CN115350163A - 甘草蛋白载药纳米粒子用于制备治疗银屑病药物的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及甘草蛋白载药纳米粒子用于制备治疗银屑病药物的应用,属于纳米中药技术领域。所述多组分药物包括黄芩苷、芍药苷、甘草苷。黄芩苷可调节NF‑κB和JAK/STAT信号通路,抑制皮肤炎症反应,改善特应性皮炎病变;亦可通过抑制IL‑17/IL‑23轴来缓解银屑病小鼠的皮肤炎症。芍药苷可调控多种信号通路,包括GPCR通路和JAK2/STAT3通路等,能显著降低STAT3的转录水平,抑制Th17细胞分泌细胞因子,从而缓解银屑病的症状。甘草苷作为甘草的主要有效成分之一,对急性肺损伤、癌症和炎症导致的细胞损伤均有良好的治疗作用。本发明利用甘草蛋白纳米粒负载上述药物,相应的载药纳米粒能被肠道细胞和炎症细胞更好地吸收,并发挥良好的银屑病治疗效果。
Description
技术领域
本发明属于纳米中药技术领域,更具体地,涉及甘草蛋白载药纳米粒子用于制备治疗银屑病药物的应用,尤其涉及一种负载多组分药物的中药蛋白纳米制剂,该多组分药物中药蛋白纳米粒尤其能够应用于银屑病的治疗。
背景技术
虽然目前医学已取得高速发展,但银屑病仍无法完全治愈。银屑病,俗称牛皮癣,是一种自身免疫性疾病,影响着世界上约1.25亿人口的健康。银屑病主要特征是皮肤增厚、出现红斑、并伴有白色鳞屑。银屑病通常被认为是免疫细胞(譬如树突状细胞、T细胞及巨噬细胞等)级联反应导致的,它们被异常激活并释放炎症因子,然后攻击包括角化细胞在内的皮肤细胞。银屑病患者患心脏病、中风、高血压和糖尿病的风险更高。银屑病可以显著降低患者的生活质量,甚至比癌症更严重。目前有效的治疗药物主要有生物制剂、激素透皮给药和传统口服药物(如甲氨蝶呤)。这些药物难以同时满足经济性、安全性和良好用药依从性的要求,因此开发新的治疗药物策略来克服上述缺点具有现实意义。
随着抗击新冠肺炎疫情行动的进展,有关甘草抗炎抗病毒作用的研究再次被提出。甘草苷作为甘草的主要有效成分之一,对急性肺损伤、癌症和炎症导致的细胞损伤均有良好的治疗作用。甘草的解毒、抗炎、抗溃疡、抗病毒和抗癌作用已被证实,而对于甘草蛋白(GP),已经有研究表明它能抑制结肠癌细胞的增殖并诱导细胞凋亡,但GP在炎症中的作用尚未见报道。在甘草蛋白载药纳米粒中,甘草蛋白可以作为安全的药物载体。黄芩苷可调节NF-κB和JAK/STAT信号通路,抑制皮肤炎症,改善特应性皮炎病变;此外,黄芩苷可以通过抑制IL-17/IL-23轴来缓解银屑病小鼠的皮肤炎症,其中JAK/STAT的激活是导致自身免疫性疾病的重要炎症机制,炎症与DC细胞和Th17细胞中IL-6/STAT3通路有关。芍药苷可调控多种信号通路,包括GPCR通路和JAK2/STAT3通路。有研究表明芍药苷能够显著降低STAT3的转录水平和蛋白水平,抑制Th17细胞的细胞因子分泌,从而缓解银屑病的症状。以上物质均具有缓解银屑病的潜力,且经济适用,但由于水溶性差,难以成药,生物利用度低,药物使用量大,限制了其临床应用。
近年,纳米制剂已经应用于临床,例如利用脂质体包载盐酸阿霉素,可以提高药物在病灶的蓄积量,同时延长药物在血液循环中的半衰期。另外,利用纳米技术可以很好地改善一些成药性差的药物,比如增强药物溶解度,提高药物稳定性等。利用纳米技术对中药活性成分进行成药改造可以达到提高疾病治疗效果,减少毒副作用的目的。因此,利用纳米制药技术对以上药物进行处理,有望提高其生物利用度,得到简便易得的纳米制剂。甘草蛋白可以促进纳米结构的组装,同时封装活性成分,并且变性后的蛋白质具有一定的炎症靶向作用,因此,利用甘草蛋白变性形成纳米粒有望能够更好地对以上药物进行包封,实现三者的共递送,并发挥良好的缓解银屑病的作用。
发明内容
针对现有技术的以上缺陷或改进需求,本发明的目的在于提供一种用于治疗银屑病的中药药物组装纳米粒,利用甘草蛋白负载具有抑炎作用的黄芩苷、芍药苷和甘草苷,相应得到的甘草蛋白纳米粒能高效包封以上疏水性中药药物,促进细胞摄取,发挥良好的抑炎效果,尤其可用于银屑病治疗。本发明中的甘草蛋白载药纳米粒具有较好的生物相容性,并解决了部分中药药物溶解性差、成药性差、稳定性差等问题,实现了三种中药组分的共递送,对银屑病展现出显著的疗效。本发明药物组合新颖有效,制备方法简单方便,具有良好的临床转化和应用前景。
根据本发明第一方面,提供了一种甘草蛋白载药纳米粒子用于制备治疗银屑病药物的应用,所述甘草蛋白载药纳米粒子以甘草蛋白为载体,所述载体至少包载黄芩苷、芍药苷和甘草苷。
优选地,所述甘草蛋白载药纳米粒子用于下调炎症因子表达水平,从而抑制皮肤炎症反应。
优选地,所述炎症因子为TNF-α、IL-17和IL-6。
根据本发明另一方面,提供了一种甘草蛋白载药纳米粒子的制备方法,包括以下步骤:
(1)将甘草蛋白溶解,然后再加入黄芩苷、芍药苷和甘草苷的混合溶液,充分混匀后,旋蒸除去溶剂;
(2)调节步骤(1)得到的混合溶液的pH至酸性,使所述甘草蛋白变性,并包载黄芩苷、芍药苷和甘草苷,离心后弃上清,即得到甘草蛋白载药纳米粒子。
优选地,所述黄芩苷、芍药苷和甘草苷的混合溶液中,黄芩苷质量浓度为1-6mg/mL,芍药苷质量浓度为1-4mg/mL,甘草苷质量浓度为1-4mg/mL。
优选地,步骤(2),调节步骤(1)得到的混合溶液的pH至3-5。
优选地,步骤(2)中,所述离心的转速为10000-14000rpm,时间为30-60min。
根据本发明另一方面,提供了一种甘草蛋白载药纳米粒子,所述甘草蛋白载药纳米粒子以甘草蛋白为载体,所述载体至少包载黄芩苷、芍药苷和甘草苷。
优选地,所述纳米粒子的粒径为250-420nm。
优选地,所述纳米粒子中的黄芩苷、芍药苷和甘草苷的质量比为(1-6):(1-4):(1-4)。
总体而言,通过本发明所构思的以上技术方案与现有技术相比,主要具备以下的技术优点:
(1)本发明中的多组分药物包括黄芩苷、芍药苷、甘草苷。黄芩苷可调节NF-κB和JAK/STAT信号通路,抑制皮肤炎症反应,改善特应性皮炎病变;亦可通过抑制IL-17/IL-23轴来缓解银屑病小鼠的皮肤炎症。芍药苷可调控多种信号通路,包括GPCR通路和JAK2/STAT3通路等,能显著降低STAT3的转录水平,抑制Th17细胞分泌细胞因子,从而缓解银屑病的症状。甘草苷作为甘草的主要有效成分之一,对急性肺损伤、癌症和炎症导致的细胞损伤均有良好的治疗作用。本发明利用甘草蛋白纳米粒负载上述药物,相应的载药纳米粒能被肠道细胞和炎症细胞更好地吸收,并发挥良好的银屑病治疗效果。
(2)本发明提供的药物组合策略是一种新颖有效的银屑病治疗形式,通过纳米技术对药物进行共封装能实现协同有效地缓解银屑病。
(3)本发明中的甘草蛋白载药纳米粒具有良好的稳定性;解决了药物溶解性差难以制成制剂的问题;对不同理化性质的药物具有高效的载药能力;制备工艺简便,易于临床转化和扩大生产。本发明纳米粒制备方法并不局限于甘草蛋白和上述药物组合,其他疏水性和亲水性药物也适用于此方法,但优选此发明中所述的药物。
(4)本发明的甘草蛋白载药纳米粒具有良好的细胞摄取能力,也能降低给药剂量,从而避免高浓度游离药物引起的全身性毒副反应。
(5)本发明的甘草蛋白载药纳米粒经口服给药后,银屑病小鼠状态、病理学改变及炎症因子水平等方面指标均明显改善,说明甘草蛋白载药纳米粒的生物活性良好,接近甚至优于阳性对照药物甲氨蝶呤,对银屑病具有良好的治疗作用。
(6)本发明中的甘草蛋白载药纳米粒,可有效包封黄芩苷、芍药苷、甘草苷三种疏水性物质,提高药物溶解度,促进细胞摄取,从而对银屑病发挥良好的缓解作用,降低银屑病小鼠皮肤及血液中的炎症因子水平。
附图说明
图1为提取甘草蛋白的聚丙烯酰氨凝胶电泳表征图。
图2为本发明所述甘草蛋白载药纳米粒的粒径、电镜及稳定性表征;其中,图2中的(a)为结果,图2中的(b)为电镜形貌表征结果,图2中的(c)为稳定性监测结果。
图3为本发明所述甘草蛋白纳米粒的载药表征。其中,图3中的(a)为甘草蛋白载药纳米粒与标准物质的高效液相色谱图,图3中的(b)为不同物质的载药量表征。
图4为本发明所述甘草蛋白载药纳米粒的体外细胞摄取结果,包括小鼠结肠癌细胞CT26及小鼠单核巨噬细胞Raw264.7的体外摄取模型。
图5为本发明甘草蛋白载药纳米粒在银屑病动物水平的疗效研究;包括给药时间轴及银屑病小鼠背部皮肤变化图。
图6为本发明甘草蛋白载药纳米粒治疗后,小鼠银屑病面积及严重程度指数(PASI)评分结果,包括红斑评分、鳞屑评分、皮肤厚度评分及总评分。
图7为本发明所述的甘草蛋白载药纳米粒对小鼠各项生理指标的影响,其中包括小鼠背部皮肤厚度变化、耳部厚度变化、体重变化及脾重指数。
图8为本发明所述的甘草蛋白载药纳米粒治疗后小鼠皮肤组织学变化。
图9为本发明所述的甘草蛋白载药纳米粒治疗后小鼠皮肤免疫荧光切片分析,包括IL-17与Ki-67两个指标。
图10为本发明所述的甘草蛋白载药纳米粒治疗后小鼠血液中炎症因子IL-6及TNF-α的变化情况。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合附图及实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。此外,下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
本发明一种用于包载多组分疏水性药物的植物蛋白纳米粒,包括药物组合和负载该药物组合的植物蛋白纳米粒,所述药物组合包括三种疏水性中药活性成分,该药物组合物纳米粒能够缓解银屑病症状并下调炎症因子水平。
本发明中药物组合物纳米粒,三种疏水性中药活性成分为黄芩苷、芍药苷、甘草苷;所述植物蛋白为甘草蛋白(分子量为28~31kDa)。
本发明中甘草蛋白的制备方法,包括以下步骤:
(1)将甘草饮片与超纯水按1:5(w/v)混合,水浴超声30min,然后在60℃水浴搅拌30min;
(2)待步骤(1)所得样品晾至常温后用双层滤布滤去残渣;滤液以4000rpm离心15min,向上清液中加入1.5倍体积的丙酮后摇匀,-20℃静置30min;
(3)步骤2中样品在4℃条件下,4000rpm离心30min,弃上清,将丙酮挥干,冷冻干燥得到甘草粗蛋白(GP),用于后续实验。
本发明中用于银屑病治疗的药物组合物纳米粒的制备方法,包括以下步骤:
(1)将甘草蛋白溶解,取2mL蛋白溶液加入350μL黄芩苷、芍药苷和甘草苷混合甲醇溶液;
(2)超声破碎仪60%功率超声10次,旋蒸除甲醇;
(3)旋蒸后样品在水浴超声的同时调节pH=3~5,然后以13000rpm离心30min弃上清,收集纳米粒即得甘草蛋白载药纳米粒。
优选地,黄芩苷质量浓度为1-6mg/mL,优选为4mg/mL,芍药苷质量浓度为1-4mg/mL,优选为2mg/mL甘草苷质量浓度为1-4mg/mL,优选为2mg/mL。
实施例1
甘草蛋白的提取:采用丙酮沉淀法从甘草饮片中提取甘草蛋白。简而言之,将甘草饮片与超纯水按1:5(w/v)混合,水浴超声30分钟,然后在60℃水浴搅拌30min。待样品晾至常温后用双层滤布滤去残渣;滤液以4000rpm离心15min,向上清液中加入1.5倍体积的丙酮后摇匀,-20℃静置30min。最后,样品在4℃条件下,4000rpm离心30min,弃上清,将丙酮挥干,冷冻干燥得到甘草粗蛋白(GP)。
SDS-PAGE表征甘草蛋白:得到上述甘草蛋白后,用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对其进行表征。具体操作步骤如下:
①称取适量甘草蛋白冻干粉,溶解于超纯水中,按体积比1:4与蛋白上样缓冲液(Loading buffer,5×)混合均匀,95℃加热10min使蛋白变性,可放置在-20℃保存;
②10%分离胶制备:将超纯水、30%丙烯酰胺、1.5M Tris-HCl(pH8.8)、10%SDS、10%过硫酸铵(AP)按40:33:25:1:1的比例配成总体积为10mL的溶液,加入5μL的TEMED后迅速灌入组装好的玻璃板中,用异丙醇平整胶面,静置凝固后即得分离胶;
③5%浓缩胶制备:将超纯水、30%丙烯酰胺、1.0M Tris-HCl(pH6.8)、10%SDS、10%过硫酸铵(AP)按照40:5:5:4:3的比例混匀,加入8μLTEMED后迅速加入凝固后的分离胶上层,***1.5mm的加样梳子,凝固后即为浓缩胶;
④电泳液配制:将甘氨酸、Tris-Base、SDS分别称取18.8g、3.02g、1g溶解于1L UP水中得到电泳液;
⑤染色液制备:甲醇、乙酸(冰醋酸)、超纯水分别量取50mL、10mL、40mL,混合均匀后加入0.05g考马斯亮蓝R-250即得;
⑥脱色液配制:将甲醇、乙酸(冰醋酸)、超纯水按照体积比为2:1:7混合均匀即得脱色液;
⑦电泳:将制备好的凝胶板放入电泳槽中,加入适量电泳液;拔下梳子后加入约30μg蛋白量的样品,规范接入电极后,80V分离约30min,待样品进入分离胶后保持120V电压,直至Maker蛋白条带完全分离;
⑧染色:蛋白分离完成后,将凝胶从玻璃板上取下,弃去浓缩胶部分,用染色液浸泡,置于摇床上常温染色4h,染色完成后回收染色液;
⑨脱色:将染色完的凝胶用脱色液洗脱,直至蛋白条带清晰可见。
结果如图1,甘草蛋白分子量为28~31kDa,
实施例2
本发明进一步对实施例1中的甘草蛋白进行组装与载药。将甘草蛋白溶于超纯水(2mg/mL)中,取2mL蛋白溶液加入约350μL甲醇溶解的黄芩苷(4mg/mL)、芍药苷(2mg/mL)和甘草苷(2mg/mL)混合溶液。超声破碎仪60%功率超声10次后,旋蒸除去甲醇;剩余样品在水浴超声的同时调节pH=3~5,然后以13000rpm离心30min弃上清,收集纳米粒并命名为甘草蛋白载药纳米粒(GP-NPs)。
上述组装所得的GP-NPs样品测定粒径后保存于4℃冰箱,连续七天测定其粒径;将新制的GP-NPs用超纯水稀释到100-200kcps后将分散液(10μL)缓慢滴于电镜铜网上,静置30min后吸去残余液体,并将铜网挥干,在100kV的透射电子显微镜(TEM,JEM-1230)下观察GP-NPs的形貌特征。结果如图2所示。从图2中的(a)可以看出,其粒径集中分布在300-400nm,图2中的(b)的电镜图像显示GP-NPs呈较规则的类球形,较为均一。连续7天测得粒径如图2中的(c),其粒径均在400-500nm间波动,变化范围不大,表明组装得到的GP-NPs具有良好的物理稳定性。
实施例3
对照品标准曲线制备:称取黄芩苷、芍药苷和甘草苷的标准品适量,用色谱级甲醇溶解,配制成0.1、0.5、1、2.5、5、10、20、50、100、200、500、1000μg/mL的标准品溶液,按如下液相条件进行HPLC分析,绘制浓度-峰面积标准曲线。流动相为乙腈(A)和0.05%磷酸(B)溶液,梯度洗涤进行HPLC分析,流动相比例如表1-1所示:
表1-1液相色谱条件(时间-流动相比例对应表)
检测波长为230nm,柱温为30℃,流速为1mL/min,进样体积为10μL。
取上述组装所得GP-NPs样品,溶于500μL色谱级甲醇中,超声30min后以15000g离心10min,取上清液进行指纹图谱分析并对NPs中主要成分进行定量,结果如图3所示,黄芩苷、芍药苷和甘草苷在甘草蛋白纳米粒中均有包载。采用峰面积归一化法测定了甘草蛋白纳米粒中黄芩苷、芍药苷和甘草苷的含量,并据此计算出黄芩苷、芍药苷和甘草苷的相对包封率分别为31.70%、22.56%和23.80%。
实施例4
为考察所述甘草蛋白纳米粒的细胞摄取情况,首先制备了荧光染料香豆素6(Coumarin 6,C6)标记的纳米粒(C6@GP-NPs)。随后建立细胞体外摄取模型:小鼠单核巨噬细胞白血病细胞株Raw 264.7和小鼠结肠癌细胞株CT26均来自中国科学院细胞库。将Raw264.7或CT26按1×105个细胞每皿接种于共聚焦显微镜培养皿过夜。加入DMEM稀释的游离香豆素-6(C6)和甘草蛋白组装纳米粒(C6@GP-NPs),香豆素浓度均为5μg/mL,与细胞共孵育4h。然后将细胞在4%多聚甲醛中固定10min(300μL/皿),用冷PBS冲洗两次。每皿细胞均加入300μL DAPI(10μg/mL)染色8分钟,PBS洗涤3次,在共聚焦激光扫描显微镜下观察细胞摄取状况,结果如图4所示,Raw 264.7和CT26细胞中甘草蛋白纳米粒组的绿色荧光强度均显著强于游离香豆素组,表明甘草蛋白载药纳米粒能够被小鼠肠上皮样细胞和巨噬细胞有效吸收。
实施例5
在银屑病小鼠模型上观察GP-NPs对银屑病的体内治疗效果。
银屑病小鼠造模与给药方法如下所述:小鼠分为正常组、模型组、甲氨蝶呤(MTX)组和甘草蛋白载药纳米粒组。对BALB/c小鼠进行背部剃毛与脱毛(面积约为3cm×4cm),从脱毛后第2天开始,每日局部应用5%咪喹莫特乳膏。除正常对照组小鼠给予等量凡士林软膏外,其它组小鼠均将咪喹莫特乳膏(62.5mg)涂抹于脱毛后的皮肤和耳朵上,连续造模8天。在造模开始后的第二天对小鼠进行灌胃给药,具体实施方案见图5。MTX组给药剂量为0.62mg/kg,其他治疗组给予相应的药物18mg,而正常组和模型组则给予超纯水,灌胃体积均为200μL。每天对小鼠背部皮肤进行拍摄,测量皮肤及耳朵厚度,并记录体重变化情况。
皮肤变化结果如图5所示,模型组小鼠的皮肤逐渐变红变暗,并伴有鳞屑的产生,到第7天,鳞屑覆盖了裸露皮肤的80%左右。药物治疗组中,只出现少量的白色鳞屑,皮肤整体泛红伴有轻微的皮肤皱缩。总的来说,MTX和甘草蛋白载药纳米粒组连续7天的治疗对小鼠背部银屑病样皮肤有明显改善。
银屑病面积及严重指数(PASI)评分是评估银屑病严重程度的工具,评分指标包括皮肤厚度、红斑和脱屑,评分范围为0~4分,细分标准如下:0分,无现象;1分,轻度症状;2分,中度症状;3分,症状严重;4分,非常严重。PASI总评分为皮肤厚度、红斑及脱屑评分的加和,结果如图6所示,四张评分图中,模型组始终显示出快速的增长趋势。MTX和甘草蛋白载药纳米粒治疗的小鼠所呈现的趋势一致,从第3天开始,治疗组与模型组逐渐出现差异;到第7天,GP-NPs组的红斑评分接近于正常组,且其鳞屑评分和PASI总评分均低于MTX组。
小鼠各项指标变化情况如图7所示。模型组小鼠背部皮肤厚度和耳部厚度的增长速度明显高于其他各组,背部皮肤第7天变化值达到0.25mm。甘草蛋白载药纳米粒治疗的小鼠体重下降放缓,说明其对于维持小鼠生理功能有积极作用,脾重指数总体呈现下降趋势。
实施例6
在给药时间轴第8天,取皮肤经4%多聚甲醛固定后进行苏木精-伊红染色。H&E切片服务均由博尔夫生物有限公司提供。正常组小鼠皮肤有完整的毛发等皮肤附属结构,而咪喹莫特诱导的模型组小鼠皮肤明显增厚,并伴有微脓肿,棘突延长。从图8可以看出,经不同药物治疗后,上述症状均有明显改善,两个治疗组中表皮层厚度相较模型组均明显变薄,没有微脓肿出现,且甘草蛋白载药纳米粒组保留了部分毛囊。这些数据也从组织层面说明了甘草蛋白载药纳米粒对银屑病具有较好的治疗效果。
实施例7
对小鼠背部皮肤切片进行免疫荧光染色分析以确定皮损部位炎症因子IL-17的水平。从图9可以看出,模型组小鼠背部皮损处有大量炎症因子IL-17浸润。MTX组和GP-NPs组IL-17荧光亮度显著降低,表明这两组小鼠IL-17的分泌比模型组少。Ki-67作为一种标记增殖周期中细胞的抗原,在模型组小鼠背部皮损部位的基底层有大量浸润,而在药物治疗组中表皮层的Ki-67信号强度均较模型组有所降低,说明模型组小鼠出现了表皮过度增殖。在正常组、MTX组及GP-NPs组中,小鼠皮肤Ki-67免疫荧光切片的毛囊部位均有较强的红色荧光,说明毛囊组织上皮细胞保留了正常的***、增殖功能。
ELISA法测定小鼠血清中TNF-α和IL-6含量。每组小鼠眼球摘除后取等体积血液,2000rpm离心5min,取上层血清即为待测样品,保存于-80℃冰箱中。按照试剂盒说明书测定小鼠血清中炎症因子浓度,得到如图10所示结果。模型组和甘草蛋白载药纳米粒组小鼠血液中TNF-α水平仍有统计学差异。甘草蛋白载药纳米粒组的IL-6和TNF-α含量与正常组最为接近,表明甘草蛋白载药纳米粒的疗效相较于其他治疗组更为优异。
本领域的技术人员容易理解,以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.甘草蛋白载药纳米粒子用于制备治疗银屑病药物的应用,其特征在于,所述甘草蛋白载药纳米粒子以甘草蛋白为载体,所述载体至少包载黄芩苷、芍药苷和甘草苷。
2.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述甘草蛋白载药纳米粒子用于下调炎症因子表达水平,从而抑制皮肤炎症反应。
3.如权利要求2所述的应用,其特征在于,所述炎症因子为TNF-α、IL-17和IL-6。
4.一种甘草蛋白载药纳米粒子的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将甘草蛋白溶解,然后再加入黄芩苷、芍药苷和甘草苷的混合溶液,充分混匀后,旋蒸除去溶剂;
(2)调节步骤(1)得到的混合溶液的pH至酸性,使所述甘草蛋白变性,并包载黄芩苷、芍药苷和甘草苷,离心后弃上清,即得到甘草蛋白载药纳米粒子。
5.如权利要求4所述的甘草蛋白载药纳米粒子的制备方法,其特征在于,所述黄芩苷、芍药苷和甘草苷的混合溶液中,黄芩苷质量浓度为1-6mg/mL,芍药苷质量浓度为1-4mg/mL,甘草苷质量浓度为1-4mg/mL。
6.如权利要求4或5所述的甘草蛋白载药纳米粒子的制备方法,其特征在于,步骤(2),调节步骤(1)得到的混合溶液的pH至3-5。
7.如权利要求4所述的甘草蛋白载药纳米粒子的制备方法,其特征在于,步骤(2)中,所述离心的转速为10000-14000rpm,时间为30-60min。
8.一种甘草蛋白载药纳米粒子,其特征在于,所述甘草蛋白载药纳米粒子以甘草蛋白为载体,所述载体至少包载黄芩苷、芍药苷和甘草苷。
9.如权利要求8所述的甘草蛋白载药纳米粒子,其特征在于,所述纳米粒子的粒径为250-420nm。
10.如权利要求8所述的甘草蛋白载药纳米粒子,其特征在于,所述纳米粒子中的黄芩苷、芍药苷和甘草苷的质量比为(1-6):(1-4):(1-4)。
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