CN116083514B - 一种猪禽替抗添加剂及其筛选方法 - Google Patents
一种猪禽替抗添加剂及其筛选方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种猪禽替抗添加剂及其筛选方法，属于饲料添加剂技术领域。本发明采用体外消化实验对猪禽替抗添加剂进行筛选，无需进行饲养实验即可快速实现单一猪禽替抗添加剂的添加量、复配猪禽替抗添加剂的种类及其添加量的确定，猪禽替抗添加剂的筛选周期短、效率高且成本低。而且，采用本发明提供的筛选方法得到的猪禽替抗添加剂的胃肠液耐受性好，温度耐受性好，储存时间长，能够提高猪和家禽等动物的回肠干物质及有机物消化率，动物日增重比例高，饲料料重比低，能够提高饲料利用率，很好的代替饲料抗生素。
Description
技术领域
本发明涉及饲料添加剂技术领域，具体涉及一种猪禽替抗添加剂及其筛选方法。
背景技术
自1949年Stokad等发现饲喂金霉素对家禽生长具有促进作用以来，抗生素在养殖业中预防动物疾病、促进动物生长及提高养殖业产量起到了积极的作用。但是，近年来，抗生素的滥用导致的各种危害，如不良反应、过敏反应、***反应、细菌耐药、菌群失调，“三致”作用等已成为一个世界性难题。1986年瑞典全面禁止抗生素促生长剂在动物饲料中应用，一些发达国家也对此相继颁布法规和措施。因此，发展多功能、多类别且无毒、无残留、无副作用的绿色替抗生素饲料替抗添加剂(简称替抗添加剂)成为现代健康养殖和社会发展的必然需求。
现有的替抗添加剂筛选方法主要为饲养实验。然而，添加剂种类众多，采用饲养实验法筛选添加剂的周期长，以肉鸡为例一般饲养21天以上。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种猪禽替抗添加剂及其筛选方法，本发明提供的筛选方法获得合格猪禽替抗添加剂的周期短且成本低。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种猪禽替抗添加剂的筛选方法，包括以下步骤：
(1)将待选猪禽替抗添加剂、胃蛋白酶溶液和饲料混合，进行第一孵育，得到孵育样品液；
(2)将胃蛋白酶溶液和饲料混合，进行第二孵育，得到孵育对照液；
(3)分别将所述孵育样品液和所述孵育对照液与动物十二指肠肠液混合，进行第三孵育，分别得到消化反应样品肠液和消化反应对照肠液；
(4)测试所述消化反应样品肠液和消化反应对照肠液的消化率，分别得到样品消化率和对照消化率，当所述样品消化率与对照消化率的显著性P<0.05时，所述待选猪禽替抗添加剂为目标猪禽替抗添加剂；所述消化率包括干物质消化率和/有机物消化率；
步骤(1)和步骤(2)没有时间先后顺序。
优选地，所述步骤(3)后还包括：
(5)分别将所述消化反应样品肠液和消化反应对照肠液接种于含革兰氏杆菌的培养基中，进行培养，分别得到样品菌落数和对照菌落数，当所述样品菌落数与对照菌落数的显著性P<0.05时，所述待选猪禽替抗添加剂为目标猪禽替抗添加剂；所述革兰氏杆菌包括革兰氏阳性杆菌和/或革兰氏阴性杆菌；
步骤(4)和步骤(5)没有时间先后顺序。
优选地，所述步骤(3)后还包括：
(6)分别测试所述消化反应样品肠液和消化反应对照肠液的自由基清除率，分别得到样品自由基清除率和对照自由基清除率，当所述样品自由基清除率与对照自由基清除率的显著性P<0.05时，所述待选猪禽替抗添加剂为目标猪禽替抗添加剂；所述自由基包括1,1-二苯基-2-苦基肼自由基、4-苄酰氧基-四甲基哌啶氧自由基、16-DOXYL-硬脂酸自由基和氮氧自由基哌啶醇中的一种或几种；
步骤(4)和步骤(6)没有时间先后顺序；
步骤(5)和步骤(6)没有时间先后顺序。
优选地，所述待选猪禽替抗添加剂的种类包括丁酸钠、胍基乙酸、甘露寡糖、果寡糖、葡萄糖氧化酶、甘露聚糖酶、植酸酶、木聚糖酶和枯草芽孢杆菌中的至少一种；以饲料为基准，所述丁酸钠的添加量为0.1～3g/kg；所述胍基乙酸的添加量为0.3～2g/kg；所述甘露寡糖的添加量为0.3～4.0g/kg；所述果寡糖添加量为1～16g/kg；所述葡萄糖氧化酶的添加量为200～2000U/kg；所述甘露聚糖酶的添加量为2000～25000U/kg；所述植酸酶的添加量为200～20000U/kg；所述木聚糖酶的添加量为500～3000U/kg；所述枯草芽孢杆菌添加量为5×106～5×1014cfu/kg。
优选地，所述动物十二指肠肠液在使用前依次进行生理盐水稀释和离心分离。
优选地，所述胃蛋白酶溶液的酶活力与饲料的质量之比为2.0×107～3.0×107U：1kg。
优选地，所述第一孵育、第二孵育和第三孵育的温度独立地为20～50℃，时间独立地为1～8h。
优选地，所述培养的温度为20～50℃，时间为1～8h。
本发明提供了上述技术方案所述筛选方法得到的猪禽替抗添加剂，包括丁酸钠、甘露寡糖、果寡糖、甘露聚糖酶、植酸酶和枯草芽孢杆菌中的至少两种；以饲料为基准，所述甘露寡糖添加量为1.0～3.0g/kg，所述果寡糖的添加量为5～12g/kg，所述甘露聚糖酶添加量为6000～18000U/kg，所述植酸酶添加量为800～15000U/kg，所述枯草芽孢杆菌添加量为5×109～5×1011cfu/kg。
优选地，包括甘露寡糖-果寡糖-枯草芽孢杆菌复配猪禽替抗添加剂、甘露寡糖-甘露聚糖酶-枯草芽孢杆菌复配猪禽替抗添加剂、甘露寡糖-甘露聚糖酶-丁酸钠复配猪禽替抗添加剂、甘露寡糖-果寡糖-甘露聚糖酶复配猪禽替抗添加剂、甘露寡糖-果寡糖-丁酸钠复配猪禽替抗添加剂或甘露寡糖-枯草芽孢杆菌-植酸酶复配猪禽替抗添加剂。
本发明提供了一种猪禽替抗添加剂的筛选方法，包括以下步骤：(1)将待选猪禽替抗添加剂、胃蛋白酶溶液和饲料混合，进行第一孵育，得到孵育样品液；(2)将胃蛋白酶溶液和饲料混合，进行第二孵育，得到孵育对照液；(3)分别将所述孵育样品液和所述孵育对照液与动物十二指肠肠液混合，进行第三孵育，分别得到消化反应样品肠液和消化反应对照肠液；(4)测试所述消化反应样品肠液和消化反应对照肠液的消化率，分别得到样品消化率和对照消化率，当所述样品消化率与对照消化率的显著性P<0.05时，所述待选猪禽替抗添加剂为目标猪禽替抗添加剂；所述消化率包括干物质消化率和/或有机物消化率；步骤(1)和步骤(2)没有时间先后顺序。传统的饲养实验法筛选猪禽替抗添加剂，需要将不同添加量的单一添加剂、不同种类及不同添加量的复配添加剂分别混到饲料中，以含有添加剂的饲料喂养动物，以鸡为例一般饲养21天或42天，然后测试其生长性能以确定添加剂对动物生长性能(如平均日增重、料重比、死淘率)的影响。而本发明采用体外消化实验对猪禽替抗添加剂进行筛选，无需进行饲养实验即可快速实现单一猪禽替抗添加剂的添加量、复配猪禽替抗添加剂的种类及其添加量的确定，猪禽替抗添加剂的筛选周期短、效率高且成本低显著性P<0.05，说明添加了猪禽替抗添加剂后能够明显提高了饲料的消化率。而且，采用本发明提供的筛选方法得到的猪禽替抗添加剂胃肠液耐受性好，提高动物的回肠干物质及有机物消化率，温度耐受性好，储存时间长，动物日增重比例高，饲料料重比低，能够提高饲料利用率，很好的代替饲料抗生素。
进一步的，本发明提供的筛选方法还包括测试消化反应样品肠液和消化反应对照肠液对革兰氏阳性杆菌和革兰氏阴性杆菌的数量的影响，能够筛选得到促进回肠双歧杆菌的增殖、抑制了回肠沙门氏菌的增殖的猪禽替抗添加剂，改善肠道菌群结构，促进有益菌的增殖，抑制有害菌的增殖，从而提高消化率和动物机体健康。
进一步的，本发明提供的筛选方法还包括测试消化反应样品肠液和消化反应对照肠液的自由基清除率，能够筛选得到提高回肠抗氧化能力的猪禽替抗添加剂，从而改善肠道内环境。
本发明还提供了上述技术方案所述筛选方法得到的猪禽替抗添加剂，包括丁酸钠、甘露寡糖、果寡糖、甘露聚糖酶、植酸酶和枯草芽孢杆菌中的至少两种；以饲料为基准，所述甘露寡糖添加量为1.0～3.0g/kg，所述果寡糖的添加量为5～12g/kg，所述甘露聚糖酶添加量为6000～18000U/kg，所述植酸酶添加量为800～15000U/kg，所述枯草芽孢杆菌添加量为5×109～5×1011cfu/kg。丁酸钠中的丁酸能够为肠道细胞提供能量，提高动物肠道的消化吸收能力、杀菌抗菌增强免疫力，丁酸钠的特殊气味还可以作为诱食剂，提高动物的采食量。甘露寡糖可将半纤维素降解为甘露低聚糖供动物利用，显著提高了动物的饲料利用率、生长性能和免疫力；果寡糖通过调节动物肠道中微生物区系平衡而实现的，具体的，动物体内分泌的α-淀粉酶、蔗寡酶、麦芽糖酶不能水解以β-1,2-糖苷键相连的果寡糖，因此果寡糖大都能顺利通过胃和小肠而不被降解利用，但大肠中的乳酸杆菌、双岐杆菌和梭状芽孢杆菌可产生一系列果糖苷酶，使这些有益菌得到养分而增殖，而有害菌不能分泌果糖苷酶，同时有益菌增殖后，会抑制有害菌，从而使肠道微生态***调整到正常状态。甘露聚糖酶能够促进甘露聚糖分解产生的甘露寡糖，可被动物肠道中的有益菌吸收，改善菌群组成，减少大肠杆菌、沙门氏菌的感染，还能够减少肉鸡球虫病的危害，提高肉鸡均匀度。甘露聚糖酶为一种多功能的促生长剂，可以促进类胰岛素生长因子IGF-I的分泌，促进蛋白质的合成，提高瘦肉率，促进生长。植酸酶可以促进动物对于钙磷的吸收。枯草芽孢杆菌可以消耗氧气使得肠道内保持低氧，枯草芽孢杆菌菌体产生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，这些活性物质对致病菌或内源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用；枯草芽孢杆菌自身可以分泌消化酶提高肠道的消化能力；枯草芽孢杆菌对特殊菌体进行促芽孢和微胶囊包被处理，在芽孢状态下稳定性好，能耐氧化、耐挤压、耐高温(能长期耐60℃高温，在120℃温度下能存活20min)、耐酸碱(在酸性胃环境中能保持活性)，可以耐唾液和胆汁的攻击，是微生物中可100％直达大小肠的活菌。本发明筛选得到的猪禽替抗添加剂对胃肠液耐受性好，温度耐受性好，储存时间长，提高动物回肠干物质及有机物消化率，促进回肠双歧杆菌的增殖，抑制回肠沙门氏菌的增殖，提高回肠抗氧化能力，提高动物日增重，降低饲料料重比，提高饲料利用率，能够很好的代替饲料抗生素。
具体实施方式
本发明提供了一种猪禽替抗添加剂的筛选方法，包括以下步骤：
(1)将待选猪禽替抗添加剂、胃蛋白酶溶液和饲料混合，进行第一孵育，得到孵育样品液；
(2)将胃蛋白酶溶液和饲料混合，进行第二孵育，得到孵育对照液；
(3)分别将所述孵育样品液和所述孵育对照液与动物十二指肠肠液混合，进行第三孵育，分别得到消化反应样品肠液和消化反应对照肠液；
(4)测试所述消化反应样品肠液和消化反应对照肠液的消化率，分别得到样品消化率和对照消化率，当所述样品消化率与对照消化率的显著性P<0.05时，所述待选猪禽替抗添加剂为目标猪禽替抗添加剂；所述消化率包括干物质消化率和/有机物消化率；
步骤(1)和步骤(2)没有时间先后顺序。
在本发明中，若无特殊说明，所有的原料组分均为本领域技术人员熟知的市售商品。
本发明将待选猪禽替抗添加剂、胃蛋白酶溶液和饲料混合，进行第一孵育，得到孵育样品液。
在本发明中，所述待选猪禽替抗添加剂优选包括猪禽替抗添加剂的种类和添加量；所述猪禽替抗添加剂的种类优选包括丁酸钠、胍基乙酸、甘露寡糖、果寡糖、葡萄糖氧化酶、甘露聚糖酶、植酸酶、木聚糖酶和枯草芽孢杆菌中的至少一种，更优选为丁酸钠、胍基乙酸、甘露寡糖、果寡糖、葡萄糖氧化酶、甘露聚糖酶、植酸酶、木聚糖酶和枯草芽孢杆菌中的至少两种，进一步优选为丁酸钠、胍基乙酸、甘露寡糖、果寡糖、葡萄糖氧化酶、甘露聚糖酶、植酸酶、木聚糖酶和枯草芽孢杆菌中的至少三种。在本发明中，所述丁酸钠的添加量优选为0.1～3g/kg，更优选为1～2.5g/kg，进一步优选为0.6～1.5g/kg，进一步优选为0.8～1g/kg。在本发明中，所述甘露寡糖的添加量优选为0.3～4.0g/kg，更优选为0.5～3.5g/kg，进一步优选为1～2.5g/kg，最优选为1.5～2g/kg。在本发明中，所述果寡糖添加量优选为1～16g/kg，更优选为2～14g/kg，进一步优选为6～13g/kg，最优选为9～12g/kg。在本发明中，所述葡萄糖氧化酶的添加量优选为200～2000U/kg，更优选为400～1500U/kg，进一步优选为800～1000U/kg；所述葡萄糖氧化酶的酶活力优选为8000～12000U/g，更优选为9000～10000U/g。在本发明中，所述甘露聚糖酶的添加量优选为2000～25000U/kg，更优选为4000～22000U/kg，进一步优选为5000～20000U/kg，最优选为10000～15000U/kg；所述甘露聚糖酶的酶活力优选为40000～60000U/g，更优选为45000～55000U/g。在本发明中，所述植酸酶的添加量优选为200～20000U/kg，更优选为500～18000U/kg，进一步优选为6000～16000U/kg，最优选为11000～13000U/kg；所述植酸酶的酶活力优选为1×105～5×105U/g；所述木聚糖酶的添加量优选为500～3000U/kg，更优选为1000～2500U/kg，进一步优选为1500～2000U/kg；所述木聚糖酶的酶活力优选为5×104～3×105U/g，更优选为1×105～2×105U/g；所述枯草芽孢杆菌添加量优选为5×106～5×1014cfu/kg，更优选为5×108～5×1013cfu/kg，进一步优选为1×109～5×1012cfu/kg，最优选为1×1010～1×1011cfu/kg；所述枯草芽孢杆菌的有效活菌数优选为1×1011～3×1011cfu/g，更优选为1.5×1011～2.5×1011cfu/g。
在本发明中，所述胃蛋白酶溶液优选现用现配。在本发明中，所述胃蛋白酶溶液的配制方法优选包括以下步骤：将胃蛋白酶溶解于盐酸缓冲溶液中得到。在本发明中，所述胃蛋白酶优选为Sigma-P7000胃蛋白酶。在本发明中，所述盐酸缓冲溶液的pH值优选为1～3，更优选为2，所述pH值优选为39℃条件下标定得到。在本发明中，所述胃蛋白酶溶液的浓度优选为710～760kU/L，更优选为735～740kU/L。在本发明中，所述胃蛋白酶溶液的酶活力与饲料的质量之比优选为2.0×107～3.0×107，更优选为2.2×107～2.8×107U：1kg，进一步优选为2.4×107～2.5×107U：1kg。
本发明对于所述饲料没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的家禽饲料即可。在本发明中，所述饲料包括以下质量份数的组分：多维0.5～1.5份，更优选为1份；多矿1～2份，更优选为1.5份；赖氨酸708～12份，更优选为10份；苏氨酸0.5～1.5份，更优选为1份；蛋氨酸2～3份，更优选为2.5份；盐1～3份，更优选为2份；石粉10～20份，更优选为15份；碳酸氢钙5～12份，更优选为10份；小苏打0.5～3份，更优选为2份；玉米350～400份，更优选为390份；次粉28～34份，更优选为32份；小麦160～210份，更优选为200份；味精蛋白20～35份，更优选为30份；花生粕60～65份，更优选为62份；玉米DDGS(玉米酒糟蛋白饲料)60～75份，更优选为65份；豆粕46130～140份，更优选为136份；玉米蛋白粉22～30份，更优选为25份；豆油10～21份，更优选为15份。在本发明中，所述多维优选为0.7～1.3份，更优选为0.8～1份；所述多维优选包括以下质量分数的组分：vitaminA70份，vitamin D350份，vitaminE 60份，vitaminK3200份，vitamin B1128份，vitamin B280份，vitamin B6100份，vitaminB122份。在本发明中，所述多矿优选为1.2～1.8份，更优选为1.3～1.5份，所述多矿优选包括以下质量份数的组分：Mn 60份，Fe 80份，Zn 60份，Cu 8.13份，I 0.27份，Se 0.20份。在本发明中，所述盐优选为1.3～2.7份，所述盐优选为氯化钠。在本发明中，所述石粉优选为13～17份。
本发明对于所述混合没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的的混合方式将原料混合均匀即可。
在本发明中，所述第一孵育的温度优选为20～50℃，更优选为35～40℃；所述第一孵育的时间优选为1～8h，更优选为3～4h，所述第一孵育优选在恒温振荡培养箱中进行，所述第一孵育的振荡速度优选为60～100rpm，更优选为70～80rpm。
所述第一孵育后，本发明优选还包括将所得孵育液利用碱中止反应，所述碱优选包括氢氧化钠或氢氧化钙；所述碱优选以碱溶液形式使用，所述碱溶液的浓度优选为0.05～0.4mol/L，更优选为0.1～0.2mol/L；所述碱溶液与胃蛋白酶溶液的体积比优选为7：25～35，更优选为7:30。
本发明将胃蛋白酶溶液和饲料混合，进行第二孵育，得到孵育对照液。在本发明中，所述孵育对照液与所述孵育样品液的制备条件的区别仅在于孵育对照液的制备不加入猪禽替抗添加剂，其他制备条件与所述孵育样品液的制备条件相同，在此不再赘述。
得到孵育样品液和孵育对照液后，本发明分别将所述孵育样品液和所述孵育对照液与动物十二指肠肠液混合，进行第三孵育，分别得到消化反应样品肠液和消化反应对照肠液。
在本发明中，所述动物十二指肠肠液优选在使用前依次进行生理盐水稀释和离心分离。在本发明中，所述动物优选包括家禽或猪，所述家禽优选包括鸡、鸭、鹅、火鸡、鸽或鹌鹑；所述鸡优选为成年白羽肉鸡。在本发明中，所述鸡十二指肠肠液与生理盐水的体积比优选为1：0.5～3，更优选为1：1～2。在本发明中，所述离心分离的转速优选为2000～6000rpm，更优选为3000～4000rpm，所述离心分离的时间优选为5～20min，更优选为10～15min；所述离心分离得到的上清液即为动物十二指肠肠液(记为动物十二指肠稀释液)。
在本发明中，所述孵育样品液与鸡十二指肠稀释液的体积比优选为1：0.5～3，更优选为1:1。
本发明对于所述混合没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的的混合方式将原料混合均匀即可。
在本发明中，所述第三孵育的温度优选为20～50℃，更优选为35～40℃；所述第三孵育的时间优选为1～8h，更优选为3～4h，所述第三孵育优选在恒温振荡培养箱中进行，所述第三孵育的振荡速度优选为60～100rpm，更优选为80rpm。
得到消化反应样品肠液和消化反应对照肠液后，本发明测试所述消化反应样品肠液和消化反应对照肠液的消化率，分别得到样品消化率和对照消化率，当所述样品消化率与对照消化率的显著性P<0.05时，所述待选猪禽替抗添加剂为目标猪禽替抗添加剂；所述消化率包括干物质消化率和/有机物消化率。本发明对于所述干物质消化率和有机物消化率的测试方法没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的干物质消化率和有机物消化率的测试方法即可，具体如按照《GB/T 6345-2014饲料水分测定方法》测试干物质消化率，按照《GB/T 6438-2007饲料中粗灰分测定方法》测试有机物消化率。在本发明中，所述消化率的测试过程中的平行试验次数优选为3～6次，更优选为4～5次。
在本发明中，所述步骤(3)后优选还包括：(5)分别将所述消化反应样品肠液和消化反应对照肠液接种于含革兰氏杆菌的培养基中，进行培养，分别得到样品菌落数和对照菌落数，当所述样品菌落数与对照菌落数的显著性P<0.05时，所述待选猪禽替抗添加剂为目标猪禽替抗添加剂；所述革兰氏杆菌包括革兰氏阳性杆菌和/或革兰氏阴性杆菌；步骤(4)和步骤(5)没有时间先后顺序。在本发明中，所述样品菌落数和对照菌落数的测试过程中的平行试验次数优选为1～4次，更优选为2～3次。
在本发明中，所述革兰氏阴性杆菌优选包括沙门氏菌、大肠杆菌或变形杆菌；所述革兰氏阳性杆菌优选包括双歧杆菌、芽孢杆菌或葡萄球菌。本发明对于所述培养基没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的培养基即可；在本发明的具体实施例中，所述含革兰氏杆菌的培养基优选包括沙门氏菌-志贺氏菌琼脂培养基或BL培养基。在本发明中，所述消化反应样品肠液和消化反应对照肠液在使用前优选先利用灭菌生理盐水进行梯度稀释，所述梯度稀释的倍数优选为10倍、102倍、103倍、104倍、105倍、106倍、107倍和108倍。在本发明中，所述消化反应样品肠液和消化反应对照肠液的接种量独立地优选为0.05～0.3，更优选为0.07～0.2。
在本发明中，所述培养的气氛优选为5v/v％CO2，所述培养的温度优选为20～50℃，更优选为35～40℃；所述培养的时间优选为18～36h，更优选为24h。本发明优选选择菌落为30～300的平板进行计数。
在本发明中，所述步骤(3)后优选还包括：(6)分别测试所述消化反应样品肠液和消化反应对照肠液的自由基清除率，分别得到样品自由基清除率和对照自由基清除率，当所述样品自由基清除率与对照自由基清除率的显著性P<0.05时，所述待选猪禽替抗添加剂为目标猪禽替抗添加剂；所述自由基包括1,1-二苯基-2-苦基肼自由基、4-苄酰氧基-四甲基哌啶氧自由基、16-DOXYL-硬脂酸自由基和氮氧自由基哌啶醇中的一种或几种；步骤(4)和步骤(6)没有时间先后顺序；步骤(5)和步骤(6)没有时间先后顺序。
在本发明中，所述样品菌落数和对照菌落数的测试过程中的平行试验次数优选为1～4次，更优选为2～3次。
本发明对于所述自由基清除率的测试方法没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的自由基清除率的测试方法即可。在本发明的具体实施例中，所述自由基清除率的测试方法为：(1)实验组：将消化反应样品肠液与自由基溶液混合，进行自由基消除反应，得到样品消自由基反应液；测试所述样品消自由基反应液的吸光度，得到样品吸光度；(2)对照组：与所述实验组的区别仅在于用等量蒸馏水代替消化反应样品肠液，得到对照吸光度；(3)空白组：与所述实验组的区别仅在于将自由基溶液替换为自由基溶液中的溶剂，得到空白吸光度；(4)根据样品吸光度、对照吸光度和空白吸光度计算自由基清除率。在本发明中，所述自由基溶液中的溶剂优选包括醇，更优选包括无水乙醇；所述自由基溶液的浓度优选为0.1～0.7mmol/L，更优选为0.4～0.5mmol/L；所述消化反应样品肠液的体积与自由基的物质的量之比优选为1mL：0.05～2.0mmol，更优选为1mL：0.8～1.5mmol。在本发明中，所述自由基消除反应的温度优选为室温，所述自由基消除反应的时间优选为10～50min，更优选为20～30min；所述自由基消除反应优选在避光条件下进行。所述自由基消除反应后，本发明优选还包括将所得反应液进行离心分离，上清液即为样品消自由基反应液。在本发明中，所述离心分离的转速优选为4000～10000rpm，更优选为5000～8000rpm，所述离心分离的时间优选为5～15min，更优选为8～10min。在本发明中，所述自由基清除率的计算式如下：自由基清除率％＝(1-(A样品-A空白)/A对照)×100％，其中，A空白为空白组吸光度，A样品为实验组吸光度，A对照为对照组吸光度。
本发明提供了上述技术方案所述筛选方法得到的猪禽替抗添加剂，包括丁酸钠、甘露寡糖、果寡糖、甘露聚糖酶、植酸酶和枯草芽孢杆菌中的至少两种，更优选包括丁酸钠、甘露寡糖、果寡糖、甘露聚糖酶、植酸酶和枯草芽孢杆菌中的至少三种，进一步优选包括甘露寡糖-果寡糖-枯草芽孢杆菌复配猪禽替抗添加剂、甘露寡糖-甘露聚糖酶-枯草芽孢杆菌复配猪禽替抗添加剂、甘露寡糖-甘露聚糖酶-丁酸钠复配猪禽替抗添加剂、甘露寡糖-果寡糖-甘露聚糖酶复配猪禽替抗添加剂、甘露寡糖-果寡糖-丁酸钠复配猪禽替抗添加剂或甘露寡糖-枯草芽孢杆菌-植酸酶复配猪禽替抗添加剂6种复配猪禽替抗添加剂。在本发明中，以饲料为基准，所述甘露寡糖添加量为1～3g/kg，优选为1.5～2.5g/kg；所述果寡糖的添加量为5～12g/kg，优选为8～12g/kg；所述甘露聚糖酶添加量为6000～18000U/kg，优选为10000～15000U/kg；所述植酸酶添加量为800～15000U/kg，优选为5000～15000U/kg；所述枯草芽孢杆菌添加量为5×109～5×1011cfu/kg，优选为8×109～4×1011cfu/kg。在本发明中，所述复配猪禽替抗添加剂中，丁酸钠的添加量优选为1.5g/kg，甘露寡糖的添加量优选为2g/kg，枯草芽孢杆菌的添加量优选为1×1011cfu/kg，果寡糖的添加量优选为9g/kg，甘露聚糖酶的添加量优选为15000U/kg，植酸酶的添加量优选为11000U/kg，当所述复配猪禽替抗添加剂中不含某猪禽替抗添加剂时其添加量为0。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1中，使用成年白羽肉鸡来源于山东郯城旺侬禽业有限公司。葡萄糖氧化酶、甘露聚糖酶、植酸酶和木聚糖酶的酶活力依次为200～2000U/kg、40000～60000U/g、1×105～5×105U/g和500～3000U/kgU/g，枯草芽孢杆菌的有效活菌数为1×1011～3×1011cfu/g。饲料(基础日粮)组成如表1所示，营养成分如表2所示，基础日粮粉碎过100目筛，装瓶备用。
表1基础日粮的组成
1多维为每千克饲粮提供维生素A vitaminA 70份，维生素D vitamin D3 50份，维生素E vitamin E 60份，维生素K vitamin K3 200份，维生素B1 vitamin B1 128份，维生素B2 vitamin B2 80份，维生素B6 vitamin B6 100份，维生素B12 vitamin B12 2份。
2多矿为每千克饲粮提供锰Mn 60份，铁Fe 80份，锌Zn 60份，铜Cu 8.13份，碘I0.27份，硒Se 0.20份。
表2基础日粮的营养成分
| 营养成分 | 含量 | 营养成分 | 含量 |
| ME，kcal/kg | 3070 | 有效磷 | 0.3％ |
| 粗蛋白 | 22.3％ | 钠 | 0.2％ |
| 粗脂肪 | 4.2％ | 氯 | 0.2％ |
| 粗纤维 | 2.9％ | 赖氨酸 | 1.3％ |
| 钙 | 0.9％ | 蛋氨酸+胱氨酸 | 0.9％ |
| 总磷 | 0.6％ |
实施例1
(1)制备消化反应肠液
取刚屠宰的成年白羽肉鸡十二指肠肠液用生理盐水按照体积比为1:1进行稀释，在4000rpm条件下离心10min，上清液为鸡十二指肠稀释液(当天试验或于-4℃冷藏2天以内备用)。实验组：取基础日粮(干重)4g，置于150mL锥形瓶内，加入不同的替抗添加剂(每种饲料替抗添加剂设置4个重复试验)。称取184.38kU Sigma-P7000胃蛋白酶加入到250mLpH＝2.0的盐酸缓冲溶液(39℃下标定pH值)中搅拌直至溶解(现用现配)，量取30mL所得胃蛋白酶溶液加入锥形瓶中，置于恒温振荡培养箱中，在以37℃、80rpm条件下振荡温育4h，然后用0.2mol/LNaOH溶液中止反应，在所得孵育样品液中加入30mL鸡十二指肠稀释液，在37℃、80rpm条件下振荡温育4h，得到消化反应样品肠液。
对照组：与实验组的区别仅在于不加入替抗添加剂，得到消化反应对照肠液。
(2)消化反应肠液中饲料干物质消化率及有机物消化率测定
将消化反应肠液摇均，将20mL消化反应肠液分别置于离心管中，在4000rpm条件下离心10min，去除上清液，将残留物用30mL蒸馏水转移至已知重量的称量瓶中，按照《GB/T6345-2014饲料水分测定方法》测定空白组和样品组的干物质消化率(DM)。其中，消化反应肠液为消化反应样品肠液或消化反应对照肠液。
按照上述操作，将所得残留物转移至已知重量的坩埚中，按照《GB/T 6438-2007饲料中粗灰分测定方法》测试有机物消化率(OM)。饲料的干物质消化率和有机物消化率的计算式如下：
消化率(％)＝(饲料营养物质干重-消化反应肠液营养物质干重)/饲料营养物质干重×100％。
替抗添加剂种类以及相应的干物质消化率和有机物消化率测试结果如表3～7所示。
表3丁酸钠、甘露寡糖和枯草芽孢杆菌不同添加量对饲料消化率的影响
其中，表3～17和表19～20中同列数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)，相同字母或无字母表示差异不显著(P>0.05)。
由表3可知，与对照组相比，丁酸钠组添加量为1.5g/kg和2g/kg时饲料的干物质消化率和有机物消化率没有显著性差异，但随着添加量的增多，消化率均呈增长趋势，但添加量为2g/kg与1.5g/kg相比差异不显著，实验结果相差极小。与对照组相比，果寡糖添加量为9g/kg和12g/kg时干物质消化率和有机物消化率没有显著性差异。与对照组相比，枯草芽孢杆菌添加量为1×1010cfu/kg、1×1011cfu/kg和1×1012cfu/kg时饲料的干物质消化率差异极显著，添加量为1×1011cfu/kg和1×1012cfu/kg时饲料的有机物消化率差异性极显著，消化率呈增长趋势，添加量为1×1011cfu/kg与1×1012cfu/kg相比差异不显著，实验结果相差极小。根据实验结果分别选择丁酸钠的最佳添加量为1.5g/kg、果寡糖的最佳添加量为9g/kg，枯草芽孢杆菌的最佳添加量为1×1011cfu/kg。
表4果寡糖、胍基乙酸和葡萄糖氧化酶不同添加量对饲料消化率的影响
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由表4可知，与对照组相比，甘露寡糖添加量为2g/kg和2.5g/kg时干物质消化率和有机物消化率差异极显著，消化率呈增长趋势，2g/kg与2.5g/kg相比差异不显著，实验结果相差极小。与对照组相比，胍基乙酸添加量为8g/kg和1g/kg时干物质消化率和有机物消化率差异极显著，消化率均呈增长趋势，添加量为0.8g/kg与1g/kg时消化率相比差异不显著，实验结果相差极小。与对照组相比，葡萄糖氧化酶添加量为800U/kg和1000U/kg时干物质消化率和有机物消化率差异极显著，消化率均呈增长趋势。800U/kg与1000U/kg相比差异不显著，实验结果相差极小。根据实验结果分别选择甘露寡糖的最佳添加量为2g/kg、胍基乙酸的最佳添加量为0.8g/kg，葡萄糖氧化酶的最佳添加量为800U/kg。
表5甘露聚糖酶、植酸酶和木聚糖酶不同添加量对饲料消化率的影响
由表5可知，与对照组相比，甘露聚糖酶添加量为15000U/kg和20000U/kg时干物质消化率和有机物消化率差异极显著，消化率呈增长趋势，添加量为15000U/kg与20000U/kg相比差异不显著，实验结果相差极小。与对照组相比，植酸酶添加量为11000U/kg和16000U/kg时干物质消化率和有机物消化率差异极显著，消化率呈增长趋势，添加量11000U/kg与16000U/kg相比差异不显著，实验结果相差极小。与对照组相比，木聚糖酶添加量为2000U/kg和2500U/kg时干物质消化率和有机物消化率差异极显著，消化率呈增长趋势。2000U/kg与2500U/kg相比差异不显著，实验结果相差极小。根据实验结果分别选择甘露聚糖酶的最佳添加量为15000U/kg，植酸酶的最佳添加量为11000U/kg，木聚糖酶的最佳添加量为2000U/kg。
表6丁酸钠或甘露寡糖与其他添加剂两两复配对饲料消化率的影响
| 处理方式 | DM消化率 | OM消化率 |
| 对照组 | 74.39％±0.09％H | 60.67％±0.19％I |
| 丁酸钠+胍基乙酸 | 75.44％±0.16％G | 61.36％±0.12％H |
| 丁酸钠+果寡糖 | 77.71％±0.10％E | 63.77％±0.05％Ea |
| 丁酸钠+甘露聚糖酶 | 78.86％±0.09％D | 64.47％±0.13％D |
| 丁酸钠+葡萄糖氧化酶 | 78.58％±0.25％D | 64.27％±0.15％D |
| 丁酸钠+枯草芽孢杆菌 | 77.34％±0.05％E | 63.28％±0.06％FGb |
| 丁酸钠+木聚糖酶 | 76.23％±0.06％F | 62.97％±0.08％Gd |
| 丁酸钠+植酸酶 | 77.64％±0.12％E | 63.70％±0.07％EFa |
| 丁酸钠+甘露寡糖 | 79.66％±0.11％C | 65.47％±0.17％C |
| 甘露寡糖+胍基乙酸 | 76.66％±0.06％F | 63.11％±0.05％Gc |
| 甘露寡糖+果寡糖 | 80.34％±0.09％B | 66.29％±0.13％B |
| 甘露寡糖+甘露聚糖酶 | 81.35％±0.09％A | 67.57％±0.04％A |
| 甘露寡糖+葡萄糖氧化酶 | 77.61％±0.11％E | 63.65％±0.12％EFa |
| 甘露寡糖+枯草芽孢杆菌 | 80.57％±0.13％B | 66.43％±0.09％B |
| 甘露寡糖+木聚糖酶 | 77.75％±0.12％E | 63.70％±0.09％EFa |
| 甘露寡糖+植酸酶 | 77.35％±0.08％E | 63.40％±0.03％EFGb |
| P | ＜0.01 | ＜0.01 |
其中，丁酸钠添加量为1.5g/kg，甘露寡糖添加量为2g/kg，枯草芽孢杆菌添加量为1×1011cfu/kg，果寡糖添加量为9g/kg，胍基乙酸添加量为0.8g/kg，葡萄糖氧化酶添加量为800U/kg，甘露聚糖酶添加量为15000U/kg，植酸酶添加量为11000U/kg，木聚糖酶添加量为2000U/kg。
由表6可知，与对照组相比，甘露聚糖-甘露聚糖酶组的干物质消化率和有机物消化率最高，干物质消化率和有机物消化率差异极显著提高。与对照组相比，甘露寡糖-枯草芽孢杆菌组的干物质消化率和有机物消化率差异极显著提高，甘露寡糖-枯草芽孢杆菌组的干物质消化率和有机物消化率极显著低于甘露聚糖-甘露聚糖酶组。与对照组相比，甘露寡糖-果寡糖组和甘露聚糖-甘露聚糖酶组的干物质消化率和有机物消化率差异极显著提高。根据实验结果分别选择甘露聚糖-甘露聚糖酶组、甘露寡糖-枯草芽孢杆菌组和甘露寡糖-果寡糖组与其他添加剂进行三种添加剂复配组合。
表7甘露寡糖+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+甘露聚糖酶或甘露寡糖+果寡糖与其他添加剂复配对饲料消化率的影响
| 处理方式 | DM消化率 | OM消化率 |
| 对照组 | 68.26％±0.33％G | 56.51％±0.12％M |
| 甘露寡糖+枯草芽孢杆菌 | 74.38％±0.11％F | 62.12％±0.03％L |
| 甘露寡糖+甘露聚糖酶 | 74.49％±0.16％F | 62.58％±0.10％K |
| 甘露寡糖+枯草芽孢杆菌+丁酸钠 | 75.32％±0.12％E | 63.14％±0.06％J |
| 甘露寡糖+枯草芽孢杆菌+葡萄糖氧化酶 | 76.43％±0.13％D | 64.15％±0.07％FGHfi |
| 甘露寡糖+枯草芽孢杆菌+木聚糖酶 | 76.55％±0.23％D | 64.52％±0.16％EFde |
| 甘露寡糖+枯草芽孢杆菌+植酸酶 | 77.36％±0.16％C | 65.51％±0.17％D |
| 甘露寡糖+甘露聚糖酶+丁酸钠 | 78.46％±0.13％A | 66.31％±0.07％BCb |
| 甘露寡糖+甘露聚糖酶+葡萄糖氧化酶 | 75.47％±0.17％E | 63.37％±0.11％IJl |
| 甘露寡糖+甘露聚糖酶+枯草芽孢杆菌 | 78.72％±0.06％A | 66.92％±0.04％A |
| 甘露寡糖+甘露聚糖酶+木聚糖酶 | 76.45％±0.15％D | 64.41％±0.16％FGg |
| 甘露寡糖+甘露聚糖酶+植酸酶 | 76.31％±0.10％D | 64.07％±0.09％GHhi |
| 甘露寡糖+果寡糖+丁酸钠 | 77.72％±0.06％BCb | 65.65％±0.08％D |
| 甘露寡糖+果寡糖+葡萄糖氧化酶 | 76.62％±0.17％D | 64.85％±0.05％Ec |
| 甘露寡糖+果寡糖+枯草芽孢杆菌 | 78.57％±0.05％A | 66.64％±0.10％ABa |
| 甘露寡糖+果寡糖+木聚糖酶 | 75.31％±0.09％E | 63.34％±0.13％IJl |
| 甘露寡糖+果寡糖+植酸酶 | 75.51％±0.16％E | 63.74％±0.17％HIjk |
| 甘露寡糖+果寡糖+甘露聚糖酶 | 78.28％±0.14％ABa | 66.17％±0.07％C |
| P | ＜0.01 | ＜0.01 |
其中，丁酸钠添加量为1.5g/kg，甘露寡糖添加量为2g/kg，枯草芽孢杆菌添加量为1×1011cfu/kg、果寡糖添加量为9g/kg，胍基乙酸添加量为0.8g/kg，葡萄糖氧化酶添加量为800U/kg，甘露聚糖酶添加量为15000U/kg，植酸酶添加量为11000U/kg，木聚糖酶添加量为2000U/kg。
由表7可知，与对照组相比，甘露寡糖+果寡糖+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+甘露聚糖酶+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+甘露聚糖酶+丁酸钠、甘露寡糖+果寡糖+甘露聚糖酶组的干物质消化率和有机物消化率最高饲料干物质消化率差异极显著。与对照组相比，甘露寡糖+果寡糖+丁酸钠组的干物质消化率差异极显著提高，甘露寡糖+果寡糖+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+甘露聚糖酶+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+甘露聚糖酶+丁酸钠、甘露寡糖+果寡糖+甘露聚糖酶组的干物质消化率极显著低于甘露寡糖+果寡糖+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+甘露聚糖酶+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+甘露聚糖酶+丁酸钠组。甘露寡糖+果寡糖+甘露聚糖酶组的干物质消化率显著低于甘露寡糖+果寡糖+甘露聚糖酶组。与对照组相比，甘露寡糖+枯草芽孢杆菌+植酸酶组的干物质消化率差异极显著提高。甘露寡糖+果寡糖+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+甘露聚糖酶+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+甘露聚糖酶+丁酸钠、甘露寡糖+果寡糖+甘露聚糖酶组的干物质消化率极显著低于甘露寡糖+果寡糖+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+甘露聚糖酶+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+甘露聚糖酶+丁酸钠、甘露寡糖+果寡糖+甘露聚糖酶组。
与对照组相比，甘露寡糖+果寡糖+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+甘露聚糖酶+枯草芽孢杆菌组的有机物消化率最高，有机物消化率差异极显著提高。与对照组相比，甘露寡糖+甘露聚糖酶+丁酸钠组的有机物消化率差异极显著提高，甘露寡糖+甘露聚糖酶+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+果寡糖+枯草芽孢杆菌组相比有机物消化率极显著低于甘露寡糖+甘露聚糖酶+枯草芽孢杆菌组，显著低于甘露寡糖+果寡糖+枯草芽孢杆菌组。与对照组相比，甘露寡糖+果寡糖+甘露聚糖酶组的有机物消化率差异极显著提高，甘露寡糖+果寡糖+甘露聚糖酶组与甘露寡糖+甘露聚糖酶+丁酸钠组相比有机物消化率无显著性差异。与对照组相比，甘露寡糖+果寡糖+丁酸钠、甘露寡糖+枯草芽孢杆菌+植酸酶的有机物消化率差异极显著提高，甘露寡糖+果寡糖+甘露聚糖酶组的有机物消化率极显著低于甘露寡糖+果寡糖+甘露聚糖酶组。
根据实验结果分别选择甘露寡糖+果寡糖+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+甘露聚糖酶+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+甘露聚糖酶+丁酸钠、甘露寡糖+果寡糖+甘露聚糖酶、甘露寡糖+果寡糖+丁酸钠、甘露寡糖+枯草芽孢杆菌+植酸酶组六种替抗添加剂复配组合。
(3)消化反应肠液的抗氧化能力的测定
肠道菌活细胞清除自由基(DPPH)能力的测定，具体操作如下：实验组：取2mL消化反应样品肠液，加入2mL DPPH溶液(用无水乙醇溶解配制DPPH，终浓度为0.4mmol/L)，混合均匀后，然后置于室温温度下遮光反应30min，然后在转速8000r/min下离心10min，取上清部分，测定样品在波长517nm处的吸光度A，测3次平行值。对照组：与实验组的区别仅在于将消化反应样品肠液替换为等量蒸馏水。空白组：与实验组的区别仅在于：以等体积无水乙醇代替DPPH无水乙醇溶液，并以等体积的蒸馏水和无水乙醇混合液空白调零。DPPH清除率计算式如下：清除率％＝(1-(A样品-A空白)/A对照)×100％，其中，A空白为空白组吸光度，A样品为实验组吸光度，A对照为对照组吸光度。不同饲料替抗添加剂下消化反应肠液的抗氧化能力测试结果如表8～表12所示。
表8丁酸钠、甘露寡糖和枯草芽孢杆菌不同添加量对肠道抗氧化能力的影响
由表8可知，与对照组相比，丁酸钠的添加量为1g/kg、1.5g/kg和2g/kg时DPPH清除率没有显著性差异，添加量2g/kg与1.5g/kg相比差异不显著，实验结果相差极小。果寡糖的添加量为3g/kg、6g/kg、9g/kg和12g/kg时DPPH清除率显著性低于对照组，添加量为6g/kg、9g/kg与12g/kg相比差异不显著。与对照组相比，枯草芽孢杆菌不同添加量与对照组的DPPH清除率无显著性差异。
表9果寡糖、胍基乙酸和葡萄糖氧化酶不同添加量对肠道抗氧化能力的影响
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由表9可知，甘露寡糖添加量为1g/kg、1.5g/kg、2g/kg和2.5g/kg时DPPH清除率极显著性高于对照组，添加量为1.5g/kg、2g/kg与2.5g/kg相比差异不显著，实验结果相差极小。，胍基乙酸添加量为0.4g/kg、0.6g/kg、0.8g/kg和1g/kg时DPPH清除率极显著性高于对照组，添加量为0.4g/kg、0.6g/kg、0.8g/kg和1g/kg相比差异不显著。葡萄糖氧化酶添加量为400U/kg、600U/kg、800U/kg和1000U/kg时DPPH清除率极显著性高于对照组，添加量为400U/kg、600U/kg、800U/kg和1000U/kg相比差异不显著。
表10甘露聚糖酶、植酸酶和木聚糖酶不同添加量对肠道抗氧化能力的影响
/>
由表10可知，甘露聚糖酶添加量为5000U/kg、10000U/kg、15000U/kg和20000U/kg时DPPH清除率极显著性高于对照组，添加量为5000U/kg、10000U/kg、15000U/kg和20000U/kg相比差异不显著，实验结果相差极小。植酸酶添加量为1000U/kg、6000U/kg、11000U/kg和16000U/kg时DPPH清除率极显著性高于对照组，1000U/kg、6000U/kg、11000U/kg和16000U/kg相比差异不显著。与对照组相比，木聚糖酶不同添加量与对照组的DPPH清除率无显著性差异。
表11丁酸钠或甘露寡糖与其他添加剂两两复配的组合对肠道抗氧化能力的影响
其中，丁酸钠添加量为1.5g/kg，甘露寡糖添加量为2g/kg，枯草芽孢杆菌添加量为1×1011cfu/kg，果寡糖添加量为9g/kg，胍基乙酸添加量为0.8g/kg，葡萄糖氧化酶添加量为800U/kg，甘露聚糖酶添加量为15000U/kg，植酸酶添加量为11000U/kg，木聚糖酶添加量为2000U/kg。
由表11可知，甘露寡糖+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+果寡糖组的DPPH清除率最高，DPPH清除率极显著高于对照组。甘露寡糖+葡萄糖氧化酶、甘露寡糖+甘露聚糖酶、甘露寡糖+胍基乙酸、丁酸钠+甘露寡糖、丁酸钠+甘露聚糖酶、丁酸钠+果寡糖组的DPPH清除率极显著高于对照组，甘露寡糖+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+果寡糖组的DPPH清除率极显著低于甘露寡糖+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+果寡糖组。甘露寡糖+葡萄糖氧化酶、甘露寡糖+胍基乙酸组DPPH清除率极显著高于甘露寡糖+甘露聚糖酶组。
表12甘露寡糖+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+甘露聚糖酶或甘露寡糖+果寡糖与其他添加剂复配的组合对肠道抗氧化能力的影响
| 处理方式 | DPPH清除率 |
| 对照组(无添加剂) | 92.42％±0.17％H |
| 甘露寡糖+枯草芽孢杆菌 | 96.14％±0.07％FGlm |
| 甘露寡糖+甘露聚糖酶 | 95.77％±0.07％Gn |
| 甘露寡糖+枯草芽孢杆菌+丁酸钠 | 96.25％±0.05％F |
| 甘露寡糖+枯草芽孢杆菌+葡萄糖氧化酶 | 97.95％±0.06％BCde |
| 甘露寡糖+枯草芽孢杆菌+木聚糖酶 | 97.60％±0.18％CDfg |
| 甘露寡糖+枯草芽孢杆菌+植酸酶 | 98.03％±0.04％B |
| 甘露寡糖+甘露聚糖酶+丁酸钠 | 97.19％±0.07％DEh |
| 甘露寡糖+甘露聚糖酶+葡萄糖氧化酶 | 97.59％±0.07％CDfg |
| 甘露寡糖+甘露聚糖酶+枯草芽孢杆菌 | 97.95％±0.15％BCde |
| 甘露寡糖+甘露聚糖酶+木聚糖酶 | 96.11％±0.03％FGlm |
| 甘露寡糖+甘露聚糖酶+植酸酶 | 96.51％±0.10％Fk |
| 甘露寡糖+果寡糖+丁酸钠 | 97.11％±0.04％Ej |
| 甘露寡糖+果寡糖+葡萄糖氧化酶 | 98.13％±0.13％ABb |
| 甘露寡糖+果寡糖+枯草芽孢杆菌 | 98.45％±0.02％Aa |
| 甘露寡糖+果寡糖+木聚糖酶 | 97.54％±0.11％CDfg |
| 甘露寡糖+果寡糖+植酸酶 | 97.45％±0.08％DEi |
| 甘露寡糖+果寡糖+甘露聚糖酶 | 98.33％±0.17％ABc |
| P | ＜0.01 |
其中，丁酸钠添加量为1.5g/kg，甘露寡糖添加量为2g/kg，枯草芽孢杆菌添加量为1×1011cfu/kg，果寡糖添加量为9g/kg，胍基乙酸添加量为0.8g/kg，葡萄糖氧化酶添加量为800U/kg，甘露聚糖酶添加量为15000U/kg，植酸酶添加量为11000U/kg，木聚糖酶添加量为2000U/kg。
由表12可知，甘露寡糖+果寡糖+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+果寡糖+葡萄糖氧化酶、甘露寡糖+果寡糖+甘露聚糖酶对DPPH的清除率最高，DPPH清除率极显著提高。与对照组、甘露寡糖+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+甘露聚糖酶空白组相比，甘露寡糖+枯草芽孢杆菌+葡萄糖氧化酶、甘露寡糖+枯草芽孢杆菌+植酸酶、甘露寡糖+甘露聚糖酶+枯草芽孢杆菌组的DPPH清除率极显著提高，甘露寡糖+果寡糖+甘露聚糖酶组的DPPH清除率显著低于甘露寡糖+果寡糖+甘露聚糖酶组。根据实验结果分别选择甘露寡糖+果寡糖+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+果寡糖+葡萄糖氧化酶、甘露寡糖+果寡糖+甘露聚糖酶、甘露寡糖+枯草芽孢杆菌+葡萄糖氧化酶、甘露寡糖+枯草芽孢杆菌+植酸酶、甘露寡糖+甘露聚糖酶+枯草芽孢杆菌组六种替抗添加剂复配组合。
(4)消化反应肠液对双歧杆菌和沙门氏菌数量的影响
实验组：移取消化反应样品肠液1mL，加入9mL灭菌生理盐水进行稀释(稀释倍数为10倍)，使用微型振荡器振荡混匀后，静置10min，取上清液0.2mL于灭菌离心管中，并用灭菌生理盐水依次进行102倍、103倍、104倍、105倍、106倍、107倍和108倍梯度稀释。从各稀释管中吸取100μL溶液，分别接种沙门氏菌+志贺氏菌(SS)琼脂培养基和双歧杆菌(BL)培养基上，每个梯度2个重复，选取菌落在30～300个之间的平板进行细菌计数。培养条件为在5％CO2、37℃的条件下培养24h后计数。使用每mL消化反应肠液中细菌个数的对数(log10CFU/mL)来表示结果。对照组：与实验组的区别仅在于将消化反应样品肠液替换为消化反应对照肠液。菌落数测试结果如表13～17所示。表13丁酸钠、甘露寡糖和枯草芽孢杆菌不同添加量对肠道双歧杆菌和沙门氏菌数量的影响
由表13可知，与对照组相比，丁酸钠添加量为1.5g/kg和2g/kg时双歧杆菌数量极显著性提高，沙门氏菌数量极显著降低，双歧杆菌数量呈增长趋势，沙门氏菌呈下降趋势，添加量为2g/kg与1.5g/kg相比差异不显著，实验结果相差极小。与对照组相比，果寡糖添加量为9g/kg和12g/kg时，双歧杆菌数量极显著性高于其它组别，沙门氏菌数量极显著低于其它组别，添加量为9g/kg与12g/kg相比差异不显著，实验结果相差极小。与对照组相比，枯草芽孢杆菌添加量为1×1011cfu/kg和1×1012cfu/kg时双歧杆菌数量极显著性提高，沙门氏菌数量极显著降低，双歧杆菌数量呈增长趋势，沙门氏菌呈下降趋势。添加量为1×1011cfu/kg与1×1012cfu/kg相比差异不显著，实验结果相差极小。根据实验结果分别选择丁酸钠最佳添加量为1.5g/kg，果寡糖最佳添加量为9g/kg，枯草芽孢杆菌最佳添加量为1×1011cfu/kg。
表14果寡糖、胍基乙酸和葡萄糖氧化酶不同添加量对肠道双歧杆菌和沙门氏菌数量的影响
由表14可知，与对照组相比，甘露寡糖添加量为2g/kg和2.5g/kg时双歧杆菌数量极显著性高于其它组别，沙门氏菌数量极显著低于其它组别，双歧杆菌数量呈增长趋势，沙门氏菌呈下降趋势，添加量为2g/kg与2.5g/kg相比差异不显著，实验结果相差极小。与对照组相比，胍基乙酸添加量为0.8g/kg和1g/kg时双歧杆菌数量极显著性提高，沙门氏菌数量极显著降低，双歧杆菌数量呈增长趋势，沙门氏菌呈下降趋势，添加量为0.8g/kg与1g/kg相比差异不显著，实验结果相差极小。与对照组相比，葡萄糖氧化酶添加量为800U/kg和1000U/kg时双歧杆菌数量极显著性提高，沙门氏菌数量极显著降低，双歧杆菌数量呈增长趋势，沙门氏菌呈下降趋势。添加量为800U/kg与1000U/kg相比差异不显著，实验结果相差极小。根据实验结果分别选择甘露寡糖的最佳添加量为2g/kg，胍基乙酸的最佳添加量为0.8g/kg，葡萄糖氧化酶的最佳添加量为800U/kg。
表15甘露聚糖酶、植酸酶和木聚糖酶不同添加量对肠道双歧杆菌和沙门氏菌数量的影响
由表15可知，与对照组相比，甘露聚糖酶添加量为15000U/kg和20000U/kg时双歧杆菌数量极显著性提高，沙门氏菌数量极显著降低，双歧杆菌数量呈增长趋势，沙门氏菌呈下降趋势，添加量为15000U/kg与20000U/kg相比差异不显著，实验结果相差极小。对照组相比，植酸酶添加量为11000U/kg和16000U/kg时双歧杆菌数量极显著性提高，沙门氏菌数量极显著降低，双歧杆菌数量呈增长趋势，沙门氏菌呈下降趋势，添加量为11000U/kg与16000U/kg相比差异不显著，实验结果相差极小。与对照组相比，木聚糖酶添加量为2000U/kg和2500U/kg时双歧杆菌数量极显著性提高，沙门氏菌数量极显著降低，双歧杆菌数量呈增长趋势，沙门氏菌呈下降趋势，添加量为2000U/kg与2500U/kg相比差异不显著，实验结果相差极小。根据实验结果分别选择甘露聚糖酶的最佳添加量为15000U/kg，植酸酶的最佳添加量为11000U/kg，木聚糖酶的最佳添加量为2000U/kg。
表16丁酸钠或甘露寡糖与其他添加剂两两复配的组合对肠道抗氧化能力的影响
| 处理方式 | 双歧杆菌 | 沙门氏菌 |
| 无添加剂 | 7.012±0.011M | 6.249±0.008A |
| 丁酸钠+甘露寡糖 | 8.496±0.006C | 4.406±0.006J |
| 丁酸钠+胍基乙酸 | 7.576±0.020L | 5.217±0.008B |
| 丁酸钠+果寡糖 | 8.408±0.004E | 4.451±0.005H |
| 丁酸钠+甘露聚糖酶 | 8.485±0.005Db | 4.43±0.006Ia |
| 丁酸钠+葡萄糖氧化酶 | 8.346±0.008F | 4.508±0.005G |
| 丁酸钠+枯草芽孢杆菌 | 8.494±0.005CDa | 4.42±0.006Ib |
| 丁酸钠+木聚糖酶 | 8.119±0.013K | 4.82±0.019C |
| 丁酸钠+植酸酶 | 8.241±0.008H | 4.691±0.021F |
| 甘露寡糖+胍基乙酸 | 8.182±0.012J | 4.739±0.016D |
| 甘露寡糖+果寡糖 | 8.51±0.004B | 4.318±0.010Kd |
| 甘露寡糖+甘露聚糖酶 | 8.55±0.005A | 4.209±0.009L |
| 甘露寡糖+葡萄糖氧化酶 | 8.314±0.008G | 4.542±0.005G |
| 甘露寡糖+枯草芽孢杆菌 | 8.507±0.004B | 4.329±0.009Kc |
| 甘露寡糖+木聚糖酶 | 8.209±0.008I | 4.719±0.019E |
| 甘露寡糖+植酸酶 | 8.319±0.009G | 4.515±0.006G |
| P | ＜0.01 | ＜0.01 |
其中，丁酸钠添加量为1.5g/kg，甘露寡糖添加量为2g/kg，枯草芽孢杆菌添加量为1×1011cfu/kg，果寡糖添加量为9g/kg，胍基乙酸添加量为0.8g/kg，葡萄糖氧化酶添加量为800U/kg，甘露聚糖酶添加量为15000U/kg，植酸酶添加量为11000U/kg，木聚糖酶添加量为2000U/kg。
由表16可知，甘露寡糖+甘露聚糖酶组双歧杆菌数量最高，沙门氏菌数量最低，与对照组相比，双歧杆菌数量极显著性提高，沙门氏菌数量极显著降低，双歧杆菌数量呈增长趋势，沙门氏菌呈下降趋势。与对照组相比，甘露寡糖+枯草芽孢杆菌和甘露寡糖+果寡糖组的双歧杆菌数量极显著性提高，沙门氏菌数量极显著降低，甘露聚糖+甘露聚糖酶组的双歧杆菌数量极显著低于甘露聚糖+甘露聚糖酶组，沙门氏菌数量极显著高于甘露聚糖+甘露聚糖酶组。根据实验结果分别选择甘露聚糖+甘露聚糖酶组、甘露寡糖+枯草芽孢杆菌组、甘露寡糖+果寡糖组与其他替抗添加剂进行三种添加剂复配组合。
表17甘露寡糖+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+甘露聚糖酶或甘露寡糖+果寡糖与其他添加剂复配的组合对双歧杆菌和沙门氏菌数量的影响
| 处理方式 | 双歧杆菌 | 沙门氏菌 |
| 无添加剂 | 6.983±0.013H | 5.981±0.010A |
| 甘露寡糖+枯草芽孢杆菌 | 8.482±0.005Fj | 4.214±0.007C |
| 甘露寡糖+甘露聚糖酶 | 8.425±0.005G | 4.372±0.005B |
| 甘露寡糖+枯草芽孢杆菌+丁酸钠 | 8.497±0.007F | 4.118±0.012D |
| 甘露寡糖+枯草芽孢杆菌+葡萄糖氧化酶 | 8.525±0.006D | 4.059±0.012EFbc |
| 甘露寡糖+枯草芽孢杆菌+木聚糖酶 | 8.534±0.006CDf | 4.014±0.013FGd |
| 甘露寡糖+枯草芽孢杆菌+植酸酶 | 8.555±0.004Ce | 3.978±0.013GH |
| 甘露寡糖+甘露聚糖酶+丁酸钠 | 8.656±0.004B | 3.921±0.018I |
| 甘露寡糖+甘露聚糖酶+葡萄糖氧化酶 | 8.501±0.006EFhi | 4.104±0.011DEa |
| 甘露寡糖+甘露聚糖酶+枯草芽孢杆菌 | 8.682±0.004Aa | 3.817±0.017Jf |
| 甘露寡糖+甘露聚糖酶+木聚糖酶 | 8.537±0.004CDf | 4.041±0.014F |
| 甘露寡糖+甘露聚糖酶+植酸酶 | 8.522±0.005DEg | 4.06±0.014EFbc |
| 甘露寡糖+果寡糖+丁酸钠 | 8.555±0.004Ce | 3.981±0.013GH |
| 甘露寡糖+果寡糖+葡萄糖氧化酶 | 8.534±0.005CDf | 4.015±0.014FGd |
| 甘露寡糖+果寡糖+枯草芽孢杆菌 | 8.665±0.003ABbc | 3.855±0.011Je |
| 甘露寡糖+果寡糖+木聚糖酶 | 8.496±0.004F | 4.13±0.009D |
| 甘露寡糖+果寡糖+植酸酶 | 8.503±0.005EFhi | 4.099±0.011DEa |
| 甘露寡糖+果寡糖+甘露聚糖酶 | 8.644±0.003Bd | 3.949±0.011HI |
| P | ＜0.01 | ＜0.01 |
由表17可知，甘露寡糖+果寡糖+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+甘露聚糖酶+枯草芽孢杆菌组双歧杆菌数量最高，沙门氏菌数量最低，与对照组、甘露寡糖+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+甘露聚糖酶组相比，甘露寡糖+果寡糖+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+甘露聚糖酶+枯草芽孢杆菌组的双歧杆菌数量和沙门氏菌数量差异极显著。与对照组、甘露寡糖+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+甘露聚糖酶组相比，甘露寡糖+甘露聚糖酶+丁酸钠、甘露寡糖+果寡糖+甘露聚糖酶组双歧杆菌数量和沙门氏菌数量差异极显著，甘露寡糖+果寡糖+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+甘露聚糖酶+枯草芽孢杆菌组的双歧杆菌数量极显著低于甘露寡糖+果寡糖+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+甘露聚糖酶+枯草芽孢杆菌组，沙门氏菌数量极显著高于甘露寡糖+果寡糖+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+甘露聚糖酶+枯草芽孢杆菌组。与对照组、甘露寡糖+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+甘露聚糖酶组相比，甘露寡糖+枯草芽孢杆菌+木聚糖酶、甘露寡糖+枯草芽孢杆菌+植酸酶、甘露寡糖+果寡糖+丁酸钠、甘露寡糖+果寡糖+葡萄糖氧化酶组的双歧杆菌数量差异极显著。甘露寡糖+甘露聚糖酶+丁酸钠、甘露寡糖+果寡糖+甘露聚糖酶组的双歧杆菌数量极显著低于甘露寡糖+甘露聚糖酶+丁酸钠、甘露寡糖+果寡糖+甘露聚糖酶组。甘露寡糖+果寡糖+丁酸钠和甘露寡糖+枯草芽孢杆菌+植酸酶组沙门氏菌数量极显著低于甘露寡糖+枯草芽孢杆菌+木聚糖酶组。
根据实验结果分别选择甘露寡糖+果寡糖+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+甘露聚糖酶+枯草芽孢杆菌、甘露寡糖+甘露聚糖酶+丁酸钠、甘露寡糖+果寡糖+甘露聚糖酶、甘露寡糖+果寡糖+丁酸钠、甘露寡糖+枯草芽孢杆菌+植酸酶组六种替抗添加剂复配组合。其中，丁酸钠的最佳添加量为1.5g/kg，甘露寡的最佳糖添加量为2g/kg，枯草芽孢杆菌的最佳添加量为1×1011cfu/kg，果寡糖的最佳添加量为9g/kg，胍基乙酸的最佳添加量为0.8g/kg，葡萄糖氧化酶的最佳添加量为800U/kg，甘露聚糖酶的最佳添加量为15000U/kg，植酸酶的最佳添加量为11000U/kg，木聚糖酶的最佳添加量为2000U/kg。
实施例2
饲养验证试验
1.试验准备
(1)试验动物及处理
前期选取2400只1日龄AA白羽肉鸡，随机分为8组，每组300只(50只×6次平行试验)。第I组饲喂基础日粮+恩拉霉素抗生素；第II组饲喂基础日粮；第III组饲喂基础日粮+0.2％甘露寡糖+0.03％甘露聚糖酶+0.15％丁酸钠；第IV组饲喂基础日粮+0.2％甘露寡糖+0.03％甘露聚糖酶+0.05％枯草芽孢杆菌；第V组饲喂基础日粮+0.2％甘露寡糖+0.9％果寡糖+0.15％丁酸钠；第VI组饲喂基础日粮+0.2％甘露寡糖+0.9％果寡糖+0.05％枯草芽孢杆菌；第VII组饲喂基础日粮+0.2％甘露寡糖+0.9％果寡糖+0.03％甘露聚糖酶；第VIII组饲喂基础日粮+0.2％甘露寡糖+0.05％枯草芽孢杆菌+0.004％植酸酶；其中，％表示添加剂占基础日粮的质量百分比例。
选取768只21日龄AA白羽肉鸡，随机分为8组，每组96只(16只×6次平行试验)。第I组饲喂基础日粮+恩拉霉素抗生素；第II组饲喂基础日粮；第III组饲喂基础日粮+0.2％甘露寡糖+0.03％甘露聚糖酶+0.15％丁酸钠；第IV组饲喂基础日粮+0.2％甘露寡糖+0.03％甘露聚糖酶+0.05％枯草芽孢杆菌；第V组饲喂基础日粮+0.2％甘露寡糖+0.9％果寡糖+0.15％丁酸钠；第VI组饲喂基础日粮+0.2％甘露寡糖+0.9％果寡糖+0.05％枯草芽孢杆菌；第VII组饲喂基础日粮+0.2％甘露寡糖+0.9％果寡糖+0.03％甘露聚糖酶；第VIII组饲喂基础日粮+0.2％甘露寡糖+0.05％枯草芽孢杆菌+0.004％植酸酶；其中，％表示添加剂占基础日粮的质量百分比例。
鸡舍采用笼养，每个试验组每个重复单独空间饲喂，自由采食、饮水，常规免疫，按常规的饲养管理方式进行饲养管理。其中，基础日粮的组成和营养成分如表18所示：
表18基础日粮组成及营养成分
| 原料 | 试验第1～21d | 试验第22～42d |
| 玉米 | 45.00 | 44.30 |
| 小麦 | 15.00 | 14.70 |
| 膨化豆粕/46％ | 23.50 | 22.00 |
| 棉籽粕 | 5.00 | 5.00 |
| 玉米蛋白粉 | 2.50 | 1.00 |
| 水解羽毛粉 | 1.50 | 1.00 |
| 磷酸氢钙/16.5％ | 0.80 | 0.60 |
| 石粉 | 1.70 | 1.70 |
| 膨润土 | 0.50 | 0.50 |
| 豆油 | 2.20 | 7.00 |
| 氯化钠 | 0.25 | 0.25 |
| 70赖氨酸 | 0.65 | 0.62 |
| 蛋氨酸 | 0.25 | 0.23 |
| 苏氨酸 | 0.15 | 0.10 |
| 预混料 | 1.00 | 1.00 |
| 合计 | 100.00 | 100.00 |
| 营养水平 | ||
| ME，kcal/kg | 2900 | 3200 |
| CP/％ | 22.00 | 20.00 |
| 钙/％ | 0.98 | 0.88 |
| 总磷/％ | 0.76 | 0.65 |
| 赖氨酸/％ | 1.41 | 1.37 |
| 蛋氨酸/％ | 0.56 | 0.51 |
| 苏氨酸/％ | 0.91 | 0.80 |
其中，所述预混料为每千克日粮提供：维生素A 9050IU；维生素D3 1950IU；维生素E 26IU；维生素K3 5.0mg；维生素B1 2.6mg；维生素B2 8.0mg；泛酸15.0mg；维生素B6 3.0mg；维生素B12 0.02mg；烟酸35mg；氯化胆碱500mg；生物素0.20mg；叶酸1.2mg；Mn 60mg；Fe80mg；Zn 60mg；Cu 8.5mg；I 0.27mg；Se 0.20mg。
(2)生长性能
分别于试验第1天、试验第21天和第42天，以重复为单位对试验鸡进行空腹(提前八h断水断料)称重，准确记录各阶段采食量。计算第1～21日龄、22～42日龄及1～42日龄的平均日增重、平均日采食量、料重比和死淘率，结果如表19～表20所示：
表19复方替抗饲料替抗添加剂对21日龄白羽肉鸡生长性能的影响
| 组别 | 平均日增重(g) | 料重比 | 死淘率(％) |
| 第Ⅰ组 | 37.68±0.11D | 1.243±0.004B | 0.67 |
| 第Ⅱ组 | 35.52±0.15E | 1.287±0.005A | 0.33 |
| 第Ⅲ组 | 44.67±0.07A | 1.207±0.004CDac | 0.33 |
| 第Ⅳ组 | 43.8±0.03B | 1.217±0.002Ca | 0.33 |
| 第Ⅴ组 | 44.84±0.08A | 1.196±0.003DEd | 0 |
| 第Ⅵ组 | 43.78±0.05B | 1.211±0.002Ca | 0 |
| 第Ⅶ组 | 43±0.06Ca | 1.206±0.001CDbc | 0 |
| 第Ⅷ组 | 42.67±0.09Cb | 1.19±0.002E | 0 |
| P | ＜0.01 | ＜0.01 |
由表19可知，与第I组相比，第Ⅲ组、第Ⅴ组的平均日增重极显著大于基础日粮组(P<0.01)，第Ⅳ组和第Ⅵ组与第I组相比，平均日增重极显著大于基础日粮组(P<0.01)，与第Ⅲ组、第Ⅴ组相比平均日增重极显著小于第Ⅲ、Ⅴ组(P<0.01)。表明，基础日粮中添加不同的添加剂可提高平均日增重，第Ⅲ、Ⅴ组效果最好，其次是第Ⅳ和Ⅵ组。
与第I组相比，第Ⅴ组和第Ⅷ组料重比极显著小于基础日粮组(P<0.01)，第Ⅲ组和第Ⅶ组与第I组相比，料重比极显著小于基础日粮组(P<0.01)，与第Ⅴ组相比料重比显著大于第Ⅴ组。表明，基础日粮中添加不同的添加剂可降低料重比，第Ⅴ组和第Ⅷ组效果最好，其次是第Ⅲ组和第Ⅶ组。
第Ⅰ组死淘率为0.67％，第Ⅱ组、第Ⅲ组、第Ⅳ组死淘率都为0.33％，第Ⅴ组、第Ⅵ组、第Ⅶ组、第Ⅷ组死淘率为0％。
表20复方替抗饲料替抗添加剂对42日龄白羽肉鸡生长性能的影响
/>
由表20可知，与第I组相比，第Ⅶ组的平均日增重极显著大于基础日粮组(第Ⅱ组)(P<0.01)，第Ⅳ组和第Ⅴ组与第I组相比，平均日增重极显著大于基础日粮组(P<0.01)，与第Ⅶ组相比平均日增重极显著小于第Ⅶ组(P<0.01)，第Ⅳ组和第Ⅴ组之间存在显著性差异，第Ⅴ组平均日增重显著高于第Ⅳ组。第Ⅷ组和第Ⅲ组与第I组相比，平均日增重极显著大于基础日粮组(P<0.01)，与第Ⅳ和Ⅴ组相比平均日增重极显著小于第Ⅳ和Ⅴ组，第Ⅷ和Ⅲ组之间存在显著性差异，第Ⅷ组平均日增重显著高于第Ⅲ组。表明，基础日粮中添加不同的添加剂可提高平均日增重，第Ⅶ组效果最好，其次是第Ⅳ和Ⅴ组。
与第I组相比，第Ⅶ组料重比极显著小于基础日粮组(P<0.01)，第Ⅷ组与第I组相比，料重比极显著小于基础日粮组(P<0.01)，与第Ⅶ组相比料重比显著大于第Ⅶ组。第Ⅵ组与第I组相比，料重比极显著小于基础日粮组(P<0.01)，与第Ⅷ组相比料重比显著大于第Ⅷ组。表明，基础日粮中添加不同的添加剂可降低料重比，第Ⅶ组效果最好，其次是第Ⅶ组和第Ⅵ组。
第Ⅰ组死淘率为2.08％，第Ⅱ组死淘率为3.12％，第Ⅲ组死淘率为1.04％，第Ⅳ组死淘率都为0％，第Ⅴ组、第Ⅵ组死淘率为2.08％，第Ⅶ组、第Ⅷ组死淘率为0.14％。
(3)饲料成本及经济效益分析
如表21所示，根据21d和42d每只鸡均增重和毛鸡价格计算出每只肉鸡增重价格，21d和42d每只鸡均采食量和饲料及添加剂价格计算出21d和42d每只鸡饲料成本。21d经济效益＝每只肉鸡增重价格-21d每只鸡饲料成本，42d经济效益＝每只肉鸡增重价格-42d每只鸡饲料成本，复方替抗饲料替抗添加剂成本及经济效益分析结果如表21所示。
表21复方替抗饲料替抗添加剂成本及经济效益分析
/>
由表21可知，21d第Ⅲ组、第Ⅳ组和第Ⅷ组经济效益最高，分别为2.42元、2.43元和2.53元，第Ⅱ组的经济效益最低为1.89元。42d第Ⅳ组、第Ⅶ组和第Ⅷ组经济效益最高，分别为1.75元、1.80元和2.42元，第Ⅰ组的经济效益最低为0.77元。
综上所述，在基础日粮中添加不同的替抗添加剂组合，可以显著提升肉鸡的平均日增重，降低料肉比。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (8)
1.一种猪禽替抗添加剂，其特征在在于，包括甘露寡糖-果寡糖-枯草芽孢杆菌复配猪禽替抗添加剂、甘露寡糖-甘露聚糖酶-枯草芽孢杆菌复配猪禽替抗添加剂、甘露寡糖-甘露聚糖酶-丁酸钠复配猪禽替抗添加剂、甘露寡糖-果寡糖-甘露聚糖酶复配猪禽替抗添加剂、甘露寡糖-果寡糖-丁酸钠复配猪禽替抗添加剂或甘露寡糖-枯草芽孢杆菌-植酸酶复配猪禽替抗添加剂；以饲料为基准，所述丁酸钠的添加量为1.5g/kg；所述果寡糖添加量为9g/kg；所述枯草芽孢杆菌添加量为1×1011cfu/kg；所述甘露寡糖的添加量为2g/kg；所述甘露聚糖酶的添加量为15000U/kg；所述植酸酶的添加量为11000U/kg；当复配猪禽替抗添加剂中不含某猪禽替抗添加剂时其添加量为0。
2.根据权利要求1所述的猪禽替抗添加剂，其特征在于，所述猪禽替抗添加剂的筛选方法，包括以下步骤：
（1）将待选猪禽替抗添加剂、胃蛋白酶溶液和饲料混合，进行第一孵育，得到孵育样品液；
（2）将胃蛋白酶溶液和饲料混合，进行第二孵育，得到孵育对照液；
（3）分别将所述孵育样品液和所述孵育对照液与动物十二指肠肠液混合，进行第三孵育，分别得到消化反应样品肠液和消化反应对照肠液；
（4）测试所述消化反应样品肠液和消化反应对照肠液的消化率，分别得到样品消化率和对照消化率，当所述样品消化率与对照消化率的显著性P<0.05时，所述待选猪禽替抗添加剂为目标猪禽替抗添加剂；所述消化率包括干物质消化率和/或有机物消化率；
步骤（1）和步骤（2）没有时间先后顺序；
所述待选猪禽替抗添加剂的种类包括丁酸钠、胍基乙酸、甘露寡糖、果寡糖、葡萄糖氧化酶、甘露聚糖酶、植酸酶、木聚糖酶和枯草芽孢杆菌中的至少一种；以饲料为基准，所述丁酸钠的添加量为0.1~3g/kg；所述胍基乙酸的添加量为0.3~2g/kg；所述甘露寡糖的添加量为0.3~4.0g/kg；所述果寡糖添加量为1~16g/kg；所述葡萄糖氧化酶的添加量为200~2000U/kg；所述甘露聚糖酶的添加量为2000~25000U/kg；所述植酸酶的添加量为200~20000U/kg；所述木聚糖酶的添加量为500~3000U/kg；所述枯草芽孢杆菌添加量为5×106~5×1014cfu/kg。
3.根据权利要求2所述的猪禽替抗添加剂，其特征在于，所述步骤（3）后还包括：
（5）分别将所述消化反应样品肠液和消化反应对照肠液接种于含革兰氏杆菌的培养基中，进行培养，分别得到样品菌落数和对照菌落数，当所述样品菌落数与对照菌落数的显著性P<0.05时，所述待选猪禽替抗添加剂为目标猪禽替抗添加剂；所述革兰氏杆菌包括革兰氏阳性杆菌和/或革兰氏阴性杆菌；
步骤（4）和步骤（5）没有时间先后顺序。
4.根据权利要求3所述的猪禽替抗添加剂，其特征在于，所述步骤（3）后还包括：
（6）分别测试所述消化反应样品肠液和消化反应对照肠液的自由基清除率，分别得到样品自由基清除率和对照自由基清除率，当所述样品自由基清除率与对照自由基清除率的显著性P<0.05时，所述待选猪禽替抗添加剂为目标猪禽替抗添加剂；所述自由基包括1,1-二苯基-2-苦基肼自由基、4-苄酰氧基-四甲基哌啶氧自由基、16-DOXYL-硬脂酸自由基和氮氧自由基哌啶醇中的一种或几种；
步骤（4）和步骤（6）没有时间先后顺序；
步骤（5）和步骤（6）没有时间先后顺序。
5.根据权利要求2所述的猪禽替抗添加剂，其特征在于，所述动物十二指肠肠液在使用前依次进行生理盐水稀释和离心分离。
6.根据权利要求2所述的猪禽替抗添加剂，其特征在于，所述胃蛋白酶溶液的酶活力与饲料的质量之比为2.0×107~3.0×107U：1kg。
7.根据权利要求2所述的猪禽替抗添加剂，其特征在于，所述第一孵育、第二孵育和第三孵育的温度独立地为20~50℃，时间独立地为1~8h。
8.根据权利要求3所述的猪禽替抗添加剂，其特征在于，所述培养的温度为20~50℃，时间为1~8h。
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