CN115287235A - 提高鸡肠道免疫力的复合益生菌制剂及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种提高鸡肠道免疫力的复合益生菌制剂及其制备方法和应用,所述复合益生菌制剂由Bacteroides caecicola、Bacteroides uniformis、Bacteroides salanitronis菌株制备而成。该方法将三种菌株分别接种到新鲜的液态培养基中进行培养,得到三种细菌悬液;将制得的三种细菌悬液分别离心获取细菌沉淀,用磷酸盐缓冲液PBS重悬细菌沉淀,将三种活菌悬液得到活菌悬液,冷冻得到复合益生菌制剂。本发明的复合益生菌制剂显著提高肠道SIgA的浓度,并提高肠道黏膜免疫力。
Description
技术领域
本发明涉及微生物制剂领域,具体涉及一种提高鸡肠道免疫力的复合益生菌制剂及其制备方法和应用。
背景技术
随着人口的增加,确保肉类供应成为全球关注的问题,因此对牲畜的需求不断增加。在这种情况下,鸡肉产业对肉类产品的供应做出了实质性的贡献。但传染病是鸡肉集约化生产中不可避免的问题。因此,抗生素在肉鸡生产中被广泛应用以预防和治疗疾病。由此产生的抗生素滥用增加了人类慢性疾病的风险。但从饲料中停用抗生素可能会增加疾病发生率并带来巨大的行业损失。人们已经做了很多工作来寻找抗生素的替代品,但我们坚信激活免疫***是提高抗病能力的关键。
目前,常用益生菌制剂来部分替代保健用抗生素的使用。如何挖掘新型高效的免疫调节益生菌制剂成为当前的研究热点。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足,提供了一种提高鸡肠道免疫力的复合益生菌制剂及其制备方法和应用,该复合益生菌制剂由Bacteroides caecicola、Bacteroides uniformis、Bacteroides salanitronis菌株制备而成,用于提高鸡肠道免疫力,具有显著的效果,从而可以在防治腹泻过程中减少保健用抗生素的使用量。
为实现上述目的,本发明所设计一种提高鸡肠道免疫力的复合益生菌制剂,所述复合益生菌制剂由Bacteroides caecicola、Bacteroides uniformis、Bacteroidessalanitronis菌株制备而成。
上述Bacteroides caecicola、Bacteroides uniformis、Bacteroidessalanitronis三株菌均已经被分离并保藏在德国微生物菌种保藏中心DSMZ,然而Bacteroides caecicola、Bacteroides uniformis、Bacteroides salanitronis细菌至今尚未被报道有提高鸡肠道免疫力的效果。
本发明使用的Bacteroides caecicola、Bacteroides uniformis、Bacteroidessalanitronis菌株从无量山乌骨鸡十二指肠分离所得。
进一步地,所述复合益生菌制剂中,总活菌数量为106~1010CFU/mL。
再进一步地,所述复合益生菌制剂中,总活菌数量为108~109CFU/mL。
再进一步地,所述复合益生菌制剂中,Bacteroides caecicola、Bacteroidesuniformis、Bacteroides salanitronis的活菌数量比为1:1~3:1~3。
再进一步地,所述复合益生菌制剂中,Bacteroides caecicola、Bacteroidesuniformis、Bacteroides salanitronis的活菌数量比为1:1:1。
本发明还提供了一种上述提高鸡肠道免疫力的复合益生菌制剂的制备方法,包括以下步骤:
1)将Bacteroides caecicola、Bacteroides uniformis、Bacteroidessalanitronis分别接种到新鲜的液态培养基中进行培养,得到三种细菌悬液;
2)将制得的三种细菌悬液分别离心获取细菌沉淀,用磷酸盐缓冲液PBS(PBS中含有10%的甘油)重悬细菌沉淀,将三种活菌悬液按活菌数量比为1:1~3:1~3混合均匀得到活菌悬液,冷冻得到复合益生菌制剂;其中,复合益生菌制剂中,总活菌数量为106~1010CFU/mL。
进一步地,所述复合益生菌制剂中,总活菌数量为108~109CFU/mL。
再进一步地,所述复合益生菌制剂中,Bacteroides caecicola、Bacteroidesuniformis、Bacteroides salanitronis的活菌数量比为1:1:1。
本发明还提供了一种上述复合益生菌制剂在提高鸡肠道免疫力中的应用。
进一步地,所述应用方法:将复合益生菌制剂灌服至出省雏鸡胃中,灌服剂量为1~2毫升/次,日服一次。
本发明的有益效果:
本发明的复合益生菌制剂显著提高肠道SIgA的浓度,并提高肠道黏膜免疫力。
附图说明
图1为十二指肠sIgA浓度;
图2为空肠肠sIgA浓度;
图3为盲肠sIgA浓度;
图4为IgA B细胞转换所需活化诱导的胞嘧啶脱氨酶的基因表达水平;
图5为IgA分泌所系的多聚免疫球蛋白受体的基因表达水平;
图1~5中,CON为对照组,MIN为实验组。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细描述,以便本领域技术人员理解。
实施例1
1.菌种的分离和筛选:
1)通过37℃水浴快速复苏冷冻保存的无量山乌骨鸡十二指肠内容物,接种到哥伦比亚血琼脂分离培养;用接种环沾取单菌落接种于液态培养基中。待液态培养基变浑浊,提取菌液中细菌基因组DNA,PCR扩增16S rDNA全长并纯化回收;
2)将回收的16S rDNA片段送至测序公司进行测序,经测序结果与NCBI数据库进行比对,验证挑取的单菌落是否为Bacteroides caecicola、Bacteroides uniformis、Bacteroides salanitronis菌株中任意一种。
2.扩大培养
将经测序比对验证成功的菌液接种到新鲜的液态培养基扩大培养。采用活菌计数法对菌液中的活菌计数,并根据计数结果将菌液中的活菌数量调整为106~1010CFU/mL;向不同菌株的菌液中分别加入甘油得到细菌冻存液(甘油的体积分数为10%),置于液氮中低温保存。
按上述方法得到Bacteroides caecicola、Bacteroides uniformis、Bacteroidessalanitronis的三种菌液,冻存,备用。
实施例2
一种提高鸡肠道免疫力的复合益生菌制剂1的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
1)将Bacteroides caecicola、Bacteroides uniformis、Bacteroidessalanitronis分别接种到新鲜的液态培养基中进行培养,得到三种细菌悬液;
2)将制得的三种细菌悬液分别离心获取细菌沉淀,用磷酸盐缓冲液PBS(PBS中含有10%的甘油)重悬细菌沉淀,将三种活菌悬液按活菌数量比为1:1:1混合均匀得到活菌悬液,冷冻得到复合益生菌制剂;冷冻得到复合益生菌制剂;其中,复合益生菌制剂中,总活菌数量为108~1010个/mL。
上述复合益生菌制剂1的应用:
1.方法
将1日龄肉仔鸡分为两组,分别为对照组和实验组,对照组使用磷酸盐缓冲液(PBS)灌服,实验组使用复合益生菌制剂灌服,灌服剂量为1~2毫升/次,日服一次,试验持续21日;然后进行检测。
2.结论如图1~3所示:与实施磷酸盐缓冲液(PBS)灌服的对照组相比,该复合益生菌制剂灌服组在雏鸡21日龄显著提高了雏鸡十二指肠(图1)、空肠(图2)和盲肠(图3)SIgA含量。
如图4~5所示:与实施磷酸盐缓冲液(PBS)灌服的对照组相比,该复合益生菌制剂灌服组在雏鸡21日龄显著提高了雏鸡肠道胞嘧啶脱氨酶(图4)和肠道多聚免疫球蛋白受体(图5)的基因表达水平。
实施例3
本实施例制备的复合益生菌制剂2的制备方法与实施例2的制备方法基本相同,不同之处在于:
复合益生菌制剂2中,Bacteroides caecicola、Bacteroides uniformis、Bacteroides salanitronis的活菌数量比为1:2:2。
实施例4
本实施例制备的复合益生菌制剂3的制备方法与实施例2的制备方法基本相同,不同之处在于:
复合益生菌制剂3中,Bacteroides caecicola、Bacteroides uniformis、Bacteroides salanitronis的活菌数量比为1:3:3。
其它未详细说明的部分均为现有技术。尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述,但它仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部实施例,人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例,这些实施例都属于本发明保护范围。
Claims (10)
1.一种提高鸡肠道免疫力的复合益生菌制剂,其特征在于:所述复合益生菌制剂由Bacteroides caecicola、Bacteroides uniformis、Bacteroides salanitronis菌株制备而成。
2.根据权利要求1所述提高鸡肠道免疫力的复合益生菌制剂,其特征在于:所述复合益生菌制剂中,总活菌数量为106~1010CFU/mL。
3.根据权利要求2所述提高鸡肠道免疫力的复合益生菌制剂,其特征在于:所述复合益生菌制剂中,总活菌数量为108~109CFU/mL。
4.根据权利要求2或3所述提高鸡肠道免疫力的复合益生菌制剂,其特征在于:所述复合益生菌制剂中,Bacteroides caecicola、Bacteroides uniformis、Bacteroidessalanitronis的活菌数量比为1:1~3:1~3。
5.根据权利要求4所述提高鸡肠道免疫力的复合益生菌制剂,其特征在于:所述复合益生菌制剂中,Bacteroides caecicola、Bacteroides uniformis、Bacteroidessalanitronis的活菌数量比为1:1:1。
6.一种权利要求1所述提高鸡肠道免疫力的复合益生菌制剂的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
1)将Bacteroides caecicola、Bacteroides uniformis、Bacteroides salanitronis分别接种到新鲜的液态培养基中进行培养,得到三种细菌悬液;
2)将制得的三种细菌悬液分别离心获取细菌沉淀,用磷酸盐缓冲液PBS重悬细菌沉淀,将三种活菌悬液按活菌数量比为1:1~3:1~3混合均匀得到活菌悬液,冷冻得到复合益生菌制剂;其中,复合益生菌制剂中,总活菌数量为106~1010CFU/mL。
7.根据权利要求6所述提高鸡肠道免疫力的复合益生菌制剂的制备方法,其特征在于:所述复合益生菌制剂中,总活菌数量为108~109CFU/mL。
8.根据权利要求7所述提高鸡肠道免疫力的复合益生菌制剂,其特征在于:所述复合益生菌制剂中,Bacteroides caecicola、Bacteroides uniformis、Bacteroidessalanitronis的活菌数量比为1:1:1。
9.一种权利要求1所述复合益生菌制剂在提高鸡肠道免疫力中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于:所述应用方法:将复合益生菌制剂灌服至出省雏鸡胃中,灌服剂量为1~2毫升/次,日服一次。
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PB01 | Publication | ||
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