CN115684581A - 磁珠的保存液及其保存方法 - Google Patents

磁珠的保存液及其保存方法 Download PDF

Info

Publication number
CN115684581A
CN115684581A CN202110857803.9A CN202110857803A CN115684581A CN 115684581 A CN115684581 A CN 115684581A CN 202110857803 A CN202110857803 A CN 202110857803A CN 115684581 A CN115684581 A CN 115684581A
Authority
CN
China
Prior art keywords
magnetic beads
preservation solution
preservation
solution
water
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202110857803.9A
Other languages
English (en)
Inventor
赵子健
丁丁
尹思懿
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
BOE Technology Group Co Ltd
Beijing BOE Technology Development Co Ltd
Original Assignee
BOE Technology Group Co Ltd
Beijing BOE Technology Development Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by BOE Technology Group Co Ltd, Beijing BOE Technology Development Co Ltd filed Critical BOE Technology Group Co Ltd
Priority to CN202110857803.9A priority Critical patent/CN115684581A/zh
Priority to PCT/CN2022/103699 priority patent/WO2023005617A1/zh
Publication of CN115684581A publication Critical patent/CN115684581A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本公开涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种磁珠的保存液及其保存方法。可以延长磁珠的保存时间，防止磁珠在保存过程中发生聚集，保持磁珠的单分散性。一种磁珠的保存液，包含：表面活性剂、水溶性盐和抑菌剂。

Description

磁珠的保存液及其保存方法
技术领域
本公开涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种磁珠的保存液及其保存方法。
背景技术
磁珠在整个生命科学领域里扮演着极为重要的角色，是一种关键的原材料，在免疫、病理、生理、药理、微生物、生化以及分子遗传学等各个子领域里均发挥着至关重要的作用，其在免疫检测、细胞分离、生物大分子纯化和分子生物学等方面得到了越来越广泛的应用。
发明内容
本发明的主要目的在于，提供一种磁珠的保存液及其保存方法。可以延长磁珠的保存时间，防止磁珠在保存过程中发生聚集，保持磁珠的单分散性。
为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：
一方面，提供一种磁珠的保存液，包含：表面活性剂、水溶性盐和抑菌剂。
在一些实施例中，所述水溶性盐选自二价盐中的一种或多种组合，且在所述水溶性盐选自二价盐中的多种组合的情况下，多种二价盐之间不发生化学反应。
在一些实施例中，所述水溶性盐选自钙盐和镁盐中的一种或多种组合。
在一些实施例中，所述水溶性盐选自氯化钙和氯化镁中的一种或两种组合。
在一些实施例中，所述水溶性盐在所述保存液中的摩尔浓度为1mol/L～3mol/L。
在一些实施例中，所述抑菌剂选自抗生素。
在一些实施例中，所述抗生素为广谱抗生素。
在一些实施例中，所述抗生素选自氯霉素、四环霉素和万古霉素中的一种或多种组合，每种抗生素在所述保存液中的体积百分比为0.1％～0.5％。
在一些实施例中，所述表面活性剂在所述保存液中的体积百分比为0.5％～5％。
在一些实施例中，还包含：乙二胺四乙酸。
在一些实施例中，所述乙二胺四乙酸在所述保存液中的摩尔浓度为0.5mmol/L～20mmol/L。
在一些实施例中，还包含：缓冲剂，所述缓冲剂的添加量使得所述保存液的pH值为7.5～8.5。
另一方面，提供一种磁珠的保存方法，包括：
将磁珠分散于如上所述的磁珠的保存液中。
在一些实施例中，所述磁珠的保存温度为4℃～8℃。
本公开的实施例提供一种磁珠的保存液及其保存方法。通过将磁珠分散于磁珠的保存液中进行保存，保存液中的表面活性剂起到分散和稳定的作用，水溶性盐起到对磁珠进行分散的作用，抗菌剂起到抑菌的作用，与相关技术中仅通过添加表面活性剂和缓冲剂相比，水溶性盐的添加，能够保持磁珠的单分散性，防止磁珠发生聚集，抗菌剂的添加，能够在保存过程中防止细菌生成，因此基于以上保存液保存的磁珠能够保存更长的时间。
附图说明
为了更清楚地说明本公开中的技术方案，下面将对本公开一些实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本公开的一些实施例的附图，对于本领域普通技术人员来讲，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1A为保存6个月后，对比例中磁珠在显微镜下的分散图；
图1B为保存6个月后，实验例1中磁珠在显微镜下的分散图；
图2为在保存期间，对比例和实验例1中磁珠的团聚比例的变化的折线图；
图3为实验例1～实验例6中在保存3个月后，磁珠的团聚比例的柱状图。
具体实施方式
下面将结合附图，对本公开一些实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本公开一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本公开所提供的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本公开保护的范围。
除非上下文另有要求，否则，在整个说明书和权利要求书中，术语“包括(comprise)”及其其他形式例如第三人称单数形式“包括(comprises)”和现在分词形式“包括(comprising)”被解释为开放、包含的意思，即为“包含，但不限于”。在说明书的描述中，术语“一个实施例(one embodiment)”、“一些实施例(some embodiments)”、“示例性实施例(exemplary embodiments)”、“示例(example)”、“特定示例(specific example)”或“一些示例(some examples)”等旨在表明与该实施例或示例相关的特定特征、结构、材料或特性包括在本公开的至少一个实施例或示例中。上述术语的示意性表示不一定是指同一实施例或示例。此外，所述的特定特征、结构、材料或特点可以以任何适当方式包括在任何一个或多个实施例或示例中。
“A、B和C中的至少一个”与“A、B或C中的至少一个”具有相同含义，均包括以下A、B和C的组合：仅A，仅B，仅C，A和B的组合，A和C的组合，B和C的组合，及A、B和C的组合。
“A和/或B”，包括以下三种组合：仅A，仅B，及A和B的组合。
生物磁珠是指具有细小粒径(一般为1nm～100nm，也叫纳米磁珠)的超顺磁微球，具有超强的顺磁性，即在外加磁场中具有较强的磁响应性，而撤去磁场后，磁珠的磁性马上消失，也就是没有剩磁，重新均匀分散于溶液中。利用这一特性，可以用来吸附液体中的某种成分，然后通过磁性分离磁珠来达到分离成分的目的。
为了能够吸附所要的物质，在磁珠的外表面必须包裹有特异性的基团，如氨基、羟基、羧基、巯基等功能基团，通过这些基团与目的分子进行特异性的结合，然后通过磁力收集磁珠，就可以把所需要的物质分离出来。
与传统的分离方法相比，把磁珠用于生化样品复杂组分的分离，能够实现分离和富集的同时进行，有效地提高了分离速度和富集效率，同时也使分析检测的灵敏度大大提升。
目前，磁珠具有百亿美金的应用市场，包括Beckman(贝克曼)、Spherotech、Invitrogen、Millipore-Sigma等多家巨头公司均将磁珠业务作为主营业务之一，然而，磁珠虽然用途广泛，但是，一直以来其保存运输是一大难题，磁珠不耐低温与高温，只能维持4-8℃的运输，因此，磁珠保存液要求在该室温条件下具有较长保质期和耐受性，其二，磁珠容易聚集，然而聚集后的磁珠会对分离、检测效果产生巨大影响，且不可控，因此长效稳定地维持磁珠单分散对于整个行业具有极为重要的作用，不仅可以大大降低物流仓储成本，亦可以对下游应用产品提供极为有利的条件。
目前，市面上出售的磁珠保存液一般为添加了表面活性剂和缓冲剂的水溶液，保存期只有十天左右，保存效果较差。此外，在使用过程中发现，随着磁珠表面的特异性的基团不同，保存液的保存效果也存在一定的差异，通用性较差。
基于此，本公开的一些实施例提供一种磁珠的保存液，包括：表面活性剂、水溶性盐、抑菌剂和水等。
其中，表面活性剂示例的可以包括阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、两性离子表面活性剂和非离子表面活性剂等。其中，阳离子表面活性剂中起表面活性作用的部分是阳离子，如季铵化物等。阴离子表面活性剂中起表面活性作用的部分是阴离子，如硫酸化物等。两性离子表面活性剂的分子结构中，与疏水基相连的亲水基是电性相反的两个基团，即同时具有正、负电荷基团，如阴离子部分可以是羧酸盐，阳离子部分可以是胺盐或季铵盐。非离子表面活性剂在水中不解离，其分子结构中亲水基团主要是聚阳乙烯基和多元醇的羟基，亲油基团主要是长链脂肪酸或长链脂肪醇以及烷基或芳基等。
在磁珠与保存液混合时，若保存液中不含有表面活性剂，则磁珠在保存液中分散为许多微小粒子，扩大了它们之间的接触面积，导致体系能位增加而处于不稳定状态。当加入表面活性剂时，表面活性剂的亲油基吸附在磁珠上的有机分子的疏水链表面，而亲水基伸入水中，并在磁珠表面定向排列形成一层亲水性分子膜，使磁珠和水之间的界面张力降低，降低了体系的能位并且减少了磁珠之间的吸引力，防止磁珠聚集。表面活性剂在磁珠表面形成的定向排列的分子膜是一层坚固的保护膜，能防止磁珠碰撞而聚集。如果表面活性剂是离子型表面活性剂，则还会使磁珠带上同种电荷，使相互间的斥力增加，防止磁珠在频繁碰撞中发生聚集。因此，表面活性剂的加入可以使磁珠悬浮液保持稳定，并能够在一定程度上保持磁珠分散，可以提高磁珠对生化样品(如核酸等)的吸附效率。
然而，对于不同种类的表面活性剂而言，其在保存液中的添加量也有所不同，对于非离子型表面活性剂，表面活性剂主要通过空间位阻作用使磁珠分散，对于离子型表面活性剂，表面活性剂虽然可以通过电荷排斥作用使磁珠分散，但是，表面活性剂与磁珠表面的电荷中和作用，有可能破坏磁珠之间的静电排斥力而使磁珠分散脱稳而发生凝聚，并且，磁珠还会在高分子表面活性剂的桥连作用下形成粗大的絮凝体(也即表面活性剂的絮凝作用)，尤其是在表面活性剂的添加量较多的情况下，从而不利于磁珠在保存液中进一步分散。
基于此，在一些实施例中，表面活性剂在保存液中的体积百分比为0.5％～5％。用溶质(液态)的体积占全部溶液体积的百分比来表示的浓度，称为体积百分比浓度，这里，表面活性剂在保存液中的体积百分比为0.5％～5％，是指，表面活性剂的体积占保存液的体积的百分比为0.5％～5％。也即，表面活性剂在保存液中的体积百分比可以为0.5％～5％之间的任意值，示例的，表面活性剂在保存液中的体积百分比可以为0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％或5％等。
在一些实施例中，表面活性剂在保存液中的体积百分比为0.5％。可以最大程度上降低表面活性剂的絮凝作用，提高磁珠的单分散性。
在一些实施例中，表面活性剂选自吐温20、十二烷基硫酸钠(Sodium dodecylsulfate，SDS)和脂肪酸山梨坦(商品名为：司盘(Span))中的任一种或两种以上组合。其中，在表面活性剂选自吐温20、十二烷基硫酸钠和脂肪酸山梨坦中的任意两种以上组合的情况下，这任意两种以上的表面活性剂可以任意比例进行混合。
吐温20和脂肪酸山梨坦均为含有山梨醇结构的非离子型表面活性剂。分子中含有较多的亲水性基团，可与水、甲醇、乙醇、异丙醇、丙二醇、乙二醇等混溶。十二烷基硫酸钠是一种阴离子表面活性剂。这几种表面活性剂为最常用的表面活性剂，且化学性质稳定。
在这些实施例中，通过实验发现，通过将这几种表面活性剂以任意比例进行组合，均能够使磁珠保持较长时间的单分散效果，例如，通过将表面活性剂的添加量控制在体积百分比为0.5％～5％的范围内，在采用上述保存液对磁珠保存3个月后，磁珠的团聚比例可以保持在6％以下。
在一些示例中，吐温20在保存液中的体积百分比为0.2％，十二烷基硫酸钠(Sodium dodecyl sulfate，SDS)在保存液中的体积百分比为0.25％，脂肪酸山梨坦在保存液中的体积百分比为0.05％。通过实验发现，通过将吐温20、十二烷基硫酸钠和脂肪酸山梨坦的添加量保持在此范围内，可以最大程度上减少磁珠的团聚比例，延长保存时间，例如，在采用上述保存液对磁珠保存3个月后，磁珠几乎没有团聚。
盐在化学中，是指一类金属离子或铵根离子(NH4+)与酸根离子(阴离子)通过离子键结合形成的化合物。水溶性盐是指可以溶于水的盐，水溶性盐溶于水中会离解出所有的离子。
水溶性盐在水中可以为磁珠提供离子环境，通过带电离子与磁珠表面的基团之间相互作用，可以使磁珠表面的基团均处于舒张的状态，避免磁珠和磁珠的基团之间相互作用而发生团聚。这是因为：水溶性盐在水中电离成阳离子和阴离子，根据阴阳离子相互吸引的特性，在水溶性盐的阳离子与磁珠上的基团(如羧基)形成水合离子的情况下，阴离子环绕在该水合离子的周围，这样，即可在磁珠的表面形成一层阴离子膜，利用磁珠之间的静电排斥力，即可保持磁珠分散。
其中，水溶性盐可以选自单价盐和多价盐中的一种或多种组合，在此不做具体限定。
需要说明的是，水溶性盐的添加量与水溶性盐的带电离子的带电量有关，由上述作用机理可以得知，在磁珠表面的基团一定的情况下，为了使磁珠表面的基团均与水溶性盐的带电离子结合成水合离子，所需要的水溶性盐的带电离子的带电量与磁珠表面的基团的带电量相同，正负相反。
示例的，以磁珠表面的基团为羧基为例，在水溶性盐选自单价盐，如氯化钠的情况下，一个羧基可以与一个钠离子形成一个水合离子，假设羧基在保存液中的摩尔浓度为1mol/L，则需要添加的氯化钠在保存液中的摩尔浓度也为1mol/L，而在水溶性盐选自二价盐，如氯化镁的情况下，一个镁离子可以与两个羧基形成一个水合离子，这时，需要添加的氯化镁在保存液中的摩尔浓度为0.5mol/L即可，由此可见，对于单价盐来说，为了达到与多价盐相同的技术效果，需要在保存液中添加较高的浓度，而随着添加浓度过高，容易使磁珠保存液中产生絮凝，不利于磁珠的单分散。
在一些实施例中，水溶性盐选自二价盐中的一种或多种组合，且在水溶性盐选自二价盐中的多种组合的情况下，多种二价盐之间不发生化学反应。
在二价盐中，元素中成正态的金属的化合价为正二价，如：硫酸镁、氯化镁、氯化锌等。与单价盐相比，在阳离子的摩尔浓度相当的情况下，二价盐中阳离子的带电量更有助于使磁珠表面的基团处于舒张的状态。另外，通过使多种二价盐之间不发生化学反应，可以使多种二价盐均以离子状态存在，避免多种二价盐之间发生化学反应生成沉淀。
在一些实施例中，水溶性盐选自钙盐和镁盐中的一种或多种组合。
示例的，水溶性盐选自氯化钙和氯化镁中的一种或两种组合。
其中，对水溶性盐在保存液中的摩尔浓度不做具体限定，针对不同的磁珠保存液体系，可以对水溶性盐在保存液中的摩尔浓度进行合理设置，以达到避免磁珠聚集的技术效果。
在一些实施例中，水溶性盐在保存液中的摩尔浓度为1mol/L～3mol/L。也即，水溶性盐在保存液中的摩尔浓度可以为1mol/L～3mol/L之间的任意值，示例的，水溶性盐在保存液中的摩尔浓度可以为1mol/L、1.5mol/L、2mol/L、2.5mol/L或3mol/L等。
通过实验发现，通过将水溶性盐在保存液中的摩尔浓度保持在以上范围内，可以上使磁珠表面的基团处于舒张状态，并能够防止水溶性盐浓度过高而使得磁珠保存液中产生絮凝，从而可以长时间保持磁珠的单分散效果。
抑菌剂就是能抑制细菌生长的物质。抑菌剂可能无法杀死细菌，但它可以抑制细菌的生长，阻止细菌滋生过多。
在本申请中，抑菌剂可以为任何能够抑制细菌生长的物质，在此不做具体限定。
在本申请的一些实施例中，抗菌剂选自抗生素。抗生素主要是由细菌、霉菌或其他微生物产生的次级代谢产物或人工合成的类似物，主要用于治疗各种细菌感染或致病微生物感染类疾病，其能选择性地作用于菌体细胞DNA(DeoxyriboNucleic Acid，脱氧核糖核酸)、RNA(Ribonucleic Acid，核糖核酸)和蛋白质合成***的特定环节，干扰细胞的代谢作用，妨碍生命活动或使停止生长，甚至死亡，因此，通过在保存液中添加抗生素，能够最大程度上防止细菌感染，具有良好的抑菌效果。另外，在将该磁珠的保存液用于下游产品的制备和处理时，还可以对下游产品中的细菌进行消杀，并可用于下游产品的无菌保存。
在一些实施例中，抗生素选自广谱抗生素。广谱抗生素指的是抗菌谱比较宽的药物，简单说就是能够抵抗大部分细菌的药物。通过在保存液中添加广谱抗生素，即可保证保存液在保存过程中不会被大部分细菌所感染。
在一些实施例中，抗生素可以选自氯霉素、四环霉素和万古霉素中的一种或多种组合，每种抗生素在保存液中的体积百分比为0.1％～0.5％。
其中，在抗生素选自氯霉素、四环霉素和万古霉素中的一种的情况下，这种抗生素在保存液中的体积百分比可以是0.1％～0.5％中的任意值，示例的，以抗生素选自氯霉素为例，氯霉素在保存液中的体积百分比可以是0.1％、0.15％、0.2％、0.25％、0.3％、0.35％、0.4％、0.45％或0.5％。在抗生素选自氯霉素、四环霉素和万古霉素中的多种组合的情况下，不同种类的抗生素在保存液中的体积百分比均可以是0.1％～0.5％中的任意值。示例的，以抗生素选自氯霉素和万古霉素为例，氯霉素在保存液中的体积百分比可以是0.1％、0.15％、0.2％、0.25％、0.3％、0.35％、0.4％、0.45％或0.5％，同时，万古霉素在保存液中的体积百分比也可以是0.1％、0.15％、0.2％、0.25％、0.3％、0.35％、0.4％、0.45％或0.5％，当然，能够理解的是，在抗生素选自氯霉素、四环霉素和万古霉素的情况下，氯霉素在保存液中的体积百分比可以是0.1％、0.15％、0.2％、0.25％、0.3％、0.35％、0.4％、0.45％或0.5％，四环霉素在保存液中的体积百分比也可以是0.1％、0.15％、0.2％、0.25％、0.3％、0.35％、0.4％、0.45％或0.5％，同时，万古霉素在保存液中的体积百分比也可以是0.1％、0.15％、0.2％、0.25％、0.3％、0.35％、0.4％、0.45％或0.5％。
在这些实施例中，通过选择一种或多种抗生素，并将每种抗生素在保存液中的体积百分比限定在以上范围内，由于每种抗生素的功能不同，因此，在抗生素选自多种组合的情况下，可以抑制不同种类的细菌生长。
在一些示例中，抗生素选自氯霉素和万古霉素，氯霉素在保存液中的体积百分比为0.3％，万古霉素在保存液中的体积百分比为0.5％。
在这些实施例中，通过实验发现，通过选择氯霉素和万古霉素，并将氯霉素和万古霉素在保存液中的体积百分比限定在以上范围内，可以最大程度上提高磁珠的保存时间，并能够满足实际保存要求。
在一些实施例中，保存液还可以包括：乙二胺四乙酸。乙二胺四乙酸可以与保存液中的钙离子和镁离子结合成螯合物，由于多数核酸酶类和有些蛋白酶类的作用需要Mg2+，因此，通过使乙二胺四乙酸与Mg2+结合，可以对核酸酶、蛋白酶的酶解反应进行抑制。
其中，对乙二胺四乙酸的添加量不做具体限定，只要乙二胺四乙酸能够与保存液中游离的钙离子和镁离子结合成螯合物，避免过量的游离镁离子参与多数核酸酶类和有些蛋白酶类的酶解反应即可。
在一些实施例中，乙二胺四乙酸在保存液中的摩尔浓度为0.5mmol/L～20mmol/L。也即，乙二胺四乙酸在保存液中的摩尔浓度可以为0.5mmol/L～20mmol/L之间的任意值，示例的，乙二胺四乙酸在保存液中的摩尔浓度可以为0.5mol/L、1mol/L、1.5mol/L、2mol/L、2.5mol/L、3mol/L、3.5mol/L、4mol/L、4.5mol/L、5mol/L、5.5mol/L、6mol/L、6.5mol/L、7mol/L、7.5mol/L、8mol/L、8.5mol/L、9mol/L、9.5mol/L、10mol/L、10.5mol/L、11mol/L、11.5mol/L、12mol/L、12.5mol/L、13mol/L、13.5mol/L、14mol/L、14.5mol/L、15mol/L、15.5mol/L、16mol/L、17.5mol/L、18mol/L、18.5mol/L、19mol/L、19.5mol/L或20mol/L等。
在这些实施例中，通过将乙二胺四乙酸的摩尔浓度限定在上述范围内，可以起到抗酶解的作用，同时，在乙二胺四乙酸过量的情况下，还可以起到抑菌的作用。
在一些实施例中，保存液还包含：缓冲剂，缓冲剂的添加量使得保存液的pH值为7.5～8.5。
在这些实施例中，通过添加缓冲剂，可以使保存液的pH值保持在7.5～8.5，从而可以避免保存液的pH值发生大幅度变化，不利于保存液应用的缺陷。也即，保存液的pH值可以是7.5～8.5中的任意值。
其中，上述缓冲剂可以为任意可以使保存液的pH值保持在7.5～8.5的缓冲剂，在此不做具体限定。
在一些实施例中，缓冲剂选自TE。TE缓冲剂是由Tris(Tris(hydroxymethyl)methyl aminomethane，三羟甲基氨基甲烷)和EDTA(Ethylene Diamine TetraaceticAcid，乙二胺四乙酸)配制而成，主要用于溶解核酸，能稳定储存DNA(DeoxyriboNucleicAcid，脱氧核糖核酸)和RNA(Ribonucleic Acid，核糖核酸)。TE缓冲剂是一种能在加入少量酸或碱时抵抗pH改变的溶液。
在一些实施例中，缓冲剂在保存液中的摩尔浓度为0.1mmol/L～10mmol/L。也即，缓冲剂在保存液中的摩尔浓度可以为0.1mmol/L～10mmol/L中的任意值。示例的，缓冲剂在保存液中的摩尔浓度可以为0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.5mmol/L、1mmol/L、1.5mmol/L、2mmol/L、2.5mmol/L、3mmol/L、3.5mmol/L、4mmol/L、4.5mmol/L、5mmol/L、5.5mmol/L、6mmol/L、6.5mmol/L、7mmol/L、7.5mmol/L、8mmol/L、8.5mmol/L、9mmol/L、9.5mmol/L或10mmol/L等。
本公开的一些实施例提供一种磁珠的保存方法，包括：
将磁珠分散于如上所述的磁珠的保存液中。
具体的，可以称取一定量的磁珠，将磁珠放置于磁珠的保存液中，并在搅拌条件下使磁珠分散。磁珠包括四氧化三铁，以及包裹在四氧化三铁表面的PEG(polyethyleneglycol，聚乙二醇)和有机分子(有机分子与PEG键合，该有机分子的外层具有特异性基团)。
为了使磁珠在保存液中能够充分分散开来，可选的，磁珠在保存液中的浓度为10mg/mL。
磁珠的尺寸分布方差小于5％，也就是磁珠的颗粒大小基本一致，此时磁珠具有单分散性。
在这些实施例中，通过将磁珠分散于上述所述的磁珠的保存液中进行保存，保存液中的表面活性剂起到分散和稳定的作用，水溶性盐起到对磁珠进行分散的作用，抗菌剂起到抑菌的作用，与相关技术中仅通过添加表面活性剂和缓冲剂相比，水溶性盐的添加，能够保持磁珠的单分散性，防止磁珠发生聚集，抗菌剂的添加，能够在保存过程中防止细菌生成，因此基于以上保存液保存的磁珠能够保存更长的时间。
在一些实施例中，磁珠的保存温度为4℃～8℃。
在这些实施例中，通过冷藏保存，可以进一步延长磁珠的保存时间。
为了对本申请的实施例所带来的技术效果进行客观评价，以下，将通过对比例和实验例对本申请进行详细地示例性地描述。
在以下的对比例和实验例中，所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
在以下的对比例和实验例中，所采用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径购得。
在以下的对比例和实验例中，磁珠在保存液中的浓度均为10mg/mL，保存温度均为4℃，保存液的组成如下表1所示。
表1
Figure BDA0003184747500000121
其中，在表1中，“/”表示在保存液中无此成分，也即，在对比例中，保存液中不含有水溶性盐和抑菌剂。上述在实验例1中，(吐温20+SDS+Span)0.5％+0.5％+3％表示，表面活性剂包括吐温20、SDS和Span，吐温20在保存液中的体积百分比为0.5％，SDS在保存液中的体积百分比为0.5％，Span在保存液中的体积百分比为3％。同理，(氯霉素+万古霉素)0.5％+0.3％，是指抗菌剂包括氯霉素和万古霉素，氯霉素在保存液中的体积百分比为0.5％，万古霉素在保存液中的体积百分比为0.3％。(氯化镁+氯化钙)1+1，是指水溶性盐包括氯化镁和氯化钙，氯化镁和氯化钙在保存液中的摩尔浓度均为1mol/L。
每间隔一个月进行取样，并在显微镜下观测，记录对比例、实验例1～实验例6的取样中磁珠的团聚数量，并计算团聚比例，直至保存到6个月。
如图1A所示，为保存6个月后，对比例中磁珠的分散图，由图2可知，如图1B所示，为保存6个月后，实验例1中磁珠的分散图，由图1A和图1B所示，在保存6个月后，对比例中磁珠大部分发生了团聚，实验例1仅有很少的部分发生了团聚，大多处于单分散的状态。
如图2所示，为在保存期间，对比例和实验例1中磁珠的团聚比例的变化的折线图，由图2可知，随着保存时间的延长，对比例中磁珠在保存3个月后就发生了较大程度的团聚，在保存5个月后，磁珠的团聚比例急剧增大。而实验例1中磁珠在保存5个月后才发生了较少的团聚，在保存6个月后，磁珠的团聚比例仍然处于比较小的范围内。
如图3所示，为实验例1～实验例6中磁珠在保存3个月后的团聚比例的对比图，由图3可知，实验例1～实验例6中在保存3个月后，磁珠的团聚比例均小于6％，可见，本申请提供的保存液能够保持磁珠的单分散性，从而能够大大延长磁珠的保存时间，可以满足目前的应用要求。并且，由图3可知，实验例1在保存3个月后，磁珠几乎没有发生团聚，可见，通过对各个组分进行选择，并对选择的组分在保存液中的浓度进行合理设置，可以最大程度上减少磁珠团聚，具有预料不到的技术效果。同时，由实验例1和实验例6可知，在表面活性剂的组成相同的情况下，实验例6中磁珠发生团聚较为明显，可见，保存液的保存效果是各组分协同作用的结果，具有广阔的应用前景。
以上所述，仅为本公开的具体实施方式，但本公开的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本公开揭露的技术范围内，想到变化或替换，都应涵盖在本公开的保护范围之内。因此，本公开的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

Claims (14)

1.一种磁珠的保存液，其特征在于，包含：表面活性剂、水溶性盐和抑菌剂。
2.根据权利要求1所述的磁珠的保存液，其特征在于，
所述水溶性盐选自二价盐中的一种或多种组合，且在所述水溶性盐选自二价盐中的多种组合的情况下，多种二价盐之间不发生化学反应。
3.根据权利要求2所述的磁珠的保存液，其特征在于，
所述水溶性盐选自钙盐和镁盐中的一种或多种组合。
4.根据权利要求3所述的磁珠的保存液，其特征在于，
所述水溶性盐选自氯化钙和氯化镁中的一种或两种组合。
5.根据权利要求1～4任一项所述的磁珠的保存液，其特征在于，
所述水溶性盐在所述保存液中的摩尔浓度为1mol/L～3mol/L。
6.根据权利要求1～4任一项所述的磁珠的保存液，其特征在于，
所述抑菌剂选自抗生素。
7.根据权利要求6所述的磁珠的保存液，其特征在于，
所述抗生素为广谱抗生素。
8.根据权利要求7所述的磁珠的保存液，其特征在于，
所述抗生素选自氯霉素、四环霉素和万古霉素中的一种或多种组合，每种抗生素在所述保存液中的体积百分比为0.1％～0.5％。
9.根据权利要求1～4任一项所述的磁珠的保存液，其特征在于，
所述表面活性剂在所述保存液中的体积百分比为0.5％～5％。
10.根据权利要求1～4任一项所述的磁珠的保存液，其特征在于，还包含：乙二胺四乙酸。
11.根据权利要求10所述的磁珠的保存液，其特征在于，
所述乙二胺四乙酸在所述保存液中的摩尔浓度为0.5mmol/L～20mmol/L。
12.根据权利要求1～4任一项所述的磁珠的保存液，其特征在于，还包含：缓冲剂，所述缓冲剂的添加量使得所述保存液的pH值为7.5～8.5。
13.一种磁珠的保存方法，其特征在于，包括：
将磁珠分散于如权利要求1～12任一项所述的磁珠的保存液中。
14.根据权利要求13所述的磁珠的保存方法，其特征在于，
所述磁珠的保存温度为4℃～8℃。
CN202110857803.9A 2021-07-28 2021-07-28 磁珠的保存液及其保存方法 Pending CN115684581A (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110857803.9A CN115684581A (zh) 2021-07-28 2021-07-28 磁珠的保存液及其保存方法
PCT/CN2022/103699 WO2023005617A1 (zh) 2021-07-28 2022-07-04 磁珠的保存液及其保存方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110857803.9A CN115684581A (zh) 2021-07-28 2021-07-28 磁珠的保存液及其保存方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN115684581A true CN115684581A (zh) 2023-02-03

Family

ID=85058910

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110857803.9A Pending CN115684581A (zh) 2021-07-28 2021-07-28 磁珠的保存液及其保存方法

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN115684581A (zh)
WO (1) WO2023005617A1 (zh)

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106501515A (zh) * 2016-12-07 2017-03-15 普菲特益斯生物科技（北京）有限公司 Ca215检测试剂盒及其制备方法和使用方法
CN108267579B (zh) * 2016-12-30 2020-10-20 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 稳定保存稀释液、抗核抗体检测试剂及其制备方法和应用
JP2018124277A (ja) * 2017-02-02 2018-08-09 三洋化成工業株式会社 粒子含有組成物、免疫測定用試薬、免疫測定方法及び粒子の保存方法
CN108220281A (zh) * 2017-09-25 2018-06-29 天津强微特生物科技有限公司 一种含有结合核酸的磁珠在生物样品保存液的制备和运用
CN109725148B (zh) * 2018-12-30 2022-05-03 广东环凯微生物科技有限公司 一种免疫磁珠保存液
CN110609134B (zh) * 2019-10-14 2022-10-04 珠海丽珠试剂股份有限公司 磁微粒保存液及其制备方法和使用方法、免疫反应试剂及其用途
CN113607962B (zh) * 2021-08-06 2023-05-09 三诺生物传感股份有限公司 一种cTnI抗体包被磁珠的保存液及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
WO2023005617A9 (zh) 2023-09-28
WO2023005617A1 (zh) 2023-02-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8992985B2 (en) Core-shell magnetic particles and related methods
JP6423833B2 (ja) 抗菌性金属ナノ粒子の組成物および方法
Zhang et al. Evaluation of the disinfectant performance of silver nanoparticles in different water chemistry conditions
KR100976291B1 (ko) 안과용 조성물중의 살생물제에 대한 담체로서 나노입자의용도
Kanazawa et al. A novel approach to mode of action of cationic biocides morphological effect on antibacterial activity
Pencheva et al. Polyvinyl alcohol/silver nanoparticles (PVA/AgNps) as a model for testing the biological activity of hybrid materials with included silver nanoparticles
US7078224B1 (en) Cell concentration and lysate clearance using paramagnetic particles
CN103563983B (zh) 一种纳米银过氧化物复合杀菌液及其制备方法
Smalyukh et al. Elasticity-mediated nematiclike bacterial organization in model extracellular DNA matrix
US20130158247A1 (en) Method for isolating and/or purifying nucleic acid(s)
CN111357765B (zh) 一种可用于抗菌涂料的水油通用纳米银抗菌剂的制备方法
Mustajab et al. Promising performance of polyvinylpyrrolidone-doped bismuth oxyiodide quantum dots for antibacterial and catalytic applications
Brasil et al. Synergism in the antibacterial action of ternary mixtures involving silver nanoparticles, chitosan and antibiotics
JP2012526777A (ja) 殺生物剤のナノ構造組成物及びナノ構造の殺生物剤組成物を得る方法
de Q. Silveira et al. Supraparticle nanoassemblies with enzymes
WO2005122729A2 (en) An iron sequestering antimicrobial composition
WO2016039412A1 (ja) 抗菌剤および抗菌剤の製造方法
Nagasaki PEG-b-polyamine Stabilized Bionanoparticles for Nanodiagnostics and Nanotherapy
CN115684581A (zh) 磁珠的保存液及其保存方法
CN109380298A (zh) 一种无色透明防色变纳米银复合抗菌剂溶液
JP2017081852A (ja) 抗菌剤および抗菌剤の製造方法
Dhivya et al. A comparative study on the biopolymer functionalized iron oxide nanocomposite for antimicrobial activity
JPH08133918A (ja) 無機系抗菌剤
RU2601757C1 (ru) Композиция бинарной коллоидной смеси наноструктурных частиц серебра и ионов серебра в стабилизаторе, обладающая антимикробным и антитоксическим действием (варианты) и способ ее получения
CN101664111A (zh) 包埋α-半乳糖苷酶的壳聚糖纳米粒子及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination