CN114965748A - 一种同时检测新复方芦荟胶囊中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种同时检测新复方芦荟胶囊中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的方法，属于医药技术领域。本发明通过对新复方芦荟胶囊中各成分结构及其理化性质特点进行分析，确定通过芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红对新复方芦荟胶囊进行质量控制，通过大量实验筛选出通用的色谱条件，按照下述条件进行检测：色谱柱：C18ODS，4.6×250mm；检测波长：300nm；流动相A：0.08％的磷酸水溶液；流动相B：乙腈；柱温箱：30℃；流速：0.8mL/min；梯度洗脱。本发明提供的检测方法能够实现对上述三种成分的有效分离，且该方法检测灵敏度高，稳定性好，重现性好，检测的准确度高，节省人力和时间成本，能够提高效率，可以更好地控制新复方芦荟胶囊的质量。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种同时检测新复方芦荟胶囊中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的方法。
背景技术
新复方芦荟胶囊为国家中药保护品种，是由芦荟、青黛和琥珀3味药材加工而成的复方制剂，有调肝益肾、清热润肠以及宁心安神的功效，用于治疗习惯性便秘、大便燥结或因大便数日不通引起的腹胀、腹痛等。芦荟和青黛是新复方芦荟胶囊的君药，芦荟中主要活性成分有芦荟苷(Aloin)和芦荟大黄素(Aloe emodin)，靛玉红(Indirubin)则为青黛中的活性成分。
现有新复方芦荟胶囊的质量控制较为简单，由于新复方芦荟胶囊中的主要成分的极性差异较大，2015年国家食品药品监督管理总局药品标准(修订)颁布件中采用薄层色谱法对其中的靛蓝以及靛玉红以及芦荟药材进行鉴别，采用高效液相色谱法对新复方芦荟胶囊主要成分芦荟苷进行含量检测，而为了简化检测方法，一些文献提出通过对新复方芦荟胶囊的某一成分(如靛玉红或芦荟苷)进行含量测定来对新复方芦荟胶囊进行质量控制。而新复方芦荟胶囊作为一种复方中药制剂，仅使用一种成分对其进行质量控制太过单薄且易于人为添加指标成分，不能全面反映新复方芦荟胶囊的质量。现有的方法要么质控方法较为繁琐，耗时耗力，需要采用不同的方法对不同的成分进行检测，要么仅仅检测新复方芦荟胶囊的某一成分，准确度较差，无法保证胶囊的质量，存在质控盲点。因此，新复方芦荟胶囊的含量测定方法具备进一步优化提升的空间。对于中成药尤其是复方药物，通过多种指标对其进行质量控制也是提高中药质量控制标准的必然趋势。
发明内容
为了克服上述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种同时检测新复方芦荟胶囊中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的方法，解决现有检测方法繁琐、耗时耗力以及对单一成分进行定量，不能全面反映新复方芦荟胶囊质量的问题。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：
本发明公开了一种同时检测新复方芦荟胶囊中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的方法，所述检测方法包括以下步骤：
S1、对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的芦荟苷、芦荟大黄素和靛玉红对照品，制成混合标准品储备溶液，于4℃保存；
S2、供试品溶液的制备
取去胶囊壳的新复方芦荟胶囊，溶解、超声和萃取制成新复方芦荟胶囊供试品溶液；
S3、线性回归方程的建立
取S1的混合标准品储备溶液，制备系列浓度的混合对照品溶液，过0.45μm微孔滤膜，依次注入高效液相色谱仪，梯度洗脱，利用高效液相色谱仪工作站，对各化学成分进行线性回归分析并计算线性回归方程；
S4、含量测定
取S2的新复方芦荟胶囊供试品溶液，注入高效液相色谱仪，梯度洗脱，利用高效液相色谱仪工作站对结果进行分析，将峰面积代入S3所得的线性回归方程，计算供试品溶液中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的含量；
其中，S3和S4中，高效液相色谱仪的流动相为0.08％磷酸水溶液-乙腈。
优选地，0.08％磷酸水溶液为A相，乙腈为B相，梯度洗脱条件如下：
优选地，S1对照品溶液的具体制备方法为：精密称取干燥至恒重的芦荟苷、芦荟大黄素和靛玉红，采用甲醇溶液配制成浓度分别为100μg/mL、118μg/mL和100μg/mL的混合标准储备溶液，4℃保存，进样前，过0.45μm微孔滤膜。
优选地，S2中，溶解用DMF。
优选地，S2中，超声提取后进一步水洗再萃取。
优选地，S3和S4中，高效液相色谱仪的检测波长为300nm。
优选地，S3和S4中，高效液相色谱仪的柱温为30℃。
优选地，S3和S4中，高效液相色谱仪的梯度洗脱流速为0.8mL/min。
优选地，S3和S4中，高效液相色谱仪的色谱柱为Hypersil C18 ODS，4.6×250mm
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供的一种同时检测新复方芦荟胶囊中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的方法，根据新复方芦荟胶囊中各成分及其理化性质特点，确定通过芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红对新复方芦荟胶囊进行质量控制，来解决新复方芦荟胶囊主要成分极性差异较大不能一次实现对多种成分同时分离的问题，在比较了水-甲醇、水-乙腈、0.08％磷酸水溶液-乙腈和0.1％磷酸水溶液-乙腈4个不同洗脱***在不同梯度下的洗脱效果，结果发现以0.08％磷酸水溶液-乙腈为流动相时，新复方芦荟胶囊中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红与杂质峰分离效果较好。本发明提供的一种同时定性定量检测新复方芦荟胶囊中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的方法，能够同时实现芦荟苷(Aloin)、芦荟大黄素(Aloe emodin)和靛玉红(Indirubin)三种成分的有效分离和含量检测，克服了现有技术中对新复方芦荟胶囊单一成分进行检测的质控盲点问题，易于检测出人为添加成分，同时克服了现有技术中需要采用不同的方法对不同的成分进行检测的问题，以0.08％磷酸水溶液-乙腈作为流动相，优化了流动相体系，解决了主要成分极性差异较大不能同时实现对三种成分的洗脱的问题。经过方法学考察，该方法操作简单，专属性强，检测灵敏度高，稳定性好，重现性好，检测的准确度高，节省人力、物力与时间成本，能够提高检测效率，可以客观、全面、准确地评价新复方芦荟胶囊提取物的质量，更好地控制新复方芦荟胶囊的质量，对今后新复方芦荟胶囊的质量控制、品质提升以及保证新复方芦荟胶囊的临床疗效具有十分重要的意义。
进一步地，在确定最佳流动相组成后，本发明通过大量实验筛选最佳的梯度洗脱程序，实验发现，以0.08％磷酸水溶液为A相，乙腈为B相，当采用0～10min，80％A；10～15min，80％→75％A；15～20min，75％→70％A；20～25min，70％→62％A；25～30min，62％→55％A；30～35min，55％→45％A；35～40min，45％→35％A；40～50min，35％A时可实现各色谱峰的良好分离。
进一步地，本发明通过对不同提取溶剂(甲醇、乙醇、氯仿、DMF)进行实验比较，结果发现使用甲醇、水等常用溶剂很难同时将芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红这三种极性相差较大的成分同时提取出来，DMF有很好的溶解和提取能力，能够同时将这三种成分都提取出，但是DMF的溶解能力过强，所得成分过多且难以将其全部分离，因此，在使用DMF提取后还需要进行进一步的水洗以及萃取。
进一步地，本发明对流速(1mL/min、0.8mL/min、0.5mL/min)进行筛选，因新复方芦荟胶囊中成分较多，流速较高时芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红三种成分与杂质峰分离效果不佳，流速太低，所需时间长，最终选择流速为0.8mL/min进行梯度洗脱。
附图说明
图1为本发明的混合对照品溶液的HPLC色谱图；其中，1号峰是芦荟苷，2号峰是芦荟大黄素，3号峰是靛玉红；
图2为本发明的芦荟苷标准曲线图；
图3为本发明的芦荟大黄素标准曲线图；
图4为本发明的靛玉红标准曲线图；
图5为本发明的新复方芦荟胶囊的HPLC色谱图；其中，1号峰是芦荟苷，2号峰是芦荟大黄素，3号峰是靛玉红。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
需要说明的是，本发明的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别类似的对象，而不必用于描述特定的顺序或先后次序。应该理解这样使用的数据在适当情况下可以互换，以便这里描述的本发明的实施例能够以除了在这里图示或描述的那些以外的顺序实施。此外，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、***、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。
下面结合附图1-5对本发明做进一步详细描述：
本发明所用仪器如下：
岛津-LabSolutions(日本岛津LC-20)；BSA224S万分之一电子天平(赛多利斯(上海)贸易有限公司)；GL2202-1SCN百分之一电子天平(赛多利斯(上海)贸易有限公司)；KQ-300DE超声清洗器(昆山超声仪器有限公司)。
本发明所用试剂与材料如下：
芦荟苷(YJ-110787)，芦荟大黄素(A575400)，靛玉红(I521350)纯度均为HPLC≥98％；甲醇(色谱级)；乙腈(色谱级)；磷酸；新复方芦荟胶囊(河北万邦复临药业有限公司，批号：LH201917，LH201901，LH201918)。
本发明提供的一种同时检测新复方芦荟胶囊中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的方法，包括以下步骤：
1.对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的芦荟苷、芦荟大黄素和靛玉红对照品，制成混合标准品储备溶液，于4℃保存；
2.供试品溶液的制备
取去胶囊壳的新复方芦荟胶囊，溶解、超声和萃取制成新复方芦荟胶囊供试品溶液；
3.线性回归方程的建立
取步骤1的混合标准品储备溶液，制备系列浓度的混合对照品溶液，过0.45μm微孔滤膜，依次注入高效液相色谱仪，梯度洗脱，利用高效液相色谱仪工作站，以系列对照品浓度作为横坐标X，对应的峰面积为纵坐标Y，对各化学成分进行线性回归分析并计算线性回归方程；
4.含量测定
取步骤2制成的新复方芦荟胶囊供试品溶液，注入高效液相色谱仪，梯度洗脱，利用高效液相色谱仪工作站对结果进行分析，将峰面积代入步骤3的线性回归方程，计算供试品溶液中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的含量。
本发明提供的一种同时检测新复方芦荟胶囊中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的方法的具体检测步骤如下：
1.对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的芦荟苷0.0050g、芦荟大黄素0.0059g和靛玉红0.0050g，置于50mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，配制成浓度分别为100μg/mL、118μg/mL和100μg/mL的混合标准品储备溶液，4℃保存，进样前，过0.45μm微孔滤膜。
2.供试品溶液的制备
精密称定去胶囊壳的新复方芦荟胶囊1.0000g，精密量取25mL的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶解，超声提取1h，自然冷却至室温，过滤，取滤液10mL，加五倍量的水进行稀释，用20mL的乙酸乙酯进行萃取，重复萃取两次，合并上层液，制成新复方芦荟胶囊供试品溶液，进样前，过0.45μm微孔滤膜。
3.线性回归方程的建立
取步骤1制备的混合标准品储备溶液，加甲醇逐步稀释成系列浓度的混合标准品溶液，所得芦荟苷浓度如下：10、20、40、80和100μg/mL；芦荟大黄素浓度如下：11.8、23.6、47.2、94.4和118μg/mL；靛玉红浓度如下：10、20、40、80和100μg/mL。将配制溶液过0.45μm微孔滤膜依次注入岛津-LabSolutions(日本岛津LC-20)，梯度洗脱。其中，液相色谱条件如下：
色谱柱：Hypersil C18 ODS，4.6×250mm
检测波长：300nm
柱温：30℃
流速：0.8mL/min
进样体积：10μL
流动相：0.08％磷酸水溶液(A相)和乙腈(B相)
梯度洗脱条件见表1：
表1梯度洗脱条件
得到的HPLC色谱图如图1，测得三种系列对照品浓度的峰面积见表2：
表2三种系列对照品浓度峰面积
以系列对照品浓度作为横坐标X，对应的峰面积为纵坐标Y，三种对照品的线性回归方程见表3：
表3对照品的线性回归方程
所得芦荟苷、芦荟大黄素和靛玉红的标准曲线见图2-图4。
4.含量测定
所用仪器、对照品溶液的制备方法、供试品溶液的制备方法以及液相色谱条件均同上，取5批步骤2制成的新复方芦荟胶囊供试品溶液，注入岛津-LabSolutions(日本岛津LC-20)进行分析，得到的HPLC色谱图如图5，将峰面积代入步骤3得到的线性回归方程中，计算供试品溶液中荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的含量，结果见表4：
表4荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的含量
对本发明提供的一种同时检测新复方芦荟胶囊中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的方法进行方法学考察：
(1)精密度
按上述方法制备得到的对照品溶液1份，按照上述检测方法分析，平行进样6次，进样量为10μL，通过分析样品HPLC图谱的峰面积及保留时间并计算RSD值，结果见表5，计算RSD均小于3％，结果表明该设备的平行进样精密性良好。
表5精密度研究峰面积和保留时间
(2)重复性
按上述方法制备得到供试品溶液6份，按照上述检测方法分析，进样量为10μL，通过分析样品HPLC图谱的峰面积及保留时间并计算RSD值，结果见表6，计算RSD均小于3％，结果表明样品色谱峰重现性好，该方法的重复性良好。
表6重复性研究峰面积和保留时间
(3)稳定性
按上述方法制备得到供试品溶液1份，按照上述检测方法分别在0、2、4、8、12和24h进行分析，进样量为10μL，通过分析样品HPLC图谱的峰面积及保留时间并计算RSD值，结果见表7，计算RSD均小于3％，表明新复方芦荟胶囊供试品溶液在室温下24h之内的色谱峰几乎没有变化，稳定性好。
表7稳定性研究峰面积和保留时间
(4)加样回收率
精密加入与待测成分等量的对照品，按上述方法制备得到供试品溶液6份，按照上述检测方法分析，进样量为10μL，通过分析样品HPLC图谱的峰面积及保留时间并计算RSD值，结果见表8，计算RSD均小于3％，其中芦荟苷的加样回收率在98.333％～103.380％之间，RSD为1.898％；芦荟大黄素的加样回收率在97.070％～101.623％之间，RSD为1.620％；靛玉红的加样回收率在99.702％～104.450％之间，RSD为1.667％，表明该方法准确性良好。
表8三个成分的加样回收率
对本发明提供的一种同时检测新复方芦荟胶囊中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的方法进行***适应性试验：
按上述方法制备得到供试品溶液，按照上述检测方法进样分析，对三种品牌色谱柱Extend C18，4.6×250mm、Hypersil C18 ODS，4.6×250mm和Kromasil 100-5-C18，4.6×250mm的耐用性进行考察，通过分析样品HPLC图谱的峰面积及保留时间计算含量，计算RSD。结果见表9，计算RSD均小于5％，芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的含量RSD分别为：2.597％、1.742％、2.351％，表明在不同的色谱柱中，三种成分分离较好，测定结果基本一致，耐用性良好。
表9不同品牌色谱柱方法耐用性试验结果
实施例1
供试品溶液制备方法的优化比较，按以下方法进行。
1.对照品溶液的制备
对照品溶液的制备步骤同上述具体检测步骤。
2.供试品溶液的制备
精密称定去胶囊壳的新复方芦荟胶囊1.0000g，分别精密量取25mL的DMF、甲醇、乙醇、氯仿，按照表10所示方法进行处理1h，处理结束后自然冷却至室温，用所用溶剂补足减失重量，过滤，进样前，过0.45μm微孔滤膜。
表10供试品溶液制备方法的优化
3.含量测定
取实施例1项下用不同溶剂所制备的供试品溶液，注入岛津-LabSolutions(日本岛津LC-20)进行分析，液相色谱条件同上述具体检测步骤。通过目标成分含量与整体色谱图的综合考察，选择最终的提取方式，结果见表11：
表11不同溶剂溶解新复方芦荟胶囊芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的含量
结果表明，新复方芦荟胶囊中成分较为复杂，且有些成分极性相近难以分离，使用甲醇、乙醇以及氯仿作溶剂时，由于非目标成分峰较高且分离度差，使得色谱图整体基线上漂，芦荟大黄素无明显峰，使用DMF超声提取直接进样也会有同样的问题，但是DMF能够使芦荟大黄素的提取量增大，因此我们选择使用DMF为溶剂进行提取，考虑到实验安全以及操作简便的问题，我们选择使用超声提取。
供试品溶液的制备方法为：精密称取去胶囊壳的新复方芦荟胶囊1.0000g，精密量取25mL的DMF超声处理1h，处理结束后自然冷却至室温，补重后取续滤液10mL，加入5倍量的水进行稀释后使用乙酸乙酯进行萃取，每次20mL，萃取2次。合并上层萃取液，过滤，进样前，过0.45μm微孔滤膜。
实施例2
用于不同液相色谱条件中流动相的比较，按以下方法进行。
1.对照品溶液的制备
对照品溶液的制备步骤同上述具体检测步骤。
2.供试品溶液的制备
供试品溶液的制备步骤同上述具体检测步骤。
3.含量测定
取5批供试品溶液，注入岛津-LabSolutions(日本岛津LC-20)进行分析，液相色谱条件如下，比较不同的流动相体系的洗脱效果，四种流动相体系如下：
色谱柱：Hypersil C18 ODS，4.6×250mm
检测波长：300nm
柱温：30℃
流速：0.8mL/min
进样体积：10μL
流动相：(1)0.08％磷酸水溶液(A相)和乙腈(B相)
(2)0.1％磷酸水溶液(A相)和乙腈(B相)
(3)水(A相)和乙腈(B相)
(4)水(A相)和甲醇(B相)
梯度洗脱条件同上述具体检测步骤。
将峰面积代入上述具体检测步骤3得到的线性回归方程中，计算四种流动相条件下新复方芦荟胶囊的含量求平均值，结果见表12：
表12不同流动相进样时芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的含量
结果表明，使用流动相(1)即0.08％磷酸水溶液(A相)和乙腈(B相)时，新复方芦荟胶囊中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的含量最高且整体出峰情况好。因此，选用0.08％磷酸水溶液(A相)和乙腈(B相)作为流动相。
实施例3
用于不同液相色谱条件中流速的比较，按以下方法进行。
1.对照品溶液的制备
对照品溶液的制备步骤同上述具体检测方法。
2.供试品溶液的制备
供试品溶液的制备步骤同上述具体检测方法。
3.含量测定
取5批步骤2制成的新复方芦荟胶囊供试品溶液，注入岛津-LabSolutions(日本岛津LC-20)进行分析，液相色谱条件如下，用三种不同流速分别进样：
色谱柱：Hypersil C18 ODS，4.6×250mm
检测波长：300nm
柱温：30℃
流速：1.0mL/min；0.8mL/min；0.5mL/min
进样体积：10μL
流动相：0.08％磷酸水溶液(A相)和乙腈(B相)
梯度洗脱条件同上述具体检测方法：
将峰面积代入上述具体检测方法的步骤3得到的线性回归方程中，计算三种流速下新复方芦荟胶囊的含量求平均值，结果见表13：
表13不同检测波长进样时芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的含量
结果表明，流速为0.8mL/min时，新复方芦荟胶囊中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的色谱峰峰形较好，与杂质的分离情况较1mL/min时更好，所测得的三种成分的含量较高且所需时间较0.5mL/min时更短。因此，选用0.8mL/min作为洗脱流速。
以上实验结果表明，本发明提供的一种同时检测新复方芦荟胶囊中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的方法，灵敏度高，稳定性好，精密度高，重复性好，能客观、全面、准确地评价新复方芦荟胶囊的质量，实现对新复方芦荟胶囊中多个指标成分的控制，可用于新复方芦荟胶囊的质量标准提升，为保证临床疗效具有重要的意义。
以上内容仅为说明本发明的技术思想，不能以此限定本发明的保护范围，凡是按照本发明提出的技术思想，在技术方案基础上所做的任何改动，均落入本发明权利要求书的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种同时检测新复方芦荟胶囊中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
S1、对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的芦荟苷、芦荟大黄素和靛玉红对照品，制成混合标准品储备溶液，于4℃保存；
S2、供试品溶液的制备
取去胶囊壳的新复方芦荟胶囊，溶解、超声和萃取制成新复方芦荟胶囊供试品溶液；
S3、线性回归方程的建立
取S1的混合标准品储备溶液，制备系列浓度的混合对照品溶液，过0.45μm微孔滤膜，依次注入高效液相色谱仪，梯度洗脱，利用高效液相色谱仪工作站，对各化学成分进行线性回归分析并计算线性回归方程；
S4、含量测定
取S2的新复方芦荟胶囊供试品溶液，注入高效液相色谱仪，梯度洗脱，利用高效液相色谱仪工作站对结果进行分析，将峰面积代入S3所得的线性回归方程，计算供试品溶液中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的含量；
其中，S3和S4中，高效液相色谱仪的流动相为0.08％磷酸水溶液-乙腈。
2.根据权利要求1所述的一种同时检测新复方芦荟胶囊中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的方法，其特征在于，0.08％磷酸水溶液为A相，乙腈为B相，梯度洗脱条件如下：
3.根据权利要求1所述的一种同时检测新复方芦荟胶囊中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的方法，其特征在于，S1对照品溶液的具体制备方法为：精密称取干燥至恒重的芦荟苷、芦荟大黄素和靛玉红，采用甲醇溶液配制成浓度分别为100μg/mL、118μg/mL和100μg/mL的混合标准储备溶液，4℃保存，进样前，过0.45μm微孔滤膜。
4.根据权利要求1所述的一种同时检测新复方芦荟胶囊中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的方法，其特征在于，S2中，溶解用DMF。
5.根据权利要求1所述的一种同时检测新复方芦荟胶囊中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的方法，其特征在于，S2中，超声提取后进一步水洗再萃取。
6.根据权利要求1所述的一种同时检测新复方芦荟胶囊中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的方法，其特征在于，S3和S4中，高效液相色谱仪的检测波长为300nm。
7.根据权利要求1所述的一种同时检测新复方芦荟胶囊中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的方法，其特征在于，S3和S4中，高效液相色谱仪的柱温为30℃。
8.根据权利要求1所述的一种同时检测新复方芦荟胶囊中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的方法，其特征在于，S3和S4中，高效液相色谱仪的梯度洗脱流速为0.8mL/min。
9.根据权利要求1所述的一种同时检测新复方芦荟胶囊中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的方法，其特征在于，S3和S4中，高效液相色谱仪的色谱柱为Hypersil C18 ODS，4.6×250mm。
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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