CN116178476A - 一种茶皂素的制备方法及所得茶皂素产品的用途 - Google Patents
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Abstract
一种茶皂素的制备方法及所得茶皂素产品的用途，属于日化品原料技术。在油茶籽粕中加入水、碳源，灭菌，冷却至≤40℃；接种酵母菌发酵后，再接入木醋杆菌发酵；加水浸提茶皂素，分离，纯化，干燥即得。本发明利用酵母菌进行无氧发酵，通过糖酵解作用将糖转化成CO2与乙醇并产生能量，再接入木醋杆菌，乙醇经木醋杆菌氧化生成乙酸，同时合成其他种类的有机酸，有机酸是茶皂素组成部分之一，能有效地提高茶皂素含量和安全性，促进茶皂素的提取。所述茶皂素属于天然来源成分，具有清洁皮脂、美白、抗氧化的功效，可作为日化产品原料使用。
Description
技术领域
本发明属于日化品原料技术，具体涉及一种茶皂素的制备方法及所得茶皂素产品的用途。
背景技术
茶皂素(Tea saponin)又名茶皂苷，广泛存在于山茶属植物的各个部位中，尤其在茶籽中含量最高。油茶(Camellia oleifera Abel.)泛指山茶属(Camellia)植物中种子含油率较高，且有栽培应用价值的一类油料植物，是我国特有的木本食用油料植物。我国油茶籽每年可产出260多万吨食用油，同时会产生约140多万吨油茶籽粕。油茶籽粕含有茶皂素、多糖、多酚、糖萜素、黄酮、蛋白等主要活性成分，其中茶皂素含量丰富。茶皂素具有良好的表面活性作用，常被用作非离子表面活性剂。此外，茶皂素还具有美白、抗氧化、抗炎等多种生物活性，是理想的日化品原料。
常见的茶皂素提取方法有溶剂浸提法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法、超临界萃取法、沉淀法等。这些方法应用在工业化生产茶皂素的过程中，都不同程度地存在提取效率低、能耗大、生产成本高、可操作性低等问题。近年来，微生物发酵提取茶皂素的方法受到关注。公告号为CN102154427B的专利文件公开了“一种利用微生物发酵提取茶皂素的方法”；公告号为CN104357527B的专利文件公开了“一种微生物发酵法从茶籽粕中提取茶皂素的方法”；公告号为CN101880307B的专利文件公开了“利用微生物提取茶皂素的方法”；公开号为CN115029385A的专利文件公开了“一种利用微生物发酵提取茶粕中茶皂素的方法”。上面的四种方法都是利用微生物发酵分解茶籽粕中的糖类、蛋白和纤维素等杂质，促进茶皂素的提取。四种方法的不同点：专利文件CN102154427B利用大型食用真菌作为发酵菌种，乙醇为提取溶剂，采用超滤、纳滤、反渗透膜组合技术精制；专利文件CN104357527B以黑曲霉菌、产黄纤维单胞菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌为发酵菌，水为溶剂，大孔树脂AB-8精制；专利文件CN101880307B先酶解底物，再用酒精酵母发酵，水作溶剂，采用过滤或离心分离茶皂素；专利文件CN115029385A以乳酸杆菌作为发酵菌，正丁醇精制茶皂素。专利公告号为CN104031109B的专利文件也公开了“一种微生物发酵纯化茶皂素的方法”以醋酸杆菌或酵母菌中的一种或两者的复合菌种作为茶皂素絮凝剂产生菌，离心分离出沉淀，用乙醇浸提，制得茶皂素。
专利文件CN102154427B使用膜分离技术精制茶皂素，在操作过程中，膜会出现堵塞、污染和过滤速度慢等问题；专利文件CN104357527B利用微生物发酵提取茶皂素过程繁琐，不利于实现工业化生产；专利文件CN101880307B先用多种酶类分解淀粉，再用酒精酵母发酵，但是生物酶类的价格普遍偏高，造成茶皂素提取成本增加；专利文件CN115029385A使用有机溶剂——正丁醇精制茶皂素，有溶剂残留、生产成本增高、环境污染等问题；专利文件CN104031109B利用酵母菌和醋酸杆菌使茶皂素产生絮凝沉淀，再分离提取出沉淀中的茶皂素；木醋杆菌属于一种醋酸杆菌，其发酵同样产生絮凝物，但这种絮凝沉淀的主要成分为细菌纤维素(属于糖类成分)，而茶皂素的含量相对较低；茶皂素本身易溶于水，若选择提取絮凝物中的茶皂素就会造成茶皂素的分离效率低、分离量小、资源浪费等问题。
茶皂素属于三萜皂苷，由三萜苷元、亲水性糖体和有机酸三部分组成。茶皂素配基与有机酸的结合形式是配基环上的羟基与有机酸结合成酯，其中，有机酸主要包括乙酸(醋酸)、当硅酸、肉桂酸、惕各酸等。酵母菌的无氧发酵，将油茶籽粕中的淀粉等糖类转化成CO2和乙醇并产生能量。木醋杆菌不能直接分解乳糖、淀粉等糖类，但能利用乙醇合成乙酸(醋酸)，同时合成其他种类的有机酸。有机酸是茶皂素组成部分之一，经过酵母菌和木醋杆菌发酵后，能有效地提高油茶籽粕的茶皂素含量和安全性，促进茶皂素的提取。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种茶皂素的制备方法及所得茶皂素产品的用途。
本发明茶皂素的制备方法，步骤如下：
(1)在油茶籽粕中加入水、碳源，灭菌，冷却至≤40℃；
(2)接种酵母菌发酵后，再接入木醋杆菌发酵；
(3)加水浸提茶皂素，分离，纯化，干燥即得；
步骤(1)所述的油茶籽粕为新鲜油茶籽粕或干燥油茶籽粕中的一种或两种；
步骤(1)油茶籽粕与水的重量比为1：3-10；
步骤(1)所述的碳源为葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、果糖、淀粉中的一种或多种，碳源按油茶籽粕加入重量的0.2％-5％加入；
步骤(1)所述的灭菌为加热灭菌或高压灭菌，温度为100℃-120℃，时间为15min-30min；
步骤(2)所述的酵母菌发酵条件为于20℃-35℃下无氧发酵24h～72h，酵母菌接种重量为油茶籽粕重量的0.5‰-10‰；
步骤(2)所述的木醋杆菌发酵条件为于20℃-35℃下有氧发酵72h～120h，木醋杆菌接种重量为油茶籽粕加入重量的0.2‰-5‰；
步骤(3)所述的水的加入重量为油茶籽粕加入重量的300％-600％，浸提条件为94℃-100℃加热回流提取0.5h-2h。
优选地，步骤(3)所述的分离方式为2800-4000r/min离心10min-30min。
优选地，步骤(3)所述的纯化方式为大孔树脂纯化，大孔树脂为D1400、AB-8、D101、X-5中的一种或几种混用；大孔树脂最好为D1400。更进一步优选，大孔树脂用量为油茶籽粕加入量的2-5倍(w/w)，上样液流速1-6mL/min，用纯化水、30％乙醇、50％乙醇、80％乙醇进行梯度洗脱，每个梯度洗脱2-5倍树脂体积或柱体积，洗脱流速为1-5mL/min，收集洗脱液并回收乙醇。
步骤(3)所述的干燥方法为可以为真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥中的任何一种。
本发明茶皂素的制备方法所得茶皂素产品的用途是用于洗护类日化品中，用量为0.05～20wt％。
本发明茶皂素的制备方法所得到茶皂素产品的用途是用于美白类日化品中，用量为0.1～20wt％。
本发明茶皂素的制备方法所得到的茶皂素产品的用途是用于抗氧化类日化品中，用量为0.1～20wt％。
以上所述用量都是指茶皂素的重量在相应日化品总重量中的百分比。
和现有技术相比，本发明的有益效果：
1、用酵母菌无氧发酵分解油茶籽粕中的糖类、蛋白质等杂质，并生成乙醇，再利用木醋杆菌将乙醇转化成茶皂素组成部分之一的乙酸(醋酸)，使茶皂素提取率至少提高23％，茶皂素得率至少提高6％；
2、用大孔树脂D1400纯化茶皂素，茶皂素的回收率为92％以上，精制茶皂素的纯度达到86％以上；
3、制备工艺简单，成本低，可实现工业化大规模生产茶皂素，且生产过程环保，无溶剂残留；
4、制备的茶皂素应用于日化品中，具有清洁皮脂、美白、抗氧化的作用。
换言之，本发明利用酵母菌先分解代谢油茶籽粕中淀粉等多糖类生物大分子，产生乙醇，再利用木醋杆菌代谢由酵母菌无氧发酵产生的乙醇，合成乙酸(醋酸)及其他有机酸，使用大孔树脂D1400精制茶皂素。该方法能有效地提高茶皂素含量和安全性，促进茶皂素的提取，且工艺简单，可实现工业化、大规模生产茶皂素。该方法制备的茶皂素具有清洁、美白、抗氧化等活性，且无溶剂残留，可应用于日化产品中。
附图说明
图1为实施例1的工艺流程图。
图2为检测对比情况中所述的茶皂素标准品的标准曲线图。
图3为实施例1制备的茶皂素的DPPH清除活性与VC的DPPH清除活性对比图。
图4为实施例1制备的茶皂素的酪氨酸酶抑制活性与β-熊果苷的酪氨酸酶抑制活性对比图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于实施例。
实施例1
参见附图1～4。
茶皂素的制备按以下步骤：
(1)在干燥油茶籽粕中，加入8倍重量的水，再按油茶籽粕加入量的1％(w/w)加入蔗糖；
(2)在120℃条件下高压灭菌15min，冷却至≤40℃；
(3)按油茶籽粕加入量的2.5‰(w/w)接入酵母菌(购自安琪酵母股份有限公司)，搅拌均匀，在25℃-30℃条件下无氧发酵60h后，再按油茶籽粕加入量的2‰(w/w)接入木醋杆菌(购自上海保藏生物技术中心，菌株编号为：SHBCC D80374)，搅拌均匀，在25℃-28℃条件下有氧发酵98h；
(4)按油茶籽粕加入量的4倍(w/w)加入水，96℃-98℃加热回流提取1h；
(5)于3000r/min离心15min，留取上清液，经大孔树脂D1400纯化；
(6)大孔树脂D1400用量为油茶籽粕加入量的3倍(w/w)，上样液流速3mL/min，用纯化水、30％乙醇、50％乙醇、80％乙醇进行梯度洗脱，每个梯度洗脱3倍树脂体积或柱体积，洗脱流速为2mL/min，收集洗脱液并回收乙醇。
(7)真空减压浓缩茶皂素溶液，真空干燥制得茶皂素成品。
实施例2
茶皂素的制备按以下步骤：
(1)在新鲜油茶籽粕中，按料液比为1：3的比例加入水，再按油茶籽粕加入量的0.5％(w/w)加入葡萄糖；
(2)在120℃条件下高压灭菌15min，冷却至≤40℃；
(3)按油茶籽粕加入量的5‰(w/w)接入酵母菌(购自安琪酵母股份有限公司)，搅拌均匀，在20℃-35℃条件下无氧发酵48h后，再按油茶籽粕加入量的3‰(w/w)接入木醋杆菌(购自上海保藏生物技术中心，菌株编号为：SHBCC D80374)，搅拌均匀，在20℃-35℃条件下有氧发酵90h；
(4)按油茶籽粕加入量的6倍(w/w)加入水，94℃-100℃加热回流提取1h；
(5)于3000r/min离心15min，留取上清液，经大孔树脂D1400纯化；
(6)大孔树脂D1400用量为油茶籽粕加入量的5倍(w/w)，上样液流速6mL/min，用纯化水、30％乙醇、50％乙醇、80％乙醇进行梯度洗脱，每个梯度洗脱3倍树脂体积或柱体积，洗脱流速为4mL/min，收集洗脱液并回收乙醇。
(7)真空减压浓缩茶皂素溶液，真空干燥制得茶皂素成品。
对比例1
茶皂素的制备按以下步骤：
(1)在干燥油茶籽粕中，按料液比为1：12的比例加入水，94℃-100℃加热回流提取1h；
(2)于3000r/min离心15min，留取上清液，经大孔树脂D1400纯化；
(3)大孔树脂D1400用量为油茶籽粕加入量的3倍(w/w)，上样液流速3mL/min，用纯化水、30％乙醇、50％乙醇、80％乙醇进行梯度洗脱，每个梯度洗脱3倍树脂体积或柱体积，洗脱流速为2mL/min，收集洗脱液并回收乙醇。
(4)真空减压浓缩茶皂素溶液，真空干燥制得茶皂素成品。
对比例2
茶皂素的制备按以下步骤：
(1)在干燥油茶籽粕中，按料液比为1：8的比例加入水，再按油茶籽粕加入量的1％(w/w)加入蔗糖；
(2)在120℃条件下高压灭菌15min，冷却至≤40℃；
(3)按油茶籽粕加入量的2.5‰(w/w)接入酵母菌(购自安琪酵母股份有限公司)，随后，按油茶籽粕加入量的2‰(w/w)接入木醋杆菌(购自上海保藏生物技术中心，菌株编号为：SHBCC D80374)，搅拌均匀，在20℃-35℃条件下有氧发酵98h；
(4)按油茶籽粕加入量的4倍(w/w)加入水，94℃-100℃加热回流提取1h；
(5)于3000r/min离心15min，留取上清液，经大孔树脂D1400纯化；
(6)大孔树脂D1400用量为油茶籽粕加入量的3倍(w/w)，上样液流速3mL/min，用纯化水、30％乙醇、50％乙醇、80％乙醇进行梯度洗脱，每个梯度洗脱3倍树脂体积或柱体积，洗脱流速为2mL/min，收集洗脱液并回收乙醇。
(7)真空减压浓缩茶皂素溶液，真空干燥制得茶皂素成品。
对比例3
茶皂素的制备方法按以下步骤：
(1)在干燥油茶籽粕中，按料液比为1：8的比例加入水，再按油茶籽粕加入量的1％(w/w)加入蔗糖；
(2)在120℃条件下高压灭菌15min，冷却至≤40℃；
(3)按油茶籽粕加入量的2.5‰(w/w)接入酵母菌(购自安琪酵母股份有限公司)，搅拌均匀，在20℃-35℃条件下无氧发酵60h后，再按油茶籽粕加入量的2‰(w/w)接入木醋杆菌(购自上海保藏生物技术中心，菌株编号为：SHBCC D80374)，搅拌均匀，在20℃-35℃条件下有氧发酵98h；
(4)按油茶籽粕加入量的4倍(w/w)加入水，94℃-100℃加热回流提取1h；
(5)于3000r/min离心15min，留取上清液，经大孔树脂D101纯化；
(6)大孔树脂D101用量为油茶籽粕加入量的3倍(w/w)，上样液流速3mL/min，用纯化水、30％乙醇、50％乙醇、80％乙醇进行梯度洗脱，每个梯度洗脱3倍树脂体积或柱体积，洗脱流速为2mL/min，收集洗脱液并回收乙醇。
(7)真空减压浓缩茶皂素溶液，真空干燥制得茶皂素成品。
检测对比情况
茶皂素含量检测：
(1)试验材料与试剂
茶皂素标准品(纯度>98％，西安依科生物技术有限公司)；香草醛(分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司)；浓硫酸(分析纯，重庆川东化工有限公司)；氢氧化钠(分析纯，重庆川东化工有限公司)；无水乙醇(分析纯，天津市优谱化学试剂有限公司)。
8％香草醛溶液制备：精确称取香草醛适量，无水乙醇溶解并定容，配制成8％的香草醛溶液。
77％硫酸溶液制备：精确量取浓硫酸77mL，缓慢加入装有23mL去离子水的容器中混匀备用。
茶皂素标准溶液制备：精确称取茶皂素标准品适量，用80％乙醇溶解并定容，配制成浓度为1mg/mL的茶皂素标准品溶液。
样品溶液制备：分别精确称取实施例1、实施例2、对比例1、对比例2、对比例3制备的茶皂素，用80％乙醇溶解并定容，配制成浓度为1mg/mL的样品溶液。
(2)茶皂素标准曲线测定
分别吸取茶皂素标准品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL，加无水乙醇补足至4.5mL，准确加入8％的香草醛溶液0.5mL，置于冰水浴环境中加入77％硫酸溶液5mL，充分混匀，60℃水浴加热20min，然后放冰水浴中冷却10min，取出，待其中液体温度升至室温，以试剂为空白为参比，于波长545nm处检测各管的吸光度值，以茶皂素浓度C(mg/mL)为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线(y＝10.965x+0.0052,R2＝0.9997)。
(3)样品中茶皂素含量测定
分别移取实施例1、实施例2、对比例1、对比例2、对比例3制备的茶皂素样品溶液0.4mL液体，加无水乙醇补足至4.5mL，准确加入8％的香草醛溶液0.5mL，置于冰水浴环境中加入77％硫酸溶液5mL，充分混匀，60℃水浴加热20min，然后放冰水浴中冷却10min，取出，待其中液体温度升至室温，以试剂为空白为参比，于波长545nm处检测各管的吸光度值，根据茶皂素标准曲线方程计算样品茶皂素含量。
(3)不同处理条件对茶皂素含量的影响
根据样品检测出的茶皂素含量，比对分析上述实施例1、实施例2、对比例1、对比例2、对比例3制备得到的茶皂素的纯度、提取率、得率差异(见表1)。其中，纯度、提取率及得率计算公式：
纯度(％)＝(干燥成品中茶皂素质量/干燥成品总质量)×100％
提取率(％)＝(干燥成品中茶皂素质量/油茶籽粕中茶皂素质量)×100％
得率(％)＝(干燥成品中茶皂素质量/油茶籽粕质量)×100％
表1不同处理条件的茶皂素纯度、提取率、得率
| 处理 | 纯度 | 提取率 | 得率 |
| 实施例1 | 87.04％ | 95.21％ | 24.80％ |
| 实施例2 | 86.43％ | 93.34％ | 24.31％ |
| 对比例1 | 86.82％ | 70.27％ | 18.30％ |
| 对比例2 | 86.61％ | 82.19％ | 21.41％ |
| 对比例3 | 82.57％ | 78.33％ | 20.40％ |
| 处理 | 纯度 | 提取率 | 得率 |
| 实施例1 | 87.04％ | 95.21％ | 24.80％ |
| 实施例2 | 86.43％ | 93.34％ | 24.31％ |
| 对比例1 | 86.82％ | 70.27％ | 18.30％ |
| 对比例2 | 86.61％ | 82.19％ | 21.41％ |
| 对比例3 | 82.57％ | 78.33％ | 20.40％ |
由表1可知，经过酵母菌、木醋杆菌依次发酵制得的茶皂素(实施例1)的提取率比未发酵制得的的茶皂素(对比例1)的提取率高24.94％，茶皂素得率高出6.5％；酵母菌、木醋杆菌依次发酵制得的茶皂素(实施例1)的提取率比两种菌同时发酵制得的茶皂素(对比例2)的提取率高13.02％，茶皂素得率高3.39％；利用大孔树脂D1400纯化(实施例1)的茶皂素纯度比大孔树脂D101纯化(对比例3)的茶皂素纯度高4.47％，提取率高16.88％，得率高4.40％。
发明所得产品检测实例1
茶皂素体外抗氧化功效评估(DPPH自由基清除能力)
(1)试剂与材料
主要试剂：VC(抗坏血酸，纯度≥99.7％，天津广成化学试剂有限公司)；DPPH(1,1-二苯基-2-苦基肼，纯度≥98％，上海源叶生物科技有限公司)；甲醇(分析纯，天津富宇精细化工有限公司)
DPPH甲醇溶液：精确称取DPPH用甲醇定容，配制成80μg/mL的DPPH甲醇溶液，暗处存放。
VC溶液：精确称取VC，纯水溶解并定容，配置成浓度为0.1mg/mL的VC溶液。
茶皂素溶液：精确移取实施例1制备的茶皂素，用50％甲醇溶解并定容，配制10mg/mL的茶皂素溶液；
(2)操作流程
试验组：分别取0.05mL、0.100mL、0.150mL、0.250mL、0.350mL、0.500mL样品溶液于深孔板中，用蒸馏水补足到0.500mL，加入2.0mL DPPH甲醇溶液，混匀，暗处放置30min，不断震荡，测定520nm处的吸光值。
空白组：深孔板中分别取同试验组等体积的样品溶液，用蒸馏水补足到0.500mL，加入2.0mL的甲醇溶液。混匀后暗处放置30min，不断震荡，测定520nm处吸光值。
对照组：0.500mL蒸馏水加入2.0mL DPPH甲醇溶液。混匀后暗处放置30min，不断震荡，测定520nm处的吸光值。
阳性对照组：分别取0.025mL、0.050mL、0.100mL、0.125mL、0.250mL Vc溶液于深孔板中，用蒸馏水补足到0.500mL，加入2.0mL DPPH甲醇溶液。混匀后暗处放置30min，不断震荡，测定520nm处的吸光值。
阳性对照空白组：深孔板中分别取同实验组等体积的VC溶液，用蒸馏水补足到0.500mL，加入2.0mL的甲醇溶液。混匀后暗处放置30min，不断震荡，测定520nm处吸光值。
(4)茶皂素对DPPH自由基清除活性检测结果
茶皂素对DPPH自由基的清除活性(见表2)，证明茶皂素的抗氧化能力，DPPH清除率计算公式：
DPPH清除率(％)＝(A0﹣A1+A2)/A0×100％
其中A0为对照组吸光度值；A1为试验组吸光度值；A2为空白组吸光度值。
表2茶皂素的DPPH清除活性
由表2可知，当由实施例1制得的茶皂素对DPPH清除率达50％时，茶皂素浓度为0.87mg/mL，即茶皂素对DPPH清除活性的IC50值为0.87mg/mL。
发明所得产品检测实例2
茶皂素体外美白功效评估(酪氨酸酶活性抑制能力)
(1)试剂与材料
酪氨酸酶(≥500U/mg，北京沃凯生物科技有限公司)；L-酪氨酸(≥99％，成都化夏化学试剂有限公司)；十二水合磷酸氢二钠(分析纯，上海源叶生物科技有限公司)、二水合磷酸二氢钠(分析纯，上海源叶生物科技有限公司)、β-熊果苷(≥98％，上海源叶生物科技有限公司)
PBS缓冲液(pH＝6.8):取51mL A液(称取15.6g二水合磷酸二氢钠，去离子水溶解并定容至500mL)和49mL B液(称取35.8g十二水合磷酸氢二钠，去离子水溶解并定容至500mL)，混匀，调节pH至6.8即得PBS缓冲液。
酪氨酸酶溶液配制：将酪氨酸酶用PBS缓冲液溶解并分装，配制成1000U/mL的酪氨酸酶溶液，此操作在冰上进行，置于4℃冰箱保存。
0.5mmol/L L-酪氨酸溶液配制：精确称取9.06mg L-酪氨酸，再加入100mL PBS缓冲液，混匀。
熊果苷溶液的配制：准确称取β-熊果苷，蒸馏水溶解并定容，配制成浓度为0.5％的熊果苷溶液。
茶皂素溶液配制：准确称取实施例1制备的茶皂素，蒸馏水溶解并定容，配制成浓度为0.5％的茶皂素溶液。
(2)酪氨酸酶活性抑制率测定：
以0.5％熊果苷作为阳性对照，以水为阴性对照，PBS溶液为空白对照。按照表3添加试剂。
反应体系构建：
1)按照表格在96孔板中添加试剂L-酪氨酸，待测样品和PBS溶液，
然后置于37℃保温箱中预热10min，并同时预热酪氨酸酶溶液。
2)预热10min后，按照表3在96孔板中依次添加。
3)待反应30min后，用酶标仪在波长475nm处测定其吸光度值。
表3酪氨酸酶抑制实验体系的试剂配比表
| 试剂 | A | B | C | D |
| L-酪氨酸(μL) | 170 | 170 | 170 | 170 |
| 待测样品(μL) | 20(水) | 20(水) | 20(样品) | 20(样品) |
| 酪氨酸酶(μL) | 10(酶) | 10(PBS) | 10(酶) | 10(PBS) |
(3)茶皂素对酪氨酸酶活性检测结果
茶皂素对酪氨酸酶的抑制活性(见表4)，证明茶皂素美白功效，酪氨酸酶抑制率计算公式：
酪氨酸酶的抑制率(％)＝[(A﹣B)﹣(C﹣D))]/(A﹣B)×100％
其中：A表示A组反应液在475nm下的吸光度值；B表示B组反应液在475nm下的吸光度值；C表示C组反应液在475nm下的吸光度值；D表示D组反应液在475nm下的吸光度值。
表4茶皂素的酪氨酸酶抑制活性
由表4可知，当由实施例1制得的茶皂素对酪氨酸酶抑制率达50％时，茶皂素浓度为1.93mg/mL，即茶皂素对酪氨酸酶的抑制活性的IC50值为1.93mg/mL，而β-熊果苷的IC50值为2.96mg/mL。因此，证明本发明制备的茶皂素的体外酪氨酸酶抑制活性比β-熊果苷更高。
Claims (8)
1.一种茶皂素的制备方法，其特征在于步骤如下：
(1)在油茶籽粕中加入水、碳源，灭菌，冷却至≤40℃；
(2)接种酵母菌发酵后，再接入木醋杆菌发酵；
(3)加水浸提茶皂素，分离，纯化，干燥即得；
步骤(1)中：油茶籽粕为新鲜油茶籽粕或干燥油茶籽粕中的一种或两种；油茶籽粕与水的重量比为1：3-10；碳源为葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、果糖、淀粉中的一种或多种，碳源按油茶籽粕加入重量的0.2％-5％加入；灭菌为加热灭菌或高压灭菌，灭菌温度为100℃-120℃，时间为15min-30min；
步骤(2)中：酵母菌发酵条件为于20℃-35℃下无氧发酵24h～72h，酵母菌接种重量为油茶籽粕重量的0.5‰-10‰；木醋杆菌发酵条件为于20℃-35℃下有氧发酵72h～120h，木醋杆菌接种重量为油茶籽粕加入重量的0.2‰-5‰；
步骤(3)中：水的加入重量为油茶籽粕加入重量的300％-600％，浸提条件为于94℃-100℃加热回流提取0.5h-2h。
2.如权利要求1所述的茶皂素的制备方法，其特征在于步骤(3)所述的分离方式为2800-4000r/min离心10min-30min。
3.如权利要求1所述的茶皂素的制备方法，其特征在于步骤(3)所述的纯化方式为大孔树脂纯化，大孔树脂为D1400、AB-8、D101、X-5中的一种或几种混用。
4.如权利要求3所述的茶皂素的制备方法，其特征在于所述的大孔树脂为D1400。
5.如权利要求4所述的茶皂素的制备方法，其特征在于大孔树脂用量为油茶籽粕加入量的2-5倍(w/w)，上样液流速1-6mL/min，用纯化水、30％乙醇、50％乙醇、80％乙醇进行梯度洗脱，每个梯度洗脱2-5倍树脂体积或柱体积，洗脱流速为1-5mL/min，收集洗脱液并回收乙醇。
6.如权利要求1所述的茶皂素的制备方法所得茶皂素产品的用途，其特征在于：用于洗护类日化品中，用量为0.05～20wt％。
7.如权利要求1所述的茶皂素的制备方法所得茶皂素产品的用途，其特征在于：用于美白类日化品中，用量为0.1～20wt％。
8.如权利要求1所述的茶皂素的制备方法所得茶皂素产品的用途，其特征在于：用于抗氧化类日化品中，用量为0.1～20wt％。
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