CN116407665A - 一种制备鱼鳔缝合线的方法及可吸收缝合线 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种制备鱼鳔缝合线的方法及可吸收缝合线，其制备过程为：取新鲜鱼鳔进行预处理，然后将预处理鱼鳔片分层，保留纤维延伸方向沿着鱼鳔长轴方向的单层鱼鳔组织，并修剪成鱼鳔膜，再将鱼鳔膜加工为成股鱼鳔线，接着将成股鱼鳔线进行交联处理，交联后的成股鱼鳔线经后处理得到鱼鳔缝合线。本发明的有益效果：成功制备了抗拉强度、耐酸性能均优于商用羊肠线的鱼鳔缝合线，制得的鱼鳔缝合线具有良好的安全性，引发的炎症反应低，生物相容性好，降解较为缓慢，成股制备了负载药物的载药鱼鳔缝合线，其药物释放呈现出缓释特性，实现了鱼鳔缝合线的功能化，具有临床应用前景。

Description

一种制备鱼鳔缝合线的方法及可吸收缝合线

技术领域

本发明属于生物材料技术领域，具体涉及一种鱼鳔组织在制备缝合线中的应用、制备方法以及可吸收缝合线。

背景技术

医用缝合线是一种用于人体手术缝合的线型材料。根据材料是否可吸收，目前手术缝合线主要分为可吸收缝合线与不可吸收缝合线两大类。不可吸收缝合线无法被人体自然降解吸收，长期停留于缝合部位，炎症与异物反应重，但其机械强度高，性能稳定，故主要用于皮肤表面伤口的缝合；可吸收缝合线根据材料不同，可在不同时间被人体逐渐吸收降解，虽然其机械强度低于不可吸收缝合线，但无须拆线，不造成二次损伤，异物及炎症反应轻，伤口愈合更加良好。由于可吸收缝合线的以上优点，其在临床手术中的应用越来越广泛。

一种理想的可吸收缝合线需要具备以下特点：具有足够的机械性能，可以抵抗伤口张力；在体内能较长时间保持稳定的强度；生物相容性良好，异物及炎症反应轻，有助于伤口快速愈合；原材料来源广泛，价格低廉。然而，目前临床广泛应用的可吸收缝合线均存在不同程度的不足。

临床应用的可吸收缝合线主要分为天然材料吸收缝合线如蚕丝线、羊肠线、胶原纤维可吸收线、甲壳素与壳聚糖可吸收线等，以及人工合成可吸收缝合线如PGA、PLA、PGLA等。天然材料来源羊肠线在体内抗张强度损耗快，且组织反应较重；甲壳素缝合线在酸性环境下强度损失快，有时出现原因不明的轻度炎症；而人工合成的可吸收缝合线如PGA、PLA类可吸收缝合线不仅制作工艺复杂，价格较高，而且在降解过程中会产生较为严重的炎症反应。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种鱼鳔组织的用途。

其技术方案如下：

鱼鳔组织在制备手术缝合线中的应用。

作为优选，上述鱼鳔组织为脱细胞处理后的鱼鳔片。

本发明的目的之二在于提供一种制备鱼鳔缝合线的方法。

其技术方案如下：

一种制备鱼鳔缝合线的方法，其关键在于包括以下步骤：

步骤一、取新鲜鱼鳔进行预处理，得到预处理鱼鳔片；

步骤二、将所述预处理鱼鳔片分为内外两层，保留纤维延伸方向沿着鱼鳔长轴方向的单层鱼鳔组织，并修剪成矩形的鱼鳔膜，所述鱼鳔膜的纤维延伸方向与所述鱼鳔膜的长度方向一致；

步骤三、缝合线成型：将所述鱼鳔膜加工为成股鱼鳔线，所述鱼鳔膜上的纤维沿着成股鱼鳔线的走向延伸；

步骤四、将所述成股鱼鳔线置于交联剂溶液中进行交联；

步骤五、后处理，得到鱼鳔缝合线。

作为优选，上述步骤一包括：从新鲜活鱼体内获得鱼鳔，沿连接部分剪开形成鱼鳔片，经PBS溶液清洗，然后依次进行脱细胞处理和去除核酸，得到所述预处理鱼鳔片。

作为优选，上述步骤二中，将所述单层鱼鳔组织展平，晾干后修剪成不同宽度的所述鱼鳔膜。

作为优选，上述步骤三具体过程为，沿着所述鱼鳔膜的宽度方向卷起，得到单股鱼鳔线。

作为优选，上述步骤三还包括：将两股所述单股鱼鳔线螺旋缠绕，得到双股鱼鳔线。

作为优选，上述步骤三还包括：在所述鱼鳔膜表面涂敷药物，得到载药鱼鳔膜，然后再加工为成股鱼鳔线。

作为优选，上述药物为抑酸药物、抗炎药物、抗生素、促进组织修复药物中的一种或几种。

本发明的目的之三在于提供一种可吸收缝合线。

其技术方案如下：

一种可吸收缝合线，按照上述任意一项方法制备。

附图说明

图1为本发明制备的原材料草鱼完整鱼鳔(a1)、剪开后的外侧面(a2)和内侧面(a3)；

图2为鱼鳔片组织切片及不同染色，分别为未脱细胞鱼鳔截面HE染色(a)，脱细胞鱼鳔截面HE染色(b)，右侧为左侧放大图；脱细胞鱼鳔片Masson染色(c)，天狼猩红染色(d)，维多利亚蓝染色(e)和VGE染色(f)；

图3为交联和未交联鱼鳔片的红外光谱图片(a)和未交联鱼鳔片的拉曼光谱图像(b)；

图4为未交联和交联鱼鳔片扫描电镜图，分别为未交联鱼鳔片外侧面(a)，内侧面(b)和截面(c)，其中图(c)左右分别为截面两层的放大图；交联鱼鳔片外侧面(d)，内侧面(e)和截面(f)，其中图(f)左右分别为截面两层的放大图；

图5为脱细胞交联鱼鳔线实物及扫描电镜图，分别为双股交联鱼鳔线实物图(a)，双股交联鱼鳔线截面扫描电镜图(b)，单股交联鱼鳔线截面扫描电镜图(c)和羊肠线截面扫描电镜图(d)；

图6为拉伸强度实验，分别为单股交联鱼鳔线和羊肠线湿强度应力-应变图(a)及拉伸强度柱状图(b)，单股和双股交联鱼鳔线湿强度应力-应变图(c)及断裂拉力柱状图(d)；

图7为交联鱼鳔线抗酸实验，分别为交联鱼鳔线和羊肠线抗酸实验过程示意图(A)，单股交联鱼鳔线和羊肠线浸泡酸溶液后拉伸强度柱状图和折线图(B)，单股交联鱼鳔线浸泡于酸液不同时间后的扫描电镜图(C)及放大图(D)，羊肠线浸泡于酸液不同时间后的扫描电镜图(E)及放大图(F)；

图8为采用CCK-8法检测交联后的鱼鳔片细胞毒力和细胞定植实验结果，分别为3T3细胞毒力(a)和定植后光镜照片(b)以及细胞活力染色后荧光显微镜照片(c)；

图9为大鼠皮下埋植鱼鳔片不同时间点埋植处组织的外观(A)、鱼鳔片取出后大小测量照片(B)和扫描电镜观察图(C)；

图10为大鼠皮下埋植鱼鳔片不同时间点组织病理切片HE染色(A)和羊肠线不同时间点组织病理切片HE染色(B)，右侧为局部放大图，以及统计得到的埋植处组织切片炎性细胞比例(C)；

图11为鱼鳔线多功能载药实验，载药的鱼鳔线在PBS溶液中药物释放结果，分别为载富马酸夫诺拉生交联鱼鳔线释放曲线(a)，载荧光素钠交联和未交联鱼鳔线释放曲线(b)，载刚果红pH指示剂交联鱼鳔线在不同PH下显色及灰度曲线(c)；

图12为使用缝合线缝合家兔胃瘘口的模型，分别为使用载富马酸伏诺拉生交联鱼鳔线缝合胃瘘口后不同时间点内镜图(A)和使用羊肠线缝合胃瘘口后不同时间点内镜图(B)；

图13为使用缝合线缝合小香猪胃瘘口的模型，分别为使用载富马酸伏诺拉生交联鱼鳔线缝合胃瘘口场景图(A)和PH胶囊监测胃内药物释放后pH变化曲线(B)。

具体实施方式

以下结合实施例和附图对本发明作进一步说明。

实施例1

鱼鳔的处理及性能测试

于超市购买新鲜草鱼，现场宰杀后获得新鲜草鱼鱼鳔(如图1a1)；使用PBS溶液反复冲洗鱼鳔，去掉表面粘液及粘膜；剪取细长部分鱼鳔，沿血管纹理螺旋剪开(如图1a2-3)；再次使用PBS溶液反复冲洗；浸泡于0.1％SDS(Sigma)溶液中24h脱细胞，重复3次；部分脱细胞鱼鳔清洗后浸泡于生理盐水中4℃保存，另外部分修剪成0.5*0.5cm薄片，一半不处理，另一半浸泡于EDC/NHS溶液中2-4h进行交联处理，最后进行鱼鳔片性能测试。

除草鱼外，其他硬骨鱼鱼鳔的主要物质成分和微结构相近，也可使用。

1.1鱼鳔片组织切片及染色

将未经脱细胞处理的鱼鳔片反复清洗，固定于10％***溶液中，送至病理科进行包埋、切片及HE染色(如图2a)；将鱼鳔片脱细胞处理后，送至病理科进行包埋、切片，并行HE染色，masson染色，天狼猩红染色，维多利亚蓝染色和VGE染色(如图2b-f)。

从图2可以看到，HE染色显示鱼鳔片截面分为2层，纤维方向互相垂直，脱细胞后鱼鳔片细胞核数目明显减少，证明脱细胞处理有效；Masson染色，天狼猩红染色，维多利亚蓝染色和VGE染色分别显色，说明鱼鳔片主要成分为胶原纤维，据文献报道存在少量弹力纤维，但显色不明显。

1.2傅立叶变换红外吸收光谱(FTIR)和拉曼光谱测试

将制得的交联和未交联脱细胞鱼鳔片(0.5*0.5cm)用蒸馏水清洗干净并干燥，使用红外光谱仪(Spectrum100,PerkinElmer)进行红外光谱检测，得到FTIR图谱(如图3A)；

将制得的未交联脱细胞鱼鳔片(0.5*0.5cm)用蒸馏水清洗干净并干燥，使用激光拉曼检测仪(LabRAM HR Evolution，German)进行拉曼光谱检测，使用Origin 8软件对光谱进行去除荧光、降噪、降基线及平滑处理，得到对应的拉曼光谱图像(如图3B)；

标注红外光谱和拉曼光谱中明显波峰，查找文献，找到标注波峰对应的物质分子和功能键，解析鱼鳔组织的成分构成。可以看出，无论是红外光谱还是拉曼光谱，明显波峰对应的物质分子主要为胶原蛋白及相关衍生物，证明鱼鳔组织的主要成分为胶原蛋白。

1.3电子扫描显微镜观察

将制得的未交联和交联脱细胞鱼鳔片(0.5*0.5cm)用蒸馏水清洗干净；室温晾干24h后，放置于烘箱中37℃烘干2h，得到干燥的鱼鳔片；将干燥鱼鳔片分别固定于钉台，并在表面喷金处理，置于扫描电子显微镜(Hitachi S-3400N)下分别观察未交联和交联脱细胞鱼鳔片的外侧面、内侧面和截面结构(如图4)。

可以看出，未交联鱼鳔片内外侧面纤维走向整体虽有方向性，但不够明显，而截面显示其具有两层结构，纤维走向不同(图2a-c)；交联后鱼鳔片内外侧面纤维走向呈现高度一致性，且纤维分布极其密集，截面显示其具有两层结构，两层膜上的纤维走向基本垂直，其中内层膜上从纤维沿长轴排布，外层膜上纤维垂直于长轴排布(图2d-f)。

实施例2

鱼鳔线制备

载药鱼鳔缝合线的制备过程为：

步骤一、按照实施例1中描述的方法取新鲜鱼鳔，沿连接部分剪开成片状，鱼鳔片长度为10-15cm，宽度为6-8cm，经PBS溶液清洗，浸泡于生理盐水置于4℃冰箱冷藏保存待用；先后进行脱细胞、去除核酸和除味等预处理：

脱细胞：将鱼鳔片置于0.1％的十二烷基硫酸钠(SDS)溶液常温避光浸泡24h，重复3次；

去除核酸：将脱细胞处理后的鱼鳔置于20U/ml的脱氧核糖核酸酶/核糖核酸酶(DNAse/RNAse)溶液浸泡3h；

除味：将脱细胞处理后的鱼鳔置于1-10wt％氯化钠溶液中，在4℃下冷藏18-24h；

得到预处理鱼鳔片；

步骤二、分层：

将预处理鱼鳔片浸泡于1-10wt％氯化钠溶液后，保持鱼鳔片湿润，用弯头剪刀，垂直地挑起沿纵轴方向分布的纤维；

顺着纵轴方向，将横向和纵向分布地纤维缓慢撕开，保留纤维延伸方向沿着鱼鳔长轴方向的单层鱼鳔组织，将单层鱼鳔组织展平，室温下晾干24-48h，修剪成矩形状、宽度为0.2-2cm的鱼鳔膜，以与纤维延伸方向相垂直的方向为宽度方向；由于纤维沿着长度方向排布，既方便卷线，又使后续制得的鱼鳔线抗拉和抗剪能力强；

步骤三、缝合线成型：

使用移液器将药物溶液均匀地涂敷于鱼鳔膜表面，晾干后药物即可负载于鱼鳔膜上，得到载药鱼鳔膜；

使用少量纯水将载药鱼鳔膜贴附于塑料板表面，展平，载药面朝上，晾干1-2min；

沿着鱼鳔膜的宽度方向将鱼鳔膜逐层卷起，注意层与层之间不留缝隙，得到截面为螺旋线的单股鱼鳔线；

将两股单股鱼鳔线以双螺栓方式缠绕，得到双股鱼鳔线；

步骤四、交联：将双股鱼鳔线置于交联剂溶液中，在常温下浸泡2-6h，交联剂溶液为EDC/NHS溶液；

EDC/NHS溶液是将EDC和NHS先后溶解于0.1％的MES缓冲液(pH＝6)中制得，以物质的量计，EDC和NHS的加入量之比为EDC:NHS＝4:1，制得的EDC/NHS溶液中EDC浓度为4g/L；

步骤五、后处理：将交联处理后的双股载药鱼鳔缝合线使用纯水清洗，然后置于室温晾干24h，再经拉直、固定、风干、抛光、灭菌后，得到可吸收的载药鱼鳔缝合线。

鱼鳔缝合线上负载的药物可以是临床上成熟使用的功能性药物，例如可以是抑酸药物如富马酸伏诺拉生，可以是抗炎药物如非甾体抗炎药，可以是抗生素如头孢类药物，可以是止血药如凝血酶，还可以是促进组织修复的药物如生长因子。

不载药鱼鳔缝合线的制备过程基本同载药鱼鳔缝合线，不同之处在于步骤三中省去向鱼鳔膜表面涂敷药物溶液的步骤，最终制得不载药鱼鳔缝合线。

单股鱼鳔线的制备也参照上述过程进行，不同之处在于步骤三中省去将两股单股鱼鳔线以双螺旋方式缠绕的步骤。

不交联鱼鳔缝合线的制备也参照上述过程进行，不同之处在于省略交联步骤。

使用不同宽度的鱼鳔膜卷线，卷出来的线粗细不同，最终能够获得不同型号的单股鱼鳔线或双股鱼鳔线。

鱼鳔线的形貌及力学性能

2.1形貌观察

按照前述制备方法，制得双股和单股交联鱼鳔线，并取市场购买的羊肠线，采用常规方法制样，使用扫描电子显微镜(Hitachi S-3400N)对样品进行分析。

在制备过程中，单股鱼鳔线分别负载不同颜色荧光物质，再将两股单股鱼鳔线螺旋缠绕制成双股鱼鳔线，最后交联。图5a为载不同颜色荧光的双股交联鱼鳔线的外观图片。

图5(b)为双股交联鱼鳔线的截面扫描电子显微镜图，图5(c)为单股交联鱼鳔线的截面扫描电子显微镜图，图5(d)为羊肠线的截面扫描电子显微镜图。从图中可以看出，双股交联鱼鳔线液氮冷冻后断面较规整，单股交联鱼鳔线液氮冷冻后断面稍有分散，但纤维分布仍紧密且集中，羊肠线液氮冷冻后断面分散，纤维走向不一，极其散乱。

2.2拉伸强度

取未载药的直径约为0.2mm、长度6cm的双股和单股交联鱼鳔线，浸泡于PBS溶液中10min。使用万能拉力测试仪(instron5965)评估单股和双股交联鱼鳔线湿强度，并与市场上常规可吸收缝合线(羊肠线)进行比较。其中，图6(a)为单股交联鱼鳔线和羊肠线湿强度应力-应变曲线，图6(b)为单股交联鱼鳔线和羊肠线湿强度直方图，图6(c)为单股和双股交联鱼鳔线湿强度应力-应变图像，图6(d)为单股和双股交联鱼鳔线湿强度直方图。

从图中可以看出，湿润状态下，单股交联鱼鳔线应力远高于羊肠线(近200Mpa)，而双股交联鱼鳔线应力则远高于单股交联鱼鳔线2倍以上，说明双股交联鱼鳔线拉伸强度远远高于羊肠线。

2.3交联鱼鳔线抗酸能力检测

取未载药的单股交联鱼鳔线，同市场购买羊肠线一起，分别浸入pH＝1的酸性PBS溶液中，分别浸泡1d、2d、3d、5d和7d后取出，使用万能拉力测试仪(INSTRON5965)评估浸泡不同时间酸溶液后交联鱼鳔线和羊肠线湿强度的变化，并同浸泡前2种缝合线湿强度进行比较，观察湿强度变化情况。其中，图7(A)为交联鱼鳔线和羊肠线浸泡酸溶液的示意图，图7(B)为单股交联鱼鳔线和羊肠线浸泡前及浸泡不同时间酸溶液后的拉伸强度直方图与折线图。图7(C)为单股交联鱼鳔线浸泡于酸溶液不同时间后的扫描电镜图像，图7(D)为对应放大图；图7(E)为羊肠线浸泡于酸溶液不同时间后的扫描电镜图像，(F)为对应放大图像。

从图7(B)可以看出，单股交联鱼鳔线浸泡酸溶液前及浸泡不同时间后拉伸强度无明显变化，统计分析后发现无统计学差异，而羊肠线浸泡前后拉伸强度存在统计学差异，浸泡后1d、2-5d及7d三个不同时间段应力强度也存在统计学差异，说明同羊肠线相比，单股交联鱼鳔线受酸影响更小，在酸性环境下具有更稳定持久的拉伸强度。扫描电镜图像显示，单股交联鱼鳔线浸泡酸后1-7d图像无明显差异，表面无明显腐蚀痕迹，也解释了其应力强度未发生明显改变的原因，而随浸泡时间延长羊肠线表面则逐渐出现裂缝，且逐渐明显，7d时完整性出现破坏。

鱼鳔线的生物学性能

2.4细胞毒实验

取上述制得的双股交联鱼鳔缝合线，紫外线消毒灭菌后浸泡于完全培养基(90％DMEM+10％胎牛血清)中，4℃冰箱放置24h后，吸取完全培养基作为实验组；另取未做任何处理的完全培养基作为对照组。取小鼠成纤维细胞(3T3细胞)，按细胞培养流程进行复苏并培养，培养48h后接种到96孔板中，5000细胞/孔*12孔*3张，分别使用实验组和对照组完全培养基进行培养(每张板2组各6孔)，采用CCK-8试剂盒(Sigma)于培养后的1d、2d、3d进行吸光度检测，并绘制折线图(图8a)。

取实施例1中制得的交联鱼鳔片(0.5*0.5cm)，紫外线消毒灭菌后放置于6孔板中；将培养的3T3细胞接种到放置有交联鱼鳔片的6孔板内，使用完全培养基进行培养；3天后将交联鱼鳔片取出，使用PBS溶液冲洗2-3次。部分样品直接放置于显微镜下观察(图8b)，部分样品经红绿死活细胞染色(细胞活性检测试剂盒(绿色/红色双荧光)，生工生物工程(上海)股份有限公司)后，放置于荧光显微镜下观察(图8c)。

从图中可看出，实验组和对照组1d、2d、3d的吸光度无统计学差异，即实验组和对照组培养不同时间的细胞数目无差异，说明交联鱼鳔片不存在细胞毒性。交联鱼鳔片和3T3细胞共同培养3天，在反复冲洗鱼鳔片后，交联鱼鳔片表面仍可观察到大量细胞(图8b)，且红绿死活细胞染色后显示大部分细胞呈绿色，即存活状态(图8c)，说明细胞可定植于交联鱼鳔片表面，即交联鱼鳔片具有良好的细胞定植功能。

2.5降解实验

取实施例1中制得的交联鱼鳔片(0.5*0.5cm)，紫外线消毒杀菌后，植入大鼠皮下，并分别于2周、4周、8周和16周时对大鼠进行解剖，取出植入伤口周围组织进行观察(图9A)；将鱼鳔片从组织中取出，完全展平，置于测量纸上测量大小是否存在变化(图9B)；将不同时间点取出的鱼鳔片进行制样，置于扫描电子显微镜下观察表面及内部结构是否发生改变(图9C)。

从图中可看出，2周、4周、8周和16周的组织内，虽然鱼鳔片因为大鼠活动等原因，出现卷曲，但是均可被清晰观察到。鱼鳔片取出后测量大小，可发现其大小未发生明显改变，表面也无明显破损。扫描电子显微镜下观察，交联鱼鳔片表面无破损，完整性未出现破坏，但表面随包埋时间增加，逐渐出现降解，胶原纤维逐渐裸露，逐渐出现凹凸不平，说明交联鱼鳔片虽然体内可被降解，但4月时仍可保持整体完整性。

2.6组织相容性研究

将交联鱼鳔片(0.5*0.5cm)埋植于大鼠皮下(同前)，分别在术后1d、1周、1月和2月时对大鼠进行解剖，取下植入伤口周围组织固定后送专业病理医师进行切片及HE染色(图10A)；同样将商用羊肠线(1cm长)包埋植入大鼠皮下(同前)，分别在术后1d、1周、1月和2月时对大鼠进行解剖，取下植入伤口周围组织固定后送专业病理医师进行切片及HE染色(图10B)。选取HE染色图像中交联鱼鳔片和羊肠线周围区域，按上下左右位置各取1个视野，计数炎性细胞及所有有核细胞数目，并计算炎性细胞占有核细胞数的比例，绘制不同时间点的直方图(图10C)。

从图中可以看出，同样时间点，鱼鳔片周围炎性细胞数目明显少于羊肠线。炎性细胞占有核细胞比例的直方图也显示了这一点，说明无论急性期还是慢性期，鱼鳔片对组织的炎性刺激均小于羊肠线。

实施例3

功能化载药鱼鳔缝合线及动物实验

3.1功能化载药鱼鳔缝合线

按照实施例2中描述的鱼鳔缝合线制备方法，分别制备载富马酸伏诺拉生(2-4mg/根)的双股交联鱼鳔缝合线、载荧光素钠(10-50mg/根)的双股未交联鱼鳔缝合线和交联鱼鳔缝合线，以及载刚果红指示剂(0.5-2mg/根)的交联鱼鳔线。

将载富马酸伏诺拉生(2mg/根)的双股交联鱼鳔缝合线置于20ml PBS溶液中，分别于5min、10min、30min、1h、2h、6h、12h、24h、48h和72小时各取100ul PBS溶液，使用高效液相色谱进行检测，获得富马酸伏诺拉生药物浓度，绘制药物释放曲线(图11a)。从图中可以看出，交联鱼鳔缝合线对富马酸伏诺拉生确有缓释作用，在前2h基本呈线性释放，2-24h间释放速度稍微变缓，24-72h释放速度进一步变慢，证明载药的交联鱼鳔缝合线具有缓释药物作用。

将载有荧光素钠(20mg/根)的双股未交联鱼鳔缝合线和交联鱼鳔缝合线分别置于20ml PBS溶液中，分别于1min、2min、3min、5min、7min、10min、20min、30min、1h、2h、6h、12h、24h、48h和72小时各取100ul PBS溶液，使用高效液相色谱进行检测，获得荧光素钠药物浓度，绘制药物释放曲线(图11b)。比较交联和未交联的鱼鳔缝合线荧光素钠释放曲线，可以看到未交联鱼鳔线短时间药物释放即达理论最大浓度，表现为突释，但交联鱼鳔线的药物释放呈现缓释性，具有更持久作用。

将3根载药量相同的载刚果红交联鱼鳔线置于pH＝1、3和5的PBS溶液中，观察鱼鳔缝合线颜色变化，拍照后使用Image J软件对图片颜色分析，并绘制灰度图(图11c)。载刚果红交联鱼鳔线在不同pH溶液中显示不同颜色。若将这类鱼鳔线用于缝合胃部伤口，可实时显示胃内pH变化，以帮助判断胃内情况。

3.2鱼鳔缝合线缝合家兔胃部伤口实验

将家兔麻醉后，开腹暴露胃组织。使用手术刀刺穿胃壁全层，造成1cm长瘘口，分别使用灭菌后的上述载富马酸伏诺拉生的双股交联鱼鳔线(图12A)和羊肠线(图12B)缝合家兔胃部伤口。分别在术后3天、1周、2周和4周时使用胃镜观察胃内伤口，并进行比较。

从图中可以看出，术后3天和1周时，载药交联鱼鳔线和羊肠线2组伤口并无明显差异，考虑手术前期伤口肿胀影响；术后2周和4周时，可明显看出，载药交联鱼鳔线缝合伤口愈合更好，伤口更平整，而羊肠线缝合伤口愈合差于鱼鳔线，且伤口周围增生，形成结节。

3.3载药交联鱼鳔线缝合猪胃伤口后影响胃内PH变化

参照3.2部分的方法造出小香猪胃部瘘口模型，并使用灭菌的载富马酸伏诺拉生的双股交联鱼鳔线缝合胃部伤口(图13A)。使用胃镜在胃内放置pH胶囊，以检测胃内pH变化情况(图13B)。

从图中可以看出，载药鱼鳔缝合线缝合胃部伤口后，pH胶囊记录数据显示在前32h内，胃内pH>4，接近于7，而正常胃内PH值接近于1，说明载富马酸伏诺拉生的交联鱼鳔线可明显提高胃内pH值，前24-32h最为明显，推测是因为抑酸药物富马酸伏诺拉生的释放起到了抑制胃酸分泌的作用。这一效果对早期伤口具有较强保护作用，可有效防止伤口早期出血，为后期愈合奠定基础。

本发明的有益效果：

(1)提出了一种利用鱼鳔制备手术缝合线的方法；

(2)成功制备了抗拉强度、耐酸性能均优于商用羊肠线的鱼鳔缝合线；

(3)制得的鱼鳔缝合线具有良好的安全性，引发的炎症反应低，生物相容性好，小鼠皮下埋植实验证明其降解较为缓慢，具有临床应用前景；

(4)成功制备了负载功能化药物的载药鱼鳔缝合线，其药物释放呈现出缓释特性；

(5)载抑酸药物的鱼鳔缝合线用于胃部伤口缝合，较商用羊肠线具有更好的促进伤口愈合的作用；

(6)载pH指示剂的鱼鳔缝合线用于胃部伤口缝合时，能够实时显示胃部酸性环境变化。

最后需要说明的是，上述描述仅仅为本发明的优选实施例，本领域的普通技术人员在本发明的启示下，在不违背本发明宗旨及权利要求的前提下，可以做出多种类似的表示，这样的变换均落入本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.鱼鳔组织在制备手术缝合线中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述鱼鳔组织为脱细胞处理后的鱼鳔片。

3.一种制备鱼鳔缝合线的方法，其特征在于包括以下步骤：

步骤一、取新鲜鱼鳔进行预处理，得到预处理鱼鳔片；

步骤二、将所述预处理鱼鳔片分为内外两层，保留纤维延伸方向沿着鱼鳔长轴方向的单层鱼鳔组织，并修剪成矩形的鱼鳔膜，所述鱼鳔膜的纤维延伸方向与所述鱼鳔膜的长度方向一致；

步骤三、缝合线成型：将所述鱼鳔膜加工为成股鱼鳔线，所述鱼鳔膜上的纤维沿着成股鱼鳔线的走向延伸；

步骤四、将所述成股鱼鳔线置于交联剂溶液中进行交联；

步骤五、后处理，得到鱼鳔缝合线。

4.根据权利要求3所述的制备鱼鳔缝合线的方法，其特征在于所述步骤一包括：从新鲜活鱼体内获得鱼鳔，沿连接部分剪开形成鱼鳔片，经PBS溶液清洗，然后依次进行脱细胞处理和去除核酸，得到所述预处理鱼鳔片。

5.根据权利要求3所述的制备鱼鳔缝合线的方法，其特征在于：所述步骤二中，将所述单层鱼鳔组织展平，晾干后修剪成不同宽度的所述鱼鳔膜。

6.根据权利要求3所述的制备鱼鳔缝合线的方法，其特征在于：所述步骤三具体过程为，沿着所述鱼鳔膜的宽度方向卷起，得到单股鱼鳔线。

7.根据权利要求6所述的制备鱼鳔缝合线的方法，其特征在于所述步骤三还包括：将两股所述单股鱼鳔线螺旋缠绕，得到双股鱼鳔线。

8.根据权利要求3～7任意一项所述的制备鱼鳔缝合线的方法，其特征在于所述步骤三还包括：在所述鱼鳔膜表面涂敷药物，得到载药鱼鳔膜，然后再加工为成股鱼鳔线。

9.根据权利要求8所述的制备鱼鳔缝合线的方法，其特征在于：所述药物为抑酸药物、抗炎药物、抗生素、促进组织修复药物中的一种或几种。

10.一种可吸收缝合线，其特征在于按照权利要求3～9任意一项所述方法制备。

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