CN115494171B - 一种消毒液中氯己定和苯扎铵类化合物的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种消毒液中氯己定和苯扎铵类化合物的检测方法。该消毒液中氯己定和苯扎铵类化合物的检测方法包括如下步骤：S1.将消毒液过活化后的固相萃取柱，然后依次用有机酸水溶液和淋洗剂对固相萃取柱进行淋洗，再用氨水甲醇溶液对固相萃取柱进行洗脱，收集洗脱液，作为待测液；S2.采用外标法，运用HPLC‑MS/MS技术对待测液进行分析，经计算后得出消毒液中氯己定和苯扎铵类化合物的含量。该检测方法能实现消毒液中氯己定和苯扎铵类化合物的净化和有效分离，从而实现氯己定和苯扎铵类化合物含量的准确检测，回收率可达到86.4～115.70％，精密度2.7～6.7％。

Description

一种消毒液中氯己定和苯扎铵类化合物的检测方法
技术领域
本发明涉及检测技术领域，更具体地，涉及一种消毒液中氯己定和苯扎铵类化合物的检测方法。
背景技术
近年来，各类消毒液的使用逐渐成为人们生活中必不可少的一部分。常见的消毒液类众多，有氧化型如过氧乙酸、双氧水等；溶剂型如乙醇、丙醇、异丙醇等；表面活性剂型如醋酸氯己定、苯并咪唑类等；另外还有阳离子型如烷基胍类和季铵盐类等。其中具有表面活性的阳离子杀菌剂化学性质稳定，具有成本低、广谱杀菌、低毒高效的特点，因此具有表面活性作用的阳离子杀菌剂受到行业越来越多的关注，其在医疗、食品、日化、纺织品以及水处理等领域都有广泛的应用。
氯己定是具有表面活性的双胍类离子型化合物，是阳离子杀菌剂的一种。目前消毒产品独立使用单配方制剂的情况较少，大多复配多种有效成分使用，常见与氯己定复配的有醇类和季铵盐等。苯扎铵类化合物也是具有表面活性的阳离子杀菌剂。随着人们对此类物质的深入研究，发现氯己定及其盐类(如盐酸氯己定、醋酸氯己定及葡萄糖酸氯己定等)可能会导致结膜炎和严重的角膜损伤，对使用者造成附加的伤害，当氯己定吸入并到达肺泡，很可能直接诱发急性呼吸窘迫综合征；苯扎铵类化合物(如，苯扎氯铵、苯扎溴铵等)可能对上皮细胞有损害。鉴于它们对人体健康存在一定的风险，我国2015年版《化妆品安全技术规范》规定氯己定及其盐类总量不得超过0.3％的限值，GB 38850-2020《消毒剂原料清单及禁限用物质》规定黏膜消毒剂中氯己定类含量不得超过5g/L，苯扎铵类化合物不得超过2g/L。因此，建立消毒液中针对该两类表面活性阳离子杀菌剂的定量检测方法对于确保进出口消毒液的质量安全和保障消费者的使用安全具有重要意义。
虽然关于氯己定和苯扎铵类化合物的检测技术已有相关报道，但主要是针对化妆品、药片中的氯己定和苯扎铵类化合物的检测，比如文献(化妆品质量安全检测技术研究进展，孟宪双等，分析测试学报，2016，35(5)：574)报道出了检测化妆品中的苯扎氯铵的含量的方法。目前针对消毒液中的氯己定和苯扎铵类化合物的检测还无相关报道。
消毒液含有对氯己定和苯扎铵类化合物的检测造成干扰的各种干扰物，包括极性非离子表面活性剂、低聚物、分散剂、多元醇、长链脂肪酸(酯)类物质、香料等，这些干扰物会使得氯己定和苯扎铵类化合物的检测准确性降低。将氯己定和苯扎铵类化合物从含多种干扰物的消毒液中有效分离开来，才能实现对消毒液中氯己定和苯扎铵类化合物的准确检测。
因此，需建立一种准确检测消毒液中的氯己定和苯扎铵类化合物的含量的方法。
发明内容
本发明的目的是克服上述现有技术中针对消毒液中的氯己定和苯扎铵类化合物的检测方法的相关研究缺乏或的难以准确检测消毒液中氯己定和苯扎铵类化合物含量的问题，提供一种消毒液中氯己定和苯扎铵类化合物的检测方法。该检测方法能实现消毒液中氯己定和苯扎铵类化合物的净化和有效分离，从而实现氯己定和苯扎铵类化合物含量的准确检测，回收率可达到86.4～115.70％，精密度 2.7～6.7％。此外，该方法的检出限为0.20～0.95ng/mL，定量限0.57～2.84ng/mL。
本发明的上述目的通过以下技术方案实现：
一种消毒液中氯己定和苯扎铵类化合物的检测方法，包括如下步骤：
S1.将消毒液过活化后的固相萃取柱，然后依次用有机酸水溶液和淋洗剂对固相萃取柱进行淋洗，再用氨水甲醇溶液对固相萃取柱进行洗脱，收集洗脱液，作为待测液；
S2.采用外标法，运用HPLC-MS/MS技术对待测液进行分析，经计算后得出消毒液中氯己定和苯扎铵类化合物的含量；
步骤S1所述固相萃取柱的固定相为硅胶为基质键合苯磺酸官能团的吸附剂；所述淋洗剂为甲醇或甲醇水溶液。
消毒液中氯己定和苯扎铵类化合物的净化分离效果会影响到期回收率。本发明的发明人通过研究发现，除固相萃取柱的类型的选取是影响净化分离效果的重要因素外，对吸附后的固相萃取柱的淋洗处理、淋洗剂的选取以及洗脱剂的选取也非常关键。选用固定相为硅胶为基质键合苯磺酸官能团的吸附剂的固相萃取柱对消毒液进行处理，固定相中的苯磺酸能与氯己定正离子和苯扎铵正离子形成弱相互作用，再叠加反相保留的作用，能实现对氯己定和苯扎铵类化合物的有效吸附；在此基础上，先依次用有机酸水溶液和特定的淋洗剂(甲醇或甲醇水溶液) 对固相萃取柱进行淋洗，有机酸水溶液能使氯己定和苯扎铵类化合物更加牢固地吸附在固相萃取柱中，而特定的淋洗剂可将同样被吸附在固相萃取柱中的长链脂肪酸(酯)类物质、非离子表面活性剂等干扰物被冲洗走；然后再用氨水甲醇溶液对固相萃取柱进行洗脱，氨水甲醇溶液可有效将氯己定和苯扎铵类化合物洗出，且也有利于最终样液的浓缩。通过特定固定相的固相萃取柱、有机酸水溶液的淋洗、甲醇或甲醇水溶液的淋洗和氨水甲醇溶液的洗脱的配合，能对消毒液中氯己定和苯扎铵类化合物有效净化和分离，从而准确地测定消毒液中氯己定和苯扎铵类化合物的含量。
如果选取的固相萃取柱的固定相不恰当，比如选取ALN中性氧化铝柱，虽然ALN中性氧化铝柱能吸附氯己定和苯扎铵类化合物，但在淋洗过程中氯己定和苯扎铵类化合物容易被洗出，导致最后的回收率偏低；如选取Silica硅胶柱，虽然也能吸附氯己定和苯扎铵类化合物，但在淋洗过程中，长链脂肪酸(酯)类物质和聚醚多元醇与氯己定和苯扎铵类化合物可能一同被洗出，导致之后洗脱步骤时氯己定和苯扎铵类化合物浓度减少，导致回收率偏低。如果不进行有机酸水溶液的淋洗，则氯己定和苯扎铵类目标化合物不能牢固地结合在填料上，可能被淋洗剂洗出；如果淋洗剂不选用甲醇或甲醇水溶液，比如选用纯净水，则长链脂肪酸(酯)类物质、聚醚多元醇和非离子表面活性剂等干扰物不能有效地通过淋洗操作而去除，干扰物对后续氯己定和苯扎铵类化合物的检测产生干扰，导致回收率的***误差变大；如果洗脱液不选取氨水甲醇溶液，比如选用纯净水或甲醇，则可能导致氯己定和苯扎铵类化合物洗脱不完全而导致回收率偏低。
本发明的检测方法能实现消毒液中氯己定和苯扎铵类化合物的净化和有效分离，从而实现氯己定和苯扎铵类化合物含量的同时准确检测，回收率可达到 86.4～115.70％，精密度2.7～6.7％。此外，该方法的检出限为0.20～0.95ng/mL，定量限0.57～2.84ng/mL。
优选地，步骤S1中，将消毒液过活化后的固相萃取柱前，还包括对消毒液进行稀释的步骤。
更为优选地，所述稀释的具体过程为：将消毒液与甲醇水溶液混合，超声5～10min，定容，即完成稀释。
优选地，步骤S1中所述固相萃取柱为SCX强阳离子固相萃取柱。
优选地，步骤S1中所述固相萃取柱的填料质量为500～1000mg，填料上方的空间体积为3～6mL。
优选地，所述活化的具体过程为:采用甲醇水溶液对固相萃取柱进行活化。
优选地，步骤S1中所述有机酸水溶液中的有机酸为甲酸或乙酸中的至少一种。
更为优选地，所述有机酸水溶液的浓度为3％～4％。
更有优选地，所述有机酸水溶液的用量为2～3mL。
优选地，步骤S1中所述淋洗剂的用量为2～3mL；步骤S1中所述氨水甲醇溶液的用量为4～6mL。
采用该用量范围下的淋洗剂和氨水甲醇溶液，氯己定和苯扎铵类化合物的回收率更靠近100％，精密度更好。
优选地，步骤S1中所述淋洗剂为甲醇。
优选地，步骤S1中所述淋洗剂为甲醇水溶液时，甲醇水溶液中甲醇的体积分数为50％以上。
优选地，步骤S1中所述氨水甲醇溶液中氨水的体积分数为4％～5％。
采用该氨水的体积分数范围下的氨水甲醇溶液进行洗脱，氯己定和苯扎铵类化合物的回收率更靠近100％，精密度更好。
更有优选地，所述氨水中氨的质量分数为25～28％。
优选地，步骤S2中所述HPLC-MS/MS技术中的高效液相色谱的流动相A 为0.10～0.15％三氯乙酸的乙腈，流动相B为0.10～0.15％三氯乙酸水溶液。
选用0.10～0.15％三氯乙酸的乙腈作为流动相A，0.10～0.15％三氯乙酸水溶液作为流动相B，氯己定和苯扎铵类化合物出峰的峰型更好，从而使得检出限更低。
优选地，步骤S2中所述HPLCMS/MS技术中的高效液相色谱条件为：
色谱柱：C18色谱柱；
柱温：25～40℃；
进样体积为：5～20μL；
梯度洗脱程序为：0～1min，40％流动相B；1～2min，40％→90％流动相B； 2～7min，90％流动相B；7～8min，90％→40％流动相B；8～10min40％流动相B；
流速：0.2～0.3mL/min。
优选地，步骤S2中所述HPLCMS/MS技术中的串联质谱条件为：电喷雾离子源；干燥气温度：300～350℃，氮气流速：7～10L/min，雾化器压力：45psi，毛细管电压：3500～4000V，碰撞能量0～60eV，驻留时间50～150ms；采用MRM 模式采集。
优选地，步骤S2中所述苯扎铵类化合物为十二烷基二甲基苄基氯化铵、十四烷基二甲基苄基氯化铵或十六烷基二甲基苄基氯化铵中的至少一种。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明的检测方法能实现消毒液中氯己定和苯扎铵类化合物的净化和有效分离，从而实现氯己定和苯扎铵类化合物含量的准确检测，回收率可达到 86.4～115.70％，精密度2.7～6.7％。此外，该方法的检出限为0.20～0.95ng/mL，定量限0.57～2.84ng/mL。
附图说明
图1为四因素交互影响的C12-BAC回收率等高线与响应面图。
图2为氯己定和苯扎氯铵(C12-BAC、C14-BAC、C16-BAC)的多反应监测色谱图。
图3为应用例的典型消毒液样品经稀释进样后的多反应监测色谱图。
具体实施方式
为了更清楚、完整的描述本发明的技术方案，以下通过具体实施例进一步详细说明本发明，应当理解，此处所描述的具体实施例仅用于解释本发明，并不用于限定本发明，可以在本发明权利限定的范围内进行各种改变。
(1)本发明的实施例用到的仪器和试剂如下：
Agilent 1200型液相色谱仪，配有G1312B二元泵；Agilent 6410三重四级杆串联质谱仪，电喷雾离子源(ESI)和MassHunter软件数据处理***(美国安捷伦公司)；ZORBAXEclipse XDB-C18(2.1×50mm,1.8μm)色谱柱；AS20500A超声波发生器(AUTO Science公司)；Milli-Q超纯水机(美国Millipore公司)；SCX 强阳离子固相萃取柱(1000mg/6mL，固定相为硅胶为基质键合苯磺酸官能团的吸附剂)。
葡萄糖氯己定(CHD，99.0％)购自BePure公司，苯扎氯铵(C12-BAC、 C14-BAC、C16-BAC纯度＞98％)购自TCI公司。甲醇(HPLC级)购自TEDIA 公司，三氯乙酸(分析纯，西陇科学)，甲酸(分析纯，广州化学试剂厂)，氨水 (分析纯，广州化学试剂厂)，水为超纯水。
(2)标准工作溶液如下：
称取葡萄糖氯己定和苯扎氯铵(C12-BAC、C14-BAC、C16-BAC)标准物质，分别用甲醇溶解，配制成浓度为1000μg/mL的单标储备液。移取50μL以上各单标储备液至同一容量瓶，用甲醇定容至25mL，配制成浓度为2.0μg/mL的标准混合中间液。移取以上标准混合中间液，以超纯水为溶剂，配制成浓度分别为1、 2、10、50、200、500ng/mL的系列标准工作溶液。
实施例1
本实施例提供一种消毒液中氯己定和苯扎铵类化合物的检测方法，包括如下步骤：
1、样品前处理
稀释：取某消毒液100μL，记录质量(精确至0.001g)并加入到20mL的螺口旋盖玻璃瓶中，然后加入15mL甲醇水溶液(v(甲醇)/v(水)＝1/1)，常温下超声5～10min，再全部转移至100mL容量瓶内，再用甲醇水溶液(v(甲醇) /v(水)＝1/1)多次洗涤螺口旋盖玻璃瓶瓶壁，洗涤液也转移至容量瓶，定容至刻度，得稀释后的消毒液。
净化分离：取1mL稀释后的消毒液，过已活化的SCX强阳离子固相萃取柱 (用5mL甲醇水溶液(v(甲醇)/v(水)＝1/1)对SCX强阳离子固相萃取柱进行活化)，待充分吸收后，依次采用3mL 4％甲酸水溶液和3mL甲醇对固相萃取柱进行淋洗，当甲醇全部通过固相萃取柱后，弃去接收的淋洗液，更换接收瓶。然后向固相萃取柱加入5mL 5％氨水甲醇溶液进行洗脱，收集洗脱液，氮吹至干后用甲醇水溶液(v(甲醇)/v(水)＝1/1)定容至10mL，得到待测液，待上机测试。
2、高效液相色谱—串联质谱测试
2.1高效液相色谱条件
ZORBAX Eclipse XDB-C18(2.1mm×50mm，1.8μm)色谱柱。柱温35℃。进样体积5μL。流动相A为0.1％三氯乙酸的乙腈，流动相B为0.1％三氯乙酸水溶液。采用梯度洗脱程序：0～1min，40％流动相B；1～2min，40％→90％流动相 B；2～7min，90％流动相B；7～8min，90％→40％流动相B；8～10min40％流动相B。流速：0.3mL/min。
2.2质谱条件
电喷雾离子源(ESI)，正离子多反应监控模式(MRM)，干燥气温度：350℃，氮气流速：7L/min，雾化器压力：45psi，毛细管电压：3800V，碰撞能量0～60eV，驻留时间100ms。
采用外标法，待测液上机测定，通过计算后即得出消毒液中氯己定和苯扎铵类化合物的含量。
实施例2前处理的条件选择和优化
2.1固相萃取柱的选择
实验室分别选用相同柱容量的SCX强阳离子固相萃取柱，Silica硅胶柱 (1000mg，6mL)，ALN中性氧化铝柱(1000mg，6mL)进行对比试验：依次使用3mL 4％甲酸水溶液和3mL甲醇对过完消毒液后的固相萃取柱进行淋洗，然后再用5％氨水甲醇溶液对固相萃取柱进行洗脱，洗脱出氯己定和苯扎铵类化合物。结果表明，以上三种固相萃取柱对消毒液中干扰物质的净化效果差异较大，具体为：ALN中性氧化铝柱对含氮化合物有一定保留，但在淋洗过程中目标物氯己定和苯扎铵类化合物容易与长链脂肪酸(酯)类物质和聚醚多元醇等干扰物一同被洗出，导致之后洗脱步骤时氯己定和苯扎铵类化合物浓度减少；Silica硅胶柱由于能与含苯环物质能形成弱的相互作用，而对目标物的保留作用更强一些，但在淋洗过程中，仍有部分目标物与脂肪酸、聚醚多元醇和非离子表面活性剂等干扰物一起洗洗出，导致回收率下降。SCX强阳离子固相萃取柱由于离子相互作用对氯己定和苯扎铵类化合物有很好的保留能力，且能在淋洗过程中将干扰物淋洗掉，氯己定和苯扎铵类化合物的回收率良好，回收率达到86.4～115.70％，因此选用SCX强阳离子固相萃取柱作为固相萃取柱。
2.2淋洗和洗脱条件的优化
消毒液过完SCX强阳离子固相萃取柱后，采用3％的甲酸水溶液对固相萃取柱进行淋洗，使氯己定和苯扎铵类化合物更加牢固地吸附在固相萃取柱中。如不对采用3％的甲酸水溶液对固相萃取柱进行淋洗，则对固相萃取柱中淋洗过程中，氯己定和苯扎铵类化合物即被淋洗出，回收率低于80％。
选取不同浓度的淋洗剂(因素A，甲醇、甲醇水溶液(v(甲醇)/v(水) ＝1/1)和水)、不同的淋洗剂体积B(因素B，3mL、4.5mL和6mL)、不同氨水含量的洗脱剂(因素C，2％氨水甲醇溶液、5％氨水甲醇溶液和8％氨水甲醇溶液)和不同的洗脱剂体积(因素D，3mL、4.5mL和6mL)进行实验，验证这些条件对C12-BAC的回收率的影响。实验组的设置如表1所示：
表1不同淋洗和洗脱条件的实验组
采用响应面模型通过试验确认最优参数，对前处理的净化和浓缩条件进行优化。以某消毒液样品进行试验，选取净化浓缩步骤的四项参数淋洗剂中水的含量(A，％)、淋洗剂体积(B，mL)、洗脱剂中氨水的含量(C，％)、洗脱剂体积(D,mL) 作为变量，每一变量设置3个水平，以含C12-BAC为50ng/mL的消毒液加标样品的回收率为响应值，根据Box-Behnken中心组合实验设计原理，进行4因素 3水平共29次实验。结果如图1所示。图1是四因素交互影响的C12-BAC回收率等高线与响应面图。由图1a)和b)可以看出洗脱剂为5％氨水甲醇溶液时，回收率有最大值；图1c)和d)显示淋洗剂为甲醇/水(v/v＝1/1)时，回收率较低，这可能是水和甲醇混合溶液作为淋洗剂可能会把部分水溶性较好的苯扎铵类化合物淋洗出；图1d)显示同一淋洗剂，淋洗剂体积大于3mL时，对回收率的影响较少。
从模型得到回归方程：Recovery＝89.38+1.17A-1.26B+2.48C+0.6989D +0.8554AB+2.10AD+0.75BC+3.92BD-2.10CD+6.79A2+0.7505B2-14.59C2-0.062D2。
对上述实验结果进行方差分析，结果如表2，由表2可知该模型的F值为5.35，模型概率P值＜0.05，说明各影响因子对目标物回收率的影响显著。综合试验结果，模型的拟合程度良好，调整相关系数为0.8625，说明预测值与实测值相关性较好，能解析模型86％的响应值变化。可用此模型对消毒液中C12-BAC含量回收率进行分析。由F值可知，该模型的一次项C影响显著，A、B、D项相对影响不显著。单因素对回收率的影响顺序为C＞B＞D＞A，即对回收的影响依次为：洗脱剂氨水的体积浓度＞淋洗剂体积＞洗脱剂体积＞淋洗剂中水的体积浓度。二次项C2影响显著，A2影响较为显著，B2、D2影响不显著。
为进一步验证数据的可靠性，采用上述最优条件进行含基质的空白样品加标的回收实验，重复3次，得到总回收率为89％，与理论值基本相当，所以最终采用甲醇为淋洗剂，淋洗剂体积为3mL，5％氨水甲醇溶液为洗脱液，洗脱剂体积为5mL。
表2 Box-Benhnken中心组合设计的方差分析结果
实施例3高效液相色谱—串联质谱测试
3.1流动相的选择
分别采用甲醇-水溶液、乙腈-水溶液、甲醇-0.1％甲酸水溶液和0.1％三氯乙酸的乙腈-0.1％三氯乙酸水溶液作为流动相A-流动相B，对浓度均为10ng/mL的标准工作溶液进行测定，结果表明以上四种流动相***中，目标物在甲醇-水溶液和乙腈-水溶液体系响应较弱且色谱峰拖尾严重，甲醇-0.1％甲酸水溶液体系比甲醇-水体系响应稍强，但峰型仍然有拖尾或前申，这可能时目标物的阳离子与色谱柱中硅羟基之间有弱的相互作用导致。在水相中添加酸性改性剂三氯乙酸后有效地改善了峰型，使峰型更加对称，从而使得检出限更低。因此选择0.1％三氯乙酸的乙腈-0.1％三氯乙酸水溶液作为流动相A-流动相B。
3.2质谱条件优化
将4种目标物(CHD、C12-BAC、C14-BAC和C16-BAC))的标准溶液逐个在ESI正离子模式下以不同传输电压进行一级质谱扫描，结果表明4种目标物因本身带有正电荷，最强峰为准分子离子峰[M]+，如氯己定正离子[C22H30Cl2N10]+, 对应m/z＝505.1+；烷基二甲基苄基铵离子[C21H38N]+、[C23H42N]+和[C25H46N]+，对应m/z＝304.1、332.1、360.2。分别对准以上各准分子离子，以0-60eV的碰撞能量进行子离子模式扫描，得到子离子信息和子离子响应大小对应的碰撞能量值。氯己定子离子为通过胍基不同C-N键断裂形成的失去对氯苯基胍基官能团形成的系列分子离子，如[C15H22ClN7]+和[C15H25ClN8]+,等离子片段，对应 m/z＝335.7和352.7。苯扎铵类化合物通过苄基C-N键断裂易于形成带有长链烷基的季铵盐离子和苄基离子，如[C18H38N]+、[C16H34N]+和[C14H30N]+和[C7H7]+等离子片段，对应m/z＝268.0、240.1、212.1和91.1。选取响应最大、干扰较少的碎片离子作为定量、定性离子。为得到较好的灵敏度，分别对子离子的选择、碎裂电压、碰撞能量等参数进行优化。4种目标物优化后的质谱分析参数见表3，多反应监测色谱图见图2。图2中，1号峰为氯己定；2号峰为十二烷基二甲基苄基氯化铵；3号峰为十四烷基二甲基苄基氯化铵；4号峰为十六烷基二甲基苄基氯化铵。从图2可知，四种目标物色谱峰峰型对称且基线分离。
表3 4种目标物优化后的质谱分析参数
实施例4方法学验证
4.1线性范围与定量下限
对4种目标物(CHD、C12-BAC、C14-BAC和C16-BAC)的标准工作溶液进行测试，以各物质的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，4种目标物在1～500ng/mL范围内线性良好，相关系数为0.9963～0.9989。以10倍信噪比(S/N) 作为最低定量限，得出4种目标物的方法定量限范围在0.57～2.84ng/mL，4种目标物的线性方程、相关系数与定量下限见表4。
表4 4种目标物线性回归方程与相关系数、检出限和定量限
目标物 回归方程 相关系数 检出限(ng/mL) 定量限(ng/mL)
CHD Y＝1.117×105X+1.263×103 0.9989 0.20 0.57
C12-BAC Y＝3.101×106X+0.641×103 0.9968 0.28 0.83
C14-BAC Y＝8.885×105X-1.25×102 0.9972 0.52 1.57
C16-BAC Y＝2.241×105X-2.57×103 0.9963 0.95 2.84
4.2回收率与精密度
将带基质的目标物空白消毒剂样品，加入甲醇水溶液，然后分别定量添加标准混合中间液，配制成浓度为10ng/mL、50ng/mL和100ng/mL加标溶液。每个加标溶液平行测试6次，结果表明：4种目标物在加标溶液中回收率为86.4～115.7％、相对标准偏差RSD≤6.7％。6次回收率平均值和相对标准偏差见表 5。
表5 4种目标物6次回收率平均值与相对标准偏差
应用例
按照实施例1的方法，对进口的500批消毒液产品进行检测，在19个样品中检出以上阳离子杀菌剂目标物，其中以物品消毒液中检出率最高，达79％；其次是洗手消毒液和医用消毒液，检出率为21％；喷雾消毒液中均未检出。阳性样品中均含有氯己定和苯扎铵类化合物，氯己定浓度范围是2.6～17.6×105ng/mL，苯扎铵类化合物浓度范围是1.2～6.4×106ng/mL。图3为某典型消毒液样品经稀释进样后的多反应监测色谱图。图3中，1号峰为氯己定；2号峰为十二烷基二甲基苄基氯化铵；3号峰为十四烷基二甲基苄基氯化铵；4号峰为十六烷基二甲基苄基氯化铵。
显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种消毒液中氯己定和苯扎铵类化合物的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1. 将消毒液过活化后的固相萃取柱，然后依次用有机酸水溶液和淋洗剂对固相萃取柱进行淋洗，再用氨水甲醇溶液对固相萃取柱进行洗脱，收集洗脱液，作为待测液；
S2. 采用外标法，运用HPLC-MS/MS技术对待测液进行分析，经计算后得出消毒液中氯己定和苯扎铵类化合物的含量；
步骤S1所述固相萃取柱的固定相为硅胶为基质键合苯磺酸官能团的吸附剂；所述淋洗剂为甲醇；
步骤S1中所述淋洗剂的用量为3~4mL；步骤S1中所述氨水甲醇溶液的用量为4~6mL；
步骤S1中所述氨水甲醇溶液中氨水的体积分数为4%~5%；
步骤S1中所述有机酸水溶液中的有机酸为甲酸；
步骤S2中所述HPLC-MS/MS技术中的高效液相色谱的流动相A为0.10~0.15%三氯乙酸的乙腈，流动相B为0.10~0.15%三氯乙酸水溶液；
步骤S2中所述HPLCMS/MS技术中的高效液相色谱条件为：
色谱柱：C18色谱柱；
柱温：25~40℃；
进样体积为：5~20 μL；
梯度洗脱程序为：0~1min，40%流动相B；1~2min，40%→90%流动相B；2~7min，90%流动相B；7~8min，90%→40%流动相B；8~10min40%流动相B；
流速：0.2~0.3mL/min；
步骤S2中所述HPLC-MS/MS技术中的串联质谱条件为：电喷雾离子源；干燥气温度：300~350°C，氮气流速：7~10 L/min，雾化器压力：45 psi，毛细管电压：3500~4000V，碰撞能量0~60 eV，驻留时间50~150 ms；采用MRM模式采集。
2.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，步骤S1中，将消毒液过活化后的固相萃取柱前，还包括对消毒液进行稀释的步骤。
3.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，步骤S1中所述固相萃取柱为SCX强阳离子固相萃取柱。
4.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，步骤S2中所述苯扎铵类化合物为十二烷基二甲基苄基氯化铵、十四烷基二甲基苄基氯化铵或十六烷基二甲基苄基氯化铵中的至少一种。
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