CN116606755A - 地衣芽孢杆菌及其在降解聚烯烃中的应用 - Google Patents
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Abstract
本申请公开了地衣芽孢杆菌及其在降解聚烯烃中的应用。地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）M0具有较强的降解聚烯烃的能力，可用于制备聚烯烃降解菌剂，聚烯烃降解菌剂可用来降解环境中常见的聚烯烃制品，也可以作为聚烯烃制品添加剂在生产过程中添加到聚烯烃制品中，使得聚烯烃制品保留耐用性的前提下成为可降解塑料。当聚烯烃制品使用后被埋入堆肥或土壤中，地衣芽孢杆菌M0可以使得聚烯烃制品被分解为二氧化碳、无机盐和水等简单化合物。
Description
技术领域
本申请涉及微生物技术的技术领域，具体而言涉及地衣芽孢杆菌及其在降解聚烯烃中的应用。
背景技术
由于塑料的结构稳定和高性价比优势，已在生产和生活中大规模使用，但因其不易降解，在使用废弃后会造成白色污染。实际上，在自然环境中的通用塑料依然能够降解为简单化合物，只不过需要极其长的时间，所以通常被视为“不可降解”塑料。常见的降解技术是通过塑料的高温崩解，再被微生物降解为简单化合物，但此方法对通用塑料尤其是聚烯烃无效。而常见的“可降解”塑料由于具有不耐高温和脆弱易破裂的特点，价格高昂，难以大规模使用；特别是部分用于薄膜和一次性塑料产品的传统可降解塑料，由于物理性能不如聚烯烃，性价比较差。
因此，需要研发物理性能较高的可降解聚烯烃，以至少部分地解决以上问题。
发明内容
在本申请的内容部分中引入了一系列简化形式的概念，这将在具体实施方式部分中进一步详细说明。本申请的内容部分并不意味着要试图限定出所要求保护的技术方案的关键特征和必要技术特征，更不意味着试图确定所要求保护的技术方案的保护范围。
为至少部分地解决上述问题，本申请提供了地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）M0，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号GDMCC NO:63160，保藏时间为2023年02月08日。
进一步地，还提供了根据所述的地衣芽孢杆菌M0在降解聚烯烃制品方面的应用。
优选地，所述聚烯烃制品中所述地衣芽孢杆菌M0的添加量相对于所述聚烯烃制品的总重大于等于10 cfu/g。
优选地，所述聚烯烃制品中所述地衣芽孢杆菌M0的添加量相对于所述聚烯烃制品的总重为103~5×104cfu/g。
进一步地，还提供了一种聚烯烃降解菌剂，所述聚烯烃降解菌剂包括所述的地衣芽孢杆菌M0。
优选地，所述聚烯烃降解菌剂为母粒形式的聚烯烃制品添加剂。
优选地，所述母粒形式的聚烯烃制品添加剂包括占其总重量 50~80%的载体、16~46%的聚烯烃树脂和4%的PE蜡，其中，所述载体上附着有所述地衣芽孢杆菌M0。
进一步地，还提供了一种聚烯烃制品添加剂的制备方法，用于制备母粒形式的聚烯烃制品添加剂，包括以下步骤：
S1：将包括所述的地衣芽孢杆菌M0的菌液通过雾化附着在载体表面；
S2：将所述载体、聚烯烃树脂和PE蜡混合，得到混合物；
S3：用螺杆挤出机将所述混合物制成所述聚烯烃制品添加剂。
优选地，步骤S3中所述螺杆挤出机的挤出温度为170~210℃，更优选为180-200℃。
优选地，按重量百分比计，所述混合物中各成分用量为：所述载体50~80%，所述聚烯烃树脂16~46%，所述PE蜡4%。
进一步地，还提供了一种聚烯烃制品，所述聚烯烃制品包括所述的聚烯烃降解菌剂和聚烯烃材料，按重量百分比计，所述聚烯烃制品添加剂的添加量为所述聚烯烃制品总重量的10~50%，所述聚烯烃材料的添加量为所述聚烯烃制品总重量的50~90%。
优选地，所述聚烯烃制品的加工温度为180-280℃。
根据本申请的地衣芽孢杆菌M0，含有该菌株的聚烯烃制品使用后被埋入堆肥或土壤中后，或者将该菌株喷洒在废弃的聚烯烃制品中再埋入堆肥或土壤中后，地衣芽孢杆菌M0可以使得聚烯烃制品在自然环境中降解，被分解为二氧化碳、无机盐和水等简单化合物。
附图说明
本申请的下列附图在此作为本申请的一部分用于理解本申请。附图中示出了本申请的实施方式及其描述，用来解释本申请的原理。附图中：
图1为地衣芽孢杆菌M0的菌落形态照片；
图2为实验材料和参比材料的生物分解百分率曲线。
具体实施方式
在下文的描述中，给出了大量具体的细节以便提供对本申请更为彻底的理解。然而，对于本领域技术人员而言显而易见的是，本申请可以无需一个或多个这些细节而得以实施。在其他的例子中，为了避免与本申请发生混淆，对于本领域公知的一些技术特征未进行描述。
为了彻底理解本申请，将在下列的描述中提出详细的描述。显然，本申请实施方式的施行并不限定于本领域的技术人员所熟悉的特殊细节。本申请的较佳实施方式详细描述如下，然而除了这些详细描述外，本申请还可以具有其他实施方式。
应予以注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式。此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和／或“包括”时，其指明存在所述特征、整体、步骤、操作、元件和／或组件，但不排除存在或附加一个或多个其他特征、整体、步骤、操作、元件、组件和／或它们的组合。
本申请中所引用的诸如“第一”和“第二”的序数词仅仅是标识，而不具有任何其他含义，例如特定的顺序等。而且，例如，术语“第一部件”其本身不暗示“第二部件”的存在，术语“第二部件”本身不暗示“第一部件”的存在。
需要说明的是，本文中所使用的术语“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“内”、“外”以及类似的表述只是为了说明目的，并非限制。
现在，将参照附图更详细地描述根据本申请的示例性实施方式。然而，这些示例性实施方式可以多种不同的形式来实施，并且不应当被解释为只限于这里所阐述的实施方式。应当理解的是，提供这些实施方式是为了使得本申请的公开彻底且完整，并且将这些示例性实施方式的构思充分传达给本领域普通技术人员。
本发明的一个具体实施方式中，提供一株聚烯烃降解菌地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）M0，保藏信息：
生物材料名称：地衣芽孢杆菌M0，拉丁文名称：Bacillus licheniformis M0；
保藏机构：广东省微生物菌种保藏中心，地址：中国广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；
保藏日期：2023年02月08日，保藏编号：GDMCC NO: 63160。
一、地衣芽孢杆菌M0的获取及鉴定
1.获取原生菌株
在废弃物堆中，观察到不同塑料产品表面有不同的变化，部分显然表现出微生物活动的迹象。从不同的废弃物堆中选取上述现象明显的材料，对表面的微生物群落进行采样富集，初步得到微生物富集液，也即菌液。
2.筛选高效菌株
取菌液，使用前混匀，采用稀释涂布平板法进行分离。用磷酸盐缓冲液进行梯度稀释（10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6），然后取各个梯度稀释的100μL涂布于营养琼脂平板上，平行测定两个皿，放置于36℃±1℃培养24h~48h。
观察培养基上菌落生长形态。挑取营养琼脂平板上不同形态的单菌落，分别划线于营养琼脂平板上，于36℃±1℃培养24h~48h纯化，重复纯化3次，最终得到地衣芽孢杆菌M0。菌落形态如图1所示。
其中，营养琼脂培养基的成分包括蛋白胨10.0g，牛肉浸膏3.0g，氯化钠5.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1000mL。将上述成分混合均匀，煮沸溶解，调节pH至7.3±0.2。分装至试管或锥形瓶中，121℃高压灭菌15min得到营养琼脂培养基。
磷酸盐缓冲液的成分包括磷酸二氢钾（KH2PO4）34.0g，蒸馏水500mL。具体地，称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至7.2，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱得到贮存液。取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15min得到磷酸盐缓冲液。
3. 地衣芽孢杆菌M0的分子生物学鉴定
通过对菌种样品进行DNA提取，使用细菌16S通用引物进行扩增测序，利用测序结果在NCBI数据库中进行比对，从而对样品进行初步鉴定。
细菌的16S rDNA序列在不同的物种间是高度保守的，不同的物种间序列是不一样的，因而对此序列通过PCR扩增测序，与GenBank中的已知序列进行比对后，则可判定细菌种类，将其划分到属或种。
16S rDNA (16S rRNA为核糖体RNA的一个亚基，16S rDNA就是编码该亚基的基因)鉴定是指用利用细菌16S rDNA序列测序的方法对细菌进行种属鉴定。16S rDNA是细菌染色体上编码16S rRNA相对应的DNA序列，存在于所有细菌染色体基因中。rRNA指的是rDNA的转录产物，它是构成核糖体的重要成分，核糖体由许多小的rRNA分子组装而成，16S rRNA是其中一个组件，一般所分析的对象都是16S rDNA，因为DNA提取容易,也比较稳定。
I、使用DNA提取试剂盒（通用型）提取DNA，具体步骤如下：
（1） 将Spin Column置于Collection Tube中，加入250 μl Buffer BL，12000rpm/min离心1 min活化硅胶膜；
（2）取1mL菌液置于1.5 ml离心管中，加入400 μl Buffer gP1，涡旋振荡1 min，65℃水浴10 ~ 30 min，期间可取出颠倒混匀以充***解；
（3）加入150 μl Buffer gP2，涡旋振荡1 min，冰浴5 min；
（4）12000 rpm/min离心5 min，将上清转移至新的离心管中；
（5）加入上清等体积的无水乙醇，立即充分振荡混匀，液体全部转入Spin Column中，12,000 rpm/min离心30 s，弃废液；
（6）向Spin Column中加入500 μl Buffer Pw（使用前已加入无水乙醇）， 12000rpm/min离心30 s，弃废液；
（7）向Spin Column中加入500 μl Wash Buffer（使用前已加入无水乙醇），12000rpm/min离心30 s，弃废液；
（8）重复操作步骤7；
（9）将Spin Column放回Collection Tube中，12,000 rpm/min离心2 min，开盖晾干1 min；
（10）取出Spin Column，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中央处加50 ~100μl TE Buffer（65℃预热TE Buffer），20 ~ 25℃放置2 min，12,000 rpm/min 离心2 min。
II、PCR扩增
菌种鉴定通用引物如下：
提取的DNA样品适量稀释后作为PCR模板，以擎科1×TSE101金牌mix进行扩增，扩增体系各组分如下：
| 1×TSE101金牌mix | 45μl |
| 27F（10P) | 2μl |
| 1492R（10P) | 2μl |
| DNA模板 | 1μl |
以上扩增体系按以下扩增程序扩增：
III、电泳检测
将扩增好的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳（2μl样品+6μl溴酚蓝），300V电压下12分钟，获取鉴定胶图。将准备好PCR产物送至北京擎科生物科技有限公司广州分公司进行一代测序，测序结果如SEQ ID NO:1所示：
TCAGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAGCGGACCGACGGGAGCTTGCTCCCTTAGGTCAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGCTTGATTGAACCGCATGGTTCAATCATAAAAGGTGGCTTTTAGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAACTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTACCGTTCGAATAGGGCGGTACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGCGCGCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGAGGGTTTCCGCCCTTTAGTGCTGCAGCAAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAACCCTAGAGATAGGGCTTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGGCAGAACAAAGGGCAGCGAAGCCGCGAGGCTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTGGAGCCAGCCGCCGAAGGTGGGACAGATGATTGGGGTGAAGTCGTAACAGGGTAGCCGTA（SEQ ID NO:1）
将上述序列与GenBank中的已知序列进行比对后表明其与地衣芽孢杆菌属（Bacillus licheniformis）的多个种的16S rDNA基因序列相似率达到99%，该菌株属于地衣芽孢杆菌属（Bacillus licheniformis）。
二、聚烯烃制品的制备及降解检测
地衣芽孢杆菌M0可以用来制备聚烯烃降解菌剂，聚烯烃降解菌剂的剂型可为多种剂型，如液剂、乳剂、悬浮剂、粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。
聚烯烃降解菌剂可以用来降解环境中常见的聚烯烃制品，也可以作为聚烯烃制品添加剂在生产过程中添加到聚烯烃制品中以制备可降解的聚烯烃制品。
聚烯烃制品中地衣芽孢杆菌M0的添加量相对于聚烯烃制品的总重大于等于10cfu/g。
聚烯烃制品中地衣芽孢杆菌M0的添加量相对于聚烯烃制品的总重优选为103~5×104cfu/g。当添加量低于该范围时，将导致最终产品中的微生物含量不足，虽然聚烯烃仍然能发生降解，但效率将显著下降，因而不优选。当添加量高于该范围时，则可能导致成本过高，不经济。
1.制备母粒形式的聚烯烃制品添加剂
S1：将包括地衣芽孢杆菌M0的菌液通过雾化附着在载体表面。
S2：将载体、聚烯烃树脂和PE蜡混合，得到混合物，混合过程中维持温度在60~70℃之间。其中，按重量百分比计，混合物中各成分用量为：载体50~80%，聚烯烃树脂16~46%，PE蜡4%。
S3：用螺杆挤出机将混合物制成聚烯烃制品添加剂，也即母粒，螺杆挤出机的挤出温度为170~210℃，优选为180-200℃。
S4：挤出后通过拉条的方式用水冷却，将聚烯烃制品添加剂经过高速切粒机切成颗粒，得到母粒形式的聚烯烃制品添加剂。
其中，载体、聚烯烃树脂和PE蜡可采用已知的或商购的材料。
载体可以为固体载体。固体载体又可分为矿物材料和植物材料。矿物材料可以为粘土、滑石、高岭土、蒙脱石、白碳、沸石、硅石和硅藻土中的至少一种。植物材料可以为竹粉、木粉、玉米粉、豆粉和淀粉中的至少一种。
聚烯烃树脂可以为沙特LLDPE，也可以为其他聚烯烃树脂。
制备而成的聚烯烃制品添加剂中地衣芽孢杆菌M0的添加量相对于聚烯烃制品添加剂的总重大于等于100 cfu/g。
优选地，制备而成的聚烯烃制品添加剂中地衣芽孢杆菌M0的添加量相对于聚烯烃制品添加剂的总重为104~105cfu/g。
2.制备聚烯烃制品
将上述母粒形式的聚烯烃制品添加剂与聚烯烃材料共混后，经过注塑、吸塑、吹塑、模压、挤出等常规制备方法制成聚烯烃制品，产品加工温度为180-280℃。聚烯烃制品中按重量百分比计，作为母粒形式的聚烯烃制品添加剂的添加量为聚烯烃制品总重量的10~50%，聚烯烃材料的添加量为聚烯烃制品总重量的50~90%。
聚烯烃材料可以为沙特LLDPE，也可以为其他聚烯烃材料。
3.降解检测
本实施方式在堆肥环境中测定实验材料的生物分解百分率。将实验材料导入堆肥容器，在规定的温度、氧浓度和湿度下进行强烈的需氧堆肥。在实验材料的需氧生物分解过程中，二氧化碳、水、矿化无机盐及新的生物质都是最终生物分解的产物。在实验中连续监测、定期测量实验容器和空白容器产生的二氧化碳，累计产生的二氧化碳。实验材料在实验中实际产生的二氧化碳量与该材料可以产生的二氧化碳的理论量之比为生物分解百分率。根据实际测量的总有机碳（TOC）含量可以计算出二氧化碳的理论释放量。
参比材料为可降解的材料，同步进行相同条件的降解试验，以用来验证试验的有效性。
具体试验用品信息如下：
| 试验材料 | 可降解聚烯烃制品 |
| 参比材料 | 薄层色谱纤维素，粒度小于20μm |
| 堆肥来源 | 农田肥料生产的堆肥，肥龄3个月 |
| 二氧化碳测试方法 | 使用20g/L氢氧化钠溶液吸收容器排放的二氧化碳，然后用总有机碳分析仪来测定无机碳，最后确定二氧化碳量 |
| 堆肥容器 | 玻璃材质，容量3L |
| 恒温烘箱 | 58±2℃ |
其中，将浓度为108cfu/ml的地衣芽孢杆菌M0菌液原液配置成浓度为106cfu/ml的稀释液，配置100ml。将100ml稀释液通过雾化附着在800g载体的表面。将800g载体、160g沙特LLDPE和40g PE蜡通过高速共混机800rpm 在60~70℃之间共混5分钟，得到混合物。将混合物通过双螺杆挤出机，按照170~210℃、优选180-200℃挤出，经过切粒制备得1kg的聚烯烃制品添加剂，地衣芽孢杆菌M0的添加量相对于聚烯烃制品添加剂的总重为105cfu/g。取300g聚烯烃制品添加剂和700g沙特LLDPE（即，按重量百分比计30%聚烯烃制品添加剂和70%聚烯烃材料）共混，经过吹膜工艺制备得聚烯烃制品以作为实验材料，地衣芽孢杆菌M0的添加量相对于聚烯烃制品的总重为3×104cfu/g。
实验材料和参比材料基本特性如下：
| 实验材料 | 参比材料 | |
| 形状 | 颗粒状 | 粉末状 |
| 尺寸 | 小于2cm×2cm | -- |
| 样品量（g） | 50 | 50 |
| 总干固体（%） | 99.8 | 97.6 |
| 湿度（%） | 0.2 | 2.4 |
| 总有机碳（TOC,%） | 46.82 | 44.40 |
| 理论二氧化碳释放量（ThCO2,g） | 85.66 | 79.45 |
至少准备下列数量的堆肥容器：
a) 3个装实验材料的容器；
b) 3个装参比材料的容器；
c) 3个空白容器。
将实验材料和参比材料分别导入对应的堆肥容器中，空白容器只含堆肥，测试条件为58±2℃，通气流量为100-150ml/min。
在实验过程中，持续检测二氧化碳的累计释放量，持续维持堆肥混合物的湿度50%，同时持续关注堆肥过程中测试样品的变化。
用下列公式根据累计放出的二氧化碳的量，计算生物分解百分率：
Dt= [(CO2)T - (CO2)B]/ThCO2×100
其中，Dt表示实验材料或参比材料的生物分解百分率（%）；
(CO2)T表示每个含有实验材料或参比材料的堆肥容器累计放出的二氧化碳量，单位为克每个容器（g/容器）；
(CO2)B表示空白容器累计放出的二氧化碳量平均值，单位为克每个容器（g/容器）；
ThCO2表示实验材料或参比材料产生的二氧化碳理论释放量，单位为克每个容器（g/容器）。
实验结果如图2和下表所示：
| 天数 | (CO2)B1 | (CO2)B2 | (CO2)B3 | (CO2)B | (CO2)T1 | (CO2)T2 | (CO2)T3 | Dt1 | Dt2 | Dt3 | Dt |
| 10 | 24.34 | 24.05 | 26.76 | 25.05 | 40.03 | 45.34 | 45.04 | 17.49 | 23.69 | 23.34 | 21.50 |
| 45 | 38.64 | 40.86 | 46.08 | 41.86 | 76.13 | 83.09 | 76.59 | 40.00 | 48.13 | 40.54 | 42.89 |
| 127 | 52.49 | 50.21 | 62.40 | 55.03 | 106.11 | 106.63 | 108.20 | 59.63 | 60.23 | 62.06 | 60.64 |
其中，(CO2)B=[(CO2)B1+(CO2)B2+(CO2)B3]/3
Dti= [(CO2)Ti - (CO2)B]/ThCO2×100
Dt= [Dt1+Dt2+Dt3]/3
由表可知，作为实验材料的聚烯烃制品在10天、45天和127天的生物分解百分率分别为21.50%、42.89%和60.64%。由图2可知，45天后参比材料的生物分解百分率大于70%，证明试验有效。
由此可见，用含有地衣芽孢杆菌M0的聚烯烃制品添加剂制备的聚烯烃制品在堆肥或土壤环境中可降解为二氧化碳、无机盐和水等简单化合物，而不含该菌种的聚烯烃制品在相同环境中则是不可降解的。
三、聚烯烃制品物理性能检测
上述加入聚烯烃制品添加剂制备而成的聚烯烃制品，长度50mm，宽度12mm，厚度0.035mm，经机械性能检测结果，物理性能如下表所示：
| 试样号 | 拉伸强度（MPa） | 断裂伸长率（%） | 屈服应力（MPa） | 屈服伸长率（%） | 刺破力（N） | 判定 |
| 1 | 26.980 | 360.1 | 20.48 | 348.1 | 2.24 | PASS |
| 2 | 27.277 | 356.7 | 27.26 | 348.0 | 2.22 | PASS |
| 3 | 28.390 | 355.6 | 28.38 | 338.1 | 2.27 | PASS |
| 平均值 | 27.549 | 357.5 | 25.37 | 344.7 | 2.24 | PASS |
| 方差 | 0.743 | 2.3 | 4.27 | 5.7 | 0.03 | PASS |
采用本发明所述工艺和技术生产出来的可降解购物袋，在实现了降解性能的基础上，依然维持了常规塑料的使用性能。
参考国标GB/T 21661-2020 塑料购物袋的一系列标准测试，本发明制备所得的购物袋，完全满足普通塑料购物袋力学性能要求，不会为满足降解条件牺牲可用性。
在聚烯烃制品中添加降解菌株地衣芽孢杆菌M0后，该聚烯烃制品在日常使用的环境中与通用的聚烯烃制品保存期相同，仍然具有良好的物理性能。该聚烯烃制品既保留了聚烯烃的耐用性，又兼具了可降解性，具有较高的性价比。
本发明实施方式的方法的步骤顺序可以根据实际需要进行调整、合并或删减。本发明实施方式的终端的单元可以根据实际需要进行整合、进一步划分或删减。
上述的所有优选实施方式中所述的流程仅是示例。除非发生不利的效果，否则可以按与上述流程的顺序不同的顺序进行各种处理操作。上述流程的步骤顺序也可以根据实际需要进行增加、合并或删减。
此外，上述的所有优选实施方式中所述的命令、命令编号和数据项仅是示例，因此可以以任何方式设置这些命令、命令编号和数据项，只要实现了相同的功能即可。各优选实施方式的终端的单元也可以根据实际需要进行整合、进一步划分或删减。
除非另有定义，本文中所使用的技术和科学术语与本申请的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中使用的术语只是为了描述具体的实施目的，不是旨在限制本申请。本文中在一个实施方式中描述的特征可以单独地或与其它特征结合地应用于另一个实施方式，除非该特征在该另一个实施方式中不适用或是另有说明。
本申请已经通过上述实施方式进行了说明，但应当理解的是，上述实施方式只是用于举例和说明的目的，本申请并不局限于上述实施方式，根据本申请的教导还可以做出更多种的变型和修改，这些变型和修改均落在本申请所要求保护的范围以内。
Claims (12)
1.地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）M0，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号GDMCC NO:63160，保藏时间为2023年02月08日。
2.根据权利要求1所述的地衣芽孢杆菌M0在降解聚烯烃制品方面的应用。
3. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述聚烯烃制品中所述地衣芽孢杆菌M0的添加量相对于所述聚烯烃制品的总重大于等于10 cfu/g。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述聚烯烃制品中所述地衣芽孢杆菌M0的添加量相对于所述聚烯烃制品的总重为103~5×104cfu/g。
5.一种聚烯烃降解菌剂，其特征在于，所述聚烯烃降解菌剂包括权利要求1所述的地衣芽孢杆菌M0。
6.根据权利要求5所述的聚烯烃降解菌剂，其特征在于，所述聚烯烃降解菌剂为母粒形式的聚烯烃制品添加剂。
7.根据权利要求6所述的聚烯烃降解菌剂，其特征在于，所述母粒形式的聚烯烃制品添加剂包括占其总重量50~80%的载体、16~46%的聚烯烃树脂和4%的PE蜡，其中，所述载体上附着有所述地衣芽孢杆菌M0。
8.一种聚烯烃制品添加剂的制备方法，用于制备母粒形式的聚烯烃制品添加剂，其特征在于，包括以下步骤：
S1：将包括权利要求1所述的地衣芽孢杆菌M0的菌液通过雾化附着在载体表面；
S2：将所述载体、聚烯烃树脂和PE蜡混合，得到混合物；
S3：用螺杆挤出机将所述混合物制成所述聚烯烃制品添加剂。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤S3中所述螺杆挤出机的挤出温度为170~210℃。
10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，按重量百分比计，所述混合物中各成分用量为：所述载体50~80%，所述聚烯烃树脂16~46%，所述PE蜡4%。
11.一种聚烯烃制品，其特征在于，所述聚烯烃制品包括权利要求6所述的聚烯烃降解菌剂和聚烯烃材料，按重量百分比计，所述聚烯烃制品添加剂的添加量为所述聚烯烃制品总重量的10~50%，所述聚烯烃材料的添加量为所述聚烯烃制品总重量的50~90%。
12.根据权利要求11所述的聚烯烃制品，其特征在于，所述聚烯烃制品的加工温度为180-280℃。
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