CN115015543B - 一种多项病原体联合检测装置及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种多项病原体联合检测装置及其制备方法，属于医疗检测装置领域。样品垫、免疫胶体金抗体玻璃纤维膜、免疫硝酸纤维素膜、吸收垫分别粘贴在塑料板上，所述硝酸纤维素膜的两端分别与吸收垫、免疫胶体金抗体玻璃纤维膜搭接，所述免疫胶体金抗体玻璃纤维膜的另一端与样品垫搭接，利用胶体金免疫层析技术以及捕获法原理制备全血、血清、血浆标本中人流感病毒A型、流感病毒B型、鼻病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体的IgM抗体的联合检测装置。优点是提高了免疫层析方法学的灵敏度、精准度和稳定性，操作简便，实用性强，可实现呼吸道感染性疾病的灵敏、特异、全面快速检测。

Description

一种多项病原体联合检测装置及其制备方法
技术领域
本发明涉及医疗检测装置领域，特别涉及一种流感病毒A型和B型、HRV、HPIV、RSV、HAdV、MP、CP的IgM抗体联合检测装置及其制备方法，利用胶体金免疫层析技术以及捕获法原理定量检测全血、血清、血浆标本中人流感病毒A型、流感病毒B型、鼻病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体的IgM抗体的检测装置及其制备方法，可实现呼吸道感染性疾病的灵敏、特异、全面快速检测。
背景技术
流行性感冒是由流感病毒感染引起的一种急性呼吸道传染病，经呼吸道迅速传播，潜伏期短，季节性明显，极易造成大范围暴发流行，控制难度大。流感病毒分为甲(A)、乙(B)、丙(C)3型，其中甲型流感病毒、乙型流感病毒感染较常见，传染性强，传播迅速，对人类健康产生严重的威胁。由于流感病毒传播速度快，且病毒容易发生变异，每年都会发生不同规模的流行，甚至每隔10～15年发生一次全球大流行。世界卫生组织(WHO)推测全球每年约有多达65万人死于流感相关的呼吸***疾病。流感的流行不仅对人群健康造成严重威胁，也产生巨大的社会和经济损失。流感临床主要表现为发热、头痛、肌痛和全身不适，可伴咳嗽、咳痰等呼吸***症状，也可伴呕吐、腹泻等消化***症状。儿童、孕产妇、老年人及患有各种慢性病或体质虚弱者患流感后易出现严重并发症或加重原有的慢性病，甚至引起相应器官功能衰竭而危及生命。因此，了解流感的特征有利于尽早识别、及时治疗。
流感病毒的变异以甲型最为重要，常与世界性大流行有密切联系。一般来讲，流感病毒的抗原性变异就是指H和N抗原结构的改变，在亚型内部经常发生小变异(量变)，称为抗原漂移。抗原变异仅发生于甲型病毒。它可能是由于同一细胞感染了人类和动物的2种病毒，病毒之间发生基因重配而产生的。由此产生的病毒血凝素和神经氨酸酶发生全新结合，而使得人群没有免疫力。抗原转变是造成流感全球大流行的原因。甲型流感病毒大约每隔十几年发生1次大变异，自1933年以来甲型病毒已经历了4次抗原转变：1933～1946年为H0N1(原甲型，A0)，1946～1957年为H1N1(亚甲型，A1)，1957～1968年为H2N2(亚洲甲型，A2)，1968年以后为H3N2(香港型，A3)。一般新旧亚型之间有明显的交替现象，在新的亚型出现并流行到一个地区后，旧的亚型就不再能分离到。乙型流感染毒间同样有大变异与小变异，但未划分成亚型转变。丙型流感病毒尚未发现抗原变异。
乙型流感病毒虽然未造成过流感大流行，但同甲型流感病毒一样每年在全球季节性流行，导致了各地的局部流行，并能引起重症和死亡病例，在某些特定情况下所导致的疾病负担甚至超过甲型流感病毒。
急、慢性呼吸道感染是最常见的人类疾病，据统计，平均每人每年发生呼吸道感染的几率大于30％，在儿童中的发病率和病死率更高。除细菌外，病毒是引起呼吸道感染的重要的病原微生物之一。鼻病毒肺炎(HRV)是人患普通感冒的主要病原，人鼻病毒入侵人体的主要途径是上呼吸道，进入上呼吸道之后，病毒颗粒再与上皮细胞的ICAM-1(CD54受体)结合。由于病毒的复制和传播，受感染的细胞释放出趋化因子和细胞因子，这些信号可以反过来激活炎症介质。在病毒进入呼吸道并与细胞表面受体结合之后的15分钟之后，感染就会迅速发生。仅仅只有50％的患者可能只经历不到两天感冒症状，5％的病例会经历一段小于20小时的潜伏期，但是还有另外5％的病例可能会有一段大于四天半的潜伏期。鼻病毒在温度为33-35℃时感染加强，这也是它主要存在于鼻腔的重要原因。
人鼻病毒(HRV)感染后常表现为感冒症状，大约有10％～20％的成年人感冒是由HRV感染引起，而婴幼儿感冒有15％～30％是由HRV致病。HRV是感染具有自限性，但是有时会引起诸如哮喘、充血性心衰、支气管扩张，包囊纤维化等严重并发症，并且HRV多与其它呼吸道病毒合并感染，例如呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒、冠状病毒以及肠道病毒等。值得一提的是对于儿童和患有呼吸道基础疾病的易感群体，HRV感染后还可能会出现较为严重的后遗症，严重影响患者的生活质量，给家庭和社会带来沉重的经济负担，因此对HRV的研案越来越受到各界的重视。
人类副流感病毒(HPIV)常常引起儿童下呼吸道感染的一种病毒，其致病性仅次于呼吸道合胞病毒(RSV)。与RSV一样，人类副流感病毒可以造成反复发作的上呼吸道感染(如感冒和喉咙痛)。它也能造成严重的反复感染的下呼吸道疾病(如肺炎，支气管炎和细支气管炎)，特别是在老年人中和有免疫缺陷人群中。人类副流感病毒的四种亚型各有不同的临床和流行病学特征。I型和II型的最典型的临床特征是造成儿童喉气管支气管炎，I型是这种儿童喉气管支气管炎的主要原因，而II型次之。I型和II型均能造成其它的上呼吸道和下呼吸道疾病。III型经常导致肺炎和细支气管炎。IV型很难检出，可能是因为它很少导致严重的疾病。人类副流感病毒的潜伏期一般在1～7天左右。流行病学特征与感染者近距离密切接触或接触了污染物而传播的。但具有传染性的物质接触了人的眼睛、口腔或鼻子里的粘膜后就会发生感染，或通过吸入由于喷嚏和咳嗽产生的呼吸道分泌物的飞沫而感染。人类副流感病毒可以在这种悬浮状态下存活一个小时以上。人类副流感病毒无处不在，绝大部分人在儿童时代已受感染。血清学监测表示，5岁及以上儿童有90％～100％有抗人类副流感病毒III型的抗体，有大约75％有抗人类副流感病毒I型和II型的抗体。
呼吸道合胞病毒(RSV)是一种RNA病毒，属副粘液病毒科。该病经空气飞沫和密切接触传播，多见于新生儿和6个月以内的婴儿，潜伏期3～7日；婴幼儿症状较重，可有高热、鼻炎、咽炎及喉炎，以后表现为细支气管炎及肺炎；少数病儿可并发中耳炎、胸膜炎及心肌炎等。成人和年长儿童感染后，主要表现为上呼吸道感染。近十年来合胞病毒肺炎及毛细支气管炎占我国婴幼儿病毒性肺炎第一位，其症状与副流感病毒肺炎、轻症流感病毒肺炎及轻症腺病毒肺炎临床上几乎无法区别，治疗以支持和对症疗法为主，有继发细菌感染时，可用抗菌药治疗。预防同其他病毒性呼吸道感染。
腺病毒(HAdV)是一种没有包膜的直径为70～90nm的颗粒，由252个壳粒呈20面体排列构成。每个壳粒的直径为7～9nm。衣壳里是线状双链DNA分子，约含4.7kb，两端各有长约100bp的反向重复序列。由于每条DNA链的5'端同相对分子质量为55X10Da的蛋白质分子共价结合，可以出现双链DNA的环状结构。腺病毒感染主要在冬春季流行，容易在幼儿园、学校和军营新兵中暴发流行。一般来说，腺病毒主要通过呼吸道飞沫、眼分泌物，经呼吸道或接触传播；肠道感染主要通过消化道传播。其预防措施和其他呼吸道、消化道传染病预防相似，主要是勤洗手，勤消毒，避免接触患者及其呼吸道飞沫。平常多饮水，多吃蔬菜和水果，注意锻炼身体；室内多通风，保持室内环境清洁；冬春流行季节尽量少去人员密集的公共场所，外出时戴口罩，避免接触病人，以防感染。一旦发生急性发热、咽喉疼痛和结膜炎的症状，要及早到医院看病，早隔离、早治疗。出现5人以上集体发病的情况要及时向所在地区防疫部门报告，及时采取有效的防控措施，避免疾病蔓延。在腺病毒流行季节，托幼机构上呼吸道感染患儿应回家隔离休息，以免造成传播流行。患病后尽量在附近医院就诊，避免到病人较集中的大医院观察室输液，以防造成交叉感染。出现严重咳嗽和呼吸困难症状多属严重病例，应及时到医院住院治疗，以免延误病情。
肺炎是一种常见的呼吸内科疾病。肺炎由于病原体不同分为很多类型。支原体肺炎和衣原体肺炎就是两种常见的肺炎。支原体肺炎和衣原体肺炎都会出类似的临床症状，但是它们是有区别的。支原体肺炎和衣原体肺炎就是两种常见的肺炎。虽然支原体肺炎和衣原体肺炎会出现一些相同的症状，但是它们是有区别的。支原体肺炎和衣原体肺炎在致病原因，临床症状，治疗方法等方面都有所不同。患了肺炎一定要进行及时的治疗。支原体肺炎和衣原体肺炎的致病原因是不一样的。支原体肺炎的主要病原为肺炎支原体。而衣原体肺炎由衣原体感染引起的。支原体肺炎和衣原体肺炎都是通过呼吸道分泌物进行传播的。支原体肺炎和衣原体肺炎的临床症状也是不一样的。支原体肺炎常见的症状包括发热、厌食、咳嗽、畏寒、头痛、咽痛、胸骨下疼痛等。多数患者咳嗽重，初期干咳，随后有痰。婴儿患者会出现喘鸣及呼吸困难。重症患者可能会出现胸腔积液、肺不张，纵隔积气、气胸、坏死性肺炎等并发症。而衣原体肺炎早期表现为上呼吸道感染症状。患者会出现发热、寒战、肌痛、干咳，非胸膜炎性胸痛，头痛、不适和乏力等症状。相对支原体肺炎来说，衣原体肺炎的症状较轻。
流感病毒A型和B型、HRV、HPIV、RSV、HAdV、MP、CP临床治疗方案有所差异，因此需要进行鉴别诊断出究竟是哪种致病因素，然后针对性治疗；因此流感病毒A型和B型、HRV、HPIV、RSV、HAdV、MP、CP的IgM抗体联合定性检测项目能够及时、便捷、精准、全面检测出感染了哪种病毒，给临床诊疗带来极大收益，也给各级医疗机构、疾控中心等场景提供一个有力的、全面的、精准的筛查和诊断工具。其次其检测样本为全血或者血清、血浆，取材方便安全；流感病毒A型和B型、HRV、HPIV、RSV、HAdV、MP、CP的IgM抗体为现症感染指标，不存在假阳性问题，因此更加精准，对临床诊断价值非常大。
病毒的确认一般采用鸡胚或MDCK细胞分离培养和血凝抑制法，操作繁琐且费时费力，难以满足快速诊断需要。随着快速诊断技术的发展和应用，目前市场上流感及2019鼻病毒产品类型基本可以分为3大类：核酸诊断类(PCR法)、酶联免疫吸附法(ELISA法)和胶体金免疫层析法。PCR法准确度最高，是确诊的首选方法，但检测成本较高，检测时间较长；ELISA法是医院检验科和疾控***实验室的经典方法；胶体金法速度最快、技术成熟稳、简便易行，适合于各级医疗机构、疾控中心等场合的普遍筛查和诊断。
胶体金免疫层析技术(gold immunochromatography assay，GICA)是一种将胶体金标记技术和蛋白质层析技术结合的以微孔滤膜为载体的固相膜免疫分析技术。胶体金免疫层析技术是一种常用的免疫层析检测方法，由于其操作简单、省时、制造成本较低、结果易判读等特点，非常适合于现场检测，广泛用于生物、医药、食品等领域。由于胶体金免疫层析技术是一步完成检测，因此检测过程的干扰因素较多，其灵敏度低是限制胶体金免疫层析应用范围的主要因素，传统的胶体金免疫层析技术的检测限高于ELISA等方法。
在胶体金免疫层析检测中，蛋白质固着于硝酸纤维素膜(NC膜)作为待测样本的捕获试剂。由于检测结果完全取决于捕获试剂在膜上达到良好的吸附效果，因此蛋白质在膜上均一、良好的吸附对胶体金检测结果非常重要。如果NC膜上结合的蛋白量不足或者蛋白结合力不够强，就会出现相当多的问题，在检测结果的检测线上非常明显。如果膜上结合的蛋白量太低，那么在结果中检测线显色较弱而且检测灵敏度降低。如果蛋白不能牢固的吸附于NC膜，那么在蛋白吸附于NC膜以前发生扩散，从而导致检测线较宽、显色较弱而不是鲜艳而清晰，使检测结果难以解释。在极端条件下，如果蛋白与NC膜的物理吸附作用太弱，流过的蛋白检测物和表面活性剂溶液可能将固着的蛋白从NC膜上洗掉，从而显示较宽或者根本不清晰的检测线，难以解释检测结果。
发明内容
本发明提供一种多项病原体联合检测装置及其制备方法，以解决现有技术存在的NC膜吸附蛋白量不足、结合力不强的问题，本发明制备的流感病毒A型和B型、HRV、HPIV、RSV、HAdV的IgM抗体六合一，或流感病毒A型和B型、HRV、HPIV、RSV、HAdV、MP、CP的IgM抗体八合一定性联合检测装置，提高了对呼吸道疾病患者进行合理综合、全面判定，能够快速、准确进行呼吸道感染疾病的病情风险判断。
本发明采取的技术方案是：
一种多项病原体联合检测装置，样品垫、免疫胶体金抗体玻璃纤维膜、免疫硝酸纤维素膜、吸收垫分别粘贴在塑料板上，所述硝酸纤维素膜的两端分别与吸收垫、免疫胶体金抗体玻璃纤维膜搭接，所述免疫胶体金抗体玻璃纤维膜的另一端与样品垫搭接；所述免疫硝酸纤维素膜上设置第一检测线T1、第二检测线T2、第三检测线T3、第四检测线T4、第五检测线T5、第六检测线T6和质控线C，所述第一检测线T1上固相有流感病毒A抗原，第二检测线T2上固相有流感病毒B抗原，第三检测线T3上固相有鼻病毒抗原，第四检测线T4上固相有副流感病毒抗原，第五检测线T5上固相有呼吸道合胞病毒抗原，第六检测线T6上固相有腺病毒抗原，质控线C上喷点羊抗鼠IgG多克隆抗体，所述免疫硝酸纤维素膜上设置的第一检测线T1、第二检测线T2、第三检测线T3、第四检测线T4、第五检测线T5和第六检测线T6分别设置在六条线上，并在每条线上分别设置质控线C。
本发明所述所述免疫硝酸纤维素膜上还设置第七检测线T7和第八检测线T8，所述的第七检测线T7上固相有肺炎支原体抗原，第八检测线T8上固相有肺炎衣原体抗原，并在两条线的每条线上分别设置质控线C。
一种多项病原体联合检测装置的制备方法，包括下列步骤：
(a)氧化锌-壳聚糖-胶体金制备
1)N-羧乙基壳聚糖的合成：将4.0g壳聚糖加入到含有2.80mL丙烯酸的200mL水中，在50℃下，持续搅拌2天，反应完成后，在反应混合液中加入1mol/L的NaOH溶液，调节溶液的pH值至10-12，使其所有的羧酸全部转化为钠盐，将混合溶液倒入到丙酮中进行重沉淀，然后在水溶液中透析，除去未反应的丙烯酸，透析两天后，冷冻干燥得到N-羧乙基壳聚糖；
2)纳米氧化锌制备：称取1.3225gZnAc2·2H2O溶解在20mL的蒸馏水中,缓慢滴加9mL 5mol/L的NaOH溶液，溶液先出现白色浑浊，继续滴加则浑浊完全消失，再加入11mL的蒸馏水，搅拌均匀，然后倒入低压反应釜中，将反应釜放入烘箱中，在170℃下加热12个小时，自然冷却至室温后，得到沉淀后，分别用水和乙醇清洗、离心两次，将沉淀放入烘箱内于60℃烘干备用；
3)N-羧乙基壳聚糖与纳米氧化锌混合溶液的制备：将5.00gN-羧乙基壳聚糖加入到300mL去离子水中，在室温下剧烈搅拌0.5h，充分溶解得到水溶性壳聚糖溶液，将上述水溶性壳聚糖溶液和纳米氧化锌按一定的比例混合，将混合液剧烈搅拌3h，使其混合均匀；
4)胶体金的制备：
将装有90-100ml纯化水的圆底烧瓶放入电热套加热，加热10-12分钟后，待烧瓶中的水沸腾时开启转数控制开关，调至400rpm，并用注射器缓慢将1ml 1％氯化金溶液沿漩涡边缘加入，待溶液开始沸腾后，快速加入1％柠檬酸三钠溶液1-2ml，待溶液冷却到室温后，加水称重补足重量；
5)氧化锌-壳聚糖-胶体金制备：以苯二甲醛作为交联剂，在常温下进行交联；交联结束，将所得的氧化锌-壳聚糖-胶体金洗涤，真空干燥24h；
(b)氧化锌-壳聚糖-胶体金交联记抗人IgM抗体，取1ml氧化锌-壳聚糖-胶体金悬浮液，超声分散均匀，然后边搅拌边滴加抗体，加入抗体后，大约反应1min后，再到超声波上超声30秒，然后再反应4小时，加BSA进行封闭24小时，封闭好后进行离心，速度为12000r/min，20min，保留离心后的沉淀，待用；
(c)采用胶体金抗体缓冲液分别稀释步骤(b)离心后的沉淀氧化锌-壳聚糖-胶体金抗体，使其分散均匀，分别获得免疫胶体金抗体溶液，分别用免疫胶体金抗体溶液喷涂于玻璃纤维垫，制得免疫胶体金抗体玻璃纤维膜；
(d)将硝酸纤维素膜用聚多巴胺处理液预处理后，喷点流感病毒A抗原、流感病毒B抗原、鼻病毒抗原、副流感病毒抗原、呼吸道合胞病毒抗原、腺病毒抗原作为检测线，或喷点流感病毒A抗原、流感病毒B抗原、鼻病毒抗原、副流感病毒抗原、呼吸道合胞病毒抗原、腺病毒抗原、肺炎支原体抗原、肺炎衣原体抗原作为检测线，喷点羊抗鼠IgG抗体作为质控线，制得免疫硝酸纤维素膜；
(e)将预处理的样品垫、步骤(c)制备的免疫胶体金抗体玻璃纤维膜、步骤(d)制备的免疫硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在塑料板上，切裁制得检测试剂条，最后将检测试剂条装入塑料外壳。
本发明所述步骤(a)氧化锌-壳聚糖-胶体金制备中，1)N-羧乙基壳聚糖的合成，在水溶液中透析时，采用的透析膜截取分子量为8000-12000g/mol。
本发明所述步骤(a)氧化锌-壳聚糖-胶体金制备中，2)纳米氧化锌颗粒制备，缓慢滴加9mL 5mol/L的NaOH溶液，该NaOH溶液为新配制的溶液。
所述步骤(a)氧化锌-壳聚糖-胶体金制备中，3)N-羧乙基壳聚糖与纳米氧化锌混合溶液的制备，所述水溶性壳聚糖溶液和纳米氧化锌的混合比例是，N-羧乙基壳聚糖与氧化锌的质量之比为100/5、100/8或100/10。
本发明所述步骤(c)所述的胶体金抗体缓冲液包括：浓度为20mM Tris-HCL液、蔗糖浓度为5％、海藻糖浓度为1％、proclin浓度为1％，BSA浓度为1％，pH为8.5。
本发明所述步骤(d)中聚多巴胺处理液预处理硝酸纤维素膜：将硝酸纤维素膜放入聚多巴胺处理液中浸泡1h，并慢速振荡摇晃，取出后用蒸馏水清洗3遍，最后在真空干燥箱中干燥。
所述的聚多巴胺处理液，聚多巴胺浓度为1％，经0.22μm滤膜过滤，备用。
本发明所述步骤(e)所述的预处理的样品垫采用的样品垫处理液包括浓度为0.1mol/LTris-HCL液、浓度为1％牛血清白蛋白BSA、浓度为1％表面活性剂。
多巴胺(dopamine,DA)因其结合儿茶酚官能团和赖氨酸的氨基官能团，也被证明具有超强的黏附性能。DA在碱性溶液中可发生氧化自聚合，在材料表面形成具有超强黏性的聚多巴胺(PDA)层，从而实现在各种材料表面的超强黏附。PDA形成过程简单且不需要有机溶剂，仅需将材料浸入含DA的碱性Tris-Hcl缓冲液或其他碱性溶液中，即可在表面形成PDA层，因此，PDA被广泛应用于材料的表面改性。综上，聚多巴胺可以从电荷作用和疏水作用两方面来提高NC膜蛋白的包被效率。
甲壳素是地球上储量仅次于纤维素的可再生资源，壳聚糖是其脱乙酰基衍生物，由2-氨基2-脱氧-β-D-葡萄糖通过β-1，4-糖苷键连接形成的聚合物。由于壳聚糖具有良好的生物相容性、生物可降解性、广谱抗菌性、防腐性、无抗原性，以及可止血和促进伤口愈合等特殊功能，使得壳聚糖成为组织工程支架材料中最有应用前景的生物大分子之一。纳米氧化锌(ZnO)，白色六方晶系结晶或球形粒子，粒径小于100nm，平均粒径50nm，比表面积大于4m2/g。具有极高的化学活性及优异的催化性和光催化活性。本研究探讨了氧化锌-壳聚糖-胶体金纳米颗粒对NC膜包被抗体的影响，先将划膜用的抗体先与氧化锌-壳聚糖-胶体金纳米颗粒结合，封闭，离心纯化，去掉未结合的抗体，然后复溶到一定比例，然后划膜，这样一个氧化锌-壳聚糖-胶体金粒子可以结合多个抗体，从而增加了包被抗体效率，借助其更大的表面积增加抗体的包被效率，提高胶体金免疫层析实验的灵敏度。
为了提高胶体金免疫层析技术的灵敏度、稳定性和精准度，我们通过对硝酸纤维素膜用聚多巴胺处理液进行了预处理，将包被NC的抗体与氧化锌-壳聚糖-胶体金结合，达到了提高试纸各种性能指标的目的。
本发明的有益效果在于：
1、本发明的检测装置结构新颖，将流感病毒A抗原、流感病毒B抗原、鼻病毒抗原、副流感病毒抗原、呼吸道合胞病毒抗原、腺病毒抗原、肺炎支原体抗原、肺炎衣原体抗原包被于硝酸纤维膜膜上，特异性强，既能同时检测标本中流感病毒A型、流感病毒B型、鼻病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒的IgM抗体，或流感病毒A型、流感病毒B型、鼻病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体的IgM抗体，又没有增加生产操作的复杂度。
2、免疫胶体金制备步骤中，通过配合合适的喷金缓冲液和样品垫处理液，可保证免疫胶体金释放完全，同时这样的结合方式，会使标记物与抗体牢牢吸附在一起，从而抗体或抗原不会从标记物表面脱落，提高标记效率及免疫层析方法学的稳定性、灵敏度和精准度；且同样的阈值下，还可降低胶体金的用量，节约成本。
3、本发明对硝酸纤维素膜进行聚多巴胺预处理，对包被硝酸纤维素膜的抗体进行了修饰，增加抗体的包被效率、提高吸附效果、蛋白分布更加均一，从而提高了免疫层析方法学的灵敏度、精准度和稳定性。
4、本发明的检测装置不需要任何特殊仪器设备，检测成本低。
5、本发明的检测装置操作简便，不需要专业人员操作。实用性强。
附图说明
图1是本发明的结构示意图，图中检测线T1、T2、T3、T4、T5和T6分别横向排列在六条线上；
图2是图1的A-A剖视图；
图3是图1的B-B剖视图；
图4是图1的C-C剖视图；
图5是图1的D-D剖视图；
图6是图1的E-E剖视图；
图7是图1的F-F剖视图；
图8是本发明检测线T1、T2、T3、T4、T5、T6、T7和T8分别横向排列在八条线上的结构示意图；
图9是图8的G-G剖视图；
图10是图8的H-H剖视图。
具体实施方式
见图1～7所示，样品垫1、免疫胶体金抗体玻璃纤维膜2、免疫硝酸纤维素膜3、吸收垫4分别粘贴在塑料板5上，所述硝酸纤维素膜3的两端分别与吸收垫4、免疫胶体金抗体玻璃纤维膜2搭接，所述免疫胶体金抗体玻璃纤维膜2的另一端与样品垫1搭接；所述免疫硝酸纤维素膜3上设置第一检测线T1、第二检测线T2、第三检测线T3、第四检测线T4、第五检测线T5、第六检测线T6和质控线C，所述第一检测线T1上固相有流感病毒A抗原，第二检测线T2上固相有流感病毒B抗原，第三检测线T3上固相有鼻病毒抗原，第四检测线T4上固相有副流感病毒抗原，第五检测线T5上固相有呼吸道合胞病毒抗原，第六检测线T6上固相有腺病毒抗原，质控线C上喷点羊抗鼠IgG多克隆抗体，所述免疫硝酸纤维素膜上设置的第一检测线T1、第二检测线T2、第三检测线T3、第四检测线T4、第五检测线T5和第六检测线T6分别设置在六条线上，并在每条线上分别设置质控线C。
如图8～10所示，所述所述免疫硝酸纤维素膜3上还设置第七检测线T7和第八检测线T8，所述的第七检测线T7上固相有肺炎支原体抗原，第八检测线T8上固相有肺炎衣原体抗原，并在两条线的每条线上分别设置质控线C。
实施例1
包括下列步骤：
(a)氧化锌-壳聚糖-胶体金制备
1)N-羧乙基壳聚糖的合成：将4.0g壳聚糖加入到含有2.80mL丙烯酸的200mL水中，在50℃下，持续搅拌2天，反应完成后，在反应混合液中加入1mol/L的NaOH溶液，调节溶液的pH值至10，使其所有的羧酸全部转化为钠盐，将混合溶液倒入到丙酮中进行重沉淀，然后在水溶液中透析，透析膜截取分子量为8000g/mol，除去未反应的丙烯酸，透析两天后，冷冻干燥得到N-羧乙基壳聚糖3.6g，产率90％；
2)纳米氧化锌制备：称取1.3225gZnAc2·2H2O溶解在20mL的蒸馏水中,缓慢滴加9mL新配制的5mol/L的NaOH溶液，溶液先出现白色浑浊，继续滴加则浑浊完全消失，再加入11mL的蒸馏水，搅拌均匀，然后倒入低压反应釜中，将反应釜放入烘箱中，在170℃下加热12个小时，自然冷却至室温后，得到沉淀后，分别用水和乙醇清洗、离心两次，将沉淀放入烘箱内于60℃烘干备用；
3)N-羧乙基壳聚糖与纳米氧化锌混合溶液的制备：将5.00gN-羧乙基壳聚糖加入到300mL去离子水中，在室温下剧烈搅拌0.5h，充分溶解得到水溶性壳聚糖溶液，将上述水溶性壳聚糖溶液和纳米氧化锌按一定的比例混合，使得N-羧乙基壳聚糖与氧化锌的质量之比为100/5，将混合液剧烈搅拌3h，使其混合均匀；
4)胶体金的制备：
将装有90ml纯化水的圆底烧瓶放入电热套加热，加热10分钟后，待烧瓶中的水沸腾时开启转数控制开关，调至400rpm，并用注射器缓慢将1ml 1％氯化金溶液沿漩涡边缘加入，待溶液开始沸腾后，快速加入1％柠檬酸三钠溶液1ml，待溶液冷却到室温后，加水称重补足重量；
5)氧化锌-壳聚糖-胶体金制备：以苯二甲醛作为交联剂，在常温下进行交联；交联结束，将所得的氧化锌-壳聚糖-胶体金洗涤，真空干燥24h；
(b)氧化锌-壳聚糖-胶体金交联记抗人IgM抗体，取1ml氧化锌-壳聚糖-胶体金悬浮液，超声分散均匀，然后边搅拌边滴加抗体，加入抗体后，大约反应1min后，再到超声波上超声30秒，然后再反应4小时，加BSA进行封闭24小时，封闭好后进行离心，速度为12000r/min，20min，保留离心后的沉淀，待用；
(c)采用胶体金抗体缓冲液分别稀释步骤(b)离心后的沉淀氧化锌-壳聚糖-胶体金抗体，使其分散均匀，分别获得免疫胶体金抗体溶液，分别用免疫胶体金抗体溶液喷涂于玻璃纤维垫，制得免疫胶体金抗体玻璃纤维膜2；
所述的胶体金抗体缓冲液包括：浓度为20mM Tris-HCL液、蔗糖浓度为5％、海藻糖浓度为1％、proclin浓度为1％，BSA浓度为1％，pH为8.5；
(d)将硝酸纤维素膜用聚多巴胺处理液预处理后，喷点流感病毒A抗原、流感病毒B抗原、鼻病毒抗原、副流感病毒抗原、呼吸道合胞病毒抗原、腺病毒抗原作为检测线，或喷点流感病毒A抗原、流感病毒B抗原、鼻病毒抗原、副流感病毒抗原、呼吸道合胞病毒抗原、腺病毒抗原、肺炎支原体抗原、肺炎衣原体抗原作为检测线，喷点羊抗鼠IgG抗体作为质控线，制得免疫硝酸纤维素膜3；其中所述的聚多巴胺处理液，聚多巴胺浓度为1％，经0.22μm滤膜过滤，备用，将硝酸纤维素膜放入聚多巴胺处理液中浸泡1h，并慢速振荡摇晃，取出后用蒸馏水清洗3遍，最后在真空干燥箱中干燥；
(e)将预处理的样品垫1、步骤(c)制备的免疫胶体金抗体玻璃纤维膜2、步骤(d)制备的免疫硝酸纤维素膜3、吸水纸4依次粘贴在塑料板5上，切裁制得检测试剂条，最后将检测试剂条装入塑料外壳；所述的预处理的样品垫采用的样品垫处理液包括浓度为0.1mol/LTris-HCL液、浓度为1％牛血清白蛋白BSA、浓度为1％表面活性剂。
实施例2
包括下列步骤：
(a)氧化锌-壳聚糖-胶体金制备
1)N-羧乙基壳聚糖的合成：将4.0g壳聚糖加入到含有2.80mL丙烯酸的200mL水中，在50℃下，持续搅拌2天，反应完成后，在反应混合液中加入1mol/L的NaOH溶液，调节溶液的pH值至11，使其所有的羧酸全部转化为钠盐，将混合溶液倒入到丙酮中进行重沉淀，然后在水溶液中透析，透析膜截取分子量为10000g/mol，除去未反应的丙烯酸，透析两天后，冷冻干燥得到N-羧乙基壳聚糖；
2)纳米氧化锌制备：称取1.3225gZnAc2·2H2O溶解在20mL的蒸馏水中,缓慢滴加9mL新配制的5mol/L的NaOH溶液，溶液先出现白色浑浊，继续滴加则浑浊完全消失，再加入11mL的蒸馏水，搅拌均匀，然后倒入低压反应釜中，将反应釜放入烘箱中，在170℃下加热12个小时，自然冷却至室温后，得到沉淀后，分别用水和乙醇清洗、离心两次，将沉淀放入烘箱内于60℃烘干备用；
3)N-羧乙基壳聚糖与纳米氧化锌混合溶液的制备：将5.00gN-羧乙基壳聚糖加入到300mL去离子水中，在室温下剧烈搅拌0.5h，充分溶解得到水溶性壳聚糖溶液，将上述水溶性壳聚糖溶液和纳米氧化锌按一定的比例混合，使得N-羧乙基壳聚糖与氧化锌的质量之比为100/8，将混合液剧烈搅拌3h，使其混合均匀；
4)胶体金的制备：
将装有95ml纯化水的圆底烧瓶放入电热套加热，加热11分钟后，待烧瓶中的水沸腾时开启转数控制开关，调至400rpm，并用注射器缓慢将1ml 1％氯化金溶液沿漩涡边缘加入，待溶液开始沸腾后，快速加入1％柠檬酸三钠溶液1.5ml，待溶液冷却到室温后，加水称重补足重量；
5)氧化锌-壳聚糖-胶体金制备：以苯二甲醛作为交联剂，在常温下进行交联；交联结束，将所得的氧化锌-壳聚糖-胶体金洗涤，真空干燥24h；
(b)氧化锌-壳聚糖-胶体金交联记抗人IgM抗体，取1ml氧化锌-壳聚糖-胶体金悬浮液，超声分散均匀，然后边搅拌边滴加抗体，加入抗体后，大约反应1min后，再到超声波上超声30秒，然后再反应4小时，加BSA进行封闭24小时，封闭好后进行离心，速度为12000r/min，20min，保留离心后的沉淀，待用；
(c)采用胶体金抗体缓冲液分别稀释步骤(b)离心后的沉淀氧化锌-壳聚糖-胶体金抗体，使其分散均匀，分别获得免疫胶体金抗体溶液，分别用免疫胶体金抗体溶液喷涂于玻璃纤维垫，制得免疫胶体金抗体玻璃纤维膜2；
所述的胶体金抗体缓冲液包括：浓度为20mM Tris-HCL液、蔗糖浓度为5％、海藻糖浓度为1％、proclin浓度为1％，BSA浓度为1％，pH为8.5；
(d)将硝酸纤维素膜用聚多巴胺处理液预处理后，喷点流感病毒A抗原、流感病毒B抗原、鼻病毒抗原、副流感病毒抗原、呼吸道合胞病毒抗原、腺病毒抗原作为检测线，或喷点流感病毒A抗原、流感病毒B抗原、鼻病毒抗原、副流感病毒抗原、呼吸道合胞病毒抗原、腺病毒抗原、肺炎支原体抗原、肺炎衣原体抗原作为检测线，喷点羊抗鼠IgG抗体作为质控线，制得免疫硝酸纤维素膜3；其中所述的聚多巴胺处理液，聚多巴胺浓度为1％，经0.22μm滤膜过滤，备用，将硝酸纤维素膜放入聚多巴胺处理液中浸泡1h，并慢速振荡摇晃，取出后用蒸馏水清洗3遍，最后在真空干燥箱中干燥；
(e)将预处理的样品垫1、步骤(c)制备的免疫胶体金抗体玻璃纤维膜2、步骤(d)制备的免疫硝酸纤维素膜3、吸水纸4依次粘贴在塑料板5上，切裁制得检测试剂条，最后将检测试剂条装入塑料外壳；所述的预处理的样品垫采用的样品垫处理液包括浓度为0.1mol/LTris-HCL液、浓度为1％牛血清白蛋白BSA、浓度为1％表面活性剂。
实施例3
包括下列步骤：
(a)氧化锌-壳聚糖-胶体金制备
1)N-羧乙基壳聚糖的合成：将4.0g壳聚糖加入到含有2.80mL丙烯酸的200mL水中，在50℃下，持续搅拌2天，反应完成后，在反应混合液中加入1mol/L的NaOH溶液，调节溶液的pH值至12，使其所有的羧酸全部转化为钠盐，将混合溶液倒入到丙酮中进行重沉淀，然后在水溶液中透析，透析膜截取分子量为12000g/mol，除去未反应的丙烯酸，透析两天后，冷冻干燥得到N-羧乙基壳聚糖；
2)纳米氧化锌制备：称取1.3225gZnAc2·2H2O溶解在20mL的蒸馏水中,缓慢滴加9mL新配制的5mol/L的NaOH溶液，溶液先出现白色浑浊，继续滴加则浑浊完全消失，再加入11mL的蒸馏水，搅拌均匀，然后倒入低压反应釜中，将反应釜放入烘箱中，在170℃下加热12个小时，自然冷却至室温后，得到沉淀后，分别用水和乙醇清洗、离心两次，将沉淀放入烘箱内于60℃烘干备用；
3)N-羧乙基壳聚糖与纳米氧化锌混合溶液的制备：将5.00gN-羧乙基壳聚糖加入到300mL去离子水中，在室温下剧烈搅拌0.5h，充分溶解得到水溶性壳聚糖溶液，将上述水溶性壳聚糖溶液和纳米氧化锌按一定的比例混合，使得N-羧乙基壳聚糖与氧化锌的质量之比为100/10，将混合液剧烈搅拌3h，使其混合均匀；
4)胶体金的制备：
将装有100ml纯化水的圆底烧瓶放入电热套加热，加热12分钟后，待烧瓶中的水沸腾时开启转数控制开关，调至400rpm，并用注射器缓慢将1ml 1％氯化金溶液沿漩涡边缘加入，待溶液开始沸腾后，快速加入1％柠檬酸三钠溶液2ml，待溶液冷却到室温后，加水称重补足重量；
5)氧化锌-壳聚糖-胶体金制备：以苯二甲醛作为交联剂，在常温下进行交联；交联结束，将所得的氧化锌-壳聚糖-胶体金洗涤，真空干燥24h；
(b)氧化锌-壳聚糖-胶体金交联记抗人IgM抗体，取1ml氧化锌-壳聚糖-胶体金悬浮液，超声分散均匀，然后边搅拌边滴加抗体，加入抗体后，大约反应1min后，再到超声波上超声30秒，然后再反应4小时，加BSA进行封闭24小时，封闭好后进行离心，速度为12000r/min，20min，保留离心后的沉淀，待用；
(c)采用胶体金抗体缓冲液分别稀释步骤(b)离心后的沉淀氧化锌-壳聚糖-胶体金抗体，使其分散均匀，分别获得免疫胶体金抗体溶液，分别用免疫胶体金抗体溶液喷涂于玻璃纤维垫，制得免疫胶体金抗体玻璃纤维膜2；
所述的胶体金抗体缓冲液包括：浓度为20mM Tris-HCL液、蔗糖浓度为5％、海藻糖浓度为1％、proclin浓度为1％，BSA浓度为1％，pH为8.5；
(d)将硝酸纤维素膜用聚多巴胺处理液预处理后，喷点流感病毒A抗原、流感病毒B抗原、鼻病毒抗原、副流感病毒抗原、呼吸道合胞病毒抗原、腺病毒抗原作为检测线，或喷点流感病毒A抗原、流感病毒B抗原、鼻病毒抗原、副流感病毒抗原、呼吸道合胞病毒抗原、腺病毒抗原、肺炎支原体抗原、肺炎衣原体抗原作为检测线，喷点羊抗鼠IgG抗体作为质控线，制得免疫硝酸纤维素膜3；其中所述的聚多巴胺处理液，聚多巴胺浓度为1％，经0.22μm滤膜过滤，备用，将硝酸纤维素膜放入聚多巴胺处理液中浸泡1h，并慢速振荡摇晃，取出后用蒸馏水清洗3遍，最后在真空干燥箱中干燥；
(e)将预处理的样品垫1、步骤(c)制备的免疫胶体金抗体玻璃纤维膜2、步骤(d)制备的免疫硝酸纤维素膜3、吸水纸4依次粘贴在塑料板5上，切裁制得检测试剂条，最后将检测试剂条装入塑料外壳；所述的预处理的样品垫采用的样品垫处理液包括浓度为0.1mol/LTris-HCL液、浓度为1％牛血清白蛋白BSA、浓度为1％表面活性剂。
下边通过实验例来进一步说明本发明。
实验例1聚多巴胺处理液对硝酸纤维素膜抗体吸附能力的比较
1材料与方法
1材料：硝酸纤维素膜，孔径4.5um，购自美国通用电气公司，聚多巴胺购自Sigma公司
2硝酸纤维素膜处理方法
2.1配制聚多巴胺处理液
配制聚多巴胺处理液：聚多巴胺由蒸馏水配置成浓度为1％，经0.22μm滤膜过滤，备用。
2.2硝酸纤维素膜处理方法
将硝酸纤维素膜放入聚多巴胺处理液中浸泡1h，并慢速振荡摇晃，取出后用蒸馏水清洗3遍，最后在真空干燥箱中干燥。
3实验方法
分别将未处理和已处理过的硝酸纤维素膜按照上述实施例工艺流程制备流感病毒A型、流感病毒B型、鼻病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体的IgM联合检测试纸，测试流程参照试纸说明书，比较硝酸纤维素膜未处理和处理后吸附力和稳定性指标差异。
4结果:
4.1蛋白吸附力比较
取聚多巴胺处理组和未处理组试纸，分别加入待检样品，通过观察显色情况判断处理后膜对蛋白吸附能力，结果见表1。结果显示，处理后的硝酸纤维素膜在溶液浸润性方面要明显优于未处理膜，处理后膜阳性条带颜色略深，尤其在浓度较低时，提高了反应的灵敏度，表明蛋白吸附能力明显增强，提高了反应灵敏度。聚多巴胺组吸附效果明显优于未处理组。
表1硝酸纤维素膜吸附能力比较
Figure GDA0003752438980000151
4.2硝酸纤维素膜稳定性比较
取聚多巴胺处理组和未处理组试纸，通过37℃加速实验观察显色情况来判断处理后硝酸纤维素膜上吸附蛋白的稳定性，结果见表2。表2结果与表1结果比较发现，处理后硝酸纤维素膜颜色变化与10天前基本一致，稳定性好。
表2硝酸纤维素膜加速稳定性比较(37℃放置10天)
Figure GDA0003752438980000152
实验例2氧化锌-壳聚糖-胶体金纳米颗粒修饰抗人IgM抗体
1材料与方法
1.1材料：硝酸纤维素膜，孔径4.5um，购自美国通用电气公司
1.2氧化锌-壳聚糖-胶体金纳米颗粒修饰抗人IgM抗体
以氧化锌-壳聚糖-胶体金作为载体，取200μL氧化锌-壳聚糖-胶体金纳米颗粒(1mg/mL)溶液和25μ抗人IgM抗体(40μmol/L)溶液加入到超纯水中，使最终反应体系1mL。充分混匀后，设置摇床温度为25℃，转速为200r/m条件下，将上述混合溶液在摇床内避光震荡培养2h。反应后的混合溶液用超速离心机在13 000r/m转速条件下，使用超纯水彻底离心洗涤4次，去除上清液中过量的未反应的抗体。所得沉淀物即为氧化锌-壳聚糖-胶体金-抗人IgM抗体探针复合物，用超纯水将其定容至1mL并在4℃条件储存。
2实验方法
分别将氧化锌-壳聚糖-胶体金纳米颗粒修饰的抗人IgM抗体与未修饰的抗人IgM抗体按照上述实施例工艺流程制备检测试纸，测试流程参照试纸说明书，比较氧化锌-壳聚糖-胶体金纳米颗粒处理和未处理对蛋白吸附力和稳定性指标差异。
3结果
3.1蛋白吸附力比较
取氧化锌-壳聚糖-胶体金纳米颗粒处理组和未处理组试纸，分别加入待检样品，通过观察显色情况判断处理后膜对蛋白吸附能力，结果见表3。结果显示，氧化锌-壳聚糖-胶体金纳米颗粒修饰组膜尤其在浓度较低时，提高了反应的灵敏度，表明蛋白吸附能力明显增强，提高了反应灵敏度。
表3氧化锌-壳聚糖-胶体金纳米颗粒修饰对蛋白吸附能力比较
Figure GDA0003752438980000161
3.2稳定性比较
取氧化锌-壳聚糖-胶体金纳米颗粒处理组和未处理组试纸，通过37℃加速实验观察显色情况来判断氧化锌-壳聚糖-胶体金修饰后硝酸纤维素膜上吸附蛋白的稳定性，结果见表4。表4结果与表3结果比较发现，处理后硝酸纤维素膜颜色变化与10天前基本一致，稳定性好。
表4加速稳定性比较(37℃放置10天)
Figure GDA0003752438980000171
实验例3多项病原体联合检测装置在实际应用于临床标本中的检测能力研究
1.研究对象一般资料
此次临床试验吉林省中医药科学院第一临床医院、吉林省人民医院共入选1002例病人的血清，对血样进行检测，并且其中任一一检测线阳性率至少达到30％。本临床试验共检测血样，本中心共收集334例病人的血清浆样本。所有入选样本均完成了试验，这些数量的样本有足够的统计学意义来评价本检测试纸血清检测结果与对照试纸检测的一致性。
2.流感病毒A型IgM测定结果的一致性分析
在血清的流感病毒A型IgM定性检测过程中，试验试剂与对照试剂的均为阳性的有186例；试验试剂阳性，对照试剂阴性的有0例；试验试剂阴性，对照试剂阳性的0例；试验试剂与对照试剂均为阴性的有148例；P＝1，P＞0.05，组间差异无统计学意义。Kappa检验系数为1，大于0.75，结果表示试验试剂与对照试剂的一致性较好。
结果见表5，6；
表5两种试剂流感病毒A型IgM抗体定性测定结果
Figure GDA0003752438980000181
表6考核试剂相对于参比试剂的符合率
Figure GDA0003752438980000182
3.流感病毒B型IgM测定结果的一致性分析
在血清的流感病毒B型IgM定性检测过程中，试验试剂与对照试剂的均为阳性的有38例；试验试剂阳性，对照试剂阴性的有0例；试验试剂阴性，对照试剂阳性的0例；试验试剂与对照试剂均为阴性的有29例；P＝1，P＞0.05，组间差异无统计学意义。Kappa检验系数为1，大于0.75，结果表示试验试剂与对照试剂的一致性较好。试验试剂阳性一致例数为38例，符合率为100％，阴性一致例数为29例，符合率为100％，试验试剂的整体一致例数为67例，整体符合率为100％。结果表示试验试剂与对照试剂的检测结果的组间差异无统计学意义，一致性较好。结果见表7、8；
表7两种试剂流感病毒B型IgM抗体定性测定结果
Figure GDA0003752438980000191
表8考核试剂相对于参比试剂的符合率
Figure GDA0003752438980000192
4.人鼻病毒(HRV)IgM测定结果的一致性分析
在血清的人鼻病毒(HRV)IgM定性检测过程中，试验试剂与对照试剂的均为阳性的有173例；试验试剂阳性，对照试剂阴性的有4例；试验试剂阴性，对照试剂阳性的2例；试验试剂与对照试剂均为阴性的有155例；采用McNemar检验，P＝0.6875，P＞0.05，组间差异无统计学意义。Kappa检验系数为1，大于0.75，结果表示试验试剂与对照试剂的一致性较好。试验试剂阳性一致例数为173例，符合率为98.86％，阴性一致例数为155例，符合率为97.48％，试验试剂的整体一致例数为328例，整体符合率为98.20％。结果表示试验试剂与对照试剂的检测结果的组间差异无统计学意义，一致性较好。结果见表9、10；
表9两种试剂鼻病毒(HRV)IgM抗体定性测定结果
Figure GDA0003752438980000201
表10考核试剂相对于参比试剂的符合率
Figure GDA0003752438980000202
5.人类副流感病毒(HPIV)IgM测定结果的一致性分析
在血清的人类副流感病毒(HPIV)IgM抗体定性检测过程中，试验试剂与对照试剂的均为阳性的有50例；试验试剂阳性，对照试剂阴性的有0例；试验试剂阴性，对照试剂阳性的0例；试验试剂与对照试剂均为阴性的有17例；P＞0.05，组间差异无统计学意义。Kappa检验系数为1，大于0.75，结果表示试验试剂与对照试剂的一致性较好。试验试剂阳性一致例数为50例，符合率为100％，阴性一致例数为17例，符合率为100％，试验试剂的整体一致例数为67例，整体符合率为100％。结果表示试验试剂与对照试剂的检测结果的组间差异无统计学意义，一致性较好。结果见表11、12；
表11两种试剂人类副流感病毒(HPIV)IgM抗体定性测定结果
Figure GDA0003752438980000211
表12考核试剂相对于参比试剂的符合率
Figure GDA0003752438980000212
6.人类呼吸道合胞病毒(RSV)IgM测定结果的一致性分析
在血清的人类呼吸道合胞病毒(RSV)IgM定性检测过程中，试验试剂与对照试剂的均为阳性的有192例；试验试剂阳性，对照试剂阴性的有0例；试验试剂阴性，对照试剂阳性的0例；试验试剂与对照试剂均为阴性的有142例；采用McNemar检验，P＝1，P＞0.05，组间差异无统计学意义。Kappa检验系数为1，大于0.75，结果表示试验试剂与对照试剂的一致性较好。试验试剂阳性一致例数为192例，符合率为100％，阴性一致例数为142例，符合率为100％，试验试剂的整体一致例数为334例，整体符合率为100％。结果表示试验试剂与对照试剂的检测结果的组间差异无统计学意义，一致性较好。结果见表13、14；
表13两种试剂人类呼吸道合胞病毒(RSV)IgM抗体定性测定结果
Figure GDA0003752438980000221
表14考核试剂相对于参比试剂的符合率
Figure GDA0003752438980000222
7.人类腺病毒(HAdV)IgM测定结果的一致性分析
在血清的人类腺病毒(HAdV)IgM抗体定性检测过程中，试验试剂与对照试剂的均为阳性的有39例；试验试剂阳性，对照试剂阴性的有0例；试验试剂阴性，对照试剂阳性的0例；试验试剂与对照试剂均为阴性的有28例；P＝1＞0.05，组间差异无统计学意义。Kappa检验系数为1，大于0.75，结果表示试验试剂与对照试剂的一致性较好。试验试剂阳性一致例数为39例，符合率为100％，阴性一致例数为28例，符合率为100％，试验试剂的整体一致例数为67例，整体符合率为100％。结果表示试验试剂与对照试剂的检测结果组间差异无统计学意义，一致性较好。结果见表15、16；
表15两种试剂人类腺病毒(HAdV)IgM抗体定性测定结果
Figure GDA0003752438980000231
表16考核试剂相对于参比试剂的符合率
Figure GDA0003752438980000232
8.人类肺炎支原体(MP)IgM测定结果的一致性分析
在血清的人类肺炎支原体(MP)IgM抗体定性检测过程中，试验试剂与对照试剂的均为阳性的有15例；试验试剂阳性，对照试剂阴性的有0例；试验试剂阴性，对照试剂阳性的0例；试验试剂与对照试剂均为阴性的有52例；采用McNemar检验，P＝1，P＞0.05，组间差异无统计学意义。Kappa检验系数为1，大于0.75，结果表示试验试剂与对照试剂的一致性较好。试验试剂阳性一致例数为15例，符合率为100％，阴性一致例数为52例，符合率为100％，试验试剂的整体一致例数为67例，整体符合率为100％。结果表示试验试剂与对照试剂的检测结果的组间差异无统计学意义，一致性较好。结果见表17、18；
表17两种试剂人类肺炎支原体(MP)IgM抗体定性测定结果
Figure GDA0003752438980000241
表18考核试剂相对于参比试剂的符合率
Figure GDA0003752438980000242
9.人类肺炎衣原体(CP)IgM测定结果的一致性分析
在血清的人类肺炎衣原体(CP)IgM抗体定性检测过程中，试验试剂与对照试剂的均为阳性的有34例；试验试剂阳性，对照试剂阴性的有2例；试验试剂阴性，对照试剂阳性的1例；试验试剂与对照试剂均为阴性的有297例；采用McNemar检验，P＝1，P＞0.05，组间差异无统计学意义。Kappa检验系数为0.95，大于0.75，表示一致性较好。试验试剂阳性一致例数为34例，符合率为97.14％，阴性一致例数为297例，符合率为99.33％，试验试剂的整体一致例数为331例，整体符合率为99.10％。表示试验试剂与对照试剂的检测结果的组间差异无统计学意义，一致性较好。结果见表19、20；
表19两种试剂人类肺炎衣原体(CP)IgM抗体定性测定结果
Figure GDA0003752438980000251
表20考核试剂相对于参比试剂的符合率
Figure GDA0003752438980000252
以上所述仅为本发明的优选实例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡对本发明所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种多项病原体联合检测装置的制备方法，其特征在于，包括下列步骤：
（a）氧化锌-壳聚糖-胶体金制备
1）N-羧乙基壳聚糖的合成：将4.0g壳聚糖加入到含有2.80mL丙烯酸的200mL 水中，在50℃下，持续搅拌2天，反应完成后，在反应混合液中加入1mol/L的 NaOH溶液，调节溶液的pH值至10-12，使其所有的羧酸全部转化为钠盐，将混合溶液倒入到丙酮中进行重沉淀，然后在水溶液中透析，除去未反应的丙烯酸，透析两天后，冷冻干燥得到N-羧乙基壳聚糖；
2）纳米氧化锌制备：称取1.3225gZnAc2·2H2O溶解在20mL的蒸馏水中,缓慢滴加9mL5mol/L的NaOH溶液，溶液先出现白色浑浊，继续滴加则浑浊完全消失，再加入11mL的蒸馏水，搅拌均匀，然后倒入低压反应釜中，将反应釜放入烘箱中，在170℃下加热12个小时，自然冷却至室温后，得到沉淀后，分别用水和乙醇清洗、离心两次，将沉淀放入烘箱内于60℃烘干备用；
3）N-羧乙基壳聚糖与纳米氧化锌混合溶液的制备：将5.00gN-羧乙基壳聚糖加入到300mL去离子水中，在室温下剧烈搅拌0.5h，充分溶解得到水溶性壳聚糖溶液，将上述水溶性壳聚糖溶液和纳米氧化锌按一定的比例混合，将混合液剧烈搅拌3h，使其混合均匀；
4）胶体金的制备：
将装有90-100ml纯化水的圆底烧瓶放入电热套加热，加热10-12分钟后，待烧瓶中的水沸腾时开启转数控制开关，调至400rpm，并用注射器缓慢将1ml 1%氯化金溶液沿漩涡边缘加入，待溶液开始沸腾后，快速加入1%柠檬酸三钠溶液1-2ml，待溶液冷却到室温后，加水称重补足重量；
5）氧化锌-壳聚糖-胶体金制备：以苯二甲醛作为交联剂，在常温下进行交联；交联结束，将所得的氧化锌-壳聚糖-胶体金洗涤，真空干燥24h；
（b）氧化锌-壳聚糖-胶体金交联记抗人IgM抗体，取1ml氧化锌-壳聚糖-胶体金悬浮液，超声分散均匀，然后边搅拌边滴加抗体，加入抗体后，反应 1min后，再到超声波上超声30秒，然后再反应4小时，加 BSA进行封闭24小时，封闭好后进行离心，速度为 12000r/min，20min，保留离心后的沉淀，待用；
（c）采用胶体金抗体缓冲液分别稀释步骤（b）离心后的沉淀氧化锌-壳聚糖-胶体金抗体，使其分散均匀，分别获得免疫胶体金抗体溶液，分别用免疫胶体金抗体溶液喷涂于玻璃纤维垫，制得免疫胶体金抗体玻璃纤维膜；
（d）将硝酸纤维素膜用聚多巴胺处理液预处理后，喷点流感病毒A抗原、流感病毒B抗原、鼻病毒抗原、副流感病毒抗原、呼吸道合胞病毒抗原、腺病毒抗原作为检测线，或喷点流感病毒A抗原、流感病毒B抗原、鼻病毒抗原、副流感病毒抗原、呼吸道合胞病毒抗原、腺病毒抗原、肺炎支原体抗原、肺炎衣原体抗原作为检测线，喷点羊抗鼠IgG抗体作为质控线，制得免疫硝酸纤维素膜；
（e）将预处理的样品垫、步骤（c）制备的免疫胶体金抗体玻璃纤维膜、步骤（d）制备的免疫硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在塑料板上，切裁制得检测试剂条，最后将检测试剂条装入塑料外壳。
2.根据权利要求1所述的一种多项病原体联合检测装置的制备方法，其特征在于：所述步骤（a）氧化锌-壳聚糖-胶体金制备中，1）N-羧乙基壳聚糖的合成，在水溶液中透析时，采用的透析膜截取分子量为 8000-12000g/mol。
3.根据权利要求1所述的一种多项病原体联合检测装置的制备方法，其特征在于：所述步骤（a）氧化锌-壳聚糖-胶体金制备中，2）纳米氧化锌颗粒制备，缓慢滴加9mL 5mol/L的NaOH溶液，该NaOH溶液为新配制的溶液。
4.根据权利要求1所述的一种多项病原体联合检测装置的制备方法，其特征在于：所述步骤（a）氧化锌-壳聚糖-胶体金制备中，3）N-羧乙基壳聚糖与纳米氧化锌混合溶液的制备，所述水溶性壳聚糖溶液和纳米氧化锌的混合比例是，N-羧乙基壳聚糖与氧化锌的质量之比为 100/5、100/8或100/10。
5. 根据权利要求1所述的一种多项病原体联合检测装置的制备方法，其特征在于：所述步骤（c）所述的胶体金抗体缓冲液包括：浓度为20mM Tris-HCL液、蔗糖浓度为5%、海藻糖浓度为1%、proclin浓度为1%，BSA浓度为1%，pH为8.5。
6.根据权利要求1所述的一种多项病原体联合检测装置的制备方法，其特征在于：所述步骤（d）中聚多巴胺处理液预处理硝酸纤维素膜：将硝酸纤维素膜放入聚多巴胺处理液中浸泡1h，并慢速振荡摇晃，取出后用蒸馏水清洗3遍，最后在真空干燥箱中干燥。
7.根据权利要求6所述的一种多项病原体联合检测装置的制备方法，其特征在于：所述的聚多巴胺处理液，聚多巴胺浓度为1%，经0.22μm滤膜过滤，备用。
8.根据权利要求1所述的一种多项病原体联合检测装置的制备方法，其特征在于：所述步骤（e）所述的预处理的样品垫采用的样品垫处理液包括浓度为0.1mol/LTris-HCL液、浓度为1%牛血清白蛋白BSA、浓度为1%表面活性剂。
9.采用权利要求1~8任一项所述方法制备的一种多项病原体联合检测装置，其特征在于：样品垫、免疫胶体金抗体玻璃纤维膜、免疫硝酸纤维素膜、吸收垫分别粘贴在塑料板上，所述硝酸纤维素膜的两端分别与吸收垫、免疫胶体金抗体玻璃纤维膜搭接，所述免疫胶体金抗体玻璃纤维膜的另一端与样品垫搭接；所述免疫硝酸纤维素膜上设置第一检测线(T1)、第二检测线(T2)、第三检测线(T3)、第四检测线(T4)、第五检测线(T5)、第六检测线(T6)和质控线(C)，所述第一检测线(T1)上固相有流感病毒A抗原，第二检测线(T2)上固相有流感病毒B抗原，第三检测线(T3)上固相有鼻病毒抗原，第四检测线(T4)上固相有副流感病毒抗原，第五检测线(T5)上固相有呼吸道合胞病毒抗原，第六检测线(T6)上固相有腺病毒抗原，质控线(C)上喷点羊抗鼠IgG多克隆抗体，所述免疫硝酸纤维素膜上设置的第一检测线(T1)、第二检测线(T2)、第三检测线(T3)、第四检测线(T4)、第五检测线(T5)和第六检测线(T6)分别设置在六条线上，并在每条线上分别设置质控线(C)。
10.根据权利要求9所述的一种多项病原体联合检测装置，其特征在于：所述免疫硝酸纤维素膜上还设置第七检测线(T7)和第八检测线(T8)，所述的第七检测线(T7)上固相有肺炎支原体抗原，第八检测线(T8)上固相有肺炎衣原体抗原，并在两条线的每条线上分别设置质控线(C)。
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115015543B (zh) * 2022-04-17 2023-02-28 吉林迅准生物技术有限公司 一种多项病原体联合检测装置及其制备方法
CN117471098B (zh) * 2023-12-27 2024-03-12 北京芯迈微生物技术有限公司 肺炎支原体、肺炎衣原体IgM抗体联合检测的芯片及应用

Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003016914A1 (fr) * 2001-08-17 2003-02-27 Shanghai Health Digit Limited Kit de diagnostic simultane d'une pluralite de maladies infectieuses et technique de preparation de celui-ci
EP1882936A1 (en) * 2006-07-27 2008-01-30 The Jordanian Pharmaceutical Manufacturing Co. Urinary immunochromatographic detection cup
EP1947458A1 (en) * 2007-01-17 2008-07-23 The Jordanian Pharmaceutical Manufacturing Co. Ltd. Using colour conjugated chitosan and chitosan oligo-saccharides in the manufacture of a lateral-flow test device
CN102430392A (zh) * 2011-09-14 2012-05-02 江苏益通生物科技有限公司 一种复合纳米胶体金壳聚糖免疫载体及其制备方法
CN105424931A (zh) * 2015-04-04 2016-03-23 吉林双正医疗科技有限公司 幽门螺杆菌尿素酶抗体IgM、IgG联合快速检测装置及其制备方法
GB201709827D0 (en) * 2017-06-20 2017-08-02 Tripod Tech Corp Method of making colloidal metal nanoparticles
WO2017132319A2 (en) * 2016-01-27 2017-08-03 Regents Of The University Of Minnesota Methods of attaching probes to microorganisms and methods of use thereof
CN111579792A (zh) * 2020-04-30 2020-08-25 杨小军 流感病毒和2019新型冠状病毒抗体联合检测装置及其制备方法
CN111638372A (zh) * 2020-04-30 2020-09-08 吉林省格瑞斯特生物技术有限公司 一种心肌标志物的联合检测装置及其制备方法
CN113533465A (zh) * 2021-08-01 2021-10-22 济南大学 一种基于irmof-3内外负载氮掺杂量子点复合材料的电化学免疫传感器的制备方法
WO2021218661A1 (zh) * 2020-04-30 2021-11-04 吉林省格瑞斯特生物技术有限公司 G-17、pgi、pgii联合检测装置及其制备方法
CN113702643A (zh) * 2021-07-12 2021-11-26 杭州奥泰生物技术股份有限公司 一种联合检测新型冠状病毒中和抗体及核衣壳蛋白抗体的装置

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105259345A (zh) * 2015-11-19 2016-01-20 国家纳米科学中心 检测IgM抗体的胶体金试纸条及试纸卡、制备和检测方法
CN105807050A (zh) * 2016-03-15 2016-07-27 威尚生物技术（合肥）有限公司 腮腺炎病毒抗体双抗原夹心法免疫胶体金检测试纸条及其制备方法
CN106841604A (zh) * 2017-03-22 2017-06-13 上海市疾病预防控制中心 一种呼吸道病毒快速检测试剂盒及其制备方法
CN111521786A (zh) * 2020-04-28 2020-08-11 天津健博生物科技有限公司 一种呼吸道病原体IgM抗体联合检测试剂盒及其制备方法
CN112362869B (zh) * 2021-01-14 2021-05-18 山东康华生物医疗科技股份有限公司 一种多项呼吸道抗原检测卡及试剂盒
CN115015543B (zh) * 2022-04-17 2023-02-28 吉林迅准生物技术有限公司 一种多项病原体联合检测装置及其制备方法

Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003016914A1 (fr) * 2001-08-17 2003-02-27 Shanghai Health Digit Limited Kit de diagnostic simultane d'une pluralite de maladies infectieuses et technique de preparation de celui-ci
EP1882936A1 (en) * 2006-07-27 2008-01-30 The Jordanian Pharmaceutical Manufacturing Co. Urinary immunochromatographic detection cup
EP1947458A1 (en) * 2007-01-17 2008-07-23 The Jordanian Pharmaceutical Manufacturing Co. Ltd. Using colour conjugated chitosan and chitosan oligo-saccharides in the manufacture of a lateral-flow test device
CN102430392A (zh) * 2011-09-14 2012-05-02 江苏益通生物科技有限公司 一种复合纳米胶体金壳聚糖免疫载体及其制备方法
CN105424931A (zh) * 2015-04-04 2016-03-23 吉林双正医疗科技有限公司 幽门螺杆菌尿素酶抗体IgM、IgG联合快速检测装置及其制备方法
WO2017132319A2 (en) * 2016-01-27 2017-08-03 Regents Of The University Of Minnesota Methods of attaching probes to microorganisms and methods of use thereof
GB201709827D0 (en) * 2017-06-20 2017-08-02 Tripod Tech Corp Method of making colloidal metal nanoparticles
CN111579792A (zh) * 2020-04-30 2020-08-25 杨小军 流感病毒和2019新型冠状病毒抗体联合检测装置及其制备方法
CN111638372A (zh) * 2020-04-30 2020-09-08 吉林省格瑞斯特生物技术有限公司 一种心肌标志物的联合检测装置及其制备方法
WO2021218661A1 (zh) * 2020-04-30 2021-11-04 吉林省格瑞斯特生物技术有限公司 G-17、pgi、pgii联合检测装置及其制备方法
CN113702643A (zh) * 2021-07-12 2021-11-26 杭州奥泰生物技术股份有限公司 一种联合检测新型冠状病毒中和抗体及核衣壳蛋白抗体的装置
CN113533465A (zh) * 2021-08-01 2021-10-22 济南大学 一种基于irmof-3内外负载氮掺杂量子点复合材料的电化学免疫传感器的制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
基于氧化锌-壳聚糖-纳米金复合杂化膜修饰的过氧化氢生物传感器的研究;黄小梅等;《重庆文理学院学报(自然科学版)》;20091018(第05期);第35页 *

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