CN115666578A - 补体因子d抑制剂单独或结合抗c5抗体治疗阵发性睡眠性血红蛋白尿的用途 - Google Patents
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Abstract
本披露提供了用于治疗先前对抗C5抗体疗法表现出不充分应答的受试者的阵发性睡眠性血红蛋白尿的方法，向受试者施用治疗有效量的补体替代途径的抑制剂(例如，抑制补体5(C5)上游的靶标，如因子D或补体3(C3)，的抑制剂)。本披露还提供了用于治疗人类受试者的PNH的方法，该方法包括向受试者单独施用补体因子D抑制剂或结合抗C5抗体或其抗原结合片段一起施用。在一些实施例中，患者先前对抗C5抗体疗法表现出不充分应答。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求美国临时申请号63/023,415(2020年5月12日提交的申请)和美国临时申请号63/044,431(2020年6月26日提交的申请)的优先权和权益，其全部内容以引用的方式并入本文中。
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背景技术
补体***与机体的其他免疫***共同作用以抵御细胞病原体和病毒病原体的入侵。有至少25种补体蛋白，发现这些蛋白是血浆蛋白和膜辅因子的复杂集合。血浆蛋白约占脊椎动物血清中球蛋白的10％。补体成分通过一系列复杂但精确的酶促裂解和膜结合事件相互作用，以此实现其免疫防御功能。由此引起的补体级联使得具有调理、免疫调节和溶解功能的产物产生。与补体激活有关的生物活性的简明概要提供于例如第16版的The MerckManual[默克家庭诊疗手册]中。
尽管功能正常的补体***提供强大防御力来抵御微生物感染，但补体途径的不当调控或激活已牵涉到多种病症(包括阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH))的发病。PNH是主要通过血管内溶血和血小板激活引起的一种疾患，其中不受控制的补体活性会导致全身并发症(参见SociéG等人,French Society of Haematology.Lancet.[法国血液学会-柳叶刀]1996；348(9027):573-577和Brodsky,R.,Blood[血液].2014；124(18):2804-2811)。持续性血管内溶血可能由多种应激因素(如感染或体力消耗)触发，并且这会导致平滑肌收缩(游离血红蛋白)、慢性贫血和严重血栓栓塞风险增加。血栓栓塞是引起PNH患者死亡的最常见原因，并且此类事件的后遗症为肺高压以及如肝脏、肾脏、脑、和肠之类重要器官的终末器官损伤(Hillmen,P.等人,Am.J.Hematol[美国血液学杂志].2010；85(8):553-559)。由于这些不良的病理过程，PNH患者的生命质量(QoL)下降，其中可包括使人虚弱的疲劳、慢性疼痛、身体机能差、呼吸急促、腹痛、***功能障碍、需要抗凝血、输血，并且在一些情况下，需要透析(Weitz,IC.等人,Thromb Res[血栓形成研究].2012；130(3):361-368)。
PNH患者有很高的发病和死亡风险。因此，本披露的目的是提供用于治疗PNH患者的改进方法。
发明内容
本披露部分涉及以下发现：对抗C5抗体疗法不充分应答或未能应答的PNH患者受益于补体的替代抑制剂(如因子D(FD)抑制剂或C3抑制剂)的治疗。具体来说，输血依赖型PNH患者在使用依库珠单抗(eculizumab)的常规方案之外，还在依库珠单抗基础上接受口服FD抑制剂(达尼科潘(danicopan))，表现出的临床结果有所改善，如以下所示：血红蛋白(Hgb)水平的增加、慢性病治疗功能评估(FACIT)疲劳分数的改善、输血需求的减少、以及其他PNH参数的改进。数据显示，使用FD抑制剂(如达尼科潘)阻断FD为正在进行使用C5抑制剂(例如使用依库珠单抗
进行的抗C5抗体疗法)的主要疗法的PNH患者提供额外的好处。这种额外的好处可能是由于对C3介导的细胞外溶血(EVH)的预防以及对血管内溶血(IVH)的控制。
本文提供了用于治疗先前对C5抑制剂表现出不充分应答(例如，抗C5抗体疗法)的受试者的阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)的方法：向受试者施用治疗有效量的替代途径(AP)的替代成分的抑制剂。在一些实施例中，AP的替代成分的抑制剂是抑制补体5(C5)上游的靶标，如因子D或补体3(C3)，的抑制剂。在一些实施例中，PNH受试者具有血管外溶血(EVH)。
在一些实施例中，治疗使得受试者以下一项或多项下降：(a)持续性血管外溶血(EVH)；(b)贫血；和/或(c)输血依赖性。在一些实施例中，治疗使得FACIT疲劳量表分数的改善。在一些实施例中，在治疗后，维持或改善对不充分应答的PNH受试者中MAC介导的血管内溶血的控制。
在一些实施例中，对抗C5抗体疗法不充分应答与以下方面有关：药代动力学(PK)方面，例如，(a)对受试者C5裂解的抑制无效；(b)抗C5抗体的剂量低和/或受试者血浆水平低；(c)受试者中抗C5抗体的清除率增强；和/或(d)受试者中的抗C5抗体不耐受导致抗C5抗体剂量降低，优选地其中抗C5抗体不耐受包含疲劳和输注后疼痛。在一些实施例中，对抗C5抗体疗法不充分应答与以下方面有关：药效学(PD)方面，例如，(a)CR1多态性；(b)血管外溶血(EVH)，例如，通过血管内溶血(IVH)存活的血细胞的调理作用；和/或(c)C3片段对抗C5抗体活性的损害作用。在一些实施例中，对抗C5抗体疗法不充分应答与一个或多个PK和PD方面有关。
本文还提供了用于治疗人类患者PNH的方法，该方法包括向患者单独施用补体因子D(CFD)抑制剂或结合抗C5抗体或其抗原结合片段一起施用。在一些实施例中，根据特定的临床剂量方案(例如，以特定的剂量和根据特定的给药方案)施用(或用于施用)CFD抑制剂和/或抗C5抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，PNH受试者具有血管外溶血(EVH)。在一些实施例中，本披露涉及治疗患有阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)的患者(例如，人类患者)临床上明显的血管外溶血(EVH)的方法。特别地，本披露的实施例涉及治疗先前已经接受C5抑制剂治疗(如抗C5抗体(例如，采用依库珠单抗或瑞利珠单抗(ravulizumab)的疗法))的PNH患者的EVH，治疗包括向患者施用治疗有效量的补体替代途径(AP)的替代成分的调节剂(例如，抑制剂)。在一些实施例中，补体AP的替代成分的调节剂包含补体5(C5)上游的靶标的抑制剂，如因子D(FD)或补体3(C3)的抑制剂；特别是因子D的抑制剂。
在上述或以下治疗方法的一些实施例中，本披露涉及(一种或多种)用于治疗先前已经接受C5抑制剂治疗(例如，抗C5抗体疗法)的PNH患者的EVH的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的因子D抑制剂(例如，达尼科潘)。在一些实施例中，治疗有效量的达尼科潘以每日600mg的剂量给药。
在上述或以下治疗方法的一些实施例中，临床上明显的EVH包含(a)贫血(例如，Hgb≤9.5g/dL)与绝对网织红细胞计数≥120×109/L；和/或(b)在用补体AP的替代成分的抑制剂治疗之前(例如，使用FD抑制剂(如达尼科潘)治疗之前)的6个月内，至少1次浓缩RBC或全血输注。
在上述或以下治疗方法的一些实施例中，补体AP的替代成分(例如，因子D抑制剂(如达尼科潘))的施用使得具有临床上明显的EVH的PNH患者避免输血(TA)。
在上述或以下治疗方法的一些实施例中，AP补体途径的替代成分(例如，因子D抑制剂(如达尼科潘))的施用使得具有临床上明显的EVH的PNH患者不再需要pRBC输血，例如，出现以下情况时，PNH患者需要进行pRBC输血：(1)血红蛋白值小于6g/dL时，无论是否存在PNH的临床体征或症状；或(2)血红蛋白值小于9g/dL，伴随需要输血才能缓解的严重PNH体征或症状。
在上述或以下治疗方法的一些实施例中，具有临床上明显的EVH的PNH患者使用抗C5抗体连同治疗有效量的AP补体的替代成分的抑制剂(例如，依库珠单抗或瑞利珠单抗)(作为抗C5抗体)以及FD抑制剂(如达尼科潘)治疗。在一些实施例中，患者单独使用FD抑制剂(例如，单独使用达尼科潘)治疗。
在上述或以下治疗方法的一些实施例中，在使用补体AP的替代成分的抑制剂治疗(例如，使用因子D抑制剂(如达尼科潘)治疗)之前，具有临床上明显的EVH的PNH患者按PNH疗法中抗C5抗体的标准剂量和/或给药方案使用抗C5抗体(例如，依库珠单抗
或瑞利珠单抗
)治疗，并且随后使用相同的抗C5抗体治疗。
在一些实施例中，本披露涉及有效量的补体替代途径(AP)的替代成分的调节剂(例如，抑制剂)用于治疗患有PNH的患者(例如，人类患者)的临床上明显的EVH的用途。特别地，本披露的实施例涉及有效量的C5上游的靶标的抑制剂(如FD或C3抑制剂；尤其是FD抑制剂)在治疗先前已经接受C5抑制剂(如抗C5抗体)治疗(例如，采用依库珠单抗或瑞利珠单抗的疗法)的PNH患者的EVH中的应用。在特定实施例中，本披露涉及有效量的达尼科潘(例如，每日600mg的口服剂量)在治疗具有临床上明显的EVH的人类PNH患者中的应用，该患者先前已经使用依库珠单抗或瑞利珠单抗治疗。
在一个实施例中，提供了用于治疗受试者的PNH的方法，该方法包括：向受试者施用治疗有效量的补体因子D(CFD)抑制剂结合治疗有效量的抗C5抗体或其抗原结合片段，
其中受试者在用CFD抑制剂治疗后12和/或24周表现出以下临床改善中的一种或多种：
(a)与受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；
(b)输血非依赖性；和/或
(c)与受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，FACIT疲劳量表分数增加10分或更多(例如，10、11、12)。
在另一个实施例中，提供了用于治疗先前对抗C5抗体疗法表现出不充分应答的受试者的PNH的方法，该方法包括：
向受试者施用治疗有效量的补体因子D(CFD)抑制剂，
其中受试者的不充分应答是输血依赖性和/或贫血；并且
其中受试者在用CFD抑制剂治疗后12和/或24周表现出以下临床改善中的一种或多种：
(a)与受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；
(b)输血非依赖性；和/或
(c)与受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，FACIT疲劳量表分数增加10分或更多(例如，10、11、12)。
在另一个实施例中，提供了用于治疗先前对抗C5抗体疗法表现出不充分应答的受试者的PNH的方法，该方法包括：
向受试者施用治疗有效量的补体因子D(CFD)抑制剂结合治疗有效量的抗C5抗体或其抗原结合片段，
其中受试者的不充分应答是输血依赖性和/或贫血；以及
其中受试者在用CFD抑制剂治疗后12和/或24周表现出以下临床改善中的一种或多种：
(a)与受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；
(b)输血非依赖性；和/或
(c)与受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，FACIT疲劳量表分数增加10分或更多(例如，10、11、12)。
在一些实施例中，这些方法还包括在基线和治疗后12和/或24周时确定受试者的血红蛋白水平、输血状态、和/或FACIT疲劳量表分数，其中(a)与受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；(b)输血非依赖性；和/或(c)与受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，FACIT疲劳量表分数增加10分或更多(例如，10、11、12)是治疗的指示。
在一些实施例中，这些方法涉及治疗患有PNH的受试者，受试者先前对抗C5抗体疗法(例如，
7086抗体、8110抗体、305LO5抗体、SKY59抗体或REGN3918抗体)表现出不充分应答。在一些实施例中，患有PNH的受试者先前对
表现出不充分应答。在一些实施例中，在不改变方案≤8周的情况下，患有PNH的受试者先前在批准剂量或更高剂量下对
表现出不充分应答≥24周(例如，24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40或更多周)。在一些实施例中，患有PNH的受试者先前对
表现出不充分应答。
在一些实施例中，受试者的不充分应答是输血依赖性(例如，在筛查前≤12周的时间进行≥1次红细胞(RBC)输血)。在一些实施例中，受试者的不充分应答是贫血(例如，血红蛋白<10g/dl)。在一些实施例中，受试者的不充分应答是输血依赖性和贫血。
在一些实施例中，受试者在根据本文所述的这些方法治疗后表现出一种或多种临床改善。例如，在一个实施例中，在治疗后，与受试者的基线血红蛋白水平相比，受试者表现出2.0g/dL或更高的血红蛋白增加。在其他实施例中，在治疗12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30周后，与受试者的基线血红蛋白水平相比，受试者表现出2.0g/dL或更高的血红蛋白增加。在其他实施例中，在治疗24周后，与受试者的基线血红蛋白水平相比，受试者表现出2.0g/dL或更高的血红蛋白增加。在其他实施例中，在治疗后，受试者表现出输血非依赖性。在其他实施例中，在治疗12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30周后，受试者表现出输血非依赖性。在其他实施例中，在治疗24周后，受试者表现出输血非依赖性。在其他实施例中，在治疗后，受试者表现出避免输血。在其他实施例中，在治疗12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30周后，受试者表现出避免输血。在其他实施例中，在治疗12周后，受试者表现出避免输血。在其他实施例中，在治疗后，与受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，受试者表现出FACIT疲劳量表分数增加10分或更多(例如，10、11、12)。在其他实施例中，在治疗后，与受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，受试者表现出FACIT疲劳量表分数增加11分或更多。在其他实施例中，在治疗12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30周后，受试者表现出FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。在其他实施例中，在治疗12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30周后，受试者表现出FACIT疲劳量表分数增加11分或更多。在其他实施例中，在治疗12周后，受试者表现出FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。在其他实施例中，在治疗12周后，受试者表现出FACIT疲劳量表分数增加11分或更多。在其他实施例中，在治疗24周后，受试者表现出FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。在其他实施例中，在治疗24周后，受试者表现出FACIT疲劳量表分数增加11分或更多。
在其他实施例中，在治疗12周后，与受试者的基线血红蛋白水平相比，受试者表现出血红蛋白增加，并且表现出输血非依赖性或避免输血。在其他实施例中，在治疗后(例如，12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30周后)，与受试者的基线血红蛋白水平相比，受试者表现出2.0g/dL的血红蛋白增加，并且表现出输血非依赖性。在其他实施例中，在治疗12周后，与受试者的基线血红蛋白水平相比，受试者表现出2.0g/dL的血红蛋白增加，并且表现出输血非依赖性或避免输血。在其他实施例中，在治疗24周后，与受试者的基线血红蛋白水平相比，受试者表现出2.0g/dL的血红蛋白增加，并且表现出输血非依赖性或避免输血。
在其他实施例中，在治疗12周后，与受试者的基线血红蛋白水平相比，受试者表现出血红蛋白增加，并且表现出FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。在其他实施例中，在治疗后(例如，治疗12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30周后)，与受试者的基线血红蛋白水平相比，受试者表现出2.0g/dL的血红蛋白增加，并且表现出FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。在其他实施例中，在治疗后(例如，治疗12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30周后)，与受试者的基线血红蛋白水平相比，受试者表现出2.0g/dL的血红蛋白增加，并且表现出FACIT疲劳量表分数增加11分或更多。在其他实施例中，在治疗12周后，与受试者的基线血红蛋白水平相比，受试者表现出2.0g/dL的血红蛋白增加，并且表现出FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。在其他实施例中，在治疗24周后，与受试者的基线血红蛋白水平相比，受试者表现出2.0g/dL的血红蛋白增加，并且表现出FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。在其他实施例中，在治疗24周后，与受试者的基线血红蛋白水平相比，受试者表现出2.0g/dL的血红蛋白增加，并且表现出FACIT疲劳量表分数增加11分或更多。
在其他实施例中，在治疗12周后，受试者表现出输血非依赖性或避免输血以及FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。在其他实施例中，在治疗后(例如，治疗12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30周后)，受试者表现出输血非依赖性或避免输血以及FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。在其他实施例中，在治疗后(例如，治疗12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30周后)，受试者表现出输血非依赖性以及FACIT疲劳量表分数增加11分或更多。在其他实施例中，在治疗24周后，受试者表现出输血非依赖性以及FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。在其他实施例中，在治疗24周后，受试者表现出输血非依赖性以及FACIT疲劳量表分数增加11分或更多。
在其他实施例中，在治疗后(例如，治疗12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30周后)，与受试者的基线血红蛋白水平相比，受试者表现出2.0g/dL的血红蛋白增加，并且表现出输血非依赖性或避免输血以及FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。在其他实施例中，在治疗后(例如，治疗12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30周后)，与受试者的基线血红蛋白水平相比，受试者表现出2.0g/dL的血红蛋白增加，并且表现出输血非依赖性或避免输血以及FACIT疲劳量表分数增加11分或更多。在其他实施例中，在治疗24周后，与受试者的基线血红蛋白水平相比，受试者表现出2.0g/dL的血红蛋白增加，并且表现出输血非依赖性或疲劳量表以及FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。在其他实施例中，在治疗24周后，与受试者的基线血红蛋白水平相比，受试者表现出2.0g/dL的血红蛋白增加，并且表现出输血非依赖性或避免输血以及FACIT疲劳量表分数增加11分或更多。
在一些实施例中，该方法还包括在基线和治疗后12和/或24周时确定受试者的血红蛋白水平、输血状态、和/或FACIT疲劳量表分数，其中(a)与受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；(b)输血非依赖性；和/或(c)与受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，FACIT疲劳量表分数增加10分或更多是治疗的指示。
任何合适的CFD抑制剂可用于本文所述的这些方法中。在一些实施例中，CFD抑制剂是小分子抑制剂、核苷酸、肽、蛋白、肽模拟物、适配体或与因子D结合的任何其他分子。在其他实施例中，CFD抑制剂是选自由以下组成的组的核苷酸：DNA、RNA、shRNA、miRNA、siRNA和反义DNA。在其他实施例中，CFD抑制剂是与因子D结合的抗体或其抗原结合片段。在其他实施例中，CFD抑制剂包含：
或其药学上可接受的盐。
示例性CFD抑制剂是达尼科潘。
其他示例性CFD抑制剂包括Maibaum,J.等人(在Nature Chemical Biology[自然化学生物学]，第12卷，第1105-1110页(2016)中)所述的化合物1-7。因此，在一个实施例中，CFD抑制剂包含：
化合物1
化合物2
化合物3(R＝H)
化合物4(R＝CO2H)
化合物5
化合物6；或者
化合物7。
另一种示例性CFD抑制剂为兰帕利珠单抗(lampalizumab)(也称为“FCFD4 14S”和“aFD”)，如WO 2015168468和美国专利号10,407,510所述。附加的示例性CFD抑制剂包括US20190359699中描述的抗因子D抗体，包括mAb 11-8A1、mAb 1F10-5及其变体、本文披露的教导和特定CFD抑制剂，将其全部通过引用明确并入本文。
其他示例性CFD抑制剂包括美国专利号6,653,340中描述的融合双环化合物(包括CFD抑制剂BCX1470和示例1-20中披露的化合物)，以及US 20080269318中描述的特定CFD抑制剂，包括BCX-1470、WO 2012/093101(参见，例如，US 9,085,555)、WO 2014/002057、WO2014/009833(参见，例如，US 9,550,755)、WO 2014/002051(参见，例如，US 9,815,819)、WO2014/002052、WO 2014/002053、WO 2014/002054、WO 2014/002058(参见，例如，US 9,487,483)、WO 2014/002059、和WO 2014/005150，其中披露的教导和CFD抑制剂，将其全部通过引用明确并入本文。
任何合适的抗C5抗体或其抗原结合片段可用于本文所述的这些方法。在一些实施例中，抗C5抗体或其抗原结合片段是人抗体、人源化抗体、双特异性抗体、嵌合抗体、Fab、Fab’2、ScFv、SMIP、
纳米抗体、或结构域抗体。
示例性抗C5抗体是
(也称为依库珠单抗)。
是包含分别具有SEQ ID NO:10和11所示序列的重链和轻链或其抗原结合片段和变体的抗C5抗体。在一些实施例中，抗C5抗体包含具有SEQ ID NO:7所示序列的
VH区的CDR1、CDR2和CDR3结构域，以及具有SEQ ID NO:8所示序列的
VL区的CDR1、CDR2和CDR3结构域。在其他实施例中，抗体包含分别具有SEQ ID NO:1、2和3所示序列的重链CDR1、CDR2和CDR3结构域，以及分别具有SEQ ID NO:4、5和6所示序列的轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域。在其他实施例中，抗体包含分别具有SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的VH和VL区。
另一种示例性抗C5抗体是包含分别具有SEQ ID NO:14和11所示序列的重链和轻链的
(瑞利珠单抗)或其抗原结合片段和变体。在其他实施例中，抗体包含
的重链和轻链互补决定区(CDR)或可变区(VR)。因此，在一个实施例中，抗体包含具有SEQ ID NO:12中所示序列的
重链可变(VH)区的CDR1、CDR2和CDR3结构域，以及具有SEQ ID NO:8中所示序列的
轻链可变(VL)区的CDR1、CDR2和CDR3结构域。在其他实施例中，抗体分别包含如SEQ ID NO:19、18和3中所示的CDR1、CDR2和CDR3重链序列，以及如SEQ ID NO:4、5和6中所示的CDR1、CDR2和CDR3轻链序列。在其他实施例中，抗体包含分别具有SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的VH和VL区。在其他实施例中，抗体包含如SEQ ID NO:13中所示的重链恒定区。
在其他实施例中，抗体包含结合人新生儿Fc受体(FcRn)的变体人Fc恒定区，其中变体人Fc CH3恒定区在对应于天然人IgG Fc恒定区的甲硫氨酸428和天冬酰胺434的残基处包含Met429Leu和Asn435Ser取代，该取代各自根据EU编号规定编号。
在其他实施例中，抗体包含分别如SEQ ID NO:19、18和3中所示的CDR1、CDR2和CDR3重链序列，和分别如SEQ ID NO:4、5和6中所示的CDR1、CDR2和CDR3轻链序列；以及结合人新生儿Fc受体(FcRn)的变体人Fc恒定区，其中该变体人Fc CH3恒定区在对应于天然人IgG Fc恒定区的甲硫氨酸428和天冬酰胺434的残基处包含Met429Leu和Asn435Ser取代，该取代各自根据EU编号规定编号。
在其他实施例中，抗C5抗体包含BNJ421抗体的重链和轻链CDR或可变区(PCT/US2015/019225和美国专利号9,079,949所述)。在其他实施例中，抗C5抗体包含7086抗体的重链和轻链CDR或可变区(参见美国专利号8,241,628和8,883,158)。在一些实施例中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含分别具有SEQ ID NO:21、22和23所示序列的重链CDR1、CDR2和CDR3结构域，以及分别具有SEQ ID NO:24、25和26所示序列的轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域。在一些实施例中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含SEQ ID NO:27所示序列，该轻链可变区包含SEQ ID NO:28所示序列。
在一些实施例中，抗C5抗体包含8110抗体的重链和轻链CDR或可变区(参见美国专利号8,241,628和8,883,158)。在一些实施例中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含分别具有SEQ ID NO:29、30和31所示序列的重链CDR1、CDR2和CDR3结构域，以及分别具有SEQ ID NO:32、33和34所示序列的轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域。在一些实施例中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含SEQ ID NO:35所示序列，该轻链可变区包含SEQ ID NO:36所示序列。
在一些实施例中，该抗C5抗体包含305LO5抗体的重链和轻链CDR或可变区(参见US2016/0176954 A1)。在一些实施例中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含分别具有SEQ IDNO:37、38和39所示序列的重链CDR1、CDR2和CDR3结构域，以及分别具有SEQ ID NO:40、41和42所示序列的轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域。在一些实施例中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含SEQ ID NO:43所示序列，该轻链可变区包含SEQ ID NO:44所示序列。
在一些实施例中，抗C5抗体包含SKY59抗体的重链和轻链CDR或可变区。在一些实施例中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，该重链包含SEQ ID NO:45所示序列，该轻链包含SEQ ID NO:46所示序列。
在一些实施例中，抗C5抗体包含REGN3918抗体的重链和轻链可变区或重链和轻链(参见US 20170355757)。在一些实施例中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含SEQ ID NO:47所示序列，该轻链可变区包含SEQ ID NO:48所示序列。在一些实施例中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:49中所述的重链序列，以及SEQ ID NO:50中所述的轻链序列。
在其他实施例中，抗体与上述抗体中任意一个竞争跟C5上的相同的表位结合和/或与C5上相同的表位结合。在其他实施例中，抗体与上述抗体中任意一个具有至少约90％的可变区氨基酸序列同一性(例如，与SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:8具有至少约90％、95％或99％的可变区同一性)。
在其他实施例中，抗体在pH 7.4和25℃下以在0.1nM≤KD≤1nM范围内的亲和力解离常数(KD)结合人C5。在其他实施例中，抗体在pH 6.0和25℃下以KD≥10nM结合人C5。在又一个实施例中，抗体的[(抗体或其抗原结合片段在pH 6.0和25℃下对人C5的KD)/(抗体或其抗原结合片段在pH 7.4和25℃对人C5的KD)]大于25。
在一些实施例中，根据特定的临床剂量方案(例如，以特定的剂量和根据特定的给药方案)施用(或用于施用)CFD抑制剂(例如，达尼科潘)。在一些实施例中，将CFD抑制剂口服施用于受试者。在一些实施例中，将CFD抑制剂每日三次(TID)口服施用于受试者。在一些实施例中，将CFD抑制剂以约50mg至300mg的剂量口服施用于受试者。在一些实施例中，CFD抑制剂以约100mg、110mg、120mg、130mg、140mg、150mg、160mg、170mg、180mg、190mg、200mg、210mg、220mg、230mg、240mg、250mg、260mg、270mg、280mg、290mg或300mg的剂量口服施用。在一些实施例中，CFD抑制剂以约100mg的剂量口服施用。在一些实施例中，CFD抑制剂以约100mg的剂量TID口服施用。在一些实施例中，CFD抑制剂以约150mg的剂量口服施用。在一些实施例中，CFD抑制剂以约150mg的剂量TID口服施用。在一些实施例中，CFD抑制剂以约200mg的剂量口服施用。在一些实施例中，CFD抑制剂以约200mg的剂量TID口服施用。
在一些实施例中，CFD抑制剂施用4周或更长时间(例如，4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60周或更长时间)。在一些实施例中，CFD抑制剂口服施用24周。在一些实施例中，CFD抑制剂施用9个月、12个月、15个月、20个月、24个月或更长时间。在一些实施例中，CFD抑制剂施用1年、2年、3年、4年、5年、6年、或更多年。
在一些实施例中，根据特定的临床剂量方案(例如，以特定的剂量和根据特定的给药方案)施用(或用于施用)抗C5抗体或其抗原结合片段(例如，
或
)。可以将抗C5抗体或其抗原结合片段通过任何合适的方法施用于患者。在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段静脉内施用于受试者。
在一些实施例中，抗C5抗体或其抗原结合片段的剂量是固定剂量。例如，在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段以每周600mg的剂量施用于受试者。在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段以每两周900mg的剂量施用于受试者。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段以每周600mg的剂量施用于受试者，施用四次，随后在第5周以900mg的剂量施用，并且此后以每2周900mg的剂量施用。在一些实施例中，将
以每周600mg的剂量施用于受试者(例如，成年受试者)，施用四次，随后在第5周以900mg的剂量施用，并且此后以每2周900mg的剂量施用。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段以每周900mg的剂量施用于小于18岁且体重40kg及以上的受试者，施用四次，随后在第5周以1200mg的剂量施用，并且此后以每两周1200mg的剂量施用。在一些实施例中，将
以每周900mg的剂量施用于小于18岁且体重40kg及以上的受试者，施用四次，随后在第5周以1200mg的剂量施用，并且此后以每两周1200mg的剂量施用。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段以每周600mg的剂量施用于小于18岁且体重30kg至小于40kg的受试者，施用两次，随后在第3周以900mg的剂量施用，并且此后以每两周900mg的剂量施用。在一些实施例中，将
以每周600mg的剂量施用于小于18岁且体重30kg至小于40kg的受试者，施用两次，随后在第3周以900mg的剂量施用，并且此后以每两周900mg的剂量施用。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段以每周600mg的剂量施用于小于18岁且体重20kg至小于30kg的受试者，施用两次，随后在第3周以600mg的剂量施用，并且此后以每两周600mg的剂量施用。在一些实施例中，将
以每周600mg的剂量施用于小于18岁且体重20kg至小于30kg的受试者，施用两次，随后在第3周以600mg的剂量施用，并且此后以每两周600mg的剂量施用。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段以每周600mg的剂量施用于小于18岁且体重10kg至小于20kg的受试者，施用一次，随后在第3周以300mg的剂量施用，并且此后以每两周300mg的剂量施用。在一些实施例中，将
以每周600mg的剂量施用于小于18岁且体重10kg至小于20kg的受试者，施用一次，随后在第3周以300mg的剂量施用，并且此后以每两周300mg的剂量施用。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段以每周300mg的剂量施用于小于18岁且体重5kg至小于10kg的受试者，施用一次，随后在第2周以300mg的剂量施用，并且此后以每三周300mg的剂量施用。在一些实施例中，将
以每周300mg的剂量施用于小于18岁且体重5kg至小于10kg的受试者，施用一次，随后在第2周以300mg的剂量施用，并且此后以每三周300mg的剂量施用。
在一些实施例中，抗C5抗体或其抗原结合片段的剂量是基于患者的体重。在一些实施例中，例如，将300mg的抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥5至<10kg的患者。在一些实施例中，将600mg的抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥10至<20kg的患者。在一些实施例中，将900mg或2100mg的抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥20至<30kg的患者。在一些实施例中，将1200mg或2700mg的抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥30至<40kg的患者。在一些实施例中，将2400mg或3000mg的抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥40至<60kg的患者。在一些实施例中，将2700mg或3300mg的抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥60至<100kg的患者。在一些实施例中，将3000mg或3600mg的抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥100kg的患者。在某些实施例中，调整剂量方案以提供最佳期望应答(例如，有效应答)。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段按如下施用：
(a)在施用周期的第1天一次，剂量为：体重≥40至<60kg的患者2400mg，体重≥60至<100kg的患者2700mg，或体重≥100kg的患者3000mg；以及
(b)在施用周期的第15天和此后每八周，剂量为：体重≥40至<60kg的患者3000mg，体重≥60至<100kg的患者3300mg，或体重≥100kg的患者3600mg。
在一些实施例中，
如下施用：
(a)在施用周期的第1天一次，剂量为：体重≥40至<60kg的患者2400mg，体重≥60至<100kg的患者2700mg，或体重≥100kg的患者3000mg；以及
(b)在施用周期的第15天和此后每八周，剂量为：体重≥40至<60kg的患者3000mg，体重≥60至<100kg的患者3300mg，或体重≥100kg的患者3600mg。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥40至<60kg的患者：
(a)在施用周期的第1天一次，剂量为2400mg；以及
(b)在施用周期的第15天和此后每八周，剂量为：3000mg。
在一些实施例中，将
施用于体重≥40至<60kg的患者：
(a)在施用周期的第1天一次，剂量为2400mg；以及
(b)在施用周期的第15天和此后每八周，剂量为：3000mg。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥60至<100kg的患者：
(a)在施用周期的第1天一次，剂量为2700mg；以及
(b)在施用周期的第15天和此后每八周，剂量为：3300mg。
在一些实施例中，将
施用于体重≥60至<100kg的患者：
(a)在施用周期的第1天一次，剂量为2700mg；以及
(b)在施用周期的第15天和此后每八周，剂量为：3300mg。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥100kg的患者：
(a)在施用周期的第1天一次，剂量为3000mg；以及
(b)在施用周期的第15天和此后每八周，剂量为：3600mg。
在一些实施例中，将
施用于体重≥100kg的患者：
(a)在施用周期的第1天一次，剂量为3000mg；以及
(b)在施用周期的第15天和此后每八周，剂量为：3600mg。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段施用于小于18岁的受试者：
(a)第1天施用一次，剂量为：体重≥5至<10kg的患者600mg，体重≥10至<20kg的患者600mg，体重≥20至<30kg的患者900mg，体重≥30至<40kg的患者1200mg，体重≥40至<60kg的患者2400mg，体重≥60至<100kg的患者2700mg，或体重≥100kg的患者3000mg；以及
(b)在第15天和此后每四周，剂量为：体重≥5至<10kg的患者300mg，或体重≥10至<20kg的患者600mg；或在第15天和此后每八周，剂量为：体重≥20至<30kg的患者2100mg，体重≥30至<40kg的患者2700mg，体重≥40至<60kg的患者3000mg，体重≥60至<100kg的患者3300mg，或体重≥100kg的患者3600mg。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥5至<10kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为600mg；以及(b)在第15天和此后每四周，剂量为300mg。在一些实施例中，将
施用于体重≥5至<10kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为600mg；以及(b)在第15天和此后每四周，剂量为300mg。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥10至<20kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为600mg；以及(b)在第15天和此后每四周，剂量为600mg。在一些实施例中，将抗C5抗体施用于体重≥10至<20kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为600mg；以及(b)在第15天和此后每四周，剂量为600mg。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥20至<30kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为900mg；以及(b)在第15天和此后每八周，剂量为2100mg。在一些实施例中，将
施用于体重≥20至<30kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为900mg；以及(b)在第15天和此后每八周，剂量为2100mg。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥30至<40kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为1200mg；以及(b)在第15天和此后每八周，剂量为2700mg。在一些实施例中，将
施用于体重≥30至<40kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为1200mg；以及(b)在第15天和此后每八周，剂量为2700mg。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥40至<60kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为2400mg；以及(b)在第15天和此后每八周，剂量为3000mg。在一些实施例中，将
施用于体重≥40至<60kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为2400mg；以及(b)在第15天和此后每八周，剂量为3000mg。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥60至<100kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为2700mg；以及(b)在第15天和此后每八周，剂量为3300mg。在一些实施例中，将
施用于体重≥60至<100kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为2700mg；以及(b)在第15天和此后每八周，剂量为3300mg。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥100kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为3000mg；以及(b)在第15天和此后每八周，剂量为3600mg。在一些实施例中，将
施用于体重≥100kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为3000mg；以及(b)在第15天和此后每八周，剂量为3600mg。
在另一个方面，所描述的治疗方案足以维持抗C5抗体或其抗原结合片段的特定血清谷浓度。在一个实施例中，例如，治疗方案维持抗C5抗体或其抗原结合片段的血清谷浓度为50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、200、205、210、215、220、225、230、240、245、250、255、260、265、270、280、290、300、305、310、315、320、325、330、335、340、345、350、355、360、365、370、375、380、385、390、395或400μg/mL或更高。在一些实施例中，治疗方案维持抗C5抗体或其抗原结合片段的血清谷浓度为100μg/mL或更高、150μg/mL或更高、200μg/mL或更高、250μg/mL或更高、或300μg/mL或更高。在一些实施例中，治疗维持抗C5抗体或其抗原结合片段的血清谷浓度在100μg/mL和200μg/mL之间。在一些实施例中，治疗维持抗C5抗体或其抗原结合片段的血清谷浓度为约175μg/mL。
在一些实施例中，为了获得有效应答，以维持至少50μg、55μg、60μg、65μg、70μg、75μg、80μg、85μg、90μg、95μg、100μg、105μg、110μg、115μg、120μg、125μg、130μg、135μg、140μg、145μg、150μg、155μg、160μg、165μg、170μg，175μg、180μg、185μg、190μg、195μg、200μg、205μg、210μg、215μg、220μg、225μg、230μg、235μg、240μg、245μg、250μg、255μg或260μg抗体/毫升患者血液的量和频率向患者施用抗C5抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，以维持50μg至250μg抗体/毫升患者血液的量和频率向患者施用抗C5抗体。在一些实施例中，以维持100μg至200μg抗体/毫升患者血液的量和频率向患者施用抗C5抗体。在一些实施例中，以维持约175μg抗体/毫升患者血液的量和频率向患者施用抗C5抗体。
本文所提供的治疗方法的疗效可使用任何适合的方式评估。在一些实施例中，治疗使得胆红素向正常水平转变(例如，从约0.2-1.2mg/dL)。在一些实施例中，与基线相比，治疗使得网织红细胞减少(例如，减少2、3、4或5倍)。在一些实施例中，与基线相比，治疗使得PNH特异性红细胞克隆大小增加(例如，增加2、3、4或5倍)。在一些实施例中，与基线相比，治疗使得用C3片段调理的PNH红细胞减少(例如，减少2、3、4或5倍)。在一些实施例中，与基线相比，治疗使得对输血的需求减少。在一些实施例中，治疗产生末端补体抑制。在一些实施例中，治疗产生选自由以下组成的组的至少一种治疗效果：与基线相比，腹痛、呼吸困难、吞咽困难、胸痛和***功能障碍减轻或停止。在一些实施例中，治疗使选自由以下组成的组的至少一个或多个溶血相关血液生物标志物向正常水平转变：游离血红蛋白、触珠蛋白、网织红细胞计数、PNH红细胞(RBC)克隆和/或D-二聚体。在一些实施例中，治疗使主要不良血管事件(MAVE)减少。在一些实施例中，治疗使估算的肾小球滤过率(eGFR)或现场尿液:白蛋白:肌酐和血浆脑利尿钠肽(BNP)向正常水平转变。在一些实施例中，如通过第4版和欧洲癌症研究与治疗组织(European Organisation for Research and Treatment of Cancer)的生命质量30项核心问卷量表(Quality of Life Questionnaire-Core 30Scale)评估，该治疗使生命质量相对于基线变化。
在一些实施例中，使用LDH水平来评估对疗法的反应性(例如，通过LDH水平评估的溶血减少指示至少一种PNH体征的改善)。在一些实施例中，根据所披露的方法治疗的患者的LDH水平降低至接近正常水平或降低至比视为正常水平的值低10％、20％、30％、40％或50％的范围内(例如，在105-333IU/L(国际单位/升)范围内)。在一些实施例中，在整个治疗维持期间，患者的LDH水平标准化。在一些实施例中，所治疗患者的LDH水平在治疗维持期间的至少95％的时间里标准化。在一些实施例中，所治疗患者的LDH水平在治疗维持期间的至少90％、85％或80％的时间里标准化。在一些实施例中，在起始治疗之前，患者的LDH水平高出正常上限≥1.5倍(LDH≥1.5×ULN)。
在一个实施例中，提供了用于既往
(依库珠单抗)治疗不充分应答的受试者的PNH的方法，该方法包括：
向受试者施用治疗有效量的达尼科潘结合治疗有效量的
(依库珠单抗)，
其中受试者的不充分应答是输血依赖性和/或贫血；并且
其中将达尼科潘以100mg、150mg或200mg的剂量TID口服施用于受试者；
其中将
(依库珠单抗)以每周600mg的剂量静脉内施用于受试者，施用四次，随后在第5周以900mg的剂量施用，并且此后以每2周900mg的剂量施用；以及
其中受试者在用CFD抑制剂治疗后12和/或24周表现出以下临床改善中的一种或多种：
(a)与受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；
(b)输血非依赖性；和/或
(c)与受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。
在另一个实施例中，提供了用于治疗对既往
(依库珠单抗)治疗不充分应答的受试者的PNH的方法，该方法包括：向受试者施用治疗有效量的达尼科潘结合治疗有效量的
(依库珠单抗)，
其中受试者的不充分应答是输血依赖性和/或贫血；并且
其中将达尼科潘以100mg、150mg或200mg的剂量TID口服施用于受试者；
其中将
(依库珠单抗)静脉内施用于小于18岁的受试者：
(a)对体重40kg及以上的受试者以每周900mg的剂量施用四次，随后在第5周以1200mg的剂量施用，并且此后以每两周1200mg的剂量施用；
(b)对体重30kg至小于40kg的受试者以每周600mg的剂量施用两次，随后在第3周以900mg的剂量施用，并且此后以每两周900mg的剂量施用；
(c)对体重20kg至小于30kg的受试者以每周600mg的剂量施用两次，随后在第3周以600mg的剂量施用，并且此后以每两周600mg的剂量施用；
(d)对体重10kg至小于20kg的受试者以每周600mg的剂量施用一次，随后在第3周以300mg的剂量施用，并且此后以每两周300mg的剂量施用；或者
(e)对体重5kg至小于10kg的受试者以每周300mg的剂量施用一次，随后在第2周以300mg的剂量施用，并且此后以每三周300mg的剂量施用；以及
其中受试者在用CFD抑制剂治疗后12和/或24周表现出以下临床改善中的一种或多种：
i.与受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；
ii.输血非依赖性；和/或
iii.与受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。
在另一个实施例中，提供了用于治疗受试者的PNH的方法，该方法包括：
向受试者施用治疗有效量的达尼科潘结合治疗有效量的
(依库珠单抗)，
其中将达尼科潘以100mg、150mg或200mg的剂量TID口服施用于受试者；
其中将
(依库珠单抗)以每周600mg的剂量静脉内施用于受试者，施用四次，随后在第5周以900mg的剂量施用，并且此后以每2周900mg的剂量施用；以及
其中受试者在用该CFD抑制剂治疗后12或24周表现出以下临床改善中的一种或多种：
(a)与受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；
(b)输血非依赖性；和/或
(c)与受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。
在另一个实施例中，提供一种用于治疗小于18岁的受试者的PNH的方法，该方法包括：向受试者施用治疗有效量的达尼科潘结合治疗有效量的
(依库珠单抗)，
其中将达尼科潘以100mg、150mg或200mg的剂量TID口服施用于受试者；
其中将
(依库珠单抗)静脉内施用：
(a)对体重40kg及以上的受试者以每周900mg的剂量施用四次，随后在第5周以1200mg的剂量施用，并且此后以每两周1200mg的剂量施用；
(b)对体重30kg至小于40kg的受试者以每周600mg的剂量施用两次，随后在第3周以900mg的剂量施用，并且此后以每两周900mg的剂量施用；
(c)对体重20kg至小于30kg的受试者以每周600mg的剂量施用两次，随后在第3周以600mg的剂量施用，并且此后以每两周600mg的剂量施用；
(d)对体重10kg至小于20kg的受试者以每周600mg的剂量施用一次，随后在第3周以300mg的剂量施用，并且此后以每两周300mg的剂量施用；或者
(e)对体重5kg至小于10kg的受试者以每周300mg的剂量施用一次，随后在第2周以300mg的剂量施用，并且此后以每三周300mg的剂量施用；以及
其中受试者在用CFD抑制剂治疗后24周表现出以下临床改善中的一种或多种：
i.与受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；
ii.输血非依赖性；和/或
iii.与受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。
在一些实施例中，本文所述的这些方法还包括在基线和治疗后12和/或24周时确定受试者的血红蛋白水平、输血状态、和/或FACIT疲劳量表分数，其中
(a)与受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；
(b)输血非依赖性；和/或
(c)与受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，FACIT疲劳量表分数增加10分或更多
是治疗的指示。
在一些实施例中，本披露涉及一种用于治疗先前对C5抑制剂(例如，抗C5抗体疗法)表现出不充分应答的受试者的PNH的方法，该方法包括：向受试者施用治疗有效量的补体替代途径(AP)的抑制剂，该抑制剂选自由以下组成的组：
a)MASP-3抑制剂(例如，α-MASP-3单克隆抗体(Mab)，如OMS906)；
b)因子D(FD)抑制剂(例如，抗FD Mab，如兰帕利珠单抗或小分子FD抑制剂，如达尼科潘(ACH-4471)或BCX9930)；
c)因子B抑制剂(例如，LNP023)；
d)坎普他汀(compstatin)分子或其衍生物(例如，APL2、APL9、AMY-101)；
e)迷你因子H(例如，迷你FH AMY-201)；以及
f)因子H融合蛋白(例如，TT30)。
在一些实施例中，本披露涉及一种用于治疗先前对C5抑制剂(例如，抗C5抗体疗法)表现出不充分应答的受试者的PNH的方法，该方法包括：向受试者施用治疗有效量的达尼科潘；特别地，其中每8小时将包含约100至约200mg达尼科潘的药物组合物施用于人类受试者。
在一些实施例中，本披露涉及一种用于治疗先前对抗C5抑制剂表现出不充分应答的受试者的PNH的方法，该C5抑制剂选自由以下组成的组：
a)依库珠单抗生物类似物(例如，ABP 959；Elizaria；或者SB12)；
b)诺马可潘(Nomacopan)(Coversin；rVA576)；
c)
(瑞利珠单抗)；
d)特度鲁单抗(Tesidolumab)(LFG316)；
e)帕泽利单抗(Pozelimab)；以及
f)可伐利单抗(Crovalimab)(SKY059)。
本文还提供了用于治疗PNH的试剂盒。在一些实施例中，试剂盒包括：(a)补体因子D(CFD)抑制剂的剂量和(b)有关在本文所述的这些方法的任一项中使用CFD的说明书。在一些实施例中，试剂盒包括：(a)补体因子D(CFD)抑制剂的剂量；(b)抗C5抗体的剂量；以及(c)有关在本文所述的这些方法的任一项中使用CFD和抗C5抗体的说明书。在一些实施例中，CFD是达尼科潘。在一些实施例中，抗C5抗体是
或
附图说明
图1是描绘临床试验的给药方案的示意图。
图2描绘了临床试验中个体患者的历史和“治疗中”输血数据。具体而言，图2显示了在开始使用达尼科潘前52周和使用达尼科潘治疗期间，每名患者的输血发生率和单位。
图3是通过年化率和单位描绘输血频率和单位量的曲线图。
图4A-4D是描绘对补体生物标志物和PNH克隆大小的影响的曲线图。具体地说，如图所示，在给药达尼科潘(基线)之前的第1天和研究过程中的选定时间点收集血清、血浆和全血样品，并进行CP活性(图4A)、AP溶血测定的AP活性(图4B)、血浆Bb浓度(图4C)和PNH粒细胞克隆大小、PNH红细胞和C3d+PNH红血球(图4D)的测量。除使用几何平均值的C3d+PNH红细胞的克隆大小外，显示所有红细胞的算术平均值和标准偏差(SD)，并显示每个时间点的范围。NHS、正常人血清；BL、基线；LLN、正常下限；ULN、正常上限。
具体实施方式
I.定义
如本文所用，术语“受试者”或“患者”是人类患者(例如，患有阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)的患者)。
如本文所用，术语“儿科”患者是18岁以下(<18岁)的人类患者。
PNH是一种获得性溶血病，最常见于成年人(Brodsky R.,Blood[血液].126:2459-65,2015)。该疾病始于在PIGA基因中已经获得体细胞突变的造血干细胞的克隆扩增(Brodsky R.,Blood[血液].124:2804-11,2014)。因此,PNH血细胞缺乏糖磷脂酰肌醇(GPI)锚蛋白，并且缺乏膜结合的补体抑制蛋白CD55和CD59。在不存在CD55的情况下，血细胞膜表面上补体蛋白C3裂解产物的沉积增加，从而导致C5裂解成C5a和C5b。PNH患者的病理和临床表现是由不受控制的末端补体激活引起。
C5a是一种强效的过敏毒素、趋化因子和细胞激活分子，介导多种促炎性和促血栓形成活性(Matis,L和Rollins,S.，Nat.Med.[自然医学]1:839-42,1995；Prodinger等人,Complement[补体].In:Paul WE，编辑，Fundamental immunology[基础免疫学](第4版).Philadelphia:Lippincott-Raven Publishers[费城利平科特-雷文出版社]；1999，第967-95页)。C5b募集末端补体成分C6、C7、C8和C9，以形成促炎性、促血栓形成性溶细胞性成孔分子C5b-9，在正常情况下，该过程在红细胞(RBC)膜上将被CD59阻断。然而，在PNH患者中，这些最终步骤在未检查的情况下就进行，最终引起溶血和游离血红蛋白的释放，以及血小板激活(Hill,A.等人,Blood[血液]，121:4985-96,2013)。PNH的体征和症状可归因于慢性的、不受控制的补体C5裂解，以及C5a和C5b-9释放导致RBC溶血，这些共同引起：
·细胞内游离血红蛋白和乳酸脱氢酶(LDH)释放到循环中为溶血的直接结果；
·血红蛋白不可逆地与一氧化氮(NO)结合并使其失活，并且抑制NO合成；
·由于缺乏血管舒张性NO而引起的血管收缩和组织床局部缺血，以及表现为腹痛、吞咽困难和***功能障碍的可能的微血栓；
·血小板激活；以及
·促炎性和血栓形成前状态。
很大一部分PNH患者经历肾功能不全和肺高压(Hillmen,P.等人,Am.J.Hematol.[美国血液学杂志]，85:553-9,2010[勘误表见于Am.J.Hematol.[美国血液学杂志],85:911,2010]；Hill,A.等人，Br.J Haematol.[英国血液学杂志]，158:409-14,2012)。患者还会在包括腹部或中枢神经***在内的不同部位经历静脉或动脉血栓形成。
相比之下，PNH儿童通常会出现与潜在骨髓疾病相关的非特异性症状，如苍白、疲劳或黄疸，血红蛋白尿的出现率较低(Ware，R.等人，N.Engl.J.Med.[新英格兰医学杂志]，325:991-6,1991)。儿科患者的临床评估也揭示了骨髓衰竭综合征，例如再生障碍性贫血和难治性细胞减少症(van den Heuvel Eibrink，M.，Paediatr.Drugs[儿科药物]，9:11-6,2007)。一旦儿童的骨髓疾病得到解决或PNH克隆扩大(其原因尚不清楚)，该疾病最终演变为一种成人中更典型的疾病。
如本文所用，“贫血”或“贫血的”是指少量红细胞，即血红蛋白<10g/dl。
如本文所用，“溶血”是指红细胞(RBC)的破裂或破坏。“血管内溶血”是指循环中RBC的裂解，从而将血红蛋白释放到血浆中。由此产生的片段RBC称为“裂细胞”。“血管外溶血”是指脾脏和肝脏中巨噬细胞对RBC的裂解和吞噬作用。血管外溶血以球形红细胞为特征。
如本文所用，“输血”是指将血液、血液制品或其他液体转移到受试者的循环***中的行为。“输血依赖型”的受试者是指筛查和/或治疗前≤12周的时间进行≥1次输血(例如，红细胞输血)的受试者。“输血非依赖型”的受试者是指>12周未接受输血(例如，红细胞输血)的受试者。
如本文所用，“避免输血”是指根据本文所述的这些方法治疗的受试者在治疗第12周内保持无输血状态且不需要输血。当受试者的(1)血红蛋白值小于6g/dL(无论是否存在临床体征或症状)，或(2)血红蛋白值小于9g/dL，且体征或症状非常严重需要输血时，则需要输血(例如，浓缩红细胞(pRBC))。如本文所用，“有效治疗”是指产生有益效果的治疗，例如，改善疾病或障碍的至少一种症状。有益效果可以采取相对于基线的改善的形式，例如，相对于根据该方法开始治疗之前进行的测量或观察的改善。有效治疗可以指减轻PNH的至少一种症状(例如，苍白、疲劳、黄疸、贫血、细胞减少、腹痛、呼吸困难、吞咽困难、胸痛或***功能障碍)。
术语“有效量”是指提供所需生物学、治疗和/或预防结果的药剂的量。该结果可以是减少、改善、缓和、减轻、延迟和/或缓解疾病的一种或多种体征、症状或原因，或生物***的任何其他所期望改变。在一个实例中，“有效量”是经临床证明可缓和PNH的至少一种症状(例如，苍白、疲劳、黄疸、贫血、细胞减少、腹痛、呼吸困难、吞咽困难、或胸痛)的抗C5抗体或其抗原结合片段的量。有效量可以一次或多次施用。
如本文所用，术语“维持”和“维持阶段”可互换使用并且指治疗的第二期。在某些实施例中，只要观察到临床益处就继续治疗或继续治疗直到出现无法控制的毒性或疾病进展。
如本文所用，术语“补体的替代成分”是指除所列成分之外的成分，例如，C5以外的成分，例如，MASP3、因子D、因子B、C3/C5转化酶等。
如本文所用，术语“C5抑制剂”在最广义上是指抑制或拮抗C5的任何分子，例如，选自以下的抗体：(a)依库珠单抗或其生物类似物，例如ABP 959；Elizaria；或SB12；(b)瑞利珠单抗；(c)特度鲁单抗(LFG316)；(d)帕泽利单抗；和(e)可伐利单抗(SKY059)；或C5的蛋白/肽抑制剂，如诺马可潘(Coversin；rVA576)。
如本文所用，术语“血清谷水平”是指血清中存在的药剂(例如，抗C5抗体或其抗原结合片段)或药物的最低水平。相比之下，“血清峰水平”是指血清中药剂的最高水平。“平均血清水平”是指血清中药剂随时间的平均水平。
II.替代途径抑制剂
补体***通过三条途径(即经典途径(CP)、凝集素途径(LP)和替代途径(AP))激活，这三条途径汇聚到一个共同点，即C3成分的激活(参见，例如，Ricklin D.等人，2010，Nat.Immunol.[自然免疫学]11:785-797)。补体AP的激活处于低水平激活的恒定状态(通常称为“低速工作”)。C3在血浆中水解成具有C3b许多特性的C3i。C3i然后与血浆蛋白，因子B结合。结合的因子B被因子D裂解以产生Ba和Bb。Ba被释放，并且由C3iBb组成的剩余复合物形成替代途径C3转化酶。转化酶产生的大部分C3b被水解。然而，如果C3b与入侵的微生物接触，它会结合并通过C3b与因子B的结合促进替代途径的扩增。血浆蛋白，备解素(properdin)稳定C3转化酶以延长活性。在该途径中产生的C3b也产生C5转化酶C3bBb3b，这导致C5a和C5b的产生。值得注意的是，CP中产生的C3b进入AP以放大补体的激活。
任何合适的补体AP的抑制剂都可用于本文所述的这些方法中。在一些实施例中，抑制剂是抑制补体5(C5)上游的靶标的抑制剂。在一些实施例中，抑制剂是C3抑制剂。示例性C3抑制剂是APL-2(pegcetacoplan)，其是与聚乙二醇(PEG)聚合物缀合的合成环状肽，其特异性结合C3和C3b。补体途径的代表性抑制剂如表1所提供。
表1：目前正在评估PNH疗法的分子和靶标
(括号中提供开发商/分销商名称)
在一些实施例中，抑制剂是补体因子D(CFD)抑制剂。补体因子D是一种丝氨酸蛋白酶，只有一种已知的天然底物：与C3b结合的因子B(参见，Volanakis，J.E.等人，1993，Methods in Enzymol[酶学方法]，223:82-97)。因子D的血清浓度为2μg/ml，是任何补体蛋白中最低的(参见，例如，Liszewski,M.K.和J.P.Atkinson，1993，Fundamental Immunology[基础免疫学]，第三版，W.E.Paul.编辑，Raven出版社有限公司(Raven Press,Ltd.)，纽约)。因子D通过在AP级联中的两个步骤裂解因子B(FB)参与C3转化酶的生成：在流体相中自发AP活化(低速工作)之后产生初始C3转化酶(C3(H2O)Bb)；以及表面结合的C3转化酶(C3bBb)的产生，其介导初始激活(扩增环)的显著扩增和末端途径的激活，导致C3b对靶表面的调理作用、过敏毒素C3a和C5a的释放以及膜攻击复合物(MAC)的形成(参见，例如，Yuan等人，Haematologica[血液学]，2017年3月；102(3)：466-475)。附加的调节蛋白可以促进(备解素)或减弱(因子H、因子I、多种膜结合蛋白，包括CD55和CD59)AP活性。
如本文所用，“因子D抑制剂”或“CFD抑制剂”是预防、降低或阻断因子D活性的分子或物质。在一些实施例中，CFD抑制剂是抗体或其抗原结合片段，例如，结合因子D的抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，CFD抑制剂是小分子抑制剂。在一些实施例中，CFD抑制剂是核苷酸(例如，DNA、RNA、shRNA、miRNA、siRNA或反义DNA)。在一些实施例中，CFD抑制剂是肽、蛋白、肽模拟物、适配体或与因子D结合的任何其他分子。
一种示例性CFD抑制剂是达尼科潘(也称为“ALXN2040”、“ACH-4471”和“ACH-0144471”)。达尼科潘是一种选择性和口服活性的小分子因子D抑制剂，对人因子D具有高结合亲和力，Kd值为0.54nM。达尼科潘抑制补体AP(APC)的活性。在一个实施例中，CFD抑制剂包含：
或其药学上可接受的盐。
附加的示例性CFD抑制剂包括Maibaum,J.等人教授的小分子CFD抑制剂(NatureChemical Biology[自然化学生物学]，第12卷，1105-1110页(2016))，即化合物1-7或其药学上可接受的盐。因此，在一个实施例中，CFD抑制剂包含：
化合物1
化合物2
化合物3(R＝H)
化合物4(R＝CO2H)
化合物5
化合物6；或者
化合物7。
另一种示例性CFD抑制剂是兰帕利珠单抗(也称为“FCFD4 14S”和“aFD”)，其是与补体因子D结合的人源化单克隆抗体的抗原结合片段。具体来说，兰帕利珠单抗是由214个残基轻链(SEQ ID NO:51)和223个残基重链(SEQ ID NO:52)组成的抗体Fab片段。兰帕利珠单抗描述于WO 2015168468和美国专利号10,407,510中，其教导通过引用明确并入本文。附加的示例性CFD抑制剂包括US 20190359699中描述的抗因子D抗体，包含mAb 11-8A1、mAb1F10-5及其变体(参见，例如，段落[007]-[0021])，其教导通过引用明确并入本文。
其他示例性CFD抑制剂包括美国专利号6,653,340中描述的融合双环化合物(参见，例如，第6列(第15行)到第56列(第48行))，(包括CFD抑制剂BCX1470)和实例1-20中披露的化合物)，以及US 20080269318中描述的特定CFD抑制剂，包括BCX-1470(例如，参见段落[0023]和[0032])，WO 2012/093101(例如，参见第5-67页)、WO 2014/002057(例如，参见第3-13页)、WO 2014/009833(例如，第4-11页)、WO 2014/002051(例如，参见第5-16页)、WO2014/002052(参见，例如，第4-11)、WO 2014/002053(参见，例如，第4-11页)、WO 2014/002054(参见，例如，第5-19页)、WO 2014/002058(参见，例如，第5-20页)、WO 2014/002059(参见，例如，第6-8页和第13-20页)、和WO 2014/005150(参见，例如，第3-4页和第7-30页)，其中披露的教导和特定CFD抑制剂，通过引用全部明确并入本文。
本文所述的CFD抑制剂可以例如全身或局部施用。全身施用包括，例如，口服施用、经皮施用、皮下施用、腹腔内施用、表皮下施用、经鼻施用、舌下施用或直肠施用。例如，局部施用(local administration)包括局部施用(topical administration)。在一个实施例中，CFD抑制剂是口服施用的达尼科潘。
在一些实施例中，替代补体成分的抑制剂是补体3(C3)抑制剂，其可用于降低次优C5阻断(例如，持续贫血)的影响。据推测，在许多PNH患者中，抗C5抗体所带来的血液学益处的减弱可能是由于C3片段对存活的PNH红细胞的调理作用，从而降低红细胞的体内半衰期。因此，在某些实施例中，本披露的方法涉及C3抑制剂(单独或与FD抑制剂一起)在治疗对C5抑制剂不充分应答的PNH患者中的应用，例如，用依库珠单抗进行抗C5抗体疗法。
在一些实施例中，C3抑制剂是坎普他汀或其类似物。坎普他汀是一种与C3结合并抑制补体激活的环肽(参见美国专利号6,319,897)。已经开发了补体抑制活性高于坎普他汀的坎普他汀类似物，例如，WO 2004/026328(参见，例如，US 7,989,589)。如本文所用，术语“坎普他汀类似物”包括坎普他汀的补体抑制类似物。参见WO2017/062879；WO/2014/152391和WO/2012/178083，这些出版物及其美国副本中的披露(参见，例如，US 2019-0381129；US 10,308,687；和US 10,039,802)通过引用以其全文并入本文。优选的坎普他汀类似物包括pegcetacoplan(APL-2)和相关分子(例如，APL-9)。坎普他汀类似物可以乙酰化或酰胺化，例如，在N-末端和/或C-末端，特别是在N-末端乙酰化和在C-末端酰胺化。
在一些实施例中，C3抑制剂是坎普他汀模拟物。WO 2004/026328、WO2007/062249、WO/2008/140637、WO/2015/142701中提供了代表性的坎普他汀模拟物，这些出版物及其美国副本中的披露(参见，例如，US 7,989,589；US 7,888,323；US2011-0046075；和US 10,213,476)通过引用以其全文并入本文。优选的坎普他汀模拟物包括AMY-101(CAS:1427001-89-5)。
在一些实施例中，替代补体成分调节因子H。因子H通过具有因子I介导的C3b裂解的辅因子活性和针对替代途径C3转化酶C3bBb的衰变加速活性来调节细胞和表面上的补体激活。因子H对细胞和自身表面起保护作用，但对细菌或病毒的表面不起保护作用。这被认为是因子H具有采用具有较低或较高活性的构象作为C3裂解或衰变加速活性的辅因子的能力的结果。在优选实施例中，补体成分是迷你因子H(迷你FH/AMY-201)。
III.抗C5抗体
本文所述的抗C5抗体结合补体成分C5(例如，人C5)并抑制C5裂解成片段C5a和C5b。适用于本披露的抗C5抗体(或衍生自其的VH/VL结构域)可以使用本领域已知的方法产生。可替代地，可以使用本领域公认的抗C5抗体。也可以使用与这些本领域公认的抗体竞争结合C5的抗体或任何其他药剂。
术语“抗体”描述了包含至少一个抗体衍生的抗原结合位点(例如，VH/VL区或Fv、或CDR)的多肽。抗体包括已知的抗体形式。例如，抗体可以是人抗体、人源化抗体、双特异性抗体或嵌合抗体。抗体也可以是Fab、Fab'2、ScFv、SMIP、
纳米抗体或结构域抗体。抗体也可以是以下任何同种型：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgAsec、IgD和IgE。抗体可以是天然存在的抗体或可以是已经通过蛋白质工程技术改变的抗体(例如，通过突变、缺失、取代、与非抗体部分缀合)。例如，抗体可以包括一个或多个变体氨基酸(与天然存在的抗体相比)其改变抗体的特性(例如，功能特性)。例如，许多这样的改变在本领域中是已知的，它们影响例如半衰期、效应子功能和/或患者对抗体的免疫应答。术语抗体还包括包含至少一个抗体衍生的抗原结合位点的人工或工程化的多肽构建体。
依库珠单抗(也称为
)是包含分别具有SEQ ID NO:10和11所示序列的重链和轻链或其抗原结合片段和变体的抗C5抗体。
的可变区描述于PCT/US1995/005688和美国专利号6,355,245中，其教导通过引用并入本文。
的全重链和轻链描述于PCT/US2007/006606(参见，例如，US 9,718,880)中，其教导通过引用并入本文。在一个实施例中，抗C5抗体包含具有SEQ ID NO:7所示序列的
VH区的CDR1、CDR2和CDR3结构域，以及具有SEQ ID NO:8所示序列的
VL区的CDR1、CDR2和CDR3结构域。在另一个实施例中，抗体包含分别具有SEQ ID NO:1、2和3所示序列的重链CDR1、CDR2和CDR3结构域，以及分别具有SEQ ID NO:4、5和6所示序列的轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域。在另一个实施例中，抗体包含分别具有SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的VH和VL区。
另一种示例性抗C5抗体是包含分别具有SEQ ID NO:14和11所示序列的重链和轻链的
(瑞利珠单抗)或其抗原结合片段和变体。
(瑞利珠单抗)(也称为BNJ441和ALXN1210)描述于PCT/US2015/019225和美国专利号9,079,949中，其教导通过引用并入本文。在本文件通篇，术语瑞利珠单抗、BNJ441和ALXN1210可互换使用，但都是指同一抗体。
(瑞利珠单抗)选择性地结合人补体蛋白C5，在补体激活过程中抑制其裂解为C5a和C5b。这种抑制可防止促炎介质C5a的释放和溶细胞孔形成性膜攻击复合物(MAC)C5b-9的形成，同时保留对微生物的调理作用和免疫复合物的清除至关重要的补体激活的近端或早期组分(例如，C3和C3b)。
在其他实施例中，抗体包含
(瑞利珠单抗)的重链和轻链CDR或可变区。例如，在一个实施例中，抗体包含具有SEQ ID NO:12所示序列的
(瑞利珠单抗)VH区的CDR1、CDR2和CDR3结构域，以及具有SEQ ID NO:8所示序列的
(瑞利珠单抗)VL区的CDR1、CDR2和CDR3结构域。在另一个实施例中，抗体包含分别具有SEQ ID NO:19、18和3所示序列的重链CDR1、CDR2和CDR3结构域，以及分别具有SEQ ID NO:4、5和6所示序列的轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域。在另一个实施例中，抗体包含分别具有SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的VH和VL区。
另一种示例性抗C5抗体是包含分别具有SEQ ID NO:20和11所示序列的重链和轻链的抗体BNJ421或其抗原结合片段和变体。BNJ421(也称为ALXN1211)描述于PCT/US2015/019225和美国专利号9,079,949中，其教导通过引用并入本文。
在其他实施例中，抗体包含BNJ421的重链和轻链CDR或可变区。因此，在一个实施例中，抗体包含具有SEQ ID NO:12所示序列的BNJ421 VH区的CDR1、CDR2和CDR3结构域，以及具有SEQ ID NO:8所示序列的BNJ421 VL区的CDR1、CDR2和CDR3结构域。在另一个实施例中，抗体包含分别具有SEQ ID NO:19、18和3所示序列的重链CDR1、CDR2和CDR3结构域，以及分别具有SEQ ID NO:4、5和6所示序列的轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域。在另一个实施例中，抗体包含分别具有SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的VH和VL区。
CDR的确切边界已根据不同的方法进行了不同的定义。在一些实施例中，轻链或重链可变结构域内的CDR或框架区的位置可以如以下所定义：Kabat等人[(1991)“Sequencesof Proteins of Immunological Interest[具有免疫学意义的蛋白质序列].”NIH出版号91-3242,美国卫生与公众服务部(U.S.Department of Health and Human Services),贝塞斯达,马里兰州]。在这种情况下，CDR可以称为“Kabat CDR”(例如，“Kabat LCDR2”或“Kabat HCDR1”)。在一些实施例中，轻链或重链可变区的CDR的位置可以如以下所定义：Chothia等人(1989)Nature[自然]342:877-883。因此，这些区域可以称为“Chothia CDR”(例如，“Chothia LCDR2”或“Chothia HCDR3”)。在一些实施例中，轻链和重链可变区的CDR的位置可以如Kabat-Chothia组合定义所定义。在此类实施例中，这些区域可称为“组合的Kabat-Chothia CDR”。Thomas等人[(1996)Mol Immunol[分子免疫学]33(17/18):1389-1401]举例说明了根据Kabat和Chothia定义鉴定CDR边界。
在一些实施例中，本文所述的抗C5抗体包含重链CDR1，其包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：GHIFSNYWIQ(SEQ ID NO:19)。在一些实施例中，本文所述的抗C5抗体包含重链CDR2，其包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：EILPGSGHTEYTENFKD(SEQ ID NO:18)。在一些实施例中，本文所述的抗C5抗体包含重链可变区，其包含以下氨基酸序列：QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGHIFSNYWIQWVRQAPGQGLEWMGEILPGSGHTEYTENFKDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARYFFGSSPNWYFDVWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:12)。
在一些实施例中，本文所述的抗C5抗体包含轻链可变区，其包含以下氨基酸序列：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCGASENIYGALNWYQQKPGKAPKLLIYGATNLADGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQNVLNTPLTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO:8)。
另一种示例性抗C5抗体是美国专利号8,241,628和8,883,158中描述的7086抗体。在一个实施例中，抗体包含7086抗体的重链和轻链CDR或可变区(参见美国专利号8,241,628和8,883,158)。在另一个实施例中，抗体或其抗原结合片段包含分别具有SEQ ID NO:21、22和23所示序列的重链CDR1、CDR2和CDR3结构域，以及分别具有SEQ ID NO:24、25和26所示序列的轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域。在另一个实施例中，抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO:27所示序列的7086抗体VH区和具有SEQ ID NO:28所示序列的7086抗体VL区。
另一种示例性抗C5抗体是美国专利号8,241,628和8,883,158中也描述的8110抗体。在一个实施例中，抗体包含8110抗体的重链和轻链CDR或可变区。在另一个实施例中，抗体或其抗原结合片段包含分别具有SEQ ID NO:29、30和31所示序列的重链CDR1、CDR2和CDR3结构域，以及分别具有SEQ ID NO:32、33和34所示序列的轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域。在另一个实施例中，抗体包含具有SEQ ID NO:35所示序列的8110抗体VH区和具有SEQID NO:36所示序列的8110抗体VL区。
另一种示例性抗C5抗体是US 2016/0176954 A1中描述的305LO5抗体。在一个实施例中，抗体包含305LO5抗体的重链和轻链CDR或可变区。在另一个实施例中，抗体或其抗原结合片段包含分别具有SEQ ID NO:37、38和39所示序列的重链CDR1、CDR2和CDR3结构域，以及分别具有SEQ ID NO:40、41和42所示序列的轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域。在另一个实施例中，抗体包含具有SEQ ID NO:43所示序列的305LO5抗体VH区和具有SEQ ID NO:44所示序列的305LO5抗体VL区。
另一种示例性抗C5抗体是在Fukuzawa,T.等人的Rep.[报道],2017年4月24；7(1):1080中描述的SKY59抗体。在一个实施例中，抗体包含SKY59抗体的重链和轻链CDR或可变区。在另一个实施例中，抗体或其抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:45的重链和包含SEQID NO:46的轻链。
另一种示例性抗C5抗体是US 20170355757(参见US 10,633,434)中所描述的REGN3918抗体(也称为H4H12166PP)。在一个实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:47的重链可变区和含有SEQ ID NO:48的轻链可变区。在另一个实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:49的重链和含有SEQ ID NO:50的轻链。
在一些实施例中，本文所述的抗C5抗体可以包含与人新生儿Fc受体(FcRn)结合的变体人Fc恒定区，其结合人新生儿Fc受体的亲和力大于与从其衍生出变体人Fc恒定区的天然人Fc恒定区的亲和力。例如，Fc恒定区可以包含一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个、六个、七个或八个或更多个)相对于从其衍生出变体人Fc恒定区的天然人Fc恒定区的氨基酸取代。取代可以增加含有变体Fc恒定区的IgG抗体在pH 6.0下对FcRn的结合亲和力，同时维持相互作用的pH依赖性。用于测试抗体Fc恒定区中的一个或多个取代是否增加在pH6.0下Fc恒定区对FcRn的亲和力(同时维持相互作用的pH依赖性)的方法在本领域中是已知的。
增强抗体Fc恒定区对FcRn的结合亲和力的取代是本领域已知的并且包括例如(1)Dall’Acqua等人(2006)J Biol Chem[生物化学杂志]281:23514-23524描述的M252Y/S254T/T256E三重取代；(2)Hinton等人(2004)J Biol Chem[生物化学杂志]279:6213-6216和Hinton等人(2006)J Immunol[免疫学杂志]176:346-356中描述的M428L或T250Q/M428L取代；和(3)Petkova等人(2006)Int Immunol[国际免疫学]18(12):1759-69中描述的N434A或T307/E380A/N434A取代。另外的取代配对：例如，在Datta-Mannan等人(2007)J BiolChem[生物化学杂志]282(3):1709-1717中描述了P257I/Q311I、P257I/N434H和D376V/N434H，通过引用将其披露以其整体并入本文。
在一些实施例中，变体恒定区在EU氨基酸残基255处具有对缬氨酸的取代。在一些实施例中，变体恒定区在EU氨基酸残基309处具有对天冬酰胺的取代。在一些实施例中，变体恒定区在EU氨基酸残基312处具有对异亮氨酸的取代。在一些实施例中，变体恒定区在EU氨基酸残基386处具有取代。
在一些实施例中，变体Fc恒定区包含不超过30个(例如，不超过29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3或2)相对于衍生其的天然恒定区的氨基酸取代、***或缺失。在一些实施例中，变体Fc恒定区包含一个或多个选自由以下组成的组的氨基酸取代：M252Y、S254T、T256E、N434S、M428L、V259I、T250I和V308F。在一些实施例中，变体人Fc恒定区在天然人IgG Fc恒定区的位置428包含甲硫氨酸并且位置434包含天冬酰胺，其各自以EU编号。在一些实施例中，变体Fc恒定区包含428L/434S双取代，例如美国专利号8,088,376中所描述。
在一些实施例中，这些突变的精确位置可能由于抗体工程而从天然人Fc恒定区位置偏移。例如，当在IgG2/4嵌合Fc中使用时，428L/434S双取代可对应于在BNJ441(
(瑞利珠单抗))中发现并描述于美国专利号9,079,949(通过引用将其披露以其整体并入本文)中的M429L和N435S变体中的429L和435S。
在一些实施例中，变体恒定区相对于天然人Fc恒定区包含在氨基酸位置237、238、239、248、250、252、254、255、256、257、258、265、270、286、289、297、298、303、305、307、308、309、311、312、314、315、317、325、332、334、360、376、380、382、384、385、386、387、389、424、428、433、434或436(EU编号)处的取代。在一些实施例中，取代选自由以下组成的组：位置237处甲硫氨酸取代甘氨酸；位置238处丙氨酸取代脯氨酸；位置239处赖氨酸取代丝氨酸；位置248处异亮氨酸取代赖氨酸；位置250处丙氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、缬氨酸、色氨酸或酪氨酸取代苏氨酸；位置252处苯丙氨酸、色氨酸或酪氨酸取代甲硫氨酸；位置254处苏氨酸取代丝氨酸；位置255处谷氨酸取代精氨酸；位置256处天冬氨酸、谷氨酸或谷氨酰胺取代苏氨酸；位置257处丙氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸取代脯氨酸；位置258处组氨酸取代谷氨酸；位置265处丙氨酸取代天冬氨酸；位置270处苯丙氨酸取代天冬氨酸；位置286处丙氨酸或谷氨酸取代天冬酰胺；位置289处组氨酸取代苏氨酸；位置297处丙氨酸取代天冬酰胺；位置298处甘氨酸取代丝氨酸；位置303处丙氨酸取代缬氨酸；位置305处丙氨酸取代缬氨酸；位置307处丙氨酸、天冬氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、丝氨酸、缬氨酸、色氨酸或酪氨酸取代苏氨酸；位置308处丙氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺或苏氨酸取代缬氨酸；位置309处丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、脯氨酸或精氨酸取代亮氨酸或缬氨酸；位置311处丙氨酸、组氨酸或异亮氨酸取代谷氨酰胺；位置312处丙氨酸或组氨酸取代天冬氨酸；位置314处赖氨酸或精氨酸取代亮氨酸；位置315处丙氨酸或组氨酸取代天冬酰胺；位置317处丙氨酸取代赖氨酸；位置325处甘氨酸取代天冬酰胺；位置332处缬氨酸取代异亮氨酸；位置334处亮氨酸取代赖氨酸；位置360处组氨酸取代赖氨酸；位置376处丙氨酸取代天冬氨酸；位置380处丙氨酸取代谷氨酸；位置382处丙氨酸取代谷氨酸；位置384处丙氨酸取代天冬酰胺或丝氨酸；位置385处天冬氨酸或组氨酸取代甘氨酸；位置386处脯氨酸取代谷氨酰胺；位置387处谷氨酸取代脯氨酸；位置389处丙氨酸或丝氨酸取代天冬酰胺；位置424处丙氨酸取代丝氨酸；位置428处丙氨酸、天冬氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸或酪氨酸取代甲硫氨酸；位置433处赖氨酸取代组氨酸；位置434处丙氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、丝氨酸、色氨酸或酪氨酸取代天冬酰胺；以及位置436处组氨酸取代酪氨酸或苯丙氨酸，均采用EU编号。
在一些实施例中，用于本文所述的这些方法中的合适的抗C5抗体包括包含SEQ IDNO:14描述的氨基酸序列的重链多肽和/或包含SEQ ID NO:11描述的氨基酸序列的轻链多肽。可替代地，在一些实施例中，用于本文所述的这些方法中的抗C5抗体包括包含SEQ IDNO:20描述的氨基酸序列的重链多肽和/或包含SEQ ID NO:11描述的氨基酸序列的轻链多肽。
在一个实施例中，抗体在pH 7.4和25℃(以及，否则，在生理条件下)以至少0.1(例如，至少0.15、0.175、0.2、0.25、0.275、0.3、0.325、0.35、0.375、0.4、0.425、0.45、0.475、0.5、0.525、0.55、0.575、0.6、0.625、0.65、0.675、0.7、0.725、0.75、0.775、0.8、0.825、0.85、0.875、0.9、0.925、0.95或0.975)nM的亲和力解离常数(KD)与C5结合。在一些实施例中，抗C5抗体或其抗原结合片段的KD不大于1(例如，不大于0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3,或0.2)nM。
在其他实施例中，[(抗体针对C5在pH 6.0和℃时的KD)/(抗体针对C5在pH7.4和25℃时的KD)]大于21(例如，大于22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、350、400、450、500、600、700、800、900、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500或8000)。
用于确定抗体是否结合蛋白质抗原和/或抗体对蛋白质抗原的亲和力的方法是本领域已知的。例如，可以使用多种技术检测和/或定量抗体与蛋白质抗原的结合，例如但不限于蛋白质印迹、斑点印迹、表面等离子共振(SPR)方法(例如，BIAcore***；Pharmacia公司生物传感器AB,瑞典乌普萨拉和新泽西州，皮斯卡塔韦)或酶联免疫吸附测定(ELISA)。参见，例如，Benny K.C.Lo(2004)“Antibody Engineering:Methods and Protocols[抗体工程：方法和协议]”，胡马纳出版社(Humana Press)(ISBN:1588290921)；Johne等人(1993)JImmunol Meth[免疫学方法杂志]160:191-198；Jonsson等人(1993)Ann Biol Clin[临床生物学年鉴]51:19-26；和Jonsson等人(1991)Biotechniques[生物诊所年鉴]11:620-627。此外，用于测量亲和力(例如，解离和缔合常数)的方法在工作实例中进行了阐述。
如本文所用，术语“ka”是指抗体与抗原结合的速率常数。术语“kd”是指抗体从抗体/抗原复合物中解离的速率常数。并且术语“KD”是指抗体-抗原相互作用的平衡解离常数。平衡解离常数由动力学速率常数的比率推导出，KD＝ka/kd。此类测定优选在25℃或37℃测量(参见工作实例)。例如，抗体与人C5结合的动力学可以在pH 8.0、7.4、7.0、6.5和6.0通过BIAcore 3000仪器上的表面等离子共振(SPR)使用抗Fc捕获方法固定抗体来确定。
在一个实施例中，抗C5抗体或其抗原结合片段阻断C5蛋白(例如，人C5蛋白)的C5a和/或C5b活性片段的产生或活性。通过这种阻断作用，抗体抑制例如，C5a的促炎性作用和细胞表面C5b-9膜攻击复合物(MAC)的产生。
用于确定本文所述的特定抗体或治疗药剂是否抑制C5裂解的方法是本领域已知的。抑制人补体成分C5可降低受试者体液中补体的细胞裂解能力。(一种或多种)体液中存在的补体的细胞裂解能力的这种降低可以通过本领域所熟知的方法来测量，例如，通过常规溶血测定，例如由Kabat和Mayer(编辑),“Experimental Immunochemistry[实验免疫化学],第2版,”135-240,斯普林菲尔德(Springfield),伊利诺伊州,CC Thomas(1961),第135-139页描述的溶血测定，或该测定的常规变体，例如Hillmen等人，(2004)N Engl J Med[新英格兰医学杂志]，350(6):552)中所述的鸡红细胞溶血法。用于确定候选化合物是否抑制人C5被裂解成C5a和C5b形式的方法是本领域已知的，并在Evans等人(1995)Mol Immunol[分子免疫学]32(16):1183-95中描述。例如，可以通过本领域所熟知的方法测量体液中C5a和C5b的浓度和/或生理活性。对于C5b，可以使用如本文讨论的针对可溶性C5b-9的一种或多种溶血测定。也可以使用本领域已知的其他测定。使用这些或其他合适类型的测定，可以筛查能够抑制人补体成分C5的候选药剂。
免疫学技术例如但不限于ELISA可用于测量C5和/或其***产物的蛋白质浓度以确定抗C5抗体或其抗原结合片段抑制C5转化为生物活性产物的能力。在一些实施例中，测量C5a的产生。在一些实施例中，C5b-9新表位特异性抗体用于检测末端补体的形成。
溶血测定可用于确定抗C5抗体或其抗原结合片段对补体激活的抑制活性。为了确定抗C5抗体或其抗原结合片段对体外血清测试溶液中经典补体途径介导的溶血的影响，例如，用溶血素包被的绵羊红细胞或用抗鸡红细胞抗体敏化的鸡红细胞用作靶细胞。通过将100％裂解视为等于在不存在抑制剂的情况下发生的裂解来对裂解百分比进行标准化。在一些实施例中，经典补体途径是由人IgM抗体激活，例如
经典途径补体试剂盒(
COMPL CP310,Euro-Diagnostica，瑞典)中所使用。简而言之，在存在人IgM抗体的情况下，将测试血清与抗C5抗体或其抗原结合片段一起培育。通过使混合物与酶缀合的抗C5b-9抗体和荧光底物接触，并在适当波长下测量吸光度，来测量所产生的C5b-9的量。作为对照,在不存在抗C5抗体或其抗原结合片段的情况下培育测试血清。在一些实施例中，测试血清是用C5多肽重构的缺乏C5的血清。
为了确定抗C5抗体或其抗原结合片段对替代途径介导的溶血的影响，可将未致敏的兔或豚鼠红细胞用作靶细胞。在一些实施例中，血清测试溶液是用C5多肽重构的缺乏C5的血清。通过将100％裂解视为等于在不存在抑制剂的情况下发生的裂解来对裂解百分比进行标准化。在一些实施例中，替代补体途径由脂多糖分子激活，例如，如在
替代途径补体试剂盒(
COMPL AP330,Euro-Diagnostica,瑞典)中所使用。简而言之，在存在脂多糖的情况下，将测试血清与抗C5抗体或其抗原结合片段一起培育。通过使混合物与酶缀合的抗C5b-9抗体和荧光底物接触，并在适当波长下测量荧光度，来测量所产生的C5b-9的量。作为对照,在不存在抗C5抗体或其抗原结合片段的情况下培育测试血清。
在一些实施例中，C5活性或其抑制使用CH50eq测定来定量。CH50eq测定是一种用于测量血清中总经典补体活性的方法。该测试是裂解测定，它使用抗体敏化的红细胞作为经典补体途径的激活剂和测试血清的各种稀释以确定提供50％裂解所需的量(CH50)。例如，可以使用分光光度计确定溶血百分比。CH50eq测定提供了末端补体复合物(TCC)形成的间接测量，因为TCC本身直接负责所测量的溶血。
该测定是本领域技术人员所熟知的并且通常实践的。简而言之,为了激活经典补体途径,将未稀释的血清样品(例如，重构的人血清样品)添加到含有抗体敏化的红细胞的微量测定孔中，由此产生TCC。接下来,将激活的血清在微量测定孔中稀释，这些微量测定孔涂有捕获试剂(例如，与TCC的一种或多种组分结合的抗体)。激活的样品中存在的TCC与涂布微量测定孔表面的单克隆抗体结合。洗涤各孔，并将可检测地标记并识别结合的TCC的检测试剂添加到每个孔中。可检测标记可以是例如荧光标记或酶标记。测定结果是以每毫升CH50单位当量(CH50 U Eq/mL)表示。
例如，与末端补体活性有关的抑制包括与在相似条件和等摩尔浓度下的对照抗体(或其抗原结合片段)的作用相比降低至少5％(例如，至少6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％)的例如溶血测定或CH50eq测定中的末端补体活性。如本文所用，显著抑制是指给定活性(例如，末端补体活性)被抑制至少40％(例如，至少45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％或更高)。在一些实施例中，本文所述的抗C5抗体相对于
的CDR(即，SEQ ID NO:1-6)含有一个或多个氨基酸取代，但仍保留溶血测定或CH50eq测定中的
的补体抑制活性的至少30％(例如,至少31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％)。
在一个实施例中，抗体与本文所述的抗体竞争跟C5上的相同的表位结合和/或与C5上相同的表位结合。关于两种或更多种抗体的术语“结合相同的表位”是指抗体结合相同的氨基酸残基片段，如通过给定方法所确定的。用于确定抗体是否与本文所描述的抗体结合至“C5上的相同的表位”的技术包括例如表位作图法，如关于抗原：抗体复合物的晶体的x射线分析，这些方法提供了表位的原子级解析，以及氢/氘交换质谱法(HDX-MS)。其他方法监测抗体与肽抗原片段或抗原的突变变体的结合，其中由于抗原序列内氨基酸残基的修饰而导致的结合丧失通常被认为是表位组分的指示。此外，还可以使用用于表位作图的计算组合方法。这些方法依赖于目的抗体从组合噬菌体展示肽文库中亲和力分离特定短肽的能力。具有相同VH和VL或相同CDR1、2和3序列的抗体预计会结合相同的表位。
“与另一种抗体竞争结合靶标”的抗体是指抑制(部分或完全抑制)另一种抗体与靶标结合的抗体。两种抗体是否相互竞争以结合靶标，即，一种抗体是否抑制另一种抗体与靶标的结合以及抑制到何种程度，可以使用已知的竞争实验来确定。在某些实施例中，抗体与另一种抗体竞争并将另一种抗体与靶标的结合抑制至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。抑制或竞争的水平可能会有所不同，这具体取决于哪种抗体是“阻断性抗体”(即，首先与目的孵育的冷抗体)。竞争性抗体结合相同的表位、重叠的表位或相邻的表位(例如，如空间位阻所示)。
用于本文所述的这些方法的本文所述抗C5抗体或其抗原结合片段可使用多种本领域公认的技术产生。单克隆抗体可以通过本领域技术人员熟悉的各种技术获得。简而言之，来自用所需抗原免疫的动物的脾细胞被通常通过与骨髓瘤细胞融合永生化(参见,Kohler和Milstein,Eur.J.Immunol.[欧洲免疫学杂志]6:511-519(1976))。替代的永生化方法包括用爱泼斯坦巴尔病毒、癌基因或逆转录病毒进行转化或本领域熟知的其他方法。筛查来自单个永生化细胞的集落以产生对抗原具有所需特异性和亲和力的抗体，并且由这些细胞产生的单克隆抗体的产率可以通过各种技术提高，包括注射到脊椎动物宿主的腹膜腔中。可替代地，可以根据Huse等人,Science[科学]246:1275-1281(1989)中概述的一般方案，通过筛查来自人B细胞的DNA文库来分离编码单克隆抗体或其结合片段的DNA序列。
IV.组合物
组合物可以配制成药物溶液，例如，用于对受试者施用以治疗或预防补体相关病症。药物组合物通常包括药学上可接受的载剂。如本文所用，“药学上可接受的载剂”是指并且包括在生理上相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。组合物可以包括药学上可接受的盐，例如酸加成盐或碱加成盐、糖、碳水化合物、多元醇和/或张度调节剂。
可以根据标准方法配制组合物。药物配制是一项公认的技术(参见，例如，Gennaro(2000)“Remington:The Science and Practice of Pharmacy[雷明顿：药学的科学与实践],”第20版，Lippincott，Williams和Wilkis(ISBN:0683306472)；Ansel等人(1999)“Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems[药物剂型和药物输送***],”第7版，Lippincott Williams和Wilkins出版商(ISBN:0683305727)；以及Kibbe(2000)“Handbook of Pharmaceutical Excipients American PharmaceuticalAssociation[药物辅料手册美国药学协会],”第3版(ISBN:091733096X))。在一些实施例中，组合物可以例如配制为合适浓度并且适合于在2℃-8℃(例如，4℃)储存的缓冲溶液。在一些实施例中，可以配制组合物用于在低于0℃的温度(例如，-20℃或-80℃)储存。在一些实施例中，组合物可以配制用于在2℃-8℃(例如，4℃)储存长达2年(例如，1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、1年、11/2年或2年)。因此，在一些实施例中，本文所述的组合物在2℃-8℃(例如，4℃)储存至少1年是稳定的。
药物组合物可以呈各种形式。这些形式包括，例如，液体、半固体和固体剂型，例如液体溶液(例如，可注射和可输注溶液)、分散剂或混悬剂、片剂、丸剂、粉末、脂质体和栓剂。优选的形式部分取决于预期的施用方式和治疗应用。例如，含有用于全身或局部递送的组合物的组合物可以呈可注射或可输注溶液的形式。因此，可以将组合物配制成通过肠胃外方式施用(例如，静脉内、皮下、腹膜内或肌肉内注射)。如本文所用，“肠胃外施用”、“肠胃外地施用”和其他语法上等同的短语是指除肠内和局部施用以外的施用方式，通常通过注射，并且包括但不限于静脉内、鼻内、眼内、肺部、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、肺内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊髓内、硬膜外、脑内、颅内、颈动脉内和胸骨内注射和输注。
V.方法
本文提供了用于通过向受试者施用治疗有效量的AP的抑制剂治疗先前对抗C5抗体疗法表现出不充分应答的受试者的PNH的方法。在一些实施例中，AP的抑制剂是抑制C5上游的靶标，如因子D或补体3(C3)，的抑制剂。
在一些实施例中，治疗使得受试者以下一项或多项下降：(a)持续性血管外溶血(EVH)；(b)贫血；和/或(c)输血依赖性；和/或FACIT疲劳量表分数的改善。在一些实施例中，在治疗后，维持或改善对不充分应答的PNH受试者中MAC介导的血管内溶血的控制。
在一些实施例中，对抗C5抗体疗法不充分应答与以下方面有关：药代动力学(PK)方面，例如，(a)对受试者C5裂解的抑制无效；(b)抗C5抗体的剂量低和/或受试者血浆水平低；(c)受试者中抗C5抗体的清除率增强；和/或(d)受试者中的抗C5抗体不耐受导致抗C5抗体剂量降低，优选地其中抗C5抗体不耐受包含疲劳和输注后疼痛。在一些实施例中，对抗C5抗体疗法不充分应答与以下方面有关：药效学(PD)方面，例如，(a)CR1多态性；(b)血管外溶血(EVH)，例如，通过血管内溶血(IVH)存活的血细胞的调理作用；和/或(c)C3片段对抗C5抗体活性的损害作用。在一些实施例中，对抗C5抗体疗法不充分应答与一个或多个PK和PD方面有关。
本文还提供了用于治疗人类患者的PNH的方法，该方法包括向患者单独施用CFD抑制剂或结合抗C5抗体或其抗原结合片段一起施用。在一些实施例中，根据特定的临床剂量方案(例如，以特定的剂量和根据特定的给药方案)施用(或用于施用)CFD抑制剂和/或抗C5抗体或其抗原结合片段。
在一个实施例中，提供了用于治疗受试者的PNH的方法，该方法包括：向受试者施用治疗有效量的补体因子D(CFD)抑制剂结合治疗有效量的抗C5抗体或其抗原结合片段，
其中受试者在用CFD抑制剂治疗后12和/或24周表现出以下临床改善中的一种或多种：
(a)与受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；
(b)输血非依赖性；和/或
(c)与受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。
在另一个实施例中，提供了用于治疗先前对抗C5抗体疗法表现出不充分应答的受试者的PNH的方法，该方法包括：
向受试者施用治疗有效量的补体因子D(CFD)抑制剂，
其中受试者的不充分应答是输血依赖性和/或贫血；并且
其中受试者在用CFD抑制剂治疗后12和/或24周表现出以下临床改善中的一种或多种：
(d)与受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；
(e)输血非依赖性或避免输血；和/或
(f)与受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。
在另一个实施例中，提供了用于治疗先前对抗C5抗体疗法表现出不充分应答的受试者的PNH的方法，该方法包括：
向受试者施用治疗有效量的补体因子D(CFD)抑制剂结合治疗有效量的抗C5抗体或其抗原结合片段，
其中受试者的不充分应答是输血依赖性和/或贫血；并且
其中受试者在用CFD抑制剂治疗后12和/或24周表现出以下临床改善中的一种或多种：
(a)与受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；
(b)输血非依赖性或避免输血；和/或
(c)与受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。
在一些实施例中，这些方法还包括在基线和治疗后12和/或24周时确定受试者的血红蛋白水平、输血状态、和/或FACIT疲劳量表分数，其中(a)与受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；(b)输血非依赖性或避免输血；和/或(c)与受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，FACIT疲劳量表分数增加10分或更多是治疗的指示。在一些实施例中，这些方法涉及治疗患有PNH的受试者，受试者先前对抗C5抗体疗法(例如，
7086抗体、8110抗体、305LO5抗体、SKY59抗体或REGN3918抗体)表现出不充分应答。在一些实施例中，患有PNH的受试者先前对
表现出不充分应答。在一些实施例中，在不改变方案≤8周的情况下，患有PNH的受试者先前在批准剂量或更高剂量下对
表现出不充分应答≥24周(例如，24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40或更多周)。在一些实施例中，患有PNH的受试者先前对
表现出不充分应答。
在一些实施例中，受试者的不充分应答是输血依赖性(例如，在筛查前≤12周的时间进行≥1次红细胞(RBC)输血)。在一些实施例中，受试者的不充分应答是贫血(例如，血红蛋白<10g/dl)。在一些实施例中，受试者的不充分应答是输血依赖性和贫血。
在一些实施例中，该方法还包括在基线和治疗后12和/或24周时确定受试者的血红蛋白水平、输血状态、和/或FACIT疲劳量表分数，其中
(a)与受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；
(b)输血非依赖性或避免输血；和/或
(c)与受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，FACIT疲劳量表分数增加10分或更多是治疗的指示。
在一些实施例中，根据特定的临床剂量方案(例如，以特定的剂量和根据特定的给药方案)施用(或用于施用)CFD抑制剂(例如，达尼科潘)。在一些实施例中，将CFD抑制剂口服施用于受试者。在一些实施例中，将CFD抑制剂每日三次(TID)口服施用于受试者。在一些实施例中，将CFD抑制剂以约50mg至300mg的剂量口服施用于受试者。在一些实施例中，CFD抑制剂以约100mg、110mg、120mg、130mg、140mg、150mg、160mg、170mg、180mg、190mg、200mg、210mg、220mg、230mg、240mg、250mg、260mg、270mg、280mg、290mg或300mg的剂量口服施用。在一些实施例中，CFD抑制剂以约100mg的剂量口服施用。在一些实施例中，CFD抑制剂以约100mg的剂量TID口服施用。在一些实施例中，CFD抑制剂以约150mg的剂量口服施用。在一些实施例中，CFD抑制剂以约150mg的剂量TID口服施用。在一些实施例中，CFD抑制剂以约200mg的剂量口服施用。在一些实施例中，CFD抑制剂以约200mg的剂量TID口服施用。
在一些实施例中，CFD抑制剂施用4周或更长时间(例如，4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60周或更长时间)。在一些实施例中，CFD抑制剂口服施用24周。在一些实施例中，CFD抑制剂施用9个月、12个月、15个月、20个月、24个月或更长时间。在一些实施例中，CFD抑制剂施用1年、2年、3年、4年、5年、6年、或更多年。
在一些实施例中，根据特定的临床剂量方案(例如，以特定的剂量和根据特定的给药方案)施用(或用于施用)抗C5抗体或其抗原结合片段(例如，
或
)。可以将抗C5抗体或其抗原结合片段通过任何合适的方法施用于患者。在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段静脉内施用于受试者。
在一些实施例中，抗C5抗体或其抗原结合片段的剂量是固定剂量。例如，在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段以每周600mg的剂量施用于受试者。在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段以每两周900mg的剂量施用于受试者。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段以每周600mg的剂量施用于受试者，施用四次，随后在第5周以900mg的剂量施用，并且此后以每2周900mg的剂量施用。在一些实施例中，将
以每周600mg的剂量施用于受试者(例如，成年受试者)，施用四次，随后在第5周以900mg的剂量施用，并且此后以每2周900mg的剂量施用。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段以每周900mg的剂量施用于小于18岁且体重40kg及以上的受试者，施用四次，随后在第5周以1200mg的剂量施用，并且此后以每两周1200mg的剂量施用。在一些实施例中，将
以每周900mg的剂量施用于小于18岁且体重40kg及以上的受试者，施用四次，随后在第5周以1200mg的剂量施用，并且此后以每两周1200mg的剂量施用。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段以每周600mg的剂量施用于小于18岁且体重30kg至小于40kg的受试者，施用两次，随后在第3周以900mg的剂量施用，并且此后以每两周900mg的剂量施用。在一些实施例中，将
以每周600mg的剂量施用于小于18岁且体重30kg至小于40kg的受试者，施用两次，随后在第3周以900mg的剂量施用，并且此后以每两周900mg的剂量施用。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段以每周600mg的剂量施用于小于18岁且体重20kg至小于30kg的受试者，施用两次，随后在第3周以600mg的剂量施用，并且此后以每两周600mg的剂量施用。在一些实施例中，将
以每周600mg的剂量施用于小于18岁且体重20kg至小于30kg的受试者，施用两次，随后在第3周以600mg的剂量施用，并且此后以每两周600mg的剂量施用。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段以每周600mg的剂量施用于小于18岁且体重10kg至小于20kg的受试者，施用一次，随后在第3周以300mg的剂量施用，并且此后以每两周300mg的剂量施用。在一些实施例中，将
以每周600mg的剂量施用于小于18岁且体重10kg至小于20kg的受试者，施用一次，随后在第3周以300mg的剂量施用，并且此后以每两周300mg的剂量施用。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段以每周300mg的剂量施用于小于18岁且体重5kg至小于10kg的受试者，施用一次，随后在第2周以300mg的剂量施用，并且此后以每三周300mg的剂量施用。在一些实施例中，将
以每周300mg的剂量施用于小于18岁且体重5kg至小于10kg的受试者，施用一次，随后在第2周以300mg的剂量施用，并且此后以每三周300mg的剂量施用。
在一些实施例中，抗C5抗体或其抗原结合片段的剂量是基于患者的体重。在一些实施例中，例如，将300mg的抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥5至<10kg的患者。在一些实施例中，将600mg的抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥10至<20kg的患者。在一些实施例中，将900mg或2100mg的抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥20至<30kg的患者。在一些实施例中，将1200mg或2700mg的抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥30至<40kg的患者。在一些实施例中，将2400mg或3000mg的抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥40至<60kg的患者。在一些实施例中，将2700mg或3300mg的抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥60至<100kg的患者。在一些实施例中，将3000mg或3600mg的抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥100kg的患者。在某些实施例中，调整剂量方案以提供最佳期望应答(例如，有效应答)。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段按如下施用：
(a)在施用周期的第1天一次，剂量为：体重≥40至<60kg的患者2400mg，体重≥60至<100kg的患者2700mg，或体重≥100kg的患者3000mg；以及
(b)在施用周期的第15天和此后每八周，剂量为：体重≥40至<60kg的患者3000mg，体重≥60至<100kg的患者3300mg，或体重≥100kg的患者3600mg。
在一些实施例中，
如下施用：
(a)在施用周期的第1天一次，剂量为：体重≥40至<60kg的患者2400mg，体重≥60至<100kg的患者2700mg，或体重≥100kg的患者3000mg；以及
(b)在施用周期的第15天和此后每八周，剂量为：体重≥40至<60kg的患者3000mg，体重≥60至<100kg的患者3300mg，或体重≥100kg的患者3600mg。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥40至<60kg的患者：
(a)在施用周期的第1天一次，剂量为2400mg；以及
(b)在施用周期的第15天和此后每八周，剂量为：3000mg。
在一些实施例中，将
施用于体重≥40至<60kg的患者：
(a)在施用周期的第1天一次，剂量为2400mg；以及
(b)在施用周期的第15天和此后每八周，剂量为：3000mg。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥60至<100kg的患者：
(a)在施用周期的第1天一次，剂量为2700mg；以及
(b)在施用周期的第15天和此后每八周，剂量为：3300mg。
在一些实施例中，将
施用于体重≥60至<100kg的患者：
(a)在施用周期的第1天一次，剂量为2700mg；以及
(b)在施用周期的第15天和此后每八周，剂量为：3300mg。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥100kg的患者：
(a)在施用周期的第1天一次，剂量为3000mg；以及
(b)在施用周期的第15天和此后每八周，剂量为：3600mg。
在一些实施例中，将
施用于体重≥100kg的患者：
(a)在施用周期的第1天一次，剂量为3000mg；以及
(b)在施用周期的第15天和此后每八周，剂量为：3600mg。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段施用于小于18岁的受试者：
(a)第1天施用一次，剂量为：体重≥5至<10kg的患者600mg，体重≥10至<20kg的患者600mg，体重≥20至<30kg的患者900mg，体重≥30至<40kg的患者1200mg，体重≥40至<60kg的患者2400mg，体重≥60至<100kg的患者2700mg，或体重≥100kg的患者3000mg；以及
(b)在第15天和此后每四周，剂量为：体重≥5至<10kg的患者300mg，或体重≥10至<20kg的患者600mg；或在第15天和此后每八周，剂量为：体重≥20至<30kg的患者2100mg，体重≥30至<40kg的患者2700mg，体重≥40至<60kg的患者3000mg，体重≥60至<100kg的患者3300mg，或体重≥100kg的患者3600mg。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥5至<10kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为600mg；以及(b)在第15天和此后每四周，剂量为300mg。在一些实施例中，将
施用于体重≥5至<10kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为600mg；以及(b)在第15天和此后每四周，剂量为300mg。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥10至<20kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为600mg；以及(b)在第15天和此后每四周，剂量为600mg。在一些实施例中，将抗C5抗体施用于体重≥10至<20kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为600mg；以及(b)在第15天和此后每四周，剂量为600mg。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥20至<30kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为900mg；以及(b)在第15天和此后每八周，剂量为2100mg。在一些实施例中，将
施用于体重≥20至<30kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为900mg；以及(b)在第15天和此后每八周，剂量为2100mg。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥30至<40kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为1200mg；以及(b)在第15天和此后每八周，剂量为2700mg。在一些实施例中，将
施用于体重≥30至<40kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为1200mg；以及(b)在第15天和此后每八周，剂量为2700mg。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥40至<60kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为2400mg；以及(b)在第15天和此后每八周，剂量为3000mg。在一些实施例中，将
施用于体重≥40至<60kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为2400mg；以及(b)在第15天和此后每八周，剂量为3000mg。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥60至<100kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为2700mg；以及(b)在第15天和此后每八周，剂量为3300mg。在一些实施例中，将
施用于体重≥60至<100kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为2700mg；以及(b)在第15天和此后每八周，剂量为3300mg。
在一些实施例中，将抗C5抗体或其抗原结合片段施用于体重≥100kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为3000mg；以及(b)在第15天和此后每八周，剂量为3600mg。在一些实施例中，将
施用于体重≥100kg的患者：(a)在第1天一次，剂量为3000mg；以及(b)在第15天和此后每八周，剂量为3600mg。
在另一个方面，所描述的治疗方案足以维持抗C5抗体或其抗原结合片段的特定血清谷浓度。在一个实施例中，例如，治疗方案维持抗C5抗体或其抗原结合片段的血清谷浓度为50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、200、205、210、215、220、225、230、240、245、250、255、260、265、270、280、290、300、305、310、315、320、325、330、335、340、345、350、355、360、365、370、375、380、385、390、395或400μg/mL或更高。在一些实施例中，治疗方案维持抗C5抗体或其抗原结合片段的血清谷浓度为100μg/mL或更高、150μg/mL或更高、200μg/mL或更高、250μg/mL或更高、或300μg/mL或更高。在一些实施例中，治疗维持抗C5抗体或其抗原结合片段的血清谷浓度在100μg/mL和200μg/mL之间。在一些实施例中，治疗维持抗C5抗体或其抗原结合片段的血清谷浓度为约175μg/mL。
在一些实施例中，为了获得有效应答，以维持至少50μg、55μg、60μg、65μg、70μg、75μg、80μg、85μg、90μg、95μg、100μg、105μg、110μg、115μg、120μg、125μg、130μg、135μg、140μg、145μg、150μg、155μg、160μg、165μg、170μg，175μg、180μg、185μg、190μg、195μg、200μg、205μg、210μg、215μg、220μg、225μg、230μg、235μg、240μg、245μg、250μg、255μg或260μg抗体/毫升患者血液的量和频率向患者施用抗C5抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，以维持50μg至250μg抗体/毫升患者血液的量和频率向患者施用抗C5抗体。在一些实施例中，以维持100μg至200μg抗体/毫升患者血液的量和频率向患者施用抗C5抗体。在一些实施例中，以维持约175μg抗体/毫升患者血液的量和频率向患者施用抗C5抗体。
在一个实施例中，提供了用于既往
(依库珠单抗)治疗不充分应答的受试者的PNH的方法，该方法包括：
向受试者施用治疗有效量的达尼科潘结合治疗有效量的
(依库珠单抗)，
其中受试者的不充分应答是输血依赖性和/或贫血；并且
其中将达尼科潘以100mg、150mg或200mg的剂量TID口服施用于受试者；
其中将
(依库珠单抗)以每周600mg的剂量静脉内施用于受试者，施用四次，随后在第5周以900mg的剂量施用，并且此后以每2周900mg的剂量施用；并且
其中受试者在用CFD抑制剂治疗后12和/或24周表现出以下临床改善中的一种或多种：
(a)与受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；
(b)输血非依赖性或避免输血；和/或
(c)与受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。
在另一个实施例中，提供了用于治疗对既往
(依库珠单抗)治疗不充分应答的受试者的PNH的方法，该方法包括：向受试者施用治疗有效量的达尼科潘结合治疗有效量的
(依库珠单抗)，
其中受试者的不充分应答是输血依赖性和/或贫血；并且
其中将达尼科潘以100mg、150mg或200mg的剂量TID口服施用于受试者；
其中将
(依库珠单抗)静脉内施用于小于18岁的受试者：
(a)对体重40kg及以上的受试者以每周900mg的剂量施用四次，随后在第5周以1200mg的剂量施用，并且此后以每两周1200mg的剂量施用；
(b)对体重30kg至小于40kg的受试者以每周600mg的剂量施用两次，随后在第3周以900mg的剂量施用，并且此后以每两周900mg的剂量施用；
(c)对体重20kg至小于30kg的受试者以每周600mg的剂量施用两次，随后在第3周以600mg的剂量施用，并且此后以每两周600mg的剂量施用；
(d)对体重10kg至小于20kg的受试者以每周600mg的剂量施用一次，随后在第3周以300mg的剂量施用，并且此后以每两周300mg的剂量施用；或者
(e)对体重5kg至小于10kg的受试者以每周300mg的剂量施用一次，随后在第2周以300mg的剂量施用，并且此后以每三周300mg的剂量施用；并且
其中受试者在用CFD抑制剂治疗后12和/或24周表现出以下临床改善中的一种或多种：
iv.与受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；
v.输血非依赖性或避免输血；和/或
vi.与受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。
在另一个实施例中，提供了用于治疗受试者的PNH的方法，该方法包括：
向受试者施用治疗有效量的达尼科潘结合治疗有效量的
(依库珠单抗)，
其中将达尼科潘以100mg、150mg或200mg的剂量TID口服施用于受试者；
其中将
(依库珠单抗)以每周600mg的剂量静脉内施用于受试者，施用四次，随后在第5周以900mg的剂量施用，并且此后以每2周900mg的剂量施用；并且
其中受试者在用CFD抑制剂治疗后12和/或24周表现出以下临床改善中的一种或多种；
(a)与受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；
(b)输血非依赖性或避免输血；和/或
(c)与受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。
在另一个实施例中，提供一种用于治疗小于18岁的受试者的PNH的方法，该方法包括：向受试者施用治疗有效量的达尼科潘结合治疗有效量的
(依库珠单抗)，
其中将达尼科潘以100mg、150mg或200mg的剂量TID口服施用于受试者；
其中将
(依库珠单抗)静脉内施用：
(a)对体重40kg及以上的受试者以每周900mg的剂量施用四次，随后在第5周以1200mg的剂量施用，并且此后以每两周1200mg的剂量施用；
(b)对体重30kg至小于40kg的受试者以每周600mg的剂量施用两次，随后在第3周以900mg的剂量施用，并且此后以每两周900mg的剂量施用；
(c)对体重20kg至小于30kg的受试者以每周600mg的剂量施用两次，随后在第3周以600mg的剂量施用，并且此后以每两周600mg的剂量施用；
(d)对体重10kg至小于20kg的受试者以每周600mg的剂量施用一次，随后在第3周以300mg的剂量施用，并且此后以每两周300mg的剂量施用；或者
(e)对体重5kg至小于10kg的受试者以每周300mg的剂量施用一次，随后在第2周以300mg的剂量施用，并且此后以每三周300mg的剂量施用；并且
其中受试者在用CFD抑制剂治疗后12和/或24周表现出以下临床改善中的一种或多种：
i.与受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；
ii.输血非依赖性或避免输血；和/或
iii.与受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。
在一些实施例中，本文所述的这些方法还包括在基线和治疗后12和/或24周时确定受试者的血红蛋白水平、输血状态、和/或FACIT疲劳量表分数，其中(a)与受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；(b)输血非依赖性或避免输血；和/或(c)与受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，FACIT疲劳量表分数增加10分或更多是治疗的指示。
VI.结果
本文提供了用于治疗患者的PNH的方法。PNH的症状包括但不限于苍白、疲劳(例如，疲倦、日常活动困难、注意力难集中、头晕、虚弱)、疼痛(例如，胃痛、腿痛或肿胀、胸痛、背痛)、尿液呈深色、呼吸急促、吞咽困难、皮肤和/或眼睛发黄、贫血、细胞减少、***功能障碍、血凝块、肾脏疾病、器官损害、中风或心脏病发作。
根据本文所披露的这些方法治疗的患者经历至少一种PNH体征的改善。治疗可产生至少一种选自由以下组成的组的治疗效果，例如，苍白、疲劳、黄疸、贫血、细胞减少、腹痛、呼吸困难、吞咽困难、胸痛或***功能障碍减轻或停止。
在一些实施例中，受试者在根据本文所述的这些方法治疗后表现出一种或多种其他临床改善。例如，在一个实施例中，在治疗后，与受试者的基线血红蛋白水平相比，受试者表现出2.0g/dL或更高的血红蛋白增加。在一些实施例中，在治疗12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30周后，与受试者的基线血红蛋白水平相比，受试者表现出2.0g/dL或更高的血红蛋白增加。在一些实施例中，在治疗24周后，与受试者的基线血红蛋白水平相比，受试者表现出2.0g/dL或更高的血红蛋白增加。
在一些实施例中，在治疗后，受试者表现出输血非依赖性。在一些实施例中，在治疗12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30周后，受试者表现出输血非依赖性。在一些实施例中，在治疗24周后，受试者表现出输血非依赖性。在一些实施例中，在治疗后，受试者表现出避免输血。在一些实施例中，在治疗12周后，受试者表现出避免输血。
在一些实施例中，在治疗后，与受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，受试者表现出FACIT疲劳量表分数增加10分或更多(例如，10、11、12)。在一些实施例中，在治疗12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30周后，受试者表现出FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。在一些实施例中，在治疗12和/或24周后，受试者表现出FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。
在一些实施例中，在治疗后(例如，12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30周后)，与受试者的基线血红蛋白水平相比，受试者表现出2.0g/dL的血红蛋白增加，并且表现出输血非依赖性。在一些实施例中，治疗12和/或24周后，与受试者的基线血红蛋白水平相比，受试者表现出血红蛋白增加2.0g/dL，并且表现出输血非依赖性。
在一些实施例中，治疗后(例如，治疗12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30周后)，与受试者的基线血红蛋白水平相比，受试者表现出2.0g/dL的血红蛋白增加，并且表现出FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。在一些实施例中，治疗12和/或24周后，与受试者的基线血红蛋白水平相比，受试者表现出2.0g/dL的血红蛋白增加，并且表现出FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。
在一些实施例中，治疗后(例如，治疗12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30周后)，受试者表现出输血非依赖性或避免输血以及FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。在一些实施例中，治疗12或24周后，受试者表现出输血非依赖性或避免输血以及FACIT疲劳量表分数增加10分或更多
在一些实施例中，治疗后(例如，治疗12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30周后)，与受试者的基线血红蛋白水平相比，受试者表现出2.0g/dL的血红蛋白增加，并且表现出输血非依赖性或避免输血以及FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。在一些实施例中，治疗12或24周后，与受试者的基线血红蛋白水平相比，受试者表现出2.0g/dL的血红蛋白增加，并且表现出输血非依赖性或避免输血以及FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。
在一些实施例中，治疗使得胆红素向正常水平转变(例如，从约0.2-1.2mg/dL)。
在一些实施例中，与基线相比，治疗使得网织红细胞减少(例如，减少2、3、4或5倍)。
在一些实施例中，与基线相比，治疗使得PNH特异性红细胞克隆大小增加(例如，增加2、3、4或5倍)。
在一些实施例中，与基线相比，治疗使得用C3片段调理的PNH红细胞减少(例如，减少2、3、4或5倍)。
在一些实施例中，与基线相比，治疗使得对输血的需求减少。
在一些实施例中，治疗使得避免输血。
在一些实施例中，治疗产生末端补体抑制。
在一些实施例中，治疗使选自由以下组成的组的至少一个或多个溶血相关血液生物标志物向正常水平转变：游离血红蛋白、触珠蛋白、网织红细胞计数、PNH红细胞(RBC)克隆和/或D-二聚体。
在一些实施例中，可以使用乳酸脱氢酶(LDH)水平来评估对疗法的反应性(例如，通过乳酸脱氢酶(LDH)水平评估的溶血减少指示PNH的至少一种体征得到改善)。LDH是血管内溶血的标志物(Hill,A.等人，Br.J.Haematol.[英国血液学杂志]，149:414-25,2010；Hillmen，P.等人，N.Engl.J.Med.[新英格兰医学杂志]，350:552-9，2004；Parker,C.等人，Blood[血液]，106:3699-709，2005)。红血细胞含有大量的LDH，并且在体外(Van Lente,F.等人，Clin.Chem.[临床化学],27:1453-5,1981)和体内(Kato,G.等人,Blood[血液],107:2279-85,2006)无细胞血红蛋白与LDH浓度之间的相关性已有报导。溶血的后果与贫血无关(Hill,A.等人,Haematologica[血液学],93(s1):359Abs.0903,2008；Kanakura,Y.等人,Int.J.Hematol.[国际血液学杂志],93:36-46,2011)。在基线时以及随后在整个治疗期中连续获得的LDH浓度是溶血的重要量度。LDH高出正常上限≥1.5倍(LDH≥1.5×ULN)的PNH患者的无细胞血浆血红蛋白基线水平明显升高，并且LDH与无细胞血浆血红蛋白之间存在显著相关性(Hillmen,P.等人，N.Engl.J.Med.[新英格兰医学杂志]，355:1233-43，2006)。正常LDH值范围是105-333IU/L(国际单位/升)。
LDH水平可以使用任何适合的测试或测定来测量，例如Ferri FF编辑的Ferri'sClinical Advisor[Ferri临床诊疗指南]2014.Philadelphia:Pa:Elsevier Mosby；2014:Section IV-Laboratory tests and interpretation of results[第四节-实验室测试和结果解释]中所描述的那些。LDH浓度可以在从患者获得的各种样品中，特别是在血清样品中测量。如本文所用，术语“样品”是指来自受试者的生物材料。尽管血清LDH浓度很值得关注，但是样品可以来自其他来源，包括例如单个细胞、多个细胞、组织、肿瘤、生物流体、生物分子或前述任一种的上清液或提取物。实例包括为进行活组织检查而取出的组织、在切除过程中取出的组织、血液、尿液、淋巴组织、淋巴液、脑脊髓液、粘液和粪便样品。所使用的样品可以根据测定法的形式、检测方法以及要测定的肿瘤、组织、细胞或提取物的性质而有所不同。用于制备样品的方法是本领域已知的，并且可以容易地进行调整以获得与所用方法相容的样品。
在一些实施例中，根据所披露的方法治疗的患者的LDH水平降低至接近正常水平或降低至比视为正常水平的值低10％、20％、30％、40％或50％的范围内(例如，在105-333IU/L(国际单位/升)范围内)。在一些实施例中，在整个治疗维持期间，患者的LDH水平标准化。在一些实施例中，所治疗患者的LDH水平在治疗维持期间的至少95％的时间里标准化。在一些实施例中，所治疗患者的LDH水平在治疗维持期间的至少90％、85％或80％的时间里标准化。在一些实施例中，在起始治疗之前，患者的LDH水平高出正常上限≥1.5倍(LDH≥1.5×ULN)。
在一些实施例中，治疗使得主要不良血管事件(MAVE；例如，血栓性静脉炎/深静脉血栓形成、肺栓塞、心肌梗塞、短暂性脑缺血发作、不稳定性心绞痛、肾静脉血栓形成/肾动脉血栓形成/肾小球血栓形成、肾梗死、急性外周血管闭塞、肠系膜/内脏静脉/动脉血栓形成或梗塞、肝/门静脉血栓形成、脑动脉闭塞/脑血管意外、脑静脉闭塞、肾动脉血栓形成或多发梗塞性痴呆)减少。
在一些实施例中，治疗使慢性疾病相关生物标志物向正常水平转变，该生物标志物选自由以下组成的组：估算的肾小球滤过率(eGFR)和现场尿液:白蛋白:肌酐和血浆脑利尿钠肽(BNP)。
在一些实施例中，如通过第4版和欧洲癌症研究与治疗组织(EuropeanOrganisation for Research and Treatment of Cancer)的生命质量30项核心问卷量表(Quality of Life Questionnaire-Core 30Scale)评估，该治疗使生命质量相对于基线变化。
VII.试剂盒
本文还提供了用于治疗PNH的试剂盒。试剂盒任选地还可以包括说明书，该说明书例如包含施用时间表，以允许从业者(例如，医师、护士或患者)施用其中包含的(多种)组合物，由此将该(多种)组合物施用于患有PNH的患者。试剂盒还可以包括注射器。
可选地，试剂盒包括(多种)单剂量药物组合物的多个包装，每个包装包含用于根据上文提供的这些方法施用的有效量的CFD抑制剂和/或抗C5抗体。用于施用(多种)药物组合物所需的仪器或设备也可以包括在试剂盒中。例如，试剂盒可以提供一个或多个含有有效量的CFD抑制剂和/或抗C5抗体的预填充注射器。
在一些实施例中，试剂盒包括：(a)补体因子D(CFD)抑制剂的剂量和(b)有关在本文所述的这些方法的任一项中使用CFD的说明书。在一些实施例中，试剂盒包括：(a)补体因子D(CFD)抑制剂的剂量；(b)抗C5抗体的剂量；以及(c)有关在本文所述的这些方法的任一项中使用CFD和抗C5抗体的说明书。在一些实施例中，CFD是达尼科潘。在一些实施例中，抗C5抗体是依库珠单抗(例如，
)或瑞利珠单抗
以下实施例仅是示例性的，并且不应以任何方式解释为限制本披露的范围，因为在阅读了本披露之后，许多变化和等效内容对于本领域技术人员来说将是显而易见的。本申请通篇所引用的所有参考文献、Genbank条目、专利以及公布的专利申请的内容均清楚地以引用的方式并入本文。
实例
实例1：达尼科潘(ACH 4471)在对
单一疗法不充分应答的阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)患者中的2期开放标记研究
在2018年6月至2019年9月期间，对
(依库珠单抗)单一疗法不充分应答的PNH患者进行了2期临床研究。具体来说，研究的目的是评估添加因子D抑制剂达尼科潘对PNH患者(对
(依库珠单抗)次优应答)的输血需求的影响。
A.方法
1.患者
除了继续图1所示的其当前
(依库珠单抗)方案外，基于对200mg TID的应答进行剂量递增，12名高达65岁且对
(依库珠单抗)表现出次优应答(即血红蛋白[Hgb]<10g/dL和输血依赖性[筛查≤12周进行≥1次RBC输注])的成年PNH患者每日三次(TID)口服100-150mg的达尼科潘(ACH-4471；ACH-0144471)。关键纳入和排除标准见表2。
表2：关键纳入和排除标准
具体来说，患者以100mg或150mg的起始剂量每日三次口服达尼科潘，并被指示每日大约相同的时间服用这些剂量，并且间隔尽可能接近8小时。所有剂量均在用餐或吃完点心后约15-30分钟服用。基于安全性和血红蛋白值，每日三次将剂量递增到最大200mg，并且允许在第12周期间每隔4周增加50mg。如果患者在第12周之前还没有达到每日三次的最大剂量200mg，如果临床有指示，则允许递增。在整个研究过程中，患者继续使用其先前存在的
(依库珠单抗)方案。在24周治疗期间，不允许将
(依库珠单抗)转换为另一种C5抑制剂。完成具有临床益处的治疗的患者进入了长期扩展阶段。
2.终点
本研究的主要目标是基于第24个治疗周(TW)时Hgb相对于基线的增加，评估达尼科潘及其
(依库珠单抗)护理标准的疗效。次要目标包括与达尼科潘治疗前24周相比，24周达尼科潘治疗期间输注的RBC单位减少，以及在24周达尼科潘治疗期间RBC输注非依赖型患者百分比，以及TW24时乳酸脱氢酶(LDH)相对于基线变化。附加终点包括使用FACIT疲劳测试仪评估的达尼科潘对补体生物标志物和疲劳评估的影响，其中该测试仪的总分范围为0至52分，较高的分数表示改善(参见，例如，Cella D等人，Cancer[癌症].2002；94(2):528-538)。测定了达尼科潘的一般安全性、耐受性、药代动力学和药效学。在完成治疗24周后，患者进入了长期扩展期。
3.药代动力学和药效学方法
血浆达尼科潘浓度通过蛋白质沉淀测定：向75μL血浆等分试样(K2EDTA作为抗凝剂)中加入含有0.15％甲酸的乙腈溶液，然后使用用于量化的氘化内标物在正电离模式下进行液相色谱法/串联质谱测定法。分别监测了达尼科潘和内标物的580.2至360.2amu和587.2至362.2amu的离子跃迁。
通过AP溶血测定测量血清AP活性来确定药效学。也监测血清CP活性、血浆Bb浓度、血清FD、和C3浓度。补体试验由一个中心实验室使用商业试剂盒进行，但AP溶血测定除外，该测定在内部进行，用于探索目的。在每次AP溶血运行中，除了患者血清样品外，还包括单个正常人血清样品，因此可以将单个患者血清样品的溶血值标准化为正常人血清样品的溶血值。最后，使用FITC缀合抗人C3d抗体的流式细胞术测量红细胞上PNH克隆大小和C3片段沉积。
4.统计方法
提供描述性统计数据用于生化、生命质量测量和输血数据。连续变量用平均值、中值、最小值和最大值进行总结。分类变量，例如输血非依赖性变量，用计数和百分比进行总结。未估算缺失值。
输血频率和输血量分别经由年化率和单位进行评估。治疗前输血频率的平均强度率通过将筛查前52周内的输血事件数加上从筛查到给药第1天的10名患者的输血次数，再将该总和除以患者的总暴露时间来计算。用同样的方法计算治疗后24周的平均强度率。这两种强度率的比率(后与前)用于量化治疗效果。为了对比两种强度率(治疗后与治疗前)进行标准统计分析。输血量的减少通过使用相同程序的年化输血单位进行评估。
B.结果
1.患者特征
12名患者被纳入研究，并接受了至少一个剂量的达尼科潘。一名患者在服用2剂达尼科潘后因不太可能与达尼科潘相关的潜在病情恶化(肺高压/水肿)的严重不良事件而停止服用。该患者先前存在肺高压(瓣膜性高血压以及由于他们的PNH)，并且在开始研究药物的前几天，他们的心脏药物已经改变。严重不良事件被认为不太可能与研究药物有关，并且患者的数据被排除在该分析之外。
11名患者完成了治疗。治疗方案见表3。结果见表4。中位年龄为42.5岁，并且给药前平均C5治疗持续时间为36个月。所有患者均采用稳定的
(依库珠单抗)方案，其中8名患者每14天静脉内注射批准剂量900mg。两名患者服用1200mg的
(依库珠单抗)，并且一名患者每14天服用1500mg。
尽管采用了稳定的
(依库珠单抗)疗法，但患者入院时LDH水平略有升高。患者贫血，平均Hgb为7.9mg/dL(SD±1.5g/dL)，并且除一名患者外，所有患者都有RBC输血史，在筛查前24周的时间内平均输血3.4次(平均5.8个单位)。没有输血史的患者由于宗教异议不接受输血；她开始时基线Hgb为5.0g/dL(患者A，表4)，并诊断为遗传性椭圆形红细胞增多症。
表3：治疗方案
表4：基线、第12周和第24周的关键临床参数
F-雌性；Hgb-血红蛋白；IV-静脉内；LDH-乳酸脱氢酶；M-雄性；PNH-阵发性睡眠性血红蛋白尿；q14d-每14天；RBC-红细胞；TID-每日三次。
*基于慢性病治疗功能评估(FACIT)-疲劳量表V4的分数。分数范围0-52。分数小于30表示严重疲劳。
§N＝7；对于四名患者，样品超出稳定性范围。
$几何平均值(范围)
2.研究处置
九名患者起始每8小时服用100mg达尼科潘，并且两名患者起始每8小时服用150mg达尼科潘。在起始服用100mg的患者中，一名患者每8小时滴定200mg，并且六名患者每8小时滴定150mg，其中两名滴定150mg的患者在试验结束时每8小时滴定200mg。在整个研究过程中，所有患者均维持其
(依库珠单抗)方案，但美国有一名患者因Hgb改善，在第16周之前，其保险公司将其
(依库珠单抗)剂量降低(从1200mg降至900mg)。一名患者在服用2剂达尼科潘后因上述不太可能与达尼科潘相关的严重不良事件而停止服用，剩下11名患者在治疗时达到主要终点，并纳入最终分析。
3.药代动力学
在第7周对11名患者进行的密集药代动力学采样日期间，在稳定状态下，达尼科潘的Cmax、Tmax和AUC(0-8hr)的平均值(％CV)分别为432(37)ng/mL、2.14(33)hr和1806(37)ng·hr/mL。在这些密集采样日期间，平均(％CV)C谷值为105(57)ng/mL。在较少控制的条件下，在研究持续时间的剩余时间内进行采样，得到150(59)ng/mL的平均(％CV)C谷值。这些结果与健康志愿者研究中观察到的达尼科潘的药代动力学值一致。
4.临床疗效
如表4所示，在PNH的多个实验室标志物中观察到了益处。治疗24周时Hgb平均增加2.4g/dL。在大多数患者中，这种对血红蛋白的治疗效果在第2周出现，并在研究期间被维持。
除了观察到接受达尼科潘的患者血红蛋白升高外，在24周的治疗期间，还证明了RBC输血需求的临床意义降低，如图2所示。在十名有52周输血史的患者中，截至筛查时间以及筛查和给药日之间的时间(第1天)，基于历史数据，共输血57次，共101单位的浓缩红细胞(PRBC)。注意，一名患者(患者A)被排除在分析之外，因为因宗教异议，患者拒绝输血。自开始使用达尼科潘治疗以来，只有一名患者在第24周接受了单次输血，总共2个单位，这是在因肺炎住院期间施用的，研究人员认为这与达尼科潘无关。输血事件年化率的平均值为5.234(施用达尼科潘前)和0.217(施用达尼科潘后)，比率(施用达尼科潘后与施用达尼科潘前)为0.042(95％ CI＝0，0.176；p＝0.0001)，表明施用达尼科潘后输血频率在统计学上有非常显著的95.8％降低(见图3)。年化输血单元的平均值为9.27(施用达尼科潘前)和0.43(施用达尼科潘后)，比率(施用达尼科潘后与施用达尼科潘前)为0.047(95％ CI＝0，0.224；p＝0.0019)，这也反映了由于添加了达尼科潘，输血单位的数量非常显著地减少(见图3)。
除了血红蛋白和输血需求的改善外，还观察到临床相关参数的改善(表4)。在研究中，接受达尼科潘治疗的患者在LDH方面比正常上限继续有进一步的改善，并且绝对网织红细胞计数也有显著改善。研究中还观察到基线水平升高患者的总胆红素和直接胆红素测量值的降低。
该研究采用经验证的生命质量工具FACIT疲劳量表(第4版)。该自我报告工具以0至52的等级测量所经历的疲劳程度，其中小于30的分数表示严重疲劳，而较高的分数表示疲劳改善。3分变化在该量表上具有临床意义。10分或更高变化在该量表上是非常显著的。报告FACIT疲劳评分，与
(依库珠单抗)基线相比，24周时平均增加11分(表4)。观察到患者F(一名44岁女性受试者)的改善最大，从基线到第24周，患者改善了43分(即对比第24周的52分，基线时为9分)。这构成了本披露的上限。
在研究过程中监测补体生物标志物。血清FD和C3浓度在基线时是正常的，并且在达尼科潘治疗期间几乎没有变化(数据未显示)。CP活性的抑制在基线时接近完全，表明存在少量游离血清C5(图4A)。这在整个研究过程中一直存在。相比之下，在基线时用AP溶血测定检测残余AP活性，并在给药达尼科潘后降低(图4B)。同时，给药达尼科潘后血浆Bb水平也降低(图4C)。
与Hill等人先前的报告一致，评估了用
(依库珠单抗)治疗的PNH患者的C3调理作用，由于在存在C5抑制剂的情况下从血管内溶血中幸存下来的PNH RBC上的C3片段积累，在基线时用C3片段调理的PNH RBC的百分比(即，％C3d+PNH RBC)较高(几何平均值22％；范围6.3-80％)(参见，例如，Hill等人，Haematologica[血液学].2010；95:567-573)。添加达尼科潘显著降低了用C3片段调理的PNH RBC的百分比(几何平均值6.7％；在第24周范围为0.1％-57％)(图4D)。同时，PNH RBC的克隆大小从基线时的54±24.9％增加到第24周时的84±22.1％(平均值±SD)，接近PNH粒细胞的克隆大小，其在基线时较高(平均值±SD：92±9.2％)，并且在研究过程中保持较高(平均值±SD：第24周的95±7.2％)(图4D)。
5.安全性
达尼科潘的耐受性一般良好。表5中列出了至少2名患者报告的治疗突发不良事件(TEAE)，并且96％的治疗TEAE的严重程度为轻度至中度。没有因TEAE而中断。
除以下2名患者外，所有事件的严重程度均被视为轻度至中度。一名患者在第70天出现3级直接胆红素升高，与1级ALT升高同时发生。在基线和筛查期间，该患者在这些参数上的升高相似。到第77天，两种不良事件均得到解决。达尼科潘的剂量暂时减少，并且然后在事件解决后重新递增。该患者完成了研究。研究人员认为这些事件是由突破性溶血引起的，因为相关的LDH大约加倍，并且Hgb降低0.8mg/dL。
第二名患者在第145天经历了严重的肺炎不良事件，需要住院治疗，并在第152天恢复。该事件由病毒性支气管炎演变而来。该患者也有嗜中性白血球减少症病史。该患者在独立于试验中心的机构住院期间接受了2单位PRBC的输血。与研究药物的关系被认为不太可能。达尼科潘剂量没有改变，并且患者完成了研究。
表5：安全性
| 由超过10％的患者报告的MedDRA优选术语 | n(％) |
| 报告TEAE的患者数量 | 11(100) |
| 头痛 | 3(27) |
| 腹痛 | 2(18) |
| 挫伤 | 2(18) |
| 咳嗽 | 2(18) |
| 疲劳 | 2(18) |
| 鼻咽炎 | 2(18) |
| 恶心 | 2(18) |
| 口咽 | 2(18) |
| 四肢疼痛 | 2(18) |
C.总结
使用
(依库珠单抗)或
(瑞利珠单抗)的C5抑制(目前的护理标准)是PNH患者的有效治疗方法。虽然这种治疗方法控制了血管内溶血并显著改善了总体生存率，但许多患者仍然贫血，并且一些患者可能由于持续性血管外溶血而继续依赖输血。
在上述临床试验中，在这些严重贫血患者(主要是由于血管外溶血(EVH))的背景
(依库珠单抗)疗法中加入达尼科潘时，可使Hgb平均增加2.4克，并在临床和统计上显著减少RBC输血需求。当患者在
(依库珠单抗)疗法的背景下进行此试验时FACIT疲劳分数平均增加11分是明显且非常显著的。国际PNH注册中心显示，疲劳是未治疗患者最常见的患者报告症状之一，约80％的患者在过去六个月内报告疲劳(参见，例如，Schrezenmeier H.等人，Haematologica[血液学]，2014；99(5)：922-929)。对于贫血患者，如那些癌症患者和PNH患者，通常使用FACIT疲劳量表评估疲劳。采用
(依库珠单抗)单一疗法的治疗改善了PNH患者的疲劳水平，通过FACIT疲劳进行测量，如标志性试验SHEPHERD和TRIUMPH所示，其中分数分别比基线显著增加12.2分和6.4分(参见，例如，Brodsky RA等人，Blood[血液].2008；111(4):1840-1847和Hillmen P等人，N.Engl.J.Med.[新英格兰医学杂志]2006；355:1233-1243)。在本次试验中，在持续贫血的患者中，在
(依库珠单抗)中添加达尼科潘，不仅使血红蛋白升高了2g/dL以上，而且还表明添加达尼科潘可能对患者生命质量的潜在影响。
在本研究中，在
(依库珠单抗)中添加达尼科潘几乎消除了大多数患者的输血需求。有一名被纳入试验的患者由于宗教异议没有输血史。试验时，她对
(依库珠单抗)的基线血红蛋白为5g/dL。在她的
(依库珠单抗)疗法中加入达尼科潘使她的血红蛋白在24周时升高3g/dL以上，并显著改善了她的疲劳。她还被诊断为遗传性椭圆形红细胞增多症，这是另一种溶血性贫血，但达尼科潘对其无影响。
胆红素和网织红细胞也有显著改善。与基线相比，第24周总胆红素进入正常范围，而网织红细胞计数在第24周降至接近正常。附加地，PNH红细胞克隆大小接近PNH粒细胞的大小，这表明添加达尼科潘进一步保护PNH RBC免受溶血。从基线到第24周，用C3片段调理的PNH RBC的百分比下降，这支持达尼科潘的上游AP作用机制。所有这些表明，采用达尼科潘预防C3介导的血管外溶血，同时保持对MAC介导的血管内溶血的控制。
总之，除了
(依库珠单抗)的护理标准外，在治疗PNH的过程中，还与达尼科潘建立了概念证明。达尼科潘的耐受性一般良好，并在Hgb、输血需求、FACIT疲劳和其他相关参数方面有显著改善。这表明，在接受
(依库珠单抗)的护理标准的患者中，通过用达尼科潘阻断因子D的AP，可以获得进一步的益处。这种益处可能是由于预防C3介导的血管外溶血，同时控制血管内溶血带来的。达尼科潘针对PNH未满足的需求。
实例2：作为C5抑制剂的附加疗法，对达尼科潘在阵发性睡眠性血红蛋白尿的患者的临床上明显的血管外溶血(EVH)的第3期研究
对患有临床上明显的血管外溶血(EVH)的成年PNH患者(18岁以上)进行第3期临床研究，其基本上符合所述方案，其全部公开内容通过引用并入本文。
A.目标
本研究的主要目标是在12周时评估达尼科潘(也称为“ALXN2040”和ACH 4471)作为C5抑制剂(即
或
)的附加疗法与口服(片剂)安慰剂相比的疗效。主要终点是与安慰剂相比，在使用达尼科潘治疗12周后血红蛋白(Hgb)相对于基线的变化。
关键次要目标包括评估避免输血的患者比例、慢性病治疗功能评估(FACIT)疲劳分数相对于基线的变化、以及绝对网织红细胞计数相对于基线的变化。
评估：(1)与安慰剂相比，作为C5抑制剂的附加疗法，达尼科潘在12周时对避免输血的影响(即，避免输血(TA)的患者比例被定义为在第12周内保持不输血且不需要根据方案规定的指导方针进行输血的患者)；(2)与安慰剂相比，作为C5抑制剂的附加疗法，达尼科潘对治疗12周时FACIT疲劳分数的影响(即，第12周时FACIT疲劳分数相对于基线的变化)；以及(3)与安慰剂比较，作为C5抑制剂的附加疗法，达尼科潘对绝对网织红细胞计数的影响(即，第12周时绝对网织细胞计数相对于基线的变化)。
附加目标包括评估：(1)作为C5抑制剂的附加疗法，达尼科潘对接受达尼科潘治疗24周的那些患者在24周时的输血需求的影响
(即，与使用达尼科潘治疗开始前24周相比，用达尼科潘治疗24周期间输血的红细胞(RBC)单位数和输血实例的变化、以及治疗24周后避免输血的患者的百分比)；(2)与安慰剂相比，作为C5抑制剂的附加疗法，达尼科潘对12周时输血需求的影响(即，与接受安慰剂治疗的12周相比，使用达尼科潘治疗的12周内输血的RBC单位数和输血实例的变化)；(3)作为C5抑制剂的附加疗法，达尼科潘对治疗24周后的FACIT疲劳分数的影响(即，所有患者在第24周时的FACIT疲劳分数相对于基线的变化)。进一步的目标包括评估：(1)作为C5抑制剂的附加疗法，达尼科潘对血红蛋白稳定化的影响(即，在接受达尼科潘治疗24周的患者中，在过去的治疗12周内血红蛋白稳定化患者的百分比)和(2)与PNH患者相关的其他实验室标志物(即，与安慰剂相比，用达尼科潘治疗12周时患者的总胆红素和直接胆红素相对于基线的变化、PNH RBC克隆大小的变化、C3片段在PNH RBC上的沉积、以及与安慰剂相比，用达尼科潘治疗12周时替代途径活性的测量结果、12周时乳酸脱氢酶(LDH)和经典途径活性的变化、以及在12周和24周时血红蛋白标准化的患者的百分比)。
探索性目标包括评估治疗24周期间患者报告的结果(PRO)和其他与健康相关的生命质量(QoL)的测量结果(即，第12周时，与安慰剂相比，第三阶段EuroQoL5维度(EQ-5D-3L)分数相对于基线的变化；第24周时EQ-5D-3L分数相对于基线的变化；第12周时，与安慰剂相比，欧洲癌症研究与治疗组织(European Organisation for Research and Treatment ofCancer(EORTC))生命质量30项核心问卷量表(Quality of Life Questionnaire-Core30Scale(QLQ-C30))相对于基线的变化；第24周时，EORTC-QLQ-C30量表相对于基线的变化；与安慰剂相比，工作效率和活动障碍调查问卷相对于基线的变化：第12周时的总体健康状况(WPAI:SHP，V2.0)；第24周时WPAI:SHP分数相对于基线的变化；与安慰剂相比，第12周时的医疗资源利用率(HRU)相对于基线的变化；第24周时的HRU分数相对于基线的变化)。
安全目标包括评估：(1)作为C5抑制剂的附加疗法，用达尼科潘治疗24周的安全性和耐受性(即，在12周盲法和随后的12周开放标记治疗期间，治疗突发不良事件(TEAE)、严重不良事件(SAE)、实验室异常情况和导致研究药物停用的事件的发生率)，以及(2)在LTE期间，作为C5抑制剂的附加疗法，达尼科潘的安全性和耐受性(即，治疗突发不良事件(TEAE)、严重不良事件(SAE)、实验室异常情况和导致研究药物停用的事件的发生率)。
B.总体设计
这项多区域、随机、双盲、安慰剂对照、多剂量、第3期研究针对使用C5抑制剂(依库珠单抗或瑞利珠单抗)，研究对象为临床上明显的EVH的PNH患者。这项研究包括大约84名患者，他们根据常规剂量和时间表正在接受C5抑制剂疗法。这些患者被纳入研究，并用达尼科潘或安慰剂(比率为2:1)进行治疗。
随机分组按输血史分层(即筛查后6个月内输血>2或≤2次)和Hgb(即<8.5g/dL和≥8.5g/dL)和日本患者(定义为从日本纳入研究的患者)/非日本患者。除了其C5抑制剂疗法(依库珠单抗或瑞利珠单抗)外，将患者随机分为每日三次施用达尼科潘(tid)或每日三次施用安慰剂，比率为2:1，持续12周(治疗期1)。在第12周，随机接受安慰剂治疗的患者再转换为接受额外12周的达尼科潘治疗(治疗期2)，并且随机接受达尼科潘治疗的患者继续接受12周附加的达尼科潘治疗，同时继续进行C5抑制剂疗法。在治疗期(第24周)结束时，患者可以进入长期扩展(LTE)期，并继续接受达尼科潘加其C5抑制剂疗法。
在本研究中，患者已经接受C5抑制剂疗法一段时间足以充分受益于该疗法，但仍然贫血。单独使用C5抑制剂的长期疗法预计不会对其临床应答产生附加影响。在筛查就诊前52周，捕获历史输血需求和输血前血红蛋白水平。这些历史数据用于评估在本研究中联合疗法的疗效和安全性。
在输血后不早于4周进行筛查就诊，以尽量减少输血对用于分层目的的筛查Hgb水平的影响。对患者进行疫苗接种史评估。在起始研究药物之前的3年内或在起始研究药物时，所有患者均接种了针对脑膜炎球菌感染的疫苗。在接受脑膜炎球菌疫苗后不到2周开始研究药物治疗的患者必须接受适当的预防性抗生素治疗直至接种后2周。
达尼科潘或安慰剂的起始剂量为150mg，每日三次。任何丙氨酸氨基转移酶或直接胆红素筛查值>1.5×正常上限(ULN)的患者以每日三次100mg的给药。具有吉尔伯特综合征证明文件的患者每日三次以150mg的推荐起始剂量开始治疗。在任何随后递增到下一剂量水平之前，每个剂量水平至少需要4周的治疗。基于安全性和临床效果，在方案规定的时间点(第4周、第8周和第12周)，剂量可按50mg的增量递增到最多200mg，每日三次。在第12周就诊后获得的所有剂量递增均以患者为基础进行。治疗期2的最大剂量为200mg，每日三次。在研究的前24周，患者不能从第1天的C5抑制剂转换为任何其他C5抑制剂，但可以在LTE期间这样做。
在研究期间，C5抑制剂+安慰剂组以与C5抑制剂+达尼科潘组相同的方式递增剂量，以保持盲法。第12周后，C5抑制剂+安慰剂组在治疗期2期间将安慰剂转换为接受达尼科潘治疗。
所有患者在治疗期间和LTE期间返回门诊进行安全性和其他评估，如实例3的表6-8所示。治疗期2(24周)结束后，患者可进入LTE期长达1年，达尼科潘剂量与第24周时他们接受的剂量相同，再加上其C5抑制剂疗法。在LTE期间，患者的剂量可以递增到最多200mg，每日三次。
如果患者停止研究，则在6天内逐渐减少达尼科潘或安慰剂的剂量(第1次和第2次减量就诊)，并在最后一次服用研究药物后约14天和28天进行两次随访就诊。患者继续接受其C5抑制剂疗法，剂量和间隔与减量就诊和随访就诊期间相同。
除其C5抑制剂疗法外，将患者随机分为接受达尼科潘治疗或安慰剂治疗，比率为2:1，持续12周(治疗期1)。在第12周，随机接受安慰剂治疗的患者转换为接受额外12周的达尼科潘治疗(治疗期2)，并且随机接受达尼科潘治疗的患者继续接受12周附加治疗。在治疗期(24周)结束时，患者可以进入LTE期，相同剂量加上其C5抑制剂疗法。在任何时间点停止研究的任何患者都应接受6天的减量治疗，以及额外28天的随访。
在本研究中使用的C5抑制剂(依库珠单抗或瑞利珠单抗)被视为背景疗法。如果患者在完成治疗24周后从依库珠单抗转换为瑞利珠单抗，则以这种方式使用的新药物也被视为背景疗法，因为患者需要在研究开始前长时间服用稳定剂量和间隔的其C5抑制剂。
纳入研究需要以下标准：
1.PNH的诊断
2.临床上明显的血管外溶血(EVH)定义为：
·贫血(Hgb≤9.5g/dL)，绝对网织红细胞计数≥120×109/L。
·在研究开始前6个月内至少1次浓缩RBC或全血输注
3.在本研究第1天之前，以批准剂量(或更高剂量)接受C5抑制剂治疗至少6个月，并且在本研究第1天之前的224周内，剂量或间隔没有变化。对于最近从依库珠单抗转换为瑞利珠单抗的那些患者，他们必须在第1天之前至少接受负荷剂量和3次维持剂量(至少24周)的瑞利珠单抗。
4.血小板计数≥30,000/μL，无需血小板输注。
5.绝对嗜中性粒细胞计数≥750/μL。
6.脑膜炎奈瑟菌疫苗接种证明文件：在起始研究药物之前3年内或在起始研究药物时，所有患者都必须接种针对脑膜炎球菌感染的疫苗。在接受脑膜炎球菌疫苗后不到2周开始研究药物治疗的患者必须接受适当的预防性抗生素治疗直至接种后2周。
7.年龄18岁或以上(或根据当地法律要求大于或等于最低成人年龄)
8.有生育潜力的女性患者必须同意从签署知情同意书之日起至其最后一次服用研究药物后30天内使用高效或可接受的避孕方法。有生育潜力的女性患者还必须在筛查期间进行阴性血清妊娠试验，并在第1天进行阴性尿液妊娠试验。
9.有经文件证明证据的非生育潜力的女性患者无需采用避孕方法。
10.非不育男性患者必须同意从给药的第一天到其最后一次服用研究药物后90天，与(多个)具有生育潜力的伴侣一起使用高效或可接受的避孕方法。手术不育的男性无需采用额外避孕。男性必须同意在纳入在本研究中以及其最后一次服用研究药物后90天内不捐献***。
11.能够签署知情同意书，包括遵守知情同意书和本方案中列出的要求和限制。
12.必须获得紧急医疗护理。
基于以下标准将患者排除在研究之外：
1.主要器官移植史(例如，心脏、肺、肾、肝)或造血干细胞移植史(HSCT)。
2.患有已知再生障碍性贫血或其他骨髓衰竭的患者，需要HSCT或其他治疗，包括抗胸腺细胞球蛋白和/或免疫抑制剂
3.在研究开始前的30天内或研究药剂的5个半衰期内(以较大者为准)接受了除C5抑制剂(依库珠单抗或瑞利珠单抗)以外的另一种研究药剂。
1.已知或疑似补体缺乏。
2.首次施用研究药物前的14天内，发生主动细菌或病毒感染，连续两天测量体温>38℃，其他感染迹象，或有任何发热病史。
3.任何临床相关共发病的病史或存在会使患者不适合进行研究(例如，可能导致患者病情恶化，影响患者在研究期间的安全性，或混淆研究结果)。
4.筛查时的实验室异常情况，包括：
·ALP>2×ULN
·ALT>2×ULN
·直接胆红素>2×ULN(除非研究人员认为是由于血管外溶血)和吉尔伯特综合征患者可进入本研究；然而，需要吉尔伯特综合征的证明文件。如果胆红素升高提示吉尔伯特综合征，但患者无法提供证明文件；那么对患者进行这种情况的测试(详见下文)。
8.在主要研究人员看来，研究人员判断的任何其他临床重要实验室异常情况将使患者不适合进行研究或使患者处于不应有的风险中。
9.在研究期间或研究药物施用的90天内怀孕、哺乳或计划怀孕的女性。
10.胆汁淤积症的现有证据。
11.筛查时有人体免疫缺陷病毒、乙型肝炎、或活动性丙型肝炎感染的证据。
12.估算的肾小球滤过率(eGFR)<30mL/min/1.73m2和/或正在透析。
13.对试验药物(达尼科潘)或其任何赋形剂超过敏。
实例3：发起一项多区域、随机、双盲、安慰剂对照、多剂量、第3期研究针对使用C5抑制剂(依库珠单抗或瑞利珠单抗)，研究对象为临床上明显的EVH的PNH患者。这项研究包括大约84名患者，他们根据常规剂量和时间表正在接受C5抑制剂疗法。随机分组按输血史分层(例如，筛查后6个月内输血>2或≤2次)和Hgb(例如，<8.5g/dL和≥8.5g/dL)和日本患者(定义为从日本纳入研究的患者)/非日本患者。
除了其C5抑制剂疗法(依库珠单抗或瑞利珠单抗)外，将患者随机分为施用达尼科潘(tid)或施用安慰剂(tid)，比率为2:1，持续12周(治疗期1)。在第12周，随机接受安慰剂治疗的患者转换为接受额外12周的达尼科潘治疗(治疗期2)，并且随机接受达尼科潘治疗的患者将继续接受额外12周的达尼科潘治疗，同时继续进行C5抑制剂疗法。在治疗期(第24周)结束时，患者可以进入长期扩展(LTE)期，并继续接受达尼科潘+其C5抑制剂疗法。
在本研究中，PNH患者已经接受C5抑制剂疗法一段时间足以充分受益于疗法，但仍然贫血。单独使用C5抑制剂的长期疗法预计不会对其临床应答产生附加影响。在筛查就诊前52周，可以捕获历史输血需求和输血前血红蛋白水平。这些历史数据可以用于评估在本研究中联合疗法的疗效和安全性。
在输血后不早于4周进行筛查就诊，以尽量减少输血对将用于分层目的的筛查Hgb水平的影响。
将对患者进行疫苗接种史评估。在起始研究药物之前3年内或在起始研究药物时，所有患者都必须接种针对脑膜炎球菌感染的疫苗。在接受脑膜炎球菌疫苗后不到2周开始研究药物治疗的患者必须接受适当的预防性抗生素治疗直至接种后2周。
达尼科潘或安慰剂的起始剂量为150mg tid。任何丙氨酸氨基转移酶或直接胆红素筛查值>1.5×正常上限(ULN)的患者将以100mg tid的给药剂量开始治疗。具有吉尔伯特综合征证明文件的患者以150mg tid的推荐起始剂量开始治疗。在任何随后递增到下一剂量水平之前，每个剂量水平将至少需要4周的治疗。基于安全性和临床效果，在方案规定的时间点(第4、8和12周)，剂量可以按50mg的增量递增到最多200mg tid。在第12周就诊后获得的所有剂量递增均由主要研究人员在与实验委托人协商后以患者为基础进行。治疗期2的最大剂量为200mg tid。在研究的前24周，患者不可以从其第1天的C5抑制剂转换为任何其他C5抑制剂，但可以在LTE期间这样做。
在研究期间，C5抑制剂+安慰剂组以与C5抑制剂+达尼科潘组相同的方式递增剂量，以保持盲法。第12周后，C5抑制剂+安慰剂组在治疗期2期间将安慰剂转换为接受达尼科潘治疗。
所有患者将在治疗期间和LTE期间返回门诊进行安全性和其他评估，如表6至表8所示。
评估时间表
表6：评估时间表治疗期1：所有患者
AE＝不良事件；AP＝替代途径；APH＝AP溶血；CP＝经典途径；ECG＝心电图；FD＝因子D；FSH＝促卵泡激素；Hbs Ag＝乙型肝炎表面抗原；HCV＝丙型肝炎病毒；HIV Ab＝人体免疫缺陷病毒抗体；HRU＝医疗资源利用率；INR＝国际标准化率；PK＝药代动力学；PT＝凝血素时间；PTT＝部分促凝血酶原激酶时间；QoL＝生命质量；RBC＝红细胞；SAE＝严重不良事件。
1第1至12周的就诊窗口为±1天。患者可以随时停止研究，并应在最后就诊时完成24周的所有评估
2第4、8和12周是潜在的剂量递增时间点。
3如果出现剂量递增，应在递增后72至96小时，由就诊的医疗服务机构或门诊抽血测量丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、γ-谷氨酰转移酶和碱性磷酸酶。
4现场将在1至3天内致电患者，确认进行了就诊医疗评估，并评估AE、SAE和伴随药物。
5绝经后妇女的FSH。
6在施用任何疫苗或增强剂之前，接受疫苗接种或增强剂的有生育潜力的女性患者必须在疫苗接种当天进行阴性尿液妊娠试验。
7患者将获得足够的研究药物，以持续到其下一次就诊。在剂量递增就诊时，患者将返回门诊以被分配研究药物，并接受新的给药说明书。
8筛查和第1天进行全面体检。在所有其他时间点进行简单体检。
9患者将在每次门诊就诊时进行发热监测，并在就诊之间进行自我监测。
10患者必须在筛查、第1天和所有就诊医疗评估抽血前禁食8小时。
11患者在采血前24小时应避免剧烈运动。步行和轻度运动是可以接受的。
12筛查时进行血清妊娠试验。仅对有生育潜力的妇女进行尿液妊娠试验。在第1天，给药前尿液妊娠试验必须为阴性才能继续。任何阳性尿液妊娠试验将通过随访血清妊娠试验确认。
13根据门诊就诊时间，现场将获得给药前或给药后样品；应记录样品采集前的实际采样时间和最近的给药时间。样品应在进行FD、C3、CP活性样品采集的同时采集14参考PRO和QoL调查问卷。HRU将在第1天和第12周施用
表7：评估时间表治疗期2：所有患者
AE＝不良事件；AP＝替代途径；APH＝AP溶血；CP＝经典途径；ECG＝心电图；EORTC-QLQ30＝欧洲癌症研究与治疗组织(European Organisation for Research andTreatment of Cancer)生命质量30项核心问卷量表(Quality of Life Questionnaire-Core 30Scale)；ET＝提前终止；FD＝因子D；HRU＝医疗资源利用率；INR＝国际标准化率；PK＝药代动力学；PT＝凝血素时间；PTT＝部分促凝血酶原激酶时间；
QoL＝生命质量；RBC＝红细胞；SAE＝严重不良事件；WAPI:SHP＝工作效率和活动障碍调查问卷：特定健康问题。
1第13至24周的就诊窗口为±1天。
2如果出现剂量递增，应在递增后72至96小时，由就诊的医疗服务机构或门诊抽血测量丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、γ-谷氨酰转移酶和碱性磷酸酶。
3现场将在1至3天内致电患者，确认进行了就诊医疗评估，并评估AE、SAE和伴随药物。
4在施用任何疫苗或增强剂之前，接受疫苗接种或增强剂的有生育潜力的女性患者必须在疫苗接种当天进行阴性尿液妊娠试验。
5患者将获得足够的研究药物，以持续到其下一次就诊。在剂量递增就诊时，患者将返回门诊以被分配研究药物，并接受新的给药说明书。
6患者将在每次门诊就诊时进行发热监测，并在就诊之间进行自我监测。
7患者必须在第24周和所有就诊医疗评估抽血前禁食8小时。
8患者在采血前24小时应避免剧烈运动。步行和轻度运动是可以接受的。
9仅对有生育潜力的妇女进行尿液妊娠试验。
10根据门诊就诊时间，现场将获得给药前或给药后样品。应记录样品采集前的实际采样时间和最近的给药时间。样品应在进行FD、C3、CP活性样品采集的同时采集。
11参考PRO和QoL调查问卷—医疗资源利用率(HRU)、EORTC-QLQ30和WPAI:SHP仅在第24周收集
表8：评估时间表：长期扩展期、减量期和随访期
AE＝不良事件；AP＝替代途径；APH＝AP溶血；CP＝经典途径；FD＝因子D；F/U＝随访；INR＝国际标准化率；PT＝凝血素时间；PTT＝部分促凝血酶原激酶时间；QoL＝生命质量；RBC＝红细胞；SAE＝严重不良事件；T＝减量；VHA＝就诊医疗评估。
1访视窗为±7天。患者在采血前必须禁食8小时。现场将在1至3天内致电患者，确认采集样品，并评估AE、SAE和伴随药物。
2访视窗为±7天。
3如果出现剂量递增，应在递增后72至96小时，由就诊的医疗服务机构或门诊抽血测量丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、γ-谷氨酰转移酶和碱性磷酸酶。
4停止研究药物的任何患者将完成减量期和随访期。如果患者因任何原因退出研究，所有提前终止患者都应遵循第24周/ET就诊评估。
5患者将获得足够的研究药物，以持续到其下一次就诊。在剂量递增就诊时，患者将返回门诊以被分配研究药物，并接受新的给药说明书。
6患者将在每次门诊就诊时进行发热监测，并在就诊之间进行自我监测。
7将在第40、56和72周发放PRO和QoL调查问卷。
8患者在采血前24小时应避免剧烈运动。步行和轻度运动是可以接受的。
9任何阳性试验将通过随访血清妊娠试验确认。
10将在第40、56和72周进行试验
11根据门诊就诊时间，现场将获得给药前或给药后样品。应记录样品采集前的实际采样时间和最近的给药时间。样品应在进行FD、C3、CP活性样品采集的同时采集。
12F/U1：第2减量期完成后2周，将进行体检、生命体征评估、所有必要的安全实验室测试以及血样和尿样采集
13F/U2：最后一次服用研究药物后4周，将进行体检、生命体征评估、所有必要的安全实验室测试以及血样和尿样采集
治疗期2(第24周)结束后，患者可进入LTE期长达1年，达尼科潘剂量与第24周接受的剂量相同，再加上其C5抑制剂疗法。在LTE期间，根据主要研究人员的决定，并与实验委托人协商，患者可能会递增剂量，最多为200mg tid。
如果患者停止研究，则应该在6天内逐渐减少达尼科潘或安慰剂的剂量(第1次和第2次减量就诊)，并且将在最后一次施用研究药物后约14天和28天进行两次随访就诊。患者将继续接受其C5抑制剂疗法，其剂量和间隔与减量就诊和随访就诊期间相同。
干预组和持续时间：除其C5抑制剂疗法外，将患者随机分为接受达尼科潘治疗或安慰剂治疗，比率为2:1，持续12周(治疗期1)。在第12周，随机接受安慰剂治疗的患者将转换为接受额外12周的达尼科潘治疗(治疗期2)，并且随机接受达尼科潘治疗的患者将继续接受额外12周的治疗。在治疗期(24周)结束时，患者可以进入LTE期，相同剂量加上其C5抑制剂疗法。在任何时间点停止研究的任何患者都接受6天的减量治疗，以及额外28天的随访。
在本研究中使用的C5抑制剂(依库珠单抗或瑞利珠单抗)将被视为背景疗法。
纳入标准：
1.PNH的诊断
2.临床上明显的血管外溶血(EVH)定义为：
·贫血(Hgb≤9.5g/dL)，绝对网织红细胞计数≥120×109/L。
·在研究开始前6个月内至少1次浓缩RBC或全血输注
3.在本研究第1天之前，以批准剂量(或更高剂量)接受C5抑制剂治疗至少6个月，并且在本研究第1天之前的224周内，剂量或间隔没有变化。对于最近从依库珠单抗转换为瑞利珠单抗的那些患者，他们必须在第1天之前至少接受负荷剂量和3次维持剂量(至少24周)的瑞利珠单抗。
4.血小板计数≥30,000/μL，无需血小板输注。
5.绝对嗜中性粒细胞计数≥750/μL。
6.脑膜炎奈瑟菌疫苗接种证明文件：在起始研究药物之前3年内或在起始研究药物时，所有患者都必须接种针对脑膜炎球菌感染的疫苗。在接受脑膜炎球菌疫苗后不到2周开始研究药物治疗的患者必须接受适当的预防性抗生素治疗直至接种后2周。
7.年龄18岁或以上(或根据当地法律要求大于或等于最低成人年龄)
8.有生育潜力的女性患者必须同意从签署知情同意书之日起至其最后一次服用研究药物后30天内使用高效或可接受的避孕方法。有生育潜力的女性患者还必须在筛查期间进行阴性血清妊娠试验，并在第1天进行阴性尿液妊娠试验。
9.有经文件证明证据的非生育潜力的女性患者无需采用避孕方法。
10.非不育男性患者必须同意从给药的第一天到其最后一次服用研究药物后90天，与(多个)具有生育潜力的伴侣一起使用高效或可接受的避孕方法。
·手术不育的男性无需采用额外避孕。
·男性必须同意在纳入在本研究中以及其最后一次服用研究药物后90天内不捐献***。
11.能够签署知情同意书，包括遵守知情同意书和本方案中列出的要求和限制。
12.必须获得紧急医疗护理。
排除标准：
1.主要器官移植史(例如，心脏、肺、肾、肝)或造血干细胞移植史(HSCT)。
2.患有已知再生障碍性贫血或其他骨髓衰竭的患者，需要HSCT或其他治疗，包括抗胸腺细胞球蛋白和/或免疫抑制剂
3.在研究开始前的30天内或研究药剂的5个半衰期内(以较大者为准)接受了除C5抑制剂(依库珠单抗或瑞利珠单抗)以外的另一种研究药剂。
4.已知或疑似补体缺乏。
5.首次施用研究药物前的14天内，发生主动细菌或病毒感染，连续两天测量体温>38℃，其他感染迹象，或有任何发热病史。
6.任何临床相关共发病的病史或存在会使患者不适合进行研究(例如，可能导致患者病情恶化，影响患者在研究期间的安全性，或混淆研究结果)。
7.筛查时的实验室异常情况，包括：
·碱性磷酸酶>2×正常上限(ULN)
·丙氨酸氨基转移酶>2×ULN
·直接胆红素>2×ULN(除非研究人员认为是由于血管外溶血以及吉尔伯特综合征患者将允许进入本研究；然而，需要吉尔伯特综合征的证明文件。如果胆红素升高提示吉尔伯特综合征，但患者无法提供证明文件；那么对患者进行这种情况的测试。
8.在主要研究人员看来，研究人员判断的任何其他临床重要实验室异常情况将使患者不适合进行研究或使患者处于不应有的风险中。
9.在研究期间或研究药物施用的90天内怀孕、哺乳或计划怀孕的女性。
10.胆汁淤积症的现有证据。
11.筛查时有人体免疫缺陷病毒、乙型肝炎、或活动性丙型肝炎感染的证据。
12.估算的肾小球滤过率<30mL/min/1.73m2和/或正在透析。
13.对试验药物(达尼科潘)或其任何赋形剂超过敏
统计方法：
在统计学上，与安慰剂治疗的改善相比，接受达尼科潘治疗第12周时血红蛋白水平相对于基线的改善；也就是说，在第12周，达尼科潘与安慰剂之间相对于基线的平均变化差异。
疗效分析：基线和基线后测量的汇总统计数据相对于基线的变化将通过就诊呈现，以分析所有持续疗效变量。疗效目标和终点总结在下表9中。
表9.目标和终点
主要疗效终点是达尼科潘和安慰剂之间第12周血红蛋白相对于基线的变化(定义为最低Hgb值，介于筛查和第1天之间，包括筛查和第1天)。使用重复测量混合模型(MMRM)分析血红蛋白相对于基线的纵向变化，该重复测量混合模型包括治疗、研究访视和治疗组相互作用的研究访视的固定分类效应，以及基线血红蛋白值的连续固定协变量和模型中输血史的分层随机化指标。Kenward-Roger近似将用于估计分母自由度。主要疗效分析将是在第12周时达尼科潘和安慰剂组之间的差异，并将进行试验。
此外，还将提供纵向图像表示，以检查在使用达尼科潘或安慰剂加C5抑制剂治疗12周的血红蛋白概况。
主要疗效分析将基于ITT人群。将基于每个方案人群对主要疗效终点、血红蛋白测量变化进行支持性分析，以检查主要方案偏差造成的影响。
次要疗效分析将基于ITT人群实施。关键的次要疗效终点将采用分层固定序列试验程序进行分析，以确定统计显著性。
安全性分析：所有的安全性分析都是在安全人群中进行的，包括12周的盲法和随后12周的开放标记治疗期。安全性分析将主要基于不良事件的频率、临床实验室评估、生命体征和12-导联心电图。其他安全性数据将酌情汇总。
中期分析：当约50％的患者已经被随机分配到研究治疗中并且有机会完成12周的治疗期1(信息分数＝0.5)时，研究实验委托人可酌情(基于可行性)进行中期分析。中期分析的目的是评估研究早期停止的疗效。如果进行，在第12周时Hgb水平变化的主要终点以及关键的次要终点将使用下文规定的α消耗方法进行评估，以控制家族模样差别率。
介绍
达尼科潘(ALXN2040，原名ACH-0144471)是一种小分子口服施用的因子D(FD)抑制剂，目前正在开发用于治疗补体介导的疾病，如阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)和C3肾小球疾病(C3G)。因子D是一种丝氨酸蛋白酶，催化因子B(FB)的裂解，这是补体替代途径(AP)中的限速步骤。通过抑制FD，达尼科潘有效且特异性地抑制AP活性。这项关键性研究将评估达尼科潘对C5抑制剂(依库珠单抗或瑞利珠单抗)有临床上明显的血管外溶血(EVH)的患者的疗效和安全性。
益处
PNH是一种严重的危及生命的疾病，并且该患病人群有一些未满足的需求(批准的C5抑制剂并没有解决这种需求)，而有效的口服FD抑制剂可能会解决这些需求。已经识别其PNH未得到充分控制的三组患者：
·对依库珠单抗或瑞利珠单抗有次优应答的患者(约30％)，可能主要是由于C3调理作用介导的血管外溶血。依库珠单抗或瑞利珠单抗治疗不损害膜攻击复合物(补体途径的终末期)对PNH红细胞的溶血破坏；然而，它不能阻止C3片段在PNH红细胞膜上的沉积，这可能引导其血管外溶血。达尼科潘具有潜在的机械优势，因为它在C3裂解的上游起作用，并已显示阻断C3片段沉积。
·由于CR1基因多态性(例如，HindIII H/L和L/L基因型)，患者仅对依库珠单抗或瑞利珠单抗产生部分应答，这已经被假设会导致C3调理RBC比例增加，并且可能会改善达尼科潘的治疗应答。
·由于C5突变(例如，Arg885His)而对依库珠单抗或瑞利珠单抗无应答的罕见患者(约1％)也可能受益于达尼科潘，因为它在补体级联中作用于不同的靶标，并且不应受C5突变的影响。
研究设计
总体设计
这项多区域、随机、双盲、安慰剂对照、多剂量、第3期研究针对使用C5抑制剂(依库珠单抗或瑞利珠单抗)，研究对象为临床上明显的EVH的PNH患者。
筛查失败
筛查失败定义为同意参加临床研究但随后进入研究的患者。
研究药物
本方案中的“研究药物”指的是达尼科潘或搭配的安慰剂。参见表10。
表10：实施的研究干预
背景和伴随疗法
除C5抑制剂以外的特定伴随药物的使用将在个案基础上进行考虑，由主要研究人员和实验委托人根据达尼科潘的现有知识以及潜在伴随药物的特点共同做出决定。
背景C5抑制剂疗法：依库珠单抗和瑞利珠单抗
为了实现数据采集和分析的目的，所有患者均使用研究药物结合C5抑制剂疗法(即依库珠单抗或瑞利珠单抗)治疗。以这种方式使用的C5抑制剂将被视为背景疗法。如果患者在第24周完成研究后转换为不同的批准的C5抑制剂，则以这种方式使用的新药物也将被视为背景疗法，因为患者需要在研究开始前长时间服用稳定剂量和间隔的其C5抑制剂。
在本研究期间，批准的C5抑制剂剂量不应增加，也不应缩短间隔(基于重量变化的瑞利珠单抗重量剂量除外)。如果指示，C5抑制剂的剂量可能会降低，如果剂量降低，患者不能耐受，则剂量会重新递增到先前的剂量。
C5抑制剂疗法将根据当地法规和批准提供。
在一些实施例中，将
(依库珠单抗)以每周600mg的剂量静脉内施用于成年PNH患者，施用四次，随后在第5周以900mg的剂量施用，并且此后以每2周900mg的剂量施用。在儿科(<18岁)PNH患者中，将
(依库珠单抗)静脉内施用：(a)对体重40kg及以上的受试者以每周900mg的剂量施用四次，随后在第5周以1200mg的剂量施用，并且此后以每两周1200mg的剂量施用；(b)对体重30kg至小于40kg的受试者以每周600mg的剂量施用两次，随后在第3周以900mg的剂量施用，并且此后以每两周900mg的剂量施用；(c)对体重20kg至小于30kg的受试者以每周600mg的剂量施用两次，随后在第3周以600mg的剂量施用，并且此后以每两周600mg的剂量施用；(d)对体重10kg至小于20kg的受试者以每周600mg的剂量施用一次，随后在第3周以300mg的剂量施用，并且此后以每两周300mg的剂量施用；或(e)对体重5kg至小于10kg的受试者以每周300mg的剂量施用一次，随后在第2周以300mg的剂量施用，并且此后以每三周300mg的剂量施用。
为了降低脑膜炎球菌感染的风险，所有患者在开始研究药物之前3年或之时内都接种了脑膜炎球菌感染疫苗。
研究药物剂量改变
基于安全性和临床效果，研究药物的剂量可在初始治疗期和LTE期的规定的时间点，使用以下标准，以50mg的增量递增到最多200mg tid。使用获得的实验室结果进行的所有剂量递增将由主要研究人员在与实验委托人协商后酌情决定。这适用于治疗期1和2。在研究期间，C5抑制剂+安慰剂治疗组将以与C5抑制剂+达尼科潘治疗组相同的方式递增，以保持盲法。
·第一剂量递增点：如果起始剂量耐受良好且可用安全性数据令人满意，如果患者在第4周或第16周的Hgb水平没有相对于其基线值(第1天)增加了？2g/dL或患者在前4周期间接受了输血，则患者可递增到下一最高剂量(至200mg tid的最大剂量)。
·第二剂量递增点：如果患者在第8周或第20周的Hgb水平没有增加了？3g/dL或没有从其基线值(第1天)标准化到至少性别正常范围的中点，或患者在前4周期间接受了输血，则患者可递增到下一最高剂量(至200mg tid的最大剂量)。
·第三剂量递增点：如果患者在第12周或第24周的Hgb水平没有标准化到至少性别正常范围的中点，或患者在前4周期间接受了输血，则患者可递增到下一最高剂量(至200mg tid的最大剂量)。
在剂量递增后72至96小时，应在门诊或通过访视医疗服务机构抽血测量ALT、AST、GGT和ALP。
如果患者已经服用其先前剂量至少4周，并且研究人员认为可以获得额外的疗效，则服用剂量尚未递增到最高200mg研究药物的任何患者都可以将剂量递增到最高200mgtid达尼科潘。第24周访视后的剂量递增将在实施前与实验委托人讨论。如果患者的剂量已递增，出于安全性或耐受性原因，在研究人员和医疗监督员进行下述协商后，可将剂量进行剂量降低至较低剂量。剂量也可以按照相同的过程重新递增
在剂量递增后的任何时间点，如果患者的安全性或耐受性保证将剂量降低至先前剂量，则可在与实验委托人协商后进行。只有当主要研究人员和实验委托人都同意患者从较低剂量中受益时，将仅出现该剂量减少。
研究前和研究期间的输血指导方针当受试者患有以下病症时，建议施用pRBC输血：
1.血红蛋白值小于6g/dL，无论是否存在临床体征或症状，或
2.血红蛋白值小于9g/dL，伴随需要输血才能缓解的严重体征或症状。
如果发生危及生命的贫血，输血ABO-和RhD-匹配的血液是合适的。如果在不延迟为紧急输血提供血液的情况下可以进行进一步匹配Kell和JK抗原，则建议进行该额外的测试。
研究评估和程序
本节描述了所需的研究评估程序。所有程序的时间表可以见下文。
疗效评估
将根据评估时间表采集血液，以评估血红蛋白、网织红细胞计数、胆红素和乳酸脱氢酶变化的疗效终点。还将评估PNH RBC克隆大小、C3片段在PNH RBC上的沉积、AP和CP活性、以及Bb、C3和FD水平。采血程序如下所述。
将采集从筛查到随访期间的输血数据，包括输血的RBC单位数和相关的输血前血红蛋白值(如有，网织红细胞计数)(从研究现场记录和患者接受任何输血的任何其他位置)，并记录在每个患者的CRF中。
患者报告的结果
纳入本研究的所有患者将自行管理FACIT疲劳(第4版)调查问卷、欧洲癌症研究与治疗组织(European Organisation for Research and Treatment of Cancer(EORTC))生命质量30项核心问卷量表(Quality of Life Questionnaire-Core 30Scale(QLQ-C30))调查问卷、EQ-5D-3L量表调查问卷以及工作效率和活动障碍调查问卷：特定健康问题V2.0(WPAI:SHP,V2.0)(见下文)。将单独提供每个工具的本地语言版本。
医疗资源利用率数据将按照以下所示时间表采集。对于HRU，研究人员或指定人员将记录每位参与者的门诊就诊次数、使用的急救服务、住院次数、错过的工作次数，并记录患者尿液变暗的次数。
所有PRO和QoL评估(书面或电子)将在治疗剂量前、计划就诊期间实施。
疗效分析
基线和基线后测量的汇总统计数据相对于基线的变化将通过预定义的就诊呈现，以分析所有持续疗效变量。
主要疗效分析
主要疗效终点是达尼科潘和安慰剂之间第12周时血红蛋白相对于基线的变化(定义为最低Hgb值，介于筛查和第1天之间，包括筛查和第1天)。将使用重复测量混合模型(MMRM)分析血红蛋白相对于基线的纵向变化，该重复测量混合模型包括治疗、研究访视和治疗组相互作用的研究访视的固定分类效应，以及基线血红蛋白值的连续固定协变量和模型中输血史的分层随机化指标。Kenward-Roger近似将用于估计分母自由度。主要疗效分析将是在第12周时达尼科潘和安慰剂组之间的对比，并且试验将在双侧0.05显著性水平下进行。
主要目标是评估与安慰剂相比，达尼科潘对在治疗12周后血红蛋白变化的影响。为了解决输血对血红蛋白值的影响，对于在第8周或第8周之后输血的患者，第12周采集的血红蛋白值将不包括在主要疗效分析中。该规则也将适用于早期访视时采集的纵向观察，即输血后4周内采集的血红蛋白值将不包括在主要疗效分析中。
由于样品量相对较小，并且盲法治疗持续时间较短(12周)，将尽一切努力尽量减少12周测量的缺失。此外，还将提供纵向图像表示，以检查在使用达尼科潘或安慰剂加批准的C5抑制剂治疗的12周内的血红蛋白概况。
主要疗效分析将基于ITT人群。将基于每个方案人群对主要疗效终点、血红蛋白测量变化进行支持性分析，以检查主要方案偏差造成的影响。将进行额外的敏感性分析，以评估替代缺失数据机制假设下的治疗效果。统计分析计划中将详细说明此类分析。
次要疗效分析
次要疗效终点如下所示。次要疗效分析将基于ITT人群实施。
关键的次要疗效终点(按重要性排序)如下所述。采用分层固定序列试验程序，确定各终点的双侧0.05水平的统计显著性。
1.在治疗12周期间，达尼科潘组和安慰剂组之间避免RBC输血的患者比例的差异
2.第12周时，达尼科潘组和安慰剂组之间FACIT疲劳分数相对于基线的变化差异。
3.第12周时，达尼科潘和安慰剂组之间绝对网织红细胞计数相对于基线的变化差异。
对于比例参数，如患者在第12周实现避免输血和血红蛋白标准化，将使用Fisher精确试验来比较达尼科潘和安慰剂组。
对于从治疗开始前12周到12周的治疗期1的RBC输血单位/实例的变化，将使用协方差分析(ANCOVA)模型(包括治疗组和治疗开始前12周的输血单位和实例)来比较达尼科潘和安慰剂组。
对于数值终点(如FACIT疲劳分数、EQ-5D-3L分数、EORTC QLQ-C30分数、绝对网织红细胞计数、总胆红素和直接胆红素或其他PNH相关生物标志物)在第12周时相对于基线的变化，将采用主要疗效分析中规定的MMRM模型来比较达尼科潘和安慰剂之间的平均差异。
分层固定序列试验程序要求拒绝当前假设；也就是说，如果测试统计量的p值<0.05，那么根据临床重要性从上述关键的次要终点开始测试下一个假设的显著性。当假设不能被拒绝时，将停止顺序试验过程。
基于用于分析剩余次要疗效和探索性终点的数据的各种统计程序的结果将描述如下：
·在过去治疗12周期间，血红蛋白稳定化患者的数量和在接受24周达尼科潘治疗的患者中所占的比例。血红蛋白稳定化被定义为从第12周开始第24周时避免Hgb水平下降不超过0.5g/dL。
·接受24周达尼科潘治疗的患者的RBC输血单位/实例从治疗开始前24周到24周治疗期的变化。
·24周治疗期间避免输血的患者的比例、和第24周时血红蛋白标准化的患者的比例
·接受24周达尼科潘治疗的患者FACIT疲劳、绝对网织红细胞计数、总胆红素和直接胆红素、LDH及其他PNH相关生物标志物相对于基线(第1天)的变化。
·PNH RBC克隆大小、C3片段在PNH RBC上的沉积、替代途径和经典途径活性的测量结果、Bb、C3和FD水平。
·PRO和QoL终点。
序列总结
序列列表
<110>阿雷克森制药公司（ALEXION PHARMACEUTICALS, INC.）
<120>补体因子D抑制剂单独或结合抗C5抗体治疗阵发性睡眠性血红蛋白尿的用途
<130> 195320-22F-CNP
<140>
<141>
<150> 63/044,431
<151> 2020-06-26
<150> 63/023,415
<151> 2020-05-12
<160> 52
<170> PatentIn 3.5版本
<210> 1
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
肽”
<400> 1
Gly Tyr Ile Phe Ser Asn Tyr Trp Ile Gln
1 5 10
<210> 2
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
肽”
<400> 2
Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Glu Tyr Thr Glu Asn Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 3
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
肽”
<400> 3
Tyr Phe Phe Gly Ser Ser Pro Asn Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 4
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
肽”
<400> 4
Gly Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Gly Ala Leu Asn
1 5 10
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
肽”
<400> 5
Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp
1 5
<210> 6
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
肽”
<400> 6
Gln Asn Val Leu Asn Thr Pro Leu Thr
1 5
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<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
多肽”
<400> 7
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Glu Tyr Thr Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Tyr Phe Phe Gly Ser Ser Pro Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
多肽”
<400> 8
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gly Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Gly Ala
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Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
多肽”
<400> 9
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 10
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
多肽”
<400> 10
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Glu Tyr Thr Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Phe Phe Gly Ser Ser Pro Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
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Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys
210 215 220
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser
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Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
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Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 11
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
多肽”
<400> 11
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gly Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Gly Ala
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Asn Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
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Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 12
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
多肽”
<400> 12
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly His Ile Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly His Thr Glu Tyr Thr Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Phe Phe Gly Ser Ser Pro Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 13
<211> 326
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
多肽”
<400> 13
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
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Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg
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Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys
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Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
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Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 14
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
多肽”
<400> 14
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly His Ile Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly His Thr Glu Tyr Thr Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
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Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Tyr Phe Phe Gly Ser Ser Pro Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp
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Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
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Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
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Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys
210 215 220
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
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Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
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Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr
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Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala
420 425 430
Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 15
<211> 326
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
多肽”
<400> 15
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
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Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
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Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
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Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
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Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
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Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
多肽”
<400> 16
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Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
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Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
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Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
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Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Thr Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp
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His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys
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Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser
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Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg
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Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Met Glu Val His Asn Ala
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Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
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Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
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Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
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Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
肽”
<400> 17
Gly Ala Ser Glu Asn Ile Tyr His Ala Leu Asn
1 5 10
<210> 18
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
肽”
<400> 18
Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly His Thr Glu Tyr Thr Glu Asn Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 19
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
肽”
<400> 19
Gly His Ile Phe Ser Asn Tyr Trp Ile Gln
1 5 10
<210> 20
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
多肽”
<400> 20
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly His Ile Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly His Thr Glu Tyr Thr Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Phe Phe Gly Ser Ser Pro Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys
210 215 220
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 21
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
肽”
<400> 21
Ser Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 22
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
肽”
<400> 22
Gly Ile Gly Pro Phe Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 23
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
肽”
<400> 23
Asp Thr Pro Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 24
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
肽”
<400> 24
Ser Gly Asp Ser Ile Pro Asn Tyr Tyr Val Tyr
1 5 10
<210> 25
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
肽”
<400> 25
Asp Asp Ser Asn Arg Pro Ser
1 5
<210> 26
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
肽”
<400> 26
Gln Ser Phe Asp Ser Ser Leu Asn Ala Glu Val
1 5 10
<210> 27
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
多肽”
<400> 27
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Val Trp Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Asp Thr Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 28
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
多肽”
<400> 28
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Ser Cys Ser Gly Asp Ser Ile Pro Asn Tyr Tyr Val
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Asp Asp Ser Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Phe Asp Ser Ser Leu Asn Ala
85 90 95
Glu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 29
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
肽”
<400> 29
Asn Tyr Ile Ser
1
<210> 30
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
肽”
<400> 30
Ile Ile Asp Pro Asp Asp Ser Tyr Thr Glu Tyr Ser Pro Ser Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 31
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
肽”
<400> 31
Tyr Glu Tyr Gly Gly Phe Asp Ile
1 5
<210> 32
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
肽”
<400> 32
Ser Gly Asp Asn Ile Gly Asn Ser Tyr Val His
1 5 10
<210> 33
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
肽”
<400> 33
Lys Asp Asn Asp Arg Pro Ser
1 5
<210> 34
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
肽”
<400> 34
Gly Thr Tyr Asp Ile Glu Ser Tyr Val
1 5
<210> 35
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
多肽”
<400> 35
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Ile Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly
35 40 45
Ile Ile Asp Pro Asp Asp Ser Tyr Thr Glu Tyr Ser Pro Ser Phe Gln
50 55 60
Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Glu Tyr Gly Gly Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 36
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
多肽”
<400> 36
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Ser Cys Ser Gly Asp Asn Ile Gly Asn Ser Tyr Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Lys Asp Asn Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
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Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 37
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
肽”
<400> 37
Ser Ser Tyr Tyr Val Ala
1 5
<210> 38
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
肽”
<400> 38
Ala Ile Tyr Thr Gly Ser Gly Ala Thr Tyr Lys Ala Ser Trp Ala Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 39
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
肽”
<400> 39
Asp Gly Gly Tyr Asp Tyr Pro Thr His Ala Met His Tyr
1 5 10
<210> 40
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
肽”
<400> 40
Gln Ala Ser Gln Asn Ile Gly Ser Ser Leu Ala
1 5 10
<210> 41
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
肽”
<400> 41
Gly Ala Ser Lys Thr His Ser
1 5
<210> 42
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
肽”
<400> 42
Gln Ser Thr Lys Val Gly Ser Ser Tyr Gly Asn His
1 5 10
<210> 43
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
多肽”
<400> 43
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ser His Ser Ser
20 25 30
Tyr Tyr Val Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
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Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65 70 75 80
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Cys Ala Ser Asp Gly Gly Tyr Asp Tyr Pro Thr His Ala Met His Tyr
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Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 44
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
多肽”
<400> 44
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Gly Ser Ser
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Lys Thr His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Thr Lys Val Gly Ser Ser
85 90 95
Tyr Gly Asn His Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 45
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
多肽”
<400> 45
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val His Ser Ser
20 25 30
Tyr Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Val Gly Ala Ile Phe Thr Gly Ser Gly Ala Glu Tyr Lys Ala Glu Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Ser Asp Ala Gly Tyr Asp Tyr Pro Thr His Ala Met His Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
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210 215 220
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Arg Arg Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
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260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
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290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
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Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
325 330 335
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr Arg Lys Glu Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro
450
<210> 46
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
多肽”
<400> 46
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Glu Thr Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
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115 120 125
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
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Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
180 185 190
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
195 200 205
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 47
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
多肽”
<400> 47
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Ser
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Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
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115 120
<210> 48
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
多肽”
<400> 48
Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
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Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ala Gly
50 55 60
Arg Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
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Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Asp Phe Asn Tyr Pro Trp
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 49
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
多肽”
<400> 49
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ser Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
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130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 50
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
多肽”
<400> 50
Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ala Gly
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 51
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
多肽”
<400> 51
Asp Ile Gln Val Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ile Thr Ser Thr Asp Ile Asp Asp Asp
20 25 30
Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Gly Gly Asn Thr Leu Arg Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Asp Ser Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 52
<211> 223
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223>/注=“人工序列描述：合成
多肽”
<400> 52
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Thr Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Glu Arg Glu Gly Gly Val Asn Asn Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Claims (76)
1.一种用于治疗先前对C5抑制剂，例如抗C5抗体疗法，表现出不充分应答的受试者的阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的补体替代途径(AP)的替代成分的抑制剂。
2.如权利要求1所述的方法，其中该AP的替代成分的抑制剂包含对补体5(C5)上游的靶标，如因子D或补体3(C3)，的抑制。
3.如权利要求1所述的方法，其中在使用该AP的抑制剂治疗后，观察到该受试者的以下一项或多项下降：(a)持续性血管外溶血(EVH)；(b)贫血；和/或(c)输血依赖性；和/或观察到该受试者的FACIT疲劳量表分数的改善。
4.如权利要求3所述的方法，其中在用该AP的抑制剂治疗后，维持或改善对该不充分应答的PNH受试者中MAC介导的血管内溶血的控制。
5.如权利要求1或2所述的方法，其中对抗C5抗体疗法不充分应答与以下方面有关：(I)药代动力学(PK)方面，例如，(a)对该受试者C5裂解的抑制无效；(b)该抗C5抗体的剂量低和/或受试者血浆水平低；(c)该受试者中抗C5抗体的清除率增强；或(d)该受试者中的抗C5抗体不耐受导致抗C5抗体剂量降低，优选地其中抗C5抗体不耐受包含疲劳和输注后疼痛；或(II)药效学(PD)方面，例如，(a)CR1多态性；(b)血管外溶血(EVH)，例如，通过血管内溶血(IVH)存活的血细胞的调理作用；和(c)C3片段对抗C5抗体活性的损害作用。
6.一种用于治疗先前对抗C5抗体疗法表现出不充分应答的受试者的阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)的方法，该方法包括：
向该受试者施用治疗有效量的补体因子D(CFD)抑制剂，
其中该受试者的不充分应答是输血依赖性和/或贫血；并且
其中该受试者在用该CFD抑制剂治疗后24周表现出以下临床改善中的一种或多种：
(a)与该受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；
(b)输血非依赖性；和/或
(c)与该受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，慢性病治疗功能评估(FACIT)疲劳量表分数增加10分或更多。
7.一种用于治疗先前对抗C5抗体疗法表现出不充分应答的受试者的阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)的方法，该方法包括：
向该受试者施用治疗有效量的补体因子D(CFD)抑制剂结合治疗有效量的抗C5抗体或其抗原结合片段，
其中该受试者的不充分应答是输血依赖性和/或贫血；并且
其中该受试者在用该CFD抑制剂治疗后24周表现出以下临床改善中的一种或多种：
(a)与该受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；
(b)输血非依赖性；和/或
(c)与该受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。
8.一种用于治疗受试者的阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)的方法，该方法包括：
向该受试者施用治疗有效量的补体因子D(CFD)抑制剂结合治疗有效量的抗C5抗体或其抗原结合片段，
其中该受试者在用该CFD抑制剂治疗后24周表现出以下临床改善中的一种或多种：
(a)与该受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；
(b)输血非依赖性；和/或
(c)与该受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。
9.如权利要求6或7所述的方法，其中该受试者先前对依库珠单抗表现出不充分应答。
10.如权利要求9所述的方法，其中在不改变方案≤8周的情况下，该受试者先前接受了批准剂量或更高剂量的依库珠单抗治疗≥24周。
11.如权利要求7或8所述的方法，其中施用于该受试者的抗C5抗体或其抗原结合片段是人抗体、人源化抗体、双特异性抗体、嵌合抗体、Fab、Fab’2、ScFv、SMIP、
纳米抗体或抑制C5的结构域抗体。
12.如权利要求7或8所述的方法，其中施用于该受试者的抗C5抗体或其抗原结合片段包含分别如SEQ ID NO:1、2和3中所示的CDR1、CDR2和CDR3重链序列，以及分别如SEQ IDNO:4、5和6中所示的CDR1、CDR2和CDR3轻链序列。
13.如权利要求7-8或12所述的方法，其中施用于该受试者的抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:7的重链可变区和包含SEQ ID NO:8的轻链可变区。
14.如权利要求7-8或12-13所述的方法，其中施用于该受试者的抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:10的重链和包含SEQ ID NO:11的轻链。
15.如权利要求7-8或12-14所述的方法，其中施用于该受试者的抗C5抗体是
16.如权利要求7或8所述的方法，其中施用于该受试者的抗C5抗体或其抗原结合片段包含分别如SEQ ID NO:19、18和3中所示的CDR1、CDR2和CDR3重链序列，以及分别如SEQ IDNO:4、5和6中所示的CDR1、CDR2和CDR3轻链序列。
17.如权利要求7-8或16所述的方法，其中施用于该受试者的抗C5抗体或其抗原结合片段还包含结合人新生儿Fc受体(FcRn)的变体人Fc恒定区，其中该变体人Fc CH3恒定区在对应于天然人IgG Fc恒定区的甲硫氨酸428和天冬酰胺434的残基处包含Met-429-Leu和Asn-435-Ser取代，该残基各自以EU编号。
18.如权利要求7-8或16-17所述的方法，其中施用于该受试者的抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:12的重链可变区和包含SEQ ID NO:8的轻链可变区。
19.如权利要求7-8或16-18所述的方法，其中施用于该受试者的抗C5抗体或其抗原结合片段还包含：SEQ ID NO:13描述的重链恒定区。
20.如权利要求7-8或16-19所述的方法，其中施用于该受试者的抗C5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:14描述的氨基酸序列的重链多肽和包含SEQ ID NO:11描述的氨基酸序列的轻链多肽。
21.如权利要求7-8或16-20所述的方法，其中施用于该受试者的抗C5抗体是瑞利珠单抗。
22.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该CFD抑制剂是小分子抑制剂、核苷酸、肽、蛋白、肽模拟物、适配体或与因子D结合的任何其他分子。
23.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该CFD抑制剂是选自由以下组成的组的核苷酸：DNA、RNA、shRNA、miRNA、siRNA、反义DNA。
24.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该CFD抑制剂是与因子D结合的抗体或其抗原结合片段。
25.如权利要求6-22中任一项所述的方法，其中该CFD抑制剂包含：
26.如权利要求6-22和25中任一项所述的方法，其中该CFD抑制剂是达尼科潘。
27.如权利要求6-22和25-26中任一项所述的方法，其中将该CFD抑制剂口服施用于该受试者。
28.如权利要求6-22和25-27中任一项所述的方法，其中将该CFD抑制剂每日三次(TID)口服施用于该受试者。
29.如权利要求6-22和25-28中任一项所述的方法，其中将该CFD抑制剂以100mg、150mg或200mg的剂量TID口服施用于该受试者。
30.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中将该CFD施用24周。
31.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中将该CDR施用9个月、12个月、15个月、20个月、24个月或更长时间。
32.如权利要求7-31中任一项所述的方法，其中将该抗C5抗体或抗原结合片段静脉内施用于该受试者。
33.如权利要求7-15和22-32中任一项所述的方法，其中将该抗C5抗体或其抗原结合片段以每周600mg的剂量施用于该受试者，施用四次，随后在第5周以900mg的剂量施用，并且此后以每2周900mg的剂量施用。
34.如权利要求7-15和22-32中任一项所述的方法，其中该受试者小于18岁。
35.如权利要求34所述的方法，其中将该抗C5抗体或其抗原结合片段施用于该小于18岁的受试者：
(a)对体重40kg及以上的受试者以每周900mg的剂量施用四次，随后在第5周以1200mg的剂量施用，并且此后以每两周1200mg的剂量施用；
(b)对体重30kg至小于40kg的受试者以每周600mg的剂量施用两次，随后在第3周以900mg的剂量施用，并且此后以每两周900mg的剂量施用；
(c)对体重20kg至小于30kg的受试者以每周600mg的剂量施用两次，随后在第3周以600mg的剂量施用，并且此后以每两周600mg的剂量施用；
(d)对体重10kg至小于20kg的受试者以每周600mg的剂量施用一次，随后在第3周以300mg的剂量施用，并且此后以每两周300mg的剂量施用；或者
(e)对体重5kg至小于10kg的受试者以每周300mg的剂量施用一次，随后在第2周以300mg的剂量施用，并且此后以每三周300mg的剂量施用。
36.如权利要求7-11和16-32中任一项所述的方法，其中将该抗C5抗体或其抗原结合片段按如下施用：
(a)在施用周期的第1天一次，剂量为：体重≥40至<60kg的患者2400mg，体重≥60至<100kg的患者2700mg，或体重≥100kg的患者3000mg；以及
(b)在施用周期的第15天和此后每八周，剂量为：体重≥40至<60kg的患者3000mg，体重≥60至<100kg的患者3300mg，或体重≥100kg的患者3600mg。
37.如权利要求7-11和16-32中任一项所述的方法，其中该受试者小于18岁。
38.如权利要求37所述的方法，其中将该抗C5抗体或其抗原结合片段按如下施用：
(a)第1天施用一次，剂量为：体重≥5至<10kg的患者600mg，体重≥10至<20kg的患者600mg，体重≥20至<30kg的患者900mg，体重≥30至<40kg的患者1200mg，体重≥40至<60kg的患者2400mg，体重≥60至<100kg的患者2700mg，或体重≥100kg的患者3000mg；以及
(b)在第15天和此后每四周，剂量为：体重≥5至<10kg的患者300mg或体重≥10至<20kg的患者600mg；或在第15天和此后每八周，剂量为：体重≥20至<30kg的患者2100mg，体重≥30至<40kg的患者2700mg，体重≥40至<60kg的患者3000mg，体重≥60至<100kg的患者3300mg，或体重≥100kg的患者为3600mg。
39.如权利要求7-37中任一项所述的方法，其中将该抗C5抗体或其抗原结合片段施用于该受试者12或24周。
40.如权利要求7-37中任一项所述的方法，其中将该抗C5抗体或其抗原结合片段施用于该受试者9个月、12个月、15个月、20个月、24个月或更长时间。
41.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该治疗使得胆红素向正常水平转变。
42.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中与基线相比，该治疗使得网织红细胞减少。
43.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中与基线相比，该治疗使得PNH特异性红细胞克隆大小增加。
44.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中与基线相比，该治疗使得用C3片段调理的PNH红细胞减少。
45.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中与基线相比，如通过乳酸脱氢酶(LDH)水平评估，该治疗使得溶血减少。
46.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中与基线相比，该治疗使对输血的需求减少。
47.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该治疗产生末端补体抑制。
48.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该治疗产生选自由以下组成的组的至少一种治疗效果：与基线相比，腹痛、呼吸困难、吞咽困难、胸痛和***功能障碍减轻或停止。
49.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该治疗使选自由以下组成的组的至少一个或多个溶血相关血液生物标志物向正常水平转变：游离血红蛋白、触珠蛋白、网织红细胞计数、PNH红细胞(RBC)克隆和/或D-二聚体。
50.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该治疗使主要不良血管事件(MAVE)减少。
51.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该治疗使估算的肾小球滤过率(eGFR)或现场尿液:白蛋白:肌酐和血浆脑利尿钠肽(BNP)向正常水平转变。
52.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中如通过第4版和欧洲癌症研究与治疗组织的生命质量30项核心问卷量表评估，该治疗使生命质量相对于基线变化。
53.如前述权利要求中任一项所述的方法，该方法包括在基线和治疗后12或24周确定该受试者的血红蛋白水平、输血状态、和/或FACIT疲劳量表分数，其中
(a)与该受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；
(b)输血非依赖性；和/或
(c)与该受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，FACIT疲劳量表分数增加10分或更多
是治疗的指示。
54.一种用于治疗对既往以依库珠单抗治疗的不充分应答的受试者的阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)的方法，该方法包括：
向该受试者施用治疗有效量的达尼科潘结合治疗有效量的依库珠单抗，
其中该受试者的不充分应答是输血依赖性和/或贫血；并且
其中将达尼科潘以100mg、150mg或200mg的剂量TID口服施用于该受试者；
其中将依库珠单抗以每周600mg的剂量静脉内施用于该受试者，施用四次，随后在第5周以900mg的剂量施用，并且此后以每2周900mg的剂量施用；并且
其中该受试者在用该CFD抑制剂治疗后12或24周表现出以下临床改善中的一种或多种：
(a)与该受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；
(b)输血非依赖性；和/或
(c)与该受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。
55.一种用于治疗对既往以依库珠单抗治疗的不充分应答的受试者的阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)的方法，该方法包括：向该受试者施用治疗有效量的达尼科潘结合治疗有效量的依库珠单抗，
其中该受试者的不充分应答是输血依赖性和/或贫血；并且
其中将达尼科潘以100mg、150mg或200mg的剂量TID口服施用于该受试者；
其中将依库珠单抗静脉内施用于小于18岁的受试者：
(a)对体重40kg及以上的受试者以每周900mg的剂量施用四次，随后在第5周以1200mg的剂量施用，并且此后以每两周1200mg的剂量施用；
(b)对体重30kg至小于40kg的受试者以每周600mg的剂量施用两次，随后在第3周以900mg的剂量施用，并且此后以每两周900mg的剂量施用；
(c)对体重20kg至小于30kg的受试者以每周600mg的剂量施用两次，随后在第3周以600mg的剂量施用，并且此后以每两周600mg的剂量施用；
(d)对体重10kg至小于20kg的受试者以每周600mg的剂量施用一次，随后在第3周以300mg的剂量施用，并且此后以每两周300mg的剂量施用；或者
(e)对体重5kg至小于10kg的受试者以每周300mg的剂量施用一次，随后在第2周以300mg的剂量施用，并且此后以每三周300mg的剂量施用；并且
其中该受试者在用该CFD抑制剂治疗后12或24周表现出以下临床改善中的一种或多种：
i.与该受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；
ii.输血非依赖性；和/或
iii.与该受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。
56.一种用于治疗受试者的阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)的方法，该方法包括：
向该受试者施用治疗有效量的达尼科潘结合治疗有效量的依库珠单抗，
其中将达尼科潘以100mg、150mg或200mg的剂量TID口服施用于该受试者；
其中将依库珠单抗以每周600mg的剂量静脉内施用于该受试者，施用四次，随后在第5周以900mg的剂量施用，并且此后以每2周900mg的剂量施用；并且
其中该受试者在用该CFD抑制剂治疗后12和/或24周表现出以下临床改善中的一种或多种：
(a)与该受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；
(b)输血非依赖性；和/或
(c)与该受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。
57.一种用于治疗小于18岁的受试者的阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)的方法，该方法包括：向该受试者施用治疗有效量的达尼科潘结合治疗有效量的依库珠单抗，
其中将达尼科潘以100mg、150mg或200mg的剂量TID口服施用于该受试者；
其中将依库珠单抗静脉内施用：
(a)对体重40kg及以上的受试者以每周900mg的剂量施用四次，随后在第5周以1200mg的剂量施用，并且此后以每两周1200mg的剂量施用；
(b)对体重30kg至小于40kg的受试者以每周600mg的剂量施用两次，随后在第3周以900mg的剂量施用，并且此后以每两周900mg的剂量施用；
(c)对体重20kg至小于30kg的受试者以每周600mg的剂量施用两次，随后在第3周以600mg的剂量施用，并且此后以每两周600mg的剂量施用；
(d)对体重10kg至小于20kg的受试者以每周600mg的剂量施用一次，随后在第3周以300mg的剂量施用，并且此后以每两周300mg的剂量施用；或者
(e)对体重5kg至小于10kg的受试者以每周300mg的剂量施用一次，随后在第2周以300mg的剂量施用，并且此后以每三周300mg的剂量施用；并且
其中该受试者在用该CFD抑制剂治疗后12和/或24周表现出以下临床改善中的一种或多种：
i.与该受试者的基线血红蛋白水平相比，2.0g/dL或更高的血红蛋白增加；
ii.输血非依赖性；和/或
iii.与该受试者的基线FACIT疲劳量表分数相比，FACIT疲劳量表分数增加10分或更多。
58.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该补体替代途径(AP)的替代成分的抑制剂选自由以下组成的组：
a)MASP-3抑制剂(例如，α-MASP-3单克隆抗体(Mab)，如OMS906)；
b)因子D(FD)抑制剂(例如，抗FD Mab，如兰帕利珠单抗；或小分子FD抑制剂，如达尼科潘(ACH-4471)或BCX9930)；
c)因子B抑制剂(例如，LNP023)；
d)坎普他汀分子或其衍生物(例如，APL2、APL9、AMY-101)；
e)迷你因子H(例如，迷你FH AMY-201)；以及
f)因子H融合蛋白(例如，TT30)。
59.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该C5抑制剂选自由以下组成的组：
a)依库珠单抗生物类似物(例如，ABP 959；Elizaria；SB12)；
b)诺马可潘(Coversin；rVA576)；
c)瑞利珠单抗；
d)特度鲁单抗(LFG316)；
e)帕泽利单抗；以及
f)可伐利单抗(SKY059)。
60.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中补体替代途径(AP)包含含有达尼科潘的药物组合物。
61.如前述权利要求中任一项所述的方法，该方法包括：每8小时向人类受试者施用包含约100至约200mg达尼科潘的药物组合物。
62.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该受试者在治疗前表现出血管外溶血(EVH)。
63.一种用于治疗受试者的阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)的试剂盒，该试剂盒包括：
(a)补体因子D(CFD)抑制剂的剂量；以及
(b)有关在如前述权利要求中任一项所述的方法中使用该CFD的说明书。
64.一种用于治疗受试者的阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)的试剂盒，该试剂盒包括：
(a)补体因子D(CFD)抑制剂的剂量；
(b)抗C5抗体的剂量；以及
(c)有关在如前述权利要求中任一项所述的方法中使用该CFD和抗C5抗体的说明书。
65.如权利要求63或64所述的试剂盒，其中该CFD是达尼科潘。
66.如权利要求64或65所述的试剂盒，其中该抗C5抗体是依库珠单抗。
67.如权利要求64或65所述的试剂盒，其中该抗C5抗体是瑞利珠单抗。
68.一种治疗患有阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)的患者的临床上明显的血管外溶血(EVH)的方法，所述PNH患者先前已经接受C5抑制剂，例如抗C5抗体疗法的治疗，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的补体替代途径(AP)的替代成分的抑制剂。
69.如权利要求68所述的方法，其中该AP的替代成分的抑制剂包含对补体5(C5)上游的靶标，如因子D或补体3(C3)，的抑制。
70.如权利要求69所述的方法，其中该因子D抑制剂的抑制剂包含达尼科潘。
71.如权利要求68-70中任一项所述的方法，其中该临床上明显的EVH包含(a)贫血(例如，Hgb≤9.5g/dL)与绝对网织红细胞计数≥120×109/L；和/或(b)在用补体AP的替代成分的抑制剂治疗之前的6个月内，至少1次浓缩RBC或全血输注。
72.如权利要求68-71中任一项所述的方法，其中该治疗使得具有临床上明显的EVH的PNH患者避免输血(TA)。
73.如权利要求72所述的方法，其中具有临床上明显的EVH的经治疗的PNH患者不需要pRBC输血，例如，当该患者出现以下情况时，该患者需要进行pRBC输血：(1)血红蛋白值小于6g/dL时，无论是否存在PNH的临床体征或症状；或(2)血红蛋白值<9g/dL，伴随需要输血才能缓解的严重体征或症状。
74.如权利要求68-73中任一项所述的方法，其中该治疗有效量的AP补体的替代成分的抑制剂包含每日600mg剂量的达尼科潘。
75.如权利要求68-74中任一项所述的方法，其中该患者用抗C5抗体和治疗有效量的AP补体的替代成分的抑制剂一起治疗。
76.如权利要求75所述的方法，其中该抗C5抗体疗法包含按PNH疗法中每种抗体的标准剂量和/或给药方案用依库珠单抗(例如，包含依库珠单抗的药物组合物)或瑞利珠单抗(例如，包含瑞利珠单抗的药物组合物)的疗法。
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