CN114886830B - 以海水珍珠为原料的头皮/头发/皮肤修护组合物、制备方法及其应用 - Google Patents
以海水珍珠为原料的头皮/头发/皮肤修护组合物、制备方法及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了以海水珍珠为原料的头皮/头发/皮肤修护组合物、制备方法及其应用，包括制备珍珠粉、制备海水珍珠提取物、制备水解海水珍珠、制备水解蚕丝蛋白，将珍珠粉：海水珍珠提取物：水解海水珍珠：水解蚕丝蛋白按照质量比(0.01～2):(8～12):(8～12):(4～6)的比例混合。本发明将珍珠粉、海水珍珠提取物、水解海水珍珠、水解蚕丝蛋白复配，使得多种功能组分复配互补，具有较强的受损发质修复功能，以及调节头皮皮脂腺活性、抑制5α‑还原酶的作用，具有明显的抗氧化、抗炎功效，同时，水解海水珍珠具有保湿、修复皮肤屏障的功效。
Description
技术领域
本发明属于化妆品组合物技术领域，具体涉及以海水珍珠为原料的头皮/头发/皮肤修护组合物、制备方法及其应用。
背景技术
珍珠药用在中国已有2000余年历史，明代李时珍更加重视珍珠的药理作用，认为珍珠的药效在美肤，因而在《本草纲目》中特别写道：“珍珠味成甘寒无毒，镇心点目：珍珠涂面，令人润泽好颜色。涂手足，去皮肤逆：坠痰,除面斑,止泻除小儿惊热，安魂魄：止遗精白浊，解痘疗毒。光泽洁白等同时，它还记载了珍珠药用的多种方法。明代陈继儒转引《独异志》说，唐武宗李炎在位时，宰相李德裕以珠宝粉、雄黄、朱砂煎汁为羹，每食一杯约耗钱三万，过三煎则弃其渣。当时流行炼丹术，人们认为，珍珠粉、雄黄等物，经过提炼后服用可长生不老，鹤发童颜。
海水珍珠粉含丰富的脂肪醇，易被人体表皮细胞吸收，增强细胞活力，促进细胞新陈代谢。而且珍珠粉能促使人体的胶原细胞生长，当有外伤、创口时，能促使胶原细胞生长填补空隙，连接组织，促使肌肤再生，保持肌肤柔嫩润白，光滑完整，海水珍珠项链紧贴人的颈部，对体液分泌有一定吸收能力，皮肤对珍珠药物成分也有吸收，乃至影响局部患处，起消炎治疗作用，珍珠粉有碳酸钙、氧化钙、磷酸钙、硫酸钙以及镁、锰、铜、碘、磷、锶、铅、钠、钾等多类元素和十几类氨基酸，在医学上具有危神定惊、清热害阴、明目解毒、收口生肌等功效。
发明内容
本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。
本发明提供一种以海水珍珠为原料的头皮/头发/皮肤修护组合物的制备方法：
制备珍珠粉：将海水珍珠投入超微粉碎机粉碎至粒径为10～15微米的粗粉，再经气流粉碎到平均粒径为2～3微米的海水珍珠粉末，将海水珍珠粉末放入到增压装置中，加入粉末重量15～25％的水，增压后，瞬间减压，取出，将得到的珍珠粉与水按照调成珠浆，进行湿法研磨，得到的珍珠粉，过滤烘干，得到亮白色的珍珠粉；
制备海水珍珠提取物：将所述珍珠粉加入到质量浓度为3～5％的乳酸水溶液中浸泡1～3h，过滤，收取滤渣，用蒸馏水反复冲洗，进行湿法研磨，烘干，高速粉碎机进行二次粉碎，得到海水珍珠提取物；
制备水解海水珍珠：配制pH＝7.0～7.5的0.1～0.4mg/mL的链丝菌蛋白酶溶液，加入所述珍珠粉，链丝菌蛋白酶占珍珠粉质量的0.1～0.2％，40～45℃酶解1～3h,加热灭酶，调节pH至5.5～6.5，加入占珍珠粉质量0.1～0.2％的复合酶，复合酶为脱苦蛋白酶与菠萝蛋白酶按照1～2：1的比例复配，50～55℃酶解2～3h后,加热灭酶，减压蒸发浓缩，冷冻干燥，得到水解海水珍珠；
制备水解蚕丝蛋白：
将珍珠粉：海水珍珠提取物：水解海水珍珠：水解蚕丝蛋白按照质量比(0.01～2):(8～12):(8～12):(4～6)的比例混合。
作为本发明所述的以海水珍珠为原料的头皮/头发/皮肤修护组合物的制备方法的优选方案：所述制备珍珠粉，为将海水珍珠投入超微粉碎机粉碎至粒径为10～15微米的粗粉，再经气流粉碎到平均粒径为2～3微米的海水珍珠粉末，将海水珍珠粉末放入到增压装置中，加入粉末重量20％的水，增压至0.5MP，维持4～5h后，瞬间减压，取出，将得到的珍珠粉与水按照质量比1：4～5的比例调成珠浆，进行湿法研磨，得到粒径10～100nm的珍珠粉，过滤烘干，得到亮白色的珍珠粉。
作为本发明所述的以海水珍珠为原料的头皮/头发/皮肤修护组合物的制备方法的优选方案：所述制备海水珍珠提取物，为所述珍珠粉加入到质量浓度为4％的乳酸水溶液中浸泡2～3h，过滤，收取滤渣，用蒸馏水反复冲洗，进行湿法研磨，烘干，高速粉碎机进行二次粉碎，得到亮白色的海水珍珠提取物。
作为本发明所述的以海水珍珠为原料的头皮/头发/皮肤修护组合物的制备方法的优选方案：所述制备海水珍珠提取物，为将链丝菌蛋白酶用pH7.5的磷酸盐缓冲溶液配置成0.2mg/mL的链丝菌蛋白酶溶液，加入所述珍珠粉，链丝菌蛋白酶占珍珠粉质量的0.16％，40℃酶解2～3h,加热灭酶，调节pH至6，加入占珍珠粉质量0.2％的复合酶，复合酶为脱苦蛋白酶与菠萝蛋白酶按照2：1的比例复配，55℃酶解3～4h后,加热灭酶，减压蒸发浓缩，冷冻干燥，得到水解海水珍珠。
作为本发明所述的以海水珍珠为原料的头皮/头发/皮肤修护组合物的制备方法的优选方案：所述制备水解蚕丝蛋白，为将蚕丝放入质量分数1～2％的碳酸钠水溶液中煮沸30～40min,脱去丝胶,过滤烘干，将脱去丝胶后的蚕丝与pH6.5的0.1mol/L磷酸水溶液按照g:ml为1：20-1：40混合，加入800U/g的中性蛋白酶，在45℃下水解4h，过滤调节pH＝7得到水解蚕丝蛋白，减压蒸发浓缩，冷冻干燥，水解蚕丝蛋白。
作为本发明所述的以海水珍珠为原料的头皮/头发/皮肤修护组合物的制备方法的优选方案：将珍珠粉：海水珍珠提取物：水解海水珍珠：水解蚕丝蛋白按照质量比0.02～1:10:10:5的比例混合。
作为本发明的另一个方面，本发明还提供所述的方法制备得到的以海水珍珠为原料的头皮/头发/皮肤修护组合物。
作为本发明的另一个方面，本发明还提供所述的以海水珍珠为原料的头皮/头发/皮肤修护组合物在化妆品中的应用：所述组合物用于制备包括洗发水、护发素、头皮护理液、乳液、面霜、沐浴露、面膜、洁面产品中的一种或几种的化妆品，所述组合物能够具有较强的受损发质修复功能，并能够调节头皮皮脂腺活性、抑制5α-还原酶的作用，同时具有明显的抗氧化、抗炎功效，以及保湿、修复皮肤屏障的作用。
本发明的有益效果：本发明将珍珠粉、海水珍珠提取物、水解海水珍珠、水解蚕丝蛋白复配，使得多种功能组分复配互补，具有较强的受损发质修复功能，以及调节头皮皮脂腺活性、抑制5α-还原酶的作用，具有明显的抗氧化、抗炎的功效，同时，水解海水珍珠具有保湿、修复皮肤屏障的功效。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：
图1为使用实施例1组合物前后头皮含水量变化示意图。
图2为使用实施例1前后头皮经皮失水变化示意图(g/m2h)。
图3为部分志愿者使用实施例1组合物前后头皮敏感情况图。
图4为各实施例产品皮肤保湿功效测试
图5为各实施例产品头皮5α-还原酶抑制率测试。
图6为DPPH清除率实验结果图。
图7为使用各实施例1产品后头发抗拉强度测试。
图8为IL-6表达量图。
图9为对照例7的经皮失水变化示意图。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。
实施例1：
制备组分A：珍珠粉：选择无污染的海水珍珠，除去死珠及杂质，珍珠用清水洗净、滤干、低温烘干，将珍珠投入超微粉碎机粉碎至粒径为10-15微米的粗粉，再经气流粉碎到平均粒径为2-3微米的海水珍珠粉末，将海水珍珠粉末放入到增压装置中，加入粉末重量20％的水，增压至0.5MP，维持4h后，瞬间减压，取出，将得到的珍珠粉与水按照1：4(m/m)的比例调成珠浆，进行湿法研磨，得到粒径10-100nm的珍珠粉，过滤烘干，得到组分A：亮白色的珍珠粉；
制备组分B：海水珍珠提取物：将所述珍珠粉加入到质量浓度为4％的乳酸水溶液中浸泡2h，过滤，收取滤渣，用蒸馏水反复冲洗，进行湿法研磨，烘干，高速粉碎机进行二次粉碎，即得组分B：亮白色的海水珍珠提取物；
制备组分C：水解海水珍珠：将链丝菌蛋白酶用pH7.5的磷酸盐缓冲溶液配制成0.2mg/mL的链丝菌蛋白酶溶液，加入所述珍珠粉，链丝菌蛋白酶占珍珠粉质量的0.16％，40℃酶解2h,加热灭酶，调节pH至6，加入占珍珠粉质量0.2％的复合酶，复合酶为脱苦蛋白酶与菠萝蛋白酶按照2：1的比例复配，55℃酶解3h后,加热灭酶，减压蒸发浓缩，冷冻干燥，得到组分C：水解海水珍珠；
制备组分D：水解蚕丝蛋白：将蚕丝放入质量分数1％的碳酸钠水溶液中煮沸30min,脱去丝胶,过滤烘干，将脱去丝胶后的蚕丝与pH6.5的0.1mol/L磷酸水溶液按照1：20-1：40(g:ml)混合，加入800U/g的中性蛋白酶，在45℃下水解4h，过滤调节pH＝7得到水解蚕丝蛋白，减压蒸发浓缩，冷冻干燥，得到组分D：水解蚕丝蛋白。
将组分A、B、C、D按照质量比1：10：10：5混合均匀，得到头皮/头发/皮肤修护组合物。将所述头皮/头发/皮肤修护组合物按照表1配制成溶液。
表1组合物配方
| 原料 | 质量分数(wt％) |
| 去离子水 | 至100 |
| 组分A | 1 |
| 组分B | 10 |
| 组分C | 10 |
| 组分D | 5 |
| 卡波姆940 | 0.3 |
测试方法：
DPPH清除自由基实验：DPPH液配制：1mg DPPH用少量无水乙醇溶解后蒸馏水定容至1L，避光保存，取一定量待测物质加入到2.5mL 50μg/
mL的DPPH无水乙醇溶液中，室温下放置30min后，于515nm波长处测定溶液的吸光度。由下式计算清除效应：
S(％)＝[A0-(A-A1)]×100％/A0
式中：S为DPPH自由基清除率，A0为515nm波长处DPPH的无水乙醇溶液吸光度；A为515nm波长处清楚30min后混合液的吸光度；A1为515nm波长处样品本身的吸光度。
5α-还原酶抑制实验：5α-还原酶是定位于靶细胞微粒体上的膜蛋白，在雄激素脱发的发展中起着重要作用。雄激素与受体结合后，发生复杂的酶促反应，间接地改变头发生长进程。5α-还原酶有3种同工酶，即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型。Ⅰ型5α-还原酶存在于皮肤皮脂腺、汗腺、毛***细胞、成纤维细胞、表皮角质形成细胞、毛囊角质形成细胞等皮肤组织中。而Ⅱ型5α-还原酶主要存在于***、生殖皮肤、附睾、精囊等组织中。依赖于还原型辅酶Ⅱ将睾酮转变为二氢睾酮(DHT)，高水平的二氢睾酮易引起雄激素依赖型疾病，通过抑制5α-还原酶活性来下调雄激素水平成为治疗雄激素性脱发的重要方法。5α-还原酶抑制剂的优势在于选择性阻断二氢睾酮合成，不影响睾酮的正常水平和生理功能。目前研究的5α-还原酶抑制剂可分为天然植物来源的成分及化学合成的甾体类、吡啶类、喹啉酮、苯氧丁酸类化合物。可以以5α-还原酶活性为靶点，筛选高效的抑制剂。
5α-还原酶的制备：将SPF级小鼠/大鼠禁食不禁水过夜后处死，迅速取肝脏及附睾(剥离脂肪组织)，称重，生理盐水漂洗、剪碎，加入5倍预冷的匀浆液[0.32mol/l蔗糖，1mmol/l DTT，1mmol/l EDTA，20mmol/l PBS(肝脏pH＝7.5；附睾pH＝5.5。]在玻璃匀浆器中匀浆。匀浆液于4℃及3000g离心10min，取上清液再以4℃及10000g离心60min，取上清液即为粗酶，分装，保存于-80℃超低温冰箱中，临用前取出，避免反复冻融。
采用Lowry法蛋白含量检测试剂盒测定蛋白含量或者考马斯亮蓝实验定量，以粗酶中的总蛋白含量表示5α-还原酶的浓度，操作按照试剂盒说明书进行。
考马斯亮蓝G250溶液的配制：精确称取100mg考马斯亮蓝G250，加入50ml 95％乙醇溶液。溶液呈蓝色，搅拌溶解，再加入85％(W/V)磷酸100ml搅拌，溶液呈血红色，最后用去离子水定容至1000ml，溶液变为褐色，在磁力加热搅拌器上搅拌过夜，用滤纸过滤备用。用PBS将BSA蛋白标准品梯度稀释至0.0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、50.0μg/ml。依次向96孔板中加入50μl各浓度的BSA溶液，再依次向每孔中加入150μl的考马斯亮蓝G250溶液，放入多功能酶标仪震荡5min，测595nm处吸光值。以BSA浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标绘制Bradford蛋白标准曲线。
稀释粗酶提取液至合适倍数，用Bradford法测粗酶提取液的蛋白质质量浓度，蛋白质质量浓度视为5α-还原酶的含量。
活性物对Ⅱ型5α-还原酶的抑制活性研究：按照下述反应体系进行加样，37℃孵育一定时间，加入2ml预冷甲醇终止反应，混匀，10000r/min离心5min，取上清液并用0.22μm滤膜过滤，用多功能酶标仪测个样品孔的吸光度值；或者检测个样品中睾酮剩余浓度。
表1 5α-还原酶抑制活性研究反应体系
| 试剂 | 空白对照管 | 样品管 | 阳性对照管 | 阴性对照管 |
| 磷酸盐缓冲液/μl | 300 | 300 | 300 | 300 |
| 5α-还原酶粗酶液/μl | 500 | 500 | 500 | 500 |
| 睾酮/μl | 50 | 50 | 50 | 50 |
| 75％乙醇/μl | 50 | / | 50 | / |
| 样品液/μl | / | 50 | / | / |
| 非那雄胺/μl | / | / | 50 | / |
| NADPH/μl | 100 | 100 | 100 | 100 |
| 反应时长/t | t | t | t | t |
| 甲醇(预冷) | 2000 | 2000 | 2000 | 2000 |
志愿者实验：按照要求招募入组志愿受试者，签署书面知情同意书。入组前根据入选和排除标准等询问受试者一系列关于疾病史、健康状况等问题，对入选受试者进行使用产品前头皮状况评估和图像拍摄，并记录。
本测试纳入30名年龄20-50岁头皮敏感受试者，最终有效受试者人数为30名。志愿者进入恒温恒湿评价室静坐30min进行测试，每天取0.2ml珍珠原液涂抹头皮固定2*2cm2区域；产品使用14天再次进行相同的评估和测试，实验结果为：图1为使用前后头皮含水量变化示意图，*表示与使用前相比，有显著性差异，*p<0.05，***p<0.001。图2为使用前后经皮失水变化示意图(g/m2h)。图3为部分志愿者使用本发明组合物前后头皮敏感情况图。与使用样品前相比，30名受试者在使用样品后可以得出如下结论：1)使用样品14天后，头皮角质层含水量显著提高，具有显著性差异，头皮经皮失水情况显著下降，具有即时的补水效果。2)该测试样品具有舒缓头皮泛红的功效，使用样品14天后，志愿者的头皮泛红现象明显减轻(见图3)。
对照例1：
制备组分A：珍珠粉：选择无污染的海水珍珠，除去死珠及杂质，珍珠用清水洗净、滤干、低温烘干，将珍珠投入超微粉碎机粉碎至粒径为10-15微米的粗粉，再经气流粉碎到平均粒径为2-3微米的海水珍珠粉末，将海水珍珠粉末放入到增压装置中，加入粉末重量20％的水，增压至0.5MP，维持4h后，瞬间减压，取出，将得到的珍珠粉与水按照1：4(m/m)的比例调成珠浆，进行湿法研磨，得到粒径10-100nm的珍珠粉，过滤烘干，得到组分A：珍珠粉；
制备组分B：海水珍珠提取物：将所述珍珠粉加入到质量浓度为4％的乳酸水溶液中浸泡2h，过滤，收取滤渣，用蒸馏水反复冲洗，进行湿法研磨，烘干，高速粉碎机进行二次粉碎，即得组分B：海水珍珠提取物；
制备组分C：水解海水珍珠：将链丝菌蛋白酶用pH7.5的磷酸盐缓冲溶液配置成0.2mg/mL的链丝菌蛋白酶溶液，加入所述珍珠粉，链丝菌蛋白酶占珍珠粉质量的0.16％，40℃酶解2h,加热灭酶，调节pH至6，加入占珍珠粉质量0.2％的复合酶，复合酶为脱苦蛋白酶与菠萝蛋白酶按照2：1的比例复配，55℃酶解3h后,加热灭酶，减压蒸发浓缩，冷冻干燥，得到组分C：水解海水珍珠；
制备组分D：市售角蛋白。
将组分A、B、C、D按照质量比1：10：10：5混合均匀，按照实施例1表1配制成溶液。
对照例2：
制备组分A：珍珠粉：选择无污染的海水珍珠，除去死珠及杂质，珍珠用清水洗净、滤干、低温烘干，将珍珠投入超微粉碎机粉碎至粒径为10-15微米的粗粉，再经气流粉碎到平均粒径为2-3微米的海水珍珠粉末，将海水珍珠粉末放入到增压装置中，加入粉末重量20％的水，增压至0.5MP，维持4h后，瞬间减压，取出，将得到的珍珠粉与水按照1：4(m/m)的比例调成珠浆，进行湿法研磨，得到粒径10-100nm的珍珠粉，过滤烘干，得到组分A：珍珠粉；
制备组分B：海水珍珠提取物：将所述珍珠粉加入到质量浓度为4％的乳酸水溶液中浸泡2h，过滤，收取滤渣，用蒸馏水反复冲洗，进行湿法研磨，烘干，高速粉碎机进行二次粉碎，即得组分B：海水珍珠提取物；
制备组分C：水解海水珍珠：将木瓜蛋白酶用pH6.0的磷酸盐缓冲溶液配置成0.2mg/mL的木瓜蛋白酶溶液，加入所述珍珠粉，木瓜蛋白酶珍珠粉质量的0.36％，55℃酶解5h后,加热灭酶，减压蒸发浓缩，冷冻干燥，得到组分C：水解海水珍珠；
制备组分D：水解蚕丝蛋白：将蚕丝放入质量分数1％的碳酸钠水溶液中煮沸30min,脱去丝胶,过滤烘干，将脱去丝胶后的蚕丝与pH6.5的0.1mol/L磷酸水溶液按照1：20-1：40(g:ml)混合，加入800U/g的中性蛋白酶，在45℃下水解4h，过滤调节pH＝7得到水解蚕丝蛋白，减压蒸发浓缩，冷冻干燥，得到组分D：水解蚕丝蛋白。
对照例3：
将实施例1的组分C水解海水珍珠替换为聚谷氨酸，其他制备方法与实施例1相同。
对照例4：
将实施例1的组分组分B海水珍珠提取物替换为贝壳硬蛋白粉，其他制备方法与实施例1相同。
各实施例产品皮肤保湿功效测试：本测试纳入30名志愿者，最终有效受试者人数为30名。志愿者进入恒温恒湿评价室清洗手臂静坐30min进行测试，每人取0.2ml样品涂抹左前臂2*2cm2区域，涂抹后1、2、4、8h分别进行测试。30名志愿者未报告不良反应。实验结果如图4所示，5款样品均有保湿能力，其中实施例1的保湿效果在所有样品中表现最优。
各实施例产品头皮5α-还原酶抑制率测试结果见图5。实施例1组合物的5α-还原酶抑制率为79.01％，对照例4的5α-还原酶抑制率为68.34％(P＜0.001)。
DPPH清除率实验：如图6所示，实施例1组合物的DPPH清除率达到93.7％，对照例1的DPPH清除率为80.67％(P＜0.01)具有显著性差异，对照例3的DPPH清除率76.17％(P＜0.01)具有显著性差异。
头发强韧性测试：
实验发束：Highly damaged Chinese(中国人重度受损发束，多次漂白)，18cmx1g，上海灿钰公司；人发制假发片，40cm x 25g，杭州备羽飞贸易有限公司。
使用器材：XS(08)XT-3碳纤维强力测试仪，上海旭赛仪器有限公司；HF5恒温恒湿机组，可林艾尔精密空调***(苏州)股份有限公司。
环境条件：试验结果观察应在温度为21±1℃、相对湿度为50±10％RH的环境下进行，视觉评估应在恒定光照条件(色温5500～6500K的日光灯管或LED光照)下进行。
实验方法：选取重度受损发束，在温度(25±2)℃，湿度(50±5)％恒温恒湿条件下储存。实验组发束使用定量产品涂抹三分钟，并用温水冲去，每次温水冲洗均用手使用相近力道捋发十次，此后在恒温恒湿条件下晾干，此为一次操作。每组发丝使用产品处理五次。对照组为未经处理的发束。在恒温恒湿条件下储存12h后进行拉伸测试。使用SN—1200W高清相机测量发丝的直径，具体方法为取中段3个位置的直径取平均值。取发束中的30根直径差距在10μm内的发丝使用纤维强力测试仪进行单纤维强力测试，通过以下公式计算并比较对照组和各样品组头发抗拉伸强度：
σ＝Fb/So
式中σ为抗拉强度、Fb为试样拉断时所承受的最大力、So为试样原始横截面积。如图7所示，使用各实施例1产品后，相比于对照组，发丝强韧性上升22.13％，P＜0.01存在显著性差异，本组合物具有提升发丝强韧性的功效。
对照例5:
制备组分A：珍珠粉：选择无污染的海水珍珠，除去死珠及杂质，珍珠用清水洗净、滤干、低温烘干，将珍珠投入超微粉碎机粉碎至粒径为10-15微米的粗粉，再经气流粉碎到平均粒径为2-3微米的海水珍珠粉末，将得到的粉末与水按照1：4(m/m)的比例调成珠浆，进行湿法研磨，得到珍珠粉，过滤烘干，得到组分A：淡紫色的珍珠粉，略带腥味；
制备组分B：海水珍珠提取物：将所述珍珠粉加入到质量浓度为4％的乳酸水溶液中浸泡2h，过滤，收取滤渣，用蒸馏水反复冲洗，进行湿法研磨，烘干，高速粉碎机进行二次粉碎，即得组分B：淡紫色的海水珍珠提取物。
对照例5得到的珍珠粉和海水珍珠提取物，色泽为淡紫色，略带腥味，实施例1技术方案增大了海水珍珠颗粒的比表面积，制备的珍珠粉末细小、多孔，明显改善了海水珍珠粉末的色泽，同时有利于去除海水珍珠的腥味，实施例1得到的珍珠粉无腥味。
对照例6:
将实施例1的组分A替换为牛磺酸，其他制备方法与实施例1相同，将组分A、B、C、D按照质量比0.02：10：10：5混合均匀，按照表1配制成溶液。
对照例7：
将实施例1的海水珍珠替换为淡水珍珠，制备方法与实施例1相同。将组分A、B、C、D按照质量比1：10：10：5混合均匀，按照表1配制成溶液。
LPS诱导Hacat细胞释放炎症因子：给予HaCat细胞体积分数0.5‰的待测样品孵育细胞24小时，随后加入1μg/ml LPS作用细胞6小时，孵育24小时候，收集细胞培养上清液，采用试剂盒分别测定上清液中IL-6炎症因子的含量。如图8所示，实施例1样品对LPS诱导的炎症因子IL-6具有抑制作用。相较模型组，实施例1的IL-6分泌量降低了34％(P＜0.001)，对照例6的IL-6分泌量降低了21％(P＜0.01)，对照例7的IL-6分泌量降低了19％(P＜0.01)。
30名志愿者进入恒温恒湿评价室清洗手臂静坐30min进行测试，每人取0.2ml样品涂抹左前臂2*2cm2区域，涂抹后1、2、4、8h分别进行测试。30名志愿者未报告不良反应。皮肤经皮失水示数变化率见图9所示。
相比于淡水珍珠，本发明选用的海水珍珠含有约0.02％的牛磺酸等功能组分，并且含有多种蛋白质如壳角蛋白，以及酪氨酸、精氨酸、天门冬氨酸、赖氨酸、甘氨酸、L-半胱氨酸等多种氨基酸活性组分，以及含有碳酸钙和钠、钾、磷等矿物宏量元素以及铁、锌、碘、硒、锗、等多种人体需要的微量元素，本发明将珍珠粉、海水珍珠提取物、水解海水珍珠、水解蚕丝蛋白复配，相比于单一组分，多种功能组分复配互补，使得组合物具有较强的受损发质修复功能，以及调节头皮皮脂腺活性、抑制5α-还原酶的作用，具有明显的抗氧化、抗炎功效，同时，水解海水珍珠具有保湿、修复皮肤屏障的功效。
应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (5)
1.一种以海水珍珠为原料的具有抑制5α-还原酶作用、受损发质修复功能、调节头皮皮脂腺活性、抗氧化、抗炎、保湿、修复皮肤屏障作用的头皮/头发/皮肤修护组合物在制备化妆品中的应用，其特征在于：所述组合物由以下步骤制备得到：
制备珍珠粉：将海水珍珠投入超微粉碎机粉碎至粒径为10~15微米的粗粉，再经气流粉碎到平均粒径为2~3微米的海水珍珠粉末，将海水珍珠粉末放入到增压装置中，加入粉末重量20%的水，增压至0.5MP，维持4~5 h后，瞬间减压，取出，将得到的珍珠粉与水按照质量比1：4~5的比例调成珠浆，进行湿法研磨，得到粒径10~100nm的珍珠粉，过滤烘干，得到亮白色的珍珠粉；
制备海水珍珠提取物：将所述珍珠粉加入到质量浓度为3~5%的乳酸水溶液中浸泡1~3h，过滤，收取滤渣，用蒸馏水反复冲洗，进行湿法研磨，烘干，高速粉碎机进行二次粉碎，得到海水珍珠提取物；
制备水解海水珍珠：配制pH=7.0~7.5 的0.1~0.4 mg/mL的链丝菌蛋白酶溶液，加入所述珍珠粉，链丝菌蛋白酶占珍珠粉质量的0.1~0.2 %，40~45 ℃酶解1~3h,加热灭酶，调节pH至5.5~6.5 ，加入占珍珠粉质量0.1~0.2%的复合酶，复合酶为脱苦蛋白酶与菠萝蛋白酶按照1~3：1的比例复配，50~55℃酶解2~3 h后,加热灭酶，减压蒸发浓缩，冷冻干燥，得到水解海水珍珠；
制备水解蚕丝蛋白：将蚕丝放入质量分数1~2%的碳酸钠水溶液中煮沸30~40min,脱去丝胶,过滤烘干，将脱去丝胶后的蚕丝与pH6.5的0.1 mol/L磷酸水溶液按照g:ml为1：20-1：40混合，加入800 -900 U/g的中性蛋白酶，在45 ℃下水解4h，过滤调节pH=7，减压蒸发浓缩，冷冻干燥，得到水解蚕丝蛋白；
将珍珠粉：海水珍珠提取物：水解海水珍珠：水解蚕丝蛋白按照质量比（0.01~2）:（8~12）:（8~12）:（4~6）的比例混合；
所述化妆品包括洗发水、护发素、头皮护理液、乳液、面霜、沐浴露、面膜、洁面产品中的一种或几种。
2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述制备海水珍珠提取物，为所述珍珠粉加入到质量浓度为4%的乳酸水溶液中浸泡2~3 h，过滤，收取滤渣，用蒸馏水反复冲洗，进行湿法研磨，烘干，高速粉碎机进行二次粉碎，得到亮白色的海水珍珠提取物。
3. 根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述制备海水珍珠提取物，为将链丝菌蛋白酶用pH7.5的磷酸盐缓冲溶液配置成0.2mg/mL的链丝菌蛋白酶溶液，加入所述珍珠粉，链丝菌蛋白酶占珍珠粉质量的0.16%，40 ℃酶解2~3 h,加热灭酶，调节pH至6，加入占珍珠粉质量0.2%的复合酶，复合酶为脱苦蛋白酶与菠萝蛋白酶按照1~3：1的比例复配，55℃酶解3~4 h后,加热灭酶，减压蒸发浓缩，冷冻干燥，得到水解海水珍珠。
4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：将珍珠粉：海水珍珠提取物：水解海水珍珠：水解蚕丝蛋白按照质量比0.02~1:10:10:5的比例混合。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：复合酶为脱苦蛋白酶与菠萝蛋白酶按照2：1的比例复配。
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