CN116593691A - 一种简便的IgG抗A（B）抗体效价的微柱检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种简便的IgG抗A(B)抗体效价的微柱检测方法，包括如下步骤：步骤一，向微量柱中加入血型抗体对应的A型试剂红细胞或B型试剂红细胞，其中该微量柱中设置有具有分子筛功能的填充物，其只允许游离红细胞通过进而分离游离红细胞和凝集红细胞；步骤二，将灭活的待测样本用氯化钠溶液稀释至特定终浓度，加入微量柱中，离心；步骤三，根据反应产物的1个孔中的凝集强度的强弱，直接判读IgG抗‑A或抗‑B抗体效价值。本发明提供的微柱检测方法的结果判读简单直观，操作简单快速，显著提高了实验结果精准度和降低了实验成本。
Description
技术领域
本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种简便的IgG抗A(B)抗体效价的微柱检测方法。
背景技术
ABO胎儿新生儿溶血病(hemolytic disease of the fetus and newborn，简称HDFN)主要是指母-胎ABO血型不合所致的胎儿或新生儿免疫性溶血性疾病。由于A或B型母亲的天然抗B或抗A抗体绝大多数属于IgM抗体，不能通过胎盘进入胎儿体内，而O型母亲的天然抗A和抗B抗体主要属于IgG抗体，能够通过胎盘进入胎儿体内。因此，ABO血型不合溶血病主要见于O型母亲、A或B型胎儿。
通常是母体的IgG抗A或抗B抗体经过胎盘进入胎儿血循环，从而破坏胎儿红细胞导致宫内胎儿贫血(死胎)或新生儿黄疸(核黄疸)等。HDFN可发生在第一胎，分娩次数越多，发病率越高，且一次比一次严重。为了预防HDFN，有必要进行母亲的ABO血型抗体效价监测。
ABO血型抗体效价是指ABO血型抗体在一定介质条件下与相应红细胞抗原结合，出现不同程度的红细胞凝集，根据凝集强度间接反映出血型抗体结合抗原的能力。然而，由于血型抗体活性较高的情况下，均与相应红细胞发生较强反应性凝集，从而无法区分受检者标本ABO血型抗体结合抗原的能力差异。因此，传统方法是采用巯基试剂处理待检血清(或血浆)中的IgM性质的抗-A或(和)抗-B抗体后，必须将血清(或血浆)连续倍比稀释，观察稀释后血清(或血浆)中的IgG性质的抗-A或(和)抗-B抗体与相应血型抗原红细胞的凝集反应强度，具体地，(1)需排列并标记10支试管，将经巯基试剂处理后含有IgG性质的抗-A或抗-B抗体待检血清(或血浆)分别应用0.9％氯化钠溶液按照1:1比例连续倍比稀释至1：512，(2)逐一在各试管中加入血型抗体对应2-5％A试剂红细胞或B试剂红细胞1滴后混匀，将混匀后各试管于37℃水浴箱中孵育30分钟后，将试管内红细胞洗涤3次，加入1滴抗人球蛋白试剂离心，立即判读实验结果。通常确定凝集强度为1+时稀释度的倒数，即可判读为该标本的抗体效价值。适用于观察不同受检者血标本之间ABO血型抗体活性的差异比较，也适用于同一受检者不同时期ABO血型抗体活性的变化监测。
然而上述传统方法存在如下缺点：
(1)实验过程中需要消耗大量的试管、移液吸管、移液器头和0.9％生理盐水等，操作繁琐；
(2)实验过程中反复移液和稀释极易出现加样误差，导致实验结果精准度不高；尤其是不同检测人员的实验结果可比性较差；
(3)实验操作过程相当繁琐且耗时特别长(一个血标本检测时间不少于60分钟)等。
因此，目前需要一种较为简便的测定IgG抗A(B)抗体效价的方法。
发明内容
为了改变传统ABO血型抗体效价的繁琐实验检测过程，本发明提供了一种简便的IgG抗A(B)抗体效价的微柱检测方法。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
本发明提供了一种简便的IgG抗A(B)抗体效价的微柱检测方法，包括如下步骤：
步骤一，向微量柱中加入相应血型抗体的A型试剂红细胞或B型试剂红细胞，其中该微量柱中设置有具有分子筛功能的填充物，其只允许游离红细胞通过进而分离游离红细胞和凝集红细胞；
步骤二，将灭活的待测样本用氯化钠溶液稀释至特定终浓度，加入上述微量柱中，然后离心；
步骤三，根据反应产物的凝集强度的强弱，直接判读IgG抗-A或抗-B抗体效价值。
进一步地，步骤一中相应血型抗体的A型试剂红细胞或B型试剂红细胞的浓度为2～5％。
进一步地，上述填充物内含有抗人球蛋白试剂。
进一步地，步骤二中灭活采用的试剂为巯基试剂，处理的参数为：37℃，15～30分钟。
进一步地，上述巯基试剂为2-Me(二疏基乙醇)。
进一步地，巯基试剂与待测样本的体积比为1：1。
进一步地，上述待测样本为血清或血浆。
进一步地，步骤二中，待测样本被0.9％氯化钠溶液稀释至终浓度为1:256。
进一步地，步骤三的判读标准如下：
本发明的第二方面是提供基于上述微柱检测方法的产品。
进一步地，上述产品包括微量柱或微柱凝胶卡、上述微柱检测方法中所采用的试剂和一产品说明书；该产品说明书指示了上述微柱检测方法的步骤。
本发明采用以上技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
(1)实验过程中无需反复移液和稀释过程，减少加样误差，显著提高了实验结果精准度；不同检测人员的实验结果可比性强。
(2)实验结果判读简单直观。
(3)实验过程中节省了大量的试管、移液吸管、移液器头、微柱卡和0.9％生理盐水等，显著降低实验成本。
附图说明
图1显示了本发明一实施例中已知效价为1:32的样本在不同稀释比例下的抗人球蛋白检测卡的结果；
图2显示了本发明一实施例中已知效价为1:64的样本在不同稀释比例下的抗人球蛋白检测卡的结果；
图3显示了本发明一实施例中已知效价为1:128的样本在不同稀释比例下的抗人球蛋白检测卡的结果；
图4显示了本发明一实施例中已知效价为1:256的样本在不同稀释比例下的抗人球蛋白检测卡的结果；
图5显示了本发明一实施例中已知效价为1:512的样本在不同稀释比例下的抗人球蛋白检测卡的结果。
具体实施方式
本发明针对现有检测ABO血型抗体效价技术存在操作繁琐、耗时的缺陷，创造性地提供了一种简便的IgG抗A(B)抗体效价的微柱检测方法，其包括如下步骤：
步骤一，向微量柱中加入相应血型抗体的A型试剂红细胞或B型试剂红细胞，其中该微量柱中设置有具有分子筛功能的填充物，其只允许游离红细胞通过；
步骤二，将灭活的待测样本用氯化钠溶液稀释至特定终浓度，加入上述微量柱中；
步骤三，根据反应产物的凝集强度的强弱，直接判读IgG抗-A或抗-B抗体效价值。
在本发明中，上述微量柱的设计类似微柱凝胶卡中的微柱凝胶管，其底部设置有具有分子筛功能的凝胶填充物，通过调节填充物间隙或筛孔大小，确保只允许游离红细胞通过，从而达到分离游离红细胞和凝集红细胞的作用。血型血清学的特异性抗体与红细胞上抗原结合时，凝集的红细胞留在微量柱上层或游离于微量柱(管)中，呈现阳性反应；红细胞抗原抗体没有反应时，通过离心技术使未凝集的红细胞可通过微量柱(管)填充物间隙或筛孔而沉积在微量柱(管)底部，呈现阴性反应。在本发明一优选的实施方式中，填充物内含有抗人球蛋白试剂，可提高与致敏红细胞免疫反应的灵敏度。在本发明一优选的实施方式中，可采用目前市售的微柱凝胶卡，用于批量检测样本，节约时间和操作成本。
在本发明的一优选的实施方式中，步骤一中相应血型抗体的A型试剂红细胞或B型试剂红细胞的浓度为2～5％。
在本发明一优选的实施方式中，步骤二中灭活采用的试剂为巯基试剂，处理的参数为：37℃，15～30分钟。
在本发明一优选的实施方式中，上述巯基试剂为2-Me(二疏基乙醇)。
在本发明一优选的实施方式中，巯基试剂与待测样本的体积比为1：1。
在本发明一优选的实施方式中，上述待测样本为血清或血浆。
在本发明一优选的实施方式中，步骤二中，待测样本被0.9％氯化钠溶液稀释至终浓度为1:256。
在本发明一优选的实施方式中，步骤三的判读标准如下：
下面通过具体实施例和附图对本发明进行详细和具体的介绍，以使更好的理解本发明，但是下述实施例并不限制本发明范围。
实施例中方法如无特殊说明的采用常规方法，使用的试剂如无特殊说明的使用常规市售试剂或按常规方法配制的试剂。
实施例1
本实施例提供了一种IgG抗A(B)抗体效价的微柱检测方法，包括如下步骤：
(1)取1支试管和微柱卡(抗人球蛋白卡)的1个微柱孔。
(2)根据待测样本向微柱凝胶卡的1个孔内加入2-5％相应血型抗体的A型试剂红细胞或B型试剂红细胞15μL；
(3)用移液器在试管内分别加入经巯基试剂(血清或血浆：巯基试剂比例为1:1)在37℃条件下处理30分钟后的含有IgG性质的抗-A或抗-B抗体待检血清或血浆和0.9％氯化钠溶液，二者按照一定比例混匀；用移液器吸取试管内混匀后液体40μL加入上述微柱孔内，微柱卡置入专用离心机离心。
(3)根据微柱凝胶卡孔中的凝集强度的强弱，直接判读IgG抗-A或抗-B抗体效价值。
实施例2
本实施例在实施例1的基础上，探究适合的待检血清和0.9％氯化钠溶液的混合比例，即样本的稀释比例，具体的实验步骤和结果如下：
将通过已知效价的经巯基试剂处理的血浆样本用实施例1的方法进行测定。
其中实施例1的方法中，经巯基试剂2-Me处理的血浆样本与0.9％氯化钠溶液分别按照混合比例为1:7(实际稀释比例1:16)、1:15(实际稀释比例1:32)、1:31(实际稀释比例1:64)、1:63(实际稀释比例1:128)、1:127(实际稀释比例1:256)、1:255(实际稀释比例1:572)混合得到混合液，用移液器吸取混合液40μL加入微柱卡的1个微柱孔内，离心。根据微柱凝胶卡孔中的凝集强度的强弱，直接判读IgG抗-A或抗-B抗体效价值，具体的结果如下表1：
表1实施例1的方法对已知效价的血浆样本的检测结果
其中，“w”表示weak(弱)，“s”表示strong(强)。
由上可知，经巯基试剂处理的血浆样本与0.9％氯化钠溶液的分别按照1:127(即稀释比例为1:256)的情况下，各种效价的样本可以很好地被区分开，且检测结果更精准。
基于上述结果，确定实施例1中含有IgG性质的抗-A或抗-B抗体待检血清和0.9％氯化钠溶液的混合比例优选为1:127，设立的IgG抗-A或抗-B抗体效价值判读标准如下表2：
表2效价判读标准
| 凝集强度 | 效价值 |
| 阴性 | ≤32 |
| ± | 64 |
| + | 128 |
| 2+ | 256 |
| 3+ | ≥512 |
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。
Claims (10)
1.一种简便的IgG抗A(B)抗体效价的微柱检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一，向微量柱中加入血型抗体对应的A型试剂红细胞或B型试剂红细胞，其中所述微量柱中设置有具有分子筛功能的填充物，其只允许游离红细胞通过进而分离游离红细胞和凝集红细胞；
步骤二，将灭活的待测样本用氯化钠溶液稀释至特定终浓度，加入所述微量柱中，离心；
步骤三，根据反应产物的凝集强度的强弱，直接判读IgG抗-A或抗-B抗体效价值。
2.根据权利要求1所述的微柱检测方法，其特征在于，所述相应血型抗体的A型试剂红细胞或B型试剂红细胞的浓度为2～5％。
3.根据权利要求1所述的微柱检测方法，其特征在于，步骤二中灭活采用的试剂为巯基试剂，处理的参数为：37℃，15～30分钟。
4.根据权利要求3所述的微柱检测方法，其特征在于，所述巯基试剂为2-Me。
5.根据权利要求3所述的微柱检测方法，其特征在于，所述巯基试剂与待测样本的体积比为1：1。
6.根据权利要求1所述的微柱检测方法，其特征在于，所述待测样本为血清或血浆。
7.根据权利要求1所述的微柱检测方法，其特征在于，步骤二中，所述待测样本被0.9％氯化钠溶液稀释至终浓度为1：256。
8.根据权利要求7所述的微柱检测方法，其特征在于，步骤三的判读标准如下：
9.一种基于如权利要求1-8任一项所述的微柱检测方法的产品。
10.根据权利要求9所述的产品，其特征在于，包括所述微量柱或微柱凝胶卡、所述微柱检测方法中所采用的试剂和一产品说明书；所述产品说明书指示了所述微柱检测方法的步骤。
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| CN202310490604.8A Pending CN116593691A (zh) | 2023-05-04 | 2023-05-04 | 一种简便的IgG抗A（B）抗体效价的微柱检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116593691A (zh) |
-
2023
- 2023-05-04 CN CN202310490604.8A patent/CN116593691A/zh active Pending
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