CN116068075B - 基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法，属于中药鉴别方法技术领域。具体包括：将保元汤采用水提取，然后采用***萃取，得到水层和***层。水层采用正丁醇提取、蒸干、加水溶解，然后依次采用水、乙醇洗脱，所得洗脱液干燥后采用甲醇溶解，得到第一供试品溶液；***层干燥后采用乙酸乙酯溶解，得到第二供试品溶液，制备对照品溶液，采用第一供试品溶液鉴别人参、黄芪、甘草；采用第二供试品溶液鉴别肉桂、生姜。实施本发明，可大幅提升鉴别效率。
Description
技术领域
本发明涉及中药鉴别方法技术领域，尤其涉及一种基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法。
背景技术
保元汤出自明孙志宏的《简明医彀》，其记载：“治元气虚弱，精神倦怠，肌肉柔慢，饮食少进，面青㿠白，睡卧宁静，……及有杂症，皆属虚弱，宜服。”处方由人参一钱，黄芪二钱，甘草五分，肉桂二分，加生姜一片组成，具有补气温阳的功效，主治元气不足证，症见倦息乏力，面色㿠白，少气畏寒，不欲饮食等。保元汤中的药材较多，所含化学成分十分复杂，检测难度较高。另外，保元汤中的肉桂用量小，且多含有挥发性组分，而保元汤在制备过程中需要经过水煎煮提取，这也更加提升了检测难度。现有技术（CN112697947B）通过特定的提取工序，有效实现了人参、黄芪、甘草三味药材的测定，但其难以同时测定生姜和肉桂，且该方法斑点不明显，拖尾严重，背景颜色较深。
另一方面，薄层色谱法是目前国内外药典中收载最多的鉴别与有关物质检测的方法之一；利用样品中各组成成分的不同物理特性将它们分离，通常是吸附和分配等多种分离机理综合的作用。薄层色谱法是集分离、分析于一体，是分离分析复杂混合物较理想的方法，具有设备简单、操作简便、分离速度快、可以同时分离多个样品、分析成本低等特点。广泛应用于药物分析、有机化合物的分析鉴定、植物药有效部位的分离精制、有机合成等方面，为中药材及饮片、中成药、中药提取物等质量控制奠定了基础。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于，提供一种基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法，其可快速、全面的鉴定保元汤中的各味药材，提升检测效率。且本发明的鉴别方法专属性、稳定性好，耐用性强。
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法，其包括：（1）将保元汤采用水提取，然后采用***萃取，得到水层和***层；
（2）将所述水层采用水饱和正丁醇提取，所得提取液蒸干后加水溶解，并依次采用水、乙醇洗脱，所得洗脱液干燥后采用甲醇溶解，得到第一供试品溶液；
（3）将所述***层干燥后采用乙酸乙酯溶解，得到第二供试品溶液；
（4）分别取肉桂对照药材、生姜对照药材，按照第二供试品溶液的制备方法制备得到肉桂对照药材溶液、生姜对照药材溶液；另取人参对照药材、黄芪对照药材和甘草对照药材，按照第一供试品溶液的制备方法制备得到人参对照药材溶液、黄芪对照药材溶液和甘草对照药材溶液；
（5）吸取第一供试品溶液、人参对照药材溶液、黄芪对照药材溶液、甘草对照药材溶液，点样，展开，显色；
（6）吸取第二供试品溶液、肉桂对照药材溶液，点样，展开，显色；
（7）吸取第二供试品溶液、生姜对照药材溶液，点样，展开，显色。
本发明还公开了一种基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法，其包括：
（1）将保元汤采用水提取，然后采用***萃取，得到水层和***层；
（2）将所述水层采用水饱和正丁醇提取，所得提取液蒸干后加水溶解，并依次采用水、乙醇洗脱，所得洗脱液干燥后采用甲醇溶解，得到第一供试品溶液；
（3）将所述***层干燥后采用乙酸乙酯溶解，得到第二供试品溶液；
（4）分别取肉桂酸对照品、6-姜辣素对照品、人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rg1对照品、黄芪皂苷Ⅰ对照品、黄芪皂苷Ⅱ对照品、甘草苷对照品，分别制成肉桂对照品溶液、生姜对照品溶液、人参对照品溶液、黄芪对照品溶液、甘草对照品溶液；
（5）吸取第一供试品溶液、人参对照品溶液、黄芪对照品溶液、甘草对照品溶液，点样，展开，显色；
（6）吸取第二供试品溶液、肉桂对照品溶液，点样，展开，显色；
（7）吸取第二供试品溶液、生姜对照品溶液，点样，展开，显色。
本发明还公开了一种基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法，其包括：
（1）将保元汤采用水提取，然后采用***萃取，得到水层和***层；
（2）将所述水层采用水饱和正丁醇提取，所得提取液蒸干后加水溶解，并依次采用水、乙醇洗脱，所得洗脱液干燥后采用甲醇溶解，得到第一供试品溶液；
（3）将所述***层干燥后采用乙酸乙酯溶解，得到第二供试品溶液；
（4）分别取肉桂酸对照品、6-姜辣素对照品、人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rg1对照品、黄芪皂苷Ⅰ对照品、黄芪皂苷Ⅱ对照品、甘草苷对照品，分别制成肉桂对照品溶液、生姜对照品溶液、人参对照品溶液、黄芪对照品溶液、甘草对照品溶液；
分别取肉桂对照药材、生姜对照药材，按照第二供试品溶液的制备方法制备得到肉桂对照药材溶液、生姜对照药材溶液；另取人参对照药材、黄芪对照药材和甘草对照药材，按照第一供试品溶液的制备方法制备得到人参对照药材溶液、黄芪对照药材溶液和甘草对照药材溶液；
（5）吸取第一供试品溶液、人参对照品溶液、黄芪对照品溶液、甘草对照品溶液、人参对照药材溶液、黄芪对照药材溶液、甘草对照药材溶液，点样，展开，显色；
（6）吸取第二供试品溶液、肉桂对照药材溶液、肉桂对照品溶液，点样，展开，显色；
（7）吸取第二供试品溶液、生姜对照药材溶液、生姜对照品溶液，点样，展开，显色。
作为上述技术方案的改进，步骤（1）包括：
（1.1）将保元汤采用水超声提取20~40min；其中，保元汤的重量与水的体积之比为（1~2）g：（20~40）mL；
（1.2）将步骤（1.1）得到的提取液采用***萃取2~4次，提取残留为水层，多次***萃取液合并，得到***层；其中，每次萃取所采用***的体积与保元汤的重量之比为（10~20）mL：（1~2）g。
作为上述技术方案的改进，步骤（2）包括：
（2.1）将所述水层采用水饱和正丁醇提取2~4次，合并提取液，并蒸干；其中，每次提取所采用水饱和正丁醇的体积与保元汤的重量之比为（10~20）mL：（1~2）g；
（2.2）将步骤（2.1）蒸干得到的残渣加水溶解，并加入大孔树脂中，依次采用水、30~50vol%乙醇、60~80vol%乙醇洗脱，并收集60~80vol%乙醇洗脱的洗脱液，蒸干；其中，洗脱所采用水的体积与保元汤的重量比为（15~25）mL：（1~2）g，洗脱所采用30~50vol%乙醇的体积与保元汤的重量比为（15~25）mL：（1~2）g，洗脱所采用60~80vol%乙醇的体积与保元汤的重量比为（25~35）mL：（1~2）g；
（2.3）将步骤（2.2）蒸干得到的残渣采用甲醇溶解，得到第一供试品溶液。
作为上述技术方案的改进，步骤（5）中：采用硅胶G薄层板展开，以三氯甲烷、甲醇、水的混合溶液的下层溶液为展开剂，展开后喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱和/或对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
其中，三氯甲烷、甲醇、水的体积比为（14~18）：（6~10）：（1~3）。
作为上述技术方案的改进，步骤（6）中：采用硅胶GF254薄层板展开，以石油醚、正己烷、甲酸乙酯、甲酸的混合溶液为展开剂，展开后在波长为254nm的紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱和/或对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
其中，石油醚、正己烷、甲酸乙酯、甲酸的体积比为（2~4）：（8~10）：（7~10）：（0.1~0.5）。
作为上述技术方案的改进，步骤（7）中：采用硅胶G薄层板展开，以正己烷、乙酸乙酯的混合溶液为展开剂，展开后喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱和/或对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
其中，正己烷、乙酸乙酯的体积比为（8~10）：（3~6）。
作为上述技术方案的改进，步骤（4）包括：
取肉桂酸对照品，加甲醇制成浓度为0.5~1.2mg/mL的溶液，得到肉桂对照品溶液；
取6-姜辣素对照品，加甲醇制成浓度为0.5~1.2mg/mL的溶液，得到生姜对照品溶液；
取人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成三者浓度均为0.8~1.2mg/mL的溶液，得到人参对照品溶液；
取黄芪皂苷Ⅰ对照品、黄芪皂苷Ⅱ对照品，加甲醇制成两者浓度均为0.8~1.2mg/mL的溶液，得到黄芪对照品溶液；
取甘草苷对照品，加甲醇制成浓度为0.8~1.2mg/mL的溶液，得到甘草对照品溶液。
作为上述技术方案的改进，步骤（4）包括：
取肉桂对照药材，加水煮沸20~40min，滤过，滤液采用***萃取2~4次，萃取液合并后蒸干，残渣采用乙酸乙酯溶解，得到肉桂对照药材溶液；
取生姜对照药材，加水煮沸20~40min，滤过，滤液采用***萃取2~4次，萃取液合并后蒸干，残渣采用乙酸乙酯溶解，得到生姜对照药材溶液；
取人参对照药材，加水煮沸20~40min，滤过，滤液采用***萃取2~4次，弃去***萃取液得到水层；水层采用水饱和正丁醇提取2~4次，合并提取液后蒸干，残渣加水溶解，并加入大孔树脂中，依次采用水、30~50vol%乙醇、60~80vol%乙醇洗脱，并收集60~80vol%乙醇洗脱的洗脱液，蒸干，所得残渣加甲醇溶解，得到人参对照药材溶液；
取黄芪对照药材，加水煮沸20~40min，滤过，滤液采用***萃取2~4次，弃去***萃取液得到水层；水层采用水饱和正丁醇提取2~4次，合并提取液后蒸干，残渣加水溶解，并加入大孔树脂中，依次采用水、30~50vol%乙醇、60~80vol%乙醇洗脱，并收集60~80vol%乙醇洗脱的洗脱液，蒸干，所得残渣加甲醇溶解，得到黄芪对照药材溶液；
取甘草对照药材，加水煮沸20~40min，滤过，滤液采用***萃取2~4次，弃去***萃取液得到水层；水层采用水饱和正丁醇提取2~4次，合并提取液后蒸干，残渣加水溶解，并加入大孔树脂中，依次采用水、30~50vol%乙醇、60~80vol%乙醇洗脱，并收集60~80vol%乙醇洗脱的洗脱液，蒸干，所得残渣加甲醇溶解，得到甘草对照药材溶液。
实施本发明，具有如下有益效果：
1、本发明的基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法，通过特定的提取工艺，得到了可用于同时鉴别人参、黄芪、甘草的第一供试品溶液和可用于鉴别生姜、肉桂的第二供试品溶液，大幅提升了检验效率。
2、本发明的鉴别方法整体分离效果好，斑点清晰，专属性强，耐用好，可准确地显示出保元汤中所有药味的特征，为保元汤的质量控制提供了良好的基础。
附图说明
图1为本发明实施例2中人参、黄芪、甘草薄层鉴别方法的专属性考察结果图；其中，1为人参对照品（上：人参皂苷Rb1；中：人参皂苷Re；下：人参皂苷Rg1），2为黄芪对照品（上：黄芪皂苷Ⅰ；下黄芪皂苷Ⅱ），3为甘草对照品，4为人参对照药材，5为黄芪对照药材，6为甘草对照药材，7~9为3批保元汤所制成的供试品溶液Ⅰ，10为保元汤缺人参阴性对照品，11为保元汤缺黄芪阴性对照品，12为保元汤缺甘草阴性对照品。
图2为本发明实施例2中人参、黄芪、甘草薄层鉴别方法的不同点样量的耐用性考察结果图（人参）；其中，1~3为人参对照品，点样量分别为2μL、5μL和8μL；4~6为人参对照药材，点样量分别为2μL、5μL和8μL；7~9为3批保元汤所制成的供试品溶液Ⅰ，点样量分别为2μL、5μL和8μL。
图3为本发明实施例2中人参、黄芪、甘草薄层鉴别方法的不同点样量的耐用性考察结果图（黄芪）；其中，1~3为黄芪对照品，点样量分别为2μL、5μL和8μL；4~6为黄芪对照药材，点样量分别为2μL、5μL和8μL；7~9为3批保元汤所制成的供试品溶液Ⅰ，点样量分别为2μL、5μL和8μL。
图4为本发明实施例2中人参、黄芪、甘草薄层鉴别方法的不同点样量的耐用性考察结果图（甘草）；其中，1~3为甘草对照品，点样量分别为2μL、5μL和8μL；4~6为甘草对照药材，点样量分别为2μL、5μL和8μL；7~9为3批保元汤所制成的供试品溶液Ⅰ，点样量分别为2μL、5μL和8μL。
图5为本发明实施例2中低温条件下人参、黄芪、甘草薄层鉴别结果图；其中，1为人参对照品，2为黄芪对照品，3为甘草对照品，4为人参对照药材，5为黄芪对照药材，6为甘草对照药材，7~9为3批保元汤所制成的供试品溶液Ⅰ，10为保元汤缺人参阴性对照品，11为保元汤缺黄芪阴性对照品，12为保元汤缺甘草阴性对照品。
图6为本发明实施例2中高湿条件下人参、黄芪、甘草薄层鉴别结果图；其中，1为人参对照品，2为黄芪对照品，3为甘草对照品，4为人参对照药材，5为黄芪对照药材，6为甘草对照药材，7~9为3批保元汤所制成的供试品溶液Ⅰ，10为保元汤缺人参阴性对照品，11为保元汤缺黄芪阴性对照品，12为保元汤缺甘草阴性对照品。
图7为本发明实施例2中低湿条件下人参、黄芪、甘草薄层鉴别结果图；其中，1为人参对照品，2为黄芪对照品，3为甘草对照品，4为人参对照药材，5为黄芪对照药材，6为甘草对照药材，7~9为3批保元汤所制成的供试品溶液Ⅰ，10为保元汤缺人参阴性对照品，11为保元汤缺黄芪阴性对照品，12为保元汤缺甘草阴性对照品。
图8为本发明实施例2中采用谱科硅胶G板时人参、黄芪、甘草薄层鉴别结果图；其中，1为人参对照品，2为黄芪对照品，3为甘草对照品，4为人参对照药材，5为黄芪对照药材，6为甘草对照药材，7~9为3批保元汤所制成的供试品溶液Ⅰ，10为保元汤缺人参阴性对照品，11为保元汤缺黄芪阴性对照品，12为保元汤缺甘草阴性对照品。
图9为本发明实施例2中采用默克硅胶G板时人参、黄芪、甘草薄层鉴别结果图；其中，1为人参对照品，2为黄芪对照品，3为甘草对照品，4为人参对照药材，5为黄芪对照药材，6为甘草对照药材，7~9为3批保元汤所制成的供试品溶液Ⅰ，10为保元汤缺人参阴性对照品，11为保元汤缺黄芪阴性对照品，12为保元汤缺甘草阴性对照品。
图10为本发明实施例2中肉桂薄层鉴别方法的专属性考察结果图；其中，1为肉桂对照品，2为肉桂对照药材，3~5为3批保元汤所制成的供试品溶液Ⅱ，6为保元汤缺肉桂阴性对照品。
图11为本发明实施例2中肉桂薄层鉴别方法的不同点样量的耐用性考察结果图；其中，1~3为肉桂对照品，点样量分别为1μL、2μL和3μL；4~6为肉桂对照药材，点样量分别为10μL、15μL和20μL；7~9为3批保元汤所制成的供试品溶液Ⅱ，点样量分别为10μL、15μL和20μL。
图12为本发明实施例2中低温条件下肉桂薄层鉴别结果图；其中，1为肉桂对照品，2为肉桂对照药材，3~5为3批保元汤所制成的供试品溶液Ⅱ，6为保元汤缺肉桂阴性对照品。
图13为本发明实施例2中高湿条件下肉桂薄层鉴别结果图；其中，1为肉桂对照品，2为肉桂对照药材，3~5为3批保元汤所制成的供试品溶液Ⅱ，6为保元汤缺肉桂阴性对照品。
图14为本发明实施例2中低湿条件下肉桂薄层鉴别结果图；其中，1为肉桂对照品，2为肉桂对照药材，3~5为3批保元汤所制成的供试品溶液Ⅱ，6为保元汤缺肉桂阴性对照品。
图15为本发明实施例2中采用海洋硅胶G板时肉桂薄层鉴别结果图；其中，1为肉桂对照品，2为肉桂对照药材，3~5为3批保元汤所制成的供试品溶液Ⅱ，6为保元汤缺肉桂阴性对照品。
图16为本发明实施例2中采用谱科硅胶G板时肉桂薄层鉴别结果图；其中，1为肉桂对照品，2为肉桂对照药材，3~5为3批保元汤所制成的供试品溶液Ⅱ，6为保元汤缺肉桂阴性对照品。
图17为本发明实施例2中生姜薄层鉴别方法的专属性考察结果图；其中，1为生姜对照品，2为生姜对照药材，3~5为3批保元汤所制成的供试品溶液Ⅱ，6为保元汤缺生姜阴性对照品。
图18为本发明实施例2中低温条件下生姜薄层鉴别结果图；其中，1为生姜对照品，2为生姜对照药材，3~5为3批保元汤所制成的供试品溶液Ⅱ，6为保元汤缺生姜阴性对照品。
图19为本发明实施例2中高湿条件下生姜薄层鉴别结果图；其中，1为生姜对照品，2为生姜对照药材，3~5为3批保元汤所制成的供试品溶液Ⅱ，6为保元汤缺生姜阴性对照品。
图20为本发明实施例2中低湿条件下生姜薄层鉴别结果图；其中，1为生姜对照品，2为生姜对照药材，3~5为3批保元汤所制成的供试品溶液Ⅱ，6为保元汤缺生姜阴性对照品。
图21为本发明实施例2中采用海洋硅胶G板时生姜薄层鉴别结果图；其中，1为生姜对照品，2为生姜对照药材，3~5为3批保元汤所制成的供试品溶液Ⅱ，6为保元汤缺生姜阴性对照品。
图22为本发明实施例2中采用谱科硅胶G板时生姜薄层鉴别结果图；其中，1为生姜对照品，2为生姜对照药材，3~5为3批保元汤所制成的供试品溶液Ⅱ，6为保元汤缺生姜阴性对照品。
图23为本发明实施例3中人参、黄芪、甘草薄层鉴别方法的提取方法考察结果图；其中，1为人参对照品，2为黄芪对照品，3为甘草对照品，4~6为供试品溶液A，7~9为供试品溶液B。
图24为本发明对比例1中人参、黄芪、甘草薄层鉴别方法的结果图；其中，1为人参对照品，2为黄芪对照品，3为甘草对照品，4~6为3批保元汤所制成的供试品溶液C；
图25为本发明对比例2中人参、黄芪、甘草薄层鉴别方法的结果图；其中，1为甘草对照品，2~3为供试品溶液D，4~5为供试品溶液E，6~7为供试品溶液Ⅰ，8为人参对照品，9为黄芪对照品；
图26为本发明对比例3中肉桂薄层鉴别方法的结果图；其中，1为肉桂对照品，2~4为3批保元汤所制成的供试品溶液F；
图27为本发明对比例4中生姜薄层鉴别方法的结果图；其中，1为生姜对照品，2~4为3批保元汤所制成的供试品溶液G。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图及具体实施方式对本发明作进一步地详细描述。
作为本发明的第一个方面，本发明提供了一种用于保元汤薄层色谱鉴别的供试品溶液的制备方法，具体包括以下步骤：
S100：将保元汤采用水提取，然后采用***萃取，得到水层和***层；
其中，保元汤可为汤剂、颗粒剂、散剂、胶囊剂、口服液、片剂或丸剂，但不限于此。
具体的，水提取工艺为加热回流提取、超声提取、常温提取、煮沸提取，但不限于此。优选的为超声提取。
优选的，在本发明的一个实施例中，步骤S100包括：
S110：将保元汤采用水超声提取20~40min；
其中，保元汤的重量与水的体积之比为（1~2）g：（20~40）mL；示例性的为1g：20mL、1.5g：30mL、1.5g：25mL或1.5g：35mL，但不限于此。优选的为1.5g:30mL。
S120：将步骤S110得到的提取液采用***萃取2~4次，提取残留为水层，多次***萃取液合并，得到***层；
其中，每次提取所采用***的体积与保元汤的重量之比为（10~20）mL：（1~2）g。示例性的为10mL：1.2g、12mL：1.5g、15mL：1.8g或20mL：1.5g，但不限于此。优选的为15mL：1.5g。
S200：将水层采用水饱和正丁醇提取，所得提取液蒸干后加水溶解，并依次采用水、乙醇洗脱，所得洗脱液干燥后采用甲醇溶解，得到第一供试品溶液；
其中，提取工艺可为加热回流提取、超声提取、常温提取、煮沸提取，但不限于此。洗脱可在大孔树脂中进行，但不限于此。
优选的，在本发明的一个实施例之中，步骤S200包括：
S210：将水层采用水饱和正丁醇提取2~4次，合并提取液，并蒸干；
其中，每次提取所采用水饱和正丁醇的体积与保元汤的重量之比为（10~20）mL：（1~2）g，示例性的为10mL：1.2g、15mL：1.5g、18mL：1.6g或20mL：1.8g，但不限于此。优选的为15mL：1.5g。
S220：将步骤S210蒸干得到的残渣加水溶解，并加入大孔树脂中，依次采用水、30~50vol%乙醇、60~80vol%乙醇洗脱，并收集60~80vol%乙醇洗脱的洗脱液，蒸干；
其中，大孔树脂可选用D101大孔树脂，但不限于此。洗脱所采用溶液依次为水、30~50vol%乙醇、60~80vol%乙醇，优选的为水、40%乙醇和70%乙醇。
洗脱所采用水的体积与保元汤的重量比为（15~25）mL：（1~2）g，示例性的为18mL：1.2g、20mL：1.5g、24mL：1.9g，但不限于此。优选的为20mL：1.5g。
洗脱所采用30~50vol%乙醇的体积与保元汤的重量比为（15~25）mL：（1~2）g，示例性的为18mL：1.2g、20mL：1.5g、24mL：1.9g，但不限于此。优选的为20mL：1.5g。
洗脱所采用60~80vol%乙醇的体积与保元汤的重量比为（25~35）mL：（1~2）g；示例性的为28mL：1.2g、30mL：1.5g、34mL：1.9g，但不限于此。优选的为30mL：1.5g。
S230：将步骤S220蒸干得到的残渣采用甲醇溶解，得到第一供试品溶液。
具体的，溶解所采用的甲醇的体积浓度为50~90%，示例性的为55%、60%、75%、80%或85%，优选的为80%。
S300：将***层干燥后采用乙酸乙酯溶解，得到第二供试品溶液；
具体的，将***层挥干，加入乙酸乙酯溶解，即得。
需要说明的是，本发明中步骤S200、S300不分先后，本领域技术人员可先实施步骤S200，再实施步骤S300；亦可先实施步骤S300，再实施步骤S200。
基于上述制备方法得到的第一供试品溶液可用于人参、黄芪、甘草的鉴别，第二供试品溶液可用于肉桂、生姜的鉴别，大幅提升了检测效率。
作为本发明的第二个方面，本发明提供了一种基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法。基于其所采用的对照品的不同，具体可分为三种方案，一种是单独以对照品进行对照，另一种是以对照药材进行对照，最后一种是以对照品和对照药材同时进行对照。下述内容以对照品、对照药材同时对照的技术方案进行详尽说明。
具体的，鉴别方法包括以下步骤：
S1：制备供试品溶液；
具体制备步骤如S100~S300所示。
S2：制备对照品溶液、对照药材溶液；
具体的，对照品溶液包括肉桂对照品溶液、生姜对照品溶液、人参对照品溶液、黄芪对照品溶液、甘草对照品溶液，其制备方法为：
分别取肉桂酸对照品、6-姜辣素对照品、人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rg1对照品、黄芪皂苷Ⅰ对照品、黄芪皂苷Ⅱ对照品、甘草苷对照品，分别制成肉桂对照品溶液、生姜对照品溶液、人参对照品溶液、黄芪对照品溶液、甘草对照品溶液；
具体的，在本发明的一个实施例中，各对照品溶液的具体制备方法为：
取肉桂酸对照品，加甲醇制成浓度为0.5~1.2mg/mL的溶液，得到肉桂对照品溶液；
取6-姜辣素对照品，加甲醇制成浓度为0.5~1.2mg/mL的溶液，得到生姜对照品溶液；
取人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成三者浓度均为0.8~1.2mg/mL的溶液，得到人参对照品溶液；
取黄芪皂苷Ⅰ对照品、黄芪皂苷Ⅱ对照品，加甲醇制成两者浓度均为0.8~1.2mg/mL的溶液，得到黄芪对照品溶液；
取甘草苷对照品，加甲醇制成浓度为0.8~1.2mg/mL的溶液，得到甘草对照品溶液。
具体的，对照药材溶液包括肉桂对照药材溶液、生姜对照药材溶液、人参对照药材溶液、黄芪对照药材溶液和甘草对照药材溶液；其制备方法为：
分别取肉桂对照药材、生姜对照药材，按照第二供试品溶液的制备方法制备得到肉桂对照药材溶液、生姜对照药材溶液；另取人参对照药材、黄芪对照药材和甘草对照药材，按照第一供试品溶液的制备方法制备得到人参对照药材溶液、黄芪对照药材溶液和甘草对照药材溶液；
优选的，在本发明的一个实施例之中，各对照药材溶液的制备方法分别为：
取肉桂对照药材，加水煮沸20~40min，滤过，滤液采用***萃取2~4次，提取液合并后蒸干，残渣采用乙酸乙酯溶解，得到肉桂对照药材溶液；
取生姜对照药材，加水煮沸20~40min，滤过，滤液采用***萃取2~4次，提取液合并后蒸干，残渣采用乙酸乙酯溶解，得到生姜对照药材溶液；
取人参对照药材，加水煮沸20~40min，滤过，滤液采用***萃取2~4次，弃去***萃取液得到水层；水层采用水饱和正丁醇提取2~4次，合并提取液后蒸干，残渣加水溶解，并加入大孔树脂中，依次采用水、30~50vol%乙醇、60~80vol%乙醇洗脱，并收集60~80vol%乙醇洗脱的洗脱液，蒸干，所得残渣加甲醇溶解，得到人参对照药材溶液；
取黄芪对照药材，加水煮沸20~40min，滤过，滤液采用***萃取2~4次，弃去***萃取液得到水层；水层采用水饱和正丁醇提取2~4次，合并提取液后蒸干，残渣加水溶解，并加入大孔树脂中，依次采用水、30~50vol%乙醇、60~80vol%乙醇洗脱，并收集60~80vol%乙醇洗脱的洗脱液，蒸干，所得残渣加甲醇溶解，得到黄芪对照药材溶液；
取甘草对照药材，加水煮沸20~40min，滤过，滤液采用***萃取2~4次，弃去***萃取液得到水层；水层采用水饱和正丁醇提取2~4次，合并提取液后蒸干，残渣加水溶解，并加入大孔树脂中，依次采用水、30~50vol%乙醇、60~80vol%乙醇洗脱，并收集60~80vol%乙醇洗脱的洗脱液，蒸干，所得残渣加甲醇溶解，得到甘草对照药材溶液。
需要说明的是，本发明中的S1、S2不分先后。本领域技术人员可先实施S1，再实施S2，也可先实施S2，再实施S1。
S3：吸取第一供试品溶液、人参对照品溶液、黄芪对照品溶液、甘草对照品溶液、人参对照药材溶液、黄芪对照药材溶液、甘草对照药材溶液，点样，展开，显色；
具体的，采用硅胶G薄层板展开，以三氯甲烷、甲醇、水的混合溶液的下层溶液为展开剂，展开后喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
其中，展开剂中三氯甲烷、甲醇、水的体积比为（14~18）：（6~10）：（1~3），示例性的为14:7:3、15:8:2、16:9:1、18:8:2，但不限于此。优选的为16:7:2。
其中，第一供试品溶液的吸取量为2~8μL，各对照品溶液的吸取量为2~8μL，各对照药材溶液的吸取量为2~8μL。
需要说明的是，当仅采用对照品溶液进行对照时，在吸取步骤中仅吸取第一供试品溶液、人参对照品溶液、黄芪对照品溶液、甘草对照品溶液即可，其余步骤均与上述相同。相应的，当仅采用对照药材溶液进行对照时，在吸取步骤中仅吸取第一供试品溶液、人参对照药材溶液、黄芪对照药材溶液、甘草对照药材溶液即可，其余步骤均与上述相同。
S4：吸取第二供试品溶液、肉桂对照药材溶液、肉桂对照品溶液，点样，展开，显色；
具体的，采用硅胶GF254薄层板展开，以石油醚、正己烷、甲酸乙酯、甲酸的混合溶液为展开剂，展开后在波长为254nm的紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
其中，石油醚、正己烷、甲酸乙酯、甲酸的体积比为（2~4）：（8~10）：（7~10）：（0.1~0.5）。示例性的为2:9:7:0.2、3:8:9:0.3、3:10:8:0.4，但不限于此。优选的为3:9:8:0.3。
其中，第二供试品溶液的吸取量为10~20μL，对照品溶液的吸取量为1~4μL，对照药材溶液的吸取量为10~20μL。
需要说明的是，当仅采用对照品溶液进行对照时，在吸取步骤中仅吸取第二供试品溶液、肉桂对照品溶液即可，其余步骤均与上述相同。相应的，当仅采用对照药材溶液进行对照时，在吸取步骤中仅吸取第二供试品溶液、肉桂对照药材溶液即可，其余步骤均与上述相同。
S5：吸取第二供试品溶液、生姜对照药材溶液、生姜对照品溶液，点样，展开，显色；
具体的，采用硅胶G薄层板展开，以正己烷、乙酸乙酯的混合溶液为展开剂，展开后喷以香草醛硫酸溶液，加热至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱和/或对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
其中，正己烷、乙酸乙酯的体积比为（8~10）：（3~6）；示例性的为，8:4、9:5、10：4，但不限于此；优选的为9:5。
其中，第二供试品溶液的吸取量为10~20μL，对照品溶液的吸取量为1~4μL，对照药材溶液的吸取量为10~20μL。
需要说明的是，当仅采用对照品溶液进行对照时，在吸取步骤中仅吸取第二供试品溶液、生姜对照品溶液即可，其余步骤均与上述相同。相应的，当仅采用对照药材溶液进行对照时，在吸取步骤中仅吸取第二供试品溶液、生姜对照药材溶液即可，其余步骤均与上述相同。
需要说明的是，步骤S3、S4、S5不分先后，本领域技术人员可按照任意顺序实施。
下面以具体实施例对本发明进行进一步说明：
实施例1 鉴别方法的建立
1、供试品溶液的制备：
取保元汤冻干粉1.5g，加水30ml，超声处理（功率500W，频率40kHz）30分钟，用***萃取3次，每次15ml，合并***液，挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液Ⅱ。取经***萃取后的水层溶液，再用水饱和正丁醇提取3次，每次15ml，合并水饱和正丁醇溶液，蒸干，残渣加水5ml使溶解，加在D101大孔树脂（内径1.5cm，柱高15cm），用20ml水洗脱，弃去洗脱液，再用20ml40%乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用30ml70%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加80%甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液Ⅰ；
2、对照品、对照药材溶液的制备：
取肉桂对照药材1.0g，加水50ml，煮沸30分钟，滤过，滤液蒸干至20ml，用***萃取3次，每次15ml，合并***液，挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为肉桂对照药材溶液；另取肉桂酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为肉桂对照品溶液。
取生姜对照药材1.0g，加水50ml，煮沸30分钟，滤过，滤液蒸干至20ml，用***萃取3次，每次15ml，合并***液，挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为生姜对照药材溶液；取6-姜辣素对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为生姜对照品溶液。
分别取人参、黄芪、甘草对照药材各1.0g，分别按照下述步骤操作：加水50ml，煮沸30分钟，滤过，滤液蒸干至20ml，用***萃取3次，每次15ml，弃去***液，再用水饱和正丁醇提取3次，每次15ml，合并水饱和正丁醇溶液，蒸干，残渣加水5ml使溶解，加在D101大孔树脂（内径1.5cm，柱高15cm），用20ml水洗脱，弃去洗脱液，再用20ml40%乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用30ml70%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加80%甲醇2ml使溶解，得到人参对照药材溶液、黄芪对照药材溶液和甘草对照药材溶液。
取人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rg1对照品，加80%甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作为人参对照品溶液。
取黄芪皂苷Ⅰ对照品、黄芪皂苷Ⅱ对照品，加80%甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作为黄芪对照品溶液。
取甘草苷对照品，加80%甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为甘草对照品溶液。
3、鉴别方法：
（1）人参、黄芪、甘草的鉴别
吸取人参对照品溶液5μL、黄芪对照品溶液5μL，甘草对照品溶液5μL、人参对照药材溶液5μL、黄芪对照药材溶液5μL、甘草对照药材溶液5μL、供试品溶液Ⅰ 5μL、分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比16:7:2的三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点清晰，置日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
（2）肉桂的鉴别
吸取肉桂对照品溶液2μL、肉桂对照药材溶液20μL、供试品溶液Ⅱ 20μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比3:9:8:0.3的石油醚-正己烷-甲酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同荧光斑点。
（3）生姜的鉴别
吸取生姜对照品溶液2μL、生姜对照药材溶液20μL、供试品溶液Ⅱ 20μL，分别点于同一硅胶G薄层板，以体积比9:5的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点清晰，置日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例2 方法学验证
一、人参、黄芪、甘草薄层鉴别的方法学考察
（一）专属性考察
1、分别取保元汤缺人参阴性样品、保元汤缺黄芪阴性样品、保元汤缺甘草阴性样品各1.5g，按实施例1中供试品溶液Ⅰ制备方法制成保元汤缺人参阴性对照品溶液、保元汤缺黄芪阴性对照品溶液、保元汤缺甘草阴性对照品溶液。
2、吸取人参对照品溶液5μL、黄芪对照品溶液5μL，甘草对照品溶液5μL、人参对照药材溶液各5μL、黄芪对照药材溶液5μL、甘草对照药材溶液5μL、供试品溶液Ⅰ 5μL、保元汤缺人参阴性对照品溶液 5μL、保元汤缺黄芪阴性对照品溶液5μL、保元汤缺甘草阴性对照品溶液 5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比16:7:2的三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开（24℃、RH：60%），取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点清晰，置日光下检视。
结果如图1所示，结果显示供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性无干扰，表明该方法专属性良好。
（二）耐用性考察
1、不同点样量考察
分别吸取人参对照品溶液2μL、5μL、8μL、人参对照药材溶液2μL、5μL、8μL、供试品溶液Ⅰ 2μL、5μL、8μL，按实施例1的薄层色谱条件，在常温条件（24℃，RH：60%）下进行试验，比较不同点样量的展开效果。
实验结果见图2：由图2可见，人参对照品溶液的点样量为5μL、人参对照药材溶液的点样量为5μL、供试品溶液Ⅰ的点样量为5μL时，供试品色谱与对照品色谱和对照药材色谱在相应的位置上，显相同颜色的斑点。因此，选择人参对照品溶液的点样量为5μL、人参对照药材溶液的点样量为5μL、供试品溶液Ⅰ的点样量为5μL。
分别吸取黄芪对照品溶液2μL、5μL、8μL、黄芪对照药材溶液2μL、5μL、8μL、供试品溶液Ⅰ 2μL、5μL、8μL，按实施例1的薄层色谱条件，在常温条件下（25℃，RH：60%）进行试验，比较不同点样量的展开效果。
实验结果见图3：由图3可见，黄芪对照品溶液的点样量为5μL、黄芪对照药材溶液的点样量为5μL、供试品溶液Ⅰ的点样量为5μL时，供试品色谱与对照品色谱和对照药材色谱在相应的位置上，显相同颜色的斑点。因此，选择黄芪对照品溶液的点样量为5μL、黄芪对照药材溶液的点样量为5μL、供试品溶液Ⅰ的点样量为5μL。
分别吸取甘草对照品溶液2μL、5μL、8μL、甘草对照药材溶液2μL、5μL、8μL、供试品溶液Ⅰ 2μL、5μL、8μL，按实施例1的薄层色谱条件，在常温条件下（25℃，RH：60%）进行试验，比较不同点样量的展开效果。
实验结果见图4：由图4可见，甘草对照品溶液的点样量为5μL、甘草对照药材溶液的点样量为5μL、供试品溶液Ⅰ的点样量为5μL时，供试品色谱与对照品色谱和对照药材色谱在相应的位置上，显相同颜色的斑点。因此，选择甘草对照品溶液的点样量为5μL、甘草对照药材溶液的点样量为5μL、供试品溶液Ⅰ的点样量为5μL。
2、温度的耐用性考察
分别吸取人参对照品溶液5μL、黄芪对照品溶液5μL、甘草对照品溶液5μL、人参对照药材溶液5μL、黄芪对照药材溶液5μL、甘草对照药材溶液5μL、供试品溶液Ⅰ 5μL、保元汤缺人参阴性对照品溶液5μL、保元汤缺黄芪阴性对照品溶液5μL、保元汤缺甘草阴性对照品溶液5μL，按实施例1的薄层色谱条件，分别在常温（24℃，RH：60%）、低温条件（8℃，RH：75%）下进行试验，比较在不同温度下的展开效果。
实验结果见图1和图5：由图1和图5可见，常温和低温条件下，供试品色谱、对照品色谱和对照药材色谱的斑点均显色清晰，分离度较好，无拖尾现象。供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性无干扰，表明温度的降低对保元汤中人参、黄芪、甘草的鉴别无明显影响，说明该薄层方法对常温和低温的条件耐用性良好。
3、湿度的耐用性考察
分别吸取人参对照品溶液5μL、黄芪对照品溶液5μL、甘草对照品溶液5μL、人参对照药材溶液5μL、黄芪对照药材溶液5μL、甘草对照药材溶液5μL、供试品溶液Ⅰ 5μL、保元汤缺人参阴性对照品溶液5μL、保元汤缺黄芪阴性对照品溶液5μL、保元汤缺甘草阴性对照品溶液5μL，按实施例1的薄层色谱条件，分别在高湿（25℃，RH：87%）、低湿（25℃，RH：37%）条件下进行试验，比较在不同湿度下的展开效果。
实验结果见图6和图7：由图6和图7可见，在高湿和低湿条件下，供试品色谱、对照品色谱和对照药材色谱的斑点均显色清晰，分离度较好，无拖尾现象。供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性无干扰，表明湿度对保元汤中人参、黄芪、甘草的鉴别无明显影响，说明该薄层方法专属性好，且对不同的湿度耐用性良好。
4、不同厂家薄层板的耐用性考察
分别吸取人参对照品溶液5μL、黄芪对照品溶液5μL、甘草对照品溶液5μL、人参对照药材溶液5μL、黄芪对照药材溶液5μL、甘草对照药材溶液5μL、供试品溶液Ⅰ 5μL、保元汤缺人参阴性对照品溶液5μL、保元汤缺黄芪阴性对照品溶液5μL、保元汤缺甘草阴性对照品溶液5μL，按实施例1的薄层色谱条件，分别用不同厂家制备的硅胶G薄层板（谱科硅胶G板、默克硅胶G板）进行试验，比较不同生产厂家薄层板的展开效果。
实验结果见图8和图9：由图8和图9可见，采用不同厂家制备的硅胶G薄层板（谱科硅胶G板、默克硅胶G板），供试品色谱、对照品色谱和对照药材色谱的斑点均显色清晰，分离度较好，无拖尾现象。供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性无干扰，说明该薄层方法专属性好，且对不同厂家制备的硅胶G薄层板耐用性良好。
二、肉桂薄层鉴别的方法学考察
（一）专属性考察
1、取保元汤缺肉桂阴性样品1.5g，按供试品溶液Ⅱ的制备方法制成保元汤缺肉桂阴性对照品溶液。
2、吸取肉桂对照品溶液2μL、肉桂对照药材溶液20μL、供试品溶液Ⅱ 20μL，保元汤缺肉桂阴性对照品溶液20μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比3:9:8:0.3的石油醚-正己烷-甲酸乙酯-甲酸为展开剂，展开（24℃，RH：60%），取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。
结果如图10所示，结果显示供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性无干扰，表明该方法专属性良好。
（二）耐用性考察
1、不同点样量考察
分别吸取肉桂对照品溶液1μL、2μL、3μL、肉桂对照药材溶液10μL、15μL、20μL、供试品溶液Ⅱ 10μL、15μL、20μL，按实施例1薄层色谱条件，在常温条件下（25℃，RH：60%）进行试验，比较不同点样量的展开效果。
实验结果见图11：由图11可见肉桂对照品溶液的点样量为2μL、肉桂对照药材溶液的点样量为20μL、供试品溶液Ⅱ的点样量为20μL时，供试品色谱与对照品色谱和对照药材色谱在相应的位置上，显相同的荧光斑点。因此选择肉桂酸对照品溶液的点样量为2μL、肉桂对照药材溶液的点样量为20μL、供试品溶液Ⅱ的点样量为20μL。
2、温度的耐用性考察
分别吸取肉桂对照品溶液2μL、肉桂对照药材溶液20μL、供试品溶液Ⅱ 20μL、保元汤缺肉桂阴性对照品溶液20μL，按实施例1的薄层色谱条件，分别在常温（24℃，RH：60%）、低温（8℃，RH：80%）条件下进行试验，比较不同温度下的展开效果。
实验结果见图10和图12：由图10和图12可见，常温和低温条件下，供试品色谱、对照品色谱和对照药材色谱的斑点均显色清晰，分离度较好，无拖尾现象。供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点，且阴性无干扰，表明温度的降低对保元汤中肉桂的鉴别无明显影响，说明该薄层方法专属性好，且对常温和低温的条件耐用性良好。
3、湿度的耐用性考察
分别吸取肉桂对照品溶液2μL、肉桂对照药材溶液20μL、供试品溶液Ⅱ 20μL、保元汤缺肉桂阴性对照品溶液20μL，按实施例1的薄层色谱条件，分别在高湿（25℃，RH：87%）、低湿（25℃，RH：35%）条件下进行试验，比较不同湿度下的展开效果。
实验结果见图13和14：由图13和14可见，高湿和低湿条件下，供试品色谱、对照品色谱和对照药材色谱的斑点均显色清晰，分离度较好，无拖尾现象。供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点，且阴性无干扰，表明湿度对保元汤中肉桂的鉴别无明显影响，说明该薄层方法专属性好，且对不同的湿度耐用性良好。
4、不同厂家薄层板的耐用考察
分别吸取肉桂对照品溶液2μL、肉桂对照药材溶液20μL、供试品溶液Ⅱ 20μL、保元汤缺肉桂阴性对照品溶液20μL，按实施例1的薄层色谱条件，分别用不同厂家制备的硅胶GF254薄层板（海洋硅胶GF254、谱科硅胶GF254）进行试验，比较不同生产厂家薄层板的展开效果。
实验结果见图15和图16：由图15和图16可见，采用不同厂家制备的薄层硅胶GF254板（海洋硅胶GF254板、谱科硅胶GF254板），供试品色谱、对照品色谱和对照药材色谱的斑点均显色清晰，分离度较好，无拖尾现象。供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点，且阴性无干扰，说明该薄层方法专属性好，且对不同厂家制备的硅胶GF254薄层板耐用性良好。
三、生姜薄层鉴别的方法学考察
（一）专属性考察
1、取保元汤缺生姜阴性样品1.5g，按供试品溶液Ⅱ的制备方法制成保元汤缺生姜阴性对照品溶液。
2、吸取生姜对照品溶液2μL、生姜对照药材溶液20μL、供试品溶液Ⅱ 20μL，保元汤缺生姜阴性对照品溶液20μL，分别点于同一硅胶G薄层板，以体积比9:5的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开（24℃，RH：60%），取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点清晰，置日光下检视。
结果如图17所示，结果显示供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性无干扰，表明该方法专属性良好。
（二）耐用性考察
1、不同点样量考察
分别吸取生姜对照品溶液1μL、2μL、3μL，生姜对照药材溶液10μL、15μL、20μL、供试品溶液Ⅱ10μL、15μL、20μL，按实施例1的薄层色谱条件，在常温条件下（25℃，RH：60%）进行试验，比较不同点样量的展开效果。
实验结果显示，生姜对照品溶液的点样量为2μL、生姜对照药材溶液的点样量为20μL、供试品溶液Ⅱ的点样量为20μL时，供试品色谱与对照品色谱和对照药材色谱在相应的位置上，显相同颜色的斑点。因此选择生姜对照品溶液的点样量为2μL、生姜对照药材溶液的点样量为20μL、供试品溶液Ⅱ的点样量为20μL。
2、温度的耐用性考察
分别吸取生姜对照品溶液2μL、生姜对照药材溶液20μL、供试品溶液Ⅱ 20μL、保元汤缺生姜阴性对照品溶液20μL，按实施例1的薄层色谱条件，分别在常温（24℃，RH：60%）和低温（8℃，RH：80%）条件下进行试验，比较不同温度下的展开效果。
实验结果见图17和图18：由图17和图18可见，常温和低温条件下，供试品色谱、对照品色谱和对照药材色谱的斑点均显色清晰，分离度较好，无拖尾现象。供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性无干扰，表明温度的降低对保元汤中生姜的鉴别无明显的影响，说明该薄层方法专属性好，且对常温和低温的条件耐用性良好。
3、湿度的耐用性考察
分别吸取生姜对照品溶液2μL、生姜对照药材溶液20μL、供试品溶液Ⅱ 20μL、保元汤缺生姜阴性对照品溶液20μL，按实施例1的薄层色谱条件，分别在高湿（25℃，RH：87%）、低湿（25℃，RH：35%）条件下进行试验，比较不同湿度下的展开效果。
实验结果见图19和20：由图19和20可见，高湿和低湿条件下，供试品色谱、对照品色谱和对照药材色谱的斑点均显色清晰，分离度较好，无拖尾现象。供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点，且阴性无干扰，表明湿度对保元汤中生姜的鉴别无明显影响，说明该薄层方法专属性好，且对不同的湿度耐用性良好。
4、不同厂家薄层板的耐用考察
分别吸取生姜对照品溶液2μL、生姜对照药材溶液20μL、供试品溶液Ⅱ 20μL、保元汤缺生姜阴性对照品溶液20μL，按实施例1的薄层色谱条件，分别用不同厂家制备的硅胶G薄层板（海洋硅胶G板、谱科硅胶G板）进行试验，比较不同生产厂家薄层板的展开效果。
实验结果见图21和图22：由图21和图22可见，采用不同厂家制备的硅胶G薄层板（海洋硅胶G板、谱科硅胶G板），供试品色谱、对照品色谱和对照药材色谱的斑点均显色清晰，分离度较好，无拖尾现象。供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性无干扰，说明该薄层方法专属性好，且对不同厂家制备的薄层硅胶G板耐用性良好。
实施例3 提取方法中大孔树脂纯化效果的考察
本实施例为保元汤冻干粉中人参、黄芪、甘草供试品溶液制备中大孔树脂分离纯化前后效果的对比
具体的，取保元汤冻干粉1.5g，平行2份，加水30ml，超声处理（功率500W，频率40kHz）30分钟，用***萃取3次，每次15ml；水层溶液继续用水饱和正丁醇溶液提取3次，每次15ml，合并水饱和正丁醇溶液，蒸干。其中一份样品残渣加80%甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液A；另一份样品残渣加水5ml使溶解，加在D101大孔树脂（内径1.5cm，柱高15cm），用20ml水洗脱，弃去洗脱液，再用20ml 40%乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用30ml70%乙醇溶液洗脱，收集70%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加80%甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液B。
将供试品溶液A、供试品溶液B采用实施例1中的方法进行测定。结果如图23所示。由图23可见，供试品溶液A、供试品溶液B的色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，说明可实现鉴定。但供试品溶液B色谱条带背景较供试品溶液A色谱条带背景浅，能较好的排除对人参皂苷薄层鉴别的干扰，因此，供试品溶液B的制备方法更优，选择其作为保元汤中人参、黄芪、甘草薄层鉴别的供试品溶液制备方法。
对比例1
本对比例提供一种保元汤的鉴别方法，其与实施例1的区别在于，人参、黄芪、甘草的鉴别方法中，供试品溶液的制备方法为：取保元汤冻干粉1.5g，加水30ml，超声处理（功率500W，频率40kHz）30分钟，用***萃取3次，每次15ml；取经***萃取后的水层溶液，继续用乙酸乙酯提取3次，每次15ml，合并乙酸乙酯溶液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液C。其余均与实施例1相同。具体鉴别结果如图24所示。
图谱分析：由图24可知，供试品溶液C色谱仅与黄芪对照品、甘草对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；而在与人参对照品色谱相应的位置上，未显相同颜色的斑点。
结论：由对比例1可知，以乙酸乙酯为提取溶剂的供试品溶液仅能对保元汤中黄芪、甘草进行薄层鉴别，说明以乙酸乙酯为萃取溶剂的鉴别效果不好，无法同时鉴别到人参的化学成分。
对比例2
本对比例提供一种保元汤的鉴别方法，其与实施例1的区别在于，人参、黄芪、甘草的鉴别方法中，供试品溶液的制备方法为：取保元汤冻干粉1.5g，研细，加水30ml，加入正戊醇20ml，超声处理20分钟，静置10分钟，分层，取正戊醇萃取后的水层溶液，再用水饱和正丁醇提取3次，每次15ml，合并水饱和正丁醇溶液，蒸干，残渣加水5ml使溶解，加在D101大孔树脂（内径1.5cm，柱高15cm），用20ml水洗脱，弃去洗脱液，再用20ml40%乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用30ml70%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加80%甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液D。
另取保元汤冻干粉1.5g，研细，加水30ml，加入用***萃取3次，每次15ml，取经***萃取后的水层溶液，再用正戊醇提取3次，每次15ml，合并正戊醇溶液，蒸干，残渣加水5ml使溶解，加在D101大孔树脂（内径1.5cm，柱高15cm），用20ml水洗脱，弃去洗脱液，再用20ml40%乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用30ml70%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加80%甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液E。
此外，在本对比例中，以黄芪甲苷作为黄芪的对照品。基于该对照品，黄芪对照品溶液的制备方法为：取黄芪甲苷对照品，加80%甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作为黄芪对照品溶液。
其余均与实施例1相同。另取实施例1制备的供试品溶液Ⅰ作为对比，进行鉴别，具体鉴别结果如图25所示。
图谱分析：由图25可知，供试品溶液Ⅰ色谱与人参对照品、甘草对照品色谱在相应的位置上，显相同颜色的斑点；供试品溶液E色谱仅与甘草对照品色谱在相应的位置上，显相同颜色的斑点；供试品溶液D色谱中无对照品色谱斑点。
由对比例2可知：以正戊醇作为前期萃取试剂或后期提取试剂时，均无法同时鉴别黄芪、甘草和人参组分。
对比例3
本对比例提供一种保元汤的鉴别方法，其与实施例1的区别在于，肉桂的鉴别方法中，供试品溶液的制备方法为：
取保元汤冻干粉1.5g，研细，加水30ml，加入正戊醇20ml，超声处理20分钟，静置10分钟，分层，吸取上清液，加水洗涤3次，每次20ml，弃去水层，正戊醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液F。具体鉴别结果如图26所示。
由图26可知，供试品溶液F在与肉桂对照品色谱相应的位置上，未显相同颜色的斑点。由对比例3可知，以正戊醇为提取溶剂的供试品溶液F无法鉴别到肉桂的化学成分。
对比例4
本对比例提供一种保元汤的鉴别方法，其与实施例1的区别在于，生姜的鉴别方法中，供试品溶液的制备方法为：
取保元汤冻干粉1.5g，研细，加水30ml，加入正戊醇20ml，超声处理20分钟，静置10分钟，分层，吸取上清液，加水洗涤3次，每次20ml，弃去水层，正戊醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液G。具体鉴别结果如图27所示。
由图27可知，供试品溶液F在与生姜对照品色谱相应的位置上，未显相同颜色的斑点。由对比例3可知，以正戊醇为提取溶剂的供试品溶液G无法鉴别到生姜的化学成分。
以上所述是发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。
Claims (20)
1.一种基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法，其特征在于，包括：
（1）将保元汤采用水提取，然后采用***萃取，得到水层和***层；
（2）将所述水层采用水饱和正丁醇提取，所得提取液蒸干后加水溶解，加入D101大孔树脂中，依次采用水、30~50vol%乙醇、60~80vol%乙醇洗脱，取60~80vol%乙醇洗脱的洗脱液，干燥后采用甲醇溶解，得到第一供试品溶液；
（3）将所述***层干燥后采用乙酸乙酯溶解，得到第二供试品溶液；
（4）分别取肉桂对照药材、生姜对照药材，按照第二供试品溶液的制备方法制备得到肉桂对照药材溶液、生姜对照药材溶液；另取人参对照药材、黄芪对照药材和甘草对照药材，按照第一供试品溶液的制备方法制备得到人参对照药材溶液、黄芪对照药材溶液和甘草对照药材溶液；
（5）吸取第一供试品溶液、人参对照药材溶液、黄芪对照药材溶液、甘草对照药材溶液，点样于硅胶G薄层板，以三氯甲烷、甲醇、水的混合溶液的下层溶液为展开剂展开，显色；其中，三氯甲烷、甲醇、水的体积比为（14~18）：（6~10）：（1~3）；
（6）吸取第二供试品溶液、肉桂对照药材溶液，点样于硅胶GF254薄层板，以石油醚、正己烷、甲酸乙酯、甲酸的混合溶液为展开剂展开，显色；其中，石油醚、正己烷、甲酸乙酯、甲酸的体积比为（2~4）：（8~10）：（7~10）：（0.1~0.5）；
（7）吸取第二供试品溶液、生姜对照药材溶液，点样于硅胶G薄层板，以正己烷、乙酸乙酯的混合溶液为展开剂展开，显色；其中，正己烷、乙酸乙酯的体积比为（8~10）：（3~6）。
2.如权利要求1所述的基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法，其特征在于，步骤（1）包括：
（1.1）将保元汤采用水超声提取20~40min；其中，保元汤的重量与水的体积之比为（1~2）g：（20~40）mL；
（1.2）将步骤（1.1）得到的提取液采用***萃取2~4次，多次***萃取液合并，得到***层；其中，每次萃取所采用***的体积与保元汤的重量之比为（10~20）mL：（1~2）g。
3.如权利要求1所述的基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法，其特征在于，步骤（2）包括：
（2.1）将所述水层采用水饱和正丁醇提取2~4次，合并提取液，并蒸干；其中，每次提取所采用水饱和正丁醇的体积与保元汤的重量之比为（10~20）mL：（1~2）g；
（2.2）将步骤（2.1）蒸干得到的残渣加水溶解，并加入D101大孔树脂中，依次采用水、30~50vol%乙醇、60~80vol%乙醇洗脱，并收集60~80vol%乙醇洗脱的洗脱液，蒸干；其中，洗脱所采用水的体积与保元汤的重量比为（15~25）mL：（1~2）g，洗脱所采用30~50vol%乙醇的体积与保元汤的重量比为（15~25）mL：（1~2）g，洗脱所采用60~80vol%乙醇的体积与保元汤的重量比为（25~35）mL：（1~2）g；
（2.3）将步骤（2.2）蒸干得到的残渣采用甲醇溶解，得到第一供试品溶液。
4.如权利要求1所述的基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法，其特征在于，步骤（5）中：展开后喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱和/或对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
其中，三氯甲烷、甲醇、水的体积比为16：7：2。
5.如权利要求1所述的基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法，其特征在于，步骤（6）中：展开后在波长为254nm的紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱和/或对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
其中，石油醚、正己烷、甲酸乙酯、甲酸的体积比为3：9：8：0.3。
6.如权利要求1所述的基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法，其特征在于，步骤（7）中：展开后喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱和/或对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
其中，正己烷、乙酸乙酯的体积比为9：5。
7.如权利要求1所述的基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法，其特征在于，步骤（4）包括：
取肉桂对照药材，加水煮沸20~40min，滤过，滤液采用***萃取2~4次，萃取液合并后蒸干，残渣采用乙酸乙酯溶解，得到肉桂对照药材溶液；
取生姜对照药材，加水煮沸20~40min，滤过，滤液采用***萃取2~4次，萃取液合并后蒸干，残渣采用乙酸乙酯溶解，得到生姜对照药材溶液；
取人参对照药材，加水煮沸20~40min，滤过，滤液采用***萃取2~4次，弃去***萃取液得到水层；水层采用水饱和正丁醇提取2~4次，合并提取液后蒸干，残渣加水溶解，并加入D101大孔树脂中，依次采用水、30~50vol%乙醇、60~80vol%乙醇洗脱，并收集60~80vol%乙醇洗脱的洗脱液，蒸干，所得残渣加甲醇溶解，得到人参对照药材溶液；
取黄芪对照药材，加水煮沸20~40min，滤过，滤液采用***萃取2~4次，弃去***萃取液得到水层；水层采用水饱和正丁醇提取2~4次，合并提取液后蒸干，残渣加水溶解，并加入D101大孔树脂中，依次采用水、30~50vol%乙醇、60~80vol%乙醇洗脱，并收集60~80vol%乙醇洗脱的洗脱液，蒸干，所得残渣加甲醇溶解，得到黄芪对照药材溶液；
取甘草对照药材，加水煮沸20~40min，滤过，滤液采用***萃取2~4次，弃去***萃取液得到水层；水层采用水饱和正丁醇提取2~4次，合并提取液后蒸干，残渣加水溶解，并加入D101大孔树脂中，依次采用水、30~50vol%乙醇、60~80vol%乙醇洗脱，并收集60~80vol%乙醇洗脱的洗脱液，蒸干，所得残渣加甲醇溶解，得到甘草对照药材溶液。
8.一种基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法，其特征在于，包括：
（1）将保元汤采用水提取，然后采用***萃取，得到水层和***层；
（2）将所述水层采用水饱和正丁醇提取，所得提取液蒸干后加水溶解，加入D101大孔树脂中，依次采用水、30~50vol%乙醇、60~80vol%乙醇洗脱，取60~80vol%乙醇洗脱的洗脱液，干燥后采用甲醇溶解，得到第一供试品溶液；
（3）将所述***层干燥后采用乙酸乙酯溶解，得到第二供试品溶液；
（4）分别取肉桂酸对照品，制成肉桂对照品溶液；取6-姜辣素对照品，制得生姜对照品溶液；取人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rg1对照品，制得人参对照品溶液；取黄芪皂苷Ⅰ对照品、黄芪皂苷Ⅱ对照品，制成黄芪对照品溶液；取甘草苷对照品，制成甘草对照品溶液；
（5）吸取第一供试品溶液、人参对照品溶液、黄芪对照品溶液、甘草对照品溶液，点样于硅胶G薄层板，以三氯甲烷、甲醇、水的混合溶液的下层溶液为展开剂展开，显色；其中，三氯甲烷、甲醇、水的体积比为（14~18）：（6~10）：（1~3）；
（6）吸取第二供试品溶液、肉桂对照品溶液，点样于硅胶GF254薄层板，以石油醚、正己烷、甲酸乙酯、甲酸的混合溶液为展开剂展开，显色；其中，石油醚、正己烷、甲酸乙酯、甲酸的体积比为（2~4）：（8~10）：（7~10）：（0.1~0.5）；
（7）吸取第二供试品溶液、生姜对照品溶液，点样于硅胶G薄层板，以正己烷、乙酸乙酯的混合溶液为展开剂展开，显色；其中，正己烷、乙酸乙酯的体积比为（8~10）：（3~6）。
9.如权利要求8所述的基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法，其特征在于，步骤（1）包括：
（1.1）将保元汤采用水超声提取20~40min；其中，保元汤的重量与水的体积之比为（1~2）g：（20~40）mL；
（1.2）将步骤（1.1）得到的提取液采用***萃取2~4次，多次***萃取液合并，得到***层；其中，每次萃取所采用***的体积与保元汤的重量之比为（10~20）mL：（1~2）g。
10.如权利要求8所述的基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法，其特征在于，步骤（2）包括：
（2.1）将所述水层采用水饱和正丁醇提取2~4次，合并提取液，并蒸干；其中，每次提取所采用水饱和正丁醇的体积与保元汤的重量之比为（10~20）mL：（1~2）g；
（2.2）将步骤（2.1）蒸干得到的残渣加水溶解，并加入D101大孔树脂中，依次采用水、30~50vol%乙醇、60~80vol%乙醇洗脱，并收集60~80vol%乙醇洗脱的洗脱液，蒸干；其中，洗脱所采用水的体积与保元汤的重量比为（15~25）mL：（1~2）g，洗脱所采用30~50vol%乙醇的体积与保元汤的重量比为（15~25）mL：（1~2）g，洗脱所采用60~80vol%乙醇的体积与保元汤的重量比为（25~35）mL：（1~2）g；
（2.3）将步骤（2.2）蒸干得到的残渣采用甲醇溶解，得到第一供试品溶液。
11.如权利要求8所述的基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法，其特征在于，步骤（5）中：展开后喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱和/或对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
其中，三氯甲烷、甲醇、水的体积比为16：7：2。
12.如权利要求8所述的基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法，其特征在于，步骤（6）中：展开后在波长为254nm的紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱和/或对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
其中，石油醚、正己烷、甲酸乙酯、甲酸的体积比为3：9：8：0.3。
13.如权利要求8所述的基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法，其特征在于，步骤（7）中：展开后喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱和/或对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
其中，正己烷、乙酸乙酯的体积比为9：5。
14.如权利要求8所述的基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法，其特征在于，步骤（4）包括：
取肉桂酸对照品，加甲醇制成浓度为0.5~1.2mg/mL的溶液，得到肉桂对照品溶液；
取6-姜辣素对照品，加甲醇制成浓度为0.5~1.2mg/mL的溶液，得到生姜对照品溶液；
取人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成三者浓度均为0.8~1.2mg/mL的溶液，得到人参对照品溶液；
取黄芪皂苷Ⅰ对照品、黄芪皂苷Ⅱ对照品，加甲醇制成两者浓度均为0.8~1.2mg/mL的溶液，得到黄芪对照品溶液；
取甘草苷对照品，加甲醇制成浓度为0.8~1.2mg/mL的溶液，得到甘草对照品溶液。
15.一种基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法，其特征在于，包括：
（1）将保元汤采用水提取，然后采用***萃取，得到水层和***层；
（2）将所述水层采用水饱和正丁醇提取，所得提取液蒸干后加水溶解，加入D101大孔树脂中，依次采用水、30~50vol%乙醇、60~80vol%乙醇洗脱，取60~80vol%乙醇洗脱的洗脱液，干燥后采用甲醇溶解，得到第一供试品溶液；
（3）将所述***层干燥后采用乙酸乙酯溶解，得到第二供试品溶液；
（4）分别取肉桂酸对照品，制成肉桂对照品溶液；取6-姜辣素对照品，制得生姜对照品溶液；取人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rg1对照品，制得人参对照品溶液；取黄芪皂苷Ⅰ对照品、黄芪皂苷Ⅱ对照品，制成黄芪对照品溶液，取甘草苷对照品，制成甘草对照品溶液；
分别取肉桂对照药材、生姜对照药材，按照第二供试品溶液的制备方法制备得到肉桂对照药材溶液、生姜对照药材溶液；另取人参对照药材、黄芪对照药材和甘草对照药材，按照第一供试品溶液的制备方法制备得到人参对照药材溶液、黄芪对照药材溶液和甘草对照药材溶液；
（5）吸取第一供试品溶液、人参对照品溶液、黄芪对照品溶液、甘草对照品溶液、人参对照药材溶液、黄芪对照药材溶液、甘草对照药材溶液，点样于硅胶G薄层板，以三氯甲烷、甲醇、水的混合溶液的下层溶液为展开剂展开，显色；其中，三氯甲烷、甲醇、水的体积比为（14~18）：（6~10）：（1~3）；
（6）吸取第二供试品溶液、肉桂对照药材溶液、肉桂对照品溶液，点样于硅胶GF254薄层板，以石油醚、正己烷、甲酸乙酯、甲酸的混合溶液为展开剂展开，显色；其中，石油醚、正己烷、甲酸乙酯、甲酸的体积比为（2~4）：（8~10）：（7~10）：（0.1~0.5）；
（7）吸取第二供试品溶液、生姜对照药材溶液、生姜对照品溶液，点样于硅胶G薄层板，以正己烷、乙酸乙酯的混合溶液为展开剂展开，显色；其中，正己烷、乙酸乙酯的体积比为（8~10）：（3~6）。
16.如权利要求15所述的基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法，其特征在于，步骤（1）包括：
（1.1）将保元汤采用水超声提取20~40min；其中，保元汤的重量与水的体积之比为（1~2）g：（20~40）mL；
（1.2）将步骤（1.1）得到的提取液采用***萃取2~4次，多次***萃取液合并，得到***层；其中，每次萃取所采用***的体积与保元汤的重量之比为（10~20）mL：（1~2）g。
17.如权利要求15所述的基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法，其特征在于，步骤（2）包括：
（2.1）将所述水层采用水饱和正丁醇提取2~4次，合并提取液，并蒸干；其中，每次提取所采用水饱和正丁醇的体积与保元汤的重量之比为（10~20）mL：（1~2）g；
（2.2）将步骤（2.1）蒸干得到的残渣加水溶解，并加入D101大孔树脂中，依次采用水、30~50vol%乙醇、60~80vol%乙醇洗脱，并收集60~80vol%乙醇洗脱的洗脱液，蒸干；其中，洗脱所采用水的体积与保元汤的重量比为（15~25）mL：（1~2）g，洗脱所采用30~50vol%乙醇的体积与保元汤的重量比为（15~25）mL：（1~2）g，洗脱所采用60~80vol%乙醇的体积与保元汤的重量比为（25~35）mL：（1~2）g；
（2.3）将步骤（2.2）蒸干得到的残渣采用甲醇溶解，得到第一供试品溶液。
18.如权利要求15所述的基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法，其特征在于，步骤（5）中：展开后喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱和/或对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
其中，三氯甲烷、甲醇、水的体积比为16：7：2。
19.如权利要求15所述的基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法，其特征在于，步骤（6）中：展开后在波长为254nm的紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱和/或对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
其中，石油醚、正己烷、甲酸乙酯、甲酸的体积比为3：9：8：0.3。
20.如权利要求15所述的基于薄层色谱的保元汤的快速鉴别方法，其特征在于，步骤（7）中：展开后喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱和/或对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
其中，正己烷、乙酸乙酯的体积比为9：5。
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