CN115197323A - 一种sn38抗体或其抗原结合片段及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种SN38抗体或其抗原结合片段及其应用。所述SN38抗体或其抗原结合片段包含如本发明所示的序列。本发明的SN38抗体可以高特异性地识别小分子SN38，且对SN38具有较高的亲和力，可以实现对样品中SN38含量的有效检测。

Description

一种SN38抗体或其抗原结合片段及其应用
技术领域
本申请涉及生物医药领域，具体涉及一种SN38抗体或其抗原结合片段及其应用。
背景技术
抗体-小分子药物偶联物(Antibody-drug conjugate，ADC)是新一代抗体靶向治疗药物，主要应用于癌症肿瘤的治疗。ADC药物由小分子细胞毒性药物(Drug)、抗体(Antibody)以及连接抗体和细胞毒性药物的连接子(Linker)三部分组成，小分子细胞毒性药物通过化学偶联的方法结合到抗体蛋白上。临床研究已证明，ADC药物的药效高、在血液中相对稳定，能有效地降低小分子细胞毒性药物(化药)本身对循环***以及健康组织的毒性，是目前国际上抗癌药物的研发热点。
喜树碱(CPT)是一个具有五环骨架的药物，其组成为1个(3，4-β)喹啉基团(A、B环)、1个氮茚(C、D环)和1个α-羟基-δ-内脂环(E环)，具有1个手性碳原子C-20。
SN38(7-乙基-10-羟基喜树碱)是一种半合成的天然抗癌生物碱喜树碱类似物，分子式如下：
Figure BDA0003010900600000011
SN38利用超螺旋DNA解旋和促进DNA复制调节DNA的拓扑结构，抑制TOP的合成。通过与TOP1，DNA形成稳定的三元复合物，阻滞细胞周期至S期，从而阻止DNA的复制，引起细胞死亡。因此SN38可作为ADC(抗体-小分子药物偶联物，Antibody-drug conjugate)优选的小分子细胞毒性药物。
临床试验中需要对SN38构建的ADC在给药后体内的ADC浓度进行监测以针对性地确定给药剂量，目前尚无能够良好检测样本中ADC含量的检测试剂，故市场急需一种能够有效结合SN38的抗体以便快速对SN38类ADC进行准确分析。
发明内容
针对现有技术中尚无针对SN38抗体的技术问题，难以实现对SN38的良好检测，本发明提供了一种SN38抗体或其抗原结合片段及其应用。本发明的SN38抗体可以高特异性地识别小分子SN38，且对SN38具有较高的亲和力，可以实现对样品中SN38含量的有效检测。
为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案之一为：一种SN38抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和/或轻链可变区；
所述重链可变区包括HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或其变体1；所述HCDR2包含选自如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:8所示序列构成的群组中的氨基酸序列；所述HCDR3包含选自如SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:9所示序列构成的群组中的氨基酸序列；
所述轻链可变区包括LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1如SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列或其变体2；所述LCDR2包含如GTN或GTY所示的氨基酸序列；所述LCDR3的氨基酸序列包含如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列或其变体3；
所述变体至少具有所述SN38抗体或其抗原结合片段的功能。
较佳地，所述变体1为对SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的第6位、第7位和/或第8位突变后获得，其中第6位的突变优选为T6G，第7位的突变优选为Y7A，第8位的突变优选为W8G；
所述变体2为对SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列的第7位和/或第9位突变后获得，其中第7位的突变优选为S7R，第9位的突变优选为F8Y；
所述变体3为对SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列的第4位、第5位和/或第6位突变后获得，其中第4位的突变优选为Y4H，第5位的突变优选为R5S或R5T，第6位的突变优选为N6T。
在一优选的实施方案中：
所述变体1的氨基酸序列如SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:7所示；
所述变体2的氨基酸序列如SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12所示；
所述变体3的氨基酸序列如SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:13所示。
较佳地，所述重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1-3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或，分别如SEQ ID NO:4-6所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或，分别如SEQ IDNO:7-9所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
和/或，所述轻链可变区包括氨基酸序列分别如SEQ ID NO:10、GTN、SEQ ID NO:11所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或，分别如SEQ ID NO:12、GTY、SEQ ID NO:13所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或，分别如SEQ ID NO:14、GTN、SEQ ID NO:15所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
更佳地，所述重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1-3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，且所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:10、GTN、SEQ ID NO:11所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
所述重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4-6所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，且所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:12、GTY、SEQ ID NO:13所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；
所述重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:7-9所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，且所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:14、GTN、SEQ ID NO:15所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在本技术方案中，所述重链可变区还可包含HFR1、HFR2、HFR3和HFR4，所述HFR1、HFR2、HFR3和HFR4的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:16-18和SEQ ID NO:19所示；或，所述HFR1、HFR2、HFR3和HFR4的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:20-22和SEQ ID NO:19所示；或，所述HFR1、HFR2、HFR3和HFR4的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:23-25和SEQ ID NO:19所示。
和/或，所述轻链可变区包含LFR1、LFR2、LFR3和LFR4，所述LFR1包含如SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列或其变体4；所述LFR2包含如SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列或其变体5；所述LFR3包含如SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列或其变体6；所述LFR4包含如SEQ IDNO:29所示的氨基酸序列或其变体7。
较佳地：
所述变体4的氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示；
所述变体5的氨基酸序列如SEQ ID NO:31所示；
所述变体6的氨基酸序列如SEQ ID NO:32或SEQ ID NO:33所示；
所述变体7的氨基酸序列如SEQ ID NO:34所示。
更佳地：
所述重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:16-18和SEQ ID NO:19所示的HFR1、HFR2、HFR3和HFR4，且所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:26-29所示的LFR1、LFR2、LFR3和LFR4；或，所述重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:20-22和SEQ ID NO:19所示的HFR1、HFR2、HFR3和HFR4，且所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:30-32和SEQ ID NO:29所示的LFR1、LFR2、LFR3和LFR4；所述重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:23-25和SEQ ID NO:19所示的HFR1、HFR2、HFR3和HFR4，且所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:33和SEQ IDNO:34所示的LFR1、LFR2、LFR3和LFR4。
在一优选的实施方案中，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:37或SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:37或SEQ ID NO:39所示氨基酸序列具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:38或SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:38或SEQ ID NO:40所示氨基酸序列具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。
在一优选的实施方案中，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列；或，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列；或，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列。
较佳地，所述SN38抗体或其抗原结合片段包括鼠或人抗体恒定区或其突变；所述鼠抗体恒定区包括鼠IgG1、IgG2a、IgG2b3或IgG3的重链恒定区和κ或λ型轻链恒定区，所述人抗体恒定区包括人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区和κ或λ型轻链恒定区；优选地，所述突变与所述鼠或人抗体恒定区的氨基酸序列具有至少90％、95％、96％、97％、98％或者99％的同一性。
在一优选的实施方案中，所述SN38抗体或其抗原结合片段的重链恒定区氨基酸序列如SEQ ID NO:41的第124-459位所示；所述SN38抗体或其抗原结合片段的轻链恒定区氨基酸序列如SEQ ID NO:42的第110-209位所示。
较佳地，所述SN38抗体或其抗原结合片段的结构包括免疫球蛋白、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv例如单链Fv片段(scFv)。
为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案之二为：一种分离的核酸，所述分离的核酸编码如技术方案之一所述的SN38抗体或其抗原结合片段。
较佳地，编码所述SN38抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列中，编码所述重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:43的第1-369位所示，编码所述轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:44的第1-327位所示；或编码所述重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:47的第1-372位所示，编码所述轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:48的第1-327位所示；编码所述重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:51的第1-363位所示，编码所述轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:52的第1-327位所示。
为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案之三为：一种表达载体，所示表达载体包括如技术方案之二所述的分离的核酸。优选地，所述表达载体的出发载体为pcDNA3.1(+)，更优选为英潍捷基(上海)贸易有限公司生产的pcDNA3.1(+)。
为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案之四为：一种转化体，其包括如技术方案之三所述的表达载体。优选地，所述转化体为基因修饰的慢病毒或免疫效应细胞。更优选地，所述慢病毒为含有PLVX-EF1-CAR、lentiCRISPR v2-CAR或pELNS-CAR的慢病毒，所述免疫效应细胞为T淋巴细胞、NK细胞或NKT细胞。
为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案之五为：一种检测组合物，所述检测组合物包含如技术方案之一所述的SN38抗体或其抗原结合片段、技术方案之二所述的分离的核酸、技术方案之三所述的表达载体和/或技术方案之四所述的转化体。
为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案之六为：一种试剂盒，所述试剂盒包含如技术方案之一所述的SN38抗体或其抗原结合片段、技术方案之二所述的分离的核酸、技术方案之三所述的表达载体、技术方案之四所述的转化体和/或技术方案之五所述的检测组合物。
较佳地，所述试剂盒还包括(i)施用抗体或其抗原结合片段、分离的核酸、表达载体、转化体或检测组合物的装置；和/或(ii)使用说明。
为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案之七为：一种检测样品中SN38的方法，所述方法使用如技术方案之一所述的SN38抗体或其抗原结合片段、技术方案之二所述的分离的核酸、技术方案之三所述的表达载体、技术方案之四所述的转化体、技术方案之五所述的检测组合物和/或技术方案之六所述的试剂盒与样品进行反应。
为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案之八为：一种如技术方案之一所述的SN38抗体或其抗原结合片段、技术方案之二所述的分离的核酸、技术方案之三所述的表达载体、技术方案之四所述的转化体、技术方案之五所述的检测组合物或技术方案之六所述的试剂盒在检测SN38中的应用。
另外，本发明还提供了技术方案之九：一种药物组合物，所述药物组合物包含如技术方案之一所述的SN38抗体或其抗原结合片段、技术方案之二所述的分离的核酸、技术方案之三所述的表达载体和/或技术方案之四所述的转化体。
较佳地，所述药物组合物包含药学上可接受的载体。
另外，本发明还提供了技术方案之十：如技术方案之一所述的SN38抗体或其抗原结合片段、技术方案之二所述的分离的核酸、技术方案之三所述的表达载体、技术方案之四所述的转化体、技术方案之九所述的药物组合物或技术方案之六所述的试剂盒在制备治疗SN38相关病症的药物中的应用。
另外，本发明还提供了一种技术方案：一种治疗SN38相关的病症(例如副作用)的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的如技术方案之一所述的SN38抗体或其抗原结合片段、技术方案之二所述的分离的核酸、技术方案之三所述的表达载体、技术方案之四所述的转化体、技术方案之九所述的药物组合物。
术语
本发明中，术语“CDR”是指抗体的可变结构域内主要促成抗原结合的6个高变区之一，所述6个CDR的定义由Kabat E.A.等人，(1991)Sequences of proteins ofimmunological interest.NIH Publication91-3242)提供。如本文中使用的，CDR的Kabat定义应用于轻链可变结构域的CDR1、CDR2和CDR3(CDR L1、CDR L2、CDR L3或L1、L2、L3)，以及重链可变结构域的CDR1、CDR2和CDR3(CDR H1、CDR H2、CDR H3或H1、H2、H3)。
本发明中，术语“抗体”可互换地用来指包含由二硫键相互连接的至少两条重链(HC)和两条轻链(LC)的糖蛋白。每条重链由重链可变区(本发明中缩写为VH)和重链恒定区组成。重链恒定区由3个结构域CH1、CH2和CH3组成。每条轻链由轻链可变区(本发明中缩写为VL)和轻链恒定区(本发明中缩写为CL)组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。哺乳动物重链分类为α、δ、ε、γ和μ。哺乳动物轻链分类为λ或κ。包含α、δ、ε、γ和μ重链的免疫球蛋白分类为免疫球蛋白(Ig)A、IgD、IgE、IgG和IgM。完全抗体形成“Y”形状。Y的茎由两条重链的第二和第三恒定区(并且对于IgE和IgM，第四恒定区)结合在一起组成，并且二硫键(链间)在铰链中形成。重链γ、α和δ具有由三个串联(成一行)Ig结构域构成的恒定区，和用于增加柔性的铰链区；重链μ和ε具有由四个免疫球蛋白结构域构成的恒定区。第二和第三恒定区分别称为“CH2结构域”和“CH3结构域”。Y的每个臂包括结合到单个轻链的可变和恒定区的单个重链的可变区和第一恒定区。轻链和重链的可变区负责抗原结合。
本发明中，“Fab”由一条轻链和一条重链的CH1及可变区组成。Fab分子的重链不能与另一个重链分子形成二硫键。“Fc”区含有包含抗体的CH2和CH3结构域的两个重链片段。两个重链片段由两个或多个二硫键并通过CH3结构域的疏水作用保持在一起。“Fab’”含有一条轻链和包含VH结构域和CH1结构域以及CH1和CH2结构域之间区域的一条重链的部分，由此可在两个Fab’的两条重链之间形成链间二硫键以形成F(ab’)2分子。“F(ab’)2片段”含有两条轻链和两条包含CH1和CH2结构域之间的恒定区的部分的重链，由此在两条重链间形成链间二硫键。因此F(ab’)2片段由通过两条重链间的二硫键保持在一起的两个Fab’组成。术语“Fv”意指向抗体的单臂的VL和VH结构域组成的抗体片段，但缺少恒定区。
本发明中，所述的scFv(single chain antibody fragment，单链抗体)可为本领域常规的单链抗体，其包括重链可变区、轻链可变区和15～20个氨基酸的短肽。其中VL和VH结构域通过使其能够产生为单个多肽链的连接体配对形成单价分子[参见，例如，Bird等人，Science 242:423-426(1988)和Huston等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879-5883(1988)]。此类scFv分子可具有一般结构：NH2-VL-接头-VH-COOH或NH2-VH-接头-VL-COOH。合适的现有技术接头由重复的G4S氨基酸序列或其变体组成。例如，可使用具有氨基酸序列(G4S)4或(G4S)3接头，但也可使用其变体。
如本发明所用，“药学上可接受的载体”或“药用载体”包括生理上相容的任何和全部溶剂、分散介质、等渗剂和吸收延迟剂等。适用于本发明的药用载体可以是无菌液体，如水和油，包括那些石油、动物、植物或合成来源的，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。当静脉内施用药物组合物时，水是优选的载体。还可以将盐水溶液和水性右旋糖以及甘油溶液用作液体载体，特别是用于可注射溶液。合适的赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、甘油单硬脂酸酯、滑石、氯化钠、干燥的脱脂乳、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇等。对于赋形剂的使用及其用途，亦参见“Handbook ofPharmaceuticalExcipients”,第五版,R.C.Rowe,P.J.Seskey和S.C.Owen,PharmaceuticalPress,London,Chicago。若期望的话，所述组合物还可以含有少量的润湿剂或乳化剂，或pH缓冲剂。这些组合物可以采用溶液、悬浮液、乳剂、片剂、丸剂、胶囊剂、粉末、持续释放配制剂等的形式。口服配制剂可以包含标准药用载体和/或赋形剂，如药用级甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精。可以通过将具有所需纯度的本发明的抗体或其抗原结合片段与一种或多种任选的药用辅料(Remington’s Pharmaceutical Sciences，第16版，Osol，A.编(1980))混合来制备包含本发明所述的药物制剂或药物组合物，优选地以冻干制剂或水溶液的形式。本发明的药物组合物或制剂还可以包含超过一种活性成分，所述活性成分是被治疗的特定适应症所需的，优选具有不会不利地彼此影响的互补活性的那些活性成分。例如，理想的是还提供其它抗感染活性成分，例如其它抗体、抗感染活性剂、小分子药物或免疫调节剂等。所述活性成分以对于目的用途有效的量合适地组合存在。可制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适实例包括含有本发明的抗体或其抗原结合片段的固体疏水聚合物的半渗透基质，所述基质呈成形物品，例如薄膜或微囊形式。
如本领域已知，在本发明中可交换使用的“核酸”是指任何长度的核苷酸链，并且包括DNA和RNA。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修饰的核苷酸或碱基、和/或它们的类似物、或者能够通过DNA或RNA聚合酶掺入链的任何底物。
如下进行序列之间序列同一性的计算。为确定两个氨基酸序列或两个核酸序列的同一性百分数，将所述序列出于最佳比较目的比对(例如，可以为了最佳比对而在第一和第二氨基酸序列或核酸序列之一或二者中引入空位或可以为比较目的而抛弃非同源序列)。在一个优选实施方案中，为比较目的，所比对的参考序列的长度是至少30％、优选地至少40％、更优选地至少50％、60％和甚至更优选地至少70％、80％、90％、100％的参考序列长度。随后比较在对应氨基酸位置或核苷酸位置处的氨基酸残基或核苷酸。当第一序列中的位置由第二序列中对应位置处的相同氨基酸残基或核苷酸占据时，则所述分子在这个位置处是相同的。可以利用数学算法实现两个序列间的序列比较和同一性百分数的计算。在一个优选实施方案中，使用已经集成至GCG软件包的GAP程序中的Needlema和Wunsch((1970)J.Mol.Biol.48:444-453)算法(在http://www.gcg.com可获得)，使用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵和空位权重16、14、12、10、8、6或4和长度权重1、2、3、4、5或6，确定两个氨基酸序列之间的同一性百分数。在又一个优选的实施方案中，使用GCG软件包中的GAP程序(在http://www.gcg.com可获得)，使用NWSgapdna.CMP矩阵和空位权重40、50、60、70或80和长度权重1、2、3、4、5或6，确定两个核苷酸序列之间的同一性百分数。特别优选的参数集合(和除非另外说明否则应当使用的一个参数集合)是采用空位罚分12、空位延伸罚分4和移码空位罚分5的Blossum 62评分矩阵。还可以使用PAM120加权余数表、空位长度罚分12、空位罚分4)，利用已经并入ALIGN程序(2.0版)的E.Meyers和W.Miller算法,((1989)CABIOS,4:11-17)确定两个氨基酸序列或核苷酸序列之间的同一性百分数。额外地或备选地，可以进一步使用本发明所述的核酸序列和蛋白质序列作为“查询序列”以针对公共数据库执行检索，以例如鉴定其他家族成员序列或相关序列。
如本发明所用，“表达载体”表示构建体，其能够将一种或多种所关注的基因或序列递送入宿主细胞并且优选在宿主细胞中表达所述基因或序列。表达载体的实例包括但不限于病毒载体、裸DNA或RNA表达载体、质粒、粘粒或噬菌体载体、与阳离子凝聚剂相关的DNA或RNA表达载体、包囊化于脂质体中的DNA或RNA表达载体以及某些真核细胞，例如生产细胞。
在本发明中术语“转化体”包括已经引入外源性核酸的细胞，包括这些细胞的子代。子代在核酸含量上与亲代细胞可能不完全相同，但可能含有突变。本发明包括与在初始转化的细胞中筛选或选择的细胞具有相同功能或生物学活性的突变子代。
本发明中“变体1”、“变体2”等变体之后的数字没有特殊意义，仅为指代相同术语。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：
本发明公开了一种SN38抗体或其抗原结合片段及其应用。由于本领域尚无针对SN38的抗体，本发明的SN38抗体均为全新序列的抗体。所述SN38抗体具有特异性识别小分子SN38的能力，且具有较高的亲和力，在临床检测SN38中具有广阔的前景。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
实施例1SN38免疫原的制备
SN38(北京百灵威科技有限公司)分别偶联KLH(Sigma-Aldrich，货号H1757)和BSA(Sigma-Aldrich，货号A1933)作为免疫原。
偶联KLH，首先称取3mg KLH，用0.1M碳酸氢钠包含5mM乙二胺四乙酸，pH8.0溶解成10mg/ml，共0.3ml。接着称取一定量2`亚氨基硫烷盐酸盐(生工，货号C100211)用无菌水溶解成2mg/ml(14mM)。向KLH中加入0.25ml的2`亚氨基硫烷盐酸盐，KLH氨基数目和2`亚氨基硫烷盐酸盐摩尔比为1:2，室温反应2h。用0.1M PBS含有5mM乙二胺四乙酸，pH6.5室温透析2h。然后称取SN38 1.2mg,用二甲基亚砜溶解成10mg/ml。2h后取出KLH-SH，向其加入1.2mgSN38，室温反应2h。用1×PBS，pH7.4 4℃透析过夜，换液一次。
偶联BSA，称取3mg BSA，用0.1M碳酸氢钠包含5mM乙二胺四乙酸，pH8.0溶解成10mg/ml，共0.3ml。接着称取一定量2`亚氨基硫烷盐酸盐用无菌水溶解成2mg/ml(14mM)。向BSA中加入0.255ml的2`亚氨基硫烷盐酸盐。BSA氨基数目和2`亚氨基硫烷盐酸盐摩尔比为1:2。室温反应2h。用0.1M PBS含有5mM乙二胺四乙酸,pH6.5室温透析2h。称取SN38 1.3mg,用二甲基亚砜溶解成10mg/ml。2h后取出BSA-SH，向其加入1.3mg SN38，室温反应2h。用1×PBS，pH7.4 4℃透析过夜，换液一次。
实施例2动物免疫
免疫共分为两组开展分别采用不同的抗原进行免疫，A组5只Balb/c小鼠(维通利华)，用SN38-KLH进行免疫，B组5只Balb/c小鼠，用SN38-BSA免疫。免疫开始前4天采血备用，每14天进行一次免疫，共4轮免疫，每次免疫每只小鼠用50μg抗原进行皮下注射，第3轮免疫后第7天采血间接ELISA检测免疫动物血清以此确定免疫应答的水平。第4轮免疫后进行细胞融合。
采用间接ELISA方法在第3次免疫7天后检测血清滴度。采用疏水性质的酶标板(Nunc，货号446442)，分别以1μg/ml的SN38-BSA和SN38-KLH包被酶标板条分别检测SN38-KLH免疫组和SN38-BSA免疫组，包被液为PBS(pH7.4)，血清分别稀释1000、2000、4000、8000、16000、32000、64000、128000、256000和512000倍后加入酶标板条与小分子进行结合，酶联二抗辣根过氧化物酶标记羊抗小鼠Fc的IgG(Bethyl Laboratories，货号A90-231P)检测，OD655nm波长为参比波长(Molecular Devices，型号SpectraMax M2e)，OD450nm处测定吸光度，其中46、47、50和54四个编号的小鼠血清滴度均较强。结果见表1。
表1血清滴度
Figure BDA0003010900600000101
竞争ELISA方法检测10只小鼠血清，分别采用0.1μg/ml的SN38-BSA和SN38-KLH包被酶标板条，分别检测SN38-KLH免疫组和SN38-BSA免疫组小鼠血清。其中包被液为PBS(pH7.4)，血清分别稀释1000、2000、4000、8000、16000、32000、64000、128000、256000和512000倍后与0μg/ml或者100μg/ml的SN38加入酶标板条，酶联二抗辣根过氧化物酶标记羊抗小鼠Fc的IgG检测，OD655nm波长为参比波长，OD450nm处测定吸光度，结果见表2。过量SN38小分子竞争结合抗血清筛选小鼠血清竞争结合活性较强，选择两只小鼠46和54进行细胞融合实验。
表2小鼠血清ELISA检测值
Figure BDA0003010900600000111
实施例3细胞融合与母克隆筛选：
采用电融合方法进行细胞融合，共2轮。平均融合效率约2500个脾细胞能融合产生1个杂交瘤细胞，每轮融合的所有细胞均铺到96孔板中进行扩增培养。对融合细胞产生的母克隆上清进行ELISA筛选，采用间接ELISA方法筛选阳性母克隆，SN38-BSA免疫的小鼠杂交瘤细胞母克隆用1μg/ml的SN38-KLH包被酶标板条，分别加入SN38-BSA免疫的小鼠杂交瘤细胞母克隆1C11、1H3、4F2、10E9、12E11、13A1、13H9、14G7、15B2、15G5待检上清与SN38-KLH结合，加入酶联二抗辣根过氧化物酶标记羊抗小鼠Fc的IgG，OD值越高抗体浓度越高。
SN38-KLH免疫的小鼠杂交瘤细胞母克隆采用1μg/ml的SN38-BSA包被酶标板条用于检测，分别加入SN38-KLH免疫的小鼠杂交瘤细胞母克隆17C5、19G10、20H4、21C11、25A4、26D12、29D11、29F7、30D9、30F6待检上清与SN38-BSA结合，加入酶联二抗辣根过氧化物酶标记羊抗小鼠Fc的IgG，小鼠杂交瘤细胞母克隆的ELISA检测结果见表3。
表3 SN38免疫的小鼠杂交瘤细胞母克隆的ELISA检测结果
Figure BDA0003010900600000112
Figure BDA0003010900600000121
用间接ELISA检测得到的阳性母克隆上清进行竞争ELISA分析。0.5μg/ml SN38-BSA包被检测SN38-KLH免疫的母克隆，加入1：6倍稀释的细胞上清和不同浓度的SN38(0、0.1、1和10μg/ml)，包被于酶标板条的SN38-BSA和加入的SN38竞争结合上清中的抗体，加入的SN38量越多，和包被的SN38结合的抗体越少，洗板后，加入酶联二抗辣根过氧化物酶标记羊抗小鼠Fc的IgG进行显色反应，检测OD值越低抗体对SN38的特异性越好，结果见表4。同理检测SN38-BSA免疫的母克隆，结果见表5。
表4阳性的SN38-KLH免疫母克隆上清的ELISA检测值
Figure BDA0003010900600000122
表5阳性的SN38-BSA免疫母克隆上清的ELISA检测值
Figure BDA0003010900600000123
克隆号17C5、25A4、1H3、13H9和14G7培养上清在相同的条件下进行检测，有比较强的信号值，且加入浓度为0.01μg/ml和0.1μg/ml的SN38竞争后有比较好的竞争效果(较低的信号值，即OD450nm/OD655nm小于0.4)，进行定株冻存开展亚克隆。
实施例4亚克隆筛选
采用有限稀释法对阳性母克隆进行亚克隆，以确保最终拿到单克隆细胞。亚克隆阶段进行3轮，用间接ELISA和竞争ELISA方法进行亚克隆筛选，每个母克隆选择2个稳定的子克隆进行扩增和低温保存。低温冻存前每个子克隆收集5ml上清，并采用亚类试剂盒(Sigma-Aldrich，货号：11493027001)对所有亚型进行鉴定。
对亚克隆上清进行间接ELISA阳性筛选，SN38-BSA免疫的，采用1μg/ml的SN38-KLH包被酶标板条，用SN38-KLH(SN38-BSA)免疫的用1μg/ml的SN38-BSA(SN38-KLH)包被，加入梯度稀释的待检亚克隆上清，与酶标板条上包被的与小分子进行结合，酶联二抗辣根过氧化物酶标记羊抗小鼠Fc的IgG进行显示反应。OD值越高，反映抗体浓度越高，结果见表6。
表6亚克隆细胞上清中抗体的浓度检测
Figure BDA0003010900600000131
竞争ELISA分析亚克隆细胞培养上清，0.5μg/ml SN38-BSA包被检测SN38-KLH免疫的亚克隆，加入300倍稀释的亚克隆细胞17C5-1、17C5-2、25A4-1和25A4-2上清和不同浓度的SN38(0、0.01、0.1μg/ml)，加入酶联二抗辣根过氧化物酶标记羊抗小鼠Fc的IgG进行显色反应，检测OD值越低抗体对小分子的特异性越好。同理检测SN38-BSA免疫的亚克隆1H3-1、1H3-2、13H9-1、13H9-2、14G7-1和14G7-2，结果见表7。
表7亚克隆细胞上清中抗体的特异性检测
Figure BDA0003010900600000132
Figure BDA0003010900600000141
实施例5单抗鉴定
对单克隆1H3-1、13H9-2、14G7-1进行抗体生产，采用Protein A/G亲和层析方法(Cytiva，货号29049104)纯化抗体，用透析方法将纯化抗体保存在磷酸盐缓冲液(PBS)中。用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，间接ELISA进行滴度检测，竞争ELISA进行鉴定，NanoDrop2000(Thermo)测定抗体浓度。
采用间接ELISA方法检测单抗滴度。采用疏水性质的酶标板，以1μg/ml的SN38-KLH包被酶标板条，包被液为PBS(pH7.4)，抗体分别稀释1000、2000、4000、8000、16000、32000、64000、128000、256000和512000倍后加入酶标板条与SN38-KLH进行结合，酶联二抗辣根过氧化物酶标记羊抗小鼠Fc的IgG进行显示反应，OD655nm波长为参比波长，OD450nm处测定吸光度，1H3-1、13H9-2、14G7-1滴度较强均达到512000，结果见表8。
表8间接ELISA的单抗滴度检测值
Figure BDA0003010900600000142
竞争ELISA检测：0.5μg/ml包被SN38-KLH，加入纯化后的1H3-1、13H9-2、14G7-1抗体(抗体浓度范围：5000～0.005ng/ml)和不同浓度的SN38(0、0.01和0.1μg/ml)，让包被的SN38-KLH和加入的SN38竞争结合抗体，加入的小分子量越多，和包被的SN38结合的抗体越少，洗板后加入二抗辣根过氧化物酶标记羊抗小鼠Fc的IgG，OD值越低抗体对SN38的特异性越好。SN38单抗1H3-1竞争结合结果符合预期，随着SN38剂量增大，单抗与抗原结合力下降，单抗对SN38的专属性强。
表9 1H3-1单抗的特异性检测值
Figure BDA0003010900600000143
Figure BDA0003010900600000151
表10 13H9-2单抗的特异性检测值
Figure BDA0003010900600000152
表11 14G7-1单抗的特异性检测值
Figure BDA0003010900600000153
实施例6单抗序列鉴定
对1H3-1、13H9-2、14G7-1杂交瘤细胞进行复苏，新鲜收集的杂交瘤细胞沉淀细胞数5×106以上，杂交瘤细胞裂解液，使用TriZol Reagent充***解5×106以上新鲜收集的杂交瘤细胞抽提总RNA，浓度不低于100ng/μl，总体积20μl，总量5μg，琼脂糖凝胶电泳检测RNA条带清晰无明显降解。进行反转录获取cDNA，并扩增重链和轻链的可变区序列，克隆至目标载体进行轻重链的测序。结果如下各表。
表12 HCDR氨基酸序列及编号
HCDRs 1H3-1 13H9-2 14G7-1
SEQ ID NO: 1 4 7
HCDR1 GYTFTTYW GYTFTTAG GYTFTGYW
SEQ ID NO: 2 5 8
HCDR2 INPSNGRT INTHSGVP INPGNGRT
SEQ ID NO: 3 6 9
HCDR3 ATSGPYYSYDVAWFAY ARASSSLYRYDQAWFTY ARPLDGYYETWFSY
表13 LCDR氨基酸序列及编号
LCDRs 1H3-1 13H9-2 14G7-1
SEQ ID NO: 10 12 14
LCDR1 TGAVTTRNF TGAVTTSNY TGAVTTSNF
SEQ ID NO:
LCDR2 GTN GTY GTN
SEQ ID NO: 11 13 15
LCDR3 ALWYTTHWV ALWHSNHWV ALWYRNHWV
表14 HFR氨基酸序列及编号
Figure BDA0003010900600000161
表15 LFR氨基酸序列及编号
Figure BDA0003010900600000162
Figure BDA0003010900600000171
表16各抗SN38单抗的轻重链可变区氨基酸序列及编号
Figure BDA0003010900600000172
1H3-1重链核酸序列(SEQ ID NO:43)：
CAGGTCCAACTACAGCAGCCTGGGGCTGAACTGGTGAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAACTGTCCTGCAAGGATTCTGGCTACACTTTTACCACCTACTGGATGCACTGGGTGATGCAGAGGCCTGGACAAGGTCTTGAGTGGATTGGAGAGATTAATCCTAGCAACGGTCGGACTAACTACAATGAGAGGTTCAAGAACAAGGCCACAGTGACTGTAGACAAATCCTCCACCACAGCCTACATGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAACATCAGGGCCCTACTATAGTTACGACGTGGCCTGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTTGTCACTGTCTCTGCAgccaaaacaacacccccatcagtctatccactggcccctgggtgtggagatacaactggttcctctgtgactctgggatgcctggtcaagggctacttccctgagtcagtgactgtgacttggaactctggatccctgtccagcagtgtgcacaccttcccagctctcctgcagtctggactctacactatgagcagctcagtgactgtcccctccagcacctggccaagtcagaccgtcacctgcagcgttgctcacccagccagcagcaccacggtggacaaaaaacttgagcccagcgggcccatttcaacaatcaacccctgtcctccatgcaaggagtgtcacaaatgcccagctcctaacctcgagggtggaccatccgtcttcatcttccctccaaatatcaaggatgtactcatgatctccctgacacccaaggtcacgtgtgtggtggtggatgtgagcgaggatgacccagacgtccagatcagctggtttgtgaacaacgtggaagtacacacagctcagacacaaacccatagagaggattacaacagtactatccgggtggtcagtgccctccccatccagcaccaggactggatgagtggcaaggagttcaaatgcaaggtcaacaacaaagacctcccatcacccatcgagagaaccatctcaaaaattaaagggctagtcagagctccacaagtatacatcttgccgccaccagcagagcagttgtccagggaagatgtcagtctcacttgcctggtcgtgggcttcaaccctggagacatcagtgtggagtggaccagcaatgggcatacagaggagaactacaaggacaccgcaccagtcctggactctgacggttcttacttcatatacagcaagctcgatataaaaacaagcaagtgggagaaaacagattccttctcatgcaacgtgagacacgagggtctgaaaaattactacctgaagaagaccatctcccggtctccgggtaaa
1H3-1轻链核酸序列(SEQ ID NO:44)：
CAGGCTGTTGTGACTCAGGAATCTGCACTCACCACATCACCTGGTGAAACAGTCACACTCACTTGTCGCTCAAGTACTGGGGCTGTTACAACCAGGAACTTTGCCAACTGGGTCCAAGAAAAACCAGATCATTTATTCACGGGTCTAATAGGTGGTACCAACAACCGAGCTCCAGGTGTTCCTGCCAGATTCTCAGGCTCCCTGATTGGAGACAAGGCTGCCCTCACCATCACAGGGGCACAGACTGAGGATGAGGCAATATATTTCTGTGCTCTATGGTACACCACCCATTGGGTGTTCGGTGGAGGAACCAAACTGACTGTCCTAggtcagcccaagtccactcccactctcaccgtgtttccaccttcctctgaggagctcaaggaaaacaaagccacactggtgtgtctgatttccaacttttccccgagtggtgtgacagtggcctggaaggcaaatggtacacctatcacccagggtgtggacacttcaaatcccaccaaagagggcaacaagttcatggccagcagcttcctacatttgacatcggaccagtggagatctcacaacagttttacctgtcaagttacacatgaaggggacactgtggagaagagtctgtctcctgcagaatgtctc
13H9-2重链核酸序列(SEQ ID NO:47)：
CAGATCCATCTGGTGCAGTCTGGACCTGAGCTGAAGAAGCCTGGAGAGGCAGTCAGGATCTCCTGCAAGGCTTCTGGGTATACTTTCACAACTGCTGGAATGCAGTGGGTGCAAAAGATGCCAGGAAAGGGTTTGAGGTGGATTGGCTGGATAAACACCCACTCTGGAGTGCCAAGATATGCAGAGGACTTCGCGGGACGGTTTGCCTTCTCTTTGGAAACCTCTGCCACTATTGTTTATTTACAAATAAGCAACCTCAAATATGAGGACACGGCTACGTATTTCTGTGCGAGAGCCTCCTCCTCCCTCTATAGATACGACCAGGCCTGGTTTACTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACGGTCTCTGCAgccaaaacaacacccccatcagtctatccactggcccctgggtgtggagatacaactggttcctctgtgactctgggatgcctggtcaagggctacttccctgagtcagtgactgtgacttggaactctggatccctgtccagcagtgtgcacaccttcccagctctcctgcagtctggactctacactatgagcagctcagtgactgtcccctccagcacctggccaagtcagaccgtcacctgcagcgttgctcacccagccagcagcaccacggtggacaaaaaacttgagcccagcgggcccatttcaacaatcaacccctgtcctccatgcaaggagtgtcacaaatgcccagctcctaacctcgagggtggaccatccgtcttcatcttccctccaaatatcaaggatgtactcatgatctccctgacacccaaggtcacgtgtgtggtggtggatgtgagcgaggatgacccagacgtccagatcagctggtttgtgaacaacgtggaagtacacacagctcagacacaaacccatagagaggattacaacagtactatccgggtggtcagtgccctccccatccagcaccaggactggatgagtggcaaggagttcaaatgcaaggtcaacaacaaagacctcccatcacccatcgagagaaccatctcaaaaattaaagggctagtcagagctccacaagtatacatcttgccgccaccagcagagcagttgtccagggaagatgtcagtctcacttgcctggtcgtgggcttcaaccctggagacatcagtgtggagtggaccagcaatgggcatacagaggagaactacaaggacaccgcaccagtcctggactctgacggttcttacttcatatacagcaagctcgatataaaaacaagcaagtgggagaaaacagattccttctcatgcaacgtgagacacgagggtctgaaaaattactacctgaagaagaccatctcccggtctccgggtaaa
13H9-2轻链核酸序列(SEQ ID NO:48)：
CAGGCTGTTGTGACTCAGGAATCTGCACTCACCACATCACCTGGTGAAACAGTCACACTCACTTGTCGCTCAAATACTGGGGCTGTTACAACTAGTAACTATGCCAACTGGGTCCAAGAAAAACCAGATCATTTATTCACTGCTCTAATAGGTGGTACCTACAACCGAGCTCCAGGTGTTCCTGCCAGATTCTCAGGCTCCCTGATTGGAGACAAGTCTGCCCTCACCATCACAGGGGCACAGACTGAGGATGAGGCAATATATTTCTGTGCTCTGTGGCACAGCAACCATTGGGTGTTCGGTGGAGGAACCAAACTGACTGTCCTAggtcagcccaagtccactcccactctcaccgtgtttccaccttcctctgaggagctcaaggaaaacaaagccacactggtgtgtctgatttccaacttttccccgagtggtgtgacagtggcctggaaggcaaatggtacacctatcacccagggtgtggacacttcaaatcccaccaaagagggcaacaagttcatggccagcagcttcctacatttgacatcggaccagtggagatctcacaacagttttacctgtcaagttacacatgaaggggacactgtggagaagagtctgtctcctgcagaatgtctc
14G7-1重链核酸序列(SEQ ID NO:51)：
CAGGTCCGACTGCAGCAGCCTGGGGCTGAACTGGTGACACCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGTAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCGGCTACTGGATGCACTGGGTGAGGCAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGAGAGATTAATCCTGGCAACGGTCGTACTAACTACATTGAGAAGTTCAAGACCAAGGCCACACTGACTGTAGACAAATCCTCCAACACAGCCTACATGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGACCCCTTGATGGTTATTACGAGACCTGGTTTTCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAgccaaaacaacacccccatcagtctatccactggcccctgggtgtggagatacaactggttcctctgtgactctgggatgcctggtcaagggctacttccctgagtcagtgactgtgacttggaactctggatccctgtccagcagtgtgcacaccttcccagctctcctgcagtctggactctacactatgagcagctcagtgactgtcccctccagcacctggccaagtcagaccgtcacctgcagcgttgctcacccagccagcagcaccacggtggacaaaaaacttgagcccagcgggcccatttcaacaatcaacccctgtcctccatgcaaggagtgtcacaaatgcccagctcctaacctcgagggtggaccatccgtcttcatcttccctccaaatatcaaggatgtactcatgatctccctgacacccaaggtcacgtgtgtggtggtggatgtgagcgaggatgacccagacgtccagatcagctggtttgtgaacaacgtggaagtacacacagctcagacacaaacccatagagaggattacaacagtactatccgggtggtcagtgccctccccatccagcaccaggactggatgagtggcaaggagttcaaatgcaaggtcaacaacaaagacctcccatcacccatcgagagaaccatctcaaaaattaaagggctagtcagagctccacaagtatacatcttgccgccaccagcagagcagttgtccagggaagatgtcagtctcacttgcctggtcgtgggcttcaaccctggagacatcagtgtggagtggaccagcaatgggcatacagaggagaactacaaggacaccgcaccagtcctggactctgacggttcttacttcatatacagcaagctcgatataaaaacaagcaagtgggagaaaacagattccttctcatgcaacgtgagacacgagggtctgaaaaattactacctgaagaagaccatctcccggtctccgggtaaa
14G7-1轻链核酸序列(SEQ ID NO:52)：
CAGGCTGTTGTGACTCAGGAATCTGCACTCACCACATCACCTGGTGAAACAGTCACACTCACTTGTCGCTCAAGTACTGGGGCTGTTACAACTAGTAACTTTGCCAACTGGGTCCAAGAAAAACCAGATCATTTATTCACTGGTCTAATAGGTGGTACCAACAACCGCGCTCCAGGTGTTCCTGCCAGATTCTCAGGCTCCCTGATTGGAGACAAGGCTGCCCTCACCATCACAGGGGCACAGACTGAGGATGAGGCAGTATATTTCTGTGCTCTCTGGTACAGAAACCACTGGGTGTTCGGTGGAGGAACCGAACTGACTGTCCTAggtcagcccaagtccactcccactctcaccgtgtttccaccttcctctgaggagctcaaggaaaacaaagccacactggtgtgtctgatttccaacttttccccgagtggtgtgacagtggcctggaaggcaaatggtacacctatcacccagggtgtggacacttcaaatcccaccaaagagggcaacaagttcatggccagcagcttcctacatttgacatcggaccagtggagatctcacaacagttttacctgtcaagttacacatgaaggggacactgtggagaagagtctgtctcctgcagaatgtctc
注：核酸序列中，大写为可变区，小写为恒定区
实施例7抗体亲和力测定
采用表面等离子共振(GE，型号Biacore T200)分析技术检测抗体1H3-1、13H9-2和14G7-1与SN38的亲和力常数(KD)。将SN38-KLH通过氨基共价偶联的方法固定于CM5芯片表面(GE Healthcare)，用缓冲液(10mM HEPES,150mM NaCl,3mM EDTA,0.05％Tween 20,pH7.4)稀释抗体1H3-1、13H9-2和14G7-1至不同浓度：3.125nM、6.25nM、12.5nM、25nM、50nM和100nM，分别注入芯片，进样流速为30μL/min，样品结合时间为300s,解离时间为600s。每次结合解离后，芯片表面用50mM盐酸进行再生，再生时间为60s，进样流速为100μL/min。
表17亲和力测定值
克隆 ka(1/Ms) kd(1/s) KD(M)
1H3-1 1.28E+05 3.90E-04 3.06E-09
13H9-2 1.28E+05 1.35E-04 1.06E-09
14G7-1 2.78E+05 3.42E-03 1.23E-08
测定抗体1H3-1、13H9-2和14G7-1与SN38的亲和力常数检测结果见表17。
SEQUENCE LISTING
<110> 上海复旦张江生物医药股份有限公司
<120> 一种SN38抗体或其抗原结合片段及其应用
<130> P20016924C
<160> 52
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1H3-1 HCDR1
<400> 1
Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr Trp
1 5
<210> 2
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1H3-1 HCDR2
<400> 2
Ile Asn Pro Ser Asn Gly Arg Thr
1 5
<210> 3
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1H3-1 HCDR3
<400> 3
Ala Thr Ser Gly Pro Tyr Tyr Ser Tyr Asp Val Ala Trp Phe Ala Tyr
1 5 10 15
<210> 4
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 13H9-2 HCDR1
<400> 4
Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Ala Gly
1 5
<210> 5
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 13H9-2 HCDR2
<400> 5
Ile Asn Thr His Ser Gly Val Pro
1 5
<210> 6
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 13H9-2 HCDR3
<400> 6
Ala Arg Ala Ser Ser Ser Leu Tyr Arg Tyr Asp Gln Ala Trp Phe Thr
1 5 10 15
Tyr
<210> 7
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 14G7-1 HCDR1
<400> 7
Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Trp
1 5
<210> 8
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 14G7-1 HCDR2
<400> 8
Ile Asn Pro Gly Asn Gly Arg Thr
1 5
<210> 9
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 14G7-1 HCDR3
<400> 9
Ala Arg Pro Leu Asp Gly Tyr Tyr Glu Thr Trp Phe Ser Tyr
1 5 10
<210> 10
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1H3-1 LCDR1
<400> 10
Thr Gly Ala Val Thr Thr Arg Asn Phe
1 5
<210> 11
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1H3-1 LCDR3
<400> 11
Ala Leu Trp Tyr Thr Thr His Trp Val
1 5
<210> 12
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 13H9-2 LCDR1
<400> 12
Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr
1 5
<210> 13
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 13H9-2 LCDR3
<400> 13
Ala Leu Trp His Ser Asn His Trp Val
1 5
<210> 14
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 14G7-1 LCDR1
<400> 14
Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Phe
1 5
<210> 15
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 14G7-1 LCDR3
<400> 15
Ala Leu Trp Tyr Arg Asn His Trp Val
1 5
<210> 16
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1H3-1 VH FR1
<400> 16
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Asp Ser
20 25
<210> 17
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1H3-1 VH FR2
<400> 17
Met His Trp Val Met Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10 15
Glu
<210> 18
<211> 38
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1H3-1 VH FR3
<400> 18
Asn Tyr Asn Glu Arg Phe Lys Asn Lys Ala Thr Val Thr Val Asp Lys
1 5 10 15
Ser Ser Thr Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp
20 25 30
Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
35
<210> 19
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1H3-1 VH FR4
<400> 19
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
1 5 10
<210> 20
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 13H9-2 VH FR1
<400> 20
Gln Ile His Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ala Val Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 21
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 13H9-2 VH FR2
<400> 21
Met Gln Trp Val Gln Lys Met Pro Gly Lys Gly Leu Arg Trp Ile Gly
1 5 10 15
Trp
<210> 22
<211> 38
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 13H9-2 VH FR3
<400> 22
Arg Tyr Ala Glu Asp Phe Ala Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr
1 5 10 15
Ser Ala Thr Ile Val Tyr Leu Gln Ile Ser Asn Leu Lys Tyr Glu Asp
20 25 30
Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
35
<210> 23
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 14G7-1 VH FR1
<400> 23
Gln Val Arg Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Thr Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 24
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 14G7-1 VH FR2
<400> 24
Met His Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10 15
Glu
<210> 25
<211> 38
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 14G7-1 VH FR3
<400> 25
Asn Tyr Ile Glu Lys Phe Lys Thr Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys
1 5 10 15
Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp
20 25 30
Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
35
<210> 26
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1H3-1和14G7-1 VL FR1
<400> 26
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser
20 25
<210> 27
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1H3-1和14G7-1 VL FR2
<400> 27
Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly Leu Ile
1 5 10 15
Gly
<210> 28
<211> 36
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1H3-1 VL FR3
<400> 28
Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Ile Gly
1 5 10 15
Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Thr Glu Asp Glu Ala
20 25 30
Ile Tyr Phe Cys
35
<210> 29
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1H3-1和13H9-2 VL FR4
<400> 29
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
1 5 10
<210> 30
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 13H9-2 VL FR1
<400> 30
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Asn
20 25
<210> 31
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 13H9-2 VL FR2
<400> 31
Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Ala Leu Ile
1 5 10 15
Gly
<210> 32
<211> 36
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 13H9-2 VL FR3
<400> 32
Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Ile Gly
1 5 10 15
Asp Lys Ser Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Thr Glu Asp Glu Ala
20 25 30
Ile Tyr Phe Cys
35
<210> 33
<211> 36
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 14G7-1 VL FR3
<400> 33
Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Ile Gly
1 5 10 15
Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Thr Glu Asp Glu Ala
20 25 30
Val Tyr Phe Cys
35
<210> 34
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 14G7-1 VL FR4
<400> 34
Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Thr Val Leu
1 5 10
<210> 35
<211> 123
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1H3-1 VH氨基酸序列
<400> 35
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Asp Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Met Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Ser Asn Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Arg Phe
50 55 60
Lys Asn Lys Ala Thr Val Thr Val Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Ser Gly Pro Tyr Tyr Ser Tyr Asp Val Ala Trp Phe Ala Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 36
<211> 109
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1H3-1 VL氨基酸序列
<400> 36
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Arg
20 25 30
Asn Phe Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Thr Thr
85 90 95
His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 37
<211> 124
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 13H9-2 VH氨基酸序列
<400> 37
Gln Ile His Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ala Val Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Ala
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Gln Lys Met Pro Gly Lys Gly Leu Arg Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr His Ser Gly Val Pro Arg Tyr Ala Glu Asp Phe
50 55 60
Ala Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Thr Ile Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Ser Ser Ser Leu Tyr Arg Tyr Asp Gln Ala Trp Phe Thr
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 38
<211> 109
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 13H9-2 VL氨基酸序列
<400> 38
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Asn Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Ala
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Tyr Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ser Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp His Ser Asn
85 90 95
His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 39
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 14G7-1 VH氨基酸序列
<400> 39
Gln Val Arg Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Thr Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Gly Asn Gly Arg Thr Asn Tyr Ile Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Leu Asp Gly Tyr Tyr Glu Thr Trp Phe Ser Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 40
<211> 109
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 14G7-1 VL氨基酸序列
<400> 40
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Phe Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Thr Glu Asp Glu Ala Val Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Arg Asn
85 90 95
His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 41
<211> 459
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1H3-1 重链氨基酸序列
<400> 41
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Asp Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Met Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Ser Asn Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Arg Phe
50 55 60
Lys Asn Lys Ala Thr Val Thr Val Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Ser Gly Pro Tyr Tyr Ser Tyr Asp Val Ala Trp Phe Ala Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro
115 120 125
Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser
130 135 140
Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Ser Val
145 150 155 160
Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Ser Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Leu Leu Gln Ser Gly Leu Tyr Thr Met Ser Ser Ser Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Thr Val Thr Cys Ser Val Ala
195 200 205
His Pro Ala Ser Ser Thr Thr Val Asp Lys Lys Leu Glu Pro Ser Gly
210 215 220
Pro Ile Ser Thr Ile Asn Pro Cys Pro Pro Cys Lys Glu Cys His Lys
225 230 235 240
Cys Pro Ala Pro Asn Leu Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
245 250 255
Pro Asn Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Thr Pro Lys Val Thr
260 265 270
Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser
275 280 285
Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His
290 295 300
Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Ile Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile
305 310 315 320
Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
325 330 335
Asn Lys Asp Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ile Lys
340 345 350
Gly Leu Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Ile Leu Pro Pro Pro Ala Glu
355 360 365
Gln Leu Ser Arg Glu Asp Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Val Gly Phe
370 375 380
Asn Pro Gly Asp Ile Ser Val Glu Trp Thr Ser Asn Gly His Thr Glu
385 390 395 400
Glu Asn Tyr Lys Asp Thr Ala Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr
405 410 415
Phe Ile Tyr Ser Lys Leu Asp Ile Lys Thr Ser Lys Trp Glu Lys Thr
420 425 430
Asp Ser Phe Ser Cys Asn Val Arg His Glu Gly Leu Lys Asn Tyr Tyr
435 440 445
Leu Lys Lys Thr Ile Ser Arg Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 42
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1H3-1 轻链氨基酸序列
<400> 42
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Arg
20 25 30
Asn Phe Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Thr Thr
85 90 95
His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro
100 105 110
Lys Ser Thr Pro Thr Leu Thr Val Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu
115 120 125
Lys Glu Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asn Phe Ser Pro
130 135 140
Ser Gly Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asn Gly Thr Pro Ile Thr Gln
145 150 155 160
Gly Val Asp Thr Ser Asn Pro Thr Lys Glu Gly Asn Lys Phe Met Ala
165 170 175
Ser Ser Phe Leu His Leu Thr Ser Asp Gln Trp Arg Ser His Asn Ser
180 185 190
Phe Thr Cys Gln Val Thr His Glu Gly Asp Thr Val Glu Lys Ser Leu
195 200 205
Ser Pro Ala Glu Cys Leu
210
<210> 43
<211> 1377
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1H3-1 重链核酸序列
<400> 43
caggtccaac tacagcagcc tggggctgaa ctggtgaggc ctggggcttc agtgaaactg 60
tcctgcaagg attctggcta cacttttacc acctactgga tgcactgggt gatgcagagg 120
cctggacaag gtcttgagtg gattggagag attaatccta gcaacggtcg gactaactac 180
aatgagaggt tcaagaacaa ggccacagtg actgtagaca aatcctccac cacagcctac 240
atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aacatcaggg 300
ccctactata gttacgacgt ggcctggttt gcttactggg gccaagggac tcttgtcact 360
gtctctgcag ccaaaacaac acccccatca gtctatccac tggcccctgg gtgtggagat 420
acaactggtt cctctgtgac tctgggatgc ctggtcaagg gctacttccc tgagtcagtg 480
actgtgactt ggaactctgg atccctgtcc agcagtgtgc acaccttccc agctctcctg 540
cagtctggac tctacactat gagcagctca gtgactgtcc cctccagcac ctggccaagt 600
cagaccgtca cctgcagcgt tgctcaccca gccagcagca ccacggtgga caaaaaactt 660
gagcccagcg ggcccatttc aacaatcaac ccctgtcctc catgcaagga gtgtcacaaa 720
tgcccagctc ctaacctcga gggtggacca tccgtcttca tcttccctcc aaatatcaag 780
gatgtactca tgatctccct gacacccaag gtcacgtgtg tggtggtgga tgtgagcgag 840
gatgacccag acgtccagat cagctggttt gtgaacaacg tggaagtaca cacagctcag 900
acacaaaccc atagagagga ttacaacagt actatccggg tggtcagtgc cctccccatc 960
cagcaccagg actggatgag tggcaaggag ttcaaatgca aggtcaacaa caaagacctc 1020
ccatcaccca tcgagagaac catctcaaaa attaaagggc tagtcagagc tccacaagta 1080
tacatcttgc cgccaccagc agagcagttg tccagggaag atgtcagtct cacttgcctg 1140
gtcgtgggct tcaaccctgg agacatcagt gtggagtgga ccagcaatgg gcatacagag 1200
gagaactaca aggacaccgc accagtcctg gactctgacg gttcttactt catatacagc 1260
aagctcgata taaaaacaag caagtgggag aaaacagatt ccttctcatg caacgtgaga 1320
cacgagggtc tgaaaaatta ctacctgaag aagaccatct cccggtctcc gggtaaa 1377
<210> 44
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1H3-1 轻链核酸序列
<400> 44
caggctgttg tgactcagga atctgcactc accacatcac ctggtgaaac agtcacactc 60
acttgtcgct caagtactgg ggctgttaca accaggaact ttgccaactg ggtccaagaa 120
aaaccagatc atttattcac gggtctaata ggtggtacca acaaccgagc tccaggtgtt 180
cctgccagat tctcaggctc cctgattgga gacaaggctg ccctcaccat cacaggggca 240
cagactgagg atgaggcaat atatttctgt gctctatggt acaccaccca ttgggtgttc 300
ggtggaggaa ccaaactgac tgtcctaggt cagcccaagt ccactcccac tctcaccgtg 360
tttccacctt cctctgagga gctcaaggaa aacaaagcca cactggtgtg tctgatttcc 420
aacttttccc cgagtggtgt gacagtggcc tggaaggcaa atggtacacc tatcacccag 480
ggtgtggaca cttcaaatcc caccaaagag ggcaacaagt tcatggccag cagcttccta 540
catttgacat cggaccagtg gagatctcac aacagtttta cctgtcaagt tacacatgaa 600
ggggacactg tggagaagag tctgtctcct gcagaatgtc tc 642
<210> 45
<211> 460
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 13H9-2 重链氨基酸序列
<400> 45
Gln Ile His Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ala Val Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Ala
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Gln Lys Met Pro Gly Lys Gly Leu Arg Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr His Ser Gly Val Pro Arg Tyr Ala Glu Asp Phe
50 55 60
Ala Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Thr Ile Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Ser Ser Ser Leu Tyr Arg Tyr Asp Gln Ala Trp Phe Thr
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr
115 120 125
Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Cys Gly Asp Thr Thr Gly
130 135 140
Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Ser
145 150 155 160
Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Ser Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Leu Leu Gln Ser Gly Leu Tyr Thr Met Ser Ser Ser Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Thr Val Thr Cys Ser Val
195 200 205
Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Thr Val Asp Lys Lys Leu Glu Pro Ser
210 215 220
Gly Pro Ile Ser Thr Ile Asn Pro Cys Pro Pro Cys Lys Glu Cys His
225 230 235 240
Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe
245 250 255
Pro Pro Asn Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Thr Pro Lys Val
260 265 270
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile
275 280 285
Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr
290 295 300
His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Ile Arg Val Val Ser Ala Leu Pro
305 310 315 320
Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val
325 330 335
Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ile
340 345 350
Lys Gly Leu Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Ile Leu Pro Pro Pro Ala
355 360 365
Glu Gln Leu Ser Arg Glu Asp Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Val Gly
370 375 380
Phe Asn Pro Gly Asp Ile Ser Val Glu Trp Thr Ser Asn Gly His Thr
385 390 395 400
Glu Glu Asn Tyr Lys Asp Thr Ala Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
405 410 415
Tyr Phe Ile Tyr Ser Lys Leu Asp Ile Lys Thr Ser Lys Trp Glu Lys
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Thr Asp Ser Phe Ser Cys Asn Val Arg His Glu Gly Leu Lys Asn Tyr
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Tyr Leu Lys Lys Thr Ile Ser Arg Ser Pro Gly Lys
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<210> 46
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 13H9-2 轻链氨基酸序列
<400> 46
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Asn Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Ala
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Tyr Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ser Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp His Ser Asn
85 90 95
His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro
100 105 110
Lys Ser Thr Pro Thr Leu Thr Val Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu
115 120 125
Lys Glu Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asn Phe Ser Pro
130 135 140
Ser Gly Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asn Gly Thr Pro Ile Thr Gln
145 150 155 160
Gly Val Asp Thr Ser Asn Pro Thr Lys Glu Gly Asn Lys Phe Met Ala
165 170 175
Ser Ser Phe Leu His Leu Thr Ser Asp Gln Trp Arg Ser His Asn Ser
180 185 190
Phe Thr Cys Gln Val Thr His Glu Gly Asp Thr Val Glu Lys Ser Leu
195 200 205
Ser Pro Ala Glu Cys Leu
210
<210> 47
<211> 1380
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 13H9-2重链核酸序列
<400> 47
cagatccatc tggtgcagtc tggacctgag ctgaagaagc ctggagaggc agtcaggatc 60
tcctgcaagg cttctgggta tactttcaca actgctggaa tgcagtgggt gcaaaagatg 120
ccaggaaagg gtttgaggtg gattggctgg ataaacaccc actctggagt gccaagatat 180
gcagaggact tcgcgggacg gtttgccttc tctttggaaa cctctgccac tattgtttat 240
ttacaaataa gcaacctcaa atatgaggac acggctacgt atttctgtgc gagagcctcc 300
tcctccctct atagatacga ccaggcctgg tttacttact ggggccaagg gactctggtc 360
acggtctctg cagccaaaac aacaccccca tcagtctatc cactggcccc tgggtgtgga 420
gatacaactg gttcctctgt gactctggga tgcctggtca agggctactt ccctgagtca 480
gtgactgtga cttggaactc tggatccctg tccagcagtg tgcacacctt cccagctctc 540
ctgcagtctg gactctacac tatgagcagc tcagtgactg tcccctccag cacctggcca 600
agtcagaccg tcacctgcag cgttgctcac ccagccagca gcaccacggt ggacaaaaaa 660
cttgagccca gcgggcccat ttcaacaatc aacccctgtc ctccatgcaa ggagtgtcac 720
aaatgcccag ctcctaacct cgagggtgga ccatccgtct tcatcttccc tccaaatatc 780
aaggatgtac tcatgatctc cctgacaccc aaggtcacgt gtgtggtggt ggatgtgagc 840
gaggatgacc cagacgtcca gatcagctgg tttgtgaaca acgtggaagt acacacagct 900
cagacacaaa cccatagaga ggattacaac agtactatcc gggtggtcag tgccctcccc 960
atccagcacc aggactggat gagtggcaag gagttcaaat gcaaggtcaa caacaaagac 1020
ctcccatcac ccatcgagag aaccatctca aaaattaaag ggctagtcag agctccacaa 1080
gtatacatct tgccgccacc agcagagcag ttgtccaggg aagatgtcag tctcacttgc 1140
ctggtcgtgg gcttcaaccc tggagacatc agtgtggagt ggaccagcaa tgggcataca 1200
gaggagaact acaaggacac cgcaccagtc ctggactctg acggttctta cttcatatac 1260
agcaagctcg atataaaaac aagcaagtgg gagaaaacag attccttctc atgcaacgtg 1320
agacacgagg gtctgaaaaa ttactacctg aagaagacca tctcccggtc tccgggtaaa 1380
<210> 48
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 13H9-2轻链核酸序列
<400> 48
caggctgttg tgactcagga atctgcactc accacatcac ctggtgaaac agtcacactc 60
acttgtcgct caaatactgg ggctgttaca actagtaact atgccaactg ggtccaagaa 120
aaaccagatc atttattcac tgctctaata ggtggtacct acaaccgagc tccaggtgtt 180
cctgccagat tctcaggctc cctgattgga gacaagtctg ccctcaccat cacaggggca 240
cagactgagg atgaggcaat atatttctgt gctctgtggc acagcaacca ttgggtgttc 300
ggtggaggaa ccaaactgac tgtcctaggt cagcccaagt ccactcccac tctcaccgtg 360
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aacttttccc cgagtggtgt gacagtggcc tggaaggcaa atggtacacc tatcacccag 480
ggtgtggaca cttcaaatcc caccaaagag ggcaacaagt tcatggccag cagcttccta 540
catttgacat cggaccagtg gagatctcac aacagtttta cctgtcaagt tacacatgaa 600
ggggacactg tggagaagag tctgtctcct gcagaatgtc tc 642
<210> 49
<211> 457
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 14G7-1 重链氨基酸序列
<400> 49
Gln Val Arg Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Thr Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Glu Ile Asn Pro Gly Asn Gly Arg Thr Asn Tyr Ile Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Leu Asp Gly Tyr Tyr Glu Thr Trp Phe Ser Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser
115 120 125
Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val
130 135 140
Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Ser Val Thr Val
145 150 155 160
Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Ser Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Leu Leu Gln Ser Gly Leu Tyr Thr Met Ser Ser Ser Val Thr Val Pro
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Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Thr Val Thr Cys Ser Val Ala His Pro
195 200 205
Ala Ser Ser Thr Thr Val Asp Lys Lys Leu Glu Pro Ser Gly Pro Ile
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Ser Thr Ile Asn Pro Cys Pro Pro Cys Lys Glu Cys His Lys Cys Pro
225 230 235 240
Ala Pro Asn Leu Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn
245 250 255
Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val
260 265 270
Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe
275 280 285
Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu
290 295 300
Asp Tyr Asn Ser Thr Ile Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His
305 310 315 320
Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys
325 330 335
Asp Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ile Lys Gly Leu
340 345 350
Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Ile Leu Pro Pro Pro Ala Glu Gln Leu
355 360 365
Ser Arg Glu Asp Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Val Gly Phe Asn Pro
370 375 380
Gly Asp Ile Ser Val Glu Trp Thr Ser Asn Gly His Thr Glu Glu Asn
385 390 395 400
Tyr Lys Asp Thr Ala Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Ile
405 410 415
Tyr Ser Lys Leu Asp Ile Lys Thr Ser Lys Trp Glu Lys Thr Asp Ser
420 425 430
Phe Ser Cys Asn Val Arg His Glu Gly Leu Lys Asn Tyr Tyr Leu Lys
435 440 445
Lys Thr Ile Ser Arg Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 50
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 14G7-1 轻链氨基酸序列
<400> 50
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Phe Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Thr Glu Asp Glu Ala Val Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Arg Asn
85 90 95
His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro
100 105 110
Lys Ser Thr Pro Thr Leu Thr Val Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu
115 120 125
Lys Glu Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asn Phe Ser Pro
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Ser Gly Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asn Gly Thr Pro Ile Thr Gln
145 150 155 160
Gly Val Asp Thr Ser Asn Pro Thr Lys Glu Gly Asn Lys Phe Met Ala
165 170 175
Ser Ser Phe Leu His Leu Thr Ser Asp Gln Trp Arg Ser His Asn Ser
180 185 190
Phe Thr Cys Gln Val Thr His Glu Gly Asp Thr Val Glu Lys Ser Leu
195 200 205
Ser Pro Ala Glu Cys Leu
210
<210> 51
<211> 1371
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 14G7-1 重链核酸序列
<400> 51
caggtccgac tgcagcagcc tggggctgaa ctggtgacac ctggggcttc agtgaagctg 60
tcctgtaagg cttctggcta caccttcacc ggctactgga tgcactgggt gaggcagagg 120
cctggacaag gccttgagtg gattggagag attaatcctg gcaacggtcg tactaactac 180
attgagaagt tcaagaccaa ggccacactg actgtagaca aatcctccaa cacagcctac 240
atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagacccctt 300
gatggttatt acgagacctg gttttcttac tggggccaag ggactctggt cactgtctct 360
gcagccaaaa caacaccccc atcagtctat ccactggccc ctgggtgtgg agatacaact 420
ggttcctctg tgactctggg atgcctggtc aagggctact tccctgagtc agtgactgtg 480
acttggaact ctggatccct gtccagcagt gtgcacacct tcccagctct cctgcagtct 540
ggactctaca ctatgagcag ctcagtgact gtcccctcca gcacctggcc aagtcagacc 600
gtcacctgca gcgttgctca cccagccagc agcaccacgg tggacaaaaa acttgagccc 660
agcgggccca tttcaacaat caacccctgt cctccatgca aggagtgtca caaatgccca 720
gctcctaacc tcgagggtgg accatccgtc ttcatcttcc ctccaaatat caaggatgta 780
ctcatgatct ccctgacacc caaggtcacg tgtgtggtgg tggatgtgag cgaggatgac 840
ccagacgtcc agatcagctg gtttgtgaac aacgtggaag tacacacagc tcagacacaa 900
acccatagag aggattacaa cagtactatc cgggtggtca gtgccctccc catccagcac 960
caggactgga tgagtggcaa ggagttcaaa tgcaaggtca acaacaaaga cctcccatca 1020
cccatcgaga gaaccatctc aaaaattaaa gggctagtca gagctccaca agtatacatc 1080
ttgccgccac cagcagagca gttgtccagg gaagatgtca gtctcacttg cctggtcgtg 1140
ggcttcaacc ctggagacat cagtgtggag tggaccagca atgggcatac agaggagaac 1200
tacaaggaca ccgcaccagt cctggactct gacggttctt acttcatata cagcaagctc 1260
gatataaaaa caagcaagtg ggagaaaaca gattccttct catgcaacgt gagacacgag 1320
ggtctgaaaa attactacct gaagaagacc atctcccggt ctccgggtaa a 1371
<210> 52
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 14G7-1 轻链核酸序列
<400> 52
caggctgttg tgactcagga atctgcactc accacatcac ctggtgaaac agtcacactc 60
acttgtcgct caagtactgg ggctgttaca actagtaact ttgccaactg ggtccaagaa 120
aaaccagatc atttattcac tggtctaata ggtggtacca acaaccgcgc tccaggtgtt 180
cctgccagat tctcaggctc cctgattgga gacaaggctg ccctcaccat cacaggggca 240
cagactgagg atgaggcagt atatttctgt gctctctggt acagaaacca ctgggtgttc 300
ggtggaggaa ccgaactgac tgtcctaggt cagcccaagt ccactcccac tctcaccgtg 360
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catttgacat cggaccagtg gagatctcac aacagtttta cctgtcaagt tacacatgaa 600
ggggacactg tggagaagag tctgtctcct gcagaatgtc tc 642

Claims (14)

1.一种SN38抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和/或轻链可变区；
所述重链可变区包括HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或其变体1；所述HCDR2包含选自如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:8所示序列构成的群组中的氨基酸序列；所述HCDR3包含选自如SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6和SEQ IDNO:9所示序列构成的群组中的氨基酸序列；
所述轻链可变区包括LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含如SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列或其变体2；所述LCDR2包含如GTN或GTY所示的氨基酸序列；所述LCDR3的氨基酸序列包含如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列或其变体3；
所述变体至少具有所述SN38抗体或其抗原结合片段的功能。
2.如权利要求1所述的SN38抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述变体1为对SEQID NO:1所示的氨基酸序列的第6位、第7位和/或第8位突变后获得，其中第6位的突变优选为T6G，第7位的突变优选为Y7A，第8位的突变优选为W8G；
所述变体2为对SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列的第7位和/或第9位突变后获得，其中第7位的突变优选为S7R，第9位的突变优选为F8Y；
所述变体3为对SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列的第4位、第5位和/或第6位突变后获得，其中第4位的突变优选为Y4H，第5位的突变优选为R5S或R5T，第6位的突变优选为N6T；
优选地：
所述变体1的氨基酸序列如SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:7所示；
所述变体2的氨基酸序列如SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:12所示；
所述变体3的氨基酸序列如SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:13所示。
3.如权利要求1所述的SN38抗体或其抗原结合片段，所述重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1-3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或，分别如SEQ ID NO:4-6所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或，分别如SEQ ID NO:7-9所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
和/或，所述轻链可变区包括氨基酸序列分别如SEQ ID NO:10、GTN、SEQ ID NO:11所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或，分别如SEQ ID NO:12、GTY、SEQ ID NO:13所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或，分别如SEQ ID NO:14、GTN、SEQ ID NO:15所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；
优选地，所述重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1-3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，且所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:10、GTN、SEQ ID NO:11所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
所述重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4-6所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，且所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:12、GTY、SEQ ID NO:13所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；
所述重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:7-9所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，且所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:14、GTN、SEQ ID NO:15所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
4.如权利要求1-3任一项所述的SN38抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链可变区包含HFR1、HFR2、HFR3和HFR4，所述HFR1、HFR2、HFR3和HFR4的氨基酸序列分别如SEQ IDNO:16-18和SEQ ID NO:19所示；或，所述HFR1、HFR2、HFR3和HFR4的氨基酸序列分别如SEQID NO:20-22和SEQ ID NO:19所示；或，所述HFR1、HFR2、HFR3和HFR4的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:23-25和SEQ ID NO:19所示；
和/或，所述轻链可变区包含LFR1、LFR2、LFR3和LFR4，所述LFR1包含如SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列或其变体4；所述LFR2包含如SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列或其变体5；所述LFR3包含如SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列或其变体6；所述LFR4包含如SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列或其变体7；
优选地：
所述变体4的氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示；
所述变体5的氨基酸序列如SEQ ID NO:31所示；
所述变体6的氨基酸序列如SEQ ID NO:32或SEQ ID NO:33所示；
所述变体7的氨基酸序列如SEQ ID NO:34所示；
更优选地：
所述重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:16-18和SEQ ID NO:19所示的HFR1、HFR2、HFR3和HFR4，且所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:26-29所示的LFR1、LFR2、LFR3和LFR4；或，所述重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:20-22和SEQ ID NO:19所示的HFR1、HFR2、HFR3和HFR4，且所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:30-32和SEQ ID NO:29所示的LFR1、LFR2、LFR3和LFR4；所述重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:23-25和SEQ ID NO:19所示的HFR1、HFR2、HFR3和HFR4，且所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:33和SEQ IDNO:34所示的LFR1、LFR2、LFR3和LFR4。
5.如权利要求1-4任一项所述的SN38抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:37或SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列，或包含与SEQID NO:35、SEQ ID NO:37或SEQ ID NO:39所示氨基酸序列具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:38或SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:38或SEQ ID NO:40所示氨基酸序列具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；
优选地，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列；或，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列；或，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列。
6.如权利要求1-5任一项所述的SN38抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述SN38抗体或其抗原结合片段包括鼠或人抗体恒定区或其突变；所述鼠抗体恒定区包括鼠IgG1、IgG2a、IgG2b3或IgG3的重链恒定区和κ或λ型轻链恒定区，所述人抗体恒定区包括人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区和κ或λ型轻链恒定区；
优选地，所述突变与所述鼠或人抗体恒定区的氨基酸序列具有至少90％、95％、96％、97％、98％或者99％的同一性；
更优选地，所述SN38抗体或其抗原结合片段的重链恒定区氨基酸序列如SEQ ID NO:41的第124-459位所示；所述SN38抗体或其抗原结合片段的轻链恒定区氨基酸序列如SEQ IDNO:42的第110-209位所示。
7.如权利要求1-6任一项所述的SN38抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述SN38抗体或其抗原结合片段的结构包括免疫球蛋白、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv例如单链Fv片段。
8.一种分离的核酸，其特征在于，其编码如权利要求1-7任一项所述的SN38抗体或其抗原结合片段；
优选地，编码所述SN38抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列中，编码所述重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:43的第1-369位所示，编码所述轻链可变区的核苷酸序列如SEQID NO:44的第1-327位所示；或编码所述重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:47的第1-372位所示，编码所述轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:48的第1-327位所示；编码所述重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:51的第1-363位所示，编码所述轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:52的第1-327位所示。
9.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包括如权利要求8所述的分离的核酸；优选地，所述表达载体的出发载体为pcDNA3.1(+)。
10.一种转化体，其包括如权利要求9所述的表达载体；优选地，所述转化体为基因修饰的慢病毒或免疫效应细胞；更优选地，所述慢病毒为含有PLVX-EF1-CAR、lentiCRISPR v2-CAR或pELNS-CAR的慢病毒，所述免疫效应细胞为T淋巴细胞、NK细胞或NKT细胞。
11.一种检测组合物，其特征在于，所述检测组合物包含如权利要求1-7任一项所述的SN38抗体或其抗原结合片段、权利要求8所述的分离的核酸、权利要求9所述的表达载体和/或权利要求10所述的转化体。
12.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含如权利要求1-7任一项所述的SN38抗体或其抗原结合片段、权利要求8所述的分离的核酸、权利要求9所述的表达载体、权利要求10所述的转化体和/或权利要求11所述的检测组合物；
较佳地，所述试剂盒还包括(i)施用抗体或其抗原结合片段、分离的核酸、表达载体、转化体或检测组合物的装置；和/或(ii)使用说明。
13.一种检测样品中SN38的方法，其特征在于，所述方法包括使用如权利要求1-7任一项所述的SN38抗体或其抗原结合片段、权利要求8所述的分离的核酸、权利要求9所述的表达载体、权利要求10所述的转化体、权利要求11所述的检测组合物和/或权利要求12所述的试剂盒与样品进行反应。
14.如权利要求1-7任一项所述的SN38抗体或其抗原结合片段、权利要求8所述的分离的核酸、权利要求9所述的表达载体、权利要求10所述的转化体、权利要求11所述的检测组合物或权利要求12所述的试剂盒在检测SN38中的应用。
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