CN116920006A - 一种南非叶提取物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及食品、保健品或药品领域，具体涉及一种南非叶提取物及其应用，所述南非叶提取物的制备方法包括如下步骤：1)粉碎；2)提取；3)过柱纯化；4)浓缩干燥：将步骤3)的体积分数为40％的乙醇洗脱液真空干燥，得到所述南非叶提取物。本发明提供的南非叶提取物或其组合物具有抗病毒的功效，具有开发为抗病毒功能产品的前景和优势，可用于制备抗病毒的药物。
Description
【技术领域】
本发明涉及食品、保健品或药品领域，具体涉及一种南非叶提取物及其应用。
【背景技术】
南非叶为菊科斑鸠菊属植物扁桃斑鸠菊(Vernoniaamygdalina Del.)的叶。扁桃斑鸠菊别名桃叶斑鸠菊、杏叶斑鸠菊、神奇叶、尖尾凤、肝连、苦树、苦胆叶，苦叶、苦茶叶、南非树等。
南非叶中主要的化学成分是黄酮和多酚类化合物。黄酮是一类植物次生代谢产物，具有很强的抗氧化和抗炎作用。多酚类化合物是植物中常见的化合物，具有抗氧化、抗炎、抗菌等多种生物活性。这些化合物赋予南非叶一些药用性质，如抗炎、抗菌、镇痛等。
现有文献表明，南非叶的乙醇提取物和水提取物具有防治痛风的功效。(参考文献：CN105920066A扁桃斑鸠菊提取物的用途及其制备方法与制剂)。南非叶的30-95％的乙醇提取物还具有治疗糖尿病的功效(参考文献：CN104758334A南非叶及其提取物在治疗糖尿病药物中的应用)。南非叶的水提取物还具有防治肿瘤的功效(参考文献：佚名.含扁桃斑鸠菊提取物的药物防治肿瘤[J].国外医药：植物药分册,2005(5):219-219.)。
目前鲜有关于南非叶提取物抗病毒活性的研究报道。因此，本发明提供了一种南非叶提取物，并对其进行了抗病毒活性的探索。这将有助于有效开拓南非叶在食品、保健品或药品领域中的用途，为开发新的天然抗病毒药物和新型植物源抗病毒制剂奠定基础。
【发明内容】
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种南非叶提取物及其应用。本发明提供的南非叶提取物或其组合物具有抗病毒的功效，具有开发为抗病毒功能产品的前景和优势，可用于制备抗病毒的药物。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种南非叶提取物，所述南非叶提取物的制备方法包括如下步骤：
1)粉碎：取南非叶，粉碎至粗粉，备用；
2)提取：取步骤1)的粗粉，加入体积分数为60-70％的乙醇提取，得到提取液；将所述提取液回收乙醇，真空浓缩，得到浸膏；
3)过柱纯化：将步骤2)的浸膏加在聚酰胺柱上，依次用3-6BV的体积分数为10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％的乙醇溶液进行洗脱，收集体积分数为40％的乙醇洗脱液；
4)浓缩干燥：将步骤3)的体积分数为40％的乙醇洗脱液真空干燥，得到所述南非叶提取物。
进一步地，步骤2)为：取步骤1)的粗粉，加入粗粉总重6-15倍量的体积分数为60-70％的乙醇，在70-80℃条件下加热回流提取1-3次，每次45-90min，每次提取后滤过得到滤液，合并所得滤液，得到提取液；将所述提取液回收乙醇，70-80℃真空浓缩至原体积的1/6，得到浸膏。
进一步地，所述南非叶提取物中，水分≤6％。
本发明提供了上述南非叶提取物在制备抗病毒药物中的应用。
进一步地，所述病毒为乙肝病毒。
一种含有上述南非叶提取物的组合物，所述组合物由以下重量份的组分制得：
南非叶提取物：90-95份，小蓟提取物：5-10份。
进一步地，所述小蓟提取物的制备方法包括如下步骤：
取小蓟，粉碎，加入体积分数为80％的乙醇，回流提取，滤过得到滤液，滤液真空干燥得到所述小蓟提取物。
优选地，所述小蓟提取物的制备方法包括如下步骤：
取小蓟，粉碎，加入原料总重8-10倍量的体积分数为80％的乙醇，70-80℃回流提取两次，每次1-2小时，每次提取后滤过得到滤液，合并所得滤液，真空干燥至水分≤6％，得到所述小蓟提取物。
本发明还提供了上述组合物在制备抗病毒药物中的应用。
本发明还提供了一种抗病毒的制剂，由有效量的本发明的南非叶提取物和药学上可接受的载体组成。本领域技术人员可将所述南非叶提取物直接或间接加入药学上可接受的各种常用载体，如崩解剂、润滑剂、乳化剂、粘合剂等，以常规药物制剂方法，制成常用剂型如口服液、胶囊剂、涂剂、巴布剂、喷雾剂、注射剂、注射用冻干制剂、颗粒剂、片剂、丸剂、散剂或滴丸剂。所述制剂可以通过以下方式中的适合方式给药：口服、喷雾吸入、直肠给药、鼻腔给药、***给药、局部给药、非肠道给药如皮下、静脉、肌肉、腹膜内、鞘内、心室内、胸骨内或颅内注射或输入，或借助一种外植的储器用药，其中优选口服、肌注、腹膜内或静脉内用药方式。
综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
本发明提供的南非叶提取物的成分主要包括酚类等物质。经动物实验证明，本发明提供的南非叶提取物在体外对乙肝病毒具有显著的抑制作用，具有开发为抗病毒功能产品的前景和优势，可用于制备乙肝抗病毒治疗药物。
【具体实施方式】
实施例1
一种南非叶提取物，所述南非叶提取物的制备方法包括如下步骤：
1)粉碎：取南非叶，粉碎至粗粉，备用；
2)提取：取步骤1)的粗粉，加入粗粉总重10倍量的体积分数为65％的乙醇，在75℃条件下加热回流提取2次，每次60min，每次提取后滤过得到滤液，合并所得滤液，得到提取液；将所述提取液回收乙醇，75℃真空浓缩至原体积的1/6，得到浸膏；
3)过柱纯化：将步骤2)的浸膏加在聚酰胺柱上，依次用5BV的体积分数为10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％的乙醇溶液进行洗脱，收集体积分数为40％的乙醇洗脱液；
4)浓缩干燥：将步骤3)的体积分数为40％的乙醇洗脱液真空干燥至水分≤6％，得到所述南非叶提取物。
一种组合物，所述组合物由以下重量份的组分混合制得：
实施例1的南非叶提取物：92份，小蓟提取物：8份。
其中，所述小蓟提取物的制备方法包括如下步骤：
取小蓟，粉碎，加入原料总重9倍量的体积分数为80％的乙醇，75℃回流提取两次，每次1小时，每次提取后滤过得到滤液，合并所得滤液，真空干燥至水分≤6％，得到所述小蓟提取物。
实施例2
一种南非叶提取物，所述南非叶提取物的制备方法包括如下步骤：
1)粉碎：取南非叶，粉碎至粗粉，备用；
2)提取：取步骤1)的粗粉，加入粗粉总重6倍量的体积分数为60％的乙醇，在70℃条件下加热回流提取1次，时间为90min，提取后滤过得到提取液；将所述提取液回收乙醇，70℃真空浓缩至原体积的1/6，得到浸膏；
3)过柱纯化：将步骤2)的浸膏加在聚酰胺柱上，依次用3BV的体积分数为10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％的乙醇溶液进行洗脱，收集体积分数为40％的乙醇洗脱液；
4)浓缩干燥：将步骤3)的体积分数为40％的乙醇洗脱液真空干燥至水分≤6％，得到所述南非叶提取物。
一种组合物，所述组合物由以下重量份的组分混合制得：
实施例2的南非叶提取物：90份，小蓟提取物：10份。
其中，所述小蓟提取物的制备方法包括如下步骤：
取小蓟，粉碎，加入原料总重8倍量的体积分数为80％的乙醇，70℃回流提取两次，每次2小时，每次提取后滤过得到滤液，合并所得滤液，真空干燥至水分≤6％，得到所述小蓟提取物。
实施例3
一种南非叶提取物，所述南非叶提取物的制备方法包括如下步骤：
1)粉碎：取南非叶，粉碎至粗粉，备用；
2)提取：取步骤1)的粗粉，加入粗粉总重15倍量的体积分数为70％的乙醇，在80℃条件下加热回流提取3次，每次45min，每次提取后滤过得到滤液，合并所得滤液，得到提取液；将所述提取液回收乙醇，80℃真空浓缩至原体积的1/6，得到浸膏；
3)过柱纯化：将步骤2)的浸膏加在聚酰胺柱上，依次用6BV的体积分数为10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％的乙醇溶液进行洗脱，收集体积分数为40％的乙醇洗脱液；
4)浓缩干燥：将步骤3)的体积分数为40％的乙醇洗脱液真空干燥至水分≤6％，得到所述南非叶提取物。
一种组合物，所述组合物由以下重量份的组分混合制得：
实施例3的南非叶提取物：95份，小蓟提取物：5份。
其中，所述小蓟提取物的制备方法包括如下步骤：
取小蓟，粉碎，加入原料总重10倍量的体积分数为80％的乙醇，80℃回流提取两次，每次1小时，每次提取后滤过得到滤液，合并所得滤液，真空干燥至水分≤6％，得到所述小蓟提取物。
实施例4
一种南非叶提取物，所述南非叶提取物的制备方法包括如下步骤：
1)粉碎：取南非叶，粉碎至粗粉，备用；
2)提取：取步骤1)的粗粉，加入粗粉总重8倍量的体积分数为62％的乙醇，在78℃条件下加热回流提取2次，每次70min，每次提取后滤过得到滤液，合并所得滤液，得到提取液；将所述提取液回收乙醇，72℃真空浓缩至原体积的1/6，得到浸膏；
3)过柱纯化：将步骤2)的浸膏加在聚酰胺柱上，依次用4BV的体积分数为10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％的乙醇溶液进行洗脱，收集体积分数为40％的乙醇洗脱液；
4)浓缩干燥：将步骤3)的体积分数为40％的乙醇洗脱液真空干燥至水分≤6％，得到所述南非叶提取物。
一种组合物，所述组合物由以下重量份的组分混合制得：
实施例4的南非叶提取物：94份，小蓟提取物：6份。
其中，所述小蓟提取物的制备方法包括如下步骤：
取小蓟，粉碎，加入原料总重9倍量的体积分数为80％的乙醇，76℃回流提取两次，每次1小时，每次提取后滤过得到滤液，合并所得滤液，真空干燥至水分≤6％，得到所述小蓟提取物。
实施例5
南非叶提取物及其组合物的抗病毒试验
参照现有文献，本实施例采用HepG2.2.15细胞培养及中药血清药理学方法，研究了南非叶提取物、含有南非叶提取物的组合物、小蓟提取物在2.2.15细胞培养中对HBsAg和HBeAg的抑制作用。
1、样品
实施例1制备得到的南非叶提取物、含有南非叶提取物的组合物、小蓟提取物。
2、实验动物：Wistar大鼠，体重(250±20)g，雌雄各半，由广西中医药大学实验动物中心提供。
3、实验方法和结果
3.1HepG2.2.15的细胞培养
将HepG2.2.15细胞分装到培养皿中，用含有10％胎牛血清的DMEM培养液于37℃，5％CO2培养箱中培养至细胞达到对数生长期。
3.2含药血清的制备
实验设5组，包括空白对照组(给等容积生理盐水)、阳性对照组(阿昔洛韦100mg/kg)、南非叶提取物组(南非叶提取物100mg/kg)、含有南非叶提取物的组合物组(下称组合物)(组合物100mg/kg)、小蓟提取物组(小蓟提取物100mg/kg)，每组10只，连续灌胃给药3天，末次给药2h后静脉取血，分离血清，于56℃条件下30min灭活处理，用培养液分别稀释至含药量为40％，得到40％不含药血清(空白对照组)和40％含药血清(阳性对照组、南非叶提取物组、组合物组、小蓟提取物组)，分别经0.45μm的微孔滤膜，再经0.22μm微孔滤膜过滤除菌后，置4℃冰箱保存备用。
3.3含药血清在2.2.15细胞培养中对HBsAg和HBeAg的抑制作用
将培养得到的2.2.15细胞用0.25％胰腺酶溶液进行消化，消化后加入细胞计数板计数，然后调整密度至2×105个/ml，加入96孔培养板中，每孔100μL，于37℃、5％CO2培养，24h后加40％含药血清以及40％不含药血清(终末浓度为20％)，另设细胞对照孔，于第6天时收集培养液，吸取培养上清，采用ELISA法按试剂盒进行操作，测定HBsAg、HBeAg。按下述公式计算每种含药血清的抗原抑制百分率(％)。
抗原抑制百分率(％)＝[细胞对照吸光度(A)-给药实验吸光度]/细胞对照吸光度×100％；结果如表1所示：
表1不同提取物对体外培养2.2.15细胞表达HBsAg、HBeAg的影响(x±s，n＝10)
与空白对照组比较：*p＜0.05，**p＜0.01。
3.4结果
本发明的南非叶提取物及其组合物有抑制2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的作用，提示其具有体内抗HBV的可能性。另外，含南非叶提取物的组合物组的抑制率明显高于南非叶提取物组或小蓟提取物组，说明南非叶提取物和小蓟提取物合用产生了协同效应，比单独使用南非叶提取物或小蓟提取物的效果更好。
综上，本发明的南非叶提取物及其组合物在体外对乙肝病毒具有显著的抑制作用，为进一步临床研究提供了有力依据。
上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。
Claims (9)
1.一种南非叶提取物，其特征在于，所述南非叶提取物的制备方法包括如下步骤：
1)粉碎：取南非叶，粉碎至粗粉，备用；
2)提取：取步骤1)的粗粉，加入体积分数为60-70％的乙醇提取，得到提取液；将所述提取液回收乙醇，真空浓缩，得到浸膏；
3)过柱纯化：将步骤2)的浸膏加在聚酰胺柱上，依次用3-6BV的体积分数为10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％的乙醇溶液进行洗脱，收集体积分数为40％的乙醇洗脱液；
4)浓缩干燥：将步骤3)的体积分数为40％的乙醇洗脱液真空干燥，得到所述南非叶提取物。
2.根据权利要求1所述一种南非叶提取物，其特征在于，步骤2)为：取步骤1)的粗粉，加入粗粉总重6-15倍量的体积分数为60-70％的乙醇，在70-80℃条件下加热回流提取1-3次，每次45-90min，每次提取后滤过得到滤液，合并所得滤液，得到提取液；将所述提取液回收乙醇，70-80℃真空浓缩至原体积的1/6，得到浸膏。
3.根据权利要求1所述一种南非叶提取物，其特征在于，所述南非叶提取物中，水分≤6％。
4.权利要求1所述的南非叶提取物在制备抗病毒药物中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述病毒为乙肝病毒。
6.一种含有权利要求1所述南非叶提取物的组合物，其特征在于：所述组合物由以下重量份的组分制得：
南非叶提取物：90-95份，小蓟提取物：5-10份。
7.根据权利要求6所述的含有南非叶提取物的组合物，其特征在于：所述小蓟提取物的制备方法包括如下步骤：
取小蓟，粉碎，加入体积分数为80％的乙醇，回流提取，滤过得到滤液，滤液真空干燥得到所述小蓟提取物。
8.根据权利要求7所述的一种含有南非叶提取物的组合物，其特征在于：所述小蓟提取物的制备方法包括如下步骤：
取小蓟，粉碎，加入原料总重8-10倍量的体积分数为80％的乙醇，70-80℃回流提取两次，每次1-2小时，每次提取后滤过得到滤液，合并所得滤液，真空干燥至水分≤6％，得到所述小蓟提取物。
9.权利要求6所述组合物在制备抗病毒药物中的应用。
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| CN112851738A (zh) * | 2019-11-28 | 2021-05-28 | 厦门大学 | 台湾南非叶甾体类化合物及在制备抗痛风药物中的应用 |
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