CN116063390B - 一种抗菌肽vck-17及其联合香茅醛做为抗菌药物的应用 - Google Patents
一种抗菌肽vck-17及其联合香茅醛做为抗菌药物的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种抗菌肽VCK‑17及其联合香茅醛做为抗菌药物的应用，具体涉及抗菌。抗菌肽VCK‑17的序列如SEQ ID NO.1所示。本发明通过合理分配VCK‑17与香茅醛的两种药物的有效摩尔组分比例，使得联合使用能够发挥更加快速的广谱协同抗菌效果，显著地降低各组分抗菌药物的使用剂量和毒副作用，并有效降低细菌耐药性的产生。本发明有助于为抗菌肽和中草药等植物提取物实际生产应用提供新的应用视角，有助于进一步推动抗菌肽和中草药等植物提取物在“替抗”战略上的应用和发展，并为新型抗菌药物的设计提供素材和新的思路。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种抗菌肽VCK-17及其联合香茅醛做为抗菌药物的应用。
背景技术
面对病原菌所造成的机体细菌性感染，抗生素组合疗法一直是临床治疗上的重要手段。许多研究表明，通过选择不同类型的抗菌药物进行联合使用，能有效地提高整体抗菌性能，降低药物的使用剂量和毒副作用，并能够显著地降低细菌耐药性的发展。此外，某些药物组合还能够产生协同抗菌作用，从而使抗菌疗效最大化。因此，抗菌药物的联用在临床应用中具有重大意义。然而，近年来，随着抗生素耐药性问题日趋严重以及新型抗生素研发的严重滞后，特别是关于抗生素诱导的耐药基因快速的水平转移，这导致抗生素组合疗法也同样面临着严峻的临床应用风险。因此，选择种类丰富且不易产生耐药性的抗菌药物去构建新型的药物组合疗法可能是避免重滔当前抗生素耐药性危机的一种有效策略。同时，新型抗菌药物的组合疗法也为开发新药物奠定基础。
作为多细胞生物先天免疫***的重要组成成分，抗菌肽在物种内和物种之间具有丰富的多样性，目前通过自然界发现或人工有机合成的抗菌肽已经超过12,000种。有研究发现，大多数抗菌肽均具有典型的“膜扰乱”抗菌机制，这对于限制细菌的耐药性进化具有重要意义，这些优势也使其成为目前最有潜力的“替抗”药物之一。随着研究的深入，目前许多研究发现多细胞生物在感染处通过分泌多种抗菌肽来共同杀灭病原菌。同时，在体外实验中也发现部分抗菌肽之间存在强效的协同抗菌作用。这些线索不仅表明抗菌肽的协同作用机制可能是其千百万年来在自然环境中有效抵御病原微生物的一种重要作用方式，同时也证明抗菌肽具有作为其他抗菌药物抗菌能力增效剂的潜在能力。
另一方面，植物精油在自然界中作为植物抵御病原微生物侵害有效次级代谢产物，具有极为丰富的物种多样性和良好杀菌效果。研究发现，植物精油能够通过多种抗菌模式去杀灭病原菌微生物。此外，植物精油还可以抑制细菌的毒力因子去限制生物膜的形成和群体感应效应，从而降低细菌耐药基因的突变，有效遏制细菌的耐药性演变过程。作为香茅油，山苍子油和桉树油的主要活性成分，香茅醛具有良好的杀虫和抗菌活性，其目前主要用于制作香精，食品添加剂和防腐剂等。
虽然上述新型抗菌药物展现出潜在的“替抗”优势，但抗菌肽昂贵的合成成本，植物提取物较弱的抗菌活性和较大的药物剂量都极大地限制了它们在临床治疗中的进一步发展。在这里，我们认为两者间的联合治疗能够有效地解决上述不足，然而两者间的联合治疗未见报道。
发明内容
1、基于现有技术的不足之处，本发明的目的在于提供一种抗菌肽VCK-17，具有高抗菌活性、低毒性，其氨基酸序列如SEQ NO.1所示，其C端采用氨基酰胺化，分子式如式(Ⅰ)所示：
本发明的另一目的是提供一种抗菌肽VCK-17与香茅醛联合作为制备治疗由革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌引发的感染性疾病的药物中的应用，能够作为在体外治疗多种病原菌微生物感染的联合药物，并能够显著地降低抗菌肽的使用剂量。
进一步的，如上所述的应用，按摩尔分数计，有效组分按1份抗菌肽VCK-17与1000-4000份香茅醛配比的药物组合能够有效杀灭大肠杆菌、沙门氏菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐碳青霉烯类肠杆菌15A9和β内酰胺酶类肠杆菌T18，其中1份抗菌肽VCK-17是指药物浓度为0.5-4μM。
进一步的，如上所述的应用，按摩尔分数计，有效组分按1份抗菌肽VCK-17与100-500份香茅醛配比的药物组合能够有效杀灭绿脓杆菌，鲍曼不动杆菌和β内酰胺酶类肠杆菌T17，其中1份抗菌肽VCK-17是指药物浓度为8-16μM。
进一步的，如上所述的应用，按摩尔分数计，有效组分按1份抗菌肽VCK-17与8000-60000份香茅醛配比的药物组合能够有效杀灭杀灭肺炎克雷伯菌，金黄葡萄球菌和耐碳青霉烯类肠杆菌14E3，其中1份抗菌肽VCK-17是指药物浓度为0.25-4μM。
进一步的，如上所述的应用，革兰氏阴性菌为大肠杆菌、沙门氏菌、耐碳青霉烯类肠杆菌、β内酰胺酶类肠杆菌、绿脓杆菌、鲍曼不动杆菌或肺炎克雷伯菌。
进一步的，如上所述的应用，革兰氏阳性菌为表皮葡萄球菌、粪肠球菌或耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。
本发明的有益效果及优点如下：抗菌肽VCK-17与香茅醛协同作为在体外治疗多种病原菌微生物感染的联合药物，并能够显著地降低抗菌肽的使用剂量，从而降低了药物的毒副作用和合成成本，极大地提高杀灭细菌的速率，进一步地降低细菌耐药性的产生。并且该抗菌药物组合物在发挥抗菌活性的浓度下，能够有效降低对人肾细胞HEK293T和人红细胞的细胞毒性。抗菌药物组合物能够通过多重作用模式杀灭细菌，包括破坏细菌内外膜和抑制细菌的能量代谢。通过协同作用能够发挥快速的广谱抗菌效果并显著地降低细菌耐药性的产生，从而使其抗菌功效达到最大化。这些结果表明抗菌肽VCK-17和香茅醛联合应用具有很高的科研价值和良好的应用前景。
附图说明
图1为抗菌肽VCK-17的质谱图；
图2为抗菌肽VCK-17和香茅醛单独使用和联合使用对模式菌E.coli ATCC25922杀菌速率的检测图，其中括号内数值为添加抗菌药物的浓度；
图3为在30天内抗菌肽VCK-17和香茅醛单独使用和联合使用连续诱导模式菌E.coli ATCC25922耐药性的检测图，其中多黏菌素B和环丙沙星作为耐药性诱导的阳性对照；
图4为抗菌肽VCK-17和香茅醛单独使用和联合使用对不同细胞系的细胞毒性检测图，其中a表示抗菌肽VCK-17在不同浓度下对细胞系RAW264.7,HEK293T和IPEC-J2细胞存活率的检测，b表示香茅醛在不同浓度下对细胞系RAW264.7,HEK293T和IPEC-J2细胞存活率的检测，c表示抗菌肽VCK-17和香茅醛联合使用对细胞系RAW264.7,HEK293T和IPEC-J2细胞存活率的检测；
图5为抗菌肽VCK-17和香茅醛联合使用对模式菌E.coli ATCC25922抗菌机制的探究对比图，其中a表示抗菌肽VCK-17和香茅醛单独使用和联合使用对细菌外膜通透性的影响，b表示抗菌肽VCK-17和香茅醛单独使用和联合使用对细菌内膜通透性的影响，c表示抗菌肽VCK-17和香茅醛单独使用和联合使用对细菌能量代谢的影响；
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1：
该抗菌肽的氨基酸序列如表1所示：
表1
分子式如式(Ⅰ)所示：
抗菌肽VCK-17的化学合成，方法微固相化学合成法，具体步骤为：
1、抗菌肽的制备从C端到N端逐一进行，通过多肽合成仪来完成。首先将Fmoc-X(X是每个抗菌肽的C端第一个氨基酸)接入到Wang树脂，然后脱去Fmoc基团后得到X-Wang树脂；再将Fmoc-Y-Trt-OH(9-芴甲氧羧基-三甲基-Y，Y为每个抗菌肽C端第二个氨基酸)；按照这个程序依次从C端合成到N端，直至合成完毕，得到脱去Fmoc基团的侧链保护的树脂；
2、在上述得到的肽树脂中，加入切割试剂，20℃避光下反应2h，过滤；沉淀TFA(三氟乙酸)洗涤，将洗液与上述滤液混合，旋转蒸发仪浓缩，再加入10倍左右体积的预冷无水***，-20℃沉淀3h，析出白色粉末物，以2500g离心10min，收集沉淀，再用无水***洗涤沉淀，真空干燥，得到多肽，其中切割试剂由TFA、水和TIS(三异丙基氯硅烷)按照质量比95:2.5:2.5混合而成；
3、使用0.2mol/L硫酸钠(磷酸调节至pH＝7.5)进行柱平衡30min，用90％乙腈水溶液溶解多肽，过滤，C18反相常压柱，采用梯度洗脱(洗脱剂为甲醇和硫酸钠水溶液按照体积比为30:70～70:30混合)，流速为1mL/min，检测波为220nm，收集主峰，冻干；再利用反相C18柱进一步纯化，洗脱液A为0.1％TFA/水溶液；洗脱液B为0.1％TFA/乙腈溶液，洗脱浓度为25％B～40％B，洗脱时间为12min，流速为1mL/min，再同上收集主峰，冻干；
4、抗菌肽的鉴定：将上述得到的抗菌肽经过电喷雾质谱法分析，质谱图中显示的分子量(见附图)与表2中的理论分子量基本一致，抗菌肽的纯度大于95％。
实施例2：
抗菌肽VCK-17和香茅醛单独使用或联合使用抗菌活性的测定
1.抗菌活性测定：分别将抗菌肽VCK-17和香茅醛配置成为一定浓度的储存液以备使用。利用微量肉汤稀释法测定几种抗菌肽的最小抑菌浓度(MIC值)。以0.01％乙酸(含0.2％BSA)作为稀释液，使用二倍稀释法依次配置系列梯度的抗菌药物溶液。取上述溶液100μL置于96孔细胞培养板中，然后分别添加等体积的待测菌液(5×105个/mL)于各孔中。分别设置阳性对照(含有菌液而不含有抗菌药物)和阴性对照(既不含菌液也不含抗菌药物)。37℃恒温培养20-24h，以肉眼未见孔底部有混浊现象或用酶标仪检测492nm处光吸收值确定最小抑菌浓度。
从表2结果我们发现，除了对绿脓杆菌、鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯菌的抗菌活性大于128μM，抗菌肽VCK-17对其他所有测试细菌的MIC在4-128μM范围内。而同抗菌肽VCK-17相比，香茅醛的抗菌活性较弱，除了对绿脓杆菌MIC大于2621440μM，其对所有其他测试的细菌的MIC在32768-2621440μM范围内。
表2为抗菌肽VCK-17和香茅醛单独使用和联合使用对20种常见病原微生物的抗菌活性
表内MICVCK-17[MIC组合]中MICVCK-17指的是该抗菌肽单独使用时的最小抑菌浓度，[MIC组合]指的是指抗菌肽VCK-17与香茅醛联合使用时该抗菌肽的最小抑菌浓度，MIC香茅醛[MIC组合]，中MIC香茅醛指的是香茅醛单独使用时的最小抑菌浓度，[MIC组合]指的是指抗菌肽VCK-17与香茅醛联合使用时该香茅醛的最小抑菌浓度。其中上角标a是指药物的最小抑菌浓度，上角标b是指药物组合的分级抑菌指数，上角标c是指药物组合中，当一种药物的最小抑菌浓度降低8倍时，另一种药物最小抑菌浓度的降低的倍数，上角标d是指耐碳青霉烯类肠杆菌，上角标e是指耐β内酰胺酶类肠杆菌，上角标f是指耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。
2.抗菌肽VCK-17和香茅醛协同抗菌活性的测定：根据抗菌活性测定获得的抗菌肽VCK-17和香茅醛的MIC值，将抗菌肽VCK-17和香茅醛配置成为2×MIC浓度的储存液以备使用。同样利用微量肉汤稀释法，以0.01％乙酸(含0.2％BSA)作为稀释液，在96孔板中使用二倍稀释法依次配置系列梯度的抗菌药物溶液，其中待用的抗菌肽VCK-17从右至左依次稀释，待用的香茅醛从下往上依次稀释，剩余步骤同抗菌活性测定方法一致。其中FIC指数计算公式如下：FIC指数＝FICA+FICB＝MICAB/MICA+MICBA/MICB。其中MICA为化合物A单独的MIC，MICAB为化合物A与化合物B结合的MIC，MICB为化合物B单独结合的MIC,MICBA为化合物B与化合物A结合的MIC,FICA和FICB分别表示化合物A和化合物B的FIC。协同作用定义为FIC≤0.5、相加作用(0.5<FICI<1)、无关作用(1≤FICI<4)和拮抗作用(FICI>4)。具体检测结果见表2。
从试验结果中我们发现，抗菌肽VCK-17和香茅醛对所有测试的细菌均能够产生强效的协同作用(FIC≤0.5)，其中在香茅醛MIC降低8倍的条件下，抗菌肽VCK-17的对所有测试细菌的抗菌活性提高4-128倍。反之，香茅醛的抗菌活性提高2-512倍。
3.抗菌肽VCK-17和香茅醛协同抗菌速率的测定：以模式菌E.coli ATCC25922为研究对象，在5×105个/mL的大肠杆菌中，分别添加VCK-17(终浓度为1/32和1倍MIC)、香茅醛(终浓度为1/64和1倍MIC)和VCK-17(1/32倍MIC)和香茅醛(1/64倍MIC)组合，并开始计时，其中在不同的时间间隔(1、5、10、20、30、60和120分钟)收集混合物，并将其稀释至适当倍数，铺于肉汤琼脂固体培养皿上。最后通过菌落计数来评估抗菌药物的抗菌速率。
图2结果表明，在MIC浓度条件下，32μM的抗菌肽VCK-17能够在30min内杀灭细菌，而131072μM的香茅醛自身只能够抑制细菌的生长。在FIC浓度条件下，1μM的抗菌肽VCK-17和2048μM的香茅醛单独使用均未能抑制细菌的增长，且与对照组菌落数持平。而在1μM的抗菌肽VCK-17和2048μM的香茅醛联合使用的情况下，在10min内所有细菌被完全杀。这些结果表明抗菌肽VCK-17和香茅醛联合使用不仅能够在低浓度条件下杀灭病原菌，同时也能够提高细菌的杀灭速率。
4.抗菌肽VCK-17和香茅醛单独或联合使用对细菌耐药性的测定：采用连续培养法检测模式菌E.coli ATCC25922对多粘菌素B、环丙沙星、VCK-17、香茅醛及VCK-17和香茅醛组合的耐药性。首先，采用上述测定药物抗菌活性的MIC法测定上述抗菌药物对大肠杆菌25922的抑菌活性。然后，从浑浊的亚MIC孔中取出细菌悬浮液，用新鲜MHB培养基稀释至合适浓度(5×105个/mL)，进行下一代MIC测定。按此方法，连续测量30天，并记录每次抗菌药物MIC值。
图3结果表明，同环丙沙星和多粘菌素B相比，大肠杆菌在抗菌肽VCK-17和香茅醛连续刺激30天的条件下抗菌活性分别提高8倍和4倍，这表明抗菌肽VCK-17和香茅醛单独使用诱导细菌耐药性能力低于抗生素。而在抗菌肽VCK-17和香茅醛联合使用的条件下，抗菌活性未发生变化，这表明抗菌肽VCK-17和香茅醛联合使用有助于进一步降低细菌耐药性的诱导能力。
实施例3：
抗菌肽VCK-17和香茅醛单独使用或联合对不同细胞系的细胞毒性检测：采用MTT染料还原法评估VCK-17、香茅醛及其组合对RAW264.7、HEK293T和IPEC-J2的细胞毒性。首先，将培养好的2×105个/mL细胞接种在96孔板中12h，然后将等体积不同梯度浓度的VCK-17、香茅醛及其组合加入到含有培养细胞系的96孔板中，在37℃、5％CO2中共同孵育4h。然后在96孔板各孔中加入50μL MTT(0.5mg/mL)，再孵育4h。最后，1000g离心5min，弃上清，在每个孔中再加入150μLDMSO，并用酶标仪(TECAN GENios F129004；TECAN,Austria)。其中以未加抗菌药物处理的细胞为阳性对照，以全培养基孔为阴性对照。
图4结果表明，在最高浓度下(2倍MIC)，三种细胞系与抗菌肽VCK-17共同孵育后的细胞存活率均大于50％，表明其生物安全性良好。在与香茅醛的共同孵育下，虽然RAW264.7、HEK293T细胞存活大于50％，但IPEC-J2的细胞存活率下降明显，这表明高浓度香茅醛对IPEC-J2存在一定细胞毒性。此外，尽管在2倍MIC浓度的VCK-17和1倍MIC浓度的香茅醛联合使用条件下，HEK293T细胞存活率有所降低。然而，在两者2倍FIC浓度的联合使用条件下(1/16+1/32MIC)，所有细胞系存活率均显著高于50％，这表明抗菌肽VCK-17和香茅醛联合使用能够在发挥抗菌活性的浓度下保持三种细胞系良好的细胞状态，这有助于降低抗菌肽VCK-17和香茅醛药物使用剂量，从而间接的提高抗菌肽VCK-17和香茅醛联合使用细胞存活率。
实施例4：
抗菌肽VCK-17和香茅醛联合使用对模式菌E.coli ATCC25922抗菌机制的测定
1.抗菌肽VCK-17和香茅醛联合使用对细菌外膜通透性的影响：
采用NPN探针法检测不同浓度的VCK-17、香茅醛及其组合对细菌外膜通透性的影响。首先，将对数生长期的模式菌E.coli ATCC25922细胞稀释至OD600＝0.4，并在避光条件下与终浓度为10μM的NPN孵育30min。然后，根据倍比稀释法，将VCK-17、香茅醛及其组合在含有5mM葡萄糖的HEPES缓冲液中(PH＝7.4)连续稀释，将上述抗菌药物和制备的细菌悬浮液混合，并加入96孔板中，孵育30分钟。在发射λ＝420nm的荧光光谱仪下立即检测(TecanInfinite 200pro，China)。其中以2倍MIC的蜂毒素处理的细菌悬浮液为阳性对照，以未处理的细菌悬浮液为阴性对照。
从图5a的结果中发现，同对照相比，VCK-17处理的细菌荧光强度随着浓度增高而增高，而香茅醛处理的细菌荧光强度几乎无变化。此外，VCK-17和香茅醛联用比VCK-17单独处理的细菌荧光强度更强，上述结果表明在杀菌过程中，VCK-17可能对破坏细菌外膜通透性起到主要作用，而香茅醛可能具有增强VCK-17对细菌外膜的破坏能力。
2.抗菌肽VCK-17和香茅醛联合使用对细菌内膜通透性的影响：采用PI探针法(Thermo Fisher Scientific,catalogue no.P1304MP)检测不同浓度的VCK-17、香茅醛及其组合对细菌内膜通透性的影响。首先，将对数生长期的模式菌E.coli ATCC25922细胞稀释至OD600＝0.4，并在避光条件下与终浓度为200nM的NPN孵育30min。然后，根据倍比稀释法，将VCK-17、香茅醛及其组合在PBS(PH＝7.4)缓冲液中连续稀释，将上述抗菌药物和制备的细菌悬浮液混合，并加入96孔板中，孵育30分钟。最后，在激发波长535nm，发射波长为615nm的条件下，测量了所有细菌样品的荧光强度。其中以2倍MIC的蜂毒素和利福平处理的细菌悬浮液为阳性对照，以未处理的细菌悬浮液为阴性对照。
从图5b的结果中发现，同对照相比，VCK-17和香茅醛单独处理细菌的荧光强度均随着浓度的增加而增加。此外，VCK-17和香茅醛联合应用能够导致更强细菌荧光强度增加，这些结果表明两种药物均能够导致细菌内膜通透性增加，同时两者联用则能够导致细菌内膜更强破坏效果。
3.抗菌肽VCK-17和香茅醛联合使用对细菌能量代谢的影响：使用增效ATP测定试剂盒(Beyotime,catalogue no.S0027)测定了不同浓度的VCK-17、香茅醛及其组合处理的模式菌E.coli ATCC25922胞内和胞外的ATP水平。首先，用PBS溶液(pH 7.4)将对数中生长期细菌细胞稀释至OD600＝0.4，将细菌悬浮液转移到10mL EP管中，并添加不同浓度的VCK-17、香茅醛及其组合共同孵育90min。然后，将细菌悬液在4℃下12000转离心5分钟，弃上清，并使用溶菌酶(20mg/mL))裂解细菌沉淀，再4℃下12000转离心，最后收集上清液并根据ATP试剂盒说明书方法测定细菌胞内ATP水平。用荧光光谱仪(Tecan Infinite 200pro，China)测量样品的自发光。此外，同样以2倍MIC的蜂毒素和利福平处理的细菌悬浮液为阳性对照，以未处理的细菌悬浮液为阴性对照。
如图5c结果，我们发现，同对照相比，单独使用VCK-17导致细菌胞内ATP含量随着药物浓度的升高而降低，而单独香茅醛和VCK-17或香茅醛联用处理的细菌ATP含量则发生显著的骤降。上述结果中单独使用VCK-17导致细菌胞内ATP含量梯度下降可能是由于VCK-17破坏细菌内外膜通透性而导致的细菌胞内ATP外漏。然而单独香茅醛导致的细菌ATP含量骤降除了内外膜泄漏导致ATP减少以外，也说明香茅醛能够直接抑制细菌ATP的合成。同时，VCK-17或香茅醛联用处理的细菌胞内ATP含量同样显著下降也进一步证明导致香茅醛对细菌能量代谢的抑制起到主导作用。
以上作用机制结果表明，抗菌肽VCK-17能够帮助香茅醛通过大肠杆菌外膜，并能够与香茅醛共同作用于大肠杆菌内膜造成更大的膜损伤。进一步地，大量香茅醛进入大肠杆菌胞内，从而抑制ATP合成，导致大肠杆菌能量代谢崩溃并最终导致细菌死亡。这些结果也为研究其他类抗菌肽与植物精油的协同作用机制的研究提供了实验依据。
综上，本实施例通过荧光染料标记法探究了两种药物联合应用的抗菌机制。结果证明抗菌肽VCK-17和香茅醛之间存在一种独特的“互利互惠”的协同抗菌机制，即抗菌肽VCK-17能够帮助香茅醛通过大肠杆菌外膜，并能够与香茅醛共同作用于大肠杆菌内膜造成更大的膜损伤。进一步地，大量香茅醛进入大肠杆菌胞内，从而抑制ATP合成，导致大肠杆菌能量代谢崩溃并最终导致细菌死亡。这些结果也为研究其他类抗菌肽与其他类型植物提取物的协同作用机制的研究提供了实验依据。
Claims (4)
1.一种抗菌肽VCK-17与香茅醛联合在制备治疗由革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌引发的感染性疾病的药物中的应用，所述的革兰氏阴性菌为大肠杆菌、沙门氏菌、耐碳青霉烯类肠杆菌、β内酰胺酶类肠杆菌、绿脓杆菌、鲍曼不动杆菌或肺炎克雷伯菌；所述的革兰氏阳性菌为表皮葡萄球菌、粪肠球菌或耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；所述的抗菌肽VCK-17的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，C端采用氨基酰胺化，分子式如式(Ⅰ)所示：
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：按摩尔分数计，有效组分按1份抗菌肽VCK-17与1000-4000份香茅醛配比的药物组合能够有效杀灭大肠杆菌、沙门氏菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐碳青霉烯类肠杆菌15A9和β内酰胺酶类肠杆菌T18，其中1份抗菌肽VCK-17是指药物浓度为0.5-4μM。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：按摩尔分数计，有效组分按1份抗菌肽VCK-17与100-500份香茅醛配比的药物组合能够有效杀灭绿脓杆菌，鲍曼不动杆菌和β内酰胺酶类肠杆菌T17，其中1份抗菌肽VCK-17是指药物浓度为8-16μM。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：按摩尔分数计，有效组分按1份抗菌肽VCK-17与8000-60000份香茅醛配比的药物组合能够有效杀灭肺炎克雷伯菌，金黄葡萄球菌和耐碳青霉烯类肠杆菌14E3，其中1份抗菌肽VCK-17是指药物浓度为0.25-4μM。
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