CN115776879A

CN115776879A - 抗fcrn抗体制剂

Info

Publication number: CN115776879A
Application number: CN202180046719.7A
Authority: CN
Inventors: 安惠敬; 金英珠; 郑美真
Original assignee: Hanwu Biopharmaceutical Co ltd
Current assignee: Hanwu Biopharmaceutical Co ltd
Priority date: 2020-06-29
Filing date: 2021-06-25
Publication date: 2023-03-10
Also published as: BR112022026780A2; JP2023532326A; CA3184423A1; TW202216196A; KR20220001482A; AU2021299606A1; IL299150A; EP4173637A1; MX2023000009A; WO2022005113A1; AR122766A1

Abstract

本发明的一个方面，提供了pH为4.0至8.0的水溶性药物制剂，所述药物制剂包含(a)HL 161BKN抗体或其片段，(b)一种或多种选自甘露醇、山梨醇、精氨酸、组氨酸、甘氨酸及其盐的添加剂，(c)选自柠檬酸盐或组氨酸的缓冲体系，和(d)聚山梨醇酯。存在于制剂中的HL161BKN具有改善的稳定性且无毒性，因此具有很高的工业应用潜力。

Description

抗FCRN抗体制剂

技术领域

本发明涉及针对抗FcRn抗体HL161BKN优化的制剂。

背景技术

长期以来，人们从遗传、环境和免疫学的角度研究了自身免疫性疾病的病因，但确切的病因仍不清楚。近年来的许多研究表明，许多自身免疫性疾病是由IgG型自身抗体引起的。事实上，在诊断和治疗自身免疫性疾病的研究中，已广泛研究了疾病特异性自身抗体的存在与否与根据其减少的治疗效果之间的关系。

作为这种自身免疫性疾病的治疗剂，一线药剂为全身性高剂量类固醇注射剂，当症状严重或难以用类固醇控制时，用高剂量IVIG(静脉注射免疫球蛋白)给药或血浆置换。当重复使用高剂量类固醇时，可能会产生微弱的效果或产生严重的副作用。就IVIG和血浆置换来说，治疗成本高且存在各种副作用和感染风险，因此迫切需要在该治疗领域开发治疗剂。

另一方面，最近正在研究使用FcRn抗体的自身免疫性疾病的治疗剂(韩国专利公开号10-2014-0147606)。它是一种新策略药物，通过抗体阻断参与IgG循环的FcRn(新生儿Fc受体)，增加IgG在体内的分解代谢，从而降低自身抗体水平来治疗疾病。这种抗FcRn抗体有望成为一种能够解决现有治疗剂的问题的产品。

然而，为了将这种抗体应用于严重的自身免疫性疾病，如寻常天疱疮、视神经脊髓炎和重症肌无力，这些疾病是由体内针对自身抗原的自身抗体的产生引起的，因此需要针对这种抗体优化的制剂和针对给药方法优化的制剂。

发明内容

技术问题

为了开发针对用于治疗严重自身免疫性疾病的抗FcRn抗体优化的制剂，作为研究的结果，本发明人开发了针对作为抗FcRn抗体的HL161BKN优化的缓冲液和制剂。

技术方案

为了实现上述目的，在本发明的一个方面，提供了一种药物制剂，其包含(a)抗FcRn抗体或其片段，(b)至少一种选自甘露醇、山梨醇、精氨酸、组氨酸、甘氨酸及其盐的添加剂，(c)选自柠檬酸盐或组氨酸的缓冲体系，和(d)表面活性剂。

技术效果

本发明的具有pH4.0～8.0的的药物制剂，其包含(a)抗FcRn抗体或其片段，(b)至少一种选自甘露醇、山梨醇、精氨酸、组氨酸、甘氨酸及其盐的添加剂，(c)选自柠檬酸盐或组氨酸的缓冲体系，和(d)表面活性剂，是针对HL161BKN优化的药物组合物，并且证实了制剂中HL161BKN的稳定性得到改善。

附图说明

图1显示了通过使用DSC(差示扫描量热法)分析HL161BKN的热稳定性获得的结果。

图2显示了通过确认HL161BKN在pH 5.0、6.0、7.0和8.0的柠檬酸钠-磷酸盐缓冲液条件下的4周加速稳定性获得的结果。

图3是研究HL161BKN制剂的流程示意图。

图4显示了通过确认作为赋形剂试验结果的根据各种赋形剂产生的HL161BKN(210mg/mL)的聚集体和片段的变化量获得的结果。

图5显示了通过使用CEX-HPLC分析根据每种赋形剂条件的HL161BKN(210mg/mL)的电荷变体模式获得的结果。

图6显示了根据赋形剂的组合，HL161BKN的聚集体变化量的方差分析(ANOVA)结果。

图7显示了通过确认根据赋形剂的组合产生的HL161BKN(210mg/mL)的聚集体和片段的变化量获得的结果。

图8显示了通过使用实验设计(DOE)根据赋形剂的组合分析HL161BKN的聚集体和片段的变化量获得的结果。

图9显示了通过使用CEX-HPLC根据赋形剂的组合分析HL161BKN的电荷变体模式获得的结果。

图10显示了通过确认在附加赋形剂试验中HL161BKN(210mg/mL)的聚集体和片段的变化量获得的结果。

图11显示了通过使用CEX-HPLC根据附加赋形剂试验中的赋形剂条件分析HL161BKN的电荷变体模式获得的结果。

图12显示了根据PSB20的存在与否，通过确认HL161BKN(210mg/mL)对搅拌应力(agitation stress)的影响而获得的结果。

图13显示了通过根据搅拌试验中PSB20的存在与否确认HL161BKN的单体变化获得的结果。

图14显示了通过确认在粘度降低赋形剂试验中HL161BKN(210mg/mL)的聚集体和片段的变化量获得的结果。

图15显示了通过确认首次赋形剂筛选中HL161BKN(210mg/mL)的聚集体和片段的变化获得的结果。

图16显示了通过使用CEX-HPLC根据首次赋形剂筛选条件分析HL161BKN的电荷变体模式获得的结果。

图17显示了通过确认在第二次赋形剂筛选中HL161BKN(210mg/mL)的聚集体和片段变化获得的结果。

图18显示了通过使用CEX-HPLC根据第二赋形剂条件分析HL161BKN的电荷变体模式获得的结果。

图19显示了通过确认HL161BKN的不溶性亚可见颗粒数量的变化获得的结果。

图20显示了通过根据HL161BKN制剂中HL161BKN的浓度确认粘度获得的结果。此处，当HL161BKN的浓度为170mg/mL时，确认粘度为10cP。

发明详述

在本发明的一个方面，提供了pH为4.0～8.0的药物制剂，其包含(a)抗FcRn抗体或其片段，(b)至少一种选自甘露醇、山梨醇、精氨酸、组氨酸、甘氨酸及其盐的添加剂，(c)选自柠檬酸盐或组氨酸的缓冲体系，和(d)表面活性剂。

此外，所述药物制剂可进一步包含甲硫氨酸。此外，所述药物制剂可进一步包含糖类，例如蔗糖和海藻糖。

所述缓冲体系是指由于其酸碱对应物而抵抗pH变化的缓冲液。

如本文所用，术语“组氨酸缓冲液”是指含有组氨酸离子的缓冲液。这里，组氨酸缓冲液的具体实施方案可以是选自由组氨酸氯化物缓冲液、组氨酸乙酸盐缓冲液、组氨酸磷酸盐缓冲液和组氨酸硫酸盐缓冲液中组成的组中的任何一种，但不限于此。

如本文所用，术语“柠檬酸盐缓冲液”是指含有柠檬酸根离子的缓冲液。这里，柠檬酸盐缓冲液的具体实施方案可以是选自由柠檬酸钠缓冲液、柠檬酸钾缓冲液、柠檬酸钙缓冲液和柠檬酸镁缓冲液组成的组中的任何一种，但不限于此。

如本文所用，术语“表面活性剂”是指药学上可接受的赋形剂，用于保护蛋白质制剂免受机械应力如搅拌和剪切。表面活性剂的具体实施方案可以是选自由聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80、泊洛沙姆(poloxamer)、Triton、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate)、月桂基磺酸钠(sodium lauryl sulfonate)、辛基糖苷钠(sodium octyl glycoside)、月桂基磺基甜菜碱(lauryl-sulfobetaine)、肉豆蔻基磺基甜菜碱(myristyl-sulfobetaine)、亚油酸基磺基甜菜碱(linoleyl-sulfobetaine)、硬脂基磺基甜菜碱(stearyl-sulfobetaine)、月桂基肌氨酸(lauryl-sarcosine)、肉豆蔻基肌氨酸(myristyl-sarcosine)、亚油酸基肌氨酸(linoleyl-sarcosine)、硬脂基肌氨酸(stearyl-sarcosine)、亚油酸基甜菜碱(linoleyl-betaine)、肉豆蔻基甜菜碱(myristyl-betaine)、十六烷基甜菜碱(cetyl-betaine)、月桂基酰胺丙基甜菜碱(laurylamidopropyl-betaine)、椰油酰胺丙基甜菜碱(cocamidopropyl-betaine)、亚油酸酰胺丙基甜菜碱(linoleamidopropyl-betaine,)、肉豆蔻酰胺丙基甜菜碱(myristamidopropyl-betaine)、棕榈酰胺丙基甜菜碱(palmitoylamidopropyl-betaine)、异硬脂酰胺丙基甜菜碱(isostearamidopropyl-betaine)、肉豆蔻酰胺丙基二甲胺(myristamidopropyl-dimethylamine)、棕榈酰胺丙基二甲胺(palmitoylamidopropyl-dimethylamine)、异硬脂酰胺丙基二甲胺(isostearamidopropyl-dimethylamine)、甲基椰油酰基钠(sodiummethyl cocacyl)、甲基油酰基牛磺酸钠(sodium methyl oleyl-taurate)、聚乙二醇、聚丙二醇和乙烯与丙二醇的共聚物组成的组中的任何一种。这里，所述表面活性剂可以优选为聚山梨醇酯20。

此外，所述药物制剂可以是水性制剂，优选可注射的液体制剂。

此处，抗FcRn抗体可以是HL161BKN。

HL161BKN包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的H-CDR1、如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列的H-CDR2和如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列的H-CDR3，且所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的L-CDR1、如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的L-CDR2和如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的L-CDR3。

此外，HL161BKN可包含下表1所示的重链和轻链区。另外，重链和轻链可以由表2所示的核酸编码。

[表1]

抗体的糖基化位点如下：Asn301，N-聚糖(G0F，G1F，G0-GlcNac，Man5)。

[表2]

此处，所述药物制剂可具有20cP或更低的粘度。具体地，所述药物制剂可具有1cP至20cP的粘度。此外，所述药物制剂可具有10cP至20cP的粘度，并且可具有约10cP、约11cP、约12cP、约13cP、约14cP、约15cP、约16cP、约17cP、约18cP、约19cP或约20cP的粘度。

此外，所述药物制剂可具有250mOs/kg至500mOs/kg的渗透压。具体地，所述药物制剂可具有300mOs/kg至450mOs/kg或350mOs/kg至400mOs/kg的渗透压。此外，所述药物制剂可具有约250mOs/kg、约260mOs/kg、约270mOs/kg、约280mOs/kg、约290mOs/kg、约300mOs/kg、约310mOs/kg、约320mOs/kg、约330mOs/kg、约340mOs/kg、约350mOs/kg、约360mOs/kg、约370mOs/kg、约380mOs/kg、约390mOs/kg、约400mOs/kg、约410mOs/kg、约420mOs/kg、约430mOs/kg、约440mOs/kg、约450mOs/kg、约460mOs/kg、约470mOs/kg、约480mOs/kg、约490mOs/kg或约500mOs/kg的渗透压。

此外，所述药物制剂可包含浓度为50mg/mL至250mg/mL的HL161BKN。具体地，所述药物制剂可包含浓度为60mg/mL至250mg/mL、70mg/mL至250mg/mL、80mg/mL至250mg/mL、90mg/mL至250mg/mL或100mg/mL至250mg/mL的HL161BKN。此外，所述药物制剂可包含浓度为120mg/mL至230mg/mL、150mg/mL至220mg/mL或180mg/mL至210mg/mL的HL161BKN。另外，所述药物制剂可包含浓度为约50mg/mL、约60mg/mL、约70mg/mL、约80mg/mL、约90mg/mL、约100mg/mL、约110mg/mL、约120mg/mL、约130mg/mL、约140mg/mL、约150mg/mL、约160mg/mL、约170mg/mL、约180mg/mL、约190mg/mL、约200mg/mL、约210mg/mL、约220mg/mL、约230mg/mL、约240mg/mL或约250mg/mL的HL161BKN。

此外，所述药物制剂的pH可为4.0至8.0。具体地，所述药物制剂的pH可为4.0至7.0。优选地，所述药物制剂的pH可为5.0至6.0。此外，所述药物制剂具有约pH 5.0、约pH5.1、约pH 5.2、约pH 5.3、约pH 5.4、约pH 5.5、约pH 5.6、约pH 5.7、约pH 5.8、约pH 5.9、约pH 6.0、约pH 6.1、约pH 6.2、约pH 6.3、约pH 6.4、约pH 6.5、约pH 6.6、约pH 6.7、约pH6.8、约pH 6.9或约pH 7.0。

另外，可包含10mM至400mM浓度的所述添加剂。此处，作为添加剂，甘露醇、山梨醇、精氨酸、组氨酸或甘氨酸可单独使用，且可组合使用两种或更多种。具体地，所述添加剂的浓度可分别为10mM至400mM、20mM至300mM、50mM至250mM或100mM至150mM。具体地，所述添加剂的浓度可以分别为约10mM、约20mM、约30mM、约40mM、约50mM、约60mM、约70mM、约80mM、约90mM、约100mM、约110mM、约120mM、约130mM、约140mM、约150mM、约160mM、约170mM、约180mM、约190mM、约200mM、约210mM、约220mM、约230mM、约240mM、约250mM、约260mM、约270mM、约280mM、约290mM或约300mM。

此外，可组合使用两种添加剂。在一个实施方案中，所述添加剂可包含甘露醇和山梨醇。在一个实施方案中，所述添加剂可包含甘露醇和精氨酸。在一个实施方案中，所述添加剂可包含甘露醇和组氨酸。在一个实施方案中，所述添加剂可包含甘露醇和甘氨酸。在一个实施方案中，所述添加剂可包含山梨醇和精氨酸。在一个实施方案中，所述添加剂可包含山梨醇和组氨酸。在一个实施方案中，所述添加剂可包含山梨醇和甘氨酸。在一个实施方案中，所述添加剂可包含精氨酸和组氨酸。在一个实施方案中，所述添加剂可包含精氨酸和甘氨酸。在一个实施方案中，所述添加剂可包含组氨酸和甘氨酸。这里，每种添加剂可以上述浓度包含在药物制剂中。

所述药物制剂的一个实施方案可为pH 5.0至6.0的药物制剂，其包含(a)100mg/mL至250mg/mL的抗FcRn抗体，(b)50至250mM L-精氨酸或其盐酸盐，(c)50至250mM L-组氨酸，和(d)0.01至0.05％聚山梨酯20。

此处，所述抗FcRn抗体如上所述。此外，所述药物制剂可为水性制剂，并且可为可注射的液体制剂。另外，上述药物制剂可皮下给药。

此外，已证实所述药物制剂在加速条件下非常稳定。具体地，在加速条件(25℃，相对湿度60％)下进行的6个月试验结果显示，聚集体和片段的含量可为约10％或更少。此外，在上述条件下，聚集体和片段的含量可为约9％或更少、约8％或更少、约7％或更少、约6％或更少、约5.5％或更少或约5.0％或更少。

另外，已证实所述药物制剂即使在长期储存条件下也非常稳定。具体地，在5℃和36个月的条件下，聚集体和片段的含量可为约10％或更少。此外，在上述条件下，聚集体和片段的含量可为约9％或更少、约8％或更少、约7％或更少、约6％或更少、约5％或更少、约4％或更少、约3％或更少、约2％或更少、约1.8％或更少、约1.5％或更少或约1.2％或更少。

此外，所述药物制剂可用于治疗自身免疫性疾病。此处，所述自身免疫性疾病可以为选自由重症肌无力(MG)、甲状腺眼病(TED)、温热自身免疫性溶血性贫血(WAIHA)、视神经脊髓炎(NMO)、免疫性血小板减少性紫癜(ITP)、寻常型天疱疮(PV)、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病(CIDP)、狼疮性肾炎(LN)和膜性肾病(MN)组成的组中的任何一种。

HL161BKN优化制剂筛选

在每种条件下以约210mg/mL的浓度制备HL161BKN，且在40℃的加速条件下储存4周，并进行浓度(A280)、浊度(A340)、纯度(SEC-HPLC、CEX-HPLC)、粘度、渗透压、不溶性亚可见颗粒(MFI)等分析，以评估样本的稳定性和皮下给药的适用性。

首先，对现有抗体产品中常用的11种赋形剂进行筛选试验。结果证实，L-组氨酸、L-精氨酸盐酸盐、L-甘氨酸、D-山梨醇和D-甘露醇具有减少聚集体形成的作用。

通过五种选定赋形剂的组合来测试协同效应。结果证实，L-精氨酸盐酸盐在统计学上显著水平上减少了聚集体的形成(p<0.01)。

结合聚集体和片段效应值比较结果，选择L-组氨酸和D-甘露醇作为赋形剂。此外，作为筛选其他赋形剂的结果，还额外选择了显示出减少聚集体形成效果的L-甲硫氨酸。另外，已证实组氨酸可用作基础缓冲液。而且，选择了高纯度的0.02％聚山梨酯20，其显示出抑制由于在产品储存和运输期间可能发生的搅拌应力而形成聚集体的效果。

然后，对选定的组氨酸基础缓冲液和L-精氨酸盐酸盐、D-甘露醇和L-甲硫氨酸赋形剂进行首次浓度筛选试验。此处，将PBS20的浓度固定为0.02％并进行。因此，证实了在不含赋形剂的50mM组氨酸基础缓冲液条件下稳定性高。此外，根据赋形剂条件增加的聚集体和片段的数量没有表现出显著差异，但随着添加的盐酸L-精氨酸浓度的增加，聚集体的形成减少。

另一方面，研究证实，根据D-甘露醇的存在与否和L-甲硫氨酸的浓度引起的差异很小。因此，在L-组氨酸基础缓冲液中选择盐酸L-精氨酸和0.02％ PSB20作为HL161BKN制剂。

最后，为了选择L-组氨酸和L-精氨酸盐酸盐的最佳浓度，对两批HL161BKN进行第二次浓度筛选。结果，根据赋形剂的浓度条件，增加的聚集体和片段的量没有显示出显著的差异，并且证实了在所有条件下粘度和渗透压的测量值为20cP或更低和250至500mOsmol/kg，其适于皮下给药。

加之，作为使用微流成像(MFI)对每种条件下样本进行不溶性亚可见颗粒分析的结果，确认了不溶性亚可见颗粒数量增加最少的条件；并通过纯度(聚集体和片段)、粘度和渗透压试验评估稳定性和皮下注射(SC)给药的适用性来选择最终的制剂。

总之，选择约100mM L-组氨酸、约100mM L-精氨酸盐酸盐和约0.02％聚山梨酯20(pH 6.0)作为HL161BKN非临床和1期临床试验的制剂。

在下文中，将通过实施例更详细地描述本发明。这些实施例仅用于说明本发明，对于本领域普通技术人员来说显而易见的是，本发明的范围不应被解释为受这些实施例的限制。

I.HL161BKN的制备

制备实施例1.用于制备HL161抗体的基因构建体和含有它们的载体的制备

为了制备HL161BKN，将编码包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列重链的如SEQ ID NO:3所示核酸序列的多核苷酸装载到pCHO 1.0载体(Life Technologies)上。另外，将编码包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列轻链的如SEQ ID NO:4所示核酸序列的多核苷酸装载到pCHO1.0载体上。

制备实施例2.HL161BKN细胞系的制备及HL161BKN的生产

用制备实施例1中制备的表达载体转化CHO-S细胞，并进行甲氨蝶呤和嘌呤霉素的选择过程，然后制备最终的生产细胞系。将准备的细胞系制备为细胞库并保存，且用于HL161BKN生产。抗体生产是在含有培养基(Dynamis培养基+8mM L-谷氨酰胺)的生物反应器中进行的，每2天添加一次额外的培养基(EFB+)，培养约15天后回收上清。然后，进行蛋白质A柱，在低pH下进行病毒灭活，然后进行阴离子交换色谱(AEX)和阳离子交换色谱(CEX)。之后，在浓缩和缓冲液交换(超滤/渗滤)后，通过无菌过滤进行纯化。通过分析(如SEC-HPLC、CE-SDS、cIEF、ELISA、效价和浓度)确认了生成的抗体样本的质量。

制备实施例3.HL161BKN的基本特性分析

对HL161BKN进行了热稳定性、根据pH进行的加速条件下的稳定性试验和溶解性试验。对于热稳定性，通过DSC(差示扫描量热法)分析Tm值，对于每种pH的加速条件实验，在37℃下储存1个月时监测聚集体和片段的形成度。

对于用于Tm值分析的DSC，使用来自Osong高技术医疗产业促进基金会的设备。实验在25℃至100℃的温度范围内进行，结果如图1所示。显示了IgG1型的典型DSC直方图，并且证实了根据CH结构域和Fv结构域的曲线。HL161BKN表现出79.9℃的高Tm，且分析显示为热力学非常稳定。

此外，使用pH 5.0、6.0、7.0和8.0的柠檬酸钠-磷酸盐缓冲液，制备浓度为10mg/mL的HL161BKN。此后，在37℃下储存4周，使用SEC-HPLC确认聚集体或片段的形成度。因此，聚集体或片段的形成随着pH的增加而增加(图2)。

基于此结果，在低pH 5.0和6.0下，使用具有低浓度或高浓度的缓冲液以100mg/mL的浓度制备HL161BKN，然后在40℃的加速条件下储存4周的时进行稳定性测试。结果显示，HL161BKN在pH 5.0至6.0的低pH条件下表现出稳定的趋势，且在所有条件下总体上保持高水平的单体。

此外，为了确认HL161BKN的溶解性，将其分6步浓缩至10至300mg/mL的浓度，并且逐步收集样品、目测观察，并且进行A280 nm(浓度)、A340 nm(浊度)和SEC-HPLC纯度的分析。结果证实了HL161BKN的浊度随着其浓度的增加而逐渐增加，但是在高达268mg/mL的浓度下单体纯度几乎无变化。

II.HL161BKN优化制剂的选择

制备实施例1.HL161BKN优化制剂的筛选

本实验旨在选择用于开发HL161BKN高浓度皮下给药产品的原料药和药物产品的配方。本实验使用HL161BKN-B005、HL161BKN-B018、HL161BKN-B021三个生产批次，使用的试剂和仪器如下(表3)。

[表3]

用于该制剂测试的仪器如下(表4)。

[表4]

制备实施例2.检测方法

HL161BKN的制剂筛选试验主要分为赋形剂筛选试验和赋形剂浓度筛选试验，且对其执行。具体地，以与图3中相同的方式进行实验。

实施例1.赋形剂筛选

实施例1.1.赋形剂试验

选择了目前市场上抗体产品中常用的11种赋形剂，即蔗糖、D-海藻糖、D-甘露醇、D-山梨醇、L-精氨酸HCl、L-组氨酸HCl、L-组氨酸、L-甘氨酸、聚山梨酯20、聚山梨酯80、氯化钠(NaCl)。具体地，使用5mM柠檬酸钠(pH 6.0)作为基础缓冲液(表5)，在12种缓冲液条件下进行赋形剂试验。

使用

(截留MW.30,000)将HL161BKN浓缩至1mL或更低，然后用相应的缓冲液条件置换缓冲液，以获得210mg/mL的最终浓度。按0.3至0.5mL制备每种条件下的样本，并在1.5mL微量离心管中于40℃下储存4周。在第0周、第2周和第4周采集样本，以评估浓度(A280)、浊度(A340)和纯度(SEC-HPLC、CEX-HPLC)的变化。

[表5]

实施例1.2.赋形剂组合试验

当组合选自于实施例1.1中的五种赋形剂(L-组氨酸、L-精氨酸盐酸盐、L-甘氨酸、D-山梨醇和D-甘露醇)时，证实了是否存在协同效应。具体地，使用DOE(实验设计)软件(Stat-ease DESIGN-EXPERT，版本7.0)，按2水平析因(2^n-1)设计了17项条件试验(表6)。具体地，总共进行了12个条件测试：5mM柠檬酸钠(pH 6.0)基础缓冲液条件和11种赋形剂组合条件。此外，实施例1.1的测试结果用于五种赋形剂单独条件测试。

以与实施例1.1相同的方式进行测试，进一步测量每种条件下缓冲液和样品的渗透压浓度，并使用DOE软件计算ANOVA分析结果和效应值。

[表6]

实施例1.3.其他赋形剂试验

对用于HL161BKN制剂试验的赋形剂进行了额外分析。

进行L-甲硫氨酸的另一试验，已知其具有减少共价聚集体的作用；并进行将可能在注射过程中引起疼痛的柠檬酸钠(pH 6.0)基础缓冲液改变为组氨酸(pH 6.0)的试验。此外，当使用含有大量过氧化物的低质量PSB20(聚山梨酯20)时，抗体稳定性由于氧化而降低，因此将其改为用高质量PSB20进行配制。此后，在制剂中常用的0.02％浓度下确认了对搅拌应力的影响。然后，筛选能够降低高浓度抗体产品粘度的赋形剂。

实施例1.3.1L-甲硫氨酸和组氨酸基础缓冲液试验

为了确认L-甲硫氨酸的作用以及基础缓冲液5mM柠檬酸钠(pH 6.0)是否可以改变为组氨酸(pH 6.0)，在表7所示的六种条件下进行了检测。在组氨酸基础缓冲液的情况下，将L-组氨酸和L-组氨酸盐酸盐混合以在pH 6.0下制备并使用。以与实施例1.1相同的方式进行测试。

[表7]

实施例1.3.2.聚山梨醇酯20(PSB20)试验

为了确认PSB20对搅拌应力的保护效果，在表8中的四种条件下进行了测试。将以与实施例1.1中相同的方式制备的0.5mL各样品置于1.5mL微量离心管中，并安装在MyLabintelli混合器上，在室温下以10rpm旋转1周，然后进行浓度、浊度和纯度(SEC-HPLC)分析。

[表8]

实施例1.3.3.降粘赋形剂的筛选

为了开发用于皮下给药的HL161BKN高浓度产品，测试了八种通常已知可降低粘度的赋形剂。使用50mM组氨酸(pH 6.0)作为基础缓冲液，总共进行了9次赋形剂筛选试验(表9)。

以与实施例1.1中相同的方式为每种条件制备1mL样品，并在25℃下测量粘度。此外，在进行4周加速稳定性试验的同时，评估每种条件下浓度(A280)和纯度(SEC-HPLC)的变化。

[表9]

实施例1.4.赋形剂浓度筛选

例1.4.1.首次赋形剂浓度筛选

对通过实施例1.1、1.2和1.3选择的50mM组氨酸(pH 6.0)基础缓冲液和四种赋形剂(L-甲硫氨酸、L-精氨酸盐酸盐、D-甘露醇)中的三种赋形剂(L-甲硫氨酸、L-精氨酸盐酸盐、D-甘露醇)计划进行2水平析因(2ⁿ)设计的DOE测试，并且在总共9种条件下进行赋形剂浓度筛选(表10)。

以与实施例1.1相同的方式进行实验，并分析浓度(A280)、浊度(A340)、纯度(SEC-HPLC、CEX-HPLC)、粘度和渗透压的变化。

[表10]

实施例1.4.2.第二次赋形剂浓度筛选

为了研究最终选定的组氨酸基础缓冲液和两种赋形剂(L-精氨酸盐酸盐和PSB20)中L-精氨酸盐酸盐的最佳浓度，使用两批HL161BKN B018和B021(表11)在四种条件下进行了为期4周的40℃加速稳定性试验。以与实施例1.1中相同的方式进行试验，并分析浓度(A280)、浊度(A340)、纯度(SEC-HPLC、CEX-HPLC)、粘度、渗透压和不溶性亚可见颗粒(微流成像；MFI)。

[表11]

实施例2.赋形剂筛选试验结果

实施例2.1.赋形剂试验的结果

为了评估选择用于赋形剂筛选的11种赋形剂对HL161BKN样品稳定性的影响，在40℃的加速条件下，于第0周、第2周和第4周进行了浓度、浊度、纯度、聚集体、片段和电荷变化的分析。通过这些分析，选择了5种赋形剂(L-精氨酸盐酸盐、L-组氨酸、D-甘露醇、L-甘氨酸和D-山梨醇)，它们具有抑制聚集体和片段形成的良好效果。

实施例2.1.1.浓度(A280)和浊度(A340)分析的结果

HL161BKN的浓度持续4周增加(表12)，这被认为是由于在40℃加速条件下缓冲液蒸发所致。

[表12]

另一方面，在大多数条件下浊度没有增加，或变化量为0.020或更小。然而，观察到在PSB20条件下出现视觉上可见的浑浊，并证实浑浊度(A340)也大幅增加(表13)。

[表13]

实施例2.1.2.聚集和片段分析的结果

使用SEC-HPLC对每种赋形剂条件下增加的聚集体和片段的量进行比较和评估(表14)。与基础缓冲液条件相比，盐酸L-精氨酸、L-组氨酸、盐酸L-组氨酸、D-甘露醇、L-甘氨酸、D-山梨醇能有效抑制聚集体的形成。此外，0.2％ PSB20、0.2％ PSB80和NaCl反而增加了聚集体的形成。另外，L-组氨酸、L-组氨酸盐酸盐、L-精氨酸盐酸盐和L-甘氨酸是抑制片段形成的赋形剂，且NaCl增加了片段的形成(表14和图4)。

[表14]

实施例2.1.3.电荷变体分析的结果

使用CEX-HPLC确证了根据每种赋形剂条件的HL161BKN电荷变体的变化模式。因此，未观察到电荷变体的明显变化。然而，在PSB20和NaCl条件下，主峰大幅降低(图5)。预计这是聚集体增加的结果。

实施例2.2.赋形剂组合试验的结果

评估了在实施例1.1的赋形剂试验中选择的五种赋形剂的组合对HL161BKN样品稳定性的影响。具体地，进行了为期4周的40℃加速试验，选择了有效抑制聚集体和片段形成的L-精氨酸盐酸盐、L-组氨酸和D-甘露醇。

为了确认通过赋形剂筛选试验选择的赋形剂是否通过组合具有协同效应，使用实验设计(DOE)软件计划了条件试验。总共进行了12个条件试验，包括基础缓冲液条件和11种赋形剂组合条件。实施例1.1的测试结果用于五种赋形剂单独条件测试(表15)。

当通过ANOVA分析聚集体变化量的比较结果时，发现赋形剂在统计学显著水平上减少了聚集体的形成(p<0.01)。然而，没有任何赋形剂能在统计学显著水平上减少片段的形成。

另一方面，在HL161BKN的情况下，聚集体的形成模式根据赋形剂的组合而不同，但是赋形剂的组合没有协同效应。参考方差分析和效应值的比较排序来选择赋形剂的种类。

[表15]

实施例2.2.1.浓度(A280)和浊度(A340)分析的结果

HL161BKN的浓度持续4周增加，这被认为是由于在40℃加速条件下缓冲液蒸发所致(表16)。另一方面，浊度未增加或显示为略微增加至0.054或更低(表17)。

[表16]

[表17]

实施例2.2.2.聚集体和片段分析的结果

SEC-HPLC用于比较和评估每种赋形剂组合条件下聚集体和片段的增加量(表18和图7)。此外，通过ANOVA分析了总共17个条件的SEC-HPLC数据，包括实施例1.1的仅含赋形剂的条件试验。结果，证实了L-精氨酸盐酸盐在统计学显著水平上减少了聚集体的形成(p<0.01)(图6)，并且没有赋形剂将片段的形成减少到统计学显著水平。

此外，作为对聚集体和片段的效果值进行比较的结果，证实了当L-组氨酸、D-甘露醇和D-山梨醇用作赋形剂时，HL161BKN的聚集体和片段的形成减少了。然而，在赋形剂之间没有协同效应。D-甘露醇和D-山梨醇是同分异构体，选择了其中常用的D-甘露醇(图8)。

[表18]

*A：50mM L-精氨酸盐酸盐，H：50mM L-组氨酸，G：100mM L-甘氨酸，M：200mM D-甘露醇，S：250mM D-山梨醇

实施例2.2.3.电荷变化分析的结果

使用CEX-HPLC确证了根据赋形剂组合条件的HL161BKN电荷变体变化模式。因此，未观察到电荷变体(碱性和酸性变体)的明显变化(图9)。

实施例2.2.4.粘度和渗透压分析的结果

作为对每种赋形剂组合条件的粘度测量的结果，证实了当加入L-精氨酸盐酸盐时粘度降低。渗透压随着加入的赋形剂的数量和浓度的增加而增加。具体地，证实了添加50mML-精氨酸盐酸盐、50mM L-组氨酸和100mM L-甘氨酸分别增加了约100mOsmol/kg的渗透压；添加200mM D-甘露醇增加了约200mOsmol/kg的渗透压；以及添加250mM D-山梨糖醇增加了约250mOsmol/kg的渗透压(表19)。

通常，皮下注射的渗透压类似于身体的渗透压(约290mOsmol/kg)，并被调节在约250至500mOsmol/kg的范围内(PCT/EP2009/066675)。因此，考虑到HL161BKN浓度，确定制剂缓冲液的渗透压应调节在约220至450mOsmol/kg的范围内。因此，考虑到渗透压范围，决定继续进行随后的赋形剂浓度筛选试验。

[表19]

实施例2.3.其他赋形剂试验的结果

进行了另外的赋形剂试验。结果，使用50mM组氨酸(pH 6.0)作为基础缓冲液，并选择具有抑制聚集体形成效果的L-甲硫氨酸和0.02％ PSB20(其在搅拌应力条件下抑制聚集体的形成)作为其他的赋形剂。

实施例2.3.1.L-甲硫氨酸和组氨酸基础缓冲液试验的结果

1)浓度(A280)和浊度(A340)分析的结果

HL161BKN浓度持续4周增加，这被认为是由于40℃加速条件下的缓冲液蒸发所致(表20)。浊度没有增加或显示出略微增加至0.1或更低(表21)。

[表20]

[表21]

2)聚集体和片段分析的结果

与基础缓冲液条件相比，L-甲硫氨酸表现出优异的抑制聚集体形成的作用。此外，0.02％ PSB20未增加聚集体的形成。此外，添加L-组氨酸作为赋形剂的条件下的结果与使用L-组氨酸作为基础缓冲液的条件下的结果相似，并且与10mM组氨酸条件下相比，50mM组氨酸条件下的聚集体形成有减少(表22和图10)。

[表22]

3)电荷变体分析的结果

作为CEX-HPLC分析的结果，没有观察到电荷变体(碱性和酸性变体)的明显变化(图11)。

实施例2.3.2.聚山梨醇酯20测试结果

1)浓度(A280)和浊度(A340)分析的结果

作为室温下搅拌试验的结果，浓度变化很小。在没有PSB20的情况下搅拌的样品在视觉上变成白色，且无法测量浊度(图12)。另一方面，具有PSB20的样品在搅拌条件下视觉上轻微混浊，浊度增加了约0.227(表23)。

由此证实，PSB20具有保护高浓度HL161BKN免受由搅拌引起的应力的作用。

[表23]

^*NA：不适用

2)聚集体和片段分析的结果

搅拌应力增加了聚集体的形成，并且证实了PSB20具有抑制聚集体形成的效果。另一方面，搅拌应力不会导致片段增加(表24和图13)。

[表24]

^*NA:不适用

实施例2.3.3.降粘赋形剂的筛选结果

1)浓度(A280)和粘度分析的结果

HL161BKN浓度持续4周增加(表25)，这被认为是由于在40℃的加速条件下缓冲液蒸发所致。当添加L-组氨酸盐酸盐、L-精氨酸盐酸盐和L-甘氨酸时，粘度与条件1相比有所降低，但效果不明显。另一方面，在L-赖氨酸盐酸盐、NaCl、Na₂SO₄和NH₄Cl的情况下，粘度大大增加(表26)。

[表25]

[表26]

2)聚集体和片段分析的结果

通过SEC-HPLC分析对聚集体和片段进行了分析。因此，与条件1相比，当添加L-组氨酸盐酸盐和L-精氨酸盐酸盐时，形成的聚集体相对较少，且没有赋形剂减少片段的形成(表27和图14)。

[表27]

实施例2.4.赋形剂浓度筛选的结果

实施例2.4.1.首次赋形剂浓度筛选的结果

为了筛选在上述实施例1.3中选择的组氨酸基础缓冲液(pH 6.0)和三种赋形剂(L-甲硫氨酸、L-精氨酸盐酸盐和D-甘露醇)在0.02％ PSB20中的浓度，在总共9种条件下进行了测试(表28)。因此，除了组氨酸基础缓冲液之外，还选择L-精氨酸盐酸盐和PSB20作为赋形剂。

[表28]

1)浓度(A280)、浊度(A340)分析的结果

HL161BKN浓度在4周内增加了约15％，这被认为是由于在40℃加速条件下缓冲液蒸发所致(表29)。每种条件下的浊度仅显示出平均约0.048的轻微增加(表30)。

[表29]

[表30]

2)聚集体和片段分析的结果

作为SEC-HPLC分析的结果，根据每种赋形剂浓度条件增加的聚集体和片段的量没有显示出显著差异。然而，50mM组氨酸在基础缓冲液条件(条件1)下的稳定性高，且当加入100mM而不是50mML-精氨酸盐酸盐时，聚集体的形成减少。此外，证实了聚集体和片段的量根据L-甲硫氨酸的浓度而增加，并且与基础缓冲液条件相比，加入D-甘露醇与否差异很小或略有增加(表31和图15)。

[表31]

3)电荷变体分析的结果

作为CEX-HPLC分析的结果，根据每种赋形剂条件，没有观察到电荷变体的明显变化(图16)。

4)粘度和渗透压分析的结果

作为根据每种赋形剂浓度条件测量粘度和渗透压的结果，证实了在以100mM而不是50mM的浓度添加L-精氨酸盐酸盐的条件下，降低粘度的效果高，且它们中的大多数具有112至588mOsmol/kg的浓度以满足渗透压标准(表32)。

[表32]

实施例2.4.2.第二次赋形剂浓度筛选

在实施例1.4.1的首次赋形剂浓度筛选中选择的组氨酸基础缓冲液和两种赋形剂中，为了选择L-精氨酸盐酸盐的最佳浓度，对HL161BKN的2个批次样品(HL161BKN B018和HL161BKN B021)在四种条件下通过浓度、浊度、纯度(聚集体和片段)、粘度、渗透压试验和皮下注射(SC)给药的适用性进行了稳定性评估。结果，确定100mM L-组氨酸，100mM L-精氨酸盐酸盐，0.02％ PSB20，pH 6.0为HL161BKN的最终制剂(表33)。

[表33]

1)浓度(A280)和浊度(A340)分析

在4周内，HL161BKN浓度几乎没有变化，预计这是通过用parafilm密封1.5mL微量离心机，然后将其储存在恒温恒湿仪中来防止缓冲液蒸发的效果(表34)。此外，所有条件下的浊度显示出0.102或更小的微小增加(表3)。

[表34]

[表35]

2)聚集体和片段分析

通过SEC-HPLC分析，根据每种赋形剂条件增加的聚集体和片段的量没有显示出显著差异，但是证实了在条件3(100mM L-组氨酸，100mM L-精氨酸HCl，0.02％ PSB20，pH6.0)和条件4(50mM L-组氨酸，100mM L-精氨酸HCl，0.02％ PSB20，pH 6.0)中聚集体的形成最少(表36和图17)。

[表36]

3)电荷变体分析

作为CEX-HPLC分析的结果，根据每种赋形剂条件，未观察到电荷变体(碱性和酸性变体)的明显变化(图18)。

4)粘度和渗透压分析

作为根据每种赋形剂浓度条件测量粘度和渗透压浓度的结果，将粘度调节至11至16cP，即低于20cp的限值(皮下给药产品的粘度限值)，且渗透压为350至465mOsmol/kg，以满足250至500mOsmol/kg的标准(表37)。

[表37]

5)不溶性亚可见颗粒的分析

在Osong高技术医药产业促进基金会的新药开发支持中心，使用微流成像(MFI)对HL161BKN的每个赋形剂条件样品的不溶性亚可见颗粒进行分析。

将每种条件下的样品稀释至10mg/mL，以比较5μm至100μm范围内亚可见颗粒数量的增加。结果，条件3下亚可见颗粒数量的增加最少(表38和图19)。

[表38]

实施例3.稳定性试验

在最终选定的配方条件下，由Catalent(USA)对HL161BKN进行了36个月的长期储存和加速稳定性试验。为了评估稳定性，使用硼硅酸盐玻璃瓶和涂有特氟隆的橡胶塞储存药品(DP)。作为在所选制剂条件下确认稳定性的结果，确认DP的稳定性为36个月，从而确保开发为注射剂的可能性(表39和表40)。

[表39]

[表40]

实施例4.最终开发候选抗体制剂的选择

由于HL161BKN在制剂中的高浓度下表现出非常稳定的趋势，因此旨在证实开发皮下注射给药形式的可能性。当开发注射剂时，已知20cP或更低的粘度适用于皮下给药，以减少给药部位的疼痛和副作用。因此，在9步浓缩条件下浓缩HL161BKN，并在5℃和25℃条件下测量粘度。作为确认具有170mg/mL高浓度的HL161BKN样品的粘度的结果，确认其在25℃下具有10cP的粘度，因此皮下给药是可能的(图20)。

在上述制剂研究中，证实了HL161BKN即使在200mg/mL或更高的高浓度下也具有非常稳定的性质。因此，预计将来有可能开发出自我给药的皮下注射产品。考虑到其他竞争公司的所有产品均为输注型产品，因此有可能通过增加患者便利性来实现差异化。

此外，因为证实了高浓度的HL161BKN在制剂中是稳定的，所以预期低浓度的HL161BKN在制剂中也是稳定的。因此，该制剂可适用于各种浓度的HL161BKN。

SEQUENCE LISTING

<110> 韩兀生物制药股份有限公司

<120> 抗FCRN抗体制剂

<130> P22118619WP

<150> KR 10-2020-0079135

<151> 2020-06-29

<160> 10

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 450

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HL161_重链

<400> 1

Gln Leu Leu Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Leu Ser Ser Ser

20 25 30

Phe Ser Tyr Trp Val Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Ile Gly Thr Ile Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn His Phe

65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Arg Ala Gly Ile Leu Thr Gly Tyr Leu Asp Ser Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala

130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His

195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys

210 215 220

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly

450

<210> 2

<211> 214

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HL161_轻链

<400> 2

Ser Tyr Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr

35 40 45

Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Ala Ser

50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His

85 90 95

Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys

100 105 110

Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln

115 120 125

Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly

130 135 140

Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly

145 150 155 160

Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala

165 170 175

Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser

180 185 190

Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val

195 200 205

Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210

<210> 3

<211> 1350

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 编码HL161重链的多核苷酸

<400> 3

cagctgctgc tgcaagaatc cggccctggc ctggtgaaac cctccgagac actgtccctg 60

acctgcaccg tgtccggcgg ctccctgtcc tccagcttct cctactgggt ctggatccgg 120

cagccccctg gcaagggcct ggaatggatc ggcaccatct actactccgg caacacctac 180

tacaacccca gcctgaagtc ccggctgacc atctccgtgg acacctccaa gaaccacttc 240

agcctgaagc tgtcctccgt gaccgccgct gacaccgccg tgtactactg tgccagaagg 300

gccggcatcc tgaccggcta cctggactct tggggccagg gcaccctggt gacagtgtcc 360

tccgcctcca ccaagggccc ctccgtgttc cctctggccc cctccagcaa gtccacctct 420

ggcggcaccg ctgccctggg ctgtctggtg aaagactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480

tcctggaact ctggcgccct gacctccggc gtgcacacct tccctgccgt gctgcagtcc 540

tccggcctgt actccctgtc cagcgtggtg accgtgccct ccagctctct gggcacccag 600

acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gcgggtggaa 660

cccaagtcct gcgacaagac ccacacctgt cccccctgtc ctgcccctga agctgctggc 720

ggccctagcg tgttcctgtt ccccccaaag cccaaggaca ccctgatgat ctcccggacc 780

cccgaagtga cctgcgtggt ggtggacgtg tcccacgagg accctgaagt gaagttcaat 840

tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcccagaga ggaacagtac 900

aactccacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960

aaagagtaca agtgcaaggt ctccaacaag gccctgcctg cccccatcga aaagaccatc 1020

tccaaggcca agggccagcc ccgcgagccc caggtgtaca cactgccccc tagccgggaa 1080

gagatgacca agaaccaggt gtccctgaca tgcctggtga agggcttcta cccctccgac 1140

attgccgtgg aatgggagtc caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200

gtgctggact ccgacggctc attcttcctg tactccaagc tgaccgtgga caagtcccgg 1260

tggcagcagg gcaacgtgtt ctcctgctcc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320

acccagaagt ccctgtccct gagccccggc 1350

<210> 4

<211> 642

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 编码HL161轻链的多核苷酸

<400> 4

tcttacgtgc tgacccagtc cccctccgtg tccgtggctc ctggccagac cgccagaatc 60

acctgtggcg gcaacaacat cggctccaag tccgtgcact ggtatcagca gaagcccggc 120

caggcccccg tgctggtggt gtacgacgac tccgaccggc cctctggcat ccctgagcgg 180

ttctccgcct ccaactccgg caacaccgcc accctgacca tctccagagt ggaagccggc 240

gacgaggccg actactactg ccaagtgtgg gactcctcct ccgaccacgt ggtgttcggc 300

ggaggcacca agctgaccgt gctgggccag cctaaggccg ctccctccgt gaccctgttc 360

cccccatcct ccgaggaact gcaggccaac aaggccaccc tggtctgcct gatctccgac 420

ttctaccctg gcgccgtgac cgtggcctgg aaggccgaca gctctcctgt gaaggccggc 480

gtggaaacca ccaccccctc caagcagtcc aacaacaaat acgccgcctc ctcctacctg 540

tccctgaccc ccgagcagtg gaagtcccac cggtcctaca gctgccaagt gacacacgag 600

ggctccaccg tggaaaagac cgtggcccct accgagtgct cc 642

<210> 5

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HL161_Hv CDR1

<400> 5

Phe Ser Tyr Trp Val

1 5

<210> 6

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HL161_Hv CDR2

<400> 6

Thr Ile Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 7

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HL161_Hv CDR3

<400> 7

Arg Ala Gly Ile Leu Thr Gly Tyr Leu Asp Ser

1 5 10

<210> 8

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HL161_Lv CDR1

<400> 8

Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val His

1 5 10

<210> 9

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HL161_Lv CDR2

<400> 9

Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser

1 5

<210> 10

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HL161_Lv CDR3

<400> 10

Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His Val Val

1 5 10

Claims

1.一种pH为4.0-8.0的药物制剂，所述药物制剂包含：

(a)抗FcRn抗体或其片段，

(b)至少一种选自甘露醇、山梨醇、精氨酸、组氨酸、甘氨酸及其盐的添加剂，

(c)选自柠檬酸盐或组氨酸的缓冲体系，和

(d)表面活性剂。

2.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述添加剂为精氨酸或其盐，和所述缓冲体系为组氨酸。

3.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述表面活性剂为聚山梨酯。

4.如权利要求1所述的药物制剂，其进一步包含甲硫氨酸。

5.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述药物制剂为注射剂的形式。

6.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述药物制剂具有20cP或更低的粘度。

7.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述药物制剂具有250mOs/kg至500mOs/kg的渗透压。

8.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述抗FcRn抗体或其片段的浓度为50mg/mL至250mg/mL。

9.如权利要求8所述的药物制剂，其中所述抗FcRn抗体或其片段的浓度为80mg/mL至250mg/mL。

10.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述药物制剂的pH为4.0至7.0。

11.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述抗FcRn抗体包含：

重链可变区，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的H-CDR1、如SEQID NO:6所示的氨基酸序列的H-CDR2和如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列的H-CDR3；和

轻链可变区，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的L-CDR1、如SEQID NO:9所示的氨基酸序列的L-CDR2和如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的L-CDR3。

12.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述药物制剂通过皮下给药。

13.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述药物制剂包含：

(a)50mg/mL至250mg/mL的抗FcRn抗体，

(b)50至250mM的L-精氨酸或其盐酸盐，

(c)50至250mM的L-组氨酸缓冲液，和

(d)0.01至0.05％的聚山梨酯20，和

所述药物制剂的pH为4.0至7.0。

14.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述药物制剂具有增加的稳定性，其中当在加速条件(25℃，60％的相对湿度)下储存6个月时，HL161BKN的聚集体和片段的量为10％或更少。

15.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述药物制剂具有增加的稳定性，其中当在长期储存条件(5℃)下储存36个月时，HL161BKN的聚集体和片段的量为10％或更少。

16.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述药物制剂具有增加的稳定性，其中当在长期储存条件(5℃)下储存36个月时，HL161BKN的聚集体和片段的量为5.0％或更少。

17.如权利要求1～16中任一项所述的药物制剂，其中所述药物制剂用于治疗选自由重症肌无力、甲状腺眼病、温热自身免疫性溶血性贫血、视神经脊髓炎、免疫性血小板减少性紫癜、寻常天疱疮、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、狼疮性肾炎和膜性肾病的自身免疫性疾病组成的组。