CN116004400B - 一种红托竹荪菌株黔pr23及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种红托竹荪(Dictyophora rubrovolvata)菌株黔PR23，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC NO.40103。本发明还公开了黔PR23在食品、保健品和饮料中的用途。本发明黔PR23子实体朵型大，鲜菇单重为71.5g，且菌柄菌裙洁白，菌柄圆柱形且空心，菌裙呈钟形，商品价值高；其次，黔PR23栽培产量高，其亩产量平均为1311kg，经济效益高；黔PR23栽培周期短，黔PR23从播种到开始出菇采收的最短周期为70天左右，管理成本低；黔PR23栽培用种量少，其栽培用种量为4000棒/亩，显著低于现有品种。

Description

一种红托竹荪菌株黔PR23及其应用

技术领域

本发明属于食用菌领域，具体涉及一种红托竹荪菌株，还涉及该红托竹荪菌株的用途。

背景技术

红托竹荪(拉丁学名：Dictyophora rubrovolvata)属于竹荪属红托竹荪种。因形态优美，又有“菌中皇后”的美誉。红托竹荪味道鲜美，质地脆嫩，含有丰富的氨基酸、维生素以及多种矿物元素。此外，从红托竹荪中提取的多糖物质和其他活性物质，具有抗肿瘤、抗氧化、抗菌、降血脂和免疫调节等生理活性功能，其抗癌活性远优于冬虫夏草和香菇等，因此红托竹荪的营养价值和经济价值较高。

目前，我国红托竹荪生产中存在的主要问题是：(1)品种少。(2)红托竹荪菌丝生长速度慢，栽培周期长。目前主栽的红托竹荪菌株从播种到第一茬出菇采收的栽培周期普遍为90～120天，栽培周期长意味着更高的管理成本，以及面临更多的气候风险。(3)产量低。目前红托竹荪品种的亩产量一般为400-600kg。(4)子实体朵型小，商品价值相对较低。目前，市场上销售的红托竹荪以干品为主，烘干后子实体会缩小，较大的朵型烘干后，商品价值更高。因此，培育性状稳定、出菇快、栽培周期短、产量高、朵型优良的红托竹荪品种，对红托竹荪产业稳定发展十分重要。

发明内容

针对目前红托竹荪生产中存在的产量低、栽培周期长等问题，本发明目的在于提供一种红托竹荪菌株。

本发明另一目的在于提供上述红托竹荪菌株的栽培方法。

本发明第三目的在于提供上述红托竹荪的用途。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

本发明提供一种红托竹荪(Dictyophora rubrovolvata)菌株黔PR23，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC NO.40103，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2022年2月17日。

本发明还提供上述菌株黔PR23在食品或保健品中的应用。

本发明还提供一种食品或保健品，所述的食品或保健品中含有上述菌株黔PR23或黔PR23的提取物。

本发明还提供上述菌株黔PR23在饮料中的应用。

本发明还提供一种饮料，所述的饮料中含有上述菌株黔PR23或黔PR23的提取物。

本发明还提供上述菌株黔PR23在制备提高人体免疫力药物上的应用。

本发明还提供一种红托竹荪基因工程菌，所述的红托竹荪基因工程菌的出发菌株为上述菌株黔PR23。

上述红托竹荪菌株黔PR23的栽培方法，包括如下步骤：

(1)母种培养：用灭菌冷却后的接种钩将5mm×5mm的黔PR23菌种块接种于母种培养基平板中央，在23℃、空气相对湿度65～75％、避光条件下培养30天，得黔PR23母种；

(2)原种培养：用灭菌冷却后的菌种铲挖取步骤(1)中所得黔PR23母种，按照1:30的质量比比例接种于原种培养基上，在18℃、空气相对湿度65～75％，避光条件下培养50天，菌丝长满菌袋，得黔PR23原种；

(3)栽培种培养：用灭菌冷却后的菌种铲挖取步骤(2)中所得黔PR23原种，按照1:30的质量比比例接种于栽培种培养基上，在18℃、空气相对湿度60～75％，避光条件下培养50天，菌丝长满菌袋，得黔PR23栽培种；

(4)开厢播种与覆膜：选择pH为6～6.5且土质较细的温室大棚内耕地，清除杂草后翻耕土壤开畦，畦面高5cm、宽40cm、长10米，两个畦面间留60cm走道，土壤含水量45％，用小刀将步骤(3)得到的黔PR23栽培种的菌袋表面划开，脱除菌袋，取出圆柱形栽培种棒，顺着畦面宽度摆放栽培种棒，棒身1/3没入畦面，棒与棒之间间隔8～10cm，每亩耕地摆放4000棒栽培种，播种后立刻均匀覆盖一层土，覆土深度5cm，覆土后盖上黑色聚丙烯膜；

(5)菌丝培养与原基分化：黔PR23播种后，棚内气温控制在20～25℃，空气相对湿度80～85％，土壤含水量60～65％，光照强度100～200lux，培养20天，菌丝在土壤中大量生长，菌丝接近覆土表面时，揭开黑色聚丙烯膜，用消过毒的松针覆盖2～3cm厚，再培养10天，菌丝分化形成菌索，菌索顶端扭结形成原基；

(6)出菇管理和采收：原基进一步生长形成竹荪蛋，竹荪蛋生长阶段温度控制在15～22℃，空气相对湿度70～80％，土壤含水量50～60％，光照强度500～800lux，自然通风，竹荪蛋40天可以成熟，成熟竹荪蛋从顶部长出竹荪子实体只需2～8小时；菌柄伸长后当菌裙伸出2～3cm时及时采收；用小刀割断菌索，去掉菌盖菌、菌托，只留菌柄和菌裙。

上述方法步骤(1)中所述的母种培养基的组成成分及其比例为：去皮马铃薯200g取汁，葡萄糖20g，琼脂20g，黄豆粉10g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁1g，混匀后用纯净水定容至1000mL，pH自然。

所述的母种培养基的制备方法：将马铃薯200g去皮切成1cm左右方块，放入800mLRO水中煮沸20min，3层纱布过滤取浸提液，再加入葡萄糖20g，琼脂20g，黄豆粉10g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁1g，用纯净水定容至1000mL，121℃灭菌30min，倒入直径9cm平板，备用。

上述方法步骤(2)中所述原种培养基和步骤(3)中所述栽培种培养基的组成成分及其重量百分比比例为：木屑72％，麦麸20％，黄豆粉2％，玉米粉2％，蔗糖2％，石膏1％，硫酸镁0.5％，磷酸二氢钾0.5％，培养基含水量60％。

所述步骤(2)中原种培养基和步骤(3)中栽培种培养基的制备方法：按重量比例取：木屑72％，麦麸20％，黄豆粉2％，玉米粉2％，蔗糖2％，石膏1％，硫酸镁0.5％，磷酸二氢钾0.5％，混合均匀，然后按照比例加水，搅拌均匀，装入聚丙烯塑料袋(16cm×35cm×0.005cm)后聚丙烯绳扎口，121℃灭菌2小时冷却备用。

本发明具有的优点和有益技术效果：本发明红托竹荪菌株黔PR23菌柄菌裙洁白，菌柄圆柱形且空心，菌裙呈钟形，商品价值高。(2)本发明菌株黔PR23子实体朵型大，其平均鲜菇单重为71.5g，明显高于现有红托竹荪品种的40～60g的鲜菇单重。(3)本发明菌株黔PR23栽培产量高。本发明菌株黔PR23的亩产量平均为1311kg，明显高于现有主栽红托竹荪品种的400～600kg的亩产量，经济效益高。(4)黔PR23栽培周期短。黔PR23从播种到开始出菇采收的最短周期为70天左右，明显比现有红托竹荪品种的90～120天栽培周期短。(5)用种量少。现有红托竹荪品种的栽培种用量一般为5000～6000棒/亩，而本发明黔PR23的栽培用种量为4000棒/亩，显著低于其他品种。

生物保藏：本发明红托竹荪(拉丁学名：Dictyophora rubrovolvata)菌株名称为黔PR23是本发明人于2017年5月在贵州省毕节市织金县地区采集，并经筛选、驯化培育而成；该菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCCNo.40103，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2022年2月17日。

附图说明

图1.本发明红托竹荪黔PR23的子实体照片。

图2.本发明红托竹荪黔PR23的***发育树图。

具体实施方式

以下通过具体实施例对本发明作进一步说明，但是对本发明不构成任何限制。

实施例1本发明红托竹荪黔PR23的采集、分离驯化过程：

2017年5月，本发明人在贵州省毕节市织金地区，野外采集多株红托竹荪子实体，通过子实体组织分离得到菌丝(菌种)；将组织分离后的菌种进行栽培出菇试验，再对朵型良好的子实体进行菌种分离，于PDA培养基上进行培养，筛选菌丝生长速度快，长势均匀的菌株，继续栽培人工驯化，经过数代培养，反复验证其性状稳定性，最终筛选出一个遗传性状稳定、朵型大、出菇周期短且产量高的红托竹荪菌株，命名为：黔PR23。

实施例2本发明黔PR23的分类鉴定

(1)黔PR23的形态学鉴定：

菌蕾单生或簇生，直径3～6cm，重量53～158g，成熟的子实体由菌柄、菌盖、菌裙、和菌托组成。菌柄白色，柱状海绵体、嫩脆、柄中空，顶部稍小，长13～20cm，直径3～6cm。菌裙网状、白色，网眼圆形、椭圆形或多角形，长7～10cm，下摆直径6～9cm。菌盖呈钟形，孢体附着在菌盖表面呈暗绿色或青褐色。菌托***，高3～5cm，直径4～7cm。担孢子4～5×1.5～2μm，椭圆形。根据《中国大型菌物资源图鉴》(李玉、李泰辉等，中原农民出版社，2015)中第1166页有关红托竹荪的相应形态特征特征描述及照片，黔PR23与红托竹荪的形态特征一致，说明黔PR23属于竹笋属红托竹荪种(Dictyophora rubrovolvata)。

(2)黔PR23分子生物学鉴定

采用北京康为世纪公司的新型植物基因组DNA提取试剂盒CW0531，按照其说明书提取黔PR23菌株的总DNA，以通用引物ITS5和ITS4为引物进行PCR扩增。其中所述的引物为：

ITS5：5'-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3'，

ITS4：5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'。

ITS-PCR扩增体系为总体积20μL：20-50ng/μL的DNA模板1μL，10×Buffer(withMg²⁺)2μL，2.5mM dNTP 0.5μL，5U/μl DNA聚合酶0.2μL，0.2μM引物各0.5μL，加双蒸水至20μL。反应条件为：预变性94℃4min；94℃30s，56℃30s，72℃1min，35个循环；72℃延伸10min。结果扩增出长度为564bp的DNA分子片段，送交上海生工进行测序，将测序所得黔PR23的ITS序列(见SEQ ID No.1)在GeneBank进行BLAST比对，并构建***发育树。

结果(见图2)菌株黔PR23菌株与红托竹荪的ITS序列相似性最高，可达98.77％。说明本发明菌株黔PR23在分类上属于竹笋属红托竹荪种(Dictyophora rubrovolvata)；且该菌株与任何已知的红托竹荪菌株不同，是一个新菌株。

实施例3本发明黔PR23的人工栽培试验

(1)母种培养：用灭菌冷却后的接种钩将5mm×5mm的黔PR23菌种(本菌种已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC NO.40103，保藏日期为2022年2月17日)接种于母种培养基平板中央，在23℃、空气相对湿度65～75％、避光条件下培养30天，得黔PR23母种；所述母种培养基按照如下方法制备：将马铃薯200g去皮切成1cm左右方块，放入700mL RO水中煮沸30min，4层纱布过滤取浸提液，再加入葡萄糖20g，琼脂粉20g，黄豆粉10g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁1g，用RO水定容至1000mL，121℃灭菌30min，倒入直径9cm平板，备用。

(2)原种培养：用灭菌冷却后的菌种铲挖取步骤(1)中所得黔PR23母种，按照1:30的质量比比例接种于原种培养基上，在18℃、空气相对湿度65～75％，避光条件下培养50天，菌丝长满菌袋，得黔PR23原种；所述原种培养基的组成成分及其重量百分比为：木屑72％，麦麸20％，黄豆粉2％，玉米粉2％，蔗糖2％，石膏1％，硫酸镁0.5％，磷酸二氢钾0.5％。制备时将各组分混合均匀，然后按照比例加水，搅拌均匀，装入聚丙烯塑料袋(16cm×35cm×0.005cm)后聚丙烯绳扎口，121℃灭菌2小时冷却备用。

(3)栽培种培养：用灭菌冷却后的菌种铲挖取步骤(2)中所得黔PR23原种，按照1:30的质量比比例接种于栽培种培养基上，在18℃、空气相对湿度60～75％，避光条件下培养50天，菌丝长满菌袋，得黔PR23栽培种；所述栽培种培养基的组成成分及其重量百分比与步骤(2)的原种培养基相同，制备方法亦与步骤(2)相同。

(4)开厢播种与覆膜：选择pH为5.5～6.5且土质较细的温室大棚内耕地，清除杂草后翻耕土壤开畦，畦面高5cm、宽40cm、长10米，两个畦面间留60cm走道，土壤含水量45％，用小刀将步骤(3)得到的栽培种的菌袋表面划开，脱除菌袋，取出圆柱形栽培种棒，顺着畦面宽度摆放栽培种棒，棒身1/3没入畦面，棒与棒之间间隔8～10cm，每亩耕地摆放4000棒栽培种，播种后立刻均匀覆盖一层土，覆土深度5cm，覆土后盖上黑色聚丙烯膜。

(5)菌丝培养与原基分化：黔PR23播种后，棚内气温控制在20～25℃，空气相对湿度80～85％，土壤含水量60～65％，光照强度100～200lux，培养20天，竹荪菌丝在土壤中大量生长，菌丝接近覆土表面时，揭开黑色聚丙烯膜，覆盖用消过毒的松针覆盖2～3cm厚，再培养10天，菌丝分化形成菌索，菌索顶端扭结形成原基。

(6)出菇管理和采收：原基进一步生长形成竹荪蛋，竹荪蛋生长阶段温度控制在15～22℃，空气相对湿度70～80％，土壤含水量50～60％，光照强度500～800lux，自然通风，竹荪蛋40天左右可以成熟。成熟竹荪蛋从顶部长出竹荪子实体只需2～8小时，菌柄伸长后当菌裙伸出2～3cm时及时采收。用干净的刀片割断菌索，不要沾上底部泥土，采收后去掉菌盖菌、菌托，只留菌柄、菌裙，完成采收。

对采收的红托竹荪进行观测、测产和营养检测。

结果(见图1)本发明红托竹荪菌株黔PR23菌柄菌裙洁白，菌柄圆柱形且空心，菌裙呈钟形，朵型较大，黔PR23鲜菇平均单重71.5g，明显高于现有红托竹荪品种40～60g的鲜菇单重，故黔PR23商品价值高；其次，本发明红托竹荪菌株黔PR23产量高，其平均亩产量为1311kg，相当于市场现有红托竹荪品种400～600kg亩产量的2-3倍；黔PR23的栽培周期短，从播种到开始出菇采收的周期为70天左右，明显比现有红托竹荪品种的90～120天栽培周期短，其管理成本低；此外，黔PR23的每亩栽培种用量仅为4000棒，明显比现有红托竹荪菌株的每亩5000～6000棒的用种量低。经检测，本发明红托竹荪菌株黔PR23的干菇的粗多糖含量为3.02％，粗蛋白含量为24.20％，粗脂肪含量为1.31％，说明本发明红托竹荪菌株黔PR23的营养价值高，可用于开发附加值高的产品，开发前景广阔。

Claims (4)

1.一种红托竹荪（Dictyophora rubrovolvata）菌株黔PR23，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.40103。

2.权利要求1所述的菌株黔PR23的栽培方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）母种培养：用灭菌冷却后的接种钩将5mm×5mm的黔PR23菌种块接种于母种培养基平板中央，在23℃、空气相对湿度65～75%、避光条件下培养30 天，得黔PR23母种；

（2）原种培养：用灭菌冷却后的菌种铲挖取步骤（1）中所得黔PR23母种，按照1:30的质量比比例接种于原种培养基上，在18℃、空气相对湿度65～75%，避光条件下培养50天，菌丝长满菌袋，得黔PR23原种；

（3）栽培种培养：用灭菌冷却后的菌种铲挖取步骤（2）中所得黔PR23原种，按照1:30的质量比比例接种于栽培种培养基上，在18℃、空气相对湿度60～75%，避光条件下培养50天，菌丝长满菌袋，得黔PR23栽培种；

（4）开厢播种与覆膜：选择pH为6～6.5且土质较细的温室大棚内耕地，清除杂草后翻耕土壤开畦，畦面高5cm、宽40cm、长10米，两个畦面间留60cm走道，土壤含水量45%，用小刀将步骤（3）得到的黔PR23栽培种的菌袋表面划开，脱除菌袋，取出圆柱形栽培种棒，顺着畦面宽度摆放栽培种棒，棒身1/3没入畦面，棒与棒之间间隔8～10cm，每亩耕地摆放4000棒栽培种，播种后立刻均匀覆盖一层土，覆土深度5cm，覆土后盖上黑色聚丙烯膜；

（5）菌丝培养与原基分化：黔PR23播种后，棚内气温控制在20～25℃，空气相对湿度80～85%，土壤含水量60～65%，光照强度100～200lux，培养20天，菌丝在土壤中大量生长，菌丝接近覆土表面时，揭开黑色聚丙烯膜，用消过毒的松针覆盖2～3cm厚，再培养10天，菌丝分化形成菌索，菌索顶端扭结形成原基；

（6）出菇管理和采收：原基进一步生长形成竹荪蛋，竹荪蛋生长阶段温度控制在15～22℃，空气相对湿度70～80%，土壤含水量50～60%，光照强度500～800lux，自然通风，竹荪蛋40天可以成熟，成熟竹荪蛋从顶部长出竹荪子实体只需2～8小时；菌柄伸长后当菌裙伸出2～3cm时及时采收；用小刀割断菌索，去掉菌盖菌、菌托，只留菌柄和菌裙。

3.根据权利要求2所述的栽培方法，其特征在于，其步骤（1）中所述的母种培养基的组成成分及其比例为：去皮马铃薯200g取汁，葡萄糖20g，琼脂20g，黄豆粉10g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁1g，混匀后用纯净水定容至1000mL，pH自然。

4.根据权利要求2所述的栽培方法，其特征在于，其步骤（2）中所述原种培养基和步骤（3）中所述栽培种培养基的组成成分及其重量百分比比例为：木屑72%，麦麸20%，黄豆粉2%，玉米粉2%，蔗糖2%，石膏 1%，硫酸镁0.5%，磷酸二氢钾0.5%，培养基含水量60%。