CN116064326A - 一株能够缓解抑郁情绪的动物双歧杆菌乳亚种gbw8051及其应用 - Google Patents

一株能够缓解抑郁情绪的动物双歧杆菌乳亚种gbw8051及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株能够缓解抑郁情绪的动物双歧杆菌乳亚种GBW8051及其应用。所述动物双歧杆菌乳亚种GBW8051的保藏编号为CCTCC NO：M20221402，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。所述动物双歧杆菌乳亚种对抗生素无耐药性，具有较强的细胞粘附性，良好的人工胃肠液耐受能力，且该菌能够减轻抑郁样行为和焦虑样行为；提高脑中神经递质5‑羟色胺含量；降低血清中皮质酮的水平，抑制下丘脑功能亢进；提高海马组织中BDNF水平，因此，该菌及其制备物可用于制备缓解抑郁和焦虑的食品、保健品和药物，具有广阔的应用前景。

Description

一株能够缓解抑郁情绪的动物双歧杆菌乳亚种GBW8051及其应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域，特别涉及一株能够缓解抑郁情绪的动物双歧杆菌乳亚种GBW8051及其应用。
背景技术
抑郁症是造成全球疾病总体负担的主要因素，也是世界各地首要致残原因，其可以引致***。根据世界卫生组织的数据，我国由抑郁症导致的缺勤、医药费及丧葬费每年造成78亿美元的损失。
虽然对于抑郁症已经有行之有效的治疗方法，但由于医疗资源的匮乏以及社会对精神疾病患者的歧视依旧存在，全球只有不到半数的患者接受有效治疗。另一方面，临床上使用的抗抑郁药物均具有一定程度的副作用，并且一线抗抑郁药物治愈率仅为30％，影响患者对药物的可接受性和治疗效果的满意度，且患者对药物存在明显的个体差异性，导致临床治疗效果不佳。
目前已有研究报道肠道菌群与神经精神疾病相关，影响宿主神经***的发育及宿主的行为和情绪。肠-脑轴(gut-brain axis)是大脑与肠道信息相互交流的双向调节轴，这种双向调节作用主要通过神经途径、内分泌途径和免疫途径等来实现。
研究发现，补充益生菌能缓解抑郁模型动物的抑郁行为，恢复体内异常的生化指标，这可能得益于益生菌的抗炎、抗氧化作用。临床实验也表明补充益生菌制剂对改善焦虑和抑郁等情绪具有良好的效果。抑郁症患者常常出现胃肠道不适、过敏等并发症，往往通过对这些并发症进行治疗即能改善情绪，提高生活质量。因此，寻找更多能够发挥缓解抑郁的益生菌对于抑郁患者的治疗具有深远意义。
发明内容
本发明提供了一株能够缓解抑郁情绪的动物双歧杆菌乳亚种GBW8051及其应用。所述动物双歧杆菌乳亚种GBW8051具有较强的细胞粘附性，良好的人工胃肠液耐受能力，能够缓解抑郁情绪。
为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现：
本发明提供了一株能够缓解抑郁情绪的动物双歧杆菌乳亚种GBW8051，其分类命名为动物双歧杆菌乳亚种Bifidobacterium animalis subsp.lactis，保藏编号为CCTCCNO：M 20221402。
进一步的，所述动物双歧杆菌乳亚种GBW8051的核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示。
本发明还提供了一种动物双歧杆菌乳亚种制备物，通过所述的动物双歧杆菌乳亚种GBW8051制备得到；所述制备物为发酵菌液、发酵菌泥、冻干粉中的一种或多种。
进一步的，所述制备方法为：活化所述动物双歧杆菌乳亚种GBW8051，以2％(v/v)的接种量接入培养基中，37℃厌氧培养14h～20h，得到发酵菌液；将发酵菌液离心收集沉淀，得到发酵菌泥；将发酵菌泥冷冻干燥得到冻干粉。
本发明还提供了所述的动物双歧杆菌乳亚种GBW8051在制备抗抑郁的食品、保健品或药物中的应用。
进一步的，所述食品、保健品或药物中含有细胞浓度不低于1×10 10CFU/mL的动物双歧杆菌乳亚种GBW8051。
进一步的，所述动物双歧杆菌乳亚种GBW8051能够提高血清及大脑皮层5-HT含量和海马组织中BDNF水平。
进一步的，所述动物双歧杆菌乳亚种GBW8051能够缓解由抑郁引起的快感缺乏、绝望行为，以及降低血清中皮质酮的水平，抑制下丘脑功能亢进。
本发明还提供了一种缓解抑郁情绪的食品，所述食品中包含动物双歧杆菌乳亚种GBW8051和保护剂。
进一步的，所述食品中，动物双歧杆菌乳亚种GBW8051的菌含量不低于2×1011CFU/mL；所述保护剂为脱脂乳、海藻糖和蔗糖。
本发明与现有技术相比，具有以下优点和有益效果：
1、本发明从酸秏牛乳中提取出一株动物双歧杆菌乳亚种GBW8051，其对氨苄西林、四环素、氯霉素、庆大霉素、红霉素、克林霉素等抗生素无耐药性，具有使用安全性；具有优良的表面疏水性、自聚集能力、耐酸耐胆盐能力和耐受模拟胃肠液能力，因此其具有优良的胃肠道生存能力，有利于其在体内的使用。
2、所述动物双歧杆菌乳亚种GBW8051能够减轻抑郁样行为和焦虑样行为；提高脑中神经递质5-羟色胺含量；降低血清中皮质酮的水平，抑制下丘脑功能亢进；提高海马组织中BDNF水平。因此，该菌及其制备物可用于制备缓解抑郁和焦虑的食品、保健品和药物，具有广阔的应用前景。
附图说明
图1为GBW8051的菌落照片。
图2为GBW8051对CUMS小鼠糖水偏好的影响；其中(A)第0周各组小鼠糖水偏好测定结果；(B)第3周各组小鼠糖水偏好测定结果；(C)第5周各组小鼠糖水偏好测定结果。
图3为GBW8051对CUMS小鼠在(A)悬尾和(B)强迫游泳实验中不动时间的影响。
图4为GBW8051对CUMS小鼠(A)血清及(B)大脑皮层5-HT水平的影响。
图5为GBW8051对CUMS小鼠海马皮质酮水平的影响。
图6为GBW8051对CUMS小鼠海马BDNF水平的影响。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明的技术方案进一步的详细说明，但本发明要求保护的范围并不局限于实例表述的范围。
本发明所涉及的实验动物为7-8周龄雄性C57BL/6J小鼠(购自维通利华)，体重20-22g，动物分笼饲养，其生活环境处于无特定病原体中，温度控制在22–24℃，相对湿度保持在40％–60％，每天接受12小时光照/黑夜循环(早6:00–晚6:00)。在实验开始前所有动物适应本地环境一周，且可以自由摄食(食物经过高压灭菌)和饮水。
下述实施例所涉及的培养基如下：
MRS液体培养基(1L)：蛋白胨10g、牛肉粉10g、酵母粉5g、葡萄糖20g、硫酸镁0.1g、乙酸钠5g、柠檬酸铵2g、硫酸氢二钾2g、硫酸锰0.05g、吐温-80 1mL，L-半胱氨酸盐酸盐0.1g。
MRS固体培养基：在MRS液体培养基的基础上添加琼脂12g。
实施例1：动物双歧杆菌乳亚种GBW8051的分离筛选
选取青海酸秏牛乳样本，使用质量浓度为0.9％的生理盐水进行10倍梯度稀释，稀释3次，涂布在MRS固体培养基(培养基含抗生素莫匹罗星锂盐，其可抑制大部分除双歧杆菌外的其他菌种，药品购于海博生物)上，在37℃厌氧培养48h，挑取出不同形态的菌落后，在MRS固体培养基表面划线纯化，挑取单菌落在37℃下使用MRS液体培养基扩大培养，再使用质量浓度为25％的甘油进行保藏。针对保藏的5株单菌进行体外生理特性测试，筛选出1株表面疏水性和自聚集能力、静电作用率、胃肠液耐受能力(人工模拟)最好的单菌株，命名为GBW8051。
实施例2：动物双歧杆菌乳亚种GBW8051的鉴定
对实施例1中筛选到的菌株GBW8051进行形态鉴定以及16SrRNA分子生物学鉴定：
(1)形态鉴定：
将菌株GBW8051接种在MRS固体培养基中，于37℃培养48h后，在显微镜下进行观察。观察可知(图1)，菌落为乳白色，呈半圆形凸起，表面光滑、湿润，边缘整齐；呈革兰氏染色阳性，不形成孢子，非运动性的细菌。
(2)16S rRNA分子生物学鉴定：
将-80℃保藏的菌株取出，按2％比例接种于装有40mL MRS液体培养基的蓝盖瓶中，在37℃下培养18h后进行离心分离，7000rpm下离心5min，去上清液，收集菌体。提取菌株的基因组，加入细菌通用引物进行PCR扩增，并将扩增产物送交上海生工生物工程股份有限公司进行测序鉴定。
菌株GBW8051经测序分析，其16S rDNA序列如SEQ ID No.1所示。将测序得到的序列在GeneBank中进行核酸序列比对，结果显示，菌株GBW8051与Bifidobacterium animalis的同源性最高，因此确定该菌株为动物双歧杆菌乳亚种。
将菌株GBW8051进行菌种保藏，动物双歧杆菌乳亚种GBW8051的保藏单位：中国典型培养物保藏中心(CCTCC)；地址：中国.武汉.武汉大学；保藏日期：2022年09月09日；动物双歧杆菌乳亚种Bifidobacterium animalis subsp.lactis的保藏编号为CCTCC NO：M20221402。
实施例3：动物双歧杆菌乳亚种GBW8051对抗生素耐药性评价
将分离纯化并保存的动物双歧杆菌乳亚种GBW8051接种于MRS固体培养基划线并37℃培养18h以活化，按2％接种量转接至MRS液体培养基中37℃18h，如此传代2次，制得菌悬液A。
将培养好的菌液用0.85％的生理盐水稀释成OD值为0.1(波长600nm)的菌悬液B。
用灭菌后的无菌棉签沾取稀释好的菌悬液B，均匀涂布平板，再沾取菌悬液A再次涂布，反复重复三次。用镊子夹取抗生素药敏片放入涂满菌液的平板中，轻微按压一下。37℃厌氧培养48h，读取MIC(最小抑菌浓度)结果。
测试结果见表1，氨苄西林、四环素、氯霉素、红霉素、克林霉素、万古霉素对动物双歧杆菌乳亚种GBW8051的MIC值，均为MIC≤折点值，说明动物双歧杆菌乳亚种GBW8051对抗生素无耐药性，安全性较好。
表1抗生素对动物双歧杆菌乳亚种GBW8051的MIC
抗生素 氨苄西林 四环素 氯霉素 红霉素 克林霉素 万古霉素
MIC 0.47 6 0.75 0.19 0.47 0.25
折点值 2 8 4 1 1 2
实施例4：动物双歧杆菌乳亚种GBW8051的人工胃肠液耐受性
人工胃液：在灭菌的PBS中，加入0.35g/100mL胃蛋白酶(1:3000pepsin，3000-3500u/mg)，用1mol/L HCl调整pH值为2.5后，过滤除菌备用。
人工肠液：在灭菌的PBS中，加入0.1g/100mL胰蛋白酶和0.5g/100mL牛胆盐，用0.1mol/L NaOH调整溶液pH至8.0，过滤除菌备用；
菌株活化及供试菌液的制备：将实施例3中的菌悬液A于5℃下，3000r/min低速离心10min，弃掉上清液；加入与培养液等量的灭菌PBS洗涤菌体2次后，收集菌体加入等量灭菌PBS，振荡混匀，即为供试菌液。
pH 2.5人工胃液耐受性测定：取1mL菌悬液，与9mL pH 2.5、pH 3.0的人工胃液混合后，置37℃水浴培养，分别在开始0h和3h后，取样用MRS固体培养基倾注培养，测定活菌数并计算其存活率。存活率计算公式如下：
Figure BDA0003982549020000051
式中，N1为人工胃液处理3h后的活菌数；N0为0h的活菌数。
人工模拟胃肠液转运耐受性试验：取1mL已消化3h的人工含菌胃液加入到9mL过滤除菌pH 8.0的人工肠液中，再置37℃水浴培养，8h取样，平板倾注法计数。
测试结果见表2和表3，动物双歧杆菌乳亚种GBW8051具有良好的耐受胃酸、肠液的能力。在pH 2.5人工胃液中孵育3h，存活率可达88.7％，在人工肠液中孵育8h存活率可达104.1％，经过人工胃肠液后存活率可达92.3％。良好的胃肠液耐受能力为其制备缓解抑郁情绪的产品创造了条件。
表2动物双歧杆菌乳亚种GBW8051对人工胃液耐受性
人工胃液 活菌数N0(0h) 活菌数N1(3h) 存活率(％)
pH 2.5 <![CDATA[(19.4±0.37)×10<sup>8</sup>CFU/mL]]> <![CDATA[(17.2±0.29)×10<sup>8</sup>CFU/mL]]> 88.7
表3动物双歧杆菌乳亚种GBW8051对人工肠液耐受性
活菌数N1(3h) 活菌数N8(3h+8h) 存活率(％)
<![CDATA[(17.2±0.29)×10<sup>8</sup>CFU/mL]]> <![CDATA[(17.9±0.30)×10<sup>8</sup>CFU/mL]]> 104.1％
实施例5：动物双歧杆菌乳亚种GBW8051的细胞粘附性
所用鼠李糖乳杆菌LGG(以下简称LGG)来自丹麦科汉森，步骤如下：
1、菌株疏水率测定
将实施例3中菌悬液A用无菌PBS将菌悬液OD600nm调至0.6，为菌悬液C。取适量菌悬液C加入1mL疏水溶剂二甲苯，静置5min后充分振荡120s，再静置10min取水相，以鼠李糖乳杆菌LGG为对照，用石英比色杯测定OD600nm，疏水率按如下公式计算。
Figure BDA0003982549020000061
式中：OD0为菌悬液初始OD600nm；OD1为静置10min后水相OD600nm。
2、菌株静电作用率测定
以氯仿为路易斯酸，乙酸乙酯为路易斯碱，取适量菌悬液C，加入1mL氯仿(或1mL乙酸乙酯)，静置5min后充分振荡120s，再静置10min取水相，以鼠李糖乳杆菌LGG作为对照，用石英比色杯测定OD600 nm，静电作用率按如下公式计算。
Figure BDA0003982549020000062
式中：OD0为菌悬液初始OD600nm；OD1为静置10min后水相OD600nm。
3、菌株自凝聚率测定
取适量菌悬液C，于37℃分别静置2、4h，以鼠李糖乳杆菌LGG作为对照，测定上层液体OD600nm，自凝聚率按如下公式计算。
Figure BDA0003982549020000071
式中：OD0为菌悬液初始OD600nm；OD1为静置后菌悬液上层液体OD600nm。
乳酸杆菌表面性质与黏附性有很大关系，通过受体特异性结合，电荷及疏水基的相互作用的方式，乳酸菌黏附到肠道黏膜和肠上皮细胞表面。表4可以看出，GBW8051的疏水率为92.9％，远高于LGG的36.4％；静电作用率为96.4％、25.8％也高于LGG的86.8％、11.3％，自凝聚力9.1％(2h)、13.2％(4h)稍低于LGG的14.7％(2h)、19.6％(4h)。高疏水率及静电作用率有利于GBW8051在肠道内定值，为其制备缓解抑郁情绪的产品创造了条件。
表4动物双歧杆菌乳亚种GBW8051表面性质
菌株 疏水率，％ 自凝聚力(2h)，％ 自凝聚力(4h)，％ 静电作用率(酸)，％ 静电作用率(碱)，％
GBW8051 92.9±4.3 9.1±0.5 14.7±0.7 96.4±3.8 25.8±1.1
LGG 36.4±1.7 13.2±0.6 19.6±0.7 86.8±4.6 11.3±0.5
实施例6：动物双歧杆菌乳亚种GBW8051对小鼠抑郁情绪的缓解作用
1、实验步骤
(1)灌胃剂：
A、乳酸菌灌胃剂
菌株活化：将保藏的动物双歧杆菌乳亚种GBW8051在MRS平板划线，在37℃厌氧培养48h后，从平板上分别挑取一个单菌落接种至相应的50mL MRS液体培养基中，在37℃厌氧培养18h后，按照2％(v/v)的比例接种至相应的新鲜MRS液体培养基中，在37℃下厌氧培养18h，制得动物双歧杆菌乳亚种GBW8051种子液。
菌悬液的制备：分别取上述活化2代的动物双歧杆菌乳亚种GBW8051种子液，按照2％(v/v)的比例接种至MRS液体培养基中，在37℃下厌氧培养18h，得到培养液，将得到的培养液于4℃、7000r/min条件下离心5min后收集菌体，弃去上清，并用生理盐水重悬菌体，制得终浓度为1.0×1010CFU/mL的动物双歧杆菌乳亚种GBW8051菌悬液。
上述菌悬液做灌胃使用，其中，灌胃体积为0.1mL/10g小鼠/天。
B、药物溶液配制
称取对照品氟西汀2.4mg，溶于2mL的0.9％生理盐水中，得到浓度为1.2mg/mL的氟西汀溶液，灌胃0.1mL/10g小鼠/天，剂量相当于给予小鼠12mg/kg/天。
(2)分组及方法：将32只7-8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组，每组8只，分别为正常对照组：Control(不接受CUMS刺激并给予相同剂量的生理盐水)，CUMS模型组(接受CUMS刺激并给予相同剂量的生理盐水)，药物(氟西汀，Flu)干预组、益生菌(GBW8051)干预组。药物及益生菌干预时间为第22天-35天。
(3)慢性不可预知应激CUMS抑郁小鼠模型：模型组及各给药组的小鼠均应单笼饲养，且同时给予不同的连续五周的慢性应激刺激，每天一次(除整夜光照每周两次)，且小鼠对应激源的时间安排不可预知。实验中的应激源主要(1)包括45度倾斜笼子24h、(2)束缚30min、(3)禁水24h、(4)禁食24h、(5)震动笼子30min、(6)潮湿垫料20h、(7)持续光照24h等，其具体的时间安排计划见表5。
表5慢性轻度不可预知应激(CUMS)过程的时间安排
Figure BDA0003982549020000081
(4)糖水偏好实验：在第0天、21天和38天分别对小鼠进行糖水偏好测试实验。实验开始之前，首先要锻炼小鼠适应糖水的能力。具体操作如下：在单笼剥夺小鼠食物和水18个小时后，同时给予小鼠两瓶浓度为1％的蔗糖溶液24小时。然后，将其中的一瓶用纯净水代替，再使其适应24小时。与此同时，为防止小鼠对位置的偏爱，需每隔1小时对两只水瓶进行一次位置交换。对小鼠禁食禁水24小时后，分别同时给予其事先称量好的一瓶1％的蔗糖溶液和一瓶纯净水，并记录它们在2小时内摄入的蔗糖水溶液和纯净水的量。糖水偏好实验一般在晚上18：00-20:00进行。通过称量瓶子重量来检测水和蔗糖溶液的摄入量。蔗糖偏好计算公式为：蔗糖偏好＝M(蔗糖溶液摄入量)/[M(蔗糖溶液摄入量)+M(水摄入量)]×100％。
(5)悬尾实验：在第39天进行悬尾实验，实验所用的是避光且隔音的行为箱。具体操作如下：在实验中，将距离小鼠尾尖约1cm的位置用胶带粘上，然后将其固定在记录仪的小金属挂钩上，使小鼠头部在距离地面上方50cm处悬挂，每只小鼠倒挂6min，应用悬尾测试视频分析***将小鼠在最后4分钟内的总不动时间，即小鼠在空中一动不动或仅有细微的肢体运动的时间自动记录下来。每次实验结束之后，小鼠被送回各自的笼子。
(6)强迫游泳实验：在第40天进行强迫游泳实验。具体操作如下：将小鼠分别放入装有约30cm高水的有机玻璃圆筒(高40cm×直径20cm)中，水温控制在24–26℃，使其强迫游泳6分钟，采用强迫游泳测试视频分析***记录小鼠在最后4分钟内的总不动时间。只要小鼠消极地在水中漂浮而没有剧烈地挣扎，或者只有轻微的动作将其头部保持在水面以上即认为小鼠是不动状态。每只小鼠在测试过程中都看不到彼此，且每次测试结束后都需要更换圆筒中的水。小鼠强迫游泳结束后，用干纸巾擦拭干净，归笼。
2、结果分析
快感缺乏作为抑郁症的一个重要特征，可以用抑郁症动物的蔗糖消耗量百分比的下降来反映。图1显示了动物双歧杆菌乳亚种GBW8051对CUMS的小鼠蔗糖偏好的影响。在CUMS刺激之前，任何实验组中蔗糖消耗量没有显著差异(P>0.05)。然而，在受到CUMS连续3周刺激后，相对于对照组小鼠，应激小鼠的蔗糖偏好显著降低(P<0.01)。与模型组比较，连续2周给予小鼠动物双歧杆菌乳亚种GBW8051，明显逆转CUMS诱导的蔗糖消耗的减少(P<0.01)。这些表明动物双歧杆菌乳亚种GBW805可以缓解CUMS小鼠诱导的快感缺乏。
图2A显示了动物双歧杆菌乳亚种GBW8051对CUMS小鼠在悬尾实验中不动时间的影响。其中正常对照组、CUMS组、氟西汀干预组、GBW8051干预组的小鼠悬尾不动时间分别为：77.50±3.24、152.47±4.14、77.53±3.33、79.93±1.72s。与空白对照组相比，CUMS模型组小鼠的不动时间明显延长(P<0.01)。结果表明，与模型组比较，给予动物双歧杆菌乳亚种GBW8051两周后，可以明显缩短小鼠的不动时间(P<0.01)，且与空白对照组相似的水平，这一结果与氟西汀(12mg/kg)类似(P<0.01)。这表明动物双歧杆菌乳亚种GBW8051可以缓解CUMS诱导的小鼠绝望行为。
如图2B所示，在强迫游泳实验中，正常对照组、CUMS组、氟西汀干预组、GBW8051干预组的小鼠游泳不动时间分别为：74.57±2.64、124.20±4.17、73.80±2.55、75.90±3.06s。结果表明，相对于模型组小鼠，动物双歧杆菌乳亚种GBW8051能明显逆转CUMS诱导的不动持续时间的延长(P<0.01)，这一效果与给予氟西汀类似(P<0.01)，说明动物双歧杆菌乳亚种GBW8051可以缓解CUMS小鼠的绝望行为。
实施例6：动物双歧杆菌乳亚种GBW8051对小鼠血清及大脑皮层5-HT的影响
1、实验步骤
具体实施方式同实施例5，将实施例5中的小鼠于第41天安乐处死，取适量小鼠血液，4℃条件下以转速3000rpm/min离心10分钟，取上清，用ELISA试剂盒检测血清中的5-HT含量。
取小鼠脑组织，并于冰上分离前额叶。分别取一定质量的新鲜前额叶皮层，按照100mg组织1mL无菌PBS缓冲液的比例加PBS缓冲液，用组织匀浆器进行匀浆，组织液经过5000g，5min离心后取上清，用ELISA试剂盒检测5-HT含量。
2、结果分析
图3A-B显示了GBW8051对CUMS小鼠血清及大脑皮层5-HT水平的影响。与空白对照组相比，CUMS模型组小鼠血清及大脑皮层5-HT含量明显降低(P<0.01)。与模型组比较，给予动物双歧杆菌乳亚种GBW8051两周后，可以显著逆转抑郁小鼠血清及大脑皮层5-HT含量的降低(P<0.01)，且与空白对照组相似的水平，这一结果与氟西汀(12mg/kg)类似(P<0.01)。这表明动物双歧杆菌乳亚种GBW8051具有一定的缓解抑郁的作用。
实施例7：动物双歧杆菌乳亚种GBW8051对抑郁小鼠HPA功能亢进的影响
具体实施方式同实施例5，将实施例5中的小鼠于第41天安乐处死，取适量小鼠血液，4℃条件下以转速3000rpm/min离心10分钟，取上清，用ELISA试剂盒检测血清中皮质酮的含量。
结果如图4所示，正常对照组、CUMS组、氟西汀干预组、GBW8051干预组的小鼠血清中皮质酮的含量分别为：208.33±13.07、322.00±10.23、233.13±10.05、265.67±7.93ng/mL。结果显示，与空白对照组相比，CUMS连续刺激5周后，模型组小鼠血清中皮质酮的含量明显升高(P<0.01)。与模型组比较，GBW8051干预2周后均能显著降低血清中皮质酮水平(P<0.01)。类似地，阳性药对照组氟西汀同样也能显著降低CUMS小鼠血清中皮质酮浓度(P<0.01)。这说明，动物双歧杆菌乳亚种GBW8051可以抑制CUMS小鼠HPA轴的过度活跃，且效果优于氟西汀。
实施例8：动物双歧杆菌乳亚种GBW8051对小鼠海马组织BDNF的影响
具体实施方式同实施例5，将实施例5中的小鼠于第41天安乐处死，取小鼠脑组织，并与冰上分离海马组织。分别取一定质量的新鲜海马组织，加入9倍体积的生理盐水，用组织匀浆器进行匀浆，用ELISA试剂盒检测海马BDNF的含量。
结果如图5所示，正常对照组、CUMS组、氟西汀干预组、GBW8051干预组的小鼠海马BDNF的含量分别为：61.57±5.18、40.17±3.72、50.67±3.77、49.67±4.07ng/L。结果显示，与正常对照组比较，模型组小鼠海马BDNF水平显著降低(P<0.01)。与模型组相比，GBW8051能显著逆转CUMS诱导小鼠海马组织BDNF表达的降低(P<0.01)。这种效应也在氟西汀组中观察到。这表明动物双歧杆菌乳亚种GBW8051能够显著逆转慢性应激造成的海马组织中BDNF水平的降低，显示出良好的抗抑郁治疗潜力。
实施例9
一种缓解抑郁情绪的食品，具体制备步骤如下：
菌株活化同实施例5，将活化液按照2％(v/v)的接种量接入MRS液体培养基中，于37℃厌氧培养16h，得到菌液；将菌液12000rpm离心，收集沉淀，即为菌泥；用含有120g/L脱脂乳、80g/L海藻糖和20g/L蔗糖的保护剂溶液将动物双歧杆菌乳亚种GBW8051菌体重悬至细胞浓度为2×10 11CFU/mL，得到动物双歧杆菌乳亚种GBW8051菌悬液；将动物双歧杆菌乳亚种GBW8051菌悬液冷冻干燥，粉碎，制得缓解情绪的食品。
以上事实案例均只代表本发明技术方案，而不是对实验进行限制，虽然我们对实验方案进行了改进，但是同领域的科研人员仍然可以对前面叙述的实验方案进行进一步的改善或者对实验环节进行科学等同替换，这些变动并不使相应技术解决方案的实质偏离本发明要求保护的技术解决方案的精神和范围。

Claims (10)

1.一株能够缓解抑郁情绪的动物双歧杆菌乳亚种GBW8051，其特征在于，其分类命名为动物双歧杆菌乳亚种Bifidobacterium animalis subsp.lactis，保藏编号为CCTCC NO：M20221402。
2.根据权利要求1所述的动物双歧杆菌乳亚种GBW8051，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
3.一种动物双歧杆菌乳亚种制备物，其特征在于，通过权利要求1所述的动物双歧杆菌乳亚种GBW8051制备得到；所述制备物为发酵菌液、发酵菌泥、冻干粉中的一种或多种。
4.根据权利要求3所述的动物双歧杆菌乳亚种制备物，其特征在于，其制备方法为：活化所述动物双歧杆菌乳亚种GBW8051，以2％(v/v)的接种量接入培养基中，37℃厌氧培养14h～20h，得到发酵菌液；将发酵菌液离心收集沉淀，得到发酵菌泥；将发酵菌泥冷冻干燥得到冻干粉。
5.权利要求1所述的动物双歧杆菌乳亚种GBW8051在制备抗抑郁的食品、保健品或药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述食品、保健品或药物中含有细胞浓度不低于1×10 10CFU/mL的动物双歧杆菌乳亚种GBW8051。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述动物双歧杆菌乳亚种GBW8051能够提高血清及大脑皮层5-HT含量和海马组织中BDNF水平。
8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述动物双歧杆菌乳亚种GBW8051能够缓解由抑郁引起的快感缺乏、绝望行为，以及降低血清中皮质酮的水平，抑制下丘脑功能亢进。
9.一种缓解抑郁情绪的食品，其特征在于，所述食品中包含动物双歧杆菌乳亚种GBW8051和保护剂。
10.根据权利要求9所述的食品，其特征在于，所述食品中，动物双歧杆菌乳亚种GBW8051的菌含量不低于2×10 11CFU/mL；所述保护剂为脱脂乳、海藻糖和蔗糖。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116769654A (zh) * 2023-06-14 2023-09-19 内蒙古农业大学 一株动物双歧杆菌乳亚种及其应用
CN116850213A (zh) * 2023-07-24 2023-10-10 青岛东海药业有限公司 一种改善母体及后代自闭抑郁行为的益生菌组合物及其应用

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