CN116789833B - 一种抗体或其片段及其制药用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种抗体或其片段,包括:所述抗体或其片段包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL),其中所述重链可变区(VH)包括依次示于SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10的H‑CDR1、H‑CDR2、H‑CDR3,所述轻链可变区(VL)包含依次示于SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14的L‑CDR1、L‑CDR2、L‑CDR3。本发明提供一种高亲和力结合PD‑L1、尤其是人PD‑L1的抗体,在对PD‑L1的亲和力及解离速率方面,本发明所筛选到的抗体均有所提高;同时,基于初期筛选得到的鼠抗体,通过最大限度地进行人源化改造,降低了抗体的免疫原性;此外,药效学实验证明,本发明提供的抗体具有更好的抑瘤效果。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药领域,尤其涉及一种抗体或其片段,本发明还涉及所述抗体或其片段的应用。
背景技术
PD-L1,其编码的基因又称之为CD274,是程序性死亡因子PD1的配体分子,经常表达在造血细胞和非造血细胞例如T细胞和B细胞上,以及各种类型的肿瘤细胞上。PD-L1归属为1类型的跨膜蛋白,其具有免疫球蛋白V样和C样结构域。当PD-L1作为配体与其受体分子PD-1相互作用时会抑制T细胞活化和细胞因子的产生。在正常组织感染或炎症期间,这种相互作用对于通过维持免疫反应的稳态来防止自身免疫是很重要的。同时,这种相互作用在诱导和维持对自身的免疫耐受方面发挥着至关重要的作用,而在肿瘤微环境中,通常会导致毒性T细胞失活,从而为肿瘤细胞提供免疫逃逸。该基因在肿瘤细胞中的表达被认为是许多类型的人类恶性肿瘤是否可以应用PD-1或PD-L1抗体药物的标准之一,这类恶性肿瘤包括黑色素瘤和非小细胞肺癌等。
目前已有多个PD-L1单抗药物已经上市,例如罗氏旗下的GENETECH研发并出品的首个PD-L1单抗药物Atezolizumab(商品名Tecentriq),用于治疗铂类化疗失败或者进展的晚期膀胱癌。2017年,美国食品药品监督管理局(FDA)加速批准了新药Bavencio,用于治疗成人和12岁儿童的默克尔细胞癌(MCC)。该药物主要成分为Avelumab,对转移性默克尔细胞癌(mMCC)具有持续缓解作用。在欧洲,治疗转移性尿路上皮癌的PD-L1抗体生物制剂的许可证申请也在接受FDA的优先审查。2018年3月阿斯利康也公布其免疫疗法药物Imfinzi(Durvalumab)已正式获得美国食品药品监督管理局(FDA)批准,用于治疗不能手术切除的III期非小细胞肺癌(NSCLC)患者。
目前针对PDL1的单抗药物在亲和力及解离速度上还有提高的空间,而且根据临床试验数据来看Atezolizumab药物的免疫源性比较高,导致较多的抗抗体产生,极大的影响了该药物的治疗效果。
发明内容
为此,本发明提供一种抗体或其片段,通过杂交瘤筛选和人源化技术,获得特异性结合人PD-L1、特别是对人PD-L1具有高亲和力的抗体。针对上述技术问题,本发明的目的是提供一种抗PD-L1的抗体或其片段,并基于该抗体或其片段,提供其用途。本发明所述抗体分子的“片段”涵盖抗体的各种功能性片段,例如其抗原结合部分,如Fab、F(ab’)2或scFv片段。
为实现上述目的,本发明提供一种抗体或其片段,包括:
所述抗体或其片段包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL),其中所述重链可变区(VH)包括依次示于SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3,所述轻链可变区(VL)包含依次示于SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3。
进一步地,所述重链可变区包含选自以下的序列:示于SEQ ID NO:7的氨基酸序列或与示于SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少75%同一性的氨基酸序列;和/或,所述轻链可变区包含选自以下的序列:示于SEQ ID NO:11的氨基酸序列或与示于SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少75%同一性的氨基酸序列。
进一步地,所述抗体或其片段为抗PD-L1的抗体或其片段。
进一步地,所述抗体包括单克隆抗体、单链抗体、双功能抗体、单域抗体、纳米抗体、完全或部分人源化的抗体以及嵌合抗体任意形式,或者,所述抗原结合片段为半抗体或者抗体或半抗体的抗原结合片段,所述抗原结合片段的抗体包括scFv、BsFv、dsFv、(dsFv)2、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv以及IgG。
进一步地,所述抗体或其片段还包含人或鼠源的恒定区,所述恒定区包含人或鼠源的重链恒定区(CH)和/或轻链恒定区(CL),其中,所述重链恒定区包括IgG、IgA、IgM、IgD或IgE的抗体或其片段,所述轻链恒定区包括κ或λ型。
进一步地,所述抗体包括为单克隆抗体、鼠、嵌合或人源化的单克隆抗体,其中,所述单克隆抗体的重链恒定区为IgG1或IgG4亚型,轻链恒定区为κ型;
所述单克隆抗体的重链恒定区包含示于SEQ ID NO:1的氨基酸序列或者与示于SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少75%同一性的氨基酸序列;
所述单克隆抗体的轻链恒定区包含示于SEQ ID NO:2的氨基酸序列或者与示于SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少75%同一性的氨基酸序列。
本发明的核酸分子可以被克隆到载体中,进而转化或转染宿主细胞。因此又一方面,本发明还提供一种载体,所述载体包含本发明的核酸分子。所述载体可以为真核表达载体、原核表达载体、人工染色体及噬菌体载体等。本发明的载体或核酸分子可以用于转化或转染宿主细胞,用于保存或抗体表达等目的。因此,还一方面,本发明提供一种宿主细胞,所述宿主细胞包含本发明的核酸分子和/或载体,或者所述宿主细胞被本发明的核酸分子和/或载体转化或转染。宿主细胞可以是任何原核或真核细胞,例如细菌或昆虫、真菌、植物或动物细胞。
本发明提供的抗体或其片段可以利用本领域已知的任何方法获得。例如,可以先由本发明提供的核酸分子获得所述抗体的重链可变区和/或轻链可变区,或者获得所述抗体的重链和/或轻链,然后与所述抗体的任选其他结构域组装成抗体;或者,在允许本发明提供的宿主细胞表达所述抗体的重链可变区和/或轻链可变区或者所述抗体的重链和/或轻链以组装成所述抗体的情况下,培养所述宿主细胞。任选地,所述方法还包括回收产生的抗体的步骤。
本发明提供的抗体或其片段、核酸分子、载体和/或宿主细胞可以被包含在药物组合物中,更特别地被包含在药物制剂中,从而根据实际需要用于各种目的。因此,在又一方面,本发明还提供一种药物组合物,所述药物组合物包含本发明所述的抗体或其片段、核酸分子、载体和/或宿主细胞,以及任选的药学上可接受的辅料。
再一方面,本发明还提供所述抗体或其片段、核酸分子、载体、宿主细胞和/或药物组合物在制备用于预防或治疗疾病的药物中的用途,所述疾病包括肿瘤或癌症,例如非小细胞肺癌、黑色素瘤、膀胱癌、默克尔淋巴癌、皮肤鳞状细胞癌、肺癌、霍奇金淋巴瘤、肾癌、肝癌、食管癌、非霍奇金淋巴瘤、乳腺癌、甲状腺癌、胃癌、肠癌、鼻咽癌、胰腺癌、***癌、白血病、喉癌、口腔癌、耳部眼部肿瘤、胆道癌、胆囊癌、肾上腺癌、生殖***肿瘤、多发性骨髓瘤、神经***肿瘤、尿道上皮细胞癌。
因此相应地,本发明还提供一种预防或治疗疾病的方法,所述方法包括给有此需要的受试者施用本发明的抗体或其片段、核酸分子、载体、宿主细胞和/或药物组合物,所述疾病包括肿瘤或癌症,例如非小细胞肺癌、黑色素瘤、膀胱癌、默克尔淋巴癌、皮肤鳞状细胞癌、肺癌、霍奇金淋巴瘤、肾癌、肝癌、食管癌、非霍奇金淋巴瘤、乳腺癌、甲状腺癌、胃癌、肠癌、鼻咽癌、胰腺癌、***癌、白血病、喉癌、口腔癌、耳部眼部肿瘤、胆道癌、胆囊癌、肾上腺癌、生殖***肿瘤、多发性骨髓瘤、神经***肿瘤、尿道上皮细胞癌。优选地,所述受试者为哺乳类动物;更优选地,所述受试者为人。
又一方面,本发明提供一种试剂盒,所述试剂盒包括本发明的抗体或其片段、核酸分子、载体、宿主细胞和/或药物组合物。所述试剂盒可以用于治疗或诊断用途。
与现有技术相比,本发明的有益效果在于,本发明提供了一种新型的能够以高亲和力结合PD-L1、尤其是人PD-L1的抗体。与现有抗PD-L1抗体相比,本发明的抗体具有以下特点:相比于现有抗体(以Genetech的Atezolizumab(Tecentriq)为例),在对PD-L1的亲和力及解离速率方面,本发明所筛选到的抗体均有所提高;同时,基于初期筛选得到的鼠抗体,通过最大限度地进行人源化改造,降低了抗体的免疫原性;此外,药效学实验证明,本发明提供的抗体具有更好的抑瘤效果。
附图说明
图1为本发明实施例杂交瘤细胞株的培养上清与抗原人PD-L1结合的FACS检测结果;
图2为本发明实施例杂交瘤细胞株的培养上清与抗原猴子PD-L1结合的FACS检测结果;
图3为本发明实施例杂交瘤细胞的培养上清阻断PD-L1与细胞结合的FACS检测结果;
图4为本发明实施例人源化抗体与抗原人PD-L1结合的FACS检测结果;
图5为本发明实施例人源化抗体与抗原猴子PD-L1结合的FACS检测结果;
图6为本发明实施例人源化抗体阻断PD-L1与细胞结合的FACS检测结果;
其中,图1-图6中横坐标为浓度取对数后的参数。
具体实施方式
为了使本发明的目的和优点更加清楚明白,下面结合实施例对本发明作进一步描述;应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用于解释本发明,并不用于限定本发明。
下面参照附图来描述本发明的优选实施方式。本领域技术人员应当理解的是,这些实施方式仅仅用于解释本发明的技术原理,并非在限制本发明的保护范围。
需要说明的是,在本发明的描述中,术语“上”、“下”、“左”、“右”、“内”、“外”等指示的方向或位置关系的术语是基于附图所示的方向或位置关系,这仅仅是为了便于描述,而不是指示或暗示所述装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作,因此不能理解为对本发明的限制。
此外,还需要说明的是,在本发明的描述中,除非另有明确的规定和限定,术语“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解,例如,可以是固定连接,也可以是可拆卸连接,或一体地连接;可以是机械连接,也可以是电连接;可以是直接相连,也可以通过中间媒介间接相连,可以是两个元件内部的连通。对于本领域技术人员而言,可根据具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。下述实施例中所用的药材原料、试剂材料等,如无特殊说明,均为市售购买产品。
Atezolizumab(Reference):Genetech生产,商品名为Tecentriq,公开于US2016/0319022A1,轻重链分别参见SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5。
实施例1本发明实施例杂交瘤细胞的制备
用PD-L1蛋白(KP1008 PDL1-mFc kyinno)作为免疫原免疫小鼠,选取5只小鼠皮下免疫,5只小鼠肌肉免疫,佐剂采用quick antibody 5W水溶性佐剂,加强免疫以后2周测效价,选取效价高的两只小鼠进行免疫冲击,3天后进行细胞融合。
其中,细胞融合的方法具体为,取准备融合的2只小鼠的血清后解剖取脾脏,分离其脾细胞,与培养的骨髓瘤细胞进行融合,融合后的细胞铺96孔板,同时加入选择性培养基进行筛选,7天后换液,10天后进行ELISA检测,选择OD值大于阴性对照10倍以上的进行流式细胞仪检测。
挑选双阳的细胞,通过细胞有限稀释法进行亚克隆铺板,挑选单克隆细胞。将挑选出的单克隆细胞,取培养上清,进行ELISA检测及流式细胞仪检测,挑选双阳的细胞扩大培养。
实施例2本发明实施例杂交瘤细胞的培养上清与PD-L1结合的FACS检测
将293T-PDL1(KC-0205 293T-PDL1 kyinno)细胞在含2%FBS的PBS中制备成细胞浓度为1×107个细胞/ml的细胞悬液。
向每个流式管(样品管)中放入50μl细胞悬液,同时每孔中加入待检抗体(纯化后杂交瘤抗体)以及空白对照(PBS),按照20ug/mL起始,3.16倍稀释,8doses梯度稀释,4℃孵育60分钟。向每个流式管中加入1ml的流式缓冲液,1200rpm下离心5分钟,弃上清,重复洗涤三次。同时设置对照管1(不加入培养上清和下文的二抗,仅加入细胞悬液)和对照管2(不加入培养上清,仅加入细胞悬液和下文的二抗)。
然后向每个流式管中加入100μl流式缓冲液进行重悬,根据实验要求加入5μl PE标记的抗鼠Fc标签的二抗(Biolegend,货号409304),4℃避光孵育30分钟,然后加入1ml流式缓冲液,室温下1200rpm离心5分钟,弃上清,重复洗涤三次。
再次向每个流式管中加入250μl流式缓冲液,重悬混匀,上机检测。
FACS结合的检测结果见表1和图1。
表1.杂交瘤细胞的培养上清与PD-L1结合的FACS检测结果
编号 | 名称 | EC50(μg/mL) | 荧光强度.max |
PL-29 | 26G9-5 | 0.2189 | 12113 |
PL-73 | 54F9-4 | 0.3098 | 10474 |
PL-80 | 60A12-1 | 0.3784 | 12215 |
PL-82 | 48B10-6 | 0.4460 | 10728 |
实施例3本发明实施例杂交瘤细胞的培养上清与cynoPD-L1结合的FACS检测
将293T-cynoPDL1(KC-1001,kyinno)细胞在含2%FBS的PBS中制备成细胞浓度为1×107个细胞/ml的细胞悬液。
向每个流式管(样品管)中放入50μl细胞悬液,同时每孔中加入待检抗体(纯化后杂交瘤抗体)以及空白对照(PBS),按照20ug/mL起始,3.16倍稀释,8doses梯度稀释,4℃孵育60分钟。向每个流式管中加入1ml的流式缓冲液,1200rpm下离心5分钟,弃上清,重复洗涤三次。同时设置对照管1(不加入培养上清和下文的二抗,仅加入细胞悬液)和对照管2(不加入培养上清,仅加入细胞悬液和下文的二抗)。
然后向每个流式管中加入100μl流式缓冲液进行重悬,根据实验要求加入5μl PE标记的抗鼠Fc标签的二抗(Biolegend,货号409304),4℃避光孵育30分钟,然后加入1ml流式缓冲液,室温下1200rpm离心5分钟,弃上清,重复洗涤三次。
再次向每个流式管中加入250μl流式缓冲液,重悬混匀,上机检测。
FACS结合的检测结果见表2和图2。
表2.杂交瘤细胞的培养上清与cynoPD-L1结合的FACS检测结果
编号 | 名称 | EC50(μg/mL) | 荧光强度.max |
PL-29 | 26G9-5 | 0.3073 | 15356 |
PL-73 | 54F9-4 | 0.3636 | 12176 |
PL-80 | 60A12-1 | 0.3710 | 12581 |
PL-82 | 48B10-6 | 0.2974 | 5278 |
实施例4本发明实施例杂交瘤细胞的培养上清阻断PD-L1与细胞结合的FACS检测
合成人PD-1蛋白(SEQ ID NO:6)的胞外区(SEQ ID NO:6的第24位至第170位)基因片段,构建到PLVX-IRES-PURO(Clontech),转化DH5α感受态细胞,涂板,37℃培养过夜。挑取单克隆菌落,摇菌,酶切鉴定,提取质粒,经测序验证,选取正确的克隆提取质粒,保存备用。
复苏293T细胞,连续传代2次后,按照2×106个细胞/10ml/皿铺板,16h~24h后待细胞密度生长到70%~80%时,用上述真核表达质粒转染细胞,置于37℃,5%CO2培养箱中培养。培养12h~16h后弃去培养基,换液,48~56h后,加入对应量的Puromycin(终浓度为10μg/ml)。用含10%FBS的DMEM+10μg/ml Puromycin连续培养10天,若细胞生长状态良好。初步判断拿到多克隆细胞,进行流式检测。
取阳性的多克隆细胞,按照0.5个细胞每孔铺板,7天后挑选单克隆,扩大培养。对挑选出来的单克隆进行FACS检测,选取阳性细胞即稳定表达h-PD1的293T细胞,命名为293T-h-PD1细胞。
将该细胞用FACS缓冲液洗涤一次,以2-5×105个细胞/孔铺到96深孔板,同时每孔中加入待检抗体(纯化后杂交瘤抗体)以及空白对照(PBS),按照20ug/mL起始,3.16倍稀释,8doses梯度稀释和500ng实施例2中的融合蛋白PD-L1(hFC tag)的预混液,孵育2个小时。然后每孔加入400μl FACS缓冲液洗涤两次,加入PE抗人IgG Fc二抗,孵育1个小时,之后每孔加入400μl FACS缓冲液洗涤两次。上机检测。
FACS阻断的检测结果见表3和图3。
表3.杂交瘤细胞的培养上清阻断PD-L1与细胞结合的FACS检测结果
编号 | 名称 | EC50(μg/mL) | 阻断率.max/% |
PL-29 | 26G9-5 | 0.3933 | 99.586 |
PL-73 | 54F9-4 | 0.4892 | 99.205 |
PL-80 | 60A12-1 | 0.4251 | 99.615 |
PL-82 | 48B10-6 | 0.2519 | 99.764 |
实施例5本发明实施例杂交瘤细胞的培养上清与PD-L1结合的亲和力检测实验方法:
步骤1.选用同种属的Capture Surface Dip。
步骤2.取96孔板,每孔加入200μl SD缓冲液(1×PBS+0.02%Tween20+0.1%BSA),放入ForteBio Octet中,预循环。
步骤3.固定抗体,上清液纯化后的抗体浓度采用10μg/ml。
步骤4.人PD-L1蛋白的胞外区(SEQ ID NO:3的第19位至第238位)分别稀释200nM、100nM、50nM、25nM、12.5nM、6.25nM共6个梯度,加入相应孔中。
步骤5.上机检测。结果见表4。
表4.杂交瘤细胞的培养上清与PD-L1结合的亲和力检测结果
基于上述实验选择相应的杂交瘤细胞株,从单克隆细胞中提RNA,再反转录成cDNA,连入测序载体中进行测序分析。
示例性鼠抗体的序列如下,其中下划线示出CDR(根据AbM定义方法得到)。鼠抗体的命名根据其所来源的杂交瘤细胞株。
A1(鼠抗体48B10)
>48B10-VH
QVQLKESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSSYAMSWIRQTPEKRLEWVATITSDGRYSYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTATYYCARRENWFTYWGQGTLVTVSA
>48B10-VL
DIVITQSPALMSASPGEKVTMTCSASSSVTYMYWYQQKPRSSPKPWIYLTSNLASGVPARFSGSGSGTSFSLTISNMEAEDAATYYCQQWSSGPTFGAGTKLELK
实施例6本发明实施例的抗体的人源化改造
选择A1抗体(鼠抗体48B10)进行抗体的人源化。综合考虑了该抗体与不同人源模板的序列相似性、表达量及轻重链组合是否被已经成药的抗体所使用等。根据轻重链相似性的值大于200、表达量大于50mg/ml、轻重链组合被成药的抗体使用过等因素,最后分别选取了人源的序列作为重链与轻链的模板:IGHV1-46*01和IGKV1-5*01。对A1鼠源的单抗进行同源建模,进行Fab区域的结构模拟。经过同源建模计算,最后得到预测的A1抗体的Fab结构。
通过对预测的Fab结构及重链与IGHV1-46*01序列的比对分析,把CDR区全部替换成人源的模板,再做结构模拟及动力学计算。通过结构模拟及动力学分析,把影响CDR结构的几个氨基酸进行保留鼠源的,最后重链版本除了CDR区及68A、70L等为原始鼠的氨基酸外,其它的鼠源氨基酸全部替换成相应的IGHV1-46*01模板人的氨基酸。
通过对预测的Fab结构及轻链与IGKV1-5*01序列的比对分析,把CDR区全部替换成人源的模板,再做结构模拟及动力学计算。通过结构模拟及动力学分析,把影响CDR结构的几个氨基酸进行保留鼠源的,最后轻链版本除了CDR区保留原始鼠的氨基酸外,其它的鼠源氨基酸全部替换成相应的IGKV1-5*05模板人的氨基酸。
A1抗体的人源化抗体的序列如下:
>VH人源化序列48B10-VH-hz
QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWIRQAPGKGLEWVATITSDGRYSYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRENWFTYWGQGTTVTVSS
即SEQ ID NO:15所示;
>VL人源化序列48B10-VL-hz
DIQITQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVTYMYWYQQKPGSSPKPWIYLTSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSSGPTFGQGTRLEIK
即SEQ ID NO:16所示;
以SEQ ID NO:1所示序列作为重链恒定区,SEQ ID NO:2所示序列作为轻链恒定区,对于测序得到的针对PD-L1靶点的抗体DNA序列,重新设计引物,合成相应的嵌合抗体及人源化抗体的基因,连入真核表达载体中,转化DH5alpha感受态细胞,37℃恒温培养箱培养过夜,挑单克隆菌株测序鉴定。挑选序列正确的菌株,摇菌,大提质粒,转染哺乳动物表达细胞293F,置于37℃、5%CO2的培养箱中,表达培养7天。
收取表达上清,离心,过滤,选择protein G亲和层析柱,进行纯化,纯化的抗体通过SDS-PAGE电泳检测纯度,用BCA蛋白检测试剂盒检测抗体浓度,分装,保存于-80℃冰箱中备用。其中,将嵌合抗体命名为“鼠抗体简称(chi)”,将人源化抗体命名为“鼠抗体简称(hz)”。
实施例7本发明的抗体与PD-L1结合的FACS检测
实验过程参照实施例3,不同之处在于,向每个流式管中放入50μl细胞悬液之后,加入待检抗体、阳性对照抗体(Reference)或阴性参考抗体(hIgG1),浓度参见图3。同时设置对照管1(不加入抗体和二抗,仅加入细胞悬液)和对照管2(不加入抗体,仅加入细胞悬液和二抗)。
FACS结合的检测结果见表5和图4。
表5.抗体与PD-L1结合的FACS检测结果
实施例8本发明的抗体与cynoPD-L1结合的FACS检测
抗体与cynoPD-L1结合方法参照实施例3,不同之处在于,向每个流式管中放入50μl细胞悬液之后,加入待检抗体、阳性对照抗体(Reference)或阴性参考抗体(hIgG1)。同时设置对照管1(不加入抗体和二抗,仅加入细胞悬液)和对照管2(不加入抗体,仅加入细胞悬液和二抗)。
FACS结合的检测结果见表6和图5。
表6.抗体与PD-L1结合的FACS检测结果
名称 | EC50(μg/mL) | 荧光强度.max |
Atezolizumab | 0.5913 | 5034 |
48B10-4(hz) | 0.3417 | 8668 |
实施例9本发明的抗体阻断PD-L1与细胞结合的FACS检测
实验过程参照实施例4,不同之处在于每孔加入待检抗体、阳性对照抗体Atezolizumab(Reference)或阴性参考抗体(hIgG1)。
FACS阻断的检测结果见表7和图6。
表7.抗体阻断PD-L1与细胞结合的FACS检测结果
名称 | EC50(μg/mL) | 阻断率.max/% |
Atezolizumab | 0.2502 | 99.87 |
48B10-4(hz) | 0.5245 | 99.83 |
实施例10本发明实施例抗体与PD-L1结合的亲和力检测
将人PD-L1蛋白的胞外区(SEQ ID NO:3的第19位至第238位)在PBS缓冲溶液中制备成最高浓度为30nM的溶液,并3倍稀释为6个浓度并设0浓度对照。将本发明的鼠抗体、嵌合抗体和人源化抗体在PBS中制备为20nM的溶液。
用ForteBio Octet为亲和力检测仪器测定抗体抗原的亲和力。具体操作方法参照实施例5。
实验结果见表8。
表8.抗体与抗原PD-L1结合的亲和力检测结果
抗体 | 抗原 | KD(M) | kon(1/Ms) | kdis(1/s) |
Atezolizumab | 人PD-L1-his | 9.86E-10 | 4.77E+05 | 4.71E-04 |
48B10-4(hz) | 人PD-L1-his | 5.95E-10 | 4.26E+05 | 2.54E-04 |
至此,已经结合附图所示的优选实施方式描述了本发明的技术方案,但是,本领域技术人员容易理解的是,本发明的保护范围显然不局限于这些具体实施方式。在不偏离本发明的原理的前提下,本领域技术人员可以对相关技术特征做出等同的更改或替换,这些更改或替换之后的技术方案都将落入本发明的保护范围之内。
Claims (11)
1.一种特异性结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段,其特征在于,包括:重链可变区和轻链可变区,其中所述重链可变区的H-CDR1氨基酸序列为SEQ ID NO: 8、重链可变区的H-CDR2氨基酸序列为SEQ ID NO: 9、重链可变区的H-CDR3氨基酸序列为SEQ ID NO: 10,所述轻链可变区的L-CDR1氨基酸序列为SEQ ID NO: 12、轻链可变区的L-CDR2氨基酸序列为SEQID NO: 13、轻链可变区的L-CDR3氨基酸序列为SEQ ID NO: 14。
2.根据权利要求1所述的特异性结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段,其特征在于,所述重链可变区包含选自以下的序列:示于SEQ ID NO: 7的氨基酸序列或与示于SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少75%同一性的氨基酸序列;和/或,所述轻链可变区包含选自以下的序列:示于SEQ ID NO: 11的氨基酸序列或与示于SEQ ID NO: 11的氨基酸序列具有至少75%同一性的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的特异性结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段,其特征在于,所述抗体包括嵌合抗体、单克隆抗体、单链抗体以及完全或部分人源化的抗体,所述抗原结合片段包括scFv、BsFv、dsFv、(dsFv)2、Fab、Fab'、F(ab')2以及Fv。
4.根据权利要求3所述的特异性结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段,其特征在于,还包含人或鼠源的恒定区,所述恒定区包含人或鼠源的重链恒定区和/或轻链恒定区,其中,所述重链恒定区为IgG、IgA、IgM、IgD或IgE型,所述轻链恒定区包括κ或λ型。
5.根据权利要求4所述的特异性结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段,其特征在于,所述抗体为单克隆抗体、鼠、嵌合或人源化的单克隆抗体,其中,所述单克隆抗体的重链恒定区为IgG1或IgG4亚型,轻链恒定区为κ型;
所述单克隆抗体的重链恒定区包含示于SEQ ID NO: 1的氨基酸序列或者与示于SEQID NO: 1的氨基酸序列具有至少75%同一性的氨基酸序列;
所述单克隆抗体的轻链恒定区包含示于SEQ ID NO: 2的氨基酸序列或者与示于SEQID NO: 2的氨基酸序列具有至少75%同一性的氨基酸序列。
6.一种核酸分子,其编码权利要求1-5任一项所述的特异性结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段。
7.一种载体,其包含权利要求6所述的核酸分子。
8.一种宿主细胞,所述宿主细胞包含权利要求6所述的核酸分子和/或权利要求7所述的载体,或者所述宿主细胞被权利要求6所述的核酸分子和/或权利要求7所述的载体转化或转染。
9.一种药物组合物,其包含权利要求1至5中任一项所述的特异性结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段。
10.权利要求1至5中任一项所述的特异性结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段、权利要求6所述的核酸分子、权利要求7所述的载体、权利要求8所述的宿主细胞或者权利要求9所述的药物组合物在制备用于治疗疾病的药物中的用途,所述疾病为膀胱癌、皮肤鳞状细胞癌、肺癌、肾癌、肝癌、食管癌、乳腺癌、甲状腺癌、胃癌、肠癌、鼻咽癌、胰腺癌、***癌、白血病、喉癌、口腔癌、胆道癌、胆囊癌、肾上腺癌、黑色素瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、耳部眼部肿瘤、生殖***肿瘤、多发性骨髓瘤、神经***肿瘤、尿道上皮细胞癌。
11.一种试剂盒,所述试剂盒包括权利要求1至5中任一项所述的特异性结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段。
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CN106699891A (zh) * | 2017-01-25 | 2017-05-24 | 北京天广实生物技术股份有限公司 | 一种抗pd‑l1 抗体、其药物组合物及其用途 |
CN107151269A (zh) * | 2016-03-04 | 2017-09-12 | 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 | 一种pdl‑1抗体、其药物组合物及其用途 |
CN110964111A (zh) * | 2019-12-25 | 2020-04-07 | 北京东方百泰生物科技有限公司 | 一种抗pd-l1单克隆抗体、其抗原结合片段及其应用 |
CN111278861A (zh) * | 2018-01-10 | 2020-06-12 | 江苏恒瑞医药股份有限公司 | Pd-l1抗体、其抗原结合片段及医药用途 |
CN112521503A (zh) * | 2019-09-19 | 2021-03-19 | 北京慧能安生物科技有限公司 | 一种抗人pd-l1的单克隆抗体或其抗原结合片段及其编码基因和应用 |
CN112759647A (zh) * | 2019-10-21 | 2021-05-07 | 康源博创生物科技(北京)有限公司 | 一种抗pd-l1的抗体及其制药用途 |
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WO2021077250A1 (zh) * | 2019-10-21 | 2021-04-29 | 康源博创生物科技(北京)有限公司 | 一种抗pd-l1的抗体及其制药用途 |
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Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107151269A (zh) * | 2016-03-04 | 2017-09-12 | 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 | 一种pdl‑1抗体、其药物组合物及其用途 |
CN106478819A (zh) * | 2016-10-27 | 2017-03-08 | 常州费洛斯药业科技有限公司 | 一种针对pd‑l1的单克隆抗体或抗体片段 |
CN106699891A (zh) * | 2017-01-25 | 2017-05-24 | 北京天广实生物技术股份有限公司 | 一种抗pd‑l1 抗体、其药物组合物及其用途 |
CN111278861A (zh) * | 2018-01-10 | 2020-06-12 | 江苏恒瑞医药股份有限公司 | Pd-l1抗体、其抗原结合片段及医药用途 |
CN112521503A (zh) * | 2019-09-19 | 2021-03-19 | 北京慧能安生物科技有限公司 | 一种抗人pd-l1的单克隆抗体或其抗原结合片段及其编码基因和应用 |
CN112759647A (zh) * | 2019-10-21 | 2021-05-07 | 康源博创生物科技(北京)有限公司 | 一种抗pd-l1的抗体及其制药用途 |
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