CN115851495B - 一种防治小麦赤霉病的生防菌及其应用、生防菌剂 - Google Patents
一种防治小麦赤霉病的生防菌及其应用、生防菌剂 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115851495B CN115851495B CN202211098603.0A CN202211098603A CN115851495B CN 115851495 B CN115851495 B CN 115851495B CN 202211098603 A CN202211098603 A CN 202211098603A CN 115851495 B CN115851495 B CN 115851495B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- gladioli
- biocontrol
- wheat
- graminearum
- fusarium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000209140 Triticum Species 0.000 title claims abstract description 65
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 title claims abstract description 65
- 206010039509 Scab Diseases 0.000 title claims abstract description 31
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims abstract description 26
- 230000000443 biocontrol Effects 0.000 title claims abstract description 26
- 241001135516 Burkholderia gladioli Species 0.000 claims abstract description 55
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 3
- 241000223195 Fusarium graminearum Species 0.000 claims description 43
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 8
- 241000784413 Fusarium asiaticum Species 0.000 claims description 6
- 241001451172 Fusarium pseudograminearum Species 0.000 claims description 6
- 241001290235 Ceratobasidium cereale Species 0.000 claims description 4
- 241001453380 Burkholderia Species 0.000 claims description 3
- 239000012681 biocontrol agent Substances 0.000 claims description 3
- 241001540897 Ceratobasidium gramineum Species 0.000 claims 3
- 240000003527 Crinum asiaticum Species 0.000 claims 2
- 241000190150 Bipolaris sorokiniana Species 0.000 claims 1
- 241000022708 Cirolana siamensis Species 0.000 claims 1
- 241001389943 Colletotrichum asianum Species 0.000 claims 1
- 241001639768 Colletotrichum siamense Species 0.000 claims 1
- 241001508365 Gaeumannomyces tritici Species 0.000 claims 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract description 33
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 22
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 abstract description 11
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 abstract description 10
- 239000003053 toxin Substances 0.000 abstract description 10
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 abstract description 10
- 241000333045 Fusarium graminearum PH-1 Species 0.000 abstract description 4
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 abstract description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 35
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 30
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 18
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 15
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 12
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 12
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 12
- LINOMUASTDIRTM-QGRHZQQGSA-N deoxynivalenol Chemical compound C([C@@]12[C@@]3(C[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1C=C(C([C@@H](O)[C@@]13CO)=O)C)C)O2 LINOMUASTDIRTM-QGRHZQQGSA-N 0.000 description 11
- 229930002954 deoxynivalenol Natural products 0.000 description 11
- LINOMUASTDIRTM-UHFFFAOYSA-N vomitoxin hydrate Natural products OCC12C(O)C(=O)C(C)=CC1OC1C(O)CC2(C)C11CO1 LINOMUASTDIRTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 10
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 8
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 8
- 241000831652 Salinivibrio sharmensis Species 0.000 description 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 7
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 7
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 6
- 241001024327 Oenanthe <Aves> Species 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 5
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 5
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 229940061634 magnesium sulfate heptahydrate Drugs 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 5
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- 241000222199 Colletotrichum Species 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 4
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 4
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 4
- 241001361634 Rhizoctonia Species 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 4
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 4
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 4
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 4
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000194105 Paenibacillus polymyxa Species 0.000 description 3
- 241000209504 Poaceae Species 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 3
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 3
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 description 3
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 2
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 2
- 101150066742 TRI1 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150015567 TRI12 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150078083 TRI5 gene Proteins 0.000 description 2
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 2
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 2
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 108091008053 gene clusters Proteins 0.000 description 2
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 2
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N putrescine Chemical compound NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 2
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 2
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 231100000033 toxigenic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001551 toxigenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 2
- HYZJCKYKOHLVJF-UHFFFAOYSA-N 1H-benzimidazole Chemical compound C1=CC=C2NC=NC2=C1 HYZJCKYKOHLVJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000223602 Alternaria alternata Species 0.000 description 1
- 244000153158 Ammi visnaga Species 0.000 description 1
- 235000010585 Ammi visnaga Nutrition 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000193744 Bacillus amyloliquefaciens Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- TWFZGCMQGLPBSX-UHFFFAOYSA-N Carbendazim Natural products C1=CC=C2NC(NC(=O)OC)=NC2=C1 TWFZGCMQGLPBSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- NHTMVDHEPJAVLT-UHFFFAOYSA-N Isooctane Chemical compound CC(C)CC(C)(C)C NHTMVDHEPJAVLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 1
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 239000005700 Putrescine Substances 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 101150106031 TRI gene Proteins 0.000 description 1
- 244000250129 Trigonella foenum graecum Species 0.000 description 1
- 235000001484 Trigonella foenum graecum Nutrition 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 231100000570 acute poisoning Toxicity 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 1
- 238000009412 basement excavation Methods 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000006013 carbendazim Substances 0.000 description 1
- JNPZQRQPIHJYNM-UHFFFAOYSA-N carbendazim Chemical compound C1=C[CH]C2=NC(NC(=O)OC)=NC2=C1 JNPZQRQPIHJYNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 1
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- IJOOHPMOJXWVHK-UHFFFAOYSA-N chlorotrimethylsilane Chemical compound C[Si](C)(C)Cl IJOOHPMOJXWVHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate pentahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.[Cu+2].[O-]S([O-])(=O)=O JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- JVSWJIKNEAIKJW-UHFFFAOYSA-N dimethyl-hexane Natural products CCCCCC(C)C JVSWJIKNEAIKJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 1
- PYLIXCKOHOHGKQ-UHFFFAOYSA-L disodium;hydrogen phosphate;heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O PYLIXCKOHOHGKQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 1
- SURQXAFEQWPFPV-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O SURQXAFEQWPFPV-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- ISPYRSDWRDQNSW-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate monohydrate Chemical compound O.[Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O ISPYRSDWRDQNSW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005498 polishing Methods 0.000 description 1
- 238000012257 pre-denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 238000002444 silanisation Methods 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 sodium permanganate dihydrate Chemical class 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 235000001019 trigonella foenum-graecum Nutrition 0.000 description 1
- CSRZQMIRAZTJOY-UHFFFAOYSA-N trimethylsilyl iodide Substances C[Si](C)(C)I CSRZQMIRAZTJOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- RZLVQBNCHSJZPX-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O RZLVQBNCHSJZPX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明属于微生物技术领域，具体为一种防治小麦赤霉病的生防菌及其应用、生防菌剂，所述生防菌为B.gladioli7‑1，该菌株分类命名为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(Burkholderiagladioli)，于2022年07月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO.25395。B.gladioli7‑1可以在小麦体内定殖，生防效果好，是防治小麦赤霉病潜在的生防制剂，且具有广谱抑菌活性，与禾谷镰刀菌PH‑1孢子液混合接种时不仅能100％抑制赤霉病的发生，还显著性降低DON毒素的积累。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种防治小麦赤霉病的生防菌及其应用、生防菌剂。
背景技术
小麦赤霉病(Fusarium head blight，FHB)是由多种镰刀菌引起的一种毁灭性真菌病害。在我国小麦赤霉病集中发生在气候湿润的长江中下游、淮河、珠三角麦区。近年来，由于农业结构的调整和气候变暖等因素的影响，病害有逐渐向北扩展蔓延的趋势。除了导致减产，禾谷镰刀菌在侵染小麦时还会产生脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)毒素，按照欧盟分类标准为三级致癌物，不仅影响小麦的品质，还会引发呕吐、腹泻等急性中毒症状。
有效控制小麦赤霉病的发生和流行关乎我国的粮食与食品安全。若在小麦扬花期遇到连续阴雨天气，极易造成该病的大面积发生，因此在小麦扬花期喷施多菌灵等苯并咪唑类杀菌剂是防治赤霉病的关键措施。由于化学药剂大量使用造成的病原抗药性增加等问题以及人们对环境问题的日益重视，探索绿色安全的生物防治资源对有效控制赤霉病至关重要。
目前生产上应用最多的是假单胞菌属和芽孢杆菌属的生物制剂，一时性的防治效果好但是持续时间不长。植物内生菌可以长期稳定的在植物体内定殖，是值得挖掘的一类生防资源，但是目前缺乏这样的生防资源。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了一种防治小麦赤霉病的生防菌及其应用、生防菌剂。
一种防治小麦赤霉病的生防菌，其特征在于，所述生防菌为B.gladioli 7-1，该菌株分类命名为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(Burkholderia gladioli)，于2022年07月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：中国北京朝阳区北辰西路1号，保藏编号为CGMCC No. 25395。
一种用于防治小麦赤霉病的生防菌剂，包括所述的B.gladioli 7-1。
优选的，所述B.gladioli 7-1的浓度为1×106-1×109CFU/mL。
所述的B.gladioli 7-1在制备用于防治小麦赤霉病的生防菌剂中的应用。
优选的，所述的B.gladioli 7-1用于抑制禾谷镰刀菌。
所述的B.gladioli 7-1在防治小麦赤霉病中的应用。
所述的B.gladioli 7-1在抑制禾旋孢腔菌、禾顶囊壳小麦变种、亚洲镰刀菌、禾谷丝核菌、亚洲炭疽菌、暹罗炭疽菌和假禾谷镰刀菌中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
1、内生菌株B.gladioli 7-1可以在小麦体内定殖，生防效果好，是防治小麦赤霉病潜在的生防制剂，伯克霍尔氏菌广泛存在于植物表面或根际，具有促生和诱导植物抗性等许多对植物、环境有益的功能。
2、内生菌株B.gladioli 7-1的培养滤液具有广谱抑菌活性，与禾谷镰刀菌PH-1孢子液混合接种时不仅能100％抑制赤霉病的发生，还显著性降低DON毒素的积累。对菌株B.gladioli 7-1基因组测序后预测到21条代谢物合成基因簇，因此对该菌株培养滤液的抑菌化合物进行分离鉴定，具有很好的开发应用前景，有望挖掘新的次生代谢产物。
3、生物保藏信息说明：
生物材料：7-1，分类学命名：唐菖蒲伯克霍尔德氏菌，拉丁名为：Burkholderiagladioli，该菌株于2022年07月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.25395。
附图说明
图1为对禾谷镰刀菌有拮抗作用细菌的初筛图(A)；B.gladioli 7-1菌落图(B)；B.gladioli 7-1与禾谷镰刀菌平板对峙实验的结果图(C)；B.gladioli 7-1影响禾谷镰刀菌分生孢子产量的统计图(D)，t检验进行显著性差异分析(p＝0.05)，***表示p<0.001；
图2为B.gladioli菌液灌根处理小麦后细菌定殖效果检测图；
图3为B.gladioli 7-1的抑菌谱示意图(A)；对不同病原菌抑制率统计图(B)；
图4为B.gladioli 7-1培养滤液的抑菌谱示意图(A)；对不同病原菌抑制率统计图(B)；
图5为B.gladioli 7-1不同培养基摇培的滤液对禾谷镰刀菌抑制效果图(A)及抑制率统计图(B)；
图6为B.gladioli 7-1及其培养滤液与禾谷镰刀菌PH-1孢子液混合接种结果示意图(A)；上述接种方法小麦穗发病结果统计图(B)，t检验进行显著性差异分析(p＝0.05)，***表示p<0.001；
图7为B.gladioli 7-1及培养滤液对禾谷镰刀菌DON含量影响的统计图(A)，t检验进行显著性差异分析(p＝0.05)，***表示p<0.001；B.gladioli 7-1影响禾谷镰刀菌TRI1、TRI5和TRI12表达的示意图(B)。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。本发明各实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
实施例中所用的培养基如下：
CM固体培养基的组分及配比(每1L)为：葡萄糖10g、蛋白胨20g、酵母提取物1g、酸水解酪蛋白1g、硝酸钠6g、氯化钾0.5g、七水硫酸镁1.023g、磷酸二氢钾0.5g、琼脂15g、去离子水1L、用氢氧化钠液体调节pH至6.5，该培养基通过将前述组分混合后在121℃高温高压灭菌20min得到；
CMC培养基的组分及配比(每1L)为：羧甲基纤维素钠15g、硝酸铵1g、磷酸二氢钾1g、酵母提取物1g、七水合硫酸镁0.5g、去离子水1L，该培养基通过将前述组分混合后在121℃高温高压灭菌20min得到；
LB液体培养基的组分及配比(每1L)为：胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠5g、去离子水1L，该培养基通过将前述组分混合后在121℃高温高压灭菌20min得到；
LB固体培养基的组分及配比(每1L)为：胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠5g、琼脂粉15g、去离子水1L，该培养基通过将前述组分混合后在121℃高温高压灭菌20min得到；
YEPD培养基的组分及配比(每1L)为：酵母提取物3g、蛋白胨10g、葡萄糖20g、去离子水1L，该培养基通过将前述组分混合后在121℃高温高压灭菌20min得到；
5×YEG培养基的组分及配比(每1L)为：酵母提取物5g、葡萄糖10g、去离子水1L，该培养基通过将前述组分混合后在121℃高温高压灭菌20min得到；
M9培养基的组分及配比(每1L)为：七水合磷酸氢二钠12.98g、磷酸二氢钠3g、氯化钠0.5g、氯化铵1g、1M硫酸镁2mL、1M氯化钙100μL、20％葡萄糖20mL、去离子水1L，该培养基通过将前述组分混合后在121℃高温高压灭菌20min得到；
PDB培养基的组分及配比(每1L)为：马铃薯200g、葡萄糖20g、去离子水1L，该培养基通过将前述组分混合后在121℃高温高压灭菌20min得到；
CM液体培养基的组分及配比(每1L)为：葡萄糖10g、蛋白胨20g、酵母提取物1g、酸水解酪蛋白1g、硝酸钠6g、氯化钾0.5g、七水硫酸镁1.023g、磷酸二氢钾0.5g、去离子水1L、用氢氧化钠液体调节pH至6.5，该培养基通过将前述组分混合后在121℃高温高压灭菌20min得到；
2×CM固体培养基的组分及配比(每1L)为：葡萄糖10g、蛋白胨20g、酵母提取物1g、酸水解酪蛋白1g、硝酸钠6g、氯化钾0.5g、七水硫酸镁1.023g、磷酸二氢钾0.5g、琼脂30g、去离子水1L、用氢氧化钠液体调节pH至6.5，该培养基通过将前述组分混合后在121℃高温高压灭菌20min得到；
PDA固体培养基的组分及配比(每1L)为：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂粉15g、去离子水1L，该培养基通过将前述组分混合后在121℃高温高压灭菌20min得到；
TBI培养基的组分及配比(每1L)为:蔗糖30g、磷酸二氢钾1g、七水合硫酸镁0.5g、氯化钾0.5g、七水合硫酸亚铁0.01g、精氨酸0.871g、柠檬酸0.2mg、七水合硫酸锌0.2mg、一水合硫酸锰0.002mg、五水硫酸铜0.01mg、硼酸0.002mg、二水合高锰酸钠0.002mg、腐胺0.032mg、凝胶0.3g、去离子水1L、用氢氧化钠液体调节pH至5.5，该培养基通过将前述组分混合后在121℃高温高压灭菌20min得到；
所用禾旋孢腔菌、禾顶囊壳小麦变种、亚洲镰刀菌、禾谷丝核菌、亚洲炭疽菌、暹罗炭疽菌和假禾谷镰刀菌由河南科技大学徐建强副教授馈赠。
实施例1
生防菌B.gladioli 7-1的分离、筛选、鉴定
分离：将从陕西省杨凌区曹新庄田间采集的玉米根系消毒。无菌水冲洗后用75％的酒精浸泡3min，2％NaClO浸泡15min去除表面的杂菌，再用无菌水将根系表面的乙醇、NaClO冲洗干净，用研钵把植物根系研磨后加入无菌水，振荡后得到含有内生菌的悬浮液。
筛选与保存：将融化后冷却至50℃的CM培养基与用CMC摇培4d的禾谷镰刀菌(西北农林科技大学作物病原真菌功能基因组学课题组保存)孢子液混合，至孢子液浓度为1×105个/mL后倒平板，待平板凝固后，将分离得到的内生菌蘸取单菌落用LB摇培24h得到细菌菌液，将10μL细菌菌液滴于平板上吹干，25℃培养3d后观察结果，把对禾谷镰刀菌有拮抗作用的细菌保存。通过平板对峙实验确定对禾谷镰刀菌的抑制率。
鉴定：通过对扩增的细菌16s序列的测序结果鉴定细菌所在种属。设计一对扩增细菌16S片段的引物27F(SEQ ID No.2)和1492R(SEQ ID No.3)(引物序列为27F：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’；1492R：5’-TACGACTTAACCCCAATCGC-3’)。用LB平板活化有拮抗作用的细菌，平板上长出单菌落后用上述引物扩增16S片段，PCR反应体系为:(25μL)：10×EasyTaq Buffer 2.5μL,dNTPs 2μL,模板DNA 1.5μL上游引物27F 0.5μL，下游引物1492R0.5μL，ddH2O 17.7μL。PCR反应程序：95℃预变性3min；95℃变性30s、58℃退火40s、72℃延伸120s，共35个循环；72℃再延伸10min。
PCR产物经过1％琼脂糖凝胶电泳检测，目的条带大小在2000bp左右。将PCR产物回收并送生工公司测序，测序结果见SEQ ID No.1。根据公司拼接的测序结果，在NCBI(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)数据库中进行序列比对，根据序列的同源性高低鉴定菌株。
如图1所示，在分离得到的菌株中，B.gladioli 7-1对禾谷镰刀菌的抑菌效果最明显(图1A)，从平板对峙的实验得出B.gladioli 7-1的抑菌率为50％(图1C)。通过16S测序结果在NCBI网站上比对鉴定B.gladioli 7-1菌株为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(Burkholderiagladioli)，其菌落形态如图1B所示。
实施例2
B.gladioli 7-1对禾谷镰刀菌产孢量的影响
用牙签蘸取保存于-80℃冰箱的内生菌B.gladioli 7-1菌株，在LB平板上划线活化。挑单菌落接种于液体LB培养基中摇培12h，用CMC培养基将菌株B.gladioli 7-1浓度调为1×108CFU/mL，得到B.gladioli 7-1菌液，再将活化好的禾谷镰刀菌打菌饼接种于CMC培养基中，最终将CMC的量补至50mL，25℃，175rpm培养4d，显微镜下利用血球计数板统计禾谷镰刀菌的孢子产量。
如图1所示，将统计的对照组和B.gladioli 7-1处理后禾谷镰刀菌的产孢量用t检验进行显著性差异分析(p＝0.05)，***表示p<0.001，可以看到B.gladioli7-1处理后禾谷镰刀菌的产孢量显著性下降(图1D)。
实施例3
评价B.gladioli 7-1在小麦上的定殖能力
(1)小麦的培养
将干燥的小麦种子先用清水浸泡5min，再用75％的酒精没过小麦浸泡2min，最后用清水冲洗一遍种子。将种子放在湿滤纸上，腹沟朝下，放30℃培养箱2天种子萌发后移栽到土里，定期给小麦浇B.gladioli 7-1菌液。
(2)利用灌根法处理小麦后检测该菌株的定殖效果
参照实施例2制备B.gladioli 7-1菌液，每两周给种小麦的花盆里浇一次B.gladioli 7-1菌液，每次100mL，同时用液体LB浇灌小麦作为对照，处理组和对照组均设三个重复。一个月后取小麦的根、茎、叶和花盆里的土，收样后采用稀释涂布法分离各个组织的内生细菌。B.gladioli 7-1具有氯霉素的抗性，所以分别吸取100μL小麦根、茎、叶和土的研磨液，分别涂布于含氯霉素的LB平板上，25℃培养箱中培养2d后对平板上的菌落利用B.gladioli 7-1特异性的引物扩增检测。
如图2所示，在根和土里都检测到了B.gladioli 7-1；对茎的研磨液涂的LB板上检测了12个菌落，有9个菌落扩增到了目的条带；推测可能是收样的时间有点短，叶子里目前还没有检测到该菌株。以上结果说明菌株B.gladioli7-1能在根部定殖后在小麦体内运输，这有利用发挥该菌株的生防效果，是防治小麦赤霉病的潜在生物制剂。
实施例4
B.gladioli 7-1的抑菌谱以及抑菌率的统计
利用平板对峙试验确定B.gladioli 7-1菌株对其他病原菌是否有拮抗作用。选用的病菌有禾旋孢腔菌、禾顶囊壳小麦变种、亚洲镰刀菌、禾谷丝核菌、亚洲炭疽菌、暹罗炭疽菌，提前三天在PDA皿上活化这几个病原菌；在LB平板上活化菌株B.gladioli 7-1，长出单菌落后挑单菌落接种于液体LB培养基中过夜摇培至细菌浓度为1×108CFU/mL；裁剪一些4cm×1.5cm的滤纸条灭菌备用。每个90mm的一次性塑料皿里倒入15mL CM固体培养基，将灭好菌的滤纸条用镊子放在皿的正中央，在滤纸条上滴加20μl浓度为1×108CFU/mL的B.gladioli 7-1菌液，在滤纸条的两边分别接种禾旋孢腔菌和禾顶囊壳小麦变种、亚洲镰刀菌和禾谷丝核菌、亚洲炭疽菌和暹罗炭疽菌的菌饼，25℃培养箱培养三天后统计抑菌率。抑菌率计算公式为：抑菌率(％)＝[(对照菌落直径－病原菌菌落朝细菌菌液方向扩展的直径)/对照菌落直径]×100。
如图3所示，B.gladioli 7-1对禾旋孢腔菌、禾顶囊壳小麦变种、亚洲镰刀菌、禾谷丝核菌、亚洲炭疽菌、暹罗炭疽菌均有抑菌效果(图3A)，其中对小麦全蚀病的病原菌禾顶囊壳小麦变种的抑制效果最好，可以达到56.3％(图3B)。以上结果说明B.gladioli 7-1具有广谱的抑菌活性。
实施例5
评价B.gladioli 7-1培养滤液对小麦其他病害病原菌的抑菌效果
在LB平板上划线活化B.gladioli 7-1。划线后在25℃培养箱里培养2d。挑单菌落接种于液体LB培养基中过夜摇培至细菌浓度为1×108CFU/mL后，分别以1％的接种量接种于50mL YEPD液体培养基中转摇。在25℃、175r·min-1摇床培养3d后，用0.22μm微孔滤膜细菌过滤器过滤，获得培养滤液。将2×CM和培养滤液按1：1的比例混合倒板后，凝固后在平板中央接种提前活化好的禾旋孢腔菌、禾顶囊壳小麦变种、亚洲镰刀菌、禾谷丝核菌、亚洲炭疽菌、假禾谷镰刀菌的菌饼，以不含B.gladioli 7-1培养滤液的处理为对照，在25℃培养箱培养三天后进行菌落直径测量，计算抑菌率。
如图4所示，B.gladioli 7-1的培养滤液对禾旋孢腔菌、禾顶囊壳小麦变种、亚洲镰刀菌、禾谷丝核菌、亚洲炭疽菌、假禾谷镰刀菌均有抑菌效果(图4A)，其中对假禾谷镰刀菌的抑制效果最好，可以达到60.3％(图4B)。对小麦全蚀病的病原菌禾顶囊壳小麦变种的抑制效果，可以达到48.7％，与对峙培养结果相似。以上结果说明B.gladioli 7-1的培养滤液也具有广谱的抑菌活性。
实施例6
评价不同培养基摇培条件下的培养滤液对禾谷镰刀菌的抑制效果
参照实施例5制备5×YEG、LB、YEPD、M9、PDB和CM液体培养基中摇培的培养滤液。将2×CM和培养滤液按1：1的比例混合倒板后，凝固后在平板中央接种提前活化好的提前活化的禾谷镰刀菌的菌饼，以不含B.gladioli7-1培养滤液的处理为对照，在25℃培养箱培养三天后进行菌落直径测量，计算抑菌率。
如图5所示，用5×YEG摇培的B.gladioli 7-1滤液对禾谷镰刀菌的抑制效果是最好的(图5A)，抑菌率可以达到79.4％(图5B)，所以可以通过改变改变制备培养滤液所用的培养基来提高该菌株滤液的抑菌效果。
实施例7
评价B.gladioli 7-1及其培养滤液对小麦赤霉病的防治效果
在PDA皿上活化禾谷镰刀菌，25℃培养3d后打菌饼，再接种于CMC培养基中，25℃、175rpm摇床摇培3-5d。用滤布过滤孢子液，离心机3500rpm，离心7min后弃上清得到禾谷镰刀菌的孢子液。按实施例2中的方法制备B.gladioli 7-1菌液，按实施例5中的方法制备培养滤液。用B.gladioli 7-1菌液和培养滤液将禾谷镰刀菌的孢子液浓度调至2×105个/mL。在小麦扬花期，将10μL禾谷镰刀菌的孢子液和B.gladioli 7-1的混合液、10μL禾谷镰刀菌的孢子液和培养滤液的混合液分别接种于每个小麦穗从上往下数的第四个穗子上并做好标记，套袋保湿48h后将袋子摘掉。接种14d后统计小麦穗的发病情况，将单独接种禾谷镰刀菌和B.gladioli 7-1及其培养滤液处理后的发病籽粒数用t检验进行显著性差异分析(p＝0.05)，***表示p<0.001。
如图6所示，B.gladioli 7-1菌液及培养滤液与禾谷镰刀菌混合接种后均能显著抑制小麦穗发病(图6A)，接种的小麦穗都只有接种点单籽粒发病(图6B)，与单独接种禾谷镰刀菌相比发病籽粒数显著性下降。马东方,卢涛,詹闯,等.小麦赤霉病菌拮抗菌XG-6的分离鉴定及其应用[J].长江大学学报(自然科学版),2021,18(04):105-113公开了一株解淀粉芽孢杆菌XG-6对小麦赤霉病的防治效果，具体为：蒸馏水+禾谷镰刀菌的处理的小麦在第25天时的发病率为82.67％，而使用XG-6+禾谷镰刀菌处理的小麦在第25天时的发病率为51.67％；邓云.一株拮抗性多粘类芽孢杆菌的鉴定及其对小麦赤霉病的田间防效[J].福建农林大学学报(自然科学版),2022,51(01):21-26公开了多粘类芽孢杆菌DY04对小麦赤霉病的防治效果，具体为：穗部喷洒原液和发酵液处理小麦的分别为52.64％和42.24％。B.gladioli 7-1菌液和培养滤液处理的小麦发病率分别为6.5％和6.8％。由此可见，本发明的防治效果优于现有技术。这个结果表明混合接种时B.gladioli 7-1及培养滤液能有效防治小麦赤霉病的发生，而且抑制小麦穗发病的效果非常稳定。
实施例8
B.gladioli 7-1及培养滤液对禾谷镰刀菌DON毒素产生的影响
(1)qRT-PCR检测禾谷镰刀菌TRI的表达情况
将禾谷镰刀菌孢子液调浓度至106个/mL，处理组将细菌单菌落挑至孢子液里，对照组不做任何处理。吸150微升的孢子液到加了50mL TBI的锥形瓶中，黑暗摇培4d后收集菌丝。提取菌丝RNA，并测量记录OD值后进行DNA消解与RNA反转录。设计TRI基因及内参基因的定量引物做qRT-PCR，最后分析处理数据。
(2)检测小麦单籽粒产毒DON毒素的产生
按实施例2和5制备禾谷镰刀菌孢子液、B.gladioli 7-1及其培养滤液，接种小麦穗的实验方法参照实施例4，接种14d后统计小麦穗的发病情况。将接种后发病的单籽粒取下，烘干称重记录质量。放入离心管中，加入3mL乙腈/水(84/16)后用打磨仪研磨打碎，放与摇台上振荡24h，12000rpm离心1min，上清过PE小柱，收集滤液，转移过柱后的滤液1mL到新的离心管中，旋转浓缩，加入50μL TMS(TMSI/TMCS＝100/1)硅烷化试剂，涡旋使样品与TMS充分接触，在振荡器上振荡10min，加入800μL色谱级异辛烷，颠倒混匀，加入800μL超纯水，颠倒混匀，静置分层；将上清转移到GC-MS上样瓶中。用GC-MS仪器测定DON毒素含量，测完后将单独接种禾谷镰刀菌和B.gladioli7-1及其培养滤液处理后的DON毒素含量用t检验进行显著性差异分析(p＝0.05)，***表示p<0.001。
如图7所示，B.gladioli 7-1及培养滤液与禾谷镰刀菌混合接种后单籽粒DON毒素的含量与对照相比显著性降低(图7A)；液体产毒的qRT-PCR结果表明(图7B)，B.gladioli7-1处理后禾谷镰刀菌TRI1，TRI5、TRI12基因的表达量降低。以上结果说明该菌株可以显著性降低禾谷镰刀菌DON毒素的积累，减少对食品安全的威胁。
综上，内生菌株B.gladioli 7-1可以在小麦体内定殖，生防效果好，是防治小麦赤霉病潜在的生防制剂，内生菌株B.gladioli 7-1的培养滤液具有广谱抑菌活性，与禾谷镰刀菌PH-1孢子液混合接种时不仅能100％抑制赤霉病的发生，还显著性降低DON毒素的积累。对菌株B.gladioli 7-1基因组测序后预测到21条代谢物合成基因簇，因此对该菌株培养滤液的抑菌化合物进行分离鉴定，具有很好的开发应用前景，有望挖掘新的次生代谢产物。
需要说明的是，本发明权利要求书中涉及数值范围时，应理解为每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用，为了防止赘述，本发明描述了优选的实施例。
尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
Claims (7)
1.一种防治小麦赤霉病的生防菌，其特征在于，所述生防菌为B.gladioli 7-1，该生防菌分类命名为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(Burkholderia gladioli)，于2022年07月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.25395。
2.一种用于防治小麦赤霉病的生防菌剂，其特征在于，所述生防菌剂中包括权利要求1所述的B.gladioli 7-1。
3.根据权利要求2所述的生防菌剂，其特征在于，所述B.gladioli 7-1的浓度为1×106-1×109CFU/mL。
4.一种权利要求1所述的B.gladioli 7-1在制备用于防治小麦赤霉病的生防菌剂中的应用。
5.一种权利要求1所述的B.gladioli 7-1在防治小麦赤霉病中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的B.gladioli 7-1用于抑制禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)。
7.一种权利要求1所述的B.gladioli 7-1在抑制禾旋孢腔菌(Cochliobolus sativus)、禾顶囊壳小麦变种(Gaeumannomyces graminis var.tritici)、亚洲镰刀菌(Fusarium asiaticum)、禾谷丝核菌(Rhizoctonia cerealis)、亚洲炭疽菌(Colletotrichum asianum)、暹罗炭疽菌(Colletotrichum siamense)和假禾谷镰刀菌(Fusarium pseudograminearum)中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211098603.0A CN115851495B (zh) | 2022-09-07 | 2022-09-07 | 一种防治小麦赤霉病的生防菌及其应用、生防菌剂 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211098603.0A CN115851495B (zh) | 2022-09-07 | 2022-09-07 | 一种防治小麦赤霉病的生防菌及其应用、生防菌剂 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115851495A CN115851495A (zh) | 2023-03-28 |
| CN115851495B true CN115851495B (zh) | 2024-05-24 |
Family
ID=85660824
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211098603.0A Active CN115851495B (zh) | 2022-09-07 | 2022-09-07 | 一种防治小麦赤霉病的生防菌及其应用、生防菌剂 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115851495B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117898307A (zh) * | 2024-01-15 | 2024-04-19 | 安徽农业大学 | 一种吡咯伯克霍尔德氏菌在抑制小麦赤霉病菌真菌毒素合成中的应用 |
Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20020036265A (ko) * | 2000-11-09 | 2002-05-16 | 이재호 | 길항미생물 버홀더리아 글라디올리 지비-0999 균주, 이를포함하는 미생물제제 및 이를 이용하여 식물의 풋마름병을방제하는 방법 |
| CN102286401A (zh) * | 2011-07-15 | 2011-12-21 | 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 | 一株产acc脱氨酶并拮抗赤霉病菌的水稻内生固氮菌及其用途 |
| CN105018371A (zh) * | 2015-06-11 | 2015-11-04 | 江西师范大学 | 一株东乡野生稻内生细菌唐菖蒲伯克霍尔德菌Fse32及其应用 |
| CN105524871A (zh) * | 2016-01-29 | 2016-04-27 | 江苏省中国科学院植物研究所 | 从忽地笑鳞茎中分离筛选拮抗细菌的方法 |
| CN107099478A (zh) * | 2017-06-06 | 2017-08-29 | 江苏省中国科学院植物研究所 | 一株忽地笑内生细菌伯克霍尔德氏菌hdxy‑02及其应用 |
| CN109574719A (zh) * | 2018-12-26 | 2019-04-05 | 湖北大学 | 一种多功能复合微生物菌肥及其应用 |
| CN111607537A (zh) * | 2020-05-15 | 2020-09-01 | 湖北大学 | 一株高效拮抗禾谷镰刀菌的伯克霍尔德氏菌属mel01的制备方法及其应用 |
| CN112899186A (zh) * | 2021-01-29 | 2021-06-04 | 山东省花生研究所 | 一株伯克霍尔德菌及其在禾谷镰刀菌生物防治中的应用 |
| CN115232776A (zh) * | 2022-09-06 | 2022-10-25 | 西北农林科技大学 | 一种防治小麦赤霉病的假单胞菌cxz8、生防菌剂及其应用 |
| CN116218709A (zh) * | 2022-12-16 | 2023-06-06 | 安徽农业大学 | 一株内生唐菖蒲伯克霍尔德氏菌js-59及其应用 |
-
2022
- 2022-09-07 CN CN202211098603.0A patent/CN115851495B/zh active Active
Patent Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20020036265A (ko) * | 2000-11-09 | 2002-05-16 | 이재호 | 길항미생물 버홀더리아 글라디올리 지비-0999 균주, 이를포함하는 미생물제제 및 이를 이용하여 식물의 풋마름병을방제하는 방법 |
| CN102286401A (zh) * | 2011-07-15 | 2011-12-21 | 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 | 一株产acc脱氨酶并拮抗赤霉病菌的水稻内生固氮菌及其用途 |
| CN105018371A (zh) * | 2015-06-11 | 2015-11-04 | 江西师范大学 | 一株东乡野生稻内生细菌唐菖蒲伯克霍尔德菌Fse32及其应用 |
| CN105524871A (zh) * | 2016-01-29 | 2016-04-27 | 江苏省中国科学院植物研究所 | 从忽地笑鳞茎中分离筛选拮抗细菌的方法 |
| CN107099478A (zh) * | 2017-06-06 | 2017-08-29 | 江苏省中国科学院植物研究所 | 一株忽地笑内生细菌伯克霍尔德氏菌hdxy‑02及其应用 |
| CN109574719A (zh) * | 2018-12-26 | 2019-04-05 | 湖北大学 | 一种多功能复合微生物菌肥及其应用 |
| CN111607537A (zh) * | 2020-05-15 | 2020-09-01 | 湖北大学 | 一株高效拮抗禾谷镰刀菌的伯克霍尔德氏菌属mel01的制备方法及其应用 |
| CN112899186A (zh) * | 2021-01-29 | 2021-06-04 | 山东省花生研究所 | 一株伯克霍尔德菌及其在禾谷镰刀菌生物防治中的应用 |
| CN115232776A (zh) * | 2022-09-06 | 2022-10-25 | 西北农林科技大学 | 一种防治小麦赤霉病的假单胞菌cxz8、生防菌剂及其应用 |
| CN116218709A (zh) * | 2022-12-16 | 2023-06-06 | 安徽农业大学 | 一株内生唐菖蒲伯克霍尔德氏菌js-59及其应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 1株拮抗真菌的生防细菌Xj11的分离与鉴定;敖武 等;微生物学杂志;20130615;第33卷(第3期);第45-48页 * |
| Burkholderia gladioli, an endophyte with plant growth promoting potential;Aparma Gunjal 等;Journal of Chemo and Biosphere, RAAB Proceeding Issue;20130228;第43-53页 * |
| Toxoflavin Produced by Burkholderia gladioli from Lycoris aurea Is a New Broad-Spectrum Fungicide;Xiaodan Li 等;Applied and Environmental Microbiology;20190418;第85卷(第9期);第1-13页 * |
| 伯克霍尔德氏菌CR7防治小麦赤霉病的作用机制初探;王瑜;西北农林科技大学学位论文;20230501;第1-60页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115851495A (zh) | 2023-03-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109055281B (zh) | 贝莱斯芽胞杆菌zf2及其在植物病害防治中的应用 | |
| CN109749974B (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌菌株及其应用 | |
| CN113717901B (zh) | 一株贝莱斯芽孢杆菌及其在防治多种蔬菜病害中的应用 | |
| CN108165498B (zh) | 拮抗水稻白叶枯病菌的灰黄青霉Pg-35菌株及其发酵滤液和在植物病害防冶中的应用 | |
| CN111500501B (zh) | 一株米修链霉菌及其在防治小麦根腐病和茎基腐病中的应用 | |
| CN111534460B (zh) | 一株高效拮抗禾谷镰刀菌的贝莱斯芽孢杆菌的制备方法及应用 | |
| CN108342330B (zh) | 一株具有广谱抗菌性能的长枝木霉及其应用 | |
| CN104673705B (zh) | 一株防治小麦赤霉病的解淀粉芽孢杆菌及其应用 | |
| CN114891670B (zh) | 一株具有广谱抑菌性的暹罗芽孢杆菌ZJh及其应用 | |
| CN112795496B (zh) | 一株多粘类芽孢杆菌及其在防治白菜茎基腐病中的应用 | |
| CN114456986B (zh) | 一株广谱抑菌的阿氏芽孢杆菌及其应用 | |
| CN113528353A (zh) | 蓝状菌株、生防剂及应用 | |
| CN110468083B (zh) | 一株分离的链霉菌dl70及其生防促生应用 | |
| CN112877258A (zh) | 一株枯草芽孢杆菌jx-20菌株及其应用 | |
| CN113502250B (zh) | 一种雷尔氏菌菌株及应用、获取和防效评价方法 | |
| CN115851495B (zh) | 一种防治小麦赤霉病的生防菌及其应用、生防菌剂 | |
| CN113999794B (zh) | 一株链霉菌及其应用 | |
| CN116445354A (zh) | 弗雷德里克斯堡假单胞菌及其在防病中应用 | |
| CN108641989A (zh) | 一株甲基营养型芽孢杆菌及其应用 | |
| CN118383389A (zh) | 一种复合型微生物组合物及其应用 | |
| CN113604376B (zh) | 一株甘蔗内生枯草芽孢杆菌及其应用 | |
| CN102154155B (zh) | 防治植物真菌病害的短短芽孢杆菌及生物农药的制备方法 | |
| CN116716225A (zh) | 一种耐辐射链霉菌及其应用 | |
| CN116855407A (zh) | 卡伍尔氏链霉菌y274及其应用 | |
| CN116536207A (zh) | 一种萎缩芽孢杆菌wlkysy-4、生物菌剂及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |