CN115181697A - 生活垃圾除臭用复合生物制剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种生活垃圾除臭用复合生物制剂及其制备方法，该复合生物制剂由复合乳酸菌、复合酵母菌、复合放线菌和复合霉菌分别纯种扩大培养、混合制备复合微生物发酵液，再将由纤维素酶、蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶组成的复合酶与复合微生物发酵液混合，最后再与植物精油和增溶剂按照特定比例混合进行制备。按照此方法制备的复合生物制剂可以有效的去除生活垃圾在收集、转运、存储和处理过程中产生的臭味，而且安全可靠、绿色环保。

Description

生活垃圾除臭用复合生物制剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及种生活垃圾处理领域，更具体地说，涉及一种用于生活垃圾转运站、生活垃圾填埋场和生活垃圾处理厂的生活垃圾除臭用复合生物制剂及其制备方法。
背景技术
据统计，我国生活垃圾的年产量己达2亿吨，加上历年堆存量高达66亿吨，接近发达国家水平，其中填埋处理量达垃圾总量的95％以上。垃圾在转运、填埋及处理过程中会产生大量强剌激的恶臭气体，对周边环境和人类健康造成直接或间接的影响。恶臭作为一种公害，严重影响人们的身心健康。在世界七大公害中，恶臭仅次于噪声，居于第二位，散发于空气中的恶臭主要由以低级脂肪酸代表的酸系臭气，以氨气为代表的碱系臭气和以硫化氢为代表的硫系臭气组成。其中硫化氢和氨气是臭味的主要组成成份，目前去除恶臭的常规方法主要有：化学法、物理法和生物法等。化学法通过使用除臭剂和芳香剂来减轻恶臭，其中化学除臭剂的使用并不能彻底去除臭源物质，除臭效果不充分不彻底，同时使用的芳香剂有时因遮蔽香料过强则会带来不快气味。物理法通过使用吸收剂将臭味物质吸收到吸收剂的微孔中，但吸收剂一旦吸收臭味物质后就难以解吸，无法重复使用，难以处理，造成环境的二次污染。生物法主要通过微生物的生物代谢过程和相关的酶作用来消化分解臭味物质，该方法使用条件温和，消除臭源物质彻底，且不会造成环境的二次污染。另外，现有技术还有研究通过燃烧臭味物质来去除恶臭气，但燃烧臭源物质会产生大量废气和臭气污染环境，也存在发展局限。
生物除臭的核心是高效除臭功能微生物菌剂，通过分离筛选高效除臭功能菌株并优化组合配伍成微生物除臭菌剂，再用于生活垃圾收集站、生活垃圾填埋场和生活垃圾处理厂等环境中，可以有效降低其释放的恶臭强度，达到恶臭原位控制目的。
目前，除臭功能微生物菌剂可分为单菌型和复合型两大类，单菌型由单一功能菌株构成，多菌型由两种或多种功能菌株构成。在长期研究和应用实践中，研究人员发现许多重要的生化过程是单株微生物不能完成或只能微弱地进行，而需在两种或多种微生物的协同作用下才能更好的完成。垃圾收集站，生活垃圾处理厂等臭气释放源是一个营养物质复杂、土著微生物群落多样的微生态***，如何使接种微生物在废弃物中优势生长是能否实现恶臭控制的关键，单菌株由于代谢类型、呼吸类型及作用功能单一对环境适应能力弱，很难在臭气释放源中成为优势菌群。复合型微生物降臭菌剂由多种微生物经过发酵制成，由于菌群组成，代谢类型，呼吸类型及作用功能多样，可稳定占据生态位，有效抑制产生恶臭物质的腐败菌或对恶臭物质直接降解，其具有对环境适应能力强，应用范围广，除臭效果比较持久等优点，因此，利用微生物之间的协同作有，构建多菌型微生物除臭菌剂是生物除臭研究的热点。如周卓兴等在专利号：201410080203.6中公开了用于垃圾除臭的复合微生物制剂及其制备方法，但其对除臭效果并未说明。再如许丽娟等在专利号：20111027283.9中公开了一种针对城市生活垃圾填埋场的微生物菌株、除臭剂及其制备方法，但其对填埋场的氨与硫化氢降解率只能达到60％-80％，未能达到较理想的效果。
一般的复合微生物除臭剂还存在各菌株共存性差，菌种稳定性差，启动慢，即时除臭效果不佳等问题，这些都限制了复合生物除臭制剂的进一步的应用。
发明内容
本发明要解决的技术问题在于，提供一种除臭用复合生物制剂及其制备方法，可以有效的控制生活垃圾在转运、填埋和处理过程中产生的臭味。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种生活垃圾除臭用复合生物制剂，按质量份数计包括以下组分：复合微生物发酵液95.5～98.9份、复合酶0.1～0.5份、植物精油0.5～2份、增溶剂0.5～2份；
复合微生物发酵液按质量份数计包括以下组分：复合乳酸菌发酵液55～70份，复合酵母菌发酵液10～15份，复合放线菌发酵液10～15份，复合霉菌发酵液10～15份的重量比；
所述复合酶按质量份数计包括以下组分：纤维素酶20～30份、蛋白酶10～20份、脂肪酶20～30份，淀粉酶20～50份。
按上述方案，所述复合乳酸菌发酵液采用植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌按以下步骤进行培养：
①固体平板活化：分别将植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌菌种在MRS固体培养基上划线活化，温度35～37℃活化培养48～72h；
②制备一级种子液：分别从活化平板上挑取单菌落接入到MRS液体培养基中35～37℃振荡培养48～72h，获得植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌一级种子液；
③将植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌一级种子液分别接入到发酵培养基中，发酵条件为：温度35～37℃，pH7.0±0.2，搅拌转速100～120r/min，培养时间60～72h，且当发酵液pH低于4时，发酵结束；
④将植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌发酵液按照1～3:1～3:1～3进行混合，即获得复合乳酸菌发酵液。
按上述方案，所述复合酵母菌发酵液采用克鲁斯假丝酵母、季也蒙假丝酵母和异常威克汉姆酵母按以下步骤进行培养：
①固体平板活化：分别将植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌菌种在5°Bé麦芽汁固体培养基上划线活化，温度28～30℃活化培养48～72h；
②制备一级种子液：分别从活化平板上挑取单菌落接入到5°Bé麦芽汁液体培养基中28～30℃振荡培养48～72h，获得植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌一级种子液；
③将克鲁斯假丝酵母、季也蒙假丝酵母和异常威克汉姆酵母一级种子液分别接入到发酵培养基中，发酵条件为：温度28～30℃，pH6.8±0.2，搅拌转速150～200r/min，培养时间36～48h，发酵结束；
④将克鲁斯假丝酵母、季也蒙假丝酵母和异常威克汉姆酵母发酵液按照1～3:1～3:1～3进行混合，即获得复合酵母菌发酵液。
按上述方案，所述复合放线菌发酵液采用链霉菌属和可可链霉菌可可亚种按以下步骤进行培养：
①固体平板活化：取出链霉菌属保藏管，用高氏一号琼脂培养基划平板进行活化，40～50℃培养4～7d；取出可可链霉菌可可亚种保藏管，用营养肉汁琼脂培养基划平板进行活化，35～37℃，培养5～7天；
②制备一级种子液：从高氏一号固体培养基上挑取适量单菌落接入到高氏一号液体培养基中，40～50℃振荡培养3～5天，获得链霉菌属一级种子液；从营养肉汁固体培养基上挑取适量菌落接入到营养肉汁液体培养基中，35～37℃振荡培养3～5天，获得可可链霉菌可可亚种一级种子液；
③将链霉菌属和可可链霉菌可可亚种一级种子液分别接入到发酵培养基中，链霉菌属发酵条件为：温度45～50℃，pH7.2～7.4，搅拌转速140～160r/min，培养时间7天；可可链霉菌可可亚种发酵条件为：温度35～37℃，pH7.2～7.4，搅拌转速140～160r/min，培养时间7天，发酵结束；
④将链霉菌属和可可链霉菌可可亚种发酵液按照1～3:1～3进行混合，即获得复合放线菌发酵液。
按上述方案，所述复合霉菌发酵液采用长枝木霉和米根霉按以下步骤进行培养：
①固体平板活化：取出长枝木霉保藏管，用PDA固体培养基划平板进行活化，25～27℃培养3～5天；取出米根霉保藏管，用PDA固体培养基划平板进行活化，27～30℃，培养3～5天；
②制备一级种子液：从固体培养基上分别挑取适量长枝木霉和米根霉单菌落分别接入到装有PDA固体培养基的茄形瓶中，25～30℃振荡培养5～7天；待菌苔长满茄形瓶，用无菌生理盐水洗脱孢子；分别获得长枝木霉和米根霉一级种子液；
③将长枝木霉和米根霉一级种子液分别接入到液体发酵培养基中，发酵条件为：温度27～30℃，pH自然，搅拌转速140～160r/min，培养时间3天，发酵结束；
④将长枝木霉和米根霉发酵液按照1～3:1～3进行混合，即获得复合霉菌发酵液。
按上述方案，所述纤维素酶活≥1500IU；蛋白酶活≥20000IU；脂肪酶活≥10000IU；淀粉酶活≥20000IU。
按上述方案，所述的植物精油为薄荷、茉莉、菊花、柠檬任意一种或多种的提取物。
按上述方案，所述增溶剂为槐糖脂。
本发明还提供了一种生活垃圾除臭用复合生物制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将乳酸菌、酵母菌、放线菌和霉菌分别进行单独培养，得到各菌的复合发酵液；
(2)将乳酸菌发酵液、酵母菌发酵液、放线菌发酵液和霉菌发酵液按照配方量进行复配，得到复合微生物发酵液；
(3)将复合微生物发酵液、复合酶、植物提取物、增溶剂按照配方量混合，即可得到所述生活垃圾除臭用复合微生物制剂。
实施本发明的生活垃圾除臭用复合生物制剂，具有以下有益效果：
1、本发明针对性筛选适应再垃圾中生长的菌株，包括降解硫化氢、氨气和脂肪酸臭气的乳酸菌、酵母菌和放线菌，富产乳酸的米根霉和植物乳杆菌，富产蛋白酶、纤维素酶的长枝木霉，耐高温的链霉菌属和可可链霉菌可可亚种，富产生香物质的季也蒙假丝酵母等有益微生物。添加复合酶有助于有益微生物在生活垃圾中生长繁殖，协同作用，有效改善了生活垃圾的生态环境，大大减少了硫化氢、氨气和脂肪酸臭气的产生。添加植物提取物可有效中和已腐败生活垃圾的臭味。几种除臭措施的共同作用可以有效的控制生活垃圾在转运、填埋和处理过程中产生的臭味。
2、本发明的复合微生物发酵液有多重微生物菌种构成，各菌种降解臭气的针对性强，降解效果显著，各菌株在生活垃圾中生长良好，能迅速占据有利生态位，抑制产恶臭微生物的生长，降低恶臭释放强度，实现从源头控制恶臭的目的。
3、本发明通过添加纤维素酶、蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶，加快垃圾中有机质的降解，为有益菌的快速增殖提供持续稳定的养分供应。
4、本发明通过添加植物提取物，可以有效中和已腐败垃圾产生的臭味，使该复合生物制剂具备即时和持续除臭的功能。
5、本发明的除臭用复合生物制剂适用于生活垃圾从收集到处理的全流程除臭需求。
具体实施方式
为了对本发明的技术特征、目的和效果有更加清楚的理解，现详细说明本发明的具体实施方式。
实施例1
制备生活垃圾除臭用复合生物制剂，主要以下重量份原料混合制备而成：复合微生物发酵液95.5份、复合酶0.5份、植物精油2份、增溶剂2份。
复合微生物发酵液制备包括以下步骤：
步骤(1)：复合乳酸菌的制备
采用植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌按以下步骤进行培养。
①固体平板活化：分别将植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌菌种在MRS固体培养基上划线活化，温度35～37℃活化培养48～72h。
②制备一级种子液：分别从活化平板上挑取单菌落接入到MRS液体培养基中35～37℃振荡培养48～72h，获得植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌一级种子液。
③将植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌一级种子液分别接入到发酵培养基中，发酵条件为：温度35～37℃，pH7.0±0.2，搅拌转速100～120r/min，培养时间60～72h，且当发酵液pH低于4时，发酵结束。
④将植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌发酵液按照1:1:1进行混合，即获得复合乳酸菌。
步骤(2)：复合酵母菌的制备
采用克鲁斯假丝酵母、季也蒙假丝酵母和异常威克汉姆酵母按以下步骤进行培养。
①固体平板活化：分别将植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌菌种在5°Bé麦芽汁固体培养基上划线活化，温度28～30℃活化培养48～72h。
②制备一级种子液：分别从活化平板上挑取单菌落接入到5°Bé麦芽汁液体培养基中28～30℃振荡培养48～72h，获得植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌一级种子液。
③将克鲁斯假丝酵母、季也蒙假丝酵母和异常威克汉姆酵母一级种子液分别接入到发酵培养基中，发酵条件为：温度28～30℃，pH6.8±0.2，搅拌转速150～200r/min，培养时间36～48h，发酵结束。
④将克鲁斯假丝酵母、季也蒙假丝酵母和异常威克汉姆酵母发酵液按照1:1:1进行混合，即获得复合酵母菌。
步骤(3)：复合放线菌的制备
采用链霉菌属和可可链霉菌可可亚种按以下步骤进行培养。
①固体平板活化：取出链霉菌属保藏管，用高氏一号琼脂培养基划平板进行活化，40～50℃培养4～7d。取出可可链霉菌可可亚种保藏管，用营养肉汁琼脂培养基划平板进行活化，35～37℃，培养5～7天。
②制备一级种子液：从高氏一号固体培养基上挑取适量单菌落接入到高氏一号液体培养基中，40～50℃振荡培养3～5天，获得链霉菌属一级种子液。从营养肉汁固体培养基上挑取适量菌落接入到营养肉汁液体培养基中，35～37℃振荡培养3～5天，获得可可链霉菌可可亚种一级种子液。
③将链霉菌属和可可链霉菌可可亚种一级种子液分别接入到发酵培养基中，链霉菌属发酵条件为：温度45～50℃，pH7.2～7.4，搅拌转速140～160r/min，培养时间7天；可可链霉菌可可亚种发酵条件为：温度35～37℃，pH7.2～7.4，搅拌转速140～160r/min，培养时间7天，发酵结束。
④将链霉菌属和可可链霉菌可可亚种发酵液按照1:1进行混合，即获得复合放线菌。
步骤(4)：复合霉菌的制备
采用长枝木霉和米根霉按以下步骤进行培养。
①固体平板活化：取出长枝木霉保藏管，用PDA固体培养基划平板进行活化，25～27℃培养3～5天。取出米根霉保藏管，用PDA固体培养基划平板进行活化，27～30℃，培养3～5天。
②制备一级种子液：从固体培养基上分别挑取适量长枝木霉和米根霉单菌落分别接入到装有PDA固体培养基的茄形瓶中，25～30℃振荡培养5～7天。待菌苔长满茄形瓶，用无菌生理盐水洗脱孢子。分别获得长枝木霉和米根霉一级种子液。
③将长枝木霉和米根霉一级种子液分别接入到液体发酵培养基中，发酵条件为：温度27～30℃，pH自然，搅拌转速140～160r/min，培养时间3天，发酵结束。
④将长枝木霉和米根霉发酵液按照1:1进行混合，即获得复合霉菌
步骤(5)：混合
将复合乳酸菌发酵液70份，复合酵母菌发酵液10份，复合放线菌发酵液10份，复合霉菌发酵液10份的重量比，均匀混合，即得到复合微生物发酵液。
复合酶为纤维素酶、蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶，原料重量份为纤维素酶30份、蛋白酶20份、脂肪酶20份，淀粉酶30份。
植物精油为柠檬精油，所述增溶剂为槐糖脂。
上述垃圾除臭用复合微生物制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将乳酸菌、酵母菌、放线菌和霉菌分别进行单独培养，得到各菌的复合发酵液；
(2)将乳酸菌发酵液、酵母菌发酵液、放线菌发酵液和霉菌发酵液按照配方量进行复配，得到复合微生物发酵液；
(3)将复合微生物发酵液、复合酶、植物精油、增溶剂按照复合微生物发酵液95.5份、复合酶0.5份、植物精油2份、增溶剂2份混合，即可得到所述生活垃圾除臭用复合微生物制剂。
实施例2
生活垃圾除臭用复合生物制剂包括以下重量份原料：复合微生物发酵液98.9份、复合酶0.1份、植物精油0.5份、增溶剂0.5份；
复合微生物发酵液制备包括以下步骤：
步骤(1)：复合乳酸菌的制备
采用植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌按以下步骤进行培养。
①固体平板活化：分别将植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌菌种在MRS固体培养基上划线活化，温度35～37℃活化培养48～72h。
②制备一级种子液：分别从活化平板上挑取单菌落接入到MRS液体培养基中35～37℃振荡培养48～72h，获得植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌一级种子液。
③将植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌一级种子液分别接入到发酵培养基中，发酵条件为：温度35～37℃，pH7.0±0.2，搅拌转速100～120r/min，培养时间60～72h，且当发酵液pH低于4时，发酵结束。
④将植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌发酵液按照3:1:3进行混合，即获得复合乳酸菌。
步骤(2)：复合酵母菌的制备
采用克鲁斯假丝酵母、季也蒙假丝酵母和异常威克汉姆酵母按以下步骤进行培养。
①固体平板活化：分别将植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌菌种在5°Bé麦芽汁固体培养基上划线活化，温度28～30℃活化培养48～72h。
②制备一级种子液：分别从活化平板上挑取单菌落接入到5°Bé麦芽汁液体培养基中28～30℃振荡培养48～72h，获得植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌一级种子液。
③将克鲁斯假丝酵母、季也蒙假丝酵母和异常威克汉姆酵母一级种子液分别接入到发酵培养基中，发酵条件为：温度28～30℃，pH6.8±0.2，搅拌转速150～200r/min，培养时间36～48h，发酵结束。
④将克鲁斯假丝酵母、季也蒙假丝酵母和异常威克汉姆酵母发酵液按照3:3:1进行混合，即获得复合酵母菌。
步骤(3)：复合放线菌的制备
采用链霉菌属和可可链霉菌可可亚种按以下步骤进行培养。
①固体平板活化：取出链霉菌属保藏管，用高氏一号琼脂培养基划平板进行活化，40～50℃培养4～7d。取出可可链霉菌可可亚种保藏管，用营养肉汁琼脂培养基划平板进行活化，35～37℃，培养5～7天。
②制备一级种子液：从高氏一号固体培养基上挑取适量单菌落接入到高氏一号液体培养基中，40～50℃振荡培养3～5天，获得链霉菌属一级种子液。从营养肉汁固体培养基上挑取适量菌落接入到营养肉汁液体培养基中，35～37℃振荡培养3～5天，获得可可链霉菌可可亚种一级种子液。
③将链霉菌属和可可链霉菌可可亚种一级种子液分别接入到发酵培养基中，链霉菌属发酵条件为：温度45～50℃，pH7.2～7.4，搅拌转速140～160r/min，培养时间7天；可可链霉菌可可亚种发酵条件为：温度35～37℃，pH7.2～7.4，搅拌转速140～160r/min，培养时间7天，发酵结束。
④将链霉菌属和可可链霉菌可可亚种发酵液按照3:1进行混合，即获得复合放线菌。
步骤(4)：复合霉菌的制备
采用长枝木霉和米根霉按以下步骤进行培养。
①固体平板活化：取出长枝木霉保藏管，用PDA固体培养基划平板进行活化，25～27℃培养3～5天。取出米根霉保藏管，用PDA固体培养基划平板进行活化，27～30℃，培养3～5天。
②制备一级种子液：从固体培养基上分别挑取适量长枝木霉和米根霉单菌落分别接入到装有PDA固体培养基的茄形瓶中，25～30℃振荡培养5～7天。待菌苔长满茄形瓶，用无菌生理盐水洗脱孢子。分别获得长枝木霉和米根霉一级种子液。
③将长枝木霉和米根霉一级种子液分别接入到液体发酵培养基中，发酵条件为：温度27～30℃，pH自然，搅拌转速140～160r/min，培养时间3天，发酵结束。
④将长枝木霉和米根霉发酵液按照1:3进行混合，即获得复合霉菌
步骤(5)：混合
将复合乳酸菌发酵液60份，复合酵母菌发酵液15份，复合放线菌发酵液15份，复合霉菌发酵液10份的重量比，均匀混合，即得到复合微生物发酵液。
复合酶为纤维素酶、蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶，原料重量份为纤维素酶20份、蛋白酶20份、脂肪酶30份，淀粉酶30份。
植物精油为薄荷精油，增溶剂为槐糖脂。
生活垃圾除臭用复合微生物制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将乳酸菌、酵母菌、放线菌和霉菌分别进行单独培养，得到各菌的复合发酵液；
(2)将乳酸菌发酵液、酵母菌发酵液、放线菌发酵液和霉菌发酵液按照配方量进行复配，得到复合微生物发酵液；
(3)将复合微生物发酵液、复合酶、植物提取物、增溶剂按照复合微生物发酵液98.9份、复合酶0.1份、植物精油0.5份、增溶剂0.5份混合，即可得到所述生活垃圾除臭用复合微生物制剂。
实施例3
生活垃圾除臭用复合生物制剂包括以下重量份原料：复合微生物发酵液97.7份、复合酶0.3份、植物精油1份、增溶剂1份；
复合微生物发酵液制备包括以下步骤：
步骤(1)：复合乳酸菌的制备
采用植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌按以下步骤进行培养。
①固体平板活化：分别将植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌菌种在MRS固体培养基上划线活化，温度35～37℃活化培养48～72h。
②制备一级种子液：分别从活化平板上挑取单菌落接入到MRS液体培养基中35～37℃振荡培养48～72h，获得植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌一级种子液。
③将植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌一级种子液分别接入到发酵培养基中，发酵条件为：温度35～37℃，pH7.0±0.2，搅拌转速100～120r/min，培养时间60～72h，且当发酵液pH低于4时，发酵结束。
④将植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌发酵液按照3:3:1进行混合，即获得复合乳酸菌。
步骤(2)：复合酵母菌的制备
采用克鲁斯假丝酵母、季也蒙假丝酵母和异常威克汉姆酵母按以下步骤进行培养。
①固体平板活化：分别将植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌菌种在5°Bé麦芽汁固体培养基上划线活化，温度28～30℃活化培养48～72h。
②制备一级种子液：分别从活化平板上挑取单菌落接入到5°Bé麦芽汁液体培养基中28～30℃振荡培养48～72h，获得植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌一级种子液。
③将克鲁斯假丝酵母、季也蒙假丝酵母和异常威克汉姆酵母一级种子液分别接入到发酵培养基中，发酵条件为：温度28～30℃，pH6.8±0.2，搅拌转速150～200r/min，培养时间36～48h，发酵结束。
④将克鲁斯假丝酵母、季也蒙假丝酵母和异常威克汉姆酵母发酵液按照1:3:3进行混合，即获得复合酵母菌。
步骤(3)：复合放线菌的制备
采用链霉菌属和可可链霉菌可可亚种按以下步骤进行培养。
①固体平板活化：取出链霉菌属保藏管，用高氏一号琼脂培养基划平板进行活化，40～50℃培养4～7d。取出可可链霉菌可可亚种保藏管，用营养肉汁琼脂培养基划平板进行活化，35～37℃，培养5～7天。
②制备一级种子液：从高氏一号固体培养基上挑取适量单菌落接入到高氏一号液体培养基中，40～50℃振荡培养3～5天，获得链霉菌属一级种子液。从营养肉汁固体培养基上挑取适量菌落接入到营养肉汁液体培养基中，35～37℃振荡培养3～5天，获得可可链霉菌可可亚种一级种子液。
③将链霉菌属和可可链霉菌可可亚种一级种子液分别接入到发酵培养基中，链霉菌属发酵条件为：温度45～50℃，pH7.2～7.4，搅拌转速140～160r/min，培养时间7天；可可链霉菌可可亚种发酵条件为：温度35～37℃，pH7.2～7.4，搅拌转速140～160r/min，培养时间7天，发酵结束。
④将链霉菌属和可可链霉菌可可亚种发酵液按照1:3进行混合，即获得复合放线菌。
步骤(4)：复合霉菌的制备
采用长枝木霉和米根霉按以下步骤进行培养。
①固体平板活化：取出长枝木霉保藏管，用PDA固体培养基划平板进行活化，25～27℃培养3～5天。取出米根霉保藏管，用PDA固体培养基划平板进行活化，27～30℃，培养3～5天。
②制备一级种子液：从固体培养基上分别挑取适量长枝木霉和米根霉单菌落分别接入到装有PDA固体培养基的茄形瓶中，25～30℃振荡培养5～7天。待菌苔长满茄形瓶，用无菌生理盐水洗脱孢子。分别获得长枝木霉和米根霉一级种子液。
③将长枝木霉和米根霉一级种子液分别接入到液体发酵培养基中，发酵条件为：温度27～30℃，pH自然，搅拌转速140～160r/min，培养时间3天，发酵结束。
④将长枝木霉和米根霉发酵液按照3:1进行混合，即获得复合霉菌
步骤(5)：混合
将复合乳酸菌发酵液65份，复合酵母菌发酵液15份，复合放线菌发酵液10份，复合霉菌发酵液10份的重量比，均匀混合，即得到复合微生物发酵液。
复合酶为纤维素酶、蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶，原料重量份为纤维素酶30份、蛋白酶20份、脂肪酶30份，淀粉酶20份。
植物精油为茉莉精油，增溶剂为槐糖脂。
生活垃圾除臭用复合微生物制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将乳酸菌、酵母菌、放线菌和霉菌分别进行单独培养，得到各菌的复合发酵液；
(2)将乳酸菌发酵液、酵母菌发酵液、放线菌发酵液和霉菌发酵液按照配方量进行复配，得到复合微生物发酵液；
(3)将复合微生物发酵液、复合酶、植物提取物、增溶剂按照复合微生物发酵液97.7份、复合酶0.3份、植物精油1份、增溶剂1份混合，即可得到所述生活垃圾除臭用复合微生物制剂。
下面结合试验说明本发明的生活垃圾除臭用复合生物制剂的除臭效果。本发明的生活垃圾除臭用复合生物制剂除臭试验在华新环境工程长山口工厂完成。
试验1
生活垃圾除臭用复合生物制剂除臭效果验证
将新鲜垃圾放入带盖的塑料整理箱内，量取垃圾重量1‰(v/w)的实施例1复合生物制剂，在使用前用水稀释50倍，直接喷洒在新鲜垃圾表面，分别在喷洒后24、48和72小时测定塑料箱整理内空气的硫化氢、氨气、甲硫醇和VOC浓度，每次检测重复5次，取平均值。以未喷洒复合生物制剂的新鲜垃圾作为对照，测试结果如表1。
表1复合生物制剂对新鲜垃圾的除臭试验结果
Figure BDA0003715865270000141
试验2
生活垃圾除臭用复合生物制剂除臭效果验证
量取破碎后垃圾重量1‰(v/w)的实施例2复合生物制剂，在使用前用水稀释50倍，与垃圾充分混合后，装入密闭发酵箱内。分别在24、48、72和96小时后测定发酵箱内空气的硫化氢、氨气、甲硫醇和VOC浓度，每次检测重复5次，取平均值。以未喷洒复合生物制剂的破碎垃圾作为对照，测试结果如表2。
表2复合生物制剂在发酵箱的除臭试验结果
Figure BDA0003715865270000142
试验3
在垃圾处理工厂，破碎垃圾由输送皮带送入垃圾干化池。将实施例3复合生物制剂用水稀释50倍喷散在输送皮带上，复合生物制剂使用量大致相当于垃圾输送量的1‰(v/w)。垃圾在干化池内存放7天，分别在第1、3、5和7天在干化池上方4个不同的区域取样检测硫化氢、氨气、甲硫醇和VOC浓度，取平均值。以未喷洒复合生物制剂的干化池作为对照，测试结果如表3。
表3复合生物制剂在干化池的除臭试验结果
Figure BDA0003715865270000151
以上试验数据说明本发明的除臭用复合生物制剂对新鲜垃圾和干化垃圾都具有良好的除臭功能，可在较长的时间内，大幅减少垃圾臭气中的恶臭成分含量，从而有效降低垃圾在存放和干化过程中产生的臭味。
上面对本发明的实施例进行了描述，但是本发明并不局限于上述的具体实施方式，上述的具体实施方式仅仅是示意性的，而不是限制性的，本领域的普通技术人员在本发明的启示下，在不脱离本发明宗旨和权利要求所保护的范围情况下，还可做出很多形式，这些均属于本发明的保护之内。

Claims (9)

1.一种生活垃圾除臭用复合生物制剂，其特征在于，按质量份数计包括以下组分：复合微生物发酵液95.5～98.9份、复合酶0.1～0.5份、植物精油0.5～2份、增溶剂0.5～2份；
复合微生物发酵液按质量份数计包括以下组分：复合乳酸菌发酵液55～70份，复合酵母菌发酵液10～15份，复合放线菌发酵液10～15份，复合霉菌发酵液10～15份的重量比；
所述复合酶按质量份数计包括以下组分：纤维素酶20～30份、蛋白酶10～20份、脂肪酶20～30份，淀粉酶20～50份。
2.根据权利要求1所述的生活垃圾除臭用复合生物制剂，其特征在于，所述复合乳酸菌发酵液采用植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌按以下步骤进行培养：
①固体平板活化：分别将植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌菌种在MRS固体培养基上划线活化，温度35～37℃活化培养48～72h；
②制备一级种子液：分别从活化平板上挑取单菌落接入到MRS液体培养基中35～37℃振荡培养48～72h，获得植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌一级种子液；
③将植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌一级种子液分别接入到发酵培养基中，发酵条件为：温度35～37℃，pH7.0±0.2，搅拌转速100～120r/min，培养时间60～72h，且当发酵液pH低于4时，发酵结束；
④将植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌发酵液按照1～3:1～3:1～3进行混合，即获得复合乳酸菌发酵液。
3.根据权利要求1所述的生活垃圾除臭用复合生物制剂，其特征在于，所述复合酵母菌发酵液采用克鲁斯假丝酵母、季也蒙假丝酵母和异常威克汉姆酵母按以下步骤进行培养：
①固体平板活化：分别将植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌菌种在5°Bé麦芽汁固体培养基上划线活化，温度28～30℃活化培养48～72h；
②制备一级种子液：分别从活化平板上挑取单菌落接入到5°Bé麦芽汁液体培养基中28～30℃振荡培养48～72h，获得植物乳杆菌、类干酪乳杆菌和发酵乳杆菌一级种子液；
③将克鲁斯假丝酵母、季也蒙假丝酵母和异常威克汉姆酵母一级种子液分别接入到发酵培养基中，发酵条件为：温度28～30℃，pH6.8±0.2，搅拌转速150～200r/min，培养时间36～48h，发酵结束；
④将克鲁斯假丝酵母、季也蒙假丝酵母和异常威克汉姆酵母发酵液按照1～3:1～3:1～3进行混合，即获得复合酵母菌发酵液。
4.根据权利要求1所述的生活垃圾除臭用复合生物制剂，其特征在于，所述复合放线菌发酵液采用链霉菌属和可可链霉菌可可亚种按以下步骤进行培养：
①固体平板活化：取出链霉菌属保藏管，用高氏一号琼脂培养基划平板进行活化，40～50℃培养4～7d；取出可可链霉菌可可亚种保藏管，用营养肉汁琼脂培养基划平板进行活化，35～37℃，培养5～7天；
②制备一级种子液：从高氏一号固体培养基上挑取适量单菌落接入到高氏一号液体培养基中，40～50℃振荡培养3～5天，获得链霉菌属一级种子液；从营养肉汁固体培养基上挑取适量菌落接入到营养肉汁液体培养基中，35～37℃振荡培养3～5天，获得可可链霉菌可可亚种一级种子液；
③将链霉菌属和可可链霉菌可可亚种一级种子液分别接入到发酵培养基中，链霉菌属发酵条件为：温度45～50℃，pH7.2～7.4，搅拌转速140～160r/min，培养时间7天；可可链霉菌可可亚种发酵条件为：温度35～37℃，pH7.2～7.4，搅拌转速140～160r/min，培养时间7天，发酵结束；
④将链霉菌属和可可链霉菌可可亚种发酵液按照1～3:1～3进行混合，即获得复合放线菌发酵液。
5.根据权利要求1所述的生活垃圾除臭用复合生物制剂，其特征在于，所述复合霉菌发酵液采用长枝木霉和米根霉按以下步骤进行培养：
①固体平板活化：取出长枝木霉保藏管，用PDA固体培养基划平板进行活化，25～27℃培养3～5天；取出米根霉保藏管，用PDA固体培养基划平板进行活化，27～30℃，培养3～5天；
②制备一级种子液：从固体培养基上分别挑取适量长枝木霉和米根霉单菌落分别接入到装有PDA固体培养基的茄形瓶中，25～30℃振荡培养5～7天；待菌苔长满茄形瓶，用无菌生理盐水洗脱孢子；分别获得长枝木霉和米根霉一级种子液；
③将长枝木霉和米根霉一级种子液分别接入到液体发酵培养基中，发酵条件为：温度27～30℃，pH自然，搅拌转速140～160r/min，培养时间3天，发酵结束；
④将长枝木霉和米根霉发酵液按照1～3:1～3进行混合，即获得复合霉菌发酵液。
6.根据权利要求1所述的生活垃圾除臭用复合生物制剂，其特征在于，所述纤维素酶活≥1500IU；蛋白酶活≥20000IU；脂肪酶活≥10000IU；淀粉酶活≥20000IU。
7.根据权利要求1所述的生活垃圾除臭用复合生物制剂，其特征在于，所述的植物精油为薄荷、茉莉、菊花、柠檬任意一种或多种的提取物。
8.根据权利要求1所述的生活垃圾除臭用复合生物制剂，其特征在于，所述增溶剂为槐糖脂。
9.一种权利要求1所述的生活垃圾除臭用复合生物制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将乳酸菌、酵母菌、放线菌和霉菌分别进行单独培养，得到各菌的复合发酵液；
(2)将乳酸菌发酵液、酵母菌发酵液、放线菌发酵液和霉菌发酵液按照配方量进行复配，得到复合微生物发酵液；
(3)将复合微生物发酵液、复合酶、植物提取物、增溶剂按照配方量混合，即可得到所述生活垃圾除臭用复合微生物制剂。
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