CN115260286A - Dmp-f11多肽偶联物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物制药技术领域，具体涉及一种DMP‑F11多肽偶联物及其制备方法和用途。为了提高肿瘤药物递送载体的高效性与靶向性，本发明提供了一种DMP‑F11多肽偶联物，由阳离子纳米聚合物DMP‑Mal与氨基修饰的肝癌靶向多肽F11偶联制备得到，所述的肝癌靶向多肽F11的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明DMP‑F11多肽偶联物可以利用靶向多肽F11实现将核酸药物靶向递送进入HepG2肝癌细胞的作用。在荷瘤小鼠体内，本发明纳米粒可以实现对肿瘤组织的特异性亲和，达到治疗基因的靶向递送作用，是一种具有较高应用价值的肝癌靶向基因药物递送载体。
Description
技术领域
本发明属于生物制药技术领域，具体涉及一种DMP-F11多肽偶联物及其制备方法和用途。
背景技术
随着医学的进步和科技的发展，恶性肿瘤治疗的观念正在发生改变，其中最具代表性的，即从细胞攻击模式到靶向性治疗模式的转变。目前，肿瘤靶向治疗的方式有许多，包括各种靶向消融技术、靶向药物治疗和靶向生物治疗。其中，靶向生物治疗方式由于其轻微的毒副作用和较高安全性为恶性肿瘤的攻克事业做出了巨大的贡献。基因治疗作为一种靶向生物治疗方法，是一种恶性肿瘤生物治疗的创新手段，近年来，随着肿瘤发展或抑制相关基因的研究和应用，基因治疗产品在肿瘤治疗的领域发挥着作用。
如今，大部分基因治疗是利用病毒载体实现，其虽然具有稳定表达、转染效率高等优点，但其致突变、免疫原性和生产成本高等阻碍了其在临床上的应用。因此，越来越多的研究集中在寻找基因治疗的非病毒载体上。与病毒载体相比，非病毒载体在用于肿瘤基因治疗时还存在如下难题：如何提高非病毒载体对肿瘤细胞的基因递送效率，如何实现靶向肿瘤细胞的治疗基因递送。因此，急需开发一种兼具高效性与靶向性的非病毒载体用于肿瘤的基因治疗。
发明内容
本发明要解决的技术问题在于提供一种兼具高效性与靶向性的靶向肝癌细胞的药物递送载体及其制备方法和用途。
本发明提供了一种DMP-F11多肽偶联物，由阳离子纳米聚合物DMP-Mal与氨基修饰的肝癌靶向多肽F11偶联制备得到，所述的肝癌靶向多肽F11的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
SEQ ID NO:1肝癌靶向多肽F11的氨基酸序列FYLEHPSGGLAV。
其中，上述DMP-F11多肽偶联物中，所述的阳离子纳米聚合物DMP-Mal与氨基修饰的肝癌靶向多肽F11的重量比为10-30︰1。优选为30︰1。
其中，所述氨基修饰的肝癌靶向多肽F11是指在多肽F11的碳端加上具有游离基团的氨基酸。进一步的，所述的氨基酸为半胱氨酸。进一步的，所述游离基团为-SH。
其中，上述的DMP-F11多肽偶联物的平均粒径为55nm，平均电位为+25mv。
其中，上述DMP-F11多肽偶联物中，所述的阳离子纳米聚合物DMP-Mal由DOTAP阳离子磷脂、mPEG-PCL聚合物与Mal-PEG-PCL聚合物混合制备得到。
其中，上述DMP-F11多肽偶联物中，所述阳离子纳米聚合物DMP-Mal的平均粒径为54.43nm，平均电位为+35.2mV。
其中，上述DMP-F11多肽偶联物中，所述的DOTAP阳离子磷脂为4-20份，mPEG-PCL聚合物20-100份，Mal-PEG-PCL聚合物1份。优选的，DOTAP阳离子磷脂5份、mPEG-PCL聚合物45份，Mal-PEG-PCL聚合物1份。
其中，上述DMP-F11多肽偶联物中，所述阳离子纳米聚合物DMP由以下方法中的任意一种制备得到；
方法A为薄膜旋蒸法，包括以下步骤：
a、称取原料，mPEG-PCL共聚物45份、DOTAP 5份、Mal-PEG-PCL聚合物1份；
b、将mPEG-PCL共聚物、DOTAP、Mal-PEG-PCL聚合物共同溶于溶剂中，然后采用旋转蒸发仪，在60度水浴条件下运行45分钟从而将溶剂蒸发，随后加适量水化溶液水化直到完全溶解，得到阳离子纳米聚合物DMP-Mal；
方法B为微流控法，包括以下步骤：
a、称取原料，mPEG-PCL共聚物45份、DOTAP 5份、Mal-PEG-PCL聚合物1份；
b、将mPEG-PCL共聚物、DOTAP、Mal-PEG-PCL聚合物共同溶于有机相溶剂中，然后以2mL/min的速度与水相溶剂共同通过微流控***并收集，得到阳离子纳米聚合物DMP-Mal。
进一步的，所述的溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、四氯甲烷、乙醇、甲醇、乙酸乙酯或环己烷中的至少一种；所述的有机相溶剂为乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、四氯甲烷、甲醇中的至少一种。
其中，步骤b所述的水化溶液为双蒸水、去离子水、纯水、5％葡萄糖溶液或生理盐水中的至少一种。
本发明还提供了一种上述DMP-F11多肽偶联物的制备方法，包括以下步骤：
先将阳离子纳米聚合物DMP-Mal溶液与氨基修饰的肝癌靶向多肽F11溶液共同溶于生物缓冲液中，充分混合均匀，透析后即得DMP-F11多肽偶联物。
优选地，所述DMP-Mal溶液与F11溶液质量比为30︰1。
其中，所述的DMP-Mal纳米粒由阳离子磷脂DOTAP、mPEG-PCL聚合物和Mal-PEG-PCl聚合物共同制备得到，所述的DOTAP、mPEG-PCL聚合物与Mal-PEG-PCL聚合物的质量比为：5︰45︰1。
优选地，所述混合后的溶液在4℃下静置24小时。
其中，所述氨基修饰的肝癌靶向多肽F11是指在多肽F11的碳端加上具有游离基团的氨基酸。进一步的，所述的氨基酸为半胱氨酸。进一步的，所述游离基团为-SH。
优选地，所述生物缓冲液为HEPES缓冲液，分子量为238.3Da。
优选地，所述透析时孔径大小为2000MWCO。
本发明还提供了一种上述DMP-F11多肽偶联物作为载药载体的用途。
进一步的，所述载药载体为递送靶向肝癌细胞的药物的载体。
进一步的，所述的药物为基因药物。
所述的基因为siRNA、mRNA、质粒中的一种或两种以上；优选地，所述基因为mRNA。
更进一步的，所述的基因为Bims基因、IL-22BP编码基因、IL-15编码基因、IL-12编码基因或T34A编码基因中的至少一种。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明提供了一种新型的肝癌靶向基因递送载体DMP-F11多肽偶联物。该载体可以特异性地传递治疗基因进入肝癌细胞，实现对肝癌的靶向治疗作用。动物实验中，本发明基因递送载体递送凋亡诱导基因Bims的mRNA形式，通过***给药实现了对肝癌皮下瘤的生长抑制，是一种应用前景广阔的肝癌基因药物递送载体。
附图说明
图1所示为DOTAP化学结构式；
图2所示为mPEG-PCL化学结构式；
图3所示为Mal-PEG-PCL化学结构式；
图4所示为F11多肽结构式；
图5所示为F11-Mal-PEG-PCL化学结构式；
图6所示为试验例1中DMP与DMP-F11在肝癌病人组织芯片的免疫荧光染色结果；
图7所示为试验例2中DMP与DMP-F11静脉注射小鼠体内后在小鼠体内分布的流式结果；
图8所示为试验例3中DMP与DMP-F11分别递送Bims mRNA药物对小鼠肝癌皮下瘤模型的治疗效果；A表示肿瘤生长曲线，B表示平均肿瘤重量。
具体实施方式
本发明提供了一种新型的肝癌靶向基因递送载体，发明人首先采用阳离子磷脂DOTAP、两亲性共聚物mPEG-PCL和Mal-PEG-PCL自组装为DMP-Mal阳离子纳米粒，再通过加成反应与肝癌靶向多肽F11-HS共价偶联制备得到肝癌靶向肽修饰的基因递送载体，即DMP-F11纳米粒。本发明的DMP-F11纳米粒具有基因递送效率高，对肝癌靶向性高的优点。
本发明中所采用的阳离子磷脂DOTAP，化学命名为(2,3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵，简称DOTAP，化学结构式见图1。本发明采用DOTAP制备纳米粒，一方面，DOTAP磷脂也是两亲性，能够与同为两亲性的mPEG-PCL聚合物一起自组装为纳米颗粒；另一方面，DOTAP磷脂带正电，可与带负电的mRNA分子产生静电吸附，实现对mRNA的递送；此外，由于细胞膜也由脂质组成，DOTAP的存在能够促进纳米颗粒的跨膜摄取。
本发明中所采用的两亲性共聚物之一为甲氧基聚乙二醇-聚己内酯，简称mPEG-PCL，化学结构式见图2。mPEG-PCL具有生物可降解性、生物相容性和两亲性，且能够在水溶液中自助装为纳米颗粒，是理想的纳米药物载体骨架材料。
本发明中所采用的两亲性共聚物之一为马来酰亚胺-聚乙二醇-聚己内酯，简称Mal-PEG-PCL，化学结构式见图3。Mal-PEG-PCL不仅具有生物可降解性、生物相容性和两亲性，且能够在水溶液中自助装为纳米颗粒，还能够通过马来酰亚胺基团与多肽进行共价偶联，是理想的纳米药物功能化载体骨架材料。
本发明中所采用的肝癌靶向肽F11，化学结构式见图4，是一种具有靶向HepG2肝癌细胞功能的十二肽。
本发明通过筛选试验确定了DMP-F11纳米粒中mPEG-PCL与DOTAP的重量比，先采用mPEG-PCL与DOTAP的重量比为1～20︰1制备DMP-F11纳米粒，对这些纳米粒进行细胞转染实验，试验发现当mPEG-PCL聚合物为6～12份、DOTAP 1份时有较好的转染效率，优选mPEG-PCL聚合物9份，DOTAP 1份。
本发明通过筛选试验确定了DMP-F11纳米粒中Mal-PEG-PCL与mPEG-PCL的重量比，先采用Mal-PEG-PCL与mPEG-PCL的重量比为：1︰20～100制备DMP-F11纳米粒，对这些纳米粒进行细胞转染实验，试验发现当Mal-PEG-PCL聚合物为1份、mPEG-PCL聚合物为30-50份时有较好的转染效率，优选Mal-PEG-PCL聚合物1份，mPEG-PCL共聚物45份。
在前期纳米基因药物的制备过程中，将mRNA/DMP复合物中mRNA与DMP纳米的质量比范围定为1︰1～50。通过进行凝胶阻滞分析和细胞转染实验发现，在这个比例范围内DMP-F11纳米粒能够有效结合mRNA分子并有较好的转染效率。在此的基础上，进一步将该比例缩小至1︰10～30，再次进行凝胶阻滞分析和细胞转染实验发现，在这个比例范围内DMP-F11对mRNA分子的递送效果最优。
本发明制备DMP-0F11纳米粒所需的mPEG-PCL共聚物中，mPEG和PCL的分子量比例为1︰1，mPEG-PCL的总分子量范围为4000Da～8000Da。
本发明制备DMP-F11纳米粒所需的Mal-PEG-PCL共聚物中，PEG和PCL的分子量比例为1︰1，Mal-PEG-PCL的总分子量范围为4000Da～8000Da。
优选的，本发明制备DMP-F11纳米粒所需的靶向肽中，DMP纳米粒和靶向肽F11的摩尔比例为30︰1。
本发明得到的DMP-F11纳米粒的平均粒径为55nm，平均电位为+25mv，具备良好的mRNA结合能力，能保护mRNA不被RNase酶降解，与金标转染材料PEI25K相比，本发明DMP-F11纳米粒具有更高的mRNA转染能力和较低的细胞毒性。
本发明制备得到的DMP-F11纳米粒属于生物可降解阳离子纳米粒，是一种新型基因导入***非病毒载体。该纳米粒能通过静电相互作用结合mRNA，可以有效地将mRNA形式的目的基因导入肿瘤细胞中，其本身具有细胞毒性低、转染率高等特征。
下面将通过实施例对本发明的具体实施方式做进一步的解释说明，但不表示将本发明的保护范围限制在实施例所述范围内。
实施例中各种试剂均为普通市售产品。
实施例1制备F11多肽
称取一定量2Cl树脂加入反应器中，再按照树脂：Fmoc-Cys(Trt)-OH：DIEA 1:3:6的比例加入氨基酸和碱，用DCM做溶剂反应3小时，然后加入色谱级甲醇封端30min,最后洗净抽干合成树脂。选用并准确称取相应规摩的树脂，投放至干净反应器中，加入2倍量体积DMF(DCM)溶胀60-90分钟。抽掉DMF(DCM)，加入三倍量体积的20％哌啶溶液反应30分钟，再抽掉20％哌啶溶液，用DMF清洗5遍。取少量树脂在检测管内，滴入茚三酮溶液(A,B,C液)各两滴，110℃加热3分钟，树脂显阳性为Fmoc已脱除。脱除后按照3倍AA︰6倍NMM︰2.85倍HBTU(HATU)的顺序投放到反应器中，加入DMF(使树脂刚好能充分搅拌)。取少量树脂在检测管内，滴入茚三酮溶液(A,B,C液)各两滴，110℃加热3分钟，树脂显阴性，为反应完全；树脂阳性，为反应不完全，则从加入三倍量体积的20％哌啶溶液反应30分钟处重复操作。肽序列全部组装完成后，用DMF*3，MeOH*2，DCM*2，MeOH*3清洗树脂后，放入干燥器过夜抽干。抽干的树脂按每克8-10ml加入切割液(E液/F液)，放置摇床反应2h。反应完成后，用砂芯过滤，得到滤液，加入冰***，使粗品析出，放入离心机沉淀，用***重复清洗三次。将清洗好的粗品放入干燥器过夜抽干，得到目的多肽F11(结构如图4所示)。
实施例2制备DMP-F11阳离子纳米粒
1、制备DMP-Mal纳米粒
将阳离子脂质DOTAP(图1所示)、mPEG-PCL聚合物(分子量为4000Da，PEG-PCL＝2000Da-2000Da)(图2所示)和Mal-PEG-PCL聚合物(分子量为4000Da，PEG-PCL＝2000Da-2000Da)(图3所示)按5︰45︰1的质量比进行混合，并将混合物用二氯甲烷进行溶解，并置于旋转蒸发仪上以60℃旋蒸45min后成膜。所成的膜取出后溶解于去离子水中，然后在60℃水浴条件下震荡5min，得到特定浓度的DMP-Mal阳离子聚合物纳米粒溶液，置于4℃冰箱保存备用。
2、制备DMP-F11纳米粒
将制备好的DMP-Mal纳米粒水溶液，浓度为10mg/mL，按照DMP-Mal纳米水溶液与F11-HS多肽溶液(在F11多肽的碳端加上一个半胱氨酸，即F11-HS)的质量比为30︰1的比例溶解于Hepes缓冲液中，混匀后于4℃环境下过夜反应。反应结束后将上述混合溶液放入2000Da分子量大小的透析袋中，透析液为蒸馏水，于4℃环境下过夜透析。透析后所得溶液即为DMP-F11纳米粒水溶液，置于4℃冰箱保存备用。
实施例3制备荧光染料标记的DMP-F11阳离子纳米粒
1、制备DMP-Roh纳米粒
将阳离子脂质DOTAP、mPEG-PCL聚合物(分子量为4000Da，PEG-PCL＝2000Da-2000Da)和罗丹明B-PEG-PCL聚合物按5︰45︰1的质量比进行混合，并将混合物用二氯甲烷进行溶解，并置于旋转蒸发仪上以60℃旋蒸45min后成膜。所成的膜取出后溶解于去离子水中，然后在60℃水浴条件下震荡5min，得到特定浓度的DMP-Roh阳离子聚合物纳米粒溶液，置于4℃冰箱保存备用。
2、制备DMP-F11-Roh纳米粒
将阳离子脂质DOTAP、mPEG-PCL聚合物(分子量为4000Da，PEG-PCL＝2000Da-2000Da)、罗丹明B-PEG-PCL聚合物和Mal-PEG-PCL聚合物按5︰45︰1︰1的质量比进行混合，并将混合物用二氯甲烷进行溶解，并置于旋转蒸发仪上以60℃旋蒸45min后成膜。所成的膜取出后溶解于去离子水中，然后在60℃水浴条件下震荡5min，得到10mg/ml的DMP-Mal-Roh阳离子聚合物纳米粒溶液。按照DMP-Mal-Roh纳米水溶液与F11-HS多肽溶液的质量比为30:1的比例溶解于Hepes缓冲液中，混匀后于4℃环境下过夜反应。反应结束后将上述混合溶液放入2000Da分子量大小的透析袋中，透析液为蒸馏水，于4℃环境下过夜透析。透析后所得溶液即为DMP-F11-Roh纳米粒水溶液，置于4℃冰箱保存备用。
实施例4制备Bims mRNA/DMP纳米粒基因复合物
按DMP阳离子纳米粒：Bims mRNA以30︰1(w/w)的比例将纳米粒溶液(分散于去离子水中，浓度为5mg/mL)加入到mRNA溶液(分散于去离子水中，浓度为1mg/mL)中，之后立刻用移液枪吹打混匀，再在室温环境静置15分钟，即得DMP阳离子纳米粒Bims mRNA复合物。
实施例5制备Bims mRNA/DMP-F11纳米粒基因复合物
按DMP-F11阳离子纳米粒：Bims mRNA以30︰1(w/w)的比例将纳米粒溶液(分散于去离子水中，浓度为5mg/mL)加入到mRNA溶液(分散于去离子水中，浓度为1mg/mL)中，之后立刻用移液枪吹打混匀，再在室温环境静置15分钟，即得DMP-F11阳离子纳米粒质粒BimsmRNA复合物。
以下通过试验例证明本发明的有益效果。
试验例1本发明肝癌靶向基因递送载体DMP-F11对病人肝癌组织切片染色验证
为了验证本发明肝癌靶向基因递送载体DMP-F11在肝癌病人体内具有对肝癌组织的靶向亲和能力，应用免疫荧光技术对肝癌病人组织切片进行染色。首先，将肝癌病人切片烘片后脱蜡水化抗原修复。在用山羊血清封闭20分钟后，用10μg/ml的罗丹明B染料标记的DMP-F11溶液处理2小时，PBS洗涤三次后，用带有DAPI的抗荧光猝灭剂处理并封片。染色结果代表图片如图6所示，可以看到，比起癌旁组织，肝癌组织具有明显更多的红色荧光信号，证明了DMP-F11纳米粒能够在肝癌病人体内对肝癌组织进行靶向亲和。
试验例2本发明肝癌靶向基因递送载体DMP-F11在HepG2荷瘤小鼠体内分布验证
为了验证本发明肝癌靶向基因递送载体DMP-F11在HepG2荷瘤小鼠体内对肝癌组织的靶向作用，建立了肝癌HepG2皮下瘤模型。将体外培养的HepG2肝癌细胞用胰酶消化，用无血清、抗生素的DMEM培养基洗涤两次后，在4-5周的Balb/c-nude小鼠(雌性)皮下接种HepG2细胞(1×107，100μl)。待HepG2皮下瘤生长至体积达1000mm3时，取两只肿瘤生长情况相似小鼠，分别静脉注射200μg/只的DMP-Roh B溶液和DMP-Roh B-F11溶液。注射后两个小时，将小鼠处死并且取肿瘤和心、肝、脾、肺、肾。并取一部分组织剪碎放置于胶原酶溶液中，37℃消化4小时。悬液用70μm筛网过滤，用PBS洗涤三次后流式检测荧光。流式检测结果如图7所示。可以看到相对于其它组织，DMP和DMP-F11在肝癌组织均有较强的荧光分布，并且DMP-F11在小鼠肿瘤部分分布更多，证明了F11多肽能够增强DMP阳离子聚合物纳米粒对肝癌组织的特异性亲和能力。
试验例3本发明肝癌靶向基因递送载体DMP-F11***递送Bims mRNA的抗肝癌试验
为了研究肝癌靶向基因递送载体DMP-F11靶向递送治疗基因的抗肿瘤效应，在小鼠皮下建立了人肝癌皮下瘤模型。将体外培养的HepG2肝癌细胞用胰酶消化，用无血清、抗生素的DMEM培养基洗涤两次后，在4-5周的Balb/c-nude小鼠(雌性)皮下接种HepG2细胞(1×107/只，100μl)。在细胞接种4天后，开始按以下随机分组治疗(每组6只)：
A)空白对照组：生理盐水；
B)DMP/Bims对照组：Bims mRNA与DMP以1︰30的比例置于无核酸酶水中。
C)DMP-F11/Bims治疗组：Bims mRNA与DMP-F11以1︰30的比例置于无核酸酶水中。
采取静脉概要的方式进行治疗。
DMP阳离子纳米粒/mRNA复合物按实施例3的方法制备，配比如下：mRNA︰阳离子纳米粒＝1︰30(w/w)，DMP-F11阳离子纳米粒/mRNA复合物按实施例4的方法制备，配比如下：mRNA︰阳离子纳米粒＝1︰30(w/w)。将阳离子纳米粒/mRNA复合物稀释在无核酸酶水中。每次每只小鼠注射体积为100μl，其中含mRNA10μg以及阳离子纳米粒250μg，每天给药一次，共给药19次。治疗后开始每天测量肿瘤体积大小，治疗结束后第二天将动物处死并解剖，分离皮下肿瘤组织并进行称重。肿瘤生长抑制情况用T检验分析，P＜0.05则认为有统计学差异。以上各组中的肿瘤生长曲线、肿瘤重量见图8。其中图8A表示肿瘤生长曲线，8B表示平均肿瘤重量。
从图7可以看出，DMP-F11和DMP阳离子纳米粒递送Bims mRNA均能抑制肿瘤的生长，说明本发明阳离子纳米粒在体内具有高效递送治疗基因至细胞的能力。DMP-F11阳离子纳米粒/Bim mRNA基因复合物治疗组肿瘤生长速度慢于DMP阳离子纳米粒/Bim mRNA基因复合物，说明F11多肽能够通过提高基因药物递送靶向性来增强药物作用效果。
序列表
<110> 四川大学华西医院
<120> DMP-F11多肽偶联物及其制备方法和用途
<130> A210275K（序）
<141> 2021-04-29
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Phe Tyr Leu Glu His Pro Ser Gly Gly Leu Ala Val
1 5 10
Claims (13)
1.DMP-F11多肽偶联物，其特征在于：由阳离子纳米聚合物DMP-Mal与氨基修饰的肝癌靶向多肽F11偶联制备得到，所述的肝癌靶向多肽F11的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.根据权利要求1所述的DMP-F11多肽偶联物，其特征在于：所述的阳离子纳米聚合物DMP-Mal与氨基修饰的肝癌靶向多肽F11的重量比为10-30︰1。
3.根据权利要求1或2所述的DMP-F11多肽偶联物，其特征在于：满足下述至少一项：
所述氨基修饰的肝癌靶向多肽F11是指在多肽F11的碳端加上具有游离基团的氨基酸；
优选为半胱氨酸；
所述游离基团为-SH。
4.根据权利要求1-3任一项所述的DMP-F11多肽偶联物，其特征在于：所述DMP-F11多肽偶联物的平均粒径为55nm，平均电位为+25mv。
5.根据权利要求1-4任一项所述的DMP-F11多肽偶联物，其特征在于：所述的阳离子纳米聚合物DMP-Mal由DOTAP阳离子磷脂、mPEG-PCL聚合物与Mal-PEG-PCL聚合物混合制备得到。
6.根据权利要求5所述的DMP-F11多肽偶联物，其特征在于：所述的DOTAP阳离子磷脂为4-20份，mPEG-PCL聚合物20-100份，Mal-PEG-PCL聚合物1份。
7.根据权利要求1-6任一项所述的DMP-F11多肽偶联物，其特征在于：所述阳离子纳米聚合物DMP-Mal由以下方法中的任意一种制备得到；
方法A为薄膜旋蒸法，包括以下步骤：
a、称取原料，mPEG-PCL共聚物45份、DOTAP 5份、Mal-PEG-PCL聚合物1份；
b、将mPEG-PCL共聚物、DOTAP、Mal-PEG-PCL聚合物共同溶于溶剂中，然后采用旋转蒸发仪，在60度水浴条件下运行45分钟从而将溶剂蒸发，随后加适量水化溶液水化直到完全溶解，得到阳离子纳米聚合物DMP-Mal；
方法B为微流控法，包括以下步骤：
a、称取原料，mPEG-PCL共聚物45份、DOTAP 5份、Mal-PEG-PCL聚合物1份；
b、将mPEG-PCL共聚物、DOTAP、Mal-PEG-PCL聚合物共同溶于有机相溶剂中，然后以2mL/min的速度与水相溶剂共同通过微流控***并收集，得到阳离子纳米聚合物DMP-Mal。
8.权利要求1-7任一项所述的DMP-F11多肽偶联物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
先将阳离子纳米聚合物DMP-Mal溶液与氨基修饰的肝癌靶向多肽F11溶液共同溶于生物缓冲液中，充分混合均匀，透析后即得DMP-F11多肽偶联物。
9.权利要求1-8任一项所述的DMP-F11多肽偶联物作为载药载体的用途。
10.根据权利要求9所述的DMP-F11多肽偶联物作为载药载体的用途，其特征在于：载药载体为递送靶向肝癌细胞的药物的载体。
11.根据权利要求9或10所述的DMP-F11多肽偶联物作为载药载体的用途，其特征在于：所述的药物为基因药物。
12.根据权利要求11所述的DMP-F11多肽偶联物作为载药载体的用途，其特征在于：所述的基因为siRNA、mRNA、质粒中的一种或两种以上；优选地，所述基因为mRNA。
13.根据权利要求11所述的DMP-F11多肽偶联物作为载药载体的用途，其特征在于：所述的基因为Bims基因、IL-22BP编码基因、IL-15编码基因、IL-12编码基因或T34A编码基因中的至少一种。
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