CN115006310B - 绿豆萌芽发酵物，含其皮肤外用剂及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种绿豆萌芽发酵物，含其皮肤外用剂及其制备方法和应用。绿豆萌芽发酵物的制备方法包括如下步骤：将乳杆菌接种到发酵底物中，经发酵培养，灭菌，即可；其中，发酵底物包括绿豆萌芽水提物；绿豆萌芽水提物的制备方法为以绿豆萌芽为原料，以水为提取剂，在80～95℃条件下浸提20～60min。本发明绿豆萌芽发酵物具有理想的抗氧化性能，制备工艺简单，发酵条件温和，能耗小，节约成本，制备过程中不采用任何有机试剂，具有较高的安全性，符合现代皮肤外用剂对功能性和安全性的需求，实现节能环保；可被广泛应用于皮肤外用剂领域，扩展了绿豆萌芽的应用领域。

Description

绿豆萌芽发酵物，含其皮肤外用剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于发酵领域，尤其涉及一种绿豆萌芽发酵物，含其皮肤外用剂及其制备方法和应用。

背景技术

绿豆Vigna radiata(Linn.)又名青小豆，属豆科豇豆属1年生直立草本植物。绿豆的化学组成主要包括蛋白质、脂肪、维生素、叶酸、多酚和类黄酮类物质。绿豆在发芽过程中会出现活性物质的变化，其变化主要集中在黄酮、酚类和维生素类物质，上述物质具有抗氧化、延缓衰老的作用，黄酮和酚类更是近年来天然抗氧化剂研究的热点之一，具有良好的自由基清除效果。

目前绿豆萌芽多应用于鲜食、饲料等领域，绿豆萌芽在化妆品领域的研究还相对较少；且对绿豆萌芽的加工仍停留在初级加工阶段，以绿豆萌芽为原料的深加工还有待开发；目前，对于活性物质的提取也集中于胚轴等特殊部位，不能对绿豆萌芽中全成分进行提取，导致绿豆萌芽的资源利用率低、浪费严重等现象的发生。现有技术还报道过采用有机溶剂对绿豆萌芽中的某一种活性成分进行提取，不仅会对环境造成污染，还会对绿豆萌芽中其它活性成分造成损失。

因此，本领域亟需研发一种可高效利用绿豆萌芽中的活性成分，制备成本低，且可用于皮肤外用剂领域，具有美容活性的绿豆萌芽提取物。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中对绿豆萌芽的加工仍停留在初级加工阶段，对于活性物质的提取也集中于胚轴等特殊部位，不能对绿豆萌芽中全成分进行提取，导致绿豆萌芽的资源利用率低、浪费严重；提取过程中使用有机溶剂，污染环境，且在化妆品领域的应用鲜有报道等缺陷，而提供一种绿豆萌芽发酵物，含其皮肤外用剂及其制备方法和应用。本发明绿豆萌芽发酵物具有理想的抗氧化性能，制备工艺简单，发酵条件温和，能耗小，节约成本，制备过程中不采用任何有机试剂，具有较高的安全性，符合现代皮肤外用剂对功能性和安全性的需求，实现节能环保；可被广泛应用于皮肤外用剂领域，扩展了绿豆萌芽的应用领域。

本发明采用以下技术方案解决上述技术问题：

本发明提供一种绿豆萌芽发酵物的制备方法，其包括如下步骤：将乳杆菌接种到发酵底物中，经发酵培养，灭菌，即可；其中，所述发酵底物包括绿豆萌芽水提物；所述绿豆萌芽水提物的制备方法为以绿豆萌芽为原料，以水为提取剂，在80～95℃条件下浸提20～60min。

一些实施例中，所述绿豆萌芽的制备方法可为本领域常规，一般可为绿豆经发芽处理制得。

其中，所述发芽处理的条件和方法可为本领域该类操作常规的条件和方法，一般可在发芽机中进行。

其中，所述发芽处理的温度可为本领域该类操作常规的温度，较佳地为25～30℃，更佳地为28℃。

其中，所述发芽处理的时间可为本领域该类操作常规的时间，较佳地为48～96h，更佳地为60～80h，例如，72h。

所述绿豆萌芽水提物的制备过程中，所述浸提前还可进一步包括匀浆的操作。

所述绿豆萌芽水提物的制备过程中，所述绿豆萌芽和所述水的质量比可为1：(10～30)，较佳地为1：20。

所述绿豆萌芽水提物的制备过程中，所述浸提的温度较佳地为90～95℃。

所述绿豆萌芽水提物的制备过程中，所述浸提可按照本领域常规在搅拌的条件下进行，所述搅拌的转速可为200～400rpm，较佳地为280～320rpm，例如300rpm。

所述绿豆萌芽水提物的制备过程中，所述浸提的时间较佳地为30～60min，例如40min。

一些实施例中，所述发酵底物在使用前还可按照本领域常规包括灭菌的操作。

其中，所述灭菌的条件和方法可为本领域该类操作常规的条件和方法，一般可为高温灭菌法。

当采用所述高温灭菌法对所述发酵底物进行所述灭菌时，所述灭菌的温度可为本领域该类操作常规的温度，较佳地为115～125℃，更佳地为118～121℃。

当采用所述高温灭菌法对所述发酵底物进行所述灭菌时，所述灭菌的时间可为本领域该类操作常规的时间，较佳地为30～40min，更佳地为35min。

当采用所述高温灭菌法对所述发酵底物进行所述灭菌时，所述灭菌的压力可为本领域该类操作常规的压力，较佳地为0.1～0.15Mpa，更佳地为0.1～0.13MPa，例如0.12MPa。

其中，按照本领域常规，所述灭菌的操作后还可进一步包括冷却的操作，一般可为冷却至室温。

一些实施例中，所述乳杆菌可包括瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)和/或植物乳杆菌植物亚种(Lactobacillus plantarum subsp.plantarum)。

其中，所述瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)可包括保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CICC 20243的瑞士乳杆菌。

其中，所述植物乳杆菌植物亚种(Lactobacillus plantarum subsp.plantarum)可包括保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CICC 20261的植物乳杆菌植物亚种。

其中，当所述乳杆菌包括瑞士乳杆菌和植物乳杆菌植物亚种时，所述瑞士乳杆菌和所述植物乳杆菌植物亚种的活菌数比可为(0.1～10)：1，较佳地为(0.25～4)：1，更佳地为(0.3～3)：1。

当采用所述瑞士乳杆菌时，所述瑞士乳杆菌可按照本领域常规以瑞士乳杆菌菌液的形式添加，所述瑞士乳杆菌菌液中所述瑞士乳杆菌的浓度可为10⁹～10¹¹CFU/mL，较佳地为10¹⁰CFU/mL。

当采用所述植物乳杆菌植物亚种时，所述植物乳杆菌植物亚种可按照本领域常规以植物乳杆菌植物亚种菌液的形式添加，所述植物乳杆菌植物亚种菌液中所述植物乳杆菌植物亚种的浓度可为10⁹～10¹¹CFU/mL，较佳地为10¹⁰CFU/mL。

一些实施例中，单位质量的所述发酵底物中接种的所述乳杆菌的数量可为本领域常规，较佳地为6×10⁶CFU/mL～6×10⁸CFU/mL，更佳地为6×10⁷CFU/mL～6×10⁸CFU/mL。

一些实施例中，所述发酵培养的时间可为12～24h，较佳地为14～18h，更佳地为16h。

一些实施例中，所述发酵培养的温度可为30～45℃，较佳地为35～45℃。

一些实施例中，所述灭菌的条件和方法可为本领域常规，一般可为高温灭菌法。

当采用所述高温灭菌法进行所述灭菌时，所述灭菌的温度可为本领域该类操作常规的温度，较佳地为115～125℃，更佳地为118～121℃。

当采用所述高温灭菌法进行所述灭菌时，所述灭菌的时间可为本领域该类操作常规的时间，较佳地为30～40min，更佳地为35min。

当采用所述高温灭菌法进行所述灭菌时，所述灭菌的压力可为本领域该类操作常规的压力，较佳地为0.1～0.15MPa，更佳地为0.1～0.13MPa，例如0.12MPa。

一些实施例中，所述灭菌的操作后，还可进一步包括冷却和/或离心，收集上清液的操作。

其中，按照本领域常规，所述冷却可为冷却至室温。

其中，所述离心的转速可为本领域该类操作常规的转速，较佳地为4000～8000rpm，更佳地为4800～8000rpm。

其中，所述离心的半径可为本领域该类操作常规的半径，较佳地为8～15cm。

其中，所述离心的时间可为本领域该类操作常规的时间，较佳地为20～40min，更佳地为30min。

其中，所述离心的操作后还可进一步包括二次灭菌和/或与防腐剂混合的操作。

所述二次灭菌的方法可为本领域常规使用的高温灭菌法。

当采用所述高温灭菌法进行所述二次灭菌时，所述二次灭菌的温度可为本领域该类操作常规的温度，较佳地为115～125℃，更佳地为118～121℃。

当采用所述高温灭菌法进行所述二次灭菌时，所述二次灭菌的时间可为本领域该类操作常规的时间，较佳地为30～40min，更佳地为35min。

当采用所述高温灭菌法进行所述二次灭菌时，所述二次灭菌的压力可为本领域该类操作常规的压力，较佳地为0.1～0.15MPa，更佳地为0.1～0.13MPa，例如0.12MPa。

与所述防腐剂混合的过程中，所述混合的温度可为本领域该类操作常规的温度，较佳地为60～75℃。

与所述防腐剂混合的过程中，所述防腐剂可按照本领域常规包括对羟基苯乙酮和/或1,2-己二醇。当所述防腐剂包括所述对羟基苯乙酮和所述1,2-己二醇时，所述对羟基苯乙酮占所述离心后制得所述上清液的质量百分数可为0.1％～1％，所述1,2-己二醇占所述离心后制得所述上清液的质量百分数可为0.5％～2％；较佳地，所述对羟基苯乙酮占所述离心后制得所述上清液的质量百分数为0.5％，所述1,2-己二醇占所述离心后制得所述上清液的质量百分数为0.8％。

本发明还提供一种绿豆萌芽发酵物，其由如上所述的绿豆萌芽发酵物的制备方法制得。

本发明还提供一种如上所述的绿豆萌芽发酵物直接作为产品、作为添加剂或作为基底在制备皮肤外用剂中的应用。

一些实施例中，所述绿豆萌芽发酵物可作为所述皮肤外用剂中的抗氧化活性成分。

其中，所述抗氧化活性成分可为具有DPPH自由基清除作用和/或具有羟自由基清除作用的抗氧化活性成分。

本发明还提供一种皮肤外用剂，其包括如上所述的绿豆萌芽发酵物。

一些实施例中，所述皮肤外用剂中还可进一步包括本领域常规使用的活性成分，一般可包括保湿活性成分、美白活性成分、抗炎活性成分、抗敏活性成分和抗氧化活性成分中的至少一种。

一些实施例中，所述皮肤外用剂可按照本领域常规包括但不限于面膜、精华或爽肤水。

一些实施例中，所述绿豆萌芽发酵物占所述皮肤外用剂的质量百分比可为5％～99％，较佳地为60％～99％。

一些实施例中，所述室温一般指15～40℃。

在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

本发明的积极进步效果在于：本发明制得的绿豆萌芽发酵物具有理想的抗氧化性能，制备工艺简单，发酵条件温和，能耗小，节约成本，不采用任何有机试剂，具有较高的安全性，符合现代皮肤外用剂对功能性和安全性的需求，可被广泛应用于皮肤外用剂领域，扩展了绿豆萌芽的应用领域。

附图说明

本公开可以通过参考下文中结合附图所给出的描述而得到更好的理解。所述附图连同下面的详细说明一起包含在本说明书中并且形成本说明书的一部分，而且用来进一步举例说明本公开的优选实施例和解释本公开的原理和优点。其中：

图1为采用实施例1～4或对比例1～4制得产品处理人体皮肤成纤维细胞后的细胞存活率对比图；

图2为实施例1～4或对比例1～4制得产品对DPPH自由基清除能力对比图；

图3为实施例1～4或对比例1～4制得产品总抗氧化能力对比图；

图4为实施例1～4或对比例1～4制得产品对羟自由基清除能力对比图。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例和对比例中，瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CICC 20243；

下述实施例和对比例中，植物乳杆菌植物亚种(Lactobacillus plantarumsubsp.plantarum)购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CICC 20261；

下述对比例中，嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)为郑州和合生物工程技术有限公司生产的型号为HH-ST08的嗜热链球菌。

实施例1

(1)筛选干净匀称无破损、无变色的绿豆，将绿豆漂洗3遍，将清洗后的绿豆平铺于发芽机中进行发芽处理，在28℃条件下培养3d，得到绿豆萌芽；称取绿豆萌芽15g和300mL去离子水匀浆，匀浆后在90℃条件下浸提40min，浸提时搅拌桨转速为300rpm，制得绿豆萌芽水提物；浸提结束后，在温度为121℃，压力为0.12Mpa的条件下高温高压灭菌处理35min，灭菌后冷却至室温，制得发酵底物；

(2)将如上所述的瑞士乳杆菌(CICC 20243)和植物乳杆菌植物亚种(CICC 20261)分别配置成活菌数为10¹⁰CFU/mL的菌液；在步骤(1)制得的发酵底物中接种1.35mL瑞士乳杆菌菌液和0.45mL植物乳杆菌植物亚种菌液，在30℃恒温震荡培养箱培养16h，摇床转速为180r/min；发酵完成后，在温度为121℃，压力为0.12MPa的条件下灭菌35min，灭菌结束后，冷却至室温，再进行离心，离心转速为4800r/min，离心时间为30min；离心结束后得上清液，对上清液进行二次灭菌，二次灭菌的温度为121℃，二次灭菌的压力为0.12MPa，二次灭菌的时间为35min，制得绿豆萌芽发酵物。

实施例2

与实施例1相比，区别仅在于步骤(2)中接入的乳杆菌菌液为瑞士乳杆菌菌液0.45mL和植物乳杆菌植物亚种菌液1.35mL，其他条件参数同实施例1。

实施例3

与实施例1相比，区别仅在于步骤(2)中接入的乳杆菌菌液为瑞士乳杆菌菌液1.8mL，其他条件参数同实施例1。

实施例4

与实施例1相比，区别仅在于步骤(2)中接入的乳杆菌菌液为植物乳杆菌植物亚种菌液1.8mL，其他条件参数同实施例1。

对比例1

与实施例1相比，区别仅在于步骤(1)中不进行热水浸提的操作，直接对15g绿豆萌芽和300mL水匀浆，进行灭菌处理，制得发酵底物，其他条件参数同实施例1。

对比例2

与实施例1相比，区别仅在于不进行发酵处理，具体为实施例1步骤(1)制得的发酵底物。

对比例3

与实施例1相比，区别仅在于步骤(1)制备绿豆萌芽水提物过程中，浸提的时间为70min，其他条件参数同实施例1。

对比例4

与实施例1相比，区别仅在于步骤(2)中，接入的发酵菌液为嗜热链球菌(HH-ST08)菌液，嗜热链球菌菌液中活菌数为10¹⁰CFU/mL，添加量为1.8mL，其他条件参数同实施例1。

效果实施例1人体皮肤成纤维细胞毒性实验

本实验采用人体皮肤成纤维细胞，来自中国科学细胞库，验证上述实施例1～4和对比例1～4制得产品的细胞毒性。

试剂：0.25％(含EDTA)胰蛋白酶的生产厂家为美国GIBCO公司；DMEM培养基的生产厂家为美国GIBCO公司；双抗的生产厂家为美国Corning公司；CCK-8的生产厂家为北京拜尔迪生物技术有限公司；胎牛血清的生产厂家为美国GIBCO公司；磷酸盐缓冲液的生产厂家为北京百瑞极生物科技有限公司。

设备：WJ-80A-Ⅱ型CO₂恒温培养箱的厂家为上海圣科仪器设备有限公司；Sunrise酶标仪的厂家为帝肯贸易有限公司；TL80-2型医用离心机的厂家为江苏天力医疗器械有限公司；NUNC 96孔细胞培养板的厂家为赛默飞世尔科技公司。

1、实验步骤：

分别将上述实施例1～4和对比例1～4制得的产品用无血清的DMEM培养基配置成体积百分数为5％的实验组待测液。人体皮肤成纤维细胞养于含10％胎牛血清以及1％双抗(1×10⁵U/L的青霉素、100mg/L的链霉素)的DMEM培养基中。细胞生长于37℃、5％CO₂饱和湿度的培养箱中，当细胞融合达到85％以上时，以0.05％胰酶消化对数生长期细胞，用含血清的DMEM终止消化反应。细胞计数板计数，将细胞悬液浓度调整到7×10⁴个/mL，将细胞悬液按照每孔100μL的比例接种到96孔板上，37℃、5％CO₂条件下孵育12h。去除旧培养液，用磷酸盐缓冲液清洗细胞两遍。实验组中每孔加入100μL上述配置的已过滤除菌的实验组待测液，每个待测液做6个复孔；对照组含有细胞，加入无血清的DMEM培养基；空白对照组无细胞，加入100μL的PBS。再于37℃、5％CO₂条件下孵育24h。然后每孔加入10μL的CCK-8溶液，再孵育3h，在450nm波长下测定吸光度值，计算各组细胞存活率，结果见表1和图1。

细胞存活率的计算公式如下：

细胞存活率(％)＝(A实验组-A空白对照组)/(A对照组-A空白对照组)×100％。

表1

上述结果表明，采用相同浓度的本发明实施例1～4制得产品处理人体皮肤成纤维细胞时，细胞存活率明显高于对比例1～4。

效果实施例2

DPPH是一种早期合成的有机自由基，常用来评估抗氧化物的供氢能力，它在有机溶剂中非常稳定，呈紫色，而且在517nm处有一个特征吸收峰，当遇到自由基清除剂时，DPPH的孤对电子被配对而使其退色，也就是在最大吸收波长处的吸光值变小。因此，可通过测定吸光值的变化来评价样品对DPPH自由基的清除效果。

DPPH自由基清除实验的具体实验步骤为：

(1)取等体积(1mL)的待测液(实施例1～4或对比例1～4制得的产品)与2×10^{- 4}mol/L的DPPH溶液混匀(A₁管)；

(2)取等体积(1mL)的无水乙醇(待测物溶剂)与2×10^-4mol/L的DPPH溶液混匀(A₂管)；

(3)取等体积(1mL)的无水乙醇与待测液混匀(A₃管)；

(4)避光反应30min后，在517nm下测A₁管、A₂管、A₃管吸光度值；清除率计算公式为：清除率＝[(A₂+A₃)-A₁]/A₂×100％。

本实验对实施例1～4和对比例1～4制得的产品进行DPPH自由基清除实验测试，结果见表2和图2。

表2

从图2和表2的结果可以看出，本发明实施例1～4制得的绿豆萌芽发酵物的DPPH自由基清除能力显著高于对比例1～4制得产品的DPPH自由基清除能力。图2中，ns表示与实施例1相比无统计学差异；*p＜0.05，表示与实施例1相比有统计学差异；**p＜0.01，表示与实施例1相比有显著性统计学差异，显著降低；***p＜0.001，表示与实施例1相比有极其显著性统计学差异，极显著降低。

效果实施例3

采用碧云天生物技术有限公司生产的货号为S0119的总抗氧化能力检测试剂盒(ABTS法)测试实施例1～4和对比例1～4制得的产品的总抗氧化能力，结果见表3和图3。

表3

	总抗氧化能力(TEAC/mM)
		实施例1	0.375±0.007
实施例2	0.384±0.01
		实施例3	0.318±0.014
实施例4	0.36±0.007
		对比例1	0.282±0.012
对比例2	0.253±0.005
		对比例3	0.243±0.006
对比例4	0.252±0.014

从图3和表3的结果可以看出，本发明实施例1～4制得的绿豆萌芽发酵物的总抗氧化能力显著高于对比例1～4制得产品的总抗氧化能力。图3中，ns表示与实施例1相比无统计学差异；*p＜0.05，表示与实施例1相比有统计学差异；**p＜0.01，表示与实施例1相比有显著性统计学差异，显著降低；***p＜0.001，表示与实施例1相比有极其显著性统计学差异，极显著降低。

效果实施例4

利用Fenton反应产生羟自由基(·OH)，向反应体系中加入水杨酸，·OH与水杨酸反应，生成的有色化合物2，3-二羟基苯甲酸在510nm处有特征吸收。采用固定反应时间法，在510nm处测定含被测物反应液的吸光度，并与空白液比较，测定被测物对·OH的清除作用按表4往试管中添加试剂，依次加入9mmol/L FeSO₄、9mmol/L水杨酸乙醇溶液、样品(实施例1～4或对比例1～4制得的产品)、适量去离子水和8.8mmol/L H₂O₂溶液。摇匀，37℃水浴加热15min后取出，测定空白对照的吸光度A₀(配置方式见表4中组别A)、加样品吸光度A_x(配置方式见表4中组别B)和不加H₂O₂的溶液本底吸光度A_x0(配置方式见表4中组别C)。测定A₀时，参比溶液为不加双氧水体系；按照下述公式计算各组羟自由基清除率，结果见表5和图4。

羟自由基清除率计算公式为：

清除率＝(A₀－(A_x－Ax₀))/A₀×100％。

表4

表5

从图4和表5的结果可以看出，本发明实施例1～4制得的绿豆萌芽发酵物的羟自由基清除能力显著高于对比例1～4制得产品的羟自由基清除能力。图4中，*p＜0.05，表示与实施例1相比有统计学差异；**p＜0.01，表示与实施例1相比有显著性统计学差异，显著降低；***p＜0.001，表示与实施例1相比有极其显著性统计学差异，极显著降低；^##p＜0.01，表示与实施例1相比有显著性统计学差异，显著升高。

最后，还需要说明的是，在本发明中术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。

尽管上面已经通过本公开的具体实施例的描述对本公开进行了披露，但是，应该理解，本领域技术人员可在所附方案的精神和范围内设计对本公开的各种修改、改进或者等同物。这些修改、改进或者等同物也应当被认为包括在本公开所要求保护的范围内。

Claims (28)

1.一种绿豆萌芽发酵物的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：将乳杆菌接种到发酵底物中，经发酵培养，灭菌，即可；其中，所述发酵底物包括绿豆萌芽水提物；所述绿豆萌芽水提物的制备方法为以绿豆萌芽为原料，以水为提取剂，在80～95℃条件下浸提20～60min；

所述乳杆菌包括瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)和植物乳杆菌植物亚种(Lactobacillus plantarum subsp.plantarum)；

所述瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)包括保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CICC 20243的瑞士乳杆菌；

所述植物乳杆菌植物亚种(Lactobacillus plantarum subsp.plantarum)包括保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CICC 20261的植物乳杆菌植物亚种；

所述瑞士乳杆菌和所述植物乳杆菌植物亚种的活菌数比为(0.1～10)：1。

2.如权利要求1所述的绿豆萌芽发酵物的制备方法，其特征在于，所述绿豆萌芽发酵物的制备方法满足下述条件中至少一种：

所述绿豆萌芽的制备方法为绿豆经发芽处理制得；所述绿豆萌芽水提物的制备过程中，所述浸提前还进一步包括匀浆的操作；

所述绿豆萌芽水提物的制备过程中，所述绿豆萌芽和所述水的质量比为1：(10～30)；

所述绿豆萌芽水提物的制备过程中，所述浸提的温度为90～95℃；

所述绿豆萌芽水提物的制备过程中，所述浸提在搅拌的条件下进行，所述搅拌的转速为200～400rpm；

所述绿豆萌芽水提物的制备过程中，所述浸提的时间为30～60min。

3.如权利要求2所述的绿豆萌芽发酵物的制备方法，其特征在于，所述绿豆萌芽发酵物的制备方法满足下述条件中至少一种：

所述绿豆萌芽的制备过程中，所述发芽处理的温度为25～30℃；

所述绿豆萌芽的制备过程中，所述发芽处理的时间为48～96h；

所述绿豆萌芽水提物的制备过程中，所述绿豆萌芽和所述水的质量比为1：20；

所述绿豆萌芽水提物的制备过程中，所述浸提在搅拌的条件下进行，所述搅拌的转速为280～320rpm。

4.如权利要求3所述的绿豆萌芽发酵物的制备方法，其特征在于，所述绿豆萌芽发酵物的制备方法满足下述条件中至少一种：

所述绿豆萌芽的制备过程中，所述发芽处理的温度为28℃；

所述绿豆萌芽的制备过程中，所述发芽处理的时间为60～80h；

所述绿豆萌芽水提物的制备过程中，所述浸提在搅拌的条件下进行，所述搅拌的转速为300rpm。

5.如权利要求4所述的绿豆萌芽发酵物的制备方法，其特征在于，所述绿豆萌芽的发芽过程中，所述发芽处理的时间为72h。

6.如权利要求1所述的绿豆萌芽发酵物的制备方法，其特征在于，所述发酵底物在使用前还进一步包括灭菌的操作。

7.如权利要求6所述的绿豆萌芽发酵物的制备方法，其特征在于，对所述发酵底物进行所述灭菌的方法为高温灭菌法；当采用所述高温灭菌法对所述发酵底物进行所述灭菌时，所述灭菌的温度为115～125℃；当采用所述高温灭菌法对所述发酵底物进行所述灭菌时，所述灭菌的时间为30～40min；当采用所述高温灭菌法对所述发酵底物进行所述灭菌时，所述灭菌的压力为0.1～0.15MPa。

8.如权利要求7所述的绿豆萌芽发酵物的制备方法，其特征在于，当采用所述高温灭菌法对所述发酵底物进行所述灭菌时，所述灭菌的温度为118～121℃；当采用所述高温灭菌法对所述发酵底物进行所述灭菌时，所述灭菌的时间为35min；当采用所述高温灭菌法对所述发酵底物进行所述灭菌时，所述灭菌的压力为0.1～0.13MPa。

9.如权利要求6所述的绿豆萌芽发酵物的制备方法，其特征在于，对所述发酵底物进行所述灭菌的操作后还进一步包括冷却至室温的操作。

10.如权利要求1所述的绿豆萌芽发酵物的制备方法，其特征在于，所述绿豆萌芽发酵物的制备方法满足下述条件中至少一种；

所述瑞士乳杆菌和所述植物乳杆菌植物亚种的活菌数比为(0.25～4)：1；所述瑞士乳杆菌以瑞士乳杆菌菌液的形式添加，所述瑞士乳杆菌菌液中所述瑞士乳杆菌的浓度为10⁹～10¹¹CFU/mL；

所述植物乳杆菌植物亚种以植物乳杆菌植物亚种菌液的形式添加，所述植物乳杆菌植物亚种菌液中所述植物乳杆菌植物亚种的浓度为10⁹～10¹¹CFU/mL；

单位质量的所述发酵底物中接种的所述乳杆菌的数量为6×10⁶CFU/mL～6×10⁸CFU/mL。

11.如权利要求10所述的绿豆萌芽发酵物的制备方法，其特征在于，所述绿豆萌芽发酵物的制备方法满足下述条件中至少一种：

所述瑞士乳杆菌和所述植物乳杆菌植物亚种的活菌数比为(0.3～3)：1；

所述瑞士乳杆菌以瑞士乳杆菌菌液的形式添加，所述瑞士乳杆菌菌液中所述瑞士乳杆菌的浓度为10¹⁰CFU/mL；

所述植物乳杆菌植物亚种以植物乳杆菌植物亚种菌液的形式添加，所述植物乳杆菌植物亚种菌液中所述植物乳杆菌植物亚种的浓度为10¹⁰CFU/mL；

单位质量的所述发酵底物中接种的所述乳杆菌的数量为6×10⁷CFU/mL～6×10⁸CFU/mL。

12.如权利要求1～11中任意一项所述的绿豆萌芽发酵物的制备方法，其特征在于，所述绿豆萌芽发酵物的制备方法满足下述条件中至少一种：

所述发酵培养的时间为12～24h；

所述发酵培养的温度为30～45℃；

所述灭菌的方法为高温灭菌法；当采用所述高温灭菌法进行所述灭菌时，所述灭菌的温度为115～125℃；当采用所述高温灭菌法进行所述灭菌时，所述灭菌的时间为30～40min；当采用所述高温灭菌法进行所述灭菌时，所述灭菌的压力为0.1～0.15MPa。

13.如权利要求12所述的绿豆萌芽发酵物的制备方法，其特征在于，所述绿豆萌芽发酵物的制备方法满足下述条件中至少一种：

所述发酵培养的时间为14～18h；

所述发酵培养的温度为35～45℃；

当采用所述高温灭菌法进行所述灭菌时，所述灭菌的温度为118～121℃；

当采用所述高温灭菌法进行所述灭菌时，所述灭菌的时间为35min；

当采用所述高温灭菌法进行所述灭菌时，所述灭菌的压力为0.1～0.13MPa。

14.如权利要求13所述的绿豆萌芽发酵物的制备方法，其特征在于，所述发酵培养的时间为16h。

15.如权利要求1所述的绿豆萌芽发酵物的制备方法，其特征在于，所述灭菌的操作后，还进一步包括冷却和/或离心，收集上清液的操作。

16.如权利要求15所述的绿豆萌芽发酵物的制备方法，其特征在于，所述绿豆萌芽发酵物的制备方法满足下述条件中至少一种：

所述冷却为冷却至室温；

所述离心的转速为4000～8000rpm；

所述离心的半径为8～15cm；

所述离心的时间为20～40min。

17.如权利要求16所述的绿豆萌芽发酵物的制备方法，其特征在于，所述绿豆萌芽发酵物的制备方法满足下述条件中至少一种：

所述离心的转速为4800～8000rpm；

所述离心的时间为30min。

18.如权利要求15～17中任意一项所述的绿豆萌芽发酵物的制备方法，其特征在于，所述离心的操作后还进一步包括二次灭菌和/或与防腐剂混合的操作。

19.如权利要求18所述的绿豆萌芽发酵物的制备方法，其特征在于，所述绿豆萌芽发酵物的制备方法满足下述条件中至少一种:

所述二次灭菌的方法为高温灭菌法；当采用所述高温灭菌法进行所述二次灭菌时，所述二次灭菌的温度为115～125℃；当采用所述高温灭菌法进行所述二次灭菌时，所述二次灭菌的时间为30～40min；当采用所述高温灭菌法进行所述二次灭菌时，所述二次灭菌的压力为0.1～0.15MPa；

与所述防腐剂混合的过程中，所述混合的温度为60～75℃；

与所述防腐剂混合的过程中，所述防腐剂包括对羟基苯乙酮和/或1,2-己二醇。

20.如权利要求19所述的绿豆萌芽发酵物的制备方法，其特征在于，所述绿豆萌芽发酵物的制备方法满足下述条件中至少一种:

当采用所述高温灭菌法进行所述二次灭菌时，所述二次灭菌的温度为118～121℃；当采用所述高温灭菌法进行所述二次灭菌时，所述二次灭菌的时间为35min；当采用所述高温灭菌法进行所述二次灭菌时，所述二次灭菌的压力为0.1～0.13MPa；

当所述防腐剂包括所述对羟基苯乙酮和所述1,2-己二醇时，所述对羟基苯乙酮占所述离心后制得所述上清液的质量百分数为0.1％～1％，所述1,2-己二醇占所述离心后制得所述上清液的质量百分数为0.5％～2％。

21.如权利要求20所述的绿豆萌芽发酵物的制备方法，其特征在于，当所述防腐剂包括所述对羟基苯乙酮和所述1,2-己二醇时，所述对羟基苯乙酮占所述离心后制得所述上清液的质量百分数为0.5％，所述1,2-己二醇占所述离心后制得所述上清液的质量百分数为0.8％。

22.一种绿豆萌芽发酵物，其特征在于，其由如权利要求1～21中任意一项所述的绿豆萌芽发酵物的制备方法制得。

23.一种如权利要求22所述的绿豆萌芽发酵物直接作为产品、作为添加剂或作为基底在制备皮肤外用剂中的应用。

24.如权利要求23所述的应用，其特征在于，所述绿豆萌芽发酵物作为所述皮肤外用剂中的抗氧化活性成分。

25.如权利要求24所述的应用，其特征在于，所述抗氧化活性成分为具有DPPH自由基清除作用和/或具有羟自由基清除作用的抗氧化活性成分。

26.一种皮肤外用剂，其特征在于，其包括如权利要求22所述的绿豆萌芽发酵物。

27.如权利要求26所述的皮肤外用剂，其特征在于，所述皮肤外用剂满足下述条件中至少一种:

所述皮肤外用剂中还进一步包括保湿活性成分、美白活性成分、抗炎活性成分、抗敏活性成分和抗氧化活性成分中的至少一种；

所述皮肤外用剂包括面膜、精华或爽肤水；

所述绿豆萌芽发酵物占所述皮肤外用剂的质量百分比为5％～99％。

28.如权利要求26或27所述的皮肤外用剂，其特征在于，所述绿豆萌芽发酵物占所述皮肤外用剂的质量百分比为60％～99％。