CN115590893A - 一种可抑制幽门螺杆菌的复合益生菌组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于益生菌制剂技术领域，本发明涉及一种可抑制幽门螺杆菌的复合益生菌组合物，并进一步公开了所述复合益生菌制剂用于制备治疗或预防幽门螺杆菌感染的产品的用途。本发明所述复合益生菌以干酪乳杆菌Zhang(Lactobacillus casei Zhang)和乳双歧杆菌Probio‑M8(Bifidobacterium lactis Probio‑M8)为活性成分，实验证明，本发明所述复合益生菌具有抑制幽门螺杆菌的作用，可有效预防或治疗幽门螺杆菌感染的相关病症，经服用干酪乳杆菌Zhang和乳双歧杆菌Probio‑M8可有效抑制幽门螺杆菌，在制备预防或治疗幽门螺杆菌感染的产品中具有很大的应用前景。

Description

一种可抑制幽门螺杆菌的复合益生菌组合物及其应用

技术领域

本发明属于益生菌制剂技术领域，本发明涉及一种可抑制幽门螺杆菌的复合益生菌组合物，并进一步公开了所述复合益生菌制剂用于制备治疗或预防幽门螺杆菌感染的产品的用途。

背景技术

幽门螺杆菌(helicobacter pylori，HP)是一种可黏附定植于胃黏膜表面的微需氧革兰阴性杆菌，是胃炎、消化性溃疡的致病性因素之一，已公认在胃溃疡、十二指肠溃疡、胃癌等病症中发挥了致因作用。此外，由幽门螺杆菌感染引发的胃炎还被认为是消化性溃疡及其相关并发症的危险因素。因此，消除幽门螺杆菌不仅可显著降低发生胃癌的风险，同时还可起到预防消化性溃疡的作用，而直接或间接性的提升幽门螺杆菌根除率，对防治幽门螺杆菌及其有关疾病的发生具有重要意义。

目前，传统用于根除HP的治疗方案主要为含铋剂的四联方案，而新的治疗方案如序贯疗法、左氧氟沙星疗法等，主要是通过抗生素结合的三联或者四联疗法以清除患者体内的幽门螺杆菌以恢复幽门螺杆菌感染导致的胃肠症状。但是，由于治疗过程需要联合应用多种抗生素，不仅疗程较长，且常常导致耐药、菌群失调、依从性下降等副作用，患者出现不良反应的几率极大，并降低了治疗效率。

大量临床实践证实，临床上治疗幽门螺杆菌时结合口服肠道益生菌可起到一定的正向辅助效果。这主要是因为，益生菌可增强黏膜屏障作用、减少炎症反应的发生、帮助患者改善临床症状、提升治疗依从性。因此，开发可辅助提高幽门螺杆菌根除率的益生菌制剂，对防治幽门螺杆菌感染及相关疾病的治疗具有积极的意义。

发明内容

为此，本发明的第一个目的在于提供一种可抑制幽门螺杆菌的复合益生菌组合物，所述复合益生菌组合物可有效根除幽门螺杆菌；

本发明的第二个目的在于提供上述复合益生菌制剂用于制备预防或治疗幽门螺杆菌感染的产品的用途；

本发明的第三个目的在于提供所述干酪乳杆菌Zhang和/或乳双歧杆菌Probio-M8用于制备可抑制幽门螺杆菌的复合益生菌制剂的用途。

为解决上述技术问题，本发明所述的一种可抑制幽门螺杆菌的复合益生菌组合物，所述复合益生菌组合物的活性成分包括干酪乳杆菌Zhang和乳双歧杆菌Probio-M8；

所述干酪乳杆菌Zhang，其分类命名为干酪乳杆菌Lactobacillus casei，保藏于中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC No.5469；

所述乳双歧杆菌Probio-M8，其分类命名为乳双歧杆菌Bifidobacterium lactis，保藏于中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.18610。

优选的，所述可抑制幽门螺杆菌的复合益生菌组合物，所述干酪乳杆菌Zhang和所述乳双歧杆菌Probio-M8的总活菌数不低于1×10⁶CFU/mL或1×10⁶CFU/g。

优选的，所述可抑制幽门螺杆菌的复合益生菌组合物，所述干酪乳杆菌Zhang和乳双歧杆菌Probio-M8的活菌数比例为(1-10)：(10-1)。

本发明还公开了由所述复合益生菌组合物和/或其灭活物、代谢物制备的可抑制幽门螺杆菌的益生菌制剂。

具体的，所述益生菌制剂包括液体制剂或固体制剂。

本发明还公开了一种制备所述益生菌制剂的方法，包括将所述复合益生菌组合物进行菌体培养的步骤，以及进行选定剂型加工的步骤。

本发明还公开了所述复合益生菌组合物及其灭活物、代谢物用于制备预防或治疗幽门螺杆菌感染的产品的用途。

具体的，所述产品包括药物制剂；

优选的，所述药物制剂包括粉剂、散剂、片剂或胶囊剂。

具体的，所述产品包括功能性食品；

优选的，所述功能性食品包括乳制品、豆制品或饮料。

本发明还公开了所述干酪乳杆菌Zhang和/或所述乳双歧杆菌Probio-M8用于制备可抑制幽门螺杆菌的益生菌制剂的用途。

本发明所述复合益生菌以干酪乳杆菌Zhang(Lactobacillus casei Zhang)和乳双歧杆菌Probio-M8(Bifidobacterium lactis Probio-M8)为活性成分，实验证明，本发明所述复合益生菌具有抑制幽门螺杆菌的作用，可有效预防或治疗幽门螺杆菌感染的相关病症，经服用干酪乳杆菌Zhang和乳双歧杆菌Probio-M8可有效抑制幽门螺杆菌，在制备预防或治疗幽门螺杆菌感染的产品中具有很大的应用前景。

附图说明

为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中，

图1-3为本发明所述复合益生菌对幽门螺杆菌超微结构的影响(扫描电镜观察)，其中，图1为幽门螺杆菌的形态，图2为处理前复合菌株与幽门螺杆菌的形态，图3为处理后复合菌株与幽门螺杆菌的形态；

图4-6为本发明所述复合益生菌对幽门螺杆菌超微结构的影响(透射电镜观察)，其中，图4为幽门螺杆菌的形态，图5为处理前复合菌株与幽门螺杆菌的形态，图6为处理后复合菌株与幽门螺杆菌的形态。

具体实施方式

本发明如下实施例方案中，涉及菌株包括干酪乳杆菌Zhang和乳双歧杆菌Probio-M8。

所述干酪乳杆菌Zhang(Lactobacillus casei Zhang)，其分类命名为干酪乳杆菌Lactobacillus casei，该菌株已保藏于中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2011年11月18日，保藏编号为CGMCCNo.5469；所述干酪乳杆菌Zhang在MRS培养基上生长形成乳白色菌落，不透明、圆形、表面光滑、中央凸起，直径约为1.2-1.5mm。

所述乳双歧杆菌Probio-M8(Bifidobacterium lactis Probio-M8)，其分类命名为乳双歧杆菌Bifidobacterium lactis，该菌株己保藏于中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2019年9月20日，保藏编号为CGMCC No.18610；所述乳双歧杆菌Probio-M8为革兰氏阳性菌，琼脂平板生成直径为1-2mm的凸圆形乳白色菌落，边缘完整，表面光滑，细胞形态呈哑铃状杆菌，两端规则，有许多明显节点，所述乳双歧杆菌Probio-M8为异型发酵。

本发明涉及的一株干酪乳杆菌Zhang和一株乳双歧杆菌Probio-M8，是两株具有良好的胃肠液和胆盐耐受性的益生菌菌株。

本发明如下实施例中，所述复合益生菌的效果以本领域公知的可抑制幽门螺杆菌的Pylopass DSM17648为对照菌株。

实施例1菌株氧化还原能力测定

细胞悬液和无细胞悬液的制备

细胞悬液的制备：分别将保存的两种菌剂在37℃培养24h并进行厌氧活化至三代后，于4℃、8000×g离心10min，收集发酵上清液备用。分别用灭菌PBS洗涤三次菌体后重悬调整菌液浓度至10⁸CFU/mL(OD_595nm值为1.0)，1：1混合制得细胞悬液。

无细胞悬液的制备：分别将两种细胞悬液超声波冰浴10min(工作10s；间隔10s；280w；Φ2)，于4℃、10000×g离心10min，显微镜下检查无完整细胞，收集上清液于无菌离心管中，1：1混合制得无细胞悬液。

1、菌株清除DPPH自由基能力测定

分别取1mL上述发酵上清液(细胞悬液、无细胞悬液)加入1mL DPPH无水乙醇溶液(0.2mmol/L)，摇匀后室温避光放置30min，于4℃、6000×g离心10min，各自取上清液于517nm处测定吸光度Ai值并记录。空白组Aj是以等体积无水乙醇替代DPPH无水乙醇溶液；对照组A0是以等体积蒸馏水替代样液；使用等体积蒸馏水和无水乙醇的混合液进行空白调零。计算公式如下：

式中：A0－对照组吸光度；

Ai－样品组吸光度；

Aj－空白组吸光度。

测试结果见下表1。

表1复合菌株清除DPPH自由基能力

菌株名称	发酵上清液(％)	无细胞悬液(％)	细胞悬液(％)
				复合菌株	78.28±0.14	45.11±0.09	40.63±0.09
Pylopass DSM17648	74.15±0.21	46.23±0.01	38.18±0.03

可见，本发明所述干酪乳杆菌Zhang和乳双歧杆菌Probio-M8复合菌株各组分对DPPH均有一定的清除能力，但菌株发酵上清液的DPPH清除能力相对其他两组更好，且高于75.0％。

2、菌株清除羟自由基能力测定

按照羟自由基测定试剂盒(Fenton比色法)说明进行操作，于550nm处测定吸光度并计算。

测试结果见下表2。

表2复合菌株清除羟自由基能力

菌株名称	发酵上清液(％)	无细胞悬液(％)	细胞悬液(％)
				复合菌株	46.10±0.38	32.22±0.46	29.11±0.75
Pylopass DSM17648	41.35±0.25	30.56±0.07	32.17±0.43

可见，本发明所述复合菌株各组分对羟自由基也均有一定的清除能力，且菌株发酵上清液的羟自由基清除率能力较高，达到40.0％以上。

3、菌株还原能力测定

分别取0.5mL上述发酵上清液(细胞悬液、无细胞悬液)加入1％(w/v)铁***溶液和PBS(0.2mol/L；pH6.6)各0.5mL混于10mL离心管中，50℃水浴20min后急冷，加入10％三氯乙酸0.5mL，于4000×g离心10min，取1mL上清液加入0.1％三氯化铁溶液和蒸馏水各1mL，混匀静置10min后，于700nm处测定吸光度As并记录。空白组Ab以等体积PBS替代样液。公式如下：

式中：As－样品组吸光度；

Ab－空白组吸光度。

测试结果见下表3。

表3复合菌株还原能力测定

可见，本发明所述复合菌株各组分均有一定的还原能力，且菌株发酵上清液的还原能力显著高于无细胞悬液和细胞悬液，OD_700nm值达到1.55。

实施例2菌株抑制幽门螺杆菌能力测定

幽门螺杆菌的活化及培养

将幽门螺杆菌冻存管从-80℃取出后，放入37℃水浴2分钟解冻，解冻后混匀，吸取幽门螺杆菌菌悬液于哥伦比亚血平板上，用涂布棒将菌液均匀覆盖培养基表面，放入三气培养箱(85％ N₂、10％ CO₂、5％ O₂)静置培养72h。经活化两代后，将哥伦比亚血平板表面的菌落用生理盐水洗脱后制成菌悬液，备用。

菌株的活化及培养

将菌株冻存管从-80℃取出后放置室温解冻，于MRS液体培养基中37℃需氧培养,菌株活化两代后制成菌悬液，备用。

不同比例复合菌株和幽门螺杆菌

本实施例中，不同比例复合菌株和幽门螺杆菌比例如下表4。

表4不同比例的复合菌株和幽门螺杆菌比例明细

1、菌株抑制幽门螺杆菌尿素酶活性能力测定

幽门螺杆菌菌体表面有尿素酶，能分解宿主体内尿素产生氨，中和胃酸，保护菌体免受伤害。尿素酶能够分解尿素提高溶液pH，使指示溶液变色，其活性可以由测定溶液在波长550nm处的吸光度值来反映。

根据麦氏比浊管调节复合菌株菌悬液和幽门螺杆菌菌悬液的活菌数，按照复合菌株比幽门螺杆菌1：1、5：1和10：1的比例在96孔板中，分别吸取40μL幽门螺杆菌菌悬液和10μL复合菌株菌悬液混匀后，放入三气培养箱中共培养48h，加入150μL尿素酶测试液，震荡后用酶标仪在550nm处测定其吸光值。仅用尿素酶测试液测定的结果作为空白组，用BHI液体培养基代替复合菌株菌悬液测定的结果作为对照组。

本发明所述复合菌株抑制幽门螺杆菌尿素酶活性能力测定结果见下表5。

表5复合菌株抑制幽门螺杆菌尿素酶活性能力测定

可见，在所述复合菌株比幽门螺杆菌1：1、5：1和10：1的比例条件下，OD_550nm值均低于对照组，说明不同浓度的复合菌株均可有效抑制幽门螺杆菌的尿素酶活性。

2、菌株抑制幽门螺杆菌生长能力测定

灭菌后的素琼脂，倒入一次性平板，静置30分钟等待凝固，将灭过菌的牛津杯按照适宜间隔放置刚倒的培养基上，幽门螺杆菌按照1％的接种量接种于15mL哥伦比亚培养基(含7％无菌绵羊血)，充分混匀后倒入平板，使培养基均匀覆盖平板表面无气泡，等待凝固后用镊子将牛津杯取出，按照复合菌株比幽门螺杆菌1：1、5：1和10：1的比例，分别吸取100μL不同活菌数的复合菌株菌悬液至圆孔中，将平板放置于三气培养箱中37℃静置培养48h，测量抑菌圈(mm)的大小。

利用牛津杯法进行抑菌实验，测定抑菌圈直径，初步探究不同比例下复合菌株对幽门螺杆菌的抑制作用，测试结果见下表6。

表6复合菌株抑制幽门螺杆菌生长能力测定

可见，随着复合菌株浓度的增加，抑菌圈直径也逐渐增大。通过比例为5：1和10：1的抑菌圈直径结果来看，复合菌株可有效抑制幽门螺杆菌。

实施例3菌株自凝集能力测定

1、复合菌株自凝集能力

以所述复合菌株制备菌悬液，用酶标仪调节OD_600nm＝0.5±0.05后，取1mL菌悬液于灭菌的1.5mL离心管中，室温静置培养，分别在静置1h、2h、3h、4h、5h、6h、24h和48h后吸取上层液体，测试600nm处的吸光值，计算自凝集率(％)，公式如下：

式中：A0－菌株自凝集前在600nm的初始吸光值；

At－静置t小时后在600nm的吸光值。

所述复合菌株的自凝集能力测试结果见下表7。

表7所述复合菌株自凝集能力结果

可见，随着时间的延长，菌株表面自凝聚能力增强；静置24h后，复合菌株显示出了更加明显的的自凝集能力，达到90.0％以上。

2、复合菌株与幽门螺杆菌交互凝集能力

按照前述方法进行复合菌株和幽门螺杆菌制备菌悬液，用酶标仪调节OD_600nm＝0.5±0.05后，取等量的实验菌株和幽门螺杆菌菌悬液混合于灭菌的1.5mL离心管中，彻底振荡5min，室温静置培养，分别在静置1h、2h、3h、4h、5h、6h、24h和48h后吸取上层液体，测试600nm处的吸光值，计算交互凝集率(％)，公式如下：

式中：Ax－交互凝集前在600nm处复合菌株的吸光值；

Ay－交互凝集前幽门螺杆菌在600nm处的吸光值；

Amin－静置t小时后混合菌液的吸光值。

所述复合菌株与幽门螺杆菌交互凝集能力测定结果见下表8。

表8复合菌株与幽门螺杆菌交互凝集能力测定结果

可见，随着静置时间延长，干酪乳杆菌Zhang和乳双歧杆菌Probio-M8复合菌株与幽门螺杆菌的交互凝集力也增强。静置24h后，交互凝集率达到90.0％以上。

综上，本实施例中，通过上述指标可以发现干酪乳杆菌Zhang和乳双歧杆菌Probio-M8复合菌株具有较稳定的拮抗幽门螺杆菌能力，对抑制幽门螺杆菌具有一定的作用。

实施例4菌株对幽门螺杆菌超微结构的影响

1、扫描电镜观察

双固定

样品在2.5％的戊二醛溶液中，4℃固定过夜；倒掉固定液，用0.1M，pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次，每次15min；用1％的锇酸溶液固定样品1-2h，小心取出锇酸废液，用0.1M，pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次，每次15min。

脱水

用梯度浓度(包括30％、50％、70％、80％、90％和95％六种浓度)的乙醇溶液对样品进行脱水处理，每种浓度处理15min；再用100％的乙醇处理一次，20min，最后，样品放置在新的100％乙醇里，结束前处理。

干燥及观察

于临界点干燥后进行镀膜，并进行观察，结果见附图1-3所示。

由图1-3所示结果可知，未与所述复合菌株菌悬液共培养的幽门螺杆菌，形态完好，呈弯曲杆状；而利用复合菌株菌悬液处理幽门螺杆菌4小时后，幽门螺杆菌出现凹陷、破裂等明显形态结构变化。

2、透射电镜(TEM)观察

双固定

样品在2.5％的戊二醛溶液中，4℃固定过夜，倒掉固定液，用0.1M，pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次，每次15min，用1％的锇酸溶液固定样品1-2h，小心取出锇酸废液，用0.1M，pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次，每次15min。

脱水

用梯度浓度(包括30％、50％、70％、80％四种浓度)的乙醇溶液对样品进行脱水处理，每种浓度处理15min，再过渡到90％和95％的丙酮溶液中，分别处理15min。最后用纯丙酮处理两次，每次20min。

渗透

用Spurr包埋剂与丙酮的混合液(V/V＝1/1)处理样品1h；用Spurr包埋剂与丙酮的混合液(V/V＝3/1)处理样品3h；室温下，纯包埋剂处理样品过夜。

包埋、切片及染色观察

将经过渗透处理的样品包埋起来，70℃加热过夜，即得到包埋好的样品；样品在LEICA EM UC7型超薄切片机中切片，获得70-90nm的切片；切片经柠檬酸铅溶液和醋酸双氧铀50％乙醇饱和溶液各染色5-10min；在Hitachi H-7650型透射电镜中观察，结果见附图4-6所示。

由图4-6所示结果可以看出，未与复合菌株菌悬液共培养的幽门螺杆菌，菌体保持良好；用复合菌株菌悬液处理幽门螺杆菌4小时后，幽门螺杆菌出现菌体破裂，内容物流失等现象。

实施例5复合菌株的应用

本实施例中，基于所述干酪乳杆菌Zhang和乳双歧杆菌Probio-M8复合菌株可用于制备粉剂样品。

将保存的菌株于MRS固体培养基上进行划线，37℃条件下培养48h后得到单一菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃条件下再次培养连续活化两代，得到活化液；将活化液按2％(v/v)的接种量接种于培养基中，37℃继续培养20h得到菌液；将菌液经12000g离心10min后得到菌泥；将菌泥使用生理盐水清洗后置于保护剂中得到菌悬液；最后将菌悬液冷冻干燥，得到菌粉，其活菌数为1×10¹¹CFU/g。

分别将干酪乳杆菌Zhang和乳双歧杆菌Probio-M8菌株菌粉按1：1比例混合后添加麦芽糊精稀释至活菌数为5×10¹⁰CFU/g，添加1-20g，另称取其他辅料1-50g，该辅料可为低聚半乳糖、菊粉、水苏糖或赤藓糖醇、麦芽糖醇及抗性糊精。按照配方称取复合菌株的冻干粉，混合均匀，然后加入上述辅料，混合均匀。按以上制作方法混合得到干酪乳杆菌Zhang和乳双歧杆菌M8复合粉剂样品。

实施例6复合菌株的应用

本实施例中，基于所述干酪乳杆菌Zhang和乳双歧杆菌Probio-M8复合菌株可用于制备发酵乳。

将菌株于MRS固体培养基上进行划线，37℃条件下培养48h后得到单一菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃条件下再次培养连续活化两代，得到活化液；将活化液按2％(v/v)的接种量接种于培养基中，37℃继续培养20h得到菌液；将菌液经12000g离心10min后得到菌泥；将菌泥使用生理盐水清洗后置于保护剂中得到菌悬液；最后将菌悬液冷冻干燥，得到菌粉，其活菌数为1×10¹¹CFU/g。

将干酪乳杆菌Zhang和乳双歧杆菌Probio-M8与基础发酵剂按一定比例混合后进行发酵乳制作，在纯牛奶中添加一定比例蔗糖加热至65℃进行均质，均质条件为18MPa-20MPa，95℃保温杀菌5min进行冷却；至样品温度降至37℃以0.03％(v/v)的接种量将发酵剂接种，置于37℃下进行发酵；发酵完成后置于4℃下冷藏24h进行后熟，得到发酵乳样品。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种可抑制幽门螺杆菌的复合益生菌组合物，其特征在于，所述复合益生菌组合物的活性成分包括干酪乳杆菌Zhang和乳双歧杆菌Probio-M8；

所述干酪乳杆菌Zhang，其分类名门为干酪乳杆菌Lactobacillus casei，保藏于中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCC No.5469；

所述乳双歧杆菌Probio-M8，其分类名门为乳双歧杆菌Bifidobacterium lactis，保藏于中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC No.18610。

2.根据权利要求1所述可抑制幽门螺杆菌的复合益生菌组合物，其特征在于，所述干酪乳杆菌Zhang和所述乳双歧杆菌Probio-M8的总活菌数不低于1×10⁶CFU/mL或1×10⁶CFU/g。

3.根据权利要求1或2所述可抑制幽门螺杆菌的复合益生菌组合物，其特征在于，所述干酪乳杆菌Zhang和乳双歧杆菌Probio-M8的活菌数比例为(1-10)：(10-1)。

4.由权利要求1-3任一项所述复合益生菌组合物和/或其灭活物、代谢物制备的可抑制幽门螺杆菌的益生菌制剂。

5.根据权利要求4所述的益生菌制剂，其特征在于，所述益生菌制剂包括液体制剂或固体制剂。

6.一种制备权利要求4或5所述益生菌制剂的方法，其特征在于，包括将权利要求1-3任一项所述复合益生菌组合物进行菌体培养的步骤，以及进行选定剂型加工的步骤。

7.权利要求1-3任一项所述复合益生菌组合物及其灭活物、代谢物用于制备预防或治疗幽门螺杆菌感染的产品的用途。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述产品包括药物制剂；

所述药物制剂包括粉剂、散剂、片剂或胶囊剂。

9.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述产品包括功能性食品；

所述功能性食品包括乳制品、豆制品或饮料。

10.所述干酪乳杆菌Zhang和/或所述乳双歧杆菌Probio-M8用于制备可抑制幽门螺杆菌的益生菌制剂的用途；

所述干酪乳杆菌Zhang，其分类名门为干酪乳杆菌Lactobacillus casei，保藏于中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCC No.5469；

所述乳双歧杆菌Probio-M8，其分类名门为乳双歧杆菌Bifidobacterium lactis，保藏于中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC No.18610。

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