CN116747176A - 莲花发酵物、制备方法及在抗皱紧致化妆品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种莲花发酵物的制备方法及在抗皱紧致化妆品中的应用。该莲花发酵物的制备方法包括步骤1、将莲花提取物与PDA液体培养基混合均匀，灭菌，得到含莲花提取物的PDA液体培养基；步骤2、将蛹虫草菌、灵芝菌菌种分别接种至PDA液体培养基中，培养，得到种子液；步骤3、将种子液接种在含莲花提取物的PDA液体培养基中摇床培养，发酵，得到发酵液步骤4、离心，收集上清液即得莲花发酵物。该莲花发酵物具有良好抗氧化、抗衰老、抗皱、紧致等功效。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物提取物，尤其涉及一种莲花发酵物、制备方法及在抗皱紧致化妆品中的应用。
背景技术
在当今社会，美丽和年轻已经成为了许多消费者在选择化妆品时的首要考虑因素，特别是抗皱和紧致的功效。随着人们生活水平的提高和审美观念的变化，对抗皱紧致化妆品的需求呈现了指数级的增长。这种需求的增长是由于人们越来越关注肌肤健康和保持年轻状态，尤其是面部肌肤，这是人们首先接触和评价美的部位。然而，尽管市场上的抗皱紧致化妆品种类繁多，其实质效果和安全性的问题仍然存在，许多产品的效果并不显著，同时还可能带来一些安全性问题，如过敏、刺激等，因此，开发一种既能有效抗皱紧致又具有较高安全性的化妆品已成为行业的重要需求。
莲花，作为一种具有深厚历史文化底蕴的植物，早在古代就已被广泛应用于中药和美容护肤领域。近年来的研究表明，莲花含有丰富的营养和护肤成分，如抗氧化成分、抗炎成分等，这些成分可以有效抵抗皮肤衰老，提高皮肤的紧致度和弹性。然而，尽管莲花提取物和莲花精油在护肤领域的应用越来越广泛，但在实际应用中，大多数产品还停留在将莲花提取物直接添加到化妆品配方中的阶段，这样做的问题是，莲花的潜在功效并未被充分利用，仅仅是作为一种天然添加剂而已，这是一个严重的浪费和限制了莲花在护肤领域的应用。
莲花在化妆品中的应用大多采用物理提取和化学提取方法，这些方法存在许多问题。首先，这些方法的提取效率往往并不高，很多有益成分可能没有被充分提取出来；其次，这些方法可能会对莲花的活性成分产生破坏，尤其是一些热敏感和酸敏感的活性成分，在提取过程中可能被破坏，进一步降低了化妆品的效果；最后，这些提取方法可能会引入一些化学残留物，对人体产生潜在的安全风险。因此，现有的莲花提取方法难以满足高效、安全、环保的要求，急需一种能够充分提取和利用莲花活性成分的新方法。
发酵技术是一种生物转化技术，通过微生物的代谢活动，可以提高产品的营养价值，改善其口感和风味，提高产品的附加值。近年来，发酵技术已在食品、医药和化妆品等领域得到广泛应用。然而，尽管发酵技术具有许多优点，如可以充分利用原料、提高产品的功能性、提高产品的安全性等，但到目前为止，莲花发酵物在抗皱紧致化妆品中的应用研究尚未得到充分的开发和利用。
综上所述，现有的抗皱紧致化妆品存在许多问题，如效果不显著、安全性不高等，而莲花虽然具有丰富的营养和护肤成分，但在其提取方法和在化妆品中的应用上还存在许多问题，如提取效率低、可能破坏活性成分、可能引入化学残留物等。发酵技术虽然在许多领域得到了应用，但在莲花发酵物的开发和应用上还相对落后。因此，开发一种能充分利用莲花活性成分，并通过发酵技术增强其功效的新型抗皱紧致化妆品，已经成为了行业的一项重要任务。
CN113208961A一种金莲花提取物的制备方法和应用，将金莲花粉碎与溶剂混合得到混合物，所述混合物通过微射流提取器提取，得到所述金莲花提取物。通过微射流提取器提取能够有效将金莲花原料中的细胞破碎并使有效成分溶出，无需添加化学试剂或采用复杂的工艺流程，可以保留中药成分中的有效成分，同时还避免有害成分残留，制得的金莲花提取物中荭草苷和牧荆苷的含量高、刺激性小，可用于制备抗氧化或抗衰老化妆品。制备方法复杂、有效活性成分不能被充分利用，进而影响其在化妆品中的应用。
发明内容
针对现有技术中存在的不足，本发明所要解决的技术问题是：提供一种莲花发酵物、制备方法及在抗皱紧致化妆品中的应用。
本发明提供了一种莲花发酵物的制备方法，包括下述步骤：
步骤1、将莲花提取物与PDA液体培养基混合均匀，在110-120℃灭菌10-20min，得到含莲花提取物的PDA液体培养基；
步骤2、将1-3cm2大小的真菌菌种分别接种至PDA液体培养基中，25-30℃、100-200rpm培养24-48h，得到种子液；
步骤3、将种子液接种在含莲花提取物的PDA液体培养基中摇床培养（25-30℃，100-200rpm），发酵1-10天，得到发酵液；
步骤4、5000-10000rpm离心10-20min，收集上清液并浓缩至相对密度为1.00-1.20，即得莲花发酵物。
其中步骤1中所述含莲花提取物的PDA液体培养基的浓度为1-5%（w/w）。
其中所述真菌菌种为蛹虫草菌、灵芝菌中的一种或两种混合物。
所述种子液为蛹虫草菌种子液、灵芝菌种子液中的一种或两种混合液。
其中步骤3中种子液的接种量为1-10%v/v。
本申请还公开了一种莲花提取物的制备方法。
其中所述莲花提取物的制备方法，包括以下步骤：
S1、将300-500g莲花加入200-300mL90-95wt%乙醇水溶液中用破壁机打碎，再加入700-800mL90-95wt%乙醇水溶液混合均匀，恒温水浴60-70℃浸泡萃取1-2h，其中每隔10-15min搅拌20-30s；反应结束后，离心分别收集上清液、沉淀物，分别得到第一次上清液、第一次沉淀物；
S2、将300-400g第一次沉淀物加入700-800mL60-65wt%乙醇水溶液，恒温水浴60-70℃浸泡萃取1-2h，其中每隔10-15min搅拌20-30s；反应结束后，离心分别收集上清液、沉淀物，分别得到第二次上清液、第二次沉淀物；
S3、将第一次上清液、第二次上清液混合均匀，进行旋转蒸馏并浓缩至相对密度为1.00-1.20，得到莲花提取物，其中旋转蒸馏的温度为60-70℃、转速为20-30r/min。
莲花提取物含有丰富的黄酮、总酚、粗多糖、荷叶碱、低聚糖、粗纤维等营养物质，其具有延缓皮肤衰老、抗皮肤老化、去皱、保湿、抗氧化等性能。
蛹虫草菌（Cordycepsmilitaris）又名北虫草、北冬虫夏草、蛹草、蛹草菌等，蛹虫草菌属于子囊菌门、虫草菌科、虫草属，与冬虫夏草极为相似，我国广泛分布在吉林、河北、辽宁、广西、贵州、四川等地，蛹虫草菌中一些主要的营养成分及其药物成分包括虫草素、虫草多糖、虫草酸、核苷类物质、同时还含有丰富的蛋白质、氨基酸及其人体所需的微量元素（锌、铁、硒、铜等），与人参、鹿茸并称为中药宝库的三大补药。其中蛹虫草菌中营养成分及其药物成分具有淡斑抗氧化、抗衰老、抑菌消炎等作用，可以对人体皮肤进行深层调理及保护。
灵芝菌（Ganodermalucidum）又称为灵芝菌草，是真菌门、担子菌纲、多孔菌目、灵芝菌科的一种大型食药两用真菌。灵芝菌含有的主要营养成分及其药物成分包括灵芝菌多糖、三萜类化合物、蛋白质、氨基酸、腺苷等活性成分，具有抗衰老、美白、抗氧化、抗辐射、抗炎等性能，且在化妆品中具有低毒、温和、无刺激等特点。其中富含的灵芝菌多糖、灵芝菌中的萜类化合物以及酚类等活性成分具有抗氧化和清除自由基的作用。灵芝菌还能够抑制幽门螺杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等多种菌的生长，其中灵芝菌多糖起着至关重要的作用。
本申请中莲花提取物作为培养基中的其中一种成分，采用蛹虫草菌、灵芝菌相互作用对莲花提取物进行发酵，可将含有的刺激性或毒性物质转化为低毒性或者稳定性衍生物，同时使得营养成分更容易被皮肤吸收，蛹虫草菌、灵芝菌复合菌种发酵可能会引发更强的生物转化反应，这是因为不同的菌种可能对莲花提取物中的不同成分产生更全面的转化，使得产品中含有更丰富、更多样的活性成分；蛹虫草菌、灵芝菌复合菌种发酵可能会产生协同作用。这种协同作用可能源于菌种间的互作，例如，一种菌种产生的酶或其他代谢物可能促进另一种菌种的生长或代谢，从而增强总体的生物活性，复合菌种发酵可能会产生新的活性成分，这可能是由于菌种间相互代谢互作，产生新的代谢物，这些代谢物可能具有更强的生物活性。该莲花发酵物具有良好抗氧化、抗衰老、抗皱、紧致等功效。本申请还公开了莲花发酵物在抗皱紧致化妆品中的应用。
一种抗皱紧致化妆品，包括上述得到的莲花发酵物。
其中莲花发酵物在抗皱紧致化妆品中的含量为0.1-1wt%。
本申请所述的抗皱紧致化妆品可以为任何合适的产品形式，所述产品形式包括但不限于霜剂、乳液、固体、液体、分散体、泡沫、凝胶、化妆水、摩丝、软膏、粉剂、贴剂、润滑油、面膜、湿纸巾、喷雾剂等。
优选的，所述的抗皱紧致化妆品为化妆水、乳液、精华液、乳霜。
本发明的有益技术效果：
本申请采用蛹虫草菌、灵芝菌相互作用对其进行液体发酵，可将含有的刺激性或毒性物质转化为低毒性或者稳定性衍生物；同时使得营养成分更容易被皮肤吸收，该莲花发酵物具有良好抗氧化、抗衰老、抗皱、紧致等功效。本申请还公开了莲花发酵物在抗皱紧致化妆品中的应用。
实施方式
在本发明中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本发明中具体公开。
本发明实施例中使用的原料的介绍：
实施例中采用的莲花为香水莲花（NymphaeaHybrid）；
蛹虫草菌，拉丁学名：Cordyceps militaris，编号：CGMCC5.886，购买自中国普通微生物菌种保藏管理中心。
灵芝菌，拉丁学名：Ganoderma lucidum，编号：CGMCC5.1817，购买自中国普通微生物菌种保藏管理中心。
下面将结合本发明具体实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种莲花提取物的制备方法，包括以下步骤：
S1、将500g莲花加入300mL95wt%乙醇水溶液中用破壁机打碎，再加入700mL95wt%乙醇水溶液混合均匀，恒温水浴60℃浸泡萃取2h，其中每隔15min搅拌30s；反应结束后，离心分别收集上清液、沉淀物，分别得到第一次上清液、第一次沉淀物；
S2、将400g第一次沉淀物加入800mL65wt%乙醇水溶液，恒温水浴60℃浸泡萃取2h，其中每隔15min搅拌30s；反应结束后，离心分别收集上清液、沉淀物，分别得到第二次上清液、第二次沉淀物；
S3、将第一次上清液、第二次上清液混合均匀，进行旋转蒸馏并浓缩至相对密度为1.10，得到莲花提取物，其中旋转蒸馏的温度为60℃、转速为30r/min。
对比例1
一种莲花提取物的制备方法，包括以下步骤：
S1、将500g莲花加入300mL95wt%乙醇水溶液中用破壁机打碎，再加入700mL95wt%乙醇水溶液混合均匀，恒温水浴60℃浸泡萃取2h，其中每隔15min搅拌30s；反应结束后，离心分别收集上清液、沉淀物，分别得到第一次上清液；
S2、将第一次上清液进行旋转蒸馏并浓缩至相对密度为1.10，得到莲花提取物，其中旋转蒸馏的温度为60℃、转速为30r/min。
实施例2
一种莲花发酵物的制备方法，包括下述步骤：
步骤1、将实施例1得到的莲花提取物与PDA液体培养基混合均匀，在115℃灭菌20min，得到含5%（w/w）莲花提取物的PDA液体培养基；
步骤2、将1cm2的真菌菌种分别接种至PDA液体培养基中，28℃、200rpm培养48h，得到种子液；
步骤3、将8%v/v种子液接种在含莲花提取物的PDA液体培养基中摇床培养（28℃，200rpm），发酵10天，得到发酵液；
步骤4、8000rpm离心15min，收集上清液并浓缩至相对密度为1.10，即得莲花发酵物。
所述真菌菌种分别为蛹虫草菌、灵芝菌。
所述种子液为蛹虫草菌种子液、灵芝菌种子液按体积比1:1混合而成。
实施例3
一种莲花发酵物的制备方法，包括下述步骤：
步骤1、将实施例1得到的莲花提取物与PDA液体培养基混合均匀，在115℃灭菌20min，得到含5%（w/w）莲花提取物的PDA液体培养基；
步骤2、将1cm2的灵芝菌接种至PDA液体培养基中，28℃、200rpm培养48h，得到灵芝菌种子液；
步骤3、将8%v/v灵芝菌种子液接种在含莲花提取物的PDA液体培养基中摇床培养（28℃，200rpm），发酵10天，得到发酵液；
步骤4、8000rpm离心15min，收集上清液并浓缩至相对密度为1.10，即得莲花发酵物。
实施例4
一种莲花发酵物的制备方法，包括下述步骤：
步骤1、将实施例1得到的莲花提取物与PDA液体培养基混合均匀，在115℃灭菌20min，得到含5%（w/w）莲花提取物的PDA液体培养基；
步骤2、将1cm2的蛹虫草菌接种至PDA液体培养基中，28℃、200rpm培养48h，得到蛹虫草菌种子液；
步骤3、将8%v/v蛹虫草菌种子液接种在含莲花提取物的PDA液体培养基中摇床培养（28℃，200rpm），发酵10天，得到发酵液；
步骤4、8000rpm离心15min，收集上清液并浓缩至相对密度为1.10，即得莲花发酵物。
测试例1
1、试验原理及依据
弹性纤维由弹性蛋白和微原纤维构成，分布于真皮及皮下组织，使皮肤具有弹性。而由于紫外照射、压力、污染等一些环境因素的作用，会促进体内弹性蛋白酶产生。弹性蛋白酶是胰凝乳蛋白酶家族中的一员，会降解弹性蛋白，造成表皮中连接组织的丧失，从而导致皮肤衰老，皱纹和光老化的产生。具有抑制弹性蛋白酶活性的物质能够有效抑制弹性蛋白酶活性，降低弹性蛋白的降解速度，延缓皮肤衰老，减少皱纹的产生，使皮肤达到紧致的效果。
2、试验目的
本试验旨在检测本产品莲花发酵物作为抗皱、紧致功效化妆品，在保持皮肤的紧实度、弹性；减缓皮肤皱纹产生或使皱纹变得不明显等状态发生的功效；主要通过检测产品对弹性蛋白酶的抑制率为指标评价物质抗皱、紧致功效。
3、试验受试物
测试样品：测试浓度为200mg/mL（实施例2得到的莲花发酵物）；
阳性对照物：西维来司钠溶液测试浓度为40μg/mL。
4、试验步骤
1）称取适量样品进行预处理；
2）预处理完的样品溶液按步骤加入试剂，使其反应完全；
3）将反应完全的试剂移取适量，上机测其吸光度；
4）记录数据，计算弹性蛋白酶抑制率及统计学差异值。
5、结果计算
弹性蛋白酶作为具有极高选择性和专一性的蛋白分解酶，对许多含羧基的多肽键具有催化水解的作用，可以使***蛋白质中的弹性蛋白分解。计算试验样品对弹性蛋白酶抑制的能力并计算统计学差异P值，来判定样品是否具有抗皱、紧致功效。
式中：A样品：表示样品管的吸光度；
B样品底物：表示样品本底管的吸光度；
C：表示溶剂管的吸光度；
D：表示溶剂本底管的吸光度。
本试验结果表征为试样对弹性蛋白酶的抑制率，与具有抗皱、紧致功效的对照物进行比较，如果阳性对照物抑制率高于空白对照组且统计学差异值（P<0.05），则试验结果有效，试验样品抑制率高于空白对照组且统计学差异值（P＜0.05），则说明试验样品具有抗皱、紧致功效，试验进行三次平行试验，用三次平行试验平均值作为测试结果（如表1）。
表1抑制率测定结果表
| 试验项目 | 空白对照组 | 试验样品组 | 阳性对照组 |
| 弹性蛋白酶抑制率% | 0.65 | 42.75 | 73.98 |
| P值 | / | P＜0.05 | P＜0.05 |
测试结果表明：阳性对照组抑制率高于空白对照组且统计学差异值(P<0.05)，试验结果有效；试验样品组抑制率高于空白对照组且统计学差异值(P<0.05)，试验样品莲花发酵物具有抗皱、紧致功效。
测试例2
1、试验原理及依据
自由基学说认为在正常生理条件下，机体内自由基的产生与消除处于动态平衡，一旦这种平衡被破坏则会导致过量自由基的产生；过量的自由基对染色体、线粒体、细胞膜和***等生物组织的毒害性攻击会引起机体的衰老。自由基引起机体衰老的机制可以概括为以下 3 个方面：一是使生物大分子交联聚合和脂褐素堆积；二是使器官组织细胞受到破坏并减少；三是使免疫功能降低。1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（简称 DPPH）是一种稳定的长寿命自由基，其乙醇溶液呈深紫色，在 517nm 附近有强吸收。当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使 DPPH 乙醇溶液光吸收减弱。DPPH 乙醇溶液褪色程度与其接受的电子数呈线性关系，由此可评价试验样品清除自由基的能力，即抗氧化活性的大小。
2、试验目的
本试验旨在检测本产品莲叶提取物作为抗皱功效化妆品，在减缓皮肤皱纹产生或使皱纹变得不明显而发生的功效；主要通过检测产品对自由基（DPPH）的清除率为指标评价物质抗皱抗氧化功效。
3、试验受试物
测试样品：测试浓度为20 mg/mL（实施例2得到的莲花发酵物）；
阳性对照物：维生素E溶液测试浓度为40 μg/mL 。
4、试验步骤：
1）称取适量样品进行预处理；
2）预处理完的样品溶液按步骤加入试剂，使其反应完全；
3）将反应完全的试剂移取适量，上机测其吸光度；
4）记录数据，计算自由基（DPPH）清除率及统计学差异值。
5、结果计算
DPPH·清除方法以DPPH·作为受试***，受试物直接与 DPPH·接触，DPPH·可以接受一个电子或氢原子，从而形成稳定的DPPH-H 化合物，使其甲醇（或乙醇）
溶液从深紫色变为黄色，变色程度与其接受的电子数量（自由基清除活性）成定量关系，用紫外可见分光光度计测量吸光度的改变再通过与Vc和标准对照样本吸光度改变的比较来评价受试物的抗氧活性。计算试验样品对自由基（DPPH）清除的能力并计算统计学差异 P 值，来判定样品是否具有抗皱功效。
式中：A样品：表示样品管的吸光度；
B样品底物：表示样品本底管的吸光度；
C：表示溶剂管的吸光度；
D：表示溶剂本底管的吸光度。
本试验结果表征为试样对自由基（DPPH）的清除率，与具有抗皱功效的对照物进行比较，如果阳性对照物清除率高于空白对照组且统计学差异值（P＜0.05），
则试验结果有效，试验样品清除率高于空白对照组且统计学差异值（P＜0.05），则说明试验样品具有抗皱功效，试验分别进行三次平行试验，用三次平行试验平均值作为测试结果（如下表2）。
表2 DPPH自由基清除率测试结果
| 空白对照组 | 试验样品组 | 阳性对照组 | |
| DPPH自由基清除率/% | 1.28 | 40.51 | 81.45 |
| P值 | / | P＜0.05 | P＜0.05 |
测试结果表明：阳性对照组清除率高于空白对照组且统计学差异值(P<0.05)，则试验结果有效，试验样品组清除率高于空白对照组且统计学差异值(P<0.05)，则试验样品莲叶提取物具有抗皱抗氧化功效。
测视例3
1、试验原理及依据
人体皮肤的解剖和组织结构学指出：皮脂腺是一种泡状腺体，其多开口于毛囊上部，它的分泌也在第二特征发育后增多，受雄性激素影响明显。皮脂腺是附属于皮肤的一个重要腺体，是产生皮脂的重要部位，它可分泌皮脂，皮脂进入皮囊经过毛孔排到皮肤表面。皮脂腺是雄激素的靶器官，睾酮使皮脂腺体积增大，分泌增加，特别是人体内皮脂合成催化剂 5α-还原酶过分活跃，致使二氢睾酮（DHT，一种雄性激素）分泌增多，促使皮脂腺功能失常性地增大。5α-还原酶是人体将游离***转化为 DHT 的酶，如果没有 5α-还原酶，DHT 就无法形成。故通过抑制 5α-还原酶的活性来降低 DHT 水平能有效缓解皮脂腺过度分泌油脂，从而起到控油的功效。
2、试验目的
本试验旨在检测本产品莲叶提取物作为控油功效化妆品，在减缓施用部位皮
脂分泌和沉积，或使施用部位出油现象不明显状态时发生的功效；主要通过检测
产品对 5α-还原酶的抑制率为指标评价物质控油功效。
3、试验受试物
测试样品：测试浓度为 80 mg/mL（实施例2得到的莲花发酵物）；
阳性对照物：非那雄胺溶液测试浓度为 2.5 mmol/L。
4、试验步骤
1）称取适量样品进行预处理；
2）预处理完的样品溶液按步骤加入试剂，使其反应完全；
3）同时取适量阳性对照物加入试剂，使其反应完全；
4）将反应完全的试剂移取适量，上机测其吸光度；
5）记录数据，计算 5α-还原酶抑制率及统计学差异值。
5、结果计算
5α-还原酶是依赖还原型辅酶Ⅱ(NADPH)的膜蛋白酶，能不可逆地转化睾酮（Testosterone，T）为双氢睾酮（Dihydrotestosterone，DHT）。计算试验样品对5α-还原酶抑制的能力并计算统计学差异P值，来判定样品是否具有控油功效。
式中：A样品：表示样品管的吸光度；
B样品底物：表示样品本底管的吸光度；
C：表示溶剂管的吸光度；
D：表示溶剂本底管的吸光度。
本试验结果表征为试样对5α-还原酶的抑制率，与具有控油功效的对照物进行比较，如果阳性对照物抑制率高于空白对照组且统计学差异值（P＜0.05），则试验结果有效，试验样品抑制率高于空白对照组且统计学差异值（P＜0.05），则说明试验样品具有控油功效，试验进行三次平行试验，用三次平行试验平均值作为测试结果（如下表3）。
表3 5α-还原酶的抑制率的测试结果
| 空白对照组 | 试验样品组 | 阳性对照组 | |
| 5α-还原酶抑制率/% | 0.44 | 54.87 | 75.66 |
| P值 | / | P＜0.05 | P＜0.05 |
阳性对照组抑制率高于空白对照组且统计学差异值(P<0.05)，则试验结果有效，试验样品组抑制率高于空白对照组且统计学差异值(P<0.05)，则试验样品莲叶提取物具有控油功效。
测试例4
保湿性能测试：
1、受试群体：干性皮肤的受试者，年龄20-60岁，性别随机，分成4组，每组5人。
2、受试样品的制备：分别将实施例1、对比例1制备得到的莲花提取物、实施例2-4制备得到的莲花发酵物用蒸馏水配置成1wt%的水溶液。
3、测试方法：
1)技术人员使用皮肤含水量测试Corneometer CM825测量受试者的试验部位，取平均值，记为空白值。
2)受试者在连续使用受试样品0h、2h、6h后，由技术人员使用皮肤含水量测试Corneometer CM825测量5次，取平均值。
表4水分含量的测试结果
| 0h | 2h | 6h | |
| 实施例1 | 30.35 | 50.18 | 47.56 |
| 实施例2 | 39.74 | 58.49 | 57.15 |
| 实施例3 | 37.25 | 56.37 | 55.39 |
| 实施例4 | 34.98 | 53.71 | 53.08 |
由表4可知，本申请制备的莲花发酵物具有良好的保湿性能，且使用6h后，皮肤含水量扔在50%以上，说明莲花发酵物具有持久保湿性能。
当蛹虫草菌孢子液和灵芝菌孢子液一起使用时，它们可能发生协同效应，也被称为增效作用。这种效应意味着两种菌孢子液的联合效果超过了它们各自效果的简单相加。这种协同效应可能源于两种菌类间生物化学过程的相互作用，包括竞争性代谢、互利共生或诱导共生。首先，蛹虫草菌孢子和灵芝菌孢子在共培养过程中可能发生互利共生现象。即，一种菌孢子的生长过程中释放的某些物质，可能为另一种菌孢子的生长提供了有利的环境，例如提供必要的营养物质，改善环境条件等，从而加强了其生长和代谢活动，这在细菌学中是一种常见现象。另外，我们知道菌类在生长过程中会产生大量的次生代谢物，这些物质往往具有较强的生物活性。在蛹虫草菌孢子和灵芝菌孢子共培养的环境中，可能会产生新的次生代谢物，这些新的次生代谢物具有的活性成分可能增强了其保湿效果。在竞争性代谢方面，两种菌孢子可能针对相同的营养物质进行竞争，这种竞争性代谢可能会促使菌孢子更快速、更充分地利用这些营养物质，进而加速生长，产生更多的生物活性成分。最后，从生物化学角度来看，不同种类的菌孢子可能拥有不同的代谢通路和酶***，这些不同的代谢通路和酶***可能会相互补充，从而提高总体的代谢效率，增强其生物活性。
上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。
Claims (9)
1.一种莲花发酵物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、将莲花提取物与PDA液体培养基混合均匀，灭菌，得到含莲花提取物的PDA液体培养基；
步骤2、将真菌菌种分别接种至PDA液体培养基中，培养，得到种子液；
步骤3、将种子液接种在含莲花提取物的PDA液体培养基中摇床培养，发酵，得到发酵液
步骤4、离心，收集上清液即得莲花发酵物。
2.如权利要求1所述的莲花发酵物的制备方法，其特征在于，步骤1中所述含莲花提取物的PDA液体培养基的浓度为1-5%（w/w）。
3.如权利要求1所述的莲花发酵物的制备方法，其特征在于，步骤2中所述真菌菌种为蛹虫草菌、灵芝菌中的一种或两种混合物。
4.如权利要求1或2所述的莲花发酵物的制备方法，其特征在于，步骤3中种子液的接种量为1-10%v/v。
5.一种莲花发酵物，其特征在于，由权利要求1-4中任一项所述的莲花发酵物的制备方法制备而成。
6.一种如权利要求5中所述的莲花发酵物在抗皱紧致化妆品中的应用。
7.一种抗皱紧致化妆品，其特征在于，其包括权利要求5所述的莲花发酵物。
8.如权利要求7所述的抗皱紧致化妆品，其特征在于，所述莲花发酵物在抗皱紧致化妆品中的含量为0.1-1wt%。
9.如权利要求7-8任一项所述的抗皱紧致化妆品，其特征在于，所述的抗皱紧致化妆品为化妆水、乳液、精华液、乳霜。
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