CN116059387B - 一种抗胰腺癌的疫苗、及其医药用途 - Google Patents

一种抗胰腺癌的疫苗、及其医药用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种抗肿瘤的融合蛋白能抑制MUC1阳性的肿瘤细胞生长，并具体公开了其能够抑制胰腺癌的肿瘤细胞生长的用途。本发明的融合蛋白对于胰腺癌的预防和/或治疗，具有广阔的应用前景。

Description

一种抗胰腺癌的疫苗、及其医药用途
技术领域
本发明涉及一种融合蛋白的应用，具体涉及一种含有人MUC1的融合蛋白用于制备预防和治疗胰腺癌的药物中的用途。
背景技术
胰腺癌五年生存率小于5％，被称为”癌王”。胰腺癌早期症状不明显，容易被忽视，胰腺癌被诊断时一般达到了癌症晚期。胰腺周围有丰富的血管、神经和肾、肝等重要的器官，难以手术，而且由于一般发现晚，只有10-15％早期患者适合于手术治疗。大部分患者只能用吉西他滨进行治疗，并联合卡铂、卡培他滨等，但不论哪种方案，治疗效果也只是比不治疗略好。晚期和转移的胰腺癌患者的存活时间一般只有几个月。胰腺癌在进展时会利用周围组织基质的免疫的、血管的、***损伤后修复反应来创造一个有利的肿瘤微环境，便于肿瘤生长。虽然免疫点监测疗法在多种癌症中治疗效果不错，但是对于胰腺癌，治疗反应非常差。
肿瘤细胞疫苗有可能激活免疫***，让它们直面癌症细胞。肿瘤疫苗诱导肿瘤特异的免疫反应，激活免疫***进攻带有特殊抗原的癌细胞。在众多免疫抗原中，粘蛋白MUC1被赋予希望。最初发现MUC1具有保护和润滑上皮的功能。后来陆续发现它在细胞信号传导以及从恶性细胞转化到肿瘤扩散的肿瘤发生的所有阶段均起着重要作用。MUC1是一种高度糖基化的跨膜蛋白，是一种I型跨膜蛋白，具有高度糖基化的胞外结构域，从细胞表面延伸200-500纳米。全长分为胞外区、跨膜区和胞内区。胞外区由脯氨酸，苏氨酸和富含丝氨酸的(PTS)域和SEA域组成。PTS域，也叫可变数目串联重复序列(VNTR)区，由高度多态的外显子编码，该外显子编码多个20-21个氨基酸序列重复序列组成，而MUC1的胞内区(CT)是高度保守的。MUC1的过表达通常与结肠癌，乳腺癌，卵巢癌，肺癌和胰腺癌有关。MUC1被证明存在于各种腺癌中。在一项原发性肝癌的病人治疗研究中，MUC1高表达的病人比例高达68％。同时手术后复发的比例也是最高，跟MUC1表达强度呈正相关。另外，MUC1在一些血液恶性肿瘤的也是过度表达。肿瘤组织和正常组织的MUC1不仅在表达量上有差异，肿瘤与正常组织的MUC1糖基化也存在差异。低糖基化的MUC1是在肿瘤细胞的整个表面过度表达，使肿瘤细胞粘附力的降低，为肿瘤转移提供了便利。已经形成的肿瘤中，大量MUC1可以抑制NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用，还可以抑制细胞毒淋巴细胞(CTL)的增殖,甚至可以诱导CTL凋亡。
疫苗接种可以为宿主提供长期的保护作用，且几乎没有副作用，是治疗癌症的重要方法之一。理论上MUC1应该是一个非常好的疫苗抗原，但在人体临床试验中的临床效果并不理想。疫苗产生的抗体大多不能与肿瘤细胞很好地结合，无法有效保护机体杀灭肿瘤。
我们的研究表明MUC1可以被连接到细菌或者病毒上的蛋白质，产生针对癌细胞的T细胞反应，产生抗肿瘤效应。目前研究较为火热的新生抗原(neoantigen)疫苗需要高通量的测序和生物信息学的筛选，时间花费和资源需求较大，难以造福患者。开发花费较低、效果更好的治疗性癌症疫苗被寄予厚望。本发明公开一种可用于价格低廉的治疗性癌症疫苗制备的、适用于大肠杆菌生产且抑制胰腺癌细胞生长的重组蛋白质的基因优化方法。
发明内容
为了提供更为有效的胰腺癌预防和治疗生物制剂，本发明提供了一种融合蛋白在制备抗肿瘤药物，尤其是胰腺癌药物中的用途。本发明通过如下技术方案实现：
一种融合蛋白在制备预防和/或***药物中的用途。
根据本发明，所述肿瘤为MUC1阳性的肿瘤，例如表达MUC1的腺癌或表达MUC1的血液肿瘤，更优选所述肿瘤为胰腺癌。
本发明还提供一种融合蛋白在制备预防和/或治疗胰腺癌药物中的用途。
根据本发明，所述融合蛋白包括麦芽糖结合蛋白MBP和/或蛋白MUC1-N。
根据本发明，所述融合蛋白由麦芽糖结合蛋白MBP和/或蛋白MUC1-N串联而成。
更进一步地，所述MUC1-N的基因核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述MBP的基因核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
更进一步地，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。
本发明还提供了一种抑制胰腺癌的肿瘤细胞生长的方法，所述方法包括给与本发明所述的融合蛋白。
本发明提供一种药物组合物，其包含本发明的融合蛋白。
根据本发明，所述药物用于***，优选地，所述肿瘤为MUC1阳性的肿瘤，例如表达MUC1的腺癌或表达MUC1的血液肿瘤，更优选胰腺癌。
根据本发明，所述药物用于治疗胰腺癌。
根据本发明，所述融合蛋白包括麦芽糖结合蛋白MBP和/或蛋白MUC1-N。
根据本发明，所述融合蛋白由麦芽糖结合蛋白MBP和/或黏蛋白MUC1-N串联而成。
更进一步地，所述MUC1-N的基因核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述MBP的基因核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
更优选地，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。
本发明还提供了一种融合蛋白在保健品、化妆品、食品或食品添加剂中的应用，其特征在于，其中所述融合蛋白包括麦芽糖结合蛋白MBP和/或蛋白MUC1-N。
根据本发明，所述保健品、化妆品、食品或食品添加剂可用于抑制肿瘤。
优选地，所述肿瘤为MUC1阳性的肿瘤，例如表达MUC1的腺癌或表达MUC1的血液肿瘤，更优选所述肿瘤为胰腺癌。
本申请优选实施方式，所述融合蛋白由麦芽糖结合蛋白MBP和蛋白MUC1-N串联而成。
更进一步地，所述MUC1-N基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述MBP基因核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
更优选地，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。
本发明还提供了蛋白MBP基因和/或蛋白MUC1-N基因在制备预防和/或***药物中的用途，其特征在于，所述MUC1-N基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述MBP基因如SEQ ID NO.6所示。
根据本发明，所述肿瘤包括所有表达MUC1的肿瘤，包括表达MUC1的腺癌或表达MUC1的血液肿瘤，更优选所述肿瘤为胰腺癌。
本发明还提供了蛋白MBP基因和/或蛋白MUC1-N基因在制备预防和/或治疗胰腺癌药物中的用途，其特征在于，所述MUC1-N基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述MBP基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
本发明通过动物实验证明本发明的融合蛋白和基因对于不同剂量的胰腺癌细胞生长均具有显著的抑制作用，对于胰腺癌具有显著的预防和治疗效果。
附图说明
图1：蛋白质表达和纯化后的胶图；
图2：MBP-Muc1-N抑制胰腺癌细胞增殖实验；
图3:MBP-Muc1-N抑制胰腺癌细胞增殖实验。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明进行说明。但本领域技术人员知悉。下述实施例不是对本发明保护范围的限制，任何在本发明实施例基础上做出的改变和变化，都在本发明的保护范围之内。
实施例1：融合蛋白的构建及表达
1.基因优化
(1)MUC1-N基因的优化
本发明根据Muc1-N氨基酸序列SEQ ID NO.1的特点，进行密码子优化获得SEQ IDNO.3，经比对，优化修改了28％的碱基序列；
①SEQ ID NO.1
②优化前基因序列SEQ ID NO.2
③优化后基因序列SEQ ID NO.3
④优化1前后基因对比(同源性72％，修改28％)
(2)MBP基因的优化
根据MBP氨基酸序列SEQ ID NO.4的特点，利用DNA软件进行密码子优化，获得优化后的序列SEQ ID NO.6，经比对，优化序列有15％的碱基序列改变。
①氨基酸序列SEQ ID NO.4
②优化前基因序列SEQ ID NO.5
③优化后基因序列SEQ ID NO.6
④优化1前后基因对比(同源性85％，修改15％)
(3)MUC1-N融合MBP优化基因序列的合成
MBP和Muc1-N的依次串联表达，获得融合蛋白序列为SEQ ID NO.7，其序列为：
KIEEGKLVIWINGDKGYNGLAEVGKKFEKDTGIKVTVEHPDKLEEKFPQVAATGDGPDIIFWAHDRFGGYAQSGLLAEITPDKAFQDKLYPFTWDAVRYNGKLIAYPIAVEALSLIYNKDLLPNPPKTWEEIPALDKELKAKGKSALMFNLQEPYFTWPLIAADGGYAFKYENGKYDIKDVGVDNAGAKAGLTFLVDLIKNKHMNADTDYSIAEAAFNKGETAMTINGPWAWSNIDTSKVNYGVTVLPTFKGQPSKPFVGVLSAGINAASPNKELAKEFLENYLLTDEGLEAVNKDKPLGAVALKSYEEELVKDPRIAATMENAQKGEIMPNIPQMSAFWYAVRTAVINAASGRQTVDEALKDAQTNSSSNNNNNNNNNNLGIEGRISGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAH
制备方法如下：根据MBP和Muc1-N融合蛋白质的基因序列进行串联合成。为此，先合成1a_1、1a_2、1a_3、1a_4、1a_5、1a_6、1a_7、1a_8、1a_9、1a_10、1a_11、1a_12、1a_13、1a_14、1a_15、1a_16、1a_17、1a_18、1a_19、1a_20、1a_21、1a_22、1a_23、1a_24、1a_25、1a_26、1a_27、1a_28、1a_29、1a_30寡核苷酸序列，再合成1b_1、1b_2、1b_3、1b_4序列，利用1-seq2、1-R序列进行基因扩增，获得MUC1-N融合MBP优化基因序列。
表1合成序列及编号
2、蛋白质重组表达与纯化
将融合基因的5’PCR引物附加NcoI酶切位点，3’PCR引物附加EcoI酶切位点，扩增出的基因双酶切，***到同样双酶切的pET26b(+)大肠杆菌表达载体中。经过抗性细菌培养板的筛选和单克隆挑选，用卡那霉素抗性的培养基培养和IPTG诱导操纵子的表达。将未优化的序列、优化的序列进行实验。最后得到的全菌液用含有SDS的缓冲液进行95℃预处理，用5％-12％聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析。结果显示：优化前的序列MBP-Muc1-N表达量只有总蛋白的2％，优化后的序列1MBP-Muc1-N表达量占总蛋白的51％，上升了25.5倍。经过亲和柱纯化后，未优化的基因表达的蛋白质进行10倍浓缩才能上样观察，浓缩后纯化蛋白质产量为100ml培养物0.8mg，而优化后的序列MBP-Muc1-N产量为9.6mg，上升了12倍。
实施例2融合蛋白的活性测试
1.MBP-Muc1-N动物实验
1.材料
实验试剂：使用本申请的方法重组MBP-MUC1-N融合蛋白；Pan-02胰腺癌细胞购自国家实验细胞资源中心；注射生理盐水购自北京天坛生物制品股份有限公司。
实验动物：C57 BL/6J小鼠购自北京华阜康生物科技有限公司。
2.方法
(1)方法1：该组实验以观察肿瘤变化为注射依据。即当注射后发现肿瘤抑制变差或者肿瘤迅速增长时，开始后续注射。
每组6只C57BL/6J，雄性，6-8周龄。接种Pan-02胰腺癌细胞数量为1.75×105个/只，接种位置为右腋皮下，接种MBP-Muc1-N为每剂50μg。接种后第7天，可见肿瘤约5mm左右，腿部肌肉注射第一针MBP-Muc1-N；接种后第50天，注射第二针MBP-Muc1-N；接种后第54天、57天注射第三、第四针MBP-Muc1-N。
(2)方法2：该组实验以确定的注射方案为注射依据。本方法中采用一周给药两次的方案，其中采用间隔3天、4天、3天、4天的方案注射；当然也可以按照4天、3天的方式间隔。
每组6只C57BL/6J，雄性，6-8周龄。接种Pan-02胰腺癌细胞数量为1.0×106个/只，接种位置为右腋皮下，接种MBP-Muc1-N为每剂50μg。接种后第7天，可见肿瘤约5mm左右；接种后第17天，注射第二针MBP-Muc1-N；此后接种后第20天、24天、27天、31天注射第三、第四、第五、第六针MBP-Muc1-N。
2、检测结果
(1)方法1的实验结果如图2和下表2所示。
表2 MBP-Muc1-N对于胰腺癌的抑制作用
方法1中，从图2可见，接种Pan-02胰腺癌细胞数量为1.75×105个/只后的第7天，可见肿瘤直径约5mm左右，腿部肌肉注射第一针MBP-Muc1-N；此后可见注射融合蛋白MBP-Muc1-N后肿瘤生长缓慢，第37天，肿瘤开始生长增加，此时的肿瘤直径约10mm，直到接种后第50天，肿瘤生长突然迅速增长。在第50天注射第二针MBP-Muc1-N；此后肿瘤增长变缓；在第54天、57天注射第三、第四针MBP-Muc1-N(从第50天至第57天，采用的是一周给药两次的方式)。注射第三、第四针MBP-Muc1-N后可见肿瘤生长受到显著抑制。
从图2和表2公开的内容可见，采用肿瘤开始生长时接种本发明MBP-MUC1-N融合蛋白，对于体积显著增大的肿瘤也能实现显著抑制。例如，在第54天接种后，于第57天进行测量，其MBP-MUC1-N融合蛋白对于胰腺癌的抑制率整体达到43％(共接种三针)，而于第57天追加接种第四针后，于第60天进行测量，MBP-MUC1-N融合蛋白对于胰腺癌的抑制率整体达到33％。
(2)方法2的测试结果如图3和表3所示。
表3 MBP-Muc1-N对于胰腺癌的抑制作用
方法2中，从图3和表3可见，接种后第7天，可见肿瘤直径约5mm左右；此后肿瘤生长缓慢，直到接种后第17天，注射第二针MBP-Muc1-N；此后接种后第20天、24天、27天、31天(分别间隔3天、4天、3天、4天)注射第三、第四、第五、第六针MBP-Muc1-N。注射第二、第三、第四、第五、第六针MBP-Muc1-N后可见肿瘤生长受到显著抑制。
从表3可见，MBP-MUC1-N融合蛋白对于胰腺癌的抑制率随着注射MBP-Muc1-N的次数和时间显著增加，在接种后第31天对于胰腺癌的抑制率达到45％，第33天抑制率高达57％。
综上可见，本发明通过改造后的融合蛋白MBP-Muc1-N动物实验，测定改造后的融合蛋白对于不同浓度的胰腺癌细胞生长均具有显著的抑制作用，在第一次注射后就开始起作用，可以长达50天，肿瘤都生长缓慢；随后针对大体积的肿瘤进行抑制，抑制率高达43％以上；而在每周给药两次的方案中，在第33天测量时，肿瘤抑制率甚至高达57％，由此说明，本发明的融合蛋白MBP-Muc1-N能够有效预防和/或治疗胰腺癌。
以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 元本（珠海横琴）生物科技有限公司
<120> 一种抗胰腺癌的疫苗、及其医药用途
<130> 2021
<160> 7
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 140
<212> PRT
<213> 未知
<400> 1
Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala
1 5 10 15
Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro
20 25 30
Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr
35 40 45
Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser
50 55 60
Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His
65 70 75 80
Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala
85 90 95
Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro
100 105 110
Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr
115 120 125
Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His
130 135 140
<210> 2
<211> 420
<212> DNA
<213> 未知
<400> 2
ggtgtcacct cggccccgga caccaggccg gccccgggct ccaccgcccc cccagcccac 60
ggtgtcacct cggccccgga gagcaggccg gccccgggct ccaccgcccc cccagcccac 120
ggtgtcacct cggccccgga gagcaggccg gccccgggct ccaccgcgcc cgcagcccac 180
ggtgtcacct cggccccgga gagcaggccg gccccgggct ccaccgcgcc cgcagcccac 240
ggtgtcacct cggccccgga gagcaggccg gccccgggct ccaccgcccc ccgagcccac 300
ggtgtcacct cggccccgga caccaggccg gccccgggct ccaccgcccc cccagcccac 360
ggtgtcacct cggccccgga caccaggccg gccccgggct ccaccgcccc cccagcccac 420
<210> 3
<211> 420
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 3
ggtgttactt ctgctcctga tactcgtcct gctcctggtt ctactgcacc gccagcacat 60
ggcgtgacgt ctgcgccaga tacccgtccg gcaccgggtt ccaccgcccc accggcacac 120
ggcgtaacct ccgcgccaga cacccgtcca gcgccaggtt ctaccgctcc gcctgctcat 180
ggtgttacct ctgccccgga cactcgtccg gctccaggtt ctactgcccc gccagctcat 240
ggcgtcactt ccgccccgga tacccgtcct gccccgggct ctactgcgcc tccggctcac 300
ggcgttacct ctgcaccgga tactcgtccg gctccgggct ctaccgcacc acctgctcat 360
ggcgtaacga gcgctcctga tacccgtccg gctccgggtt ccactgcacc tccggcccac 420
<210> 4
<211> 388
<212> PRT
<213> 未知
<400> 4
Lys Ile Glu Glu Gly Lys Leu Val Ile Trp Ile Asn Gly Asp Lys Gly
1 5 10 15
Tyr Asn Gly Leu Ala Glu Val Gly Lys Lys Phe Glu Lys Asp Thr Gly
20 25 30
Ile Lys Val Thr Val Glu His Pro Asp Lys Leu Glu Glu Lys Phe Pro
35 40 45
Gln Val Ala Ala Thr Gly Asp Gly Pro Asp Ile Ile Phe Trp Ala His
50 55 60
Asp Arg Phe Gly Gly Tyr Ala Gln Ser Gly Leu Leu Ala Glu Ile Thr
65 70 75 80
Pro Asp Lys Ala Phe Gln Asp Lys Leu Tyr Pro Phe Thr Trp Asp Ala
85 90 95
Val Arg Tyr Asn Gly Lys Leu Ile Ala Tyr Pro Ile Ala Val Glu Ala
100 105 110
Leu Ser Leu Ile Tyr Asn Lys Asp Leu Leu Pro Asn Pro Pro Lys Thr
115 120 125
Trp Glu Glu Ile Pro Ala Leu Asp Lys Glu Leu Lys Ala Lys Gly Lys
130 135 140
Ser Ala Leu Met Phe Asn Leu Gln Glu Pro Tyr Phe Thr Trp Pro Leu
145 150 155 160
Ile Ala Ala Asp Gly Gly Tyr Ala Phe Lys Tyr Glu Asn Gly Lys Tyr
165 170 175
Asp Ile Lys Asp Val Gly Val Asp Asn Ala Gly Ala Lys Ala Gly Leu
180 185 190
Thr Phe Leu Val Asp Leu Ile Lys Asn Lys His Met Asn Ala Asp Thr
195 200 205
Asp Tyr Ser Ile Ala Glu Ala Ala Phe Asn Lys Gly Glu Thr Ala Met
210 215 220
Thr Ile Asn Gly Pro Trp Ala Trp Ser Asn Ile Asp Thr Ser Lys Val
225 230 235 240
Asn Tyr Gly Val Thr Val Leu Pro Thr Phe Lys Gly Gln Pro Ser Lys
245 250 255
Pro Phe Val Gly Val Leu Ser Ala Gly Ile Asn Ala Ala Ser Pro Asn
260 265 270
Lys Glu Leu Ala Lys Glu Phe Leu Glu Asn Tyr Leu Leu Thr Asp Glu
275 280 285
Gly Leu Glu Ala Val Asn Lys Asp Lys Pro Leu Gly Ala Val Ala Leu
290 295 300
Lys Ser Tyr Glu Glu Glu Leu Val Lys Asp Pro Arg Ile Ala Ala Thr
305 310 315 320
Met Glu Asn Ala Gln Lys Gly Glu Ile Met Pro Asn Ile Pro Gln Met
325 330 335
Ser Ala Phe Trp Tyr Ala Val Arg Thr Ala Val Ile Asn Ala Ala Ser
340 345 350
Gly Arg Gln Thr Val Asp Glu Ala Leu Lys Asp Ala Gln Thr Asn Ser
355 360 365
Ser Ser Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Leu Gly Ile Glu
370 375 380
Gly Arg Ile Ser
385
<210> 5
<211> 1164
<212> DNA
<213> 未知
<400> 5
aaaatcgaag aaggtaaact ggtaatctgg attaacggcg ataaaggcta taacggtctc 60
gctgaagtcg gtaagaaatt cgagaaagat accggaatta aagtcaccgt tgagcatccg 120
gataaactgg aagagaaatt cccacaggtt gcggcaactg gcgatggccc tgacattatc 180
ttctgggcac acgaccgctt tggtggctac gctcaatctg gcctgttggc tgaaatcacc 240
ccggacaaag cgttccagga caagctgtat ccgtttacct gggatgccgt acgttacaac 300
ggcaagctga ttgcttaccc gatcgctgtt gaagcgttat cgctgattta taacaaagat 360
ctgctgccga acccgccaaa aacctgggaa gagatcccgg cgctggataa agaactgaaa 420
gcgaaaggta agagcgcgct gatgttcaac ctgcaagaac cgtacttcac ctggccgctg 480
attgctgctg acgggggtta tgcgttcaag tatgaaaacg gcaagtacga cattaaagac 540
gtgggcgtgg ataacgctgg cgcgaaagcg ggtctgacct tcctggttga cctgattaaa 600
aacaaacaca tgaatgcaga caccgattac tccatcgcag aagctgcctt taataaaggc 660
gaaacagcga tgaccatcaa cggcccgtgg gcatggtcca acatcgacac cagcaaagtg 720
aattatggtg taacggtact gccgaccttc aagggtcaac catccaaacc gttcgttggc 780
gtgctgagcg caggtattaa cgccgccagt ccgaacaaag agctggcaaa agagttcctc 840
gaaaactatc tgctgactga tgaaggtctg gaagcggtta ataaagacaa accgctgggt 900
gccgtagcgc tgaagtctta cgaggaagag ttggtgaaag atccgcgtat tgccgccact 960
atggaaaacg cccagaaagg tgaaatcatg ccgaacatcc cgcagatgtc cgctttctgg 1020
tatgccgtgc gtactgcggt gatcaacgcc gccagcggtc gtcagactgt cgatgaagcc 1080
ctgaaagacg cgcagactaa ttcgagctcg aacaacaaca acaataacaa taacaacaac 1140
ctcgggatcg agggaaggat ttca 1164
<210> 6
<211> 1164
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 6
aaaatcgaag aaggcaaact ggtgatctgg atcaacggtg ataagggtta taacggtctg 60
gcggaagtag gcaagaaatt cgaaaaagac accggtatca aagttaccgt tgaacatcca 120
gacaaactgg aagaaaaatt ccctcaggtg gcggctaccg gcgacggccc tgatatcatt 180
ttctgggcac atgatcgttt tggcggttac gcgcagtctg gcctgctggc agaaatcacg 240
ccggataagg cgttccagga caaactgtac ccttttacct gggacgcggt gcgttacaac 300
ggcaaactga tcgcttaccc gatcgcagtg gaagctctgt ccctgatcta caataaggac 360
ctgctgccga acccgcctaa aacgtgggaa gaaatcccgg ccctggacaa agaactgaaa 420
gcaaaaggta agagcgctct gatgttcaat ctgcaggaac cgtacttcac ttggccgctg 480
atcgcagctg acggcggtta tgcgtttaaa tacgaaaacg gtaaatatga cattaaggac 540
gtcggcgttg ataacgccgg cgccaaagcg ggcctgacct ttctggtcga cctgatcaaa 600
aacaaacaca tgaacgctga caccgattat tctattgcgg aggcggcttt taacaagggc 660
gagaccgcaa tgaccatcaa cggtccgtgg gcttggtcta acatcgacac ctccaaagta 720
aattacggtg ttaccgtcct gccgaccttc aaaggtcaac cgagcaaacc gttcgtgggc 780
gtgctgtccg caggtatcaa cgctgcctcc ccaaacaaag agctggccaa agagttcctg 840
gaaaactatc tgctgaccga cgaaggcctg gaagctgtta ataaagacaa accgctgggt 900
gctgttgcac tgaaatccta tgaagaagaa ctggtcaaag atccgcgtat tgccgccact 960
atggagaacg cgcagaaagg tgaaatcatg ccgaacatcc cgcaaatgtc cgctttttgg 1020
tacgcggtgc gtaccgctgt aattaacgcg gcgtccggtc gtcagactgt cgatgaagcg 1080
ctgaaagatg ctcagactaa ctctagctct aacaataaca ataataacaa caacaacaat 1140
ctgggtattg aaggtcgcat ctct 1164
<210> 7
<211> 528
<212> PRT
<213> 人工合成
<400> 7
Lys Ile Glu Glu Gly Lys Leu Val Ile Trp Ile Asn Gly Asp Lys Gly
1 5 10 15
Tyr Asn Gly Leu Ala Glu Val Gly Lys Lys Phe Glu Lys Asp Thr Gly
20 25 30
Ile Lys Val Thr Val Glu His Pro Asp Lys Leu Glu Glu Lys Phe Pro
35 40 45
Gln Val Ala Ala Thr Gly Asp Gly Pro Asp Ile Ile Phe Trp Ala His
50 55 60
Asp Arg Phe Gly Gly Tyr Ala Gln Ser Gly Leu Leu Ala Glu Ile Thr
65 70 75 80
Pro Asp Lys Ala Phe Gln Asp Lys Leu Tyr Pro Phe Thr Trp Asp Ala
85 90 95
Val Arg Tyr Asn Gly Lys Leu Ile Ala Tyr Pro Ile Ala Val Glu Ala
100 105 110
Leu Ser Leu Ile Tyr Asn Lys Asp Leu Leu Pro Asn Pro Pro Lys Thr
115 120 125
Trp Glu Glu Ile Pro Ala Leu Asp Lys Glu Leu Lys Ala Lys Gly Lys
130 135 140
Ser Ala Leu Met Phe Asn Leu Gln Glu Pro Tyr Phe Thr Trp Pro Leu
145 150 155 160
Ile Ala Ala Asp Gly Gly Tyr Ala Phe Lys Tyr Glu Asn Gly Lys Tyr
165 170 175
Asp Ile Lys Asp Val Gly Val Asp Asn Ala Gly Ala Lys Ala Gly Leu
180 185 190
Thr Phe Leu Val Asp Leu Ile Lys Asn Lys His Met Asn Ala Asp Thr
195 200 205
Asp Tyr Ser Ile Ala Glu Ala Ala Phe Asn Lys Gly Glu Thr Ala Met
210 215 220
Thr Ile Asn Gly Pro Trp Ala Trp Ser Asn Ile Asp Thr Ser Lys Val
225 230 235 240
Asn Tyr Gly Val Thr Val Leu Pro Thr Phe Lys Gly Gln Pro Ser Lys
245 250 255
Pro Phe Val Gly Val Leu Ser Ala Gly Ile Asn Ala Ala Ser Pro Asn
260 265 270
Lys Glu Leu Ala Lys Glu Phe Leu Glu Asn Tyr Leu Leu Thr Asp Glu
275 280 285
Gly Leu Glu Ala Val Asn Lys Asp Lys Pro Leu Gly Ala Val Ala Leu
290 295 300
Lys Ser Tyr Glu Glu Glu Leu Val Lys Asp Pro Arg Ile Ala Ala Thr
305 310 315 320
Met Glu Asn Ala Gln Lys Gly Glu Ile Met Pro Asn Ile Pro Gln Met
325 330 335
Ser Ala Phe Trp Tyr Ala Val Arg Thr Ala Val Ile Asn Ala Ala Ser
340 345 350
Gly Arg Gln Thr Val Asp Glu Ala Leu Lys Asp Ala Gln Thr Asn Ser
355 360 365
Ser Ser Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Leu Gly Ile Glu
370 375 380
Gly Arg Ile Ser Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro
385 390 395 400
Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr
405 410 415
Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser
420 425 430
Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His
435 440 445
Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala
450 455 460
Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro
465 470 475 480
Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr
485 490 495
Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser
500 505 510
Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His
515 520 525

Claims (3)

1.一种融合蛋白在制备用于预防和/或***药物中的用途，其特征在于，所述肿瘤为胰腺癌；所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。
2.MBP基因和MUC1-N基因在制备预防和/或治疗胰腺癌药物中的用途，其特征在于，所述MUC1-N基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述MBP基因如SEQ ID NO.6所示，所述MBP基因和MUC1-N基因串联表达如SEQ ID NO.7所述融合蛋白。
3.如权利要求2所述的用途，所述MBP基因和MUC1-N基因串联在大肠杆菌中表达如SEQID NO.7所述融合蛋白。
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