CN116458649A - 一种肠道活性多肽组合物的制备工艺 - Google Patents

一种肠道活性多肽组合物的制备工艺 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种肠道活性多肽组合物的制备工艺。本发明将金枪鱼原料经抗氧化处理工序或防胶凝处理工序加工，分离金枪鱼原料中的水分及脂肪，保留原料中的蛋白质，将蛋白质酶解得到肠道活性多肽；同时将肠道活性多肽与虾青素、叶黄素混合，制备得到一种肠道活性多肽组合物。本发明采用特殊的制备工艺，解决了蛋白质加工过程中原料的氧化问题，减少了成品的异味；并解决了蛋白质在酶解过程中出现的胶凝现象，有利于酶解的顺利进行。

Description

一种肠道活性多肽组合物的制备工艺
技术领域
本发明涉及多肽的加工技术领域，尤其涉及一种肠道活性多肽组合物的制备工艺。
背景技术
多肽是蛋白质水解的中间产物，具备多种生物活性。多肽可以调节人体正常的生理功能，是体内新陈代谢中至关重要的一环。多肽类保健品的应用广泛，产业上主要通过蛋白质的酶解来生产多肽。
专利CN 105154503 A公开了一种金枪鱼多肽的提取方法，使用改性膨润土对提取的金枪鱼蛋白质进行脱腥处理，降低了产品的腥味。专利CN 111480851 A公开了一种改善人体循环的肠道专属活性多肽组合物，将菊粉、低聚果糖、植物粉、活性多肽、甜味剂混合均匀，通过排除肠道毒素和调养肠道健康，改善皮肤状态。上述专利均未对活性多肽制备过程中蛋白质的氧化行为进行改善，也未对酶解过程中蛋白质胶凝现象做出优化，实际生产中可能会出现原料变质导致的品控不佳等问题。
发明内容
有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明所解决的技术问题是：(1)解决蛋白质原料在加工过程中出现的氧化变质；(2)防止酶解工序中蛋白质料液出现胶凝现象，提升酶解的效率。
蛋白质的氧化是影响多肽加工品质的重要因素之一。在长期的生产实践中，发明人观察到，加工原料的氧化变质是蛋白质自身的氧化行为及受脂肪氧化影响双重作用下的结果。在加工过程中由于氧化性物质的存在以及加工器材摩擦产生的热量等因素的影响，蛋白质侧链上的氨基酸官能团经非酶修饰发生不可逆的羰基化，导致蛋白质的直接氧化；同时由于原料中脂肪物质的氧化衍生出的羰基化合物能够与未氧化的蛋白质进行共价结合，加速了蛋白质变质的过程；脂肪氧化后产生的自由基可以与蛋白质上的巯基形成二硫键，使巯基的数量显著降低。由于氧化导致的难闻气味及可能产生的腐败物质将严重影响后续制备的多肽组合物的质量，为此发明人在加工过程中加入白皮杉醇并通过亚临界萃取的方式分离了原料中的蛋白质和脂肪成分。
金枪鱼原料中富含脂肪，由于脂肪分子小于蛋白质，相同条件下脂肪的氧化速率大于蛋白质，因而加工过程中蛋白质的变质受脂肪氧化产物的主导。白皮杉醇通过降低脂肪氧化产物来改善蛋白质的氧化行为；白皮杉醇可以通过与原料中的金属离子螯合或清除自由基的形式来阻断蛋白质羰基化进程；氧化后的白皮杉醇形成的醌类化合物和蛋白质的硫醇基团发生反应形成的加合产物也有助于减少巯基的氧化。综合上述因素，白皮杉醇在生产中对蛋白质的氧化行为能够表现出明显的抑制作用。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种肠道活性多肽组合物的制备工艺，包括以下步骤：
(1)金枪鱼原料经抗氧化处理工序或防胶凝处理工序加工，分离金枪鱼原料中的水分及脂肪，保留原料中的蛋白质，将蛋白质酶解得到肠道活性多肽；
(2)将肠道活性多肽与虾青素、叶黄素混合形成混合物，所述混合物即为肠道活性多肽组合物。
优选的，以重量份计，所述肠道活性多肽组合物中，肠道活性多肽的使用量为7～15份，虾青素的使用量为2～5份，叶黄素的使用量为0.9～2.4份。
优选的，所述抗氧化处理工序如下：
X1在金枪鱼原料中加入白皮杉醇，经粉碎、搅拌后制成金枪鱼糜，备用；
X2使用亚临界萃取法分离金枪鱼糜中的水分及脂肪，得到粗制蛋白质，备用；
X3将粗制蛋白质重新分散于含有白皮杉醇的水中，制得蛋白质料液，蛋白质料液经酶解、灭活、分离、冻干，得到肠道活性多肽。
优选的，以重量份计，步骤X1中所述金枪鱼原料的使用量为80～100份；白皮杉醇的使用量为0.2～0.5份。
优选的，以重量份计，步骤X2中所述亚临界萃取法使用的萃取剂为二甲醚，二甲醚的使用量为1800～2250份；萃取温度为36～48℃，萃取压力为0.4～0.8MPa，萃取时间为1～3h。
优选的，步骤X2中所述亚临界萃取法中分离蛋白质与水分、脂肪时的搅拌速率为950～1175rpm，搅拌时间为3～8min。
优选的，以重量份计，步骤X3中所述水的使用量为150～300份；所述白皮杉醇的使用量为0.1～0.25份。
优选的，以重量份计，步骤X3中所述酶解使用中性蛋白酶，酶的用量为0.06～0.15份，酶解的温度为50～55℃，酶解时间为1～6h。
发明人发现，蛋白质料液在酶解过程中出现胶凝作用，蛋白质料液的流动性发生变化而逐渐形成凝胶状物质，限制了酶在料液中的分散，大大增加了酶解的时间并不利于酶解制备活性多肽的进行。
蛋白质的胶凝化是线性蛋白质分子由于分子间交联作用相互结合导致的，胶凝后体系的整体粘度会增大。蛋白质胶凝的过程复杂，主要是通过氢键、二硫键、离子吸附、疏水缔合等因素导致，其中起主导作用的是蛋白质分子间的氢键以及二硫键结合。为了防止蛋白质在酶解过程中出现胶凝，发明人采用pH位移工序将蛋白质复溶、沉积，首先在碱性环境下使蛋白质溶解，此时由于自由氢离子过少，粗制蛋白质内的氢键被破坏；通过pH位移，随着pH降低，增加了游离氢离子，自由氢离子覆盖于蛋白质氢键两端负性离子，使氢键进一步破坏，最后等电沉积得到的精制蛋白质中氢键的影响被减小至最低，从而缓解了蛋白质的胶凝进程。
为了防止蛋白质中的巯基形成双硫键，发明人继续加入了白皮杉醇。现有技术中通常使用还原剂如2-巯基乙醇、二硫苏糖醇防止二硫键的形成，但是上述物质会影响酶解过程中酶的活性，降低酶解效率；而白皮杉醇是天然物质提取的小分子化合物，和酶的相容性优于2-巯基乙醇和二硫苏糖醇。在胶凝过程中蛋白质的分子链重新排列，它的聚集需要分子链一定程度的重新展开，发明人加入酪蛋白糖巨肽，酪蛋白糖巨肽与蛋白质C端带负电一极结合，降低蛋白质分子向链向舒展的倾向，进而影响其结构；另外，在加工中酪蛋白糖巨肽糖基化的过程可以改变蛋白质凝胶网络结构的持水能力，进一步影响蛋白质链的结构，减少胶凝现象的产生。
优选的，所述防胶凝处理工序如下：
Y1在金枪鱼原料中加入白皮杉醇，经粉碎、搅拌后制成金枪鱼糜，备用；
Y2使用亚临界萃取法分离金枪鱼糜中的水分及脂肪，得到粗制蛋白质，备用；
Y3通过改变环境pH的方式将粗制蛋白质重新溶解、等电沉积、回收，随后干燥、粉碎，得到精制蛋白质；
Y4将精制蛋白质分散于含有白皮杉醇的水中，继续加入酪蛋白糖巨肽，制得蛋白质料液；蛋白质料液经酶解、灭活、分离、冻干，得到肠道活性多肽。
优选的，以重量份计，步骤Y1中所述金枪鱼原料的使用量为80～100份；白皮杉醇的使用量为0.2～0.5份。
优选的，以重量份计，步骤Y2中所述亚临界萃取法使用的萃取剂为二甲醚，二甲醚的使用量为1800～2250份；萃取温度为36～48℃，萃取压力为0.4～0.8MPa，萃取时间为1～3h。
优选的，步骤Y2中所述亚临界萃取法中分离蛋白质与水分、脂肪时的搅拌速率为950～1175rpm，搅拌时间为3～8min。
优选的，以重量份计，步骤Y3中所述精制蛋白质的制备方法如下：将粗制蛋白质加入300～500份水，使用浓度均为0.5～2mol/L的盐酸和氢氧化钠的水溶液调节pH；首先将pH调节至11～12，使粗制蛋白质重新溶解；随后将pH调节至5～5.5，使蛋白质等电沉积0.5～1h；将pH调节至6.8，分离得固态物；最后将固态物经干燥、粉碎后，得到精制蛋白质。
优选的，以重量份计，步骤Y4中所述水的使用量为150～300份；所述白皮杉醇的使用量为0.1～0.25份；酪蛋白糖巨肽的使用量为0.2～0.8份。
优选的，以重量份计，步骤Y4中所述酶解使用中性蛋白酶，酶的用量为0.06～0.15份，酶解的温度为50～55℃，酶解时间为1～6h。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可以任意组合，即得本发明各较佳实施例。
本发明配方中部分原料的介绍及作用如下：
白皮杉醇：一种有机物、天然小分子化合物。本发明中用以缓解原料的变质及防止蛋白质产生胶凝。
酪蛋白糖巨肽：κ-酪蛋白经凝乳酶降解产生的一类含有糖链的多肽，具有许多的生理活性功能和独特的营养特性。本发明中用于改善蛋白质链舒展取向，减少胶凝的产生。
本发明的有益效果：
与现有技术相比，本发明在原料加工过程中加入了白皮杉醇，过降低脂肪氧化产物来改善蛋白质的氧化行为，并且与原料中的金属离子螯合或清除自由基的形式来阻断蛋白质羰基化进程，有效阻止了原料的氧化变质。
相比于现有技术，本发明使用pH位移工序结合白皮杉醇及酪蛋白糖巨肽，进一步地缓解了酶解过程中因蛋白质胶凝导致的酶解效率下降，提高了生产效率。
与现有技术相比，本发明使用亚临界萃取法分离了蛋白质与脂肪，分离后的脂肪可以进一步作为鱼油生产的原料，提高了原料的使用率。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
本发明对照例及实施例中部分原材料参数如下：
白皮杉醇，CAS号：10083-24-6；
酪蛋白巨肽，丹麦阿拉食品原料有限公司；
中性蛋白酶，酶活力：13万u/g，CAS号：37312-62-2。
实施例1
一种肠道活性多肽组合物，采用如下制备工艺生产得到：
S1在80kg金枪鱼原料经粉碎、搅拌后制成金枪鱼糜，备用；
S2使用亚临界萃取法分离金枪鱼糜中的水分及脂肪；使用的萃取剂为二甲醚，二甲醚的使用量为1800kg；萃取温度为43℃，萃取压力为0.67MPa，萃取时间为1.5h，搅拌速率为1075rpm，搅拌时间为6min，得到粗制蛋白质，备用；
S3将粗制蛋白质分散于225kg水中，制得蛋白质料液；蛋白质料液中加入0.09kg中性蛋白酶，在52℃酶解3h后升温至100℃灭活15min，随后分离上清液、冻干，得到肠道活性多肽，备用；
S4取11kg肠道活性多肽、3.5kg虾青素、1.6kg叶黄素混合，该混合物即为所述肠道活性多肽组合物。
实施例2
一种肠道活性多肽组合物，采用如下制备工艺生产得到：
S1在80kg金枪鱼原料中加入0.24kg白皮杉醇，经粉碎、搅拌后制成金枪鱼糜，备用；
S2将金枪鱼糜分散于含有白皮杉醇的水中，其中水的使用量为225kg，白皮杉醇的使用量为0.18kg，制得鱼糜料液；鱼糜料液中加入0.09kg中性蛋白酶，在52℃酶解3h后升温至100℃灭活15min，随后分离上清液、冻干，得到肠道活性多肽，备用；
S3取11kg肠道活性多肽、3.5kg虾青素、1.6kg叶黄素混合，该混合物即为所述肠道活性多肽组合物。
实施例3
一种肠道活性多肽组合物，采用如下制备工艺生产得到：
S1在80kg金枪鱼原料中加入0.24kg白皮杉醇，经粉碎、搅拌后制成金枪鱼糜，备用；
S2使用亚临界萃取法分离金枪鱼糜中的水分及脂肪；使用的萃取剂为二甲醚，二甲醚的使用量为1800kg；萃取温度为43℃，萃取压力为0.67MPa，萃取时间为1.5h，搅拌速率为1075rpm，搅拌时间为6min，得到粗制蛋白质，备用；
S3将精制蛋白质分散于含有白皮杉醇的水中，其中水的使用量为225kg，白皮杉醇的使用量为0.18kg，制得蛋白质料液；蛋白质料液中加入0.09kg中性蛋白酶，在52℃酶解3h后升温至100℃灭活15min，随后分离上清液、冻干，得到肠道活性多肽，备用；
S4取11kg肠道活性多肽、3.5kg虾青素、1.6kg叶黄素混合，该混合物即为所述肠道活性多肽组合物。
实施例4
一种肠道活性多肽组合物，采用如下制备工艺生产得到：
S1在80kg金枪鱼原料中加入0.24kg白皮杉醇，经粉碎、搅拌后制成金枪鱼糜，备用；
S2使用亚临界萃取法分离金枪鱼糜中的水分及脂肪；使用的萃取剂为二甲醚，二甲醚的使用量为1800kg；萃取温度为43℃，萃取压力为0.67MPa，萃取时间为1.5h，搅拌速率为1075rpm，搅拌时间为6min，得到粗制蛋白质，备用；
S3将粗制蛋白质分散于含有白皮杉醇的水中，其中水的使用量为225kg，白皮杉醇的使用量为0.18kg；继续加入0.4kg酪蛋白糖巨肽，制得蛋白质料液；蛋白质料液中加入0.09kg中性蛋白酶，在52℃酶解3h后升温至100℃灭活15min，随后分离上清液、冻干，
得到肠道活性多肽，备用；
S4取11kg肠道活性多肽、3.5kg虾青素、1.6kg叶黄素混合，该混合物即为所述肠道活性多肽组合物。
实施例5
一种肠道活性多肽组合物，采用如下制备工艺生产得到：
S1在80kg金枪鱼原料中加入0.24kg白皮杉醇，经粉碎、搅拌后制成金枪鱼糜，备用；
S2使用亚临界萃取法分离金枪鱼糜中的水分及脂肪；使用的萃取剂为二甲醚，二甲醚的使用量为1800kg；萃取温度为43℃，萃取压力为0.67MPa，萃取时间为1.5h，搅拌速率为1075rpm，搅拌时间为6min，得到粗制蛋白质，备用；
S3将粗制蛋白质加入400kg水，使用浓度均为1mol/L的盐酸和氢氧化钠的水溶液调节pH；首先将pH调节至11，使粗制蛋白质重新溶解；随后将pH调节至5，使蛋白质等电沉积1h；将pH调节至6.8，离心分离得固态物；最后将固态物经冷冻干燥、粉碎后，得到精制蛋白质；
S4将精制蛋白质分散于含有白皮杉醇的水中，其中水的使用量为225kg，白皮杉醇的使用量为0.18kg，制得蛋白质料液；蛋白质料液中加入0.09kg中性蛋白酶，在52℃酶解3h后升温至100℃灭活15min，随后分离上清液、冻干，得到肠道活性多肽，备用；
S5取11kg肠道活性多肽、3.5kg虾青素、1.6kg叶黄素混合，该混合物即为所述肠道活性多肽组合物。
实施例6
一种肠道活性多肽组合物，采用如下制备工艺生产得到：
S1在80kg金枪鱼原料中加入0.24kg白皮杉醇，经粉碎、搅拌后制成金枪鱼糜，备用；
S2使用亚临界萃取法分离金枪鱼糜中的水分及脂肪；使用的萃取剂为二甲醚，二甲醚的使用量为1800kg；萃取温度为43℃，萃取压力为0.67MPa，萃取时间为1.5h，搅拌速率为1075rpm，搅拌时间为6min，得到粗制蛋白质，备用；
S3将粗制蛋白质加入400kg水，使用浓度均为1mol/L的盐酸和氢氧化钠的水溶液调节pH；首先将pH调节至11，使粗制蛋白质重新溶解；随后将pH调节至5，使蛋白质等电沉积1h；将pH调节至6.8，离心分离得固态物；最后将固态物经冷冻干燥、粉碎后，得到精制蛋白质；
S4将精制蛋白质分散于含有白皮杉醇的水中，其中水的使用量为225kg，白皮杉醇的使用量为0.18kg；继续加入0.4kg酪蛋白糖巨肽，制得蛋白质料液；蛋白质料液中加入0.09kg中性蛋白酶，在52℃酶解3h后升温至100℃灭活15min，随后分离上清液、冻干，
得到肠道活性多肽，备用；
S5取11kg肠道活性多肽、3.5kg虾青素、1.6kg叶黄素混合，该混合物即为所述肠道活性多肽组合物。
对照例1
一种肠道活性多肽组合物，采用如下制备工艺生产得到：
S1在80kg金枪鱼原料经粉碎、搅拌后制成金枪鱼糜，备用；
S2将金枪鱼糜分散于225kg水中，制得鱼糜料液；鱼糜料液中加入0.09kg中性蛋白酶，在52℃酶解3h后升温至100℃灭活15min，随后分离上清液、冻干，得到肠道活性多肽，备用；
S3取11kg肠道活性多肽、3.5kg虾青素、1.6kg叶黄素混合，该混合物即为所述肠道活性多肽组合物。
测试例1
本发明的肠道活性多肽组合物的气味感官分析参考GB/T 10220-2012《感官分析方法学总论》。选择30名评价员，评价员的培训参照GB/T 15549-1995《感官分析方法学检测和识别气味方面评价员的入门和培训》的具体要求进行。采用十分制以反应本发明气味强烈程度，由评价员以1～10分评价无异味至气味腥臭难闻的程度，得分越高其难闻程度越高。测试结果按要求取算数平均值并取整，本发明气味感官测试结果见表1。
表1
测试组 气味感官评价评分
实施例1 7
实施例2 6
实施例3 4
实施例4 2
实施例5 2
实施例6 1
对照例1 9
不同加工工序下得到的肠道活性多肽组合物的气味有巨大差异。造成这种差异的主要原因在于加工过程中原料的氧化变质。加工过程中由于氧化性物质的存在以及加工器材摩擦产生的热量等因素的影响，蛋白质侧链上的氨基酸官能团经非酶修饰发生不可逆的羰基化，导致蛋白质的直接氧化；同时由于原料中脂肪物质的氧化衍生出的羰基化合物能够与未氧化的蛋白质进行共价结合，加速了蛋白质变质的过程；脂肪氧化后产生的自由基可以与蛋白质上的巯基形成二硫键，使巯基的数量显著降低，气味感官评价得分是加工过程中原料氧化变质行为的宏观体现。金枪鱼原料中富含脂肪，由于脂肪分子小于蛋白质，相同条件下脂肪的氧化速率大于蛋白质，因而加工过程中蛋白质的变质受脂肪氧化产物的主导。通过上述实施例和对照例的对比可以看出，加工过程中加入白皮杉醇并通过亚临界萃取的方式分离了原料中的蛋白质和脂肪成分。白皮杉醇通过降低脂肪氧化产物来改善蛋白质的氧化行为，并与原料中的金属离子螯合或清除自由基的形式来阻断蛋白质羰基化进程；氧化后的白皮杉醇形成的醌类化合物和蛋白质的硫醇基团发生反应形成的加合产物也有助于减少巯基的氧化。经过亚临界萃取的方式分离脂肪后的产物异味明显降低，亚临界萃取有利于减少脂肪对蛋白质氧化行为的促进作用。
测试例2
本发明制备工艺中防止蛋白质氧化的效果通过测试蛋白质中巯基的含量以表观。巯基的测试使用Measure-IT巯基检测试剂盒(M30550，赛默飞世尔科技中国有限公司提供)；样品的准备及测试参照Measure-IT巯基检测试剂盒手册和实验方案的具体要求进行。测试样品抽取工序中制备的粗制蛋白质；测试在23℃下进行，以1:100的比例稀释浓缩检测试剂，将100uL的试剂放入微孔板中，加入10uL的样品后混合，通过荧光光谱仪读取荧光并使用分析软件计算得到巯基含量，Ex＝494nm，Em＝517nm。各实施例中粗制蛋白质中巯基的含量测试结果见表2。
表2
测试组 粗制蛋白质巯基含量(umol/g)
实施例1 189
实施例3 324
巯基得含量反映了蛋白质被氧化的程度，巯基含量越高，蛋白质氧化的程度越大。通过上述实施例的对比可以看出，经过抗氧化处理的实施例能够良好地控制原料中蛋白质氧化的程度。
测试例3
本发明酶解工序中蛋白质料液发生胶凝现象的程度通过蛋白质料液的黏度进行表征。使用旋转式黏度计对实施例及测试例中蛋白质料液的粘度进行测试，测试的方法及步骤符合GB T 22235-2008《液体黏度的测定》中的具体规定。为模拟蛋白质料液的使用环境，测试在52℃下进行，每组测试5次，结果取算数平均值。黏度测试结果见表3。
表3
测试组 蛋白质料液黏度(mPa·s)
实施例4 46
实施例5 37
实施例6 21
蛋白质出现胶凝现象将导致体系的黏度增加。通过实施例4～6的对比可以看出，实施例6经过完整的抗胶凝处理后体系的粘度降低，胶凝现象得到显著改善。其原因可能在于，使用了pH位移工序将蛋白质复溶、沉积，在碱性环境下使蛋白质溶解，由于自由氢离子过少，粗制蛋白质内的氢键被破坏；通过pH位移，随着pH降低，增加了游离氢离子，自由氢离子覆盖于蛋白质氢键两端负性离子，使氢键进一步破坏，最后等电沉积得到的精制蛋白质中氢键的影响被减小至最低，从而缓解了蛋白质的胶凝进程。另外白皮杉醇的加入可以防止蛋白质中的巯基氧化形成双硫键；加入酪蛋白糖巨肽后，酪蛋白糖巨肽与蛋白质C端带负电一极结合，降低蛋白质分子向链向舒展的倾向，进而影响其结构；另外，在加工中酪蛋白糖巨肽糖基化的过程可以改变蛋白质凝胶网络结构的持水能力，进一步影响蛋白质链的结构，减少胶凝现象的产生。

Claims (9)

1.一种肠道活性多肽组合物的制备工艺，其特征在于：采用了抗氧化处理工序或防胶凝处理工序对金枪鱼原料进行加工。
2.根据权利要求1所述的一种肠道活性多肽组合物的制备工艺，其特征在于，包括如下步骤：
(1)金枪鱼原料经抗氧化处理工序或防胶凝处理工序加工，分离金枪鱼原料中的水分及脂肪，保留原料中的蛋白质，将蛋白质酶解得到肠道活性多肽；
(2)将肠道活性多肽与虾青素、叶黄素混合形成混合物，所述混合物即为肠道活性多肽组合物。
3.根据权利要求2所述的一种肠道活性多肽组合物的制备工艺，其特征在于：以重量份计，所述肠道活性多肽组合物中，肠道活性多肽的使用量为7～15份，虾青素的使用量为2～5份，叶黄素的使用量为0.9～2.4份。
4.根据权利要求2所述的一种肠道活性多肽组合物的制备工艺，其特征在于，所述抗氧化处理工序如下：
X1在金枪鱼原料中加入白皮杉醇，经粉碎、搅拌后制成金枪鱼糜，备用；
X2使用亚临界萃取法分离金枪鱼糜中的水分及脂肪，得到粗制蛋白质，备用；
X3将粗制蛋白质重新分散于含有白皮杉醇的水中，制得蛋白质料液，蛋白质料液经酶解、灭活、分离、冻干，得到肠道活性多肽。
5.根据权利要求4所述的一种肠道活性多肽组合物的制备工艺，其特征在于：以重量份计，步骤X1中所述金枪鱼原料的使用量为80～100份；白皮杉醇的使用量为0.2～0.5份。
6.根据权利要求4所述的一种肠道活性多肽组合物的制备工艺，其特征在于：以重量份计，步骤X2中所述亚临界萃取法使用的萃取剂为二甲醚，二甲醚的使用量为1800～2250份；萃取温度为36～48℃，萃取压力为0.4～0.8MPa，萃取时间为1～3h。
7.根据权利要求4所述的一种肠道活性多肽组合物的制备工艺，其特征在于：步骤X2中所述亚临界萃取法中分离蛋白质与水分、脂肪时的搅拌速率为950～1175rpm，搅拌时间为3～8min。
8.根据权利要求4所述的一种肠道活性多肽组合物的制备工艺，其特征在于：以重量份计，步骤X3中所述水的使用量为150～300份；所述白皮杉醇的使用量为0.1～0.25份。
9.根据权利要求4所述的一种肠道活性多肽组合物的制备工艺，其特征在于：以重量份计，步骤X3中所述酶解使用中性蛋白酶，酶的用量为0.06～0.15份，酶解的温度为50～55℃，酶解时间为1～6h。
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