CN115494242A - 细胞角蛋白19片段化学发光检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种细胞角蛋白19片段(CYFRA21‑1)化学发光检测试剂盒，涉及免疫分析医学领域。所述检测试剂盒包括包被的羊抗鼠的磁微粒试剂、鼠源抗体稀释液、碱性磷酸酶标记物、校准品、发光底物液和清洗液；所述鼠源抗体稀释液为1％BSA的抗体稀释液；所述碱性磷酸酶标记物为CYFRA21‑1抗体碱性磷酸酶标记物；所述校准品包括CYFRA21‑1校准品。本发明能检测CYFRA21‑1指标，缩短偶联标记时长。
Description
技术领域
本发明涉及生物类体外诊断技术领域，具体涉及一种细胞角蛋白19片段化学发光检测试剂盒。
背景技术
细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)是细胞角蛋白19的可溶性片段，分子量约30000道尔顿。CYFRA21-1主要用于非小细胞肺癌的疗效观察和复发监测，对肺炎、肺结核、慢性支气管炎、支气管哮喘、肺气肿等良性疾病也具有良好的特异性。血清CYFRA21-1检测，结合影像或内窥镜检测，可对肺癌做出初步诊断。如果肺部存在不清晰的环形阴影，同时血清CYFRA21-1浓度＞30ng/ml，表示原发性支气管肺癌的可能性非常高。CYFRA21-1的血清高浓度水平提示肿瘤晚期和预后不良；血清浓度迅速下降到正常范围表示成功治疗，但检测值正常或仅轻度升高也不能排除肿瘤的存在，应结合临床症状和影像学结果进行判断。
目前，细胞角蛋白19片段临床检测的试剂价格较高，例如大多数磁微粒化学发光检测试剂盒采用FITC标记或吖啶酯标记，存在FITC荧光基团易猝灭；吖啶酯标记物的保存期太短，偶联后发光值短期内可大幅度下降的缺陷，此外制备成本也较高。
因此有必要开发一种对细胞角蛋白19片段检测灵敏度高与良好稳定性并能降低检测/制备成本的检测试剂盒。
发明内容
本发明提供一种检测CYFRA21-1化学发光检测试剂盒，结合分子实验，通过羊抗鼠抗体溶液与磁珠偶联，得到包被的羊抗鼠的磁微粒试剂，配合碱性磷酸酶标记物、鼠源抗体稀释液、校准品、发光底物液和清洗液，制备了一种简单高效的磁微粒化学发光检测试剂盒。
本发明提供技术方案如下：
细胞角蛋白19片段化学发光检测试剂盒，包括包被的羊抗鼠的磁微粒试剂、碱性磷酸酶标记物、鼠源抗体稀释液、校准品、发光底物液和清洗液；
所述鼠源抗体稀释液为含1％BSA的CYFRA21-1鼠源单克隆抗体溶液；
所述碱性磷酸酶标记物为CYFRA21-1抗体碱性磷酸酶标记物；
所述校准品为CYFRA21-1校准品。
进一步的，所述包被的羊抗鼠的磁微粒试剂的制备方法包括：
采用缓冲液稀释羊抗鼠抗体，得到稀释后的羊抗鼠抗体溶液；
将稀释后的羊抗鼠抗体溶液与磁珠偶联，得到浓度为1mg/ml的包被羊抗鼠抗体的磁微粒试剂。
进一步的，所述鼠源抗体稀释液的制备方法包括：
将鼠源CYFRA21-1抗体溶于1％BSA溶液中，配置成1mg/ml的鼠源抗体稀释液。
进一步的，所述碱性磷酸酶标记物的制备方法包括：
对CYFRA21-1抗体进行碱性磷酸酶标记，用含100g/L牛血清的TBS缓冲液按2000：1的比例稀释碱性磷酸酶标记的CYFRA21-1抗体，得到碱性磷酸酶标记物。
进一步的，所述发光底物液为金刚烷胺衍生物。
进一步的，所述清洗液的组分及含量为：
吐温-20 3％
pH7.4的磷酸盐缓冲液 0.015mol/L。
进一步的，所述缓冲液为pH9.5，55mmol/L的Na2CO3-NaHCO3缓冲液，所述稀释后的羊抗鼠抗体溶液的浓度为10ug/mL。
进一步的，所述校准品由校准品稀释液稀释CYFRA21-1抗原得到。
进一步的，所述校准品稀释液组分及含量为：
所述校准品稀释液的pH值为7.6。
进一步的，所述校准品稀释液稀释CYFRA21-1抗原的浓度为0～500ng/ml。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明的CYFRA21-1化学发光检测试剂盒
与传统技术(FITC标记、吖啶酯标记)相比，本技术采用与抗试剂同源性的磁珠，减少了其他免疫标记物与抗原、抗体反应的偶联时长，快速、简便。磁珠偶联羊抗鼠抗体为通用磁珠，应用范围广，成本低易于获得，并且其线性相关性和精密度均符合国家要求。
具体实施方式
为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施例进行详细描述。需要说明的是，实施例中所用各试剂材料均可商购获得，所用各仪器设备也是所属领域的现有仪器设备，未注明具体条件的实验方法为所属领域熟知的常规方法和常规条件，或按照制造商所建议的条件。
实施例1
本实施例的CYFRA21-1化学发光检测试剂盒的制备方法如下：
1、包被羊抗鼠的磁微粒试剂的制备
用MES缓冲液洗涤磁微粒3次后，进行40min活化，用MES缓冲液进行1次洗涤，然后加入羊抗鼠抗体，进行偶联，然后用MES缓冲液洗涤磁微粒3次后加入封闭剂，进行封闭，用Tris缓冲液洗涤3次后，得到标记有羊抗鼠抗体的磁微粒结合物的溶液。
2、鼠源抗体稀释液的制备
将CYFRA21-1抗体溶于1％牛血清白蛋白(BSA)溶液中，配置成1mg/ml的鼠源抗体稀释液。
3、碱性磷酸酶标记物的制备
CYFRA21-1单克隆抗体的碱性磷酸酶标记物的制备
步骤1：采用改良过碘酸钠-乙二醇法对CYFRA21-1鼠源单克隆抗体进行碱性磷酸酶标记，得到CYFRA21-1鼠源单克隆抗体碱性磷酸酶标记物；
其中，改良过碘酸钠-乙二醇法为碱性磷酸酶标记的常用方法，属于现有技术，在此不再赘述。
步骤2：用含100g/L小牛血清的TBS缓冲液按2000：1的比例稀释CYFRA21-1单克隆抗体碱性磷酸酶标记物，保存于-20℃环境；
其中，TBS缓冲液的PH值为7.6。
4、校准品的制备
使用校准品稀释液分别溶解CYFRA21-1抗原，配置成如表1中所示的目标浓度的校准品。
表1 CYFRA21-1校准品的浓度
其中，校准品稀释液组分及含量为：
5、发光底物液的制备
将8000ul金刚烷衍生物CSPD、450ml浓度为0.05mol/L、PH9.5的Tris-Hcl缓冲液、10×50mL的增强剂、500ul浓度为1mol/L的MgCl2加入灭火容器中，震荡均匀，避光保存在2～8℃环境下，最终得到发光底物液510ml。
其中，增强剂可以采用曲拉通-100。
6、清洗液的制备
本实施例中清洗液的组分及含量为：
磷酸盐缓冲液pH7.4 0.01mol/L
吐温-20 2％；
在1000mL的磷酸盐缓冲液中加入20mL的吐温-20，制备成清洗液。
7、CYFRA21-1化学发光检测试剂盒的组装
将包被的磁微粒试剂、鼠源抗体稀释液、碱性磷酸酶标记物、校准品、发光底物液和清洗液进行组装，得到CYFRA21-1化学发光检测试剂盒。
临床数据
对试制的三批实施例1的CYFRA21-1化学发光检测试剂盒性能检测：1、CYFRA21-1线性相关性检测
将待检测的样本、CYFRA21-1鼠源单克隆抗体溶液、CYFRA21-1抗体碱性磷酸酶标记物、发光底物液反应。检测发光值，如表2所示：
表2 CYFRA21-1线性相关性检测结果
2、准确性检测
分别使用实施例1的CYFRA21-1化学发光检测试剂盒，将CYFRA21-1抗原校准品配置成与试剂盒内校准品相应的浓度点，用全自动化学发光测定仪测定，国家校准品每个浓度平行测定2次，实施例1校准品每个浓度平行测定3次，计算平均值，用四参数Logisticlog方程拟合剂量-反应曲线，用SPSS软件对国家标准品与校准品所测的发光值进行独立样本t检验，计算P值，如表3所示。
表3实施例1检测试剂盒的准确性检测结果
由表3可以看出，使用全自动化学发光测定仪对CYFRA21-1的三批检测试剂盒检测的P值最小值为0.95，均大于0.05；效价比为1.005～1.016，在0.900～1.100之间，均符合要求。
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.细胞角蛋白19片段化学发光检测试剂盒，其特征在于，包括包被的羊抗鼠的磁微粒试剂、碱性磷酸酶标记物、鼠源抗体稀释液、校准品、发光底物液和清洗液；
所述鼠源抗体稀释液为含1％BSA的CYFRA21-1鼠源单克隆抗体溶液；
所述碱性磷酸酶标记物为CYFRA21-1抗体碱性磷酸酶标记物；
所述校准品为CYFRA21-1校准品。
2.根据权利要求1所述的细胞角蛋白19片段化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述包被的羊抗鼠的磁微粒试剂的制备方法包括：
采用缓冲液稀释羊抗鼠抗体，得到稀释后的羊抗鼠抗体溶液；
将稀释后的羊抗鼠抗体溶液与磁珠偶联，得到浓度为1mg/ml的包被羊抗鼠抗体的磁微粒试剂。
3.根据权利要求1所述的细胞角蛋白19片段化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述鼠源抗体稀释液的制备方法包括：
将鼠源CYFRA21-1抗体溶于1％BSA溶液中，配置成1mg/ml的鼠源抗体稀释液。
4.根据权利要求1所述的细胞角蛋白19片段化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述碱性磷酸酶标记物的制备方法包括：
对CYFRA21-1抗体进行碱性磷酸酶标记，用含100g/L牛血清的TBS缓冲液按2000：1的比例稀释碱性磷酸酶标记的CYFRA21-1抗体，得到碱性磷酸酶标记物。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的细胞角蛋白19片段化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述发光底物液为金刚烷胺衍生物。
6.根据权利要求1～4中任一项所述的细胞角蛋白19片段化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述清洗液的组分及含量为：
吐温-20 3％
pH7.4的磷酸盐缓冲液0.015mol/L。
7.根据权利要求2所述的细胞角蛋白19片段化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为pH9.5，55mmol/L的Na2CO3-NaHCO3缓冲液，所述稀释后的羊抗鼠抗体溶液的浓度为10ug/mL。
8.根据权利要求1～4中任一项所述的细胞角蛋白19片段化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述校准品由校准品稀释液稀释CYFRA21-1抗原得到。
9.根据权利要求8中所述的细胞角蛋白19片段化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述校准品稀释液组分及含量为：
所述校准品稀释液的pH值为7.6。
10.根据权利要求8所述的细胞角蛋白19片段化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述校准品稀释液稀释CYFRA21-1抗原的浓度为0～500ng/ml。
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| CN202211205854.4A CN115494242A (zh) | 2022-09-30 | 2022-09-30 | 细胞角蛋白19片段化学发光检测试剂盒 |
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|---|---|
| CN115494242A true CN115494242A (zh) | 2022-12-20 |
Family
ID=84472039
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211205854.4A Pending CN115494242A (zh) | 2022-09-30 | 2022-09-30 | 细胞角蛋白19片段化学发光检测试剂盒 |
Country Status (1)
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2022
- 2022-09-30 CN CN202211205854.4A patent/CN115494242A/zh active Pending
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