CN115927066B - 一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌及其应用 - Google Patents

Abstract

一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌及其应用，属于农业生物防治技术领域。为开发生物防治的安全高效的生防微生物，本发明所述生防芽胞杆菌的分类命名为贝莱斯芽胞杆菌(Bacillusvelezensis)，于2022年8月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNo.25497，具有抑菌范围广、拮抗作用强、促生效果明显的特点，能够有效抑制尖孢镰刀菌引起的枯萎病、番茄灰霉病菌、黄瓜枯萎病菌等作物致病菌的生长，促进番茄种子发芽，促进胚根生长、促进幼苗植株生长量和根系的发育；能分泌蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、嗜铁素。

Description

一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌及其应用

技术领域

本发明属于微生物技术领域；具体涉及一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌及其应用。

背景技术

尖孢镰刀菌(F.oxysporum)是一种世界性分布的土传病原真菌，寄主范围广泛，可引起瓜类、茄科、香蕉、棉、豆科及花卉等100多种植物枯萎病的发生。尖孢镰刀菌属半知菌类(Imperfecti fungi)、从梗孢目(Moniliales)、瘤座孢科(Tuberculariaceae)、镰刀菌属(Fusarium)尖孢镰刀菌在植株根部维管束中定殖，导致导管堵塞，地上部分枯萎，根表皮产生褐色坏死斑，后期根部腐烂甚至整株植株死亡，严重影响植物的生长发育、产量以及品质。目前，针对尖孢镰刀菌引起的枯萎病的防治，主要以化学试剂为主，已有研究表明部分化学农药的作用逐渐减弱，甚至病原菌对混合使用的化学农药产生抗药性。而且随着化学农药的大量使用，化学制剂残留于土壤，造成土壤自然环境失衡，影响人们身体健康，因此生物防治技术显得有位重要。但目前，针对番茄病害的生物防治技术仍存在一些问题，仍需要开发更安全、高效、防治效果稳定的生防微生物用于尖孢镰刀菌的防治。

发明内容

为开发对尖孢镰刀菌防效更高效、稳定的生防微生物，本发提供了一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌及其应用。

本发明通过以下技术方案实现：

一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌，所述生防芽孢杆菌的分类命名为贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis)，于2022年8月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.25497。

进一步的，所述贝莱斯芽胞杆菌的16S rDNA的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示，所述贝莱斯芽胞杆菌的型号为Y-4。

进一步的，所述一种防治尖孢镰刀菌的贝莱斯芽胞杆菌在蛋白酶检测、纤维素酶、嗜铁素检测平板上培养3d-7d后分泌蛋白酶、纤维素酶、嗜铁素，并且产生生长素IAA，形成生物膜。

一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌的应用，依托于所述的一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌实现，在农业生物防治方面的应用。

进一步的，所述农业生物防治包括将所述贝莱斯芽胞杆菌用于防治尖孢镰刀菌引起的枯萎病、番茄灰霉病、黄瓜炭疽病、黄瓜枯萎病、轮支镰刀菌、葵花菌核病菌或木贼镰刀菌引起的作物病害，所述应用的具体方法是使用所述贝莱斯芽胞杆菌Y-4菌悬液喷施于植株表面。

进一步的，所述贝莱斯芽胞杆菌Y-4菌悬液的制备方法为：采集所述贝莱斯芽胞杆菌的单菌落接种于无菌LB培养液中，28℃、200r/min培养2d得到菌液浓度为1×10⁸cfu/mL的菌悬液。

一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌的应用，依托于所述的一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌实现，所述对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌在农作物种子及幼苗促生方面的应用。

进一步的，所述应用的具体方法是使用稀释500倍的所述贝莱斯芽胞杆菌菌悬液浸泡处理农作物种子。

进一步的，所述贝莱斯芽胞杆菌Y-4菌悬液的制备方法为：采集所述贝莱斯芽胞杆菌的单菌落接种于无菌LB培养液中，28℃、200r/min培养2d得到菌液浓度为1×10⁸cfu/mL的菌悬液。

本发明所述的一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌，在胞外酶检测平板上的显色情况是使用所述的贝莱斯芽胞杆菌接种在蛋白酶、纤维素酶、嗜铁素检测平板上培养3d至7d后均能分泌所检测物质。

本发明的有益效果为：

1、试验以尖孢镰刀菌为病原菌的平板对峙出发，筛选出一株生防细菌Y-4，能够有效抑制尖孢镰刀菌生长，通过形态观察、和16S rDNA序列分析，该菌株鉴定为贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis)。

2、本发明提供的对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的细菌Y-4，抑菌谱广、拮抗作用强，能够有效抑制尖孢镰刀菌引起的枯萎病、番茄灰霉病、黄瓜枯萎病、黄瓜炭疽病、木贼镰刀菌、葵花菌核病菌、轮支镰刀菌的生长，能够广泛应用于农业生物防治领域，可用于防治枯萎病、灰霉病、炭疽病和菌核病等真菌引起的作物病害。

3、本发明提供的贝莱斯芽胞杆菌Y-4能够产生植物生长素IAA；能够分泌蛋白酶、纤维素酶、嗜铁素；能够形成生物膜；不产生HCN。

4、能够产生挥发性物质抑制病原菌生长。

5、菌株Y-4对番茄种子和幼苗有很好的促生效果，对番茄幼苗的形态指标、根系的根长、表面积、节点数、根尖数以及幼苗叶部相关光合参数相对CK组有明显增加。

附图说明

图1为本发明提供的贝莱斯芽胞杆菌Y-4的菌落形态照片；

图2为本发明提供的贝莱斯芽胞杆菌Y-4的显微形态照片；

图3为本发明提供的贝莱斯芽胞杆菌Y-4的16S rDNAPCR扩增产物；

图4为本发明提供的贝莱斯芽胞杆菌Y-4的***发育树；

图5为本发明提供的贝莱斯芽胞杆菌Y-4对6种植物病原菌的抑菌效果照片；

图6为本发明提供的贝莱斯芽胞杆菌Y-4对尖孢镰刀菌的抑菌效果对比照片；

图7为本发明提供的贝莱斯芽胞杆菌Y-4挥发性物质检测结果照片；

图8为本发明提供的贝莱斯芽胞杆菌Y-4的IAA检测结果对比照片；

图9为本发明提供的贝莱斯芽胞杆菌Y-4的蛋白酶、纤维素酶检测结果照片；

图10为本发明提供的贝莱斯芽胞杆菌Y-4的嗜铁素检测结果照片；

图11为本发明提供的贝莱斯芽胞杆菌Y-4的生物膜检测结果照片；

图12为本发明提供的贝莱斯芽胞杆菌Y-4的HCN检测结果照片；

图13为本发明提供的贝莱斯芽胞杆菌Y-4促进番茄种子发芽的效果对比图；

图14为本发明提供的贝莱斯芽胞杆菌Y-4促进番茄胚根3天生长的效果对比图；

图15为本发明提供的贝莱斯芽胞杆菌Y-4促进番茄胚根6天生长的效果对比图；

图16为本发明提供的贝莱斯芽胞杆菌Y-4的对番茄幼苗植株作用后的对比图

图17为本发明提供的贝莱斯芽胞杆菌Y-4对根系指标的影响结果照片；

图18为本发明提供的贝莱斯芽胞杆菌Y-4对番茄幼苗最大光量子效率Fv/Fm的对比图；

图19为本发明提供的贝莱斯芽胞杆菌Y-4对番茄幼苗非光化学猝灭对比图；

图20为本发明提供的贝莱斯芽胞杆菌Y-4对番茄幼苗光化学猝灭qP的实际效率对比图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明的技术方案作进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的保护范围中。

实施例1

一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌，所述生防芽胞杆菌的分类命名为贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis)，于2022年8月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.25497。

进一步的，所述贝莱斯芽胞杆菌的16S rDNA的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示，所述贝莱斯芽胞杆菌的型号为Y-4。

本实施例提供了生防细菌的筛选和鉴定结果。

土样采集：菌株分离材料来西双版纳自治州一公园内。选取植株长势健壮无病害根际周围部位，除去表面土，采集5-10cm深处土样。

菌株的分离：采用平板稀释涂布法从植物的根际土中分离纯化得到多株细菌，以尖孢镰刀菌作为指示菌，采用平板对峙法，获得一株对尖孢镰刀菌均具有拮抗作用的细菌，将其编号为Y-4，对该菌株进行形态特性、生理生化特性及分子生物学鉴定。

(1)形态学特征

将该菌种接种于LB固体培养基上划线培养，28℃培养48h，菌落呈乳白色，油膏状，无褶皱，边缘光滑，中心处微褶皱，不透明，其菌落形态见图1；经显微镜油镜观察，菌株Y-4在革兰氏染色后菌体呈紫色、杆状，为革兰氏阳性，其微观形态见图2。

(2)16SrDNA序列测定及***进化分析：

以Y-4基因组DNA为模板，扩增为16S rDNA的通用引物，得到约1400bp的PCR产物。采用柱式PCR产物，扩增所得片段符合常规的16S rDNA序列长度。如图3所示，对PCR扩增产物进行回收，纯化回收后产物送到北京六合华大基因科技有限公司进行测序。

将菌株Y-4的16S rDNA序列提交到NCBI的GenBanK数据库中并进行Blast比对，并与已报道的序列进行同源性比对。MEGA6.06软件采用Neighbor-Joining法，构建得到由图4所示的菌株Y-4和13株模式菌株的***发育树，经过1000次的相似度重复计算。“T”表示模式菌株。与菌株Y-4同源性较高的为Bacillus velezensis strain Y17W(MT573877)。

(3)生理生化特性

从革兰氏染色、接触酶、淀粉水解、好氧或厌氧性试验、O/F葡萄糖氧化发酵试验鉴定菌株Y-4的生理生化特性。

结果表明菌株Y-4为革兰氏阳性菌、属于好氧型细菌、接触酶、淀粉水解、均为阳性、O/F葡萄糖氧化发酵试验为产碱型细菌。

实施例2

本实施例将实施例1所述的一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌与多种植物病原菌进行抑菌谱试验。

测试植物病原菌包括：番茄灰霉病菌(灰葡萄孢菌)、黄瓜枯萎病、黄瓜炭疽病、木贼镰刀菌、葵花菌核病菌、轮支镰刀菌；均保存于东北农业大学园艺生物技术实验室。

生防细菌Y-4在28℃恒温，200r/min培养48h，得到菌悬液。将斜面培养的6种病原菌取出，用无菌接种针将制作好的5mm病原菌饼，置于灭菌晾干的PDA固体培养有心偏右位置，将无菌牛津倍置于中心偏左位置，用无菌枪头吸取菌悬液80-100ul注射于牛津杯中，封号培养皿平板后，28℃恒温箱培养7d，测量抑菌带宽带。结果如表1和图5所示：

由表1数据可以看出，Y-4对6中植物病原真菌均能产生抑菌带，抑菌距离在0.60cm-0.90cm之间。生防细菌Y-4对上述病原真菌的生长均具有较强的拮抗作用，这充分说明生防细菌Y-4作为生防菌的抑菌谱较广、抑菌作用较强。

表1菌株对峙结果

实施例3

本实施例考察了实施例1所述的一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌Y-4对尖孢镰刀菌的防治效果。

(1)平板对峙效果

将贝莱斯芽胞杆菌Y-4进行28℃恒温，200r/min培养48h，得到菌悬液。将斜面培养的尖孢镰刀菌病原菌取出，挑其菌丝接种在PDA培养基上，待其长满平板后，用无菌接种针将制作好的5mm病原菌饼，置于灭菌晾干的PDA固体培养中心偏右位置，将无菌牛津倍置于中心偏左位置，用无菌枪头吸取菌悬液80-100ul注射于牛津杯中，封好培养皿平板后，28℃恒温箱培养7d，测量抑菌带宽度。如表2，图6所示。

表2平板对峙结果

(2)挥发性平板检测效果

将配置好的LB、PDA固体培养基倒在二分格培养皿一格中，晾干，用接种环挑取Y-4接种于LB培养基一格，尖孢镰刀菌菌块接种于PDA培养基一格，对照只接种尖孢镰刀菌菌块。28℃恒温培养，当对照长满二分格培养皿一半时，观察接种生防菌平皿生长情况。

结果如图7所示，接种有Y-4的二分格培养皿中的尖孢镰刀菌生长受到抑制，说明Y-4可以产生挥发性物质抑制病原菌生长。

实施例4

本实施例对实施例1所述的一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌进行了IAA检测。

配置200mL LB液体培养基，加入1％的L-色氨酸，后接种生防细菌Y-4，在28℃恒温，200rpm/min培养48h。取Y-4菌液于离心管，12000rpm离心10min。取2mL上清液，加入4mLSalkowaski(0.5mol/LFecl₃15 mL，浓硫酸300mL，蒸馏水500mL)试剂，随后加入两滴正磷酸。将混合液于28℃水浴2h，观察溶液是否变色，若变色则说明生防菌能分泌IAA。试验3次重复。结果如图8所示。

实施例5

本实施例对实施例1所述的一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌进行了胞外酶分泌测定和嗜铁素分泌测定。

蛋白酶：配置蛋白酶检测平板，在蛋白酶检测平板中央放直径6mm大小的无菌滤纸片，在滤纸片上滴加2ul培养48h的生防菌悬液，将检测平板放置在28℃恒温培养箱中培养3d，若滤纸片周围有透明晕圈出现，则表明菌株Y-4可以产生蛋白酶，试验三次重复。

纤维素酶：配置纤维素酶检测平板，在纤维素酶检测平板中央放直径6mm大小的无菌滤纸片，在滤纸片上滴加2ul培养48h的生防菌悬液，将检测平板放置在28℃恒温培养箱中培养3d，若滤纸片周围有透明晕圈出现，则表明菌株Y-4可以产生蛋白酶，试验三次重复。

嗜铁素：生防细菌采用嗜铁素固体培养基，晾干培养基中间放置6mm大小无菌滤纸片，滴加2μL生防菌液；28℃，逐日观察是否有橘黄色透明晕圈产生，试验三次重复。

结果如图9、10所示，Y-4菌株能分泌蛋白酶、纤维素酶和嗜铁素。

实施例6

本实施例对实施例1所述的一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌进行了生物膜形成能力和HCN检测。

生物膜：将贝莱斯芽胞杆菌Y-4菌株接种到LB液体培养基，28℃，200rpm/min培养1d。将4mL菌液于无菌试管底部，28℃静置培养2d。弃菌液，用无菌水多次清洗试管内壁，后加入5mL 1％的结晶紫染液，28℃静置15min，弃结晶紫，无菌水清洗三次，试管壁有蓝紫色产生则说明菌株可产生生物膜。结果如图11所示。

在加入结晶紫染液并用无菌水冲洗后，试管壁有蓝紫色环痕形成，表明贝莱斯芽胞杆菌Y-4菌株可以产生生物膜。生防细菌以生物膜形式存在，可以有效发挥生防细菌的促生和抗病等作用。

HCN检测：取10mL菌液于试管，滴加一滴浓硫酸，充分混匀，取HCN试纸浸入溶液中；等待15min，浓度较低时可等待过夜，根据HCN浓度试纸由浅蓝色变为深蓝色，未变色则证明未产生HCN。结果表明贝莱斯芽胞杆菌Y-4补产生HCN。结果如图12所示。

实施例7

本实施例考察了实施例1所述的一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌Y-4对番茄种子和幼苗的促生作用。

(1)对种子发芽率和胚根长度的影响

本实验测定Y-4对番茄种子和幼苗促生的作用，将wz-37(Bacillus velezensis)作为对照组，由东北农业大学园艺园林学院实验室保存，所述贝莱斯芽胞杆菌(Bacillusvelezensis)wz-37已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15766。具体测定方法为：将番茄种子置于55℃温水中，浸泡20min；用75％酒精消毒30s，无菌水冲洗3次；3％次氯酸钠浸泡3min，无菌水冲洗3次。

将Y-4和wz-37分别28℃，200rpm/min培养2d，调节菌液浓度为1×10⁸cfu/mL。后将各组均稀释500倍。生防Y-4和wz-37和无菌水对照每组10mL液体，各浸泡20粒种子，3h后用无菌水冲洗，后将种子摆入种子袋。分别记录48h、72h、96h、120h、144h种子发芽率和3d、6d种子胚根生长量。试验3次重复。结果如图13和图14所示。

图13显示出：不同处理下种子发芽率不同，菌株Y-4与wz-37、CK相比，在48h、72h、96h、120h、144h的种子发芽率均高于对照，其中144h种子发芽率最高为Y-4，发芽率为100％，较对照高30％，比wz-37组高8％，无明显差异。

图14和图15显示出：3d和6d后的Y-4处理的种子胚根长度为5.48cm、7.48cm，均显著高于对照组，说明Y-4在稀释500倍液发酵液对种子发芽率和胚根伸长具有促进作用。

(2)对幼苗形态指标的影响

Y-4菌悬液和无菌水水分别浸泡消毒后的番茄种子3h后，播种于营养钵中。移苗时两处理分别在土壤中注入10mLY-4菌液和等量无菌水，培养30d。记录植株的株高、茎粗、干重、鲜重。结果如表3和图16所示。

表3形态指标

处理组	株高(cm)	茎粗(mm)	鲜重(g)	干重(g)
					Y-4	30.00±0.29a	0.49±0.01a	5.09±0.69a	1.36±0.05a
wz-37	28.23±0.98a	0.41±0.03b	3.64±1.13ab	0.75±0.14b
					CK	23.67±1.62b	0.39±0.01b	3.52±0.92b	0.48±0.11c

结果如表3和图16表明三组处理中株高、茎粗、鲜重、干重数据最高的为Y-4分别为30.00、0.49、5.09、1.36。Y-4与对照组(CK)差异显著、在干重来看Y-4与wz-37差异显著，其余不显著。生防菌悬液的处理对番茄幼苗有良好的促生作用。

(3)番茄幼苗根系指标及形态的影响

Y-4菌悬液和无菌水水分别浸泡消毒后的番茄种子3h后，播种于营养钵中。移苗时两处理分别在土壤中注入10mLY-4菌液和等量无菌水，利用图像分析***测定幼苗根系指数。结果如表4和图17所示。

表4根系指标

如表4和图17所示，番茄幼苗根系长度、根表面积、节点数和根尖数Y-4与对照组(CK)差异显著，与wz-37差异不显著。

(4)番茄幼苗叶绿素荧光参数

Y-4菌悬液和无菌水水分别浸泡消毒后的番茄种子3h后，播种于营养钵中。移苗时两处理分别在土壤中注入10mLY-4菌液和等量无菌水，培养30d。利用FluorCam叶绿素成像***测定各处理组的叶绿素荧光参数。叶绿素荧光参数如图17、18、19所示。

图18为各处理对番茄幼苗光合作用时最大光合效率(Fv/Fm)影响程度，结果显示对照组、菌株Y-4、菌株wz-37的最大光合效率值分别为0.71、0.78、0.74。菌株Y-4处理组显著的高于对照组与菌株wz-37组，说明菌株Y-4能够提高番茄幼苗的光合效率。

图19为各处理对番茄幼苗非光化学猝灭(NPQ)的影响程度，结果显示对照组、菌株Y-4、菌株wz-37的分别为非光化学猝灭值为0.41、0.5、0.44，可以看出菌株Y-4的非光化学猝灭指数最高，均高于对照组与菌株wz-37组，说明菌株Y-4对番茄幼苗的非光化学猝灭指数有促进作用。

图20为处理对番茄幼苗光化学猝灭(qP)的影响程度,结果显示对照组、菌株Y-4、菌株wz-37的分别为光化学猝灭值为0.62、0.79、0.69，菌株Y-4处理组显著的高于对照组与菌株wz-37组，说明菌株Y-4可以增强光电子传递活性。

实施例8

一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌，所述生防芽胞杆菌的分类命名为贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis)，于2022年8月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.25497。

进一步的，所述贝莱斯芽胞杆菌的16S rDNA的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示，所述贝莱斯芽胞杆菌的型号为Y-4。

进一步的，所述一种防治尖孢镰刀菌的贝莱斯芽胞杆菌在蛋白酶检测、纤维素酶、嗜铁素检测平板上培养3d-7d后分泌蛋白酶、纤维素酶、嗜铁素，并且产生生长素IAA，形成生物膜。

实施例9

一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌的应用，依托于实施例8所述的一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌实现，其特征在于，在农业生物防治方面的应用。

进一步的，所述农业生物防治包括将所述贝莱斯芽胞杆菌用于防治尖孢镰刀菌引起的枯萎病、番茄灰霉病、黄瓜炭疽病、黄瓜枯萎病、轮支镰刀菌、葵花菌核病菌或木贼镰刀菌引起的作物病害，所述应用的具体方法是使用所述贝莱斯芽胞杆菌Y-4菌悬液喷施于植株表面。

进一步的，所述贝莱斯芽胞杆菌Y-4菌悬液的制备方法为：采集所述贝莱斯芽胞杆菌的单菌落接种于无菌LB培养液中，28℃、200r/min培养2d得到菌液浓度为1×10⁸cfu/mL的菌悬液。

实施例10

一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌的应用，依托于实施例8所述的一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌实现，其特征在于，所述对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌在农作物种子及幼苗促生方面的应用。

进一步的，所述应用的具体方法是使用稀释500倍的所述贝莱斯芽胞杆菌菌悬液浸泡处理农作物种子。

进一步的，所述贝莱斯芽胞杆菌Y-4菌悬液的制备方法为：采集所述贝莱斯芽胞杆菌的单菌落接种于无菌LB培养液中，28℃、200r/min培养2d得到菌液浓度为1×10⁸cfu/mL的菌悬液。

Claims (6)

1.一种对尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis)，其特征在于，贝莱斯芽胞杆菌保藏编号为CGMCC No.25497，于2022年8月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

2.一种权利要求1所述的一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌的应用，其特征在于，在农业生物防治方面的应用，所述农业生物防治为将所述贝莱斯芽胞杆菌用于防治尖孢镰刀菌引起的枯萎病、番茄灰霉病、黄瓜炭疽病、黄瓜枯萎病、轮支镰刀菌、葵花菌核病菌或木贼镰刀菌引起的作物病害，所述应用的具体方法是使用所述贝莱斯芽胞杆菌菌悬液喷施于植株表面。

3.根据权利要求2所述的一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌的应用，其特征在于，所述贝莱斯芽胞杆菌菌悬液的制备方法为：采集所述贝莱斯芽胞杆菌的单菌落接种于无菌LB培养液中，28℃、200r/min培养2d得到菌液浓度为1×10⁸cfu/mL的菌悬液。

4.一种权利要求1所述的一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌的应用，其特征在于，所述对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌在农作物种子及幼苗促生方面的应用。

5.根据权利要求4所述的一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌的应用，其特征在于，所述应用的具体方法是使用稀释500倍的所述贝莱斯芽孢杆菌菌悬液浸泡处理农作物种子。

6.根据权利要求5所述的一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌的应用，其特征在于，所述贝莱斯芽孢杆菌菌悬液的制备方法为：采集所述贝莱斯芽胞杆菌的单菌落接种于无菌LB培养液中，28℃、200r/min培养2d得到菌液浓度为1×10⁸cfu/mL的菌悬液。