Fv和ScFv等抗体形式。
优选地，在本发明提供的抗体组合中，所述抗体1和/或抗体2为单克隆抗体，其由两条重链和两条轻链组成，优选为鼠IgG1/Kappa同种型或鼠IgG2a/Kappa同种型。在这一方面，抗体的结构示意见图1。
根据本发明的具体实施方式，所述抗体1的重链包含SEQ ID NO. 1所示的氨基酸序列，轻链包含SEQ ID NO. 2所示的氨基酸序列；和/或，所述抗体2的重链包含SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列，轻链包含SEQ ID NO. 4所示的氨基酸序列。
根据本发明的具体实施方式，所述抗体1和/或抗体2带有可检测标记。优选地，抗体2带有可检测标记。所述可检测标记例如酶标记（例如辣根过氧化物酶）、放射性标记、发光标记、显色标记、半抗原（例如地高辛、生物素）、金属络合物和金属（例如胶体金）。
另一方面，本发明提供所述抗体组合在制备用于检测再生胰岛衍生蛋白3A（REG3A）的试剂中的用途。或者，本发明提供所述抗体组合在制备用于辅助诊断再生胰岛衍生蛋白3A（REG3A）相关疾病的试剂或用于预测再生胰岛衍生蛋白3A（REG3A）相关疾病患病风险的试剂中的用途。优选地，在本发明的上下文中，所述再生胰岛衍生蛋白3A（REG3A）为人再生胰岛衍生蛋白3A（REG3A）（Genbank Acc. No.: NM_002580）。
在本发明的上下文中，所述REG3A相关疾病的特征在于REG3A表达升高。优选地，所述REG3A相关疾病为消化***疾病。优选地，所述疾病为消化道疾病，例如1期、2期、3期或4期肠癌；胃癌；胰腺炎；消化性溃疡；炎症性肠病。
在本发明的上下文中，所述试剂可以是能够检测来自受试者的生物学样本中REG3A存在或浓度的试剂。在本发明的上下文中，“浓度”是指所述蛋白在生物学样本中的可检测到的量，并且在本文中，“浓度”可与“水平”或“量”互换使用。根据本发明的具体实施方式，REG3A的存在或浓度在全血、血清或血浆中检测得到。
上述检测结果可以用于辅助诊断所述受试者是否患有再生胰岛衍生蛋白3A（REG3A）相关疾病，或者用于预测所述受试者是否处于罹患所述相关疾病的风险。在本发明的上下文中，所述受试者是哺乳动物，优选为灵长类动物，更优选人；所述生物学样本为选自来自受试者的全血、血浆、血清、血细胞、腹水、淋巴液、唾液、痰液、汗液、尿液、粘液、间质液、组织活检和细胞中的一种或多种，优选全血、血清或血浆。
优选地，所述试剂可用于选自以下的检测方法：化学发光免疫分析法、免疫比浊、酶联免疫吸附测定（ELISA）、蛋白质印迹（Western blotting）、抗体微阵列、免疫沉淀、放射免疫测定（RIA）等。优选地，所述试剂为用于ELISA的检测试剂，例如用于双抗体夹心ELISA的检测试剂，其中所述ELISA用于检测全血、血清或血浆中的再生胰岛衍生蛋白3A。优选地，在所述ELISA中，所述抗体1作为捕获抗体（包被抗体），所述抗体2作为检测抗体。
另一方面，本发明还提供一种试剂盒，所述试剂盒包含本发明所述的抗体组合。
所述试剂盒用于检测来自受试者的生物学样本中REG3A的存在或浓度，因此能够用于辅助诊断所述受试者是否患有再生胰岛衍生蛋白3A（REG3A）相关疾病，或者预测所述受试者是否处于罹患所述相关疾病的风险。优选地，所述再生胰岛衍生蛋白3A为人再生胰岛衍生蛋白3A。所述受试者是哺乳动物，优选为灵长类动物，更优选人；所述生物学样本为选自来自受试者的全血、血浆、血清、血细胞、腹水、淋巴液、唾液、痰液、汗液、尿液、粘液、间质液、组织活检和细胞中的一种或多种，优选全血、血清或血浆。所述REG3A相关疾病的特征在于REG13A表达升高。优选地，所述REG3A相关疾病为消化***疾病。优选地，所述疾病为消化道疾病，例如1期、2期、3期或4期肠癌；胃癌；胰腺炎；消化性溃疡；炎症性肠病。
所述试剂盒可用于选自以下的检测方法：化学发光免疫分析法、免疫比浊、酶联免疫吸附测定（ELISA）、蛋白质印迹（Western blotting）、抗体微阵列、免疫沉淀、放射免疫测定（RIA）等。优选地，所述试剂盒为ELISA检测试剂盒，例如双抗体夹心ELISA检测试剂盒，所述检测试剂盒包含本发明所述的抗体组合。优选地，所述ELISA检测试剂盒包括所述抗体1作为捕获抗体，包括所述抗体2作为检测抗体。优选地，抗体2带有可检测标记。所述可检测标记例如酶标记（例如辣根过氧化物酶）、放射性标记、发光标记、显色标记、半抗原（例如地高辛、生物素）、金属络合物和金属（例如胶体金）。
更优选地，所述检测试剂盒还包括采用ELISA检测生物学样本中REG3A的存在或浓度所需的其他试剂。例如，所述检测试剂盒还包括以下中的一种或多种，甚至全部：再生胰岛衍生蛋白3A的校准品和/或质控品；抗体稀释液；洗涤液；封闭液；待测样本稀释液；酶标板；显色液；终止液。
还一方面，本发明提供一种检测来自受试者的生物学样本中再生胰岛衍生蛋白3A（REG3A）的方法，所述方法包括：采用本发明所述的抗体组合或试剂盒，检测来自受试者的生物学样本中再生胰岛衍生蛋白3A的存在或浓度。
或者，本发明提供一种用于辅助诊断再生胰岛衍生蛋白3A（REG3A）相关疾病的方法或用于预测再生胰岛衍生蛋白3A（REG3A）相关疾病患病风险的方法，所述方法包括：采用本发明所述的抗体组合或试剂盒，检测来自受试者的生物学样本中再生胰岛衍生蛋白3A的浓度。并且，所述方法还包括，将检测到的再生胰岛衍生蛋白3A的浓度与参考水平相比较，在所述生物学样本中REG3A的更高浓度指示着所述受试者患有再生胰岛衍生蛋白3A（REG3A）相关疾病或处于罹患再生胰岛衍生蛋白3A（REG3A）相关疾病的风险。
在这一方面，再生胰岛衍生蛋白3A（REG3A）、REG3A相关疾病、受试者、生物学样本、检测方法等等，如上文所定义。
在本发明提供的上述方法中，所述参考水平是指就再生胰岛衍生蛋白3A（REG3A）在生物学样本中的浓度而言，通过对健康人群和疾病人群的ROC分析和临床需求的综合考虑而确定的值。
根据本发明的具体实施方式，所述方法采用本发明提供的ELISA检测试剂盒，例如双抗体夹心ELISA检测试剂盒进行。根据本发明的具体实施方式，可包括以下步骤：
(1)在酶标板上包被捕获抗体（抗体1），并封闭；
(2)稀释待测样本；
(3)分别向酶标板的不同板孔中加入待测样本，可选地加入校准品和/或质控品，再加入经标记的检测抗体（抗体2），孵育；
(4)洗板；
(5)针对检测抗体上的标记进行检测，例如显色；
(6)终止反应；
(7)读取结果，例如OD值；
(8)以校准品浓度为横坐标，以校准品的检测结果例如OD值为纵坐标，制作标准曲线，然后基于待测样本的检测结果计算样本中再生胰岛衍生蛋白1α的浓度。
具体而言，本发明提供一种针对人再生胰岛衍生蛋白3A（REG3A）的抗体组合，该抗体组合中的每个抗体能够以高亲和力和特异性结合REG3A，且结合该蛋白的不同表位，因此可形成双抗体夹心模式，从而可组合用于REG3A的定性和定量检测。相应地，本发明还提供一种采用该抗体组合的ELISA检测方法以及相应的检测试剂盒。
实验证明，本发明提供的抗体1（捕获抗体）和抗体2（检测抗体）配对能够在血清中准确、特异地定性和定量检测人REG3A。本发明的发明人利用包括来自1期至4期肠癌、胃癌、胰腺炎、消化性溃疡、炎症性肠病患者在内的大量血清样本进行了验证。结果表明，采用本发明提供的抗体组合，进行双抗体夹心ELISA，对患者血清样本的检测灵敏度可达到70%以上，检测结果非常准确，证明本发明的抗体组合以及基于该抗体组合的ELISA（例如双抗体夹心ELISA）检测方法与试剂盒具有良好的临床应用价值。
附图说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1为本发明提供的抗体组合中抗体为单克隆抗体时的结构示意图。
图2A至图2E为根据不同血清样本中REG3A检测结果绘制的ROC曲线，其中：
图2A：表观健康vs肠癌ROC曲线；
图2B：表观健康vs胃癌ROC曲线；
图2C：表观健康vs胰腺炎ROC曲线；
图2D：表观健康vs消化性溃疡ROC曲线；
图2E：表观健康vs炎症性肠病ROC曲线。
具体实施方式
以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。
实施例中采用的人REG3A重组蛋白为根据（Genbank Acc. No.: NM_002580，27-173aa）重组制备得到。
实施例1 再生胰岛衍生蛋白3A（REG3A）的单克隆抗体的获得
免疫：用人REG3A重组蛋白，采用皮下多点注射的方式对小鼠进行3~4次免疫。免疫后取少量小鼠血液样本进行效价测定，选择效价高的小鼠脾脏进行下一步融合。
细胞融合：取小鼠脾细胞，研磨后过细胞筛，离心并用培养液清洗，然后制成脾淋巴细胞悬液；将骨髓瘤细胞与脾细胞按一定比例混合，加入融合剂使二者进行融合。
筛选：用HAT选择培养液培养，筛选出杂交瘤细胞，同时用ELISA测定培养上清液，筛选出能产生特异性识别人REG3A的抗体的杂交瘤细胞。将筛选得到的阳性杂交瘤细胞用有限稀释法进行克隆，得到稳定的单克隆杂交瘤细胞。
抗体生产：取选定的杂交瘤细胞进行扩大培养，取培养上清液，采用亲和层析的方式进行纯化，得到单克隆抗体。
获得5株单克隆抗体，经检验为鼠IgG1/Kappa同种型或鼠IgG2a/Kappa同种型，抗体信息见表1，结构见图1。
实施例2 单克隆抗体的效价测定
用50mmol/L pH9.6的碳酸缓冲液将人REG3A重组蛋白配制成1μg/mL的包被液，以100μL/孔加入酶标板中，2-8℃包被过夜（16-20h）。
以250μL/孔向上述酶标板中加入封闭液（10mmol/L pH7.4磷酸盐缓冲液+1%牛血清白蛋白+0.05%吐温20），37℃孵育2h，结束后弃掉酶标板中的剩余溶液。
用稀释液（10mmol/L pH7.4磷酸盐缓冲液+0.5%牛血清白蛋白+0.05%吐温20+0.1%Proclin300）将实施例1中获得的5株单克隆抗体分别稀释至1000ng/mL，然后再倍比稀释，将稀释液以100μL/孔加入上述酶标板中，37℃孵育1h，结束后洗板3次。
以100μL/孔向上述酶标板中加入HRP标记的羊抗鼠抗体（购自ThermoScientific，货号：31430）稀释液，37℃孵育1h，结束后洗板3次。
以100μL/孔向上述酶标板中加入TMB底物液，37℃孵育15min，然后以50μL/孔加入0.2mol/L硫酸，终止反应；用酶标仪在主波长450nm、副波长620nm下读数。
实验结果如表2所示，表明5株抗体均能有效识别人REG3A重组蛋白，效价为512000或＞512000。
实施例3 单克隆抗体在经HRP标记后的效价测定
采用过碘酸钠法分别对实施例1中获得的5株单克隆抗体进行HRP标记。
用50mmol/L pH9.6的碳酸缓冲液将人REG3A重组蛋白配制成1μg/mL的包被液，以100μL/孔加入酶标板中，2-8℃包被过夜（16-20h）。
以250μL/孔向上述酶标板中加入封闭液（10mmol/L pH7.4磷酸盐缓冲液+1%牛血清白蛋白+0.05%吐温20），37℃孵育2h，结束后弃掉酶标板中的剩余溶液。
用稀释液（10mmol/L pH7.4磷酸盐缓冲液+0.5%牛血清白蛋白+0.05%吐温20+0.1%Proclin300）将5株经HRP标记的单克隆抗体分别稀释1000倍，然后再倍比稀释，将稀释液以100μL/孔加入上述酶标板中，37℃孵育1h，结束后洗板3次。
以100μL/孔向上述酶标板中加入TMB底物液，37℃孵育15min，然后以50μL/孔加入0.2mol/L硫酸，终止反应；然后用酶标仪在主波长450nm、副波长620nm下读数。
实验结果如表3所示，表明单克隆抗体10G9H12和13C1C4进行HRP标记后亲和力变差，无法使用；11C2A10标记HRP后效价最高，26A12C11和6C12F8效价略低，但可以使用。
由此确定，单克隆抗体11C2A10、26A12C11和6C12F8经HRP标记后可作为检测抗体与其他抗体进行配对。
实施例4 捕获抗体与检测抗体的筛选与验证
将实施例1中获得的5个单克隆抗体作为捕获抗体，分别与HRP标记的单克隆抗体配对，测定对抗原人REG3A重组蛋白的检测效果。
用50mmol/L pH9.6的碳酸缓冲液将5株抗体分别配制成1μg/mL的包被液，然后分别以100μL/孔加入酶标板中，2-8℃包被过夜（16-20h），结束后洗板2次，拍干。
以250μL/孔向上述酶标板中加入封闭液（10mmol/L pH7.4磷酸盐缓冲液+1%牛血清白蛋白+0.05%吐温20），37℃孵育2h，结束后弃掉酶标板中的剩余溶液。
将人REG3A重组蛋白在抗原稀释液（10mmol/L pH7.4 磷酸盐缓冲液+0.5%牛血清白蛋白+0.1%2-氯乙酰氨+0.1%4-乙酰氨基酚+0.1%曲拉通X100+0.1%Proclin300）中稀释为浓度500ng/mL，然后以100μL/孔加入到上述酶标板中，37℃孵育1h，结束后洗板3次。
以100μL/孔向酶标板中分别加入检测抗体11C2A10-HRP、26A12C11-HRP和6C12F8-HRP，37℃孵育1h，结束后洗板3次。
以100μL/孔向上述酶标板中加入TMB底物液， 37℃孵育15min，然后以50μL/孔加入0.2mol/L硫酸，终止反应；用酶标仪在主波长450nm、副波长620nm下读数。
实验结果如表4所示，表明“捕获抗体13C1C4+检测抗体11C2A10-HRP”为最佳抗体对。
对单克隆抗体13C1C4和11C2A10进行测序，得到抗体序列。
(1) 13C1C4
(1-1) 重链（SEQ ID NO. 1（去掉信号肽））：
MAVLGLLFCLVTFPSCVLSQVQLRQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLS RYGVH WVRQSPGKGLEWLG V IWSGGSTDYNAVFIS RLSITKDNSKSQVFFKMNSLQVNDTAIYYCAR GGNWYFDV WGAGTTVTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK
(1-2) 轻链（SEQ ID NO. 2（去掉信号肽））：
MRVLAELLGLLLFCFLGVRCDIQMNQSPSSLSASLGDTITITC HASQNINVWLS WYQQKPGNIPKLLIY KASRLHT GVPSRFSGSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYC QQGQSYPLT FGAGTKLELKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
(2) 11C2A10
(2-1) 重链（SEQ ID NO. 3（去掉信号肽））：
MEWSWIFLFLLSGTAGVHSEVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFT RFLMH WVKQKPGQGLEWIG Y INPYNDGTNYNEKFKG KATLTSDKSSSAAYMELSSLTSEDSAVYYCAR DWYFDY WGQGTTLTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
(2-2) 轻链（SEQ ID NO. 4（去掉信号肽））：
METDTLLLWVLLLWVPGSTGDIVLTQSPASLAVSLGQRATISC RTSESVDSYGNSFMH WYQQKPGQPPK LLIY RASNLES GIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYYC QQSNEEPYM FGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
实施例5 采用捕获抗体13C1C4+检测抗体11C2A10-HRP对不同样本中REG3A的检测
从中山大学附属肿瘤医院和南方医科大学珠江医院获得血清样本，该血清样本来自如下如同人群：715例表观健康者，2034例肠癌患者（其中1期366例，2期714例，3期585例，4期369例），67例胃癌患者，33例胰腺炎患者，109例消化性溃疡患者，以及79例炎症性肠病患者。
采用捕获抗体13C1C4+检测抗体11C2A10-HRP组合制成ELISA试剂盒，检测上述血清样本。以表观健康者为对照组，分别和各个疾病组数据进行对比，并做ROC分析。结果表明，疾病组的血清REG3A含量和表观健康组有显著差异（P值＜0.0001）。根据ROC分析结果，计算约登指数，得到推荐阳性参考值以及相应的诊断灵敏度和诊断特异性。结果如表5、图2A至图2E所示。
以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。

Claims (38)

1.一种抗体组合，所述抗体组合包括：
(i)抗体1，所述抗体1包含重链（HC）和轻链（LC），其中所述重链包含重链CDR1（H-CDR1）、重链CDR2（H-CDR2）和重链CDR3（H-CDR3），所述重链CDR1如SEQ ID NO. 5所示，所述重链CDR2如SEQ ID NO. 6所示，和所述重链CDR3如SEQ ID NO. 7所示；所述轻链包含轻链CDR1（L-CDR1）、轻链CDR2（L-CDR2）和轻链CDR3（L-CDR3），所述轻链CDR1如SEQ ID NO. 11所示，所述轻链CDR2如SEQ ID NO. 12所示，和所述轻链CDR3如SEQ ID NO. 13所示；和
(ii)抗体2，所述抗体2包含重链（HC）和轻链（LC），其中所述重链包含重链CDR1（H-CDR1）、重链CDR2（H-CDR2）和重链CDR3（H-CDR3），所述重链CDR1如SEQ ID NO. 17所示，所述重链CDR2如SEQ ID NO. 18所示，和所述重链CDR3如SEQ ID NO. 19所示；所述轻链包含轻链CDR1（L-CDR1）、轻链CDR2（L-CDR2）和轻链CDR3（L-CDR3），所述轻链CDR1如SEQ ID NO. 23所示，所述轻链CDR2如SEQ ID NO. 24所示，和所述轻链CDR3如SEQ ID NO. 25所示。
2.根据权利要求1所述的抗体组合，其特征在于，所述抗体1和抗体2是能够特异性结合再生胰岛衍生蛋白3A（REG3A）的结合剂。
3. 根据权利要求1所述的抗体组合，其特征在于，所述抗体1的重链包含重链可变区（VH），轻链包含轻链可变区（VL），并且所述抗体1的重链可变区包含SEQ ID NO. 8所示的氨基酸序列，轻链可变区包含SEQ ID NO. 14所示的氨基酸序列；和，
所述抗体2的重链包含重链可变区（VH），轻链包含轻链可变区（VL），并且所述抗体2的重链可变区包含SEQ ID NO. 20所示的氨基酸序列，轻链可变区包含SEQ ID NO. 26所示的氨基酸序列。
4.根据权利要求3所述的抗体组合，其特征在于，所述抗体1和抗体2选自鼠抗体、嵌合抗体和人源化抗体。
5.根据权利要求3所述的抗体组合，其特征在于，所述抗体1和抗体2选自单克隆抗体、Fab、Fv和ScFv的抗体形式。
6.根据权利要求5所述的抗体组合，其特征在于，所述抗体1和抗体2均为单克隆抗体，所述单克隆抗体由两条相同的重链和两条相同的轻链组成。
7.根据权利要求6所述的抗体组合，其特征在于，所述抗体1和抗体2均为鼠IgG1/Kappa同种型或鼠IgG2a/Kappa同种型。
8. 根据权利要求6所述的抗体组合，其特征在于，所述抗体1的重链包含SEQ ID NO. 1所示的氨基酸序列，轻链包含SEQ ID NO. 2所示的氨基酸序列；和，所述抗体2的重链包含SEQ ID NO. 3所示的氨基酸序列，轻链包含SEQ ID NO. 4所示的氨基酸序列。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的抗体组合，其特征在于，所述抗体1或抗体2带有可检测标记。
10.根据权利要求9所述的抗体组合，其特征在于，所述抗体2带有可检测标记。
11.根据权利要求10所述的抗体组合，其特征在于，所述可检测标记为酶标记、放射性标记、发光标记、显色标记、半抗原、金属络合物或金属。
12.根据权利要求11所述的抗体组合，其特征在于，所述酶标记为辣根过氧化物酶。
13.根据权利要求11所述的抗体组合，其特征在于，所述半抗原为地高辛或生物素。
14.根据权利要求11所述的抗体组合，其特征在于，所述金属为胶体金。
15.权利要求1至14中任一项所述的抗体组合在制备用于检测再生胰岛衍生蛋白3A（REG3A）的试剂中的用途。
16.权利要求1至14中任一项所述的抗体组合在制备用于辅助诊断再生胰岛衍生蛋白3A（REG3A）相关疾病的试剂中的用途或用于预测再生胰岛衍生蛋白3A（REG3A）相关疾病患病风险的试剂中的用途。
17.根据权利要求15或16所述的用途，其特征在于，所述再生胰岛衍生蛋白3A为人再生胰岛衍生蛋白3A。
18.根据权利要求16所述的用途，其特征在于，所述REG3A相关疾病的特征在于REG3A表达升高。
19.根据权利要求18所述的用途，其特征在于，所述REG3A相关疾病为消化***疾病。
20.根据权利要求19所述的用途，其特征在于，所述消化***疾病为消化道疾病。
21.根据权利要求20所述的用途，其特征在于，所述消化道疾病为1期、2期、3期或4期肠癌；胃癌；胰腺炎；消化性溃疡；炎症性肠病。
22. 根据权利要求15或16所述的用途，其特征在于，所述试剂用于选自以下的检测方法：化学发光免疫分析法、免疫比浊、酶联免疫吸附测定（ELISA）、蛋白质印迹（Westernblotting）、抗体微阵列、免疫沉淀和放射免疫测定（RIA）。
23.根据权利要求22所述的用途，其特征在于，所述试剂为用于ELISA的检测试剂。
24.根据权利要求23所述的用途，其特征在于，所述检测试剂为用于双抗体夹心ELISA的检测试剂。
25.根据权利要求23或24所述的用途，其特征在于，所述ELISA用于检测全血、血清或血浆中的再生胰岛衍生蛋白3A。
26.根据权利要求25所述的用途，其特征在于，在所述ELISA中，所述抗体1作为捕获抗体，所述抗体2作为检测抗体。
27.一种试剂盒，所述试剂盒包含权利要求1至14中任一项所述的抗体组合。
28. 根据权利要求27所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒为用于选自以下的检测方法的试剂盒：化学发光免疫分析法、免疫比浊、酶联免疫吸附测定（ELISA）、蛋白质印迹（Western blotting）、抗体微阵列、免疫沉淀和放射免疫测定（RIA）。
29.根据权利要求28所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒为ELISA检测试剂盒。
30.根据权利要求29所述的试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒为双抗体夹心ELISA检测试剂盒。
31.根据权利要求30所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括所述抗体1作为捕获抗体，包括所述抗体2作为检测抗体。
32.根据权利要求31所述的试剂盒，其特征在于，所述抗体2带有可检测标记。
33.根据权利要求32所述的试剂盒，其特征在于，所述可检测标记为酶标记、放射性标记、发光标记、显色标记、半抗原、金属络合物或金属。
34.根据权利要求33所述的试剂盒，其特征在于，所述酶标记为辣根过氧化物酶。
35.根据权利要求33所述的试剂盒，其特征在于，所述半抗原为地高辛或生物素。
36.根据权利要求33所述的试剂盒，其特征在于，所述金属为胶体金。
37.根据权利要求27至36中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括采用ELISA检测生物学样本中REG3A的存在或浓度所需的其他试剂。
38.根据权利要求37所述的试剂盒，其特征在于，所述其他试剂为以下中的一种或多种：
再生胰岛衍生蛋白3A校准品和/或质控品；抗体稀释液；洗涤液；封闭液；待测样本稀释液；酶标板；显色液；终止液。
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