CN115590896A - 低分子右旋糖酐牛黄酸和小球藻联合制备治疗皮肤相关疾病药物的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及低分子右旋糖酐牛黄酸和小球藻联合制备治疗皮肤相关疾病药物的应用。其中所涉及的皮肤相关疾病包括:烧烫伤、压疮、糖尿病溃疡、特应性皮炎;其中先采用低分子右旋糖酐牛磺酸溶液润湿伤口或皮肤,然后应用小球藻;其中低分子右旋糖酐包括右旋糖酐20、40、60等,牛磺酸的用量为0.01%~5%w/v;其中小球藻以细胞、制剂等形式应用,具体包括以小球藻为活性组分的溶液、水凝胶、贴片、敷料等;小球藻的应用浓度为1×103~1×1012 cell/mL。
Description
技术领域
本发明涉及小球藻的应用,具体涉及一种低分子右旋糖酐牛黄酸和小球藻联合制备治疗皮肤相关疾病药物的应用,具体涉及烧烫伤、压疮、糖尿病溃疡、特应性皮炎。
背景技术
小球藻(Chlorella sp.)是一种单细胞真核藻类(2~10 μm),具有极快的生长速度,可以抵抗各种抑制性生长条件,是栽培最为广泛的微藻物种之一。小球藻含有丰富的蛋白质、脂质、多糖、氨基酸、维生素等营养物质,其蛋白质含量高达50%,目前小球藻已被开发为人体营养补充剂。此外,由于其内含物还包含了生长因子、免疫调节剂,可用作保健品和功能性食品,以预防疾病。小球藻在光照条件下可以通过光合作用不断产生氧气,被公认为是空气中氧气的来源。此外,小球藻还具有抗炎、抗氧化的功能。其内部含有丰富的硫酸多糖,可以通过激活和调节巨噬细胞,起到抗炎作用。除硫酸多糖外,小球藻提取物中的色素-蛋白质复合物也具备抗炎功效。目前,已鉴定出的具有抗氧化、清除自由基功能的内含物包括:叶黄素、𝛼-胡萝卜素、𝛽-胡萝卜素、抗坏血酸和𝛼-生育酚等。此外,其生物活性化合物𝛽-1,3葡聚糖作为一种活性免疫刺激剂,可以减少血液中的胆固醇,还被证明对动脉粥样硬化和高胆固醇血症具有预防功能。
小球藻具有改善皮肤相关疾病不良组织微环境的能力,但是小球藻为活体细胞,且其具有较高的增殖和代谢活性,这可能会进一步消耗病变部位的营养,减少病变部位组织细胞的营养供给,进而阻碍疾病的治疗。低分子右旋糖酐为营养性血容量扩充药,适用于治疗兼有蛋白质缺乏的血容量减少、微循环不良的疾病。其中低分子右旋糖酐能提高血浆胶体渗透压、扩充血容量、扩充毛细血管,从而改善伤口组织的血流灌注和微循环,血流的改善和血容量的增加可以加快代谢及其有害产物排出。
牛磺酸是人体的条件必需氨基酸,已广泛应用于医药、食品添加剂等领域。目前实验已证明0.01%~1%浓度牛磺酸均可促进成纤维细胞增殖。此外,牛磺酸还具有抗炎、抗氧化功效,可以通过提高超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)等抗氧化酶活性,减少过氧化脂质、羰基蛋白、活性氧的形成。
因此,我们提出利用低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻联合应用的治疗方法,以期望获得更好治疗效果。
发明内容
本发明涉及低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻联用在制备治疗促进伤口愈合的药物中的应用。
低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻联用在制备治疗皮肤疾病的药物中的应用一种低分子右旋糖酐牛磺酸和小球藻联合治疗皮肤相关疾病的方法,其中包括烧烫伤、压疮、糖尿病溃疡、特应性皮炎。
所述的联合治疗方法为先应用低分子右旋糖酐牛磺酸,后应用小球藻。
所述的低分子右旋糖酐牛磺酸溶液,其特征在于:每1000 mL含60.0 g低分子右旋糖酐20、40或60,辅料为亚硫酸氢钠,牛磺酸含量为0.01%~5% w/v。
所述的小球藻制剂包括以小球藻为活性组分的溶液、水凝胶、贴片、敷料、冻干粉等。
所述的小球藻生物量筛选范围为1 × 103 ~ 1 × 1012 cell/mL。
所述的低分子右旋糖酐牛磺酸溶液的制备方法,其特征在于:将上述低分子右旋糖酐和牛磺酸溶于生理盐水,灭菌即可。
所述的小球藻溶液包括但不限于小球藻BG-11溶液,其制备方法特征在于:将确定生物量的无菌培养的小球藻离心,弃去上清液,BG-11培养基冲洗2次,再使用定量的BG-11培养基重悬,得到小球藻BG-11溶液。
所述的小球藻水凝胶包括但是不限于小球藻透明质酸水凝胶,其制备方法的其特征在于:将10 ml 1×108 cell/ml浓度的的无菌培养的小球藻离心,弃去上清液,BG-11培养基冲洗2次,再使用定量的BG-11培养基重悬。然后,0.2g的透明质酸粉末加入小球藻溶液中,在室温条件下使用磁力搅拌器搅拌以形成小球藻透明质酸水凝胶。
所述的低分子右旋糖酐牛磺酸和小球藻联用,体现为联用的治疗效果优于单独应用。
所述的低分子右旋糖酐牛磺酸和小球藻联用,体现为先应用低分子右旋糖酐牛磺酸后应用小球藻可以显著提高联用的治疗效果。
烧烫伤一般指热力所引起的组织损害,主要指皮肤和/或黏膜,严重者也可伤及皮下或/和黏膜下组织,如肌肉、骨、关节甚至内脏。机体在烧烫伤后由于组织缺血再灌注损伤以及机体体液大量流失导致机体严重的氧化损伤,从而产生大量活性氧代谢物,同时伴随着剧烈的炎症反应。此外,烧烫伤会导致机体广泛的生理屏障损害,大量组织坏死以及免疫功能降低,同时烧伤创面存在大量富含蛋白质的渗出液,这提高了机体被病原体侵入的几率。低分子右旋糖酐和牛磺酸可以为创面组织提供再生所需的营养,小球藻可以显著减少氧化应激和炎症,具备代谢蛋白净化渗出液的功能,而且还可以提供伤口愈合所需的生长因子,因此二者联用可能是一种潜在的治疗策略。
压疮是由于局部组织长期受到压迫引发的持续血运受阻、缺氧、缺营养而导致的组织溃烂坏死,又称压力性溃疡、压疮。皮肤压疮是康复治疗、护理等长期治疗过程中面临的一种普通性的问题,且临床治疗面临一定的困难,每年约有6万人死于压疮合并征。低分子右旋糖酐和牛磺酸可以为创面组织提供再生所需的营养;小球藻可以用于促进血管再生、提供氧气、提供营养、减弱疮面炎症,进而促进压疮的愈合。
糖尿病溃疡是由长期高血糖导致的慢性伤口,其治疗周期长,复发率高,患者甚至面临截肢和死亡的危险。目前全球患者高达2600万人,造成了极大的医疗负担。研究表明,我国成年人中糖尿病患者占比11.2%(约为1.298亿),其中糖尿病溃疡的发病率约为4.1%。糖尿病慢性伤口通常表现为高葡萄糖、高氧化应激、严重缺氧、高乳酸含量和营养不良。低分子右旋糖酐和牛磺酸可以为创面组织提供再生所需的营养且可以改善胰岛素抵抗,结合小球藻的特性,因此二者联用似乎是可行的改善糖尿病溃疡组织微环境的方法。
特应性皮炎是一种慢性复发性炎症性皮肤病。全球疾病负担研究显示,儿童患病率为15%至20%,成人患病率高达10%,使特应性皮炎成为第15大最常见的非致死性疾病,也是经济负担最高的皮肤性疾病。其通常表现为皮肤瘙痒、发红、肿胀、干燥。低分子右旋糖酐和牛磺酸可以为炎症部位提供代谢所需的营养,小球藻可以用于提供氧气和营养物质,以及一定的湿润环境,加速受损皮肤的修复进程,因此二者联用似乎是一种可行的治疗特应性皮炎的方法。
有益效果
低分子右旋糖酐常用于治疗兼有蛋白质缺乏的血容量减少、微循环不良的疾病,尽管可以对伤口愈合有一定的治疗作用,但作用有限,在皮肤相关疾病的治疗中没有体现出显著的治疗优势。牛磺酸具有抗炎抗氧化功效,同时可以降低糖尿病组织的胰岛素抵抗。小球藻具有改善皮肤相关疾病不良组织微环境的能力,但同样面临着一定的困境。
本发明的关键点在于:低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻联用可以有效的治疗烧烫伤、压疮、糖尿病溃疡、特应性皮炎,其中联合应用的治疗效果显著高于单独应用,产生了协同增效作用,特别是先应用低分子右旋糖酐牛磺酸后应用小球藻具有更为显著的治疗效果。
1、低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻联用,其有效成分廉价易得,且制备工艺简单,具有工业生产潜力。
2、低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻联用,其治疗效果显著,可以有效的治疗烧烫伤、压疮、糖尿病溃疡、特应性皮炎。
3、低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻联用,其治疗效果显著高于单独应用低分子右旋糖酐牛磺酸或小球藻。
4、在联合应用中,先应用低分子右旋糖酐牛磺酸后应用小球藻,具有更为显著的治疗效果。
附图说明
图1是实施例1、实施例2、低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻联合应用、先后应用低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻在烧烫伤治疗中的应用;
图2是实施例1、实施例2、低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻联合应用、先后应用低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻在压疮治疗中的应用;
图3是实施例1、实施例2、低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻联合应用、先后应用低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻在糖尿病溃疡治疗中的应用;
图4是实施例1、实施例2、低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻联合应用、先后应用低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻在特应性皮炎治疗中的应用。
具体实施方式
以下通过具体实施例进一步说明本发明,但本发明并不限于下列实施例包含的内容。
实施例1:低分子右旋糖酐牛磺酸溶液的制备
取一定量的低分子右旋糖酐和牛磺酸加入生理盐水(每1000 mL生理盐水含60.0g右旋糖酐40、1 g牛磺酸),搅拌,灭菌,制得低分子右旋糖酐牛磺酸溶液。
实施例2:小球藻水凝胶的制备
取10 ml 1 × 108 cell/ml浓度的无菌培养的小球藻,离心(4000 rpm,3 min),弃去上清液,BG-11培养基冲洗2次,并用10 ml BG-11培养基重悬。然后,将0.2 g HA粉末加入小球藻溶液中,在室温条件下使用磁力搅拌器搅拌(500 rpm,4 h)以形成小球藻透明质酸水凝胶。
实施例3:治疗烧烫伤的体内评价
选取6-8周龄Balb/C雄鼠,使用恒温控压电烫仪造小鼠烫伤模型。造模后将老鼠随机分为五组:烧烫伤对照组(采用3M敷料密封伤口)、实施例1组(加入80 μL低分子右旋糖酐牛磺酸溶液,采用3M敷料密封伤口)、实施例2组(加入80 μL小球藻水凝胶,采用3M敷料密封伤口)、联合应用组(加入40 μL低分子右旋糖酐牛磺酸溶液,同时加入40 μL小球藻水凝胶,采用3M敷料密封伤口)、先后应用组(首先加入40 μL低分子右旋糖酐牛磺酸溶液,1 h后加入40 μL小球藻水凝胶,采用3M敷料密封伤口)。所有实验组每天更换水凝胶,在第0、3、7、10天对创面进行拍照,并通过ImageJ软件进行定量分析。
结果如图1所示,低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻联合应用可以有效治疗烧烫伤,其联合治疗效果显著高于单独应用。因为联合应用组的给药体积不变(低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻的总体积与实施例1组、实施例2组相同),但获得了更好的治疗效果,我们认为低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻联用治疗烧烫伤具有一定的协同增效作用。此外,先应用低分子右旋糖酐牛磺酸后应用小球藻水凝胶具有更好的治疗效果。
实施例4:治疗压疮的体内评价
选取200 g SD雄性大鼠,采用机械压迫法造大鼠压疮模型。造模后将老鼠随机分为五组:压疮对照组(采用3M敷料密封伤口)、实施例1组(加入80 μL低分子右旋糖酐牛磺酸溶液,采用3M敷料密封伤口)、实施例2组(加入80 μL小球藻水凝胶,采用3M敷料密封伤口)、联合应用组(加入40 μL低分子右旋糖酐牛磺酸溶液,同时加入40 μL小球藻水凝胶,采用3M敷料密封伤口)、先后应用组(首先加入40 μL低分子右旋糖酐牛磺酸溶液,1 h后加入40 μL小球藻水凝胶,采用3M敷料密封伤口)。所有实验组每天更换水凝胶,在第0、3、7、10天对创面进行拍照,并通过ImageJ软件进行定量分析。
结果如图2所示,低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻联合应用可以有效治疗压疮,其联合治疗效果显著高于单独应用。因为联合应用组的给药体积不变(低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻的总体积与实施例1组、实施例2组相同),但获得了更好的治疗效果,我们认为低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻联用治疗压疮具有一定的协同增效作用。此外,先应用低分子右旋糖酐牛磺酸后应用小球藻水凝胶具有更好的治疗效果。
实施例5:治疗糖尿病溃疡的体内评价
4-6周龄的Balb/C雄鼠糖尿病鼠饲料(高脂肪高糖)饲养4周后,连续5天腹腔注射链脲佐菌素柠檬酸盐缓冲溶液(链脲佐菌素:55 mg/kg)。后检测血糖 ≥ 16.7 mM的小鼠被认为造模成功。腹腔注射水合氯醛对小鼠进行麻醉,并剃除背毛。使用8 mm内径的活检打孔器制造圆形全层皮肤伤口,并使用不可吸收的缝合线将硅胶垫圈缝在伤口组织周围以防止小鼠皮肤的收缩作用,加入水凝胶,选取透明的聚氨酯薄膜作为外衬层构成封闭体系。实验中将小鼠随机分为五组:糖尿病对照组(采用3M敷料密封伤口)、实施例1组(加入80 μL低分子右旋糖酐牛磺酸溶液,采用3M敷料密封伤口)、实施例2组(加入80 μL小球藻水凝胶,采用3M敷料密封伤口)、联合应用组(加入40 μL低分子右旋糖酐牛磺酸溶液,同时加入40 μL小球藻水凝胶,采用3M敷料密封伤口)、先后应用组(首先加入40 μL低分子右旋糖酐牛磺酸溶液,1 h后加入40 μL小球藻水凝胶,采用3M敷料密封伤口)。所有实验组每天更换水凝胶。在第0、3、7、9天对伤口进行拍照,并通过ImageJ软件进行定量分析。
结果如图3所示,低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻联合应用可以有效治疗糖尿病溃疡,其联合治疗效果显著高于单独应用。因为联合应用组的给药体积不变(低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻的总体积与实施例1组、实施例2组相同),但获得了更好的治疗效果,我们认为低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻联用治疗糖尿病溃疡具有一定的协同增效作用。此外,先应用低分子右旋糖酐牛磺酸后应用小球藻水凝胶具有更好的治疗效果。
实施例6:治疗特应性皮炎的体内评价
利用丙酮和橄榄油以3:1比例配制成基础液,然后利用2,4二硝基氟苯(DNFB)和基础液配制1%和0.2%的DNFB致敏药物,第一周开始进行造模并持续三周。造模后将老鼠随机分为五组:特应性皮炎对照组(采用3M敷料密封伤口)、实施例1组(加入80 μL低分子右旋糖酐牛磺酸溶液,采用3M敷料密封伤口)、实施例2组(加入80 μL小球藻水凝胶,采用3M敷料密封伤口)、联合应用组(加入40 μL低分子右旋糖酐牛磺酸溶液,同时加入40 μL小球藻水凝胶,采用3M敷料密封伤口)、先后应用组(首先加入40 μL低分子右旋糖酐牛磺酸溶液,1 h后加入40 μL小球藻水凝胶,采用3M敷料密封伤口)。然后采用小球藻水凝胶治疗一周,每天三次,实验共计四周。实验结束后脱颈处死小鼠,将耳部与背部皮肤浸泡于4%的多聚甲醛固定液中用于病理切片。
在预定时间点(0、7、14、21、25、28)对小鼠背部皮损区域进行皮炎评分。具体标准如下:无症状,0分;轻度症状,1分;中度症状,2分;严重症状,3分。分别评估红斑/出血、水肿、抓痕/糜烂和鳞屑/干燥症状,皮炎评分以个体得分之和计算,满分为12分。
结果如图4所示,低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻联合应用可以有效治疗特应性皮炎,其联合治疗效果显著高于单独应用。因为联合应用组的给药体积不变(低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻的总体积与实施例1组、实施例2组相同),但获得了更好的治疗效果,我们认为低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻联用治疗特应性皮炎具有一定的协同增效作用。此外,先应用低分子右旋糖酐牛磺酸后应用小球藻水凝胶具有更好的治疗效果。
Claims (10)
1.低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻联用在制备治疗促进伤口愈合的药物中的应用。
2.低分子右旋糖酐牛磺酸与小球藻联用在制备治疗皮肤疾病的药物中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述的皮肤疾病包括,烧烫伤、压疮、糖尿病溃疡、特应性皮炎。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的应用,其特征在于,首先应用低分子右旋糖酐牛磺酸,后应用小球藻。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,小球藻制成敷料。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述的敷料为细胞溶液、水凝胶或贴片。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,所述的水凝胶由小球藻和透明质酸制备获得。
8.根据权利要求1-7所述的应用,其特征在于,低分子右旋糖酐牛磺酸溶液为每1000mL含60.0 g低分子右旋糖酐20、40或60,辅料为亚硫酸氢钠,牛磺酸含量为0.01%~5% w/v,将上述低分子右旋糖酐和牛磺酸溶于生理盐水,灭菌即可。
9.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述的小球藻生物量筛选范围为1×103 ~1×1012 cell/mL。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,所述的小球藻水凝胶包括但是不限于小球藻透明质酸水凝胶,其制备方法的其特征在于:将10 ml 1×108 cell/ml浓度的的无菌培养的小球藻离心,弃去上清液,BG-11培养基冲洗2次,再使用定量的BG-11培养基重悬;
然后,0.2 g的透明质酸粉末加入小球藻溶液中,在室温条件下使用磁力搅拌器搅拌以形成小球藻透明质酸水凝胶。
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