CN115106062A - 一种复合天然固相萃取剂、其制备方法和一种白藜芦醇的纯化方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种复合天然固相萃取剂的制备方法，包括：将烟草、甘蔗渣和龙须草，剪切，混合，得到混合纤维材料；将混合纤维材料采用乙酸浸泡，过滤后加入强碱溶液，加热回流后，过滤，得到滤渣将滤渣超声提取，离心，干燥，即得。本发明创造性的将烟草、甘蔗渣和龙须草混合，经处理使得天然复合材料的表面纤维暴露，接触面增大，改善了对于待分析物的吸附和萃取能力，对于待分析对象的渗透性好，过柱速度快，仅需10‑29s/mL，不需要真空抽溶液，仅靠重力作用，待分析溶液就能自动流下来通过该天然复合吸附萃取柱，本方案操作便捷，环境友好、方法简单、经济实惠，材料天然环保、成本低廉、性能稳定，增加了天然资源可持续综合利用。

Description

一种复合天然固相萃取剂、其制备方法和一种白藜芦醇的纯 化方法

技术领域

本发明涉及萃取分析技术领域，尤其是涉及一种复合天然固相萃取剂、其制备方法和一种白藜芦醇的纯化方法。

背景技术

固相萃取(Solid Phase Extraction，简称SPE)前处理技术，由液固萃取和液相色谱技术相结合发展而来，采用选择性吸附、选择性洗脱的方式对样品进行富集、分离、净化，降低样品基质干扰，提高检测灵敏度。固相萃取法的萃取剂是固体，其工作原理基于：水样中欲测组分与共存干扰组分在固相萃取剂上作用力强弱不同，使它们彼此分离。固相萃取剂是含C18或C8、腈基、氨基等基团的特殊填料，这些固相萃取填料能对具有疏水性的化合物表现出吸附性能，然而在许多具体的实际应用中，分析对象种类多样，常用烷基键合相固相萃取材料已不能满足要求。

天然香精香料如葡萄干提取物、葡萄干汁浓缩物、葡萄汁浓缩物、葡萄酒与雪莉酒、花生油等，富含白藜芦醇(Resveratrol)等天然活性成分，是一种多酚类化合物，学名为3,4,5-三羟基二苯乙烯，存在毛叶芦醇根部、花生、桑树、葡萄、虎杖等植物中，是能够对心脑血管起到疏通作用的主要有效成分，有较好的抗癌、抑制肿瘤等，对人体的肝脏、心脑血管具有保护作用，是天然的抗氧化剂，能降低自由基、具有延迟衰老的作用，还具有良好的抑菌作用，是重要活性物质，也是抗氧化性能、生物活性的重要指标。目前针对白藜芦醇的检测主要有HPLC检测法、薄层扫描法、毛细管电泳法、气质联用法等。

公开号为CN202010636772.X中国专利公开了一种用于红酒中的白藜芦醇提取检测方法，通过有机溶剂萃取红酒且静置分层，氮吹浓缩然后再缓冲液复溶，将有序介孔碳粉末分散到全氟磺酸型聚合物溶液超声处理，将裸丝网印刷电极用超纯水经超声活化氮气吹干，Nafion-OMC分散液滴涂在裸丝网印刷电极表面常温干燥，获得有序介孔碳修饰的丝网印花电极，构建电化学传感器对白藜芦醇含量检测，该方法使用有机溶剂且步骤繁琐。公开号为CN201811532659.6的中国专利，液相色谱串联质谱同步检测植物油料多酚的方法，检测植物油料中的酚类化合物，将待测样品粉碎后配制成溶液，加入四氧化三铁-石墨烯材料进行富集，在管壁外用磁铁吸附固体，弃液体，残留固体去杂后用解析剂进行洗脱，离心或过滤收集液体，氮吹干后复溶，前处理较为繁琐复杂，四氧化三铁-石墨烯材料制备的固相萃取材料原料成本较高，且制备过程需要高温、加压、真空冷冻，合成成本较高。

现有技术中所运用的固相萃取填料存在原料昂贵、制备工序复杂且成本较高，吸附稳定性和效率不高、使用工序较复杂等缺陷。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种复合天然固相萃取剂，本发明提供的复合天然固相萃取剂吸附稳定性好、吸附效率高。

本发明提供了一种复合天然固相萃取剂的制备方法，包括：

A)将烟草、甘蔗渣和龙须草，剪切，混合，得到混合物，称为混合纤维材料；

B)将混合纤维材料采用乙酸浸泡，过滤后加入强碱溶液，加热回流后，过滤，得到滤渣；

C)将滤渣超声提取，离心，干燥，即得。

优选的，所述烟草为加热不燃烧卷烟抽吸后的废弃烟草；所述甘蔗渣为风干的甘蔗渣；所述剪切为剪切至0.5～1.0cm。

优选的，所述烟草、甘蔗渣和龙须草的质量比为1～5:1:1。

优选的，步骤B)所述混合物和乙酸的体积比为1：(1～2)；所述浸泡的温度为45～60℃；浸泡的时间为0.5～4h。

优选的，步骤B)所述强碱溶液为NaOH或KOH；所述强碱溶液的浓度为0.5～2mol/L；所述强碱溶液与所述混合纤维材料的质量比为(1～4)：1。

优选的，步骤C)所述超声提取具体为：

采用20％～85％乙醇50～70℃加热回流超声提取5～30min，过滤后得到乙醇提取后滤渣；将乙醇提取后滤渣采用水80～100℃加热回流3～4.5h，而后滤膜过滤；所述超声提取的功率为200～500w；所述水和乙醇提取后滤渣与的质量比为(10～20)：1；所述滤膜为微滤膜，所述微滤膜的孔径为0.1μm～10μm。

优选的，步骤C)所述离心的转速为1500～4000rpm。

本发明提供了一种复合天然固相萃取剂，由上述技术方案任意一项所述的制备方法制备得到。

本发明提供了一种白藜芦醇的纯化方法，将含有白藜芦醇的天然提取物待测样品采用上述技术方案任意一项所述的制备方法制备得到的复合天然固相萃取剂进行纯化。

优选的，所述纯化方法具体为：

上述技术方案任意一项所述的制备方法制备得到的复合天然固相萃取剂作为填料，装入带有筛板的SPE空柱管中，上端盖上筛板，旋涡震荡，得到天然复合固相吸附萃取柱；所述旋涡振荡器转速300～1500rpm，点振时间10-60s；

将含有白藜芦醇的天然提取物待测样品溶液通过所述天然复合固相吸附萃取柱，而后采用溶剂冲去杂质，采用洗脱剂洗脱，即得。

与现有技术相比，本发明提供了一种复合天然固相萃取剂的制备方法，包括：A)将烟草、甘蔗渣和龙须草，剪切，混合，得到混合物；B)将混合物采用乙酸浸泡，过滤后加入强碱溶液，加热回流后，过滤，得到滤渣；C)将滤渣超声提取，离心，干燥，即得。本发明创造性的将烟草、甘蔗渣和龙须草混合，经处理使得天然复合材料的表面纤维暴露，接触面增大，改善了对于待分析物的吸附和萃取能力，对于待分析对象的渗透性好，过柱速度快，仅需10-29s/mL，不需要真空抽溶液，仅靠重力作用，待分析溶液就能自动流下来通过该天然复合吸附萃取柱，而同样的样液通过市售的SPE柱在自重作用下需70-90s/mL。本方案操作便捷，减少试验设备和工序，环境友好、方法简单、经济实惠，选用的加热不燃烧废弃烟丝、甘蔗渣、龙须草材料天然环保、成本低廉、性能稳定，且增加了天然资源可持续综合利用。

附图说明

图1为实施例中的检测图谱。

具体实施方式

本发明提供了一种复合天然固相萃取剂、其制备方法和一种白藜芦醇的纯化方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都属于本发明保护的范围。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明提供了一种复合天然固相萃取剂的制备方法，包括：

A)将烟草、甘蔗渣和龙须草，剪切，混合，得到混合物，称为混合纤维材料；

B)将混合纤维材料采用乙酸浸泡，过滤后加入强碱溶液，加热回流后，过滤，得到滤渣；

C)将滤渣超声提取，离心，干燥，即得。

本发明提供了一种复合天然固相萃取剂的制备方法，将烟草、甘蔗渣和龙须草，剪切，混合，得到混合物。

本发明所述烟草为加热不燃烧卷烟抽吸后的废弃烟草。

该加热不燃烧卷烟废弃烟丝，是经过辊压法或稠浆法工艺制备的含雾化剂的再造烟叶，加热不燃烧烟草是通过特殊的加热源对烟丝进行加热，加热时烟丝中的尼古丁及香味等物质通过挥发产生烟气来满足吸烟者需求的一种新型烟草制品，消费者使用时，烟草材料所处的温度低于500℃，烟草材料只加热烘烤未燃烧，抽吸完后的加热不燃烧卷烟往往被直接丢弃。而实际上加热不燃烧烟丝除了热解、挥发的香味物质及其它挥发性成分，仍保留有大部分化学成分和纤维结构，因此，所述的加热不燃烧烟草抽吸后的废弃烟丝，是天然的生物质，孔隙结构相当丰富，是一种具有毛细管多孔性特殊结构的物质，尺寸均匀、蓬松且具有丰富极性羟基和疏水性芳香基等功能基团，可以与分析物发生疏水作用、π-π作用、亲水作用和氢键作用等，绿色天然、来源广、成本低，具有持续综合利用、资源节约等应用前景。

本发明所述甘蔗渣为风干的甘蔗渣。

甘蔗渣是甘蔗制糖时压榨后的渣滓，是制糖工业的主要废弃物，由于甘蔗渣转化和利用技术的限制，目前大多数甘蔗渣被直接燃烧或废弃不用，其利用率很低，不仅造成资源浪费，还带来环境污染。甘蔗渣质地粗硬，约占甘蔗的24％～27％，其中含水分约50％，每生产出一吨的蔗糖，就会产生2～3吨的蔗渣。甘蔗渣是天然高分子材料、绿色化学品，天然纤维素含量高，成分相对稳定，性质均一，主要含有纤维素和半纤维素，是由许多葡萄糖以β-1,4糖苷键缩合形成的天然高分子化合物，分子间彼此以氢键相连，数目多，相当牢固，是具有不同形态的固体纤维状物质，不溶于水和有机溶剂，加热也不能熔化，坚韧不易折断和松散，可以起到吸附和支撑作用，绿色环保，有广阔的应用前景，尚未见有将甘蔗渣用于固相吸附剂的报道，本发明将甘蔗渣酸碱加热处理，进一步醇化甘蔗渣纤维，提高吸附反应活性。

本发明所述龙须草色泽乳白，叶片狭长有细绒毛，有优质的不生节、纤维长、韧性好、拉力好的长丝状纤维，经本发明酸碱加热处理后，保留纤维素和部分木质素，具有致密且规则的表面结构、较好的机械性能、吸附能力，绿色环保。

本发明所述剪切为剪切至0.5～1.0cm。上述步骤可以增大表面积，提高后续步骤的效率。

本发明对于具体的混合方式不进行限定，本领域技术人员熟知的即可。

其中，所述烟草、甘蔗渣和龙须草的质量比优选为1～5:1:1；包括但不限于1:1:1、2:1:1、3:1:1、4:1:1、5:1:1。

本发明通过烟草、甘蔗渣和龙须草三者协同混合，混合物称为混合纤维材料，既能具有吸附纯化复杂提取物杂质作用，保留其中被测物质，又能增加空腔、增大复杂液体样品通过速度，且能用少量溶剂快速洗脱被测物质。

将混合纤维材料采用乙酸浸泡，过滤。

本发明所述混合纤维材料和乙酸的体积比为1：(1～2)；所述浸泡的温度为45～60℃；浸泡的时间为0.5～4h。

所述乙酸为食品级或分析纯，使溶液中H+增多，酸性增加进而促进混合纤维中的色素、蛋白质、多糖和木质素等大分子溶出。

过滤后加入强碱溶液，加热回流后，过滤，得到滤渣。

本发明所述强碱溶液优选为NaOH或KOH；更优选为KOH。

具体的，所述强碱溶液的浓度为0.5～2mol/L；所述强碱溶液与所述混合纤维材料的质量比为(1～4)：1；优选具体为1：1、2:1、3:1或4:1。

本发明采用热碱的可以进一步去除烟叶表面的挥发性香味物质、色素以及蛋白质等大分子杂质，同时使废弃烟丝、甘蔗渣和龙须草表面粗糙，增加表面积。

将滤渣超声提取。

按照本发明，所述超声提取优选采用超声提取装置，具体为：

采用20％～85％乙醇50～70℃加热回流超声提取5～30min，优选冲洗1～3次。

上述超声处理可以高效地进一步去除色素、蛋白质、多糖、木质素、半纤维素等大分子物质和挥发性香味物质。

过滤后得到乙醇提取后滤渣；将乙醇提取后滤渣采用水80～100℃加热回流3～4.5h，回流1～2次，充分将所述混合滤渣中残留的乙酸、乙醇、KOH溶液去除，而后滤膜过滤。

所述超声提取的功率为200～500w；所述水和乙醇提取后滤渣与的质量比为(10～20)：1；所述滤膜为微滤膜，所述微滤膜的孔径优选为0.1μm～10μm；更优选为1μm～9μm。

充分保留碎混合滤渣，含有杂质的滤液可溶出过滤。

过滤后，离心，干燥，即得。本发明所述离心的转速优选为1500～4000rpm；更优选为1800～3800rpm。

本发明所述干燥优选为真空干燥。

本发明提供了一种复合天然固相萃取剂，由上述技术方案任意一项所述的制备方法制备得到。

本发明对于上述制备方法已经有了清楚的描述，在此不再限定。

本发明提供了一种白藜芦醇的纯化方法，将含有白藜芦醇的天然提取物待测样品采用上述技术方案任意一项所述的制备方法制备得到的复合天然固相萃取剂进行纯化。

在本发明其中一部分优选实施方式中，所述纯化方法具体为：

上述技术方案任意一项所述的制备方法制备得到的复合天然固相萃取剂作为填料，装入带有筛板的SPE空柱管中，上端盖上筛板，旋涡震荡，得到天然复合固相吸附萃取柱；所述旋涡振荡器转速300～1500rpm，点振时间10-60s；

将含有白藜芦醇的天然提取物待测样品溶液通过所述天然复合固相吸附萃取柱，而后采用溶剂冲去杂质，采用洗脱剂洗脱，即得。

上述技术方案任意一项所述的制备方法制备得到的复合天然固相萃取剂作为填料，装入带有筛板的SPE空柱管中，上端盖上筛板，旋涡震荡，使填料填充均匀，补充填料并压紧，成为天然复合固相吸附萃取柱；旋涡振荡器转速300-1500rpm，点振时间10-60s。

将含有白藜芦醇的天然提取物待测样品溶液通过所述天然复合固相吸附萃取柱，保留其中被测物质白藜芦醇。

而后采用溶剂冲去杂质，采用洗脱剂洗脱，即得。

优选可以直接通过液相色谱对白藜芦醇进行浓度检测。

可选的，按GB/T 24903-2010粮油检验花生中白藜芦醇的测定高效液相色谱法，对天然提取物中的白藜芦醇生物活性成分进行检测分析。

本方案中，为提高加热不燃烧废弃烟丝、甘蔗渣、龙须草的利用价值，采用简单的材料剪切和清洗步骤，然后用乙酸加热浸泡一段时间，过滤，再加入强碱溶液加热回流过滤，去除混合材料表面的色素、蛋白质、多糖、木质素等大分子杂质，再通过乙醇溶液超声提取，经纯净水多次加热回流充分将残留的乙酸、乙醇、强碱溶液去除，并通过滤膜过滤，离心去除溶剂，保留滤渣，最后得到除杂后的天然复合固相萃取材料，作为萃取柱填料，用于富集纯化葡萄提取物等中的白藜芦醇等生物活性物质。

本发明所述天然复合固相萃取材料中的废弃烟丝、甘蔗渣、龙须草，作为固相萃取的吸附介质，作为复杂天然提取物基质样品中白藜芦醇等有机物的SPE萃取吸附剂，能纯化富集其中的白藜芦醇。另一方面，将本发明混合材料直接用作萃取柱的天然填料用于萃取分析，经处理使天然复合材料的表面纤维暴露，接触面增大，改善了对于待分析物的吸附和萃取能力。本方案操作便捷，减少试验设备和工序，环境友好、方法简单、经济实惠，选用的加热不燃烧废弃烟丝、甘蔗渣、龙须草材料天然环保、成本低廉、性能稳定，且增加了天然资源可持续综合利用。

本方案以加热不燃烧卷烟废弃烟丝、甘蔗渣、龙须草材料作为原料制备固相萃取柱的天然填料，该废弃烟丝是经过消费者加热抽吸使用后的废弃烟丝，仍是一种天然的生物质，孔隙结构相当丰富，是一种具有毛细管多孔性特殊结构的物质，与由许多葡萄糖以β-1,4糖苷键缩合形成、分子间彼此以氢键相连的天然高分子甘蔗渣纤维，以及纤维长、韧性好、拉力好的长丝状龙须草纤维相混合，用乙酸加热处理在于使酸中H+增多，酸性增加进而促进色素、蛋白质、木质素、多糖等大分子溶出；用热碱加热、超声加热回流的目的在于进一步去除混合材料表面的挥发性香味物质、色素以及蛋白质、木质素等大分子杂质，同时使天然混合材料表面粗糙，增加表面积；

经本发明步骤工艺制成仍具有毛细管多孔结构、尺寸均匀、蓬松且具有丰富极性羟基和疏水性芳香基等功能基团的复合固相萃取材料(原料为废弃烟丝和干丝瓜络)，可以与分析物发生疏水作用、π-π作用、亲水作用和氢键作用等，吸附白藜芦醇能力强，稳定性高。

将加热不燃烧废弃烟丝、甘蔗渣、龙须草材料用作萃取柱的天然填料用于萃取分析，经处理使天然复合材料的表面纤维暴露，接触面增大，改善了对于待分析物的吸附和萃取能力；该废弃烟丝孔隙结构相当丰富，是一种具有毛细管多孔性特殊结构的物质，与由许多葡萄糖以β-1,4糖苷键缩合形成、分子间彼此以氢键相连的天然高分子甘蔗渣纤维，以及纤维长、韧性好、拉力好的长丝状龙须草纤维相混合，经本发明处理后，对于待分析对象的渗透性好，过柱速度快，仅需10-29s/mL，不需要真空抽溶液，仅靠重力作用，待分析溶液就能自动流下来通过该天然复合吸附萃取柱，而同样的样液通过市售的SPE柱在自重作用下需70-90s/mL。

本方案操作便捷，减少试验设备和工序，环境友好、方法简单、经济实惠，选用的加热不燃烧废弃烟丝和干丝瓜络材料天然环保、成本低廉、性能稳定，且增加了天然资源可持续综合利用。

为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的一种复合天然固相萃取剂、其制备方法和一种白藜芦醇的纯化方法进行详细描述。

实施例1一种复合天然固相萃取剂的制备方法，包括以下步骤：

S1.将加热不燃烧卷烟抽吸后的废弃烟草、煮沸后风干的甘蔗渣和龙须草，剪切为0.5cm长的小段，增大表面积，提高后续步骤的效率；

S2.将所述碎废弃烟草、甘蔗渣、龙须草碎片或碎丝按质量比1:1:1混合，混合物称为混合纤维材料，浸入1倍质量乙酸，加热浸泡，温度为45℃，加热0.5h，过滤；然后加入0.5mol/LKOH溶液(强碱溶液与所述混合材料的质量比为1：1)，加热冷凝回流后过滤，得到混合滤渣；

S3.将所述混合滤渣，采用超声提取装置(超声功率为200w)，先用20％质量浓度的乙醇溶液，加热50℃冲洗该滤渣30min，高效地进一步去除色素、蛋白质、多糖、木质素等大分子物质和挥发性香味物质；所述纯净水与所述碎烟叶滤渣的质量比为10：1，加热保持85℃，3h，充分去除残留的乙酸、乙醇、KOH溶液去除，并通过孔径0.1μm的微滤膜过滤，保留滤渣；

S4.将残渣离心(离心的转速为1500rpm)进一步除溶剂，最后得到除杂后的天然复合固相萃取材料。

将所述天然复合固相萃取材料作为填料，装入带有筛板的SPE空柱管中，上端盖上筛板，旋涡震荡转速300rpm，点振时间60s，使填料填充均匀，补充填料并压紧，成为天然复合固相吸附萃取柱，使含白藜芦醇的天然提取物液体样品溶液通过其中，吸附保留被测物质白藜芦醇，然后选用适当强度溶剂冲去杂质，然后用少量溶剂迅速洗脱被测物质，直接通过液相色谱，按GB/T24903-2010粮油检验花生中白藜芦醇的测定高效液相色谱法，对白藜芦醇进行浓度检测。

实施例2一种复合天然固相萃取剂的制备方法，包括以下步骤：

S1.将加热不燃烧卷烟抽吸后的废弃烟草、煮沸后风干的甘蔗渣和龙须草，剪切为0.8cm长的小段，增大表面积，提高后续步骤的效率；

S2.将所述废弃烟草、甘蔗渣和龙须草碎片或碎丝按质量比2.5:1:1混合，称为混合纤维材料，浸入1.5倍质量乙酸中加热浸泡2h，温度为50℃，过滤；然后加入1mol/LKOH溶液，与所述混合纤维材料的质量比为2.5：1加热冷凝回流后过滤，得到混合滤渣；

S3.将所述碎混合滤渣，采用超声提取装置，超声功率为350w，先用45％质量浓度的乙醇加热回流冲洗该混合滤渣15min，冲洗2次，过滤掉乙醇滤液；再加入纯净水，纯净水与所述碎烟叶滤渣的质量比为15：1，加热90℃，冷凝回流4h，1次，充分去除残留的强碱，并通过孔径2μm的微滤膜过滤，保留滤渣；

S4.将残渣离心，离心的转速为2500rpm，进一步除溶剂，最后得到除杂后的天然复合固相萃取材料。

将所述天然复合固相萃取材料作为填料，装入带有筛板的SPE空柱管中，上端盖上筛板，旋涡震荡转速1000rpm，点振时间30s；，使填料填充均匀，补充填料并压紧，成为天然复合固相吸附萃取柱，使含白藜芦醇的天然提取物液体样品溶液通过其中，吸附保留被测物质白藜芦醇，然后选用适当强度溶剂冲去杂质，然后用少量溶剂迅速洗脱被测物质，直接通过液相色谱，按GB/T 24903-2010粮油检验花生中白藜芦醇的测定高效液相色谱法，对白藜芦醇进行浓度检测。

实施例3一种复合天然固相萃取剂的制备方法，包括以下步骤：

S1.将加热不燃烧卷烟抽吸后的废弃烟草、甘蔗渣、龙须草材料剪切为1.0cm长的小段，增大表面积，提高后续步骤的效率；

S2.将所述废弃烟草、甘蔗渣、龙须草材料碎片或碎丝按质量比5:1:1混合，称为混合纤维材料，浸入2倍质量乙酸中加热浸泡4h，温度为60℃，过滤；然后加入2mol/LKOH溶液，与所述碎废弃烟丝和丝瓜络的质量比为4：1加热冷凝回流后过滤，得到混合纤维滤渣。

S3.将所述碎混合纤维滤渣，采用超声提取装置，超声功率为500w，先用85％质量浓度的乙醇加热温度70℃，超声加热回流冲洗该滤渣30min，3次，过滤掉乙醇滤液；再加入纯净水，纯净水与所述碎烟叶滤渣的质量比为20：1，加热100℃，冷凝回流4.5h，2次，充分去除残留的强碱，并通过孔径10μm的微滤膜过滤，保留滤渣；

S4.将残渣离心，离心的转速为4000rpm，进一步除溶剂，最后得到除杂后的天然复合固相萃取材料。

S5.将所述天然复合固相萃取材料作为填料，装入带有筛板的SPE空柱管中，上端盖上筛板，旋涡震荡，使填料填充均匀，补充填料并压紧，成为天然复合固相吸附萃取柱。

S6.使含白藜芦醇的天然提取物液体样品溶液通过该天然复合固相吸附萃取柱，保留其中被测物质白藜芦醇；

S7.选用适当强度溶剂冲去杂质，然后用少量溶剂迅速洗脱被测物质，直接通过液相色谱对白藜芦醇进行浓度检测。

将所述天然复合固相萃取材料作为填料，装入带有筛板的SPE空柱管中，上端盖上筛板，旋涡震荡转速1500rpm，点振时间10s，使填料填充均匀，补充填料并压紧，成为天然复合固相吸附萃取柱，使含白藜芦醇的天然提取物液体样品溶液通过其中，吸附保留被测物质白藜芦醇，然后选用适当强度溶剂冲去杂质，然后用少量溶剂迅速洗脱被测物质，直接通过液相色谱，按GB/T 24903-2010粮油检验花生中白藜芦醇的测定高效液相色谱法，对白藜芦醇进行浓度检测。

实施例4

称取2g葡萄提取物于10mL容量瓶中，加入正己烷稀释至刻度线，作为上样液待用。

准确称取0.1g烟丝于6mL带有筛板的SPE空柱管中，不断敲打使其填充均匀，上端盖上筛板压紧；在重力作用下，将3mL丙酮和2mL正己烷依次通过该SPE萃取柱；接着将2mL上述上样液加入SPE柱，使其在重力作用下缓慢流过萃取柱；然后加入2mL正己烷溶液作为清洗液通过萃取柱，以去除吸附在柱上的残余基质，并在真空泵负压下将清洗液抽干；最后加入2mL乙醇作为洗脱液，使其在重力作用下通过萃取柱并在真空泵负压下将洗脱液抽干，收集洗脱物于离心管中，置于40℃氮吹下浓缩至干，采用200μL异丙醇溶解，取10μL进入高效液相色谱-紫外检测器(HPLC-UV)分析。

HPLC-UV分析条件：分析柱为C₁₈柱(250mm×4.6mm i.d.,5μm)；流动相条件为A：含0.1％甲酸的水溶液，流动相B：乙腈，流动相为A/B(74/26，v/v)，流速为1.0mL/min；柱温为40℃；检测器波长为306nm。

检测结果：对葡萄提取物中白藜芦醇的加标回收率为98.9％，RSD为7.2％。附图1为在葡萄提取物中检测到的白藜芦醇色谱图。

对比例1：

用市售的ALN中性氧化铝柱SPE固相萃取柱用于葡萄提取物中白藜芦醇的检测，本对比例中，以葡萄提取物为样品，检测的目标物为白藜芦醇，利用所述萃取柱富集所述目标物后按照GB/T 24903-2010所述的检测条件进行检测，结果如表1所示。

对比例2

用市售的色谱柱Eclipse XDB-C18柱用于葡萄提取物中白藜芦醇的检测，本对比例中，以葡萄提取物为样品，检测的目标物为白藜芦醇，按照GB/T 24903-2010所述的检测条件进行检测，结果如表1所示。

对比例3

本对比例中，固相萃取柱采用C₁₈和Al₂O₃混合填料，比例为1:1；提取溶剂为80％乙醇溶液。以葡萄提取物为样品，检测的目标物为白藜芦醇，利用所述萃取柱富集所述目标物后按照GB/T 24903-2010所述的检测条件进行检测，结果如表1所示。

对比例4

本对比例中，固相萃取柱采用加热卷烟抽吸后的废弃烟丝、甘蔗渣和龙须草的质量比为0.5:1:0.5，与实施例4相同处理制备固相萃取柱，HPLC-UV分析条件相同，结果如表1所示。

对比例5

本对比例中，固相萃取柱采用加热卷烟抽吸后的废弃烟丝、甘蔗渣和龙须草的质量比为6:1:2，与实施例4相同处理制备固相萃取柱，HPLC-UV分析条件相同，结果如表1所示。

表1.本发明天然复合固相萃取剂实施例和市售固相萃取柱对比例分别对葡萄提取物中白藜芦醇萃取色谱检测

样品	含量(ug/g)	提取率(％)
			实施例1	61.26	94.20
实施例2	56.72	87.22
			实施例3	54.54	83.87
对比例1	43.23	66.48
			对比例2	37.65	57.90
对比例3	44.59	68.57
			对比例4	43.58	67.01
对比例5	46.47	71.46

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种复合天然固相萃取剂的制备方法，其特征在于，包括：

A)将烟草、甘蔗渣和龙须草，剪切，混合，得到混合纤维材料；

B)将混合纤维材料采用乙酸浸泡，过滤后加入强碱溶液，加热回流后，过滤，得到滤渣；

C)将滤渣超声提取，离心，干燥，即得。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述烟草为加热不燃烧卷烟抽吸后的废弃烟草；所述甘蔗渣为风干的甘蔗渣；所述剪切为剪切至0.5～1.0cm。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述烟草、甘蔗渣和龙须草的质量比为1～5:1:1。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤B)所述混合物和乙酸的体积比为1：(1～2)；所述浸泡的温度为45～60℃；浸泡的时间为0.5～4h。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤B)所述强碱溶液为NaOH或KOH；所述强碱溶液的浓度为0.5～2mol/L；所述强碱溶液与所述混合纤维材料的质量比为(1～4)：1。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤C)所述超声提取具体为：

采用20％～85％乙醇50～70℃加热回流超声提取5～30min，过滤后得到乙醇提取后滤渣；将乙醇提取后滤渣采用水80～100℃加热回流3～4.5h，而后滤膜过滤；所述超声提取的功率为200～500w；所述水和乙醇提取后滤渣与的质量比为(10～20)：1；所述滤膜为微滤膜，所述微滤膜的孔径为0.1μm～10μm。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤C)所述离心的转速为1500～4000rpm。

8.一种复合天然固相萃取剂，其特征在于，由权利要求1～7任意一项所述的制备方法制备得到。

9.一种白藜芦醇的纯化方法，其特征在于，将含有白藜芦醇的天然提取物待测样品采用权利要求1～7任意一项所述的制备方法制备得到的复合天然固相萃取剂进行纯化。

10.根据权利要求9所述的纯化方法，其特征在于，所述纯化方法具体为：

权利要求1～7任意一项所述的制备方法制备得到的复合天然固相萃取剂作为填料，装入带有筛板的SPE空柱管中，上端盖上筛板，旋涡震荡，得到天然复合固相吸附萃取柱；所述旋涡振荡器转速300～1500rpm，点振时间10-60s；

将含有白藜芦醇的天然提取物待测样品溶液通过所述天然复合固相吸附萃取柱，而后采用溶剂冲去杂质，采用洗脱剂洗脱，即得。

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