CN115152670B - 耐盐鳜鱼苗的驯化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种耐盐鳜鱼苗的驯化方法，该方法包括：把鳜鱼苗养于淡水池内，每天投活饵，使鳜鱼苗适应环境；使用高盐度水和淡水混合；驯化前鳜鱼苗停止喂食，将鳜鱼苗转移至含氯化钠或硫酸钠的驯化池中，且隔天喂食，并向驯化池中添加混合用水进行驯化；本发明首次建立了适用于氯化物型和硫酸盐型水体的鳜苗种驯化和筛选技术，具有极强的针对性，可以大幅提高耐盐鳜苗种的产业化水平。其中，驯养技术操作性强、既提高了入塘成活率又降低了驯化成本；筛选技术方便快捷，可以用来培育鳜耐盐品种或品系。所以本发明的方法具有针对性强、成活率高、方便快捷的特点，能满足大规模筛选程序的需要。
Description
技术领域
本发明属于水产养殖技术领域，具体涉及一种耐盐鳜鱼苗的驯化方法。
背景技术
我国有6.9亿亩盐碱水，具有水化学组成复杂多样、离子系数高、人畜无法饮用等特点。相比于短缺的淡水资源，盐碱水是丰富的非常规国土资源，但对开发利用也提出了更高的要求。国内盐碱水主要类型有：氯化物型、硫酸盐型、碳酸盐型和复合型，相应离子成分以Cl-、SO4 2-、HCO3 -和混合为主。其中，当水体中的Cl-升高时，会影响生物渗透压调节、内分泌平衡、氧气消耗等生理过程。水体中的SO4 2-主要来源于岩石的溶解，鱼类缺乏吸收或调节硫酸盐的主动机制。由于鱼类对Cl-、SO4 2-的响应机制存在差异，所以需要筛选培育适用于不同离子成分水体的耐盐碱经济品种，为构建适应当地水质的养殖模式提供养殖对象。目前，我国内陆盐碱水域绿洲渔业面临适宜养殖种类少、耐盐碱品种缺乏以及养殖产量不稳定的突出问题，以优质水产经济种类为筛选目标，通过耐盐碱环境胁迫手段，确立适宜内陆盐碱水域养殖的新品系是解决上述问题的常见技术方法。这些技术方法通常是以对有良种化潜力的种类培育耐盐碱家系、对筛选的耐盐碱品系及主养品种，在典型盐碱水进行盐碱性能测试、驯化和养殖生产中试，获得适宜特定盐碱类型的养殖品系。但这些技术方法也存在诸多问题，如缺乏对耐盐碱种类苗种规模化繁育和苗种的盐碱驯化、高效投喂、水环境保持等关键技术的集成，没有形成苗种盐碱水标准化培育技术体系，不能大幅提高耐盐碱种类苗种的产业化水平，此外，盐碱水域养殖结构与管理方式也需要进一步优化。
鳜鱼是我国传统名贵淡水鱼类，养殖经济价值高。鳜鱼为肉食性种类，以饵料鱼投喂为主，养殖区在华南、华东和华中。目前，鳜鱼养殖以翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)为主。翘嘴鳜生长快，当年养殖可达500g以上，有翘嘴鳜“华康1号”、“武农1号”等品种；斑鳜(Sscherzeri)是另一个养殖种类，生长速度较慢，当年养殖100-150g；有“秋浦杂交斑鳜”和“长珠杂交鳜”2个杂交品种。目前，这些品种均在淡水中养殖。上海海洋大学前期对鳜鱼种进行了酸碱耐受性实验，鳜在pH＝5-9范围具有一定耐受性。因此，在盐碱水开展鳜鱼品种驯化和筛选养殖试验，可为盐碱水养殖提供新的养殖品种，同时，对提高盐碱地养殖效益和长远发展有极大推动作用。
把鱼类移植到与常规条件不同的新水域，鱼类要在某种程度上改变自己的形态构造、生理习性以适应新的环境条件则称为驯养或驯化。驯养成功的前提是要准确把握驯养的适宜时间，且驯养过程中，必须注意环境逐步改变的过程，不可一步到位。针对盐度驯化，大部分采用逐步提升盐度至目标盐度。例如：中华鲟海水驯化方法，即将养殖水盐度在15‰前，每三天提高盐度3-5‰；盐度15-25‰间，每五天提高盐度1-3‰；盐度达25‰后，将中华鲟苗种驯养15-30天，然后每三天提高盐度1‰，过渡到盐度为32‰的海水中(肖志忠等2004)；鲟科鱼类纯淡水种阶段性递增盐度的驯化方法，即在驯化过程中盐度每递增4-6‰为一个阶段，在每阶段每天递增该阶段盐度的10-30％，完成此阶段驯化后，稳定2-4天，继续进行下一阶段驯化，直至驯化盐度达到海水盐度，一般驯养成活率为35-76％(湖光源等2005)；虹鳟单独盐度驯化，每天提升2-8ppt，存活率为39-78％(付占斐等2020)；罗非鱼单独盐度驯化每天提升2-4ppt，成活率为61-97％(么宗利等，2003)；对虾盐碱驯养，凡纳滨对虾每天降低1-5盐度后再经过离子驯化，入塘存活率为80％(来琦芳等2018)。此外，香鱼的淡水驯化方法，即采用多代、梯度将盐度淡水驯化方法，配合以特殊的饵料，对香鱼进行淡水驯化，经过六代的梯度驯化，最终获得的第七代亲鱼即可直接进行淡水养殖(纪连云等2020)。
表型筛选是在动植物物育种过程中将植物表现的优良性状筛选出来，并最终能够固定在植株上，从而培育出优良的品种或品系。动植物育种过程需要一种快速简便的方法来评估表型，使得尽可能在筛选过程的早期识别出所需的个体。标准的检测技术，如急性胁迫致死实验已被用耐盐碱罗非鱼等品种选育过程中的表型筛选。
鳜一般在淡水中养殖，现在还未见成功对鳜进行不同盐分(氯化物型和硫酸盐型)驯养及筛选品系的方法。
不同种类的鱼对盐碱环境胁迫的耐受性差别大，且不同类型的盐分水体对鱼类影响也不同，目前没有针对翘嘴鳜的、在不同类型的盐分水体中的驯养和筛选技术。另外，现有的鱼类耐盐碱苗种驯养技术存在诸多缺点，其中最主要体现在驯养后的成活率低上。
发明内容
针对现有技术中的不足，本发明的目的是提供一种适应于氯化物型和硫酸盐型水域的耐盐鳜鱼苗的驯化方法。
为达到上述目的，本发明的解决方案是：
一种耐盐鳜鱼苗的驯化方法，其包括如下步骤：
(1)、把鳜鱼苗养于淡水池内，每天投活饵，使鳜鱼苗适应环境；
(2)、使用高盐度水和淡水混合，得到混合用水；
(3)、驯化前24h，鳜鱼苗停止喂食，将未喂食后的鳜鱼苗转移至含氯化钠或硫酸钠的驯化池中，且隔天喂食，并向驯化池中添加步骤(2)的混合用水进行驯化。
优选地，步骤(1)和步骤(2)中，适应的环境和混合用水的条件为：溶解氧为5.0-6.0mg/L，水温为24.6±0.5℃，pH为7.5±0.1。
优选地，步骤(1)中，活饵选自麦鲮或鲫鱼。
优选地，步骤(2)中，高盐度水选自氯化钠浓度为65‰的天然盐沼水或氯化钠浓度为35‰的海水。
优选地，步骤(2)中，淡水选自地下井水或曝气后的自来水。
优选地，步骤(3)中，驯化池中氯化钠的盐度为4-13‰，期间每3天盐度升高3‰。
优选地，步骤(3)中，驯化池中硫酸钠的盐度为2-11g/L，期间每3天盐度升高3g/L。
由于采用上述方案，本发明的有益效果是：
本发明首次建立了适用于氯化物型和硫酸盐型水体的鳜苗种驯化和筛选技术，该方法具有极强的针对性，可以大幅提高耐盐鳜苗种的产业化水平。其中，驯化技术操作性强、在提高入塘存活率高的同时，降低了驯化周期和成本；筛选技术方便快捷，可以用来培育鳜耐盐品种或品系。所以本发明的方法具有针对性强、成活率高、方便快捷的特点，能满足大规模筛选程序的需要。
附图说明
图1为本发明的实施例1中适应氯化钠型水体的鳜苗种驯养技术流程图。
图2为本发明的实施例1中氯化钠盐度胁迫鳜鳃组织形态变化图(a淡水；b胁迫12h；c淡水恢复24h)。
图3为本发明的实施例1中氯化钠盐度与累计死亡率的回归曲线方程图。
图4为本发明的实施例2中适应硫酸钠型水体的鳜苗种驯养技术流程图。
图5为本发明的实施例2中硫酸钠盐度胁迫鳜鳃组织形态变化图(a淡水；b胁迫12h；c淡水恢复24h)。
图6为本发明的实施例2中硫酸钠盐度与累计死亡率的回归曲线方程图。
具体实施方式
本发明提供了一种耐盐鳜鱼苗的驯化方法。
1.本发明经反复摸索和实践检验，针对翘嘴鳜提出分别适应于氯化物型和硫酸盐型两种不同水体的驯养方案，涉及驯养鱼苗规格，初始、终末驯养浓度，提升浓度以及驯养期间的投喂策略等，通过改方案能显著提高鳜对盐度环境的适应性。
2.本发明对翘嘴鳜耐受氯化物型和硫酸盐型水体的筛选条件进行了细化，如浓度梯度设定、筛选鱼苗规格等，可以快速地筛选出耐盐个体。
下面将结合实施例和附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
适应氯化钠型水体的翘嘴鳜苗种驯化和筛选技术
1.苗种准备
在放进鳜鱼苗之前，对所有鱼池进行消毒，并准备适宜的饵料鱼，如麦鲮、鲫鱼等。将鳜苗种暂养于淡水池内，每天投活饵一次，且投饵充足。定时检查水体充氧情况，溶解氧保持在5.0-6.0mg/L，水温为24.6±0.5℃，pH为7.5±0.1，待鱼完全适应环境后开展驯化试验。
2.用水准备
由高盐度水(如盐度65‰天然盐沼水、35‰海水等)和淡水(如地下井水、充分曝气后的自来水等)勾兑而成，或按水的体积加入相应比例的NaCl配制而成，如4‰，即1L水中加入4g的盐，该盐水NaCl盐度为4‰。待水质混匀后使用。盐度用WYY-Ⅰ型光学折射盐度计测量，pH、溶解氧、氨氮、亚硝酸盐等水质指标分别用试剂盒测试。
3.驯化技术
(1)、从暂养群体中筛选出规格相近(体质量约5g)的鳜苗种用来进行盐度驯化，驯化前24h在淡水池中停止喂食；
(2)、将种苗转移至NaCl盐度4‰的驯化池中；
(3)、在驯化池中第1天，不喂食；
(4)、在驯化池中第2天，喂食；
(5)、在驯化池中第3天，不喂食；
(6)、向驯化池中加注天然或利用NaCl配制的高盐度水，使盐度梯度升高3‰(即终浓度为7‰)；
重复步骤(3)到步骤(6)，直至盐度提高至13‰，经此驯化后，存活率为60-80％。流程如图1所示。驯化过程中及时捞取死鱼，定期清洗并更换网箱。
4.筛选技术
(1)、利用组织学观察初步了解鳜对NaCl盐度的耐受性。将鳜苗种直接从淡水转入盐度12‰的NaCl盐度水体中，胁迫12h之后再转入淡水中恢复，分别在胁迫前、胁迫后12h和淡水恢复24h各采集3尾试验鱼的鳃组织放入波恩中固定，按常规方法制作石蜡切片并在光镜下观察。结果发现12‰氯化钠盐度胁迫影响了鳃的形态(图2)。
(2)、计算NaCl盐度胁迫下质量约5g鳜鱼苗种的96h半致死浓度。设定NaCl盐度胁迫梯度(0、7‰、9‰、11‰、12‰)。先将鱼暂养于无环境胁迫的对照水体(如充分曝气的自来水组为对照)，然后将试验鱼直接放入不同环境胁迫的水体内，每组30尾鱼，设3个平行，进行96h急性胁迫实验。实验开始后，每4h观察记录死亡情况。以试验鱼静卧水箱底部，呼吸停止，用玻璃棒触碰无反应为死亡标准。试验期间保持状态稳定，不喂食，用虹吸管吸出粪便以保持水体清洁。将累计死亡率转换成概率单位后，用线性回归模型拟合NaCl盐度与累计死亡率的回归方程，求出96h半致死浓度(LD50)。计算得到NaCl盐度胁迫LD50＝13.459‰(图3)。
(3)、依据步骤(1)中设定的半致死浓度数进行急性胁迫致死筛选，淘汰对胁迫环境耐受性差的个体。即将体质量5g左右的鳜鱼苗种从淡水直接转入13‰NaCl水体中，96h后存活个体留作下一步选育，死亡个体即被淘汰，淘汰率约为50％。
实施例2：
适应硫酸钠盐型水体的翘嘴鳜苗种驯化和筛选技术
1.苗种准备
同实施例1。
2.用水准备
按水的体积加入相应比例的Na2SO4配制而成，如Na2SO4盐度2g/L，即1L水中加入2g的Na2SO4，该盐水硫酸盐浓度为2g/L。
3.驯化技术
(1)、从暂养群体中筛选出规格相近的(体质量约5g)鳜种苗用来进行硫酸盐盐度驯化，驯化前24h在淡水池中停止喂食；
(2)、将种苗转移至Na2SO4浓度2g/L的驯化池中；
(3)、在驯化池中第1天，不喂食；
(4)、在驯化池中第2天，喂食；
(5)、在驯化池中第3天，不喂食；
(6)、向驯化池中加注利用Na2SO4配制的高盐度水，使盐度梯度升高3g/L(即终浓度为5g/L)；
重复步骤(3)到步骤(6)，直至盐度提高至11g/L，经此驯化后，存活率为60-80％。流程如图4所示。驯化过程中及时捞取死鱼，定期清洗并更换网箱。
4.筛选技术
(1)、利用组织学观察初步了解鳜对Na2SO4盐度的耐受性。将鳜苗种直接从淡水转入盐度14.7g/L的Na2SO4盐度水体中，胁迫12h之后再转入淡水恢复，分别在胁迫前、胁迫后12h和淡水恢复24h各采集3尾试验鱼的鳃组织放入波恩中固定，按常规方法制作石蜡切片并在光镜下观察。结果发现14.7g/L的Na2SO4盐度胁迫影响了鳃的形态(图5)。
(2)、计算Na2SO4盐度胁迫下体质量约5g鳜鱼苗种的96h半致死浓度。设定Na2SO4盐度胁迫梯度(0、7g/L、9g/L、11g/L、12g/L)。先将鱼暂养于无环境胁迫的对照水体(如充分曝气的自来水组为对照)，然后将试验鱼直接放入不同环境胁迫的水体内，每组30尾鱼，设3个平行，进行96h急性胁迫实验。试验开始后，每4h观察记录死亡情况。以试验鱼静卧水箱底部，呼吸停止，用玻璃棒触碰无反应为死亡标准。试验期间保持状态稳定，不喂食，用虹吸管吸出粪便以保持水体清洁。将累计死亡率转换成概率单位后，用线性回归模型拟合Na2SO4盐度与累计死亡率的回归方程，求出96h半致死浓度(LD50)。计算得到Na2SO4盐度胁迫LD50＝11.286g/L(图6)。
(3)、依据步骤(1)中设定的半致死浓度数进行急性胁迫致死筛选，淘汰对胁迫环境耐受性差的个体。即将体质量5g左右的鳜鱼苗种从淡水直接转入11g/L Na2SO4盐度水体中，96h后存活个体留作下一步选育，死亡个体即被淘汰，淘汰率约为50％。
上述对实施例的描述是为了便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用本发明。熟悉本领域技术人员显然可以容易的对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中，而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例。本领域技术人员根据本发明的原理，不脱离本发明的范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种耐盐鳜鱼苗的驯化方法，其特征在于：其包括如下步骤：
(1)、把鳜鱼苗养于淡水池内，每天投活饵，使鳜鱼苗适应环境；所述鳜鱼苗的品种为翘嘴鳜；
(2)、配制盐水加入到驯化池中，所述盐水为盐度4‰的氯化钠盐水或者盐度2g/L的硫酸钠盐水；
(3)、驯化前24h，鳜鱼苗停止喂食，将未喂食后的鳜鱼苗转移至含氯化钠或硫酸钠的驯化池中，且隔天喂食，并向驯化池中添加步骤(2)的盐水进行驯化；所述驯化池中氯化钠的盐度为4-13‰，期间每3天盐度升高3‰；或者，所述驯化池中硫酸钠的盐度为2-11g/L，期间每3天盐度升高3g/L。
2.根据权利要求1所述的耐盐鳜鱼苗的驯化方法，其特征在于：步骤(1)和步骤(2)中，适应的环境和盐水的条件为：溶解氧为5.0-6.0mg/L，水温为24.6±0.5℃，pH为7.5±0.1。
3.根据权利要求1所述的耐盐鳜鱼苗的驯化方法，其特征在于：步骤(1)中，所述活饵选自麦鲮或鲫鱼。
4.根据权利要求1所述的耐盐鳜鱼苗的驯化方法，其特征在于：步骤(2)中，所述氯化钠盐水是使用高盐度水和淡水混合得到；所述高盐度水选自氯化钠浓度为65‰的天然盐沼水或氯化钠浓度为35‰的海水，所述淡水选自地下井水或曝气后的自来水。
5.根据权利要求1所述的耐盐鳜鱼苗的驯化方法，其特征在于：步骤(2)中，所述硫酸钠盐水是按水的体积加入相应比例的Na2SO4配制而成。
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