CN114858943B - 一种食品中动物源天然色素含量检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种食品中动物源天然色素含量检测方法，所述的动物源天然色素为紫胶红色素。方法包括如下步骤：(1)制备标准储备液和标准工作液；(2)制备待测样品溶液；(3)高效液相色谱分析条件；(4)建立标准工作曲线；(5)结果分析。本方法建立了食品中动物源天然色素紫胶红色素的固相萃取‑高效液相色谱法。本发明填补了多类别食品中天然色素紫胶红含量检测领域空白，该方法能有效降低食品基体成分的干扰，灵敏度高，重现性好，适用于食品中紫胶红色素的日常检测和监管要求。

Description

一种食品中动物源天然色素含量检测方法
技术领域
本发明涉及食品领域，尤其涉及动物源天然色素含量的检测方法，具体是指食品中天然色素紫胶红色素的固相萃取-高效液相色谱检测方法。
背景技术
紫胶又名虫胶、赤胶、紫草茸等，是由紫胶虫在寄主树上进行取食后分泌而得的产物，主要含有紫胶蜡、紫胶树脂和紫胶色素等，具有良好的成膜性和耐酸性，在食品和药品等行业被用作被膜剂或包衣材料。紫胶红色素经由紫胶提取而得，是一种典型的昆虫源天然色素，着色能力强，色调鲜艳，可用作食品着色剂、纺织品染料、细胞染料等，具有较高经济价值。紫胶红色素主要含有A、B、C、D、E 5种确定结构的活性组分，各组分含量随产地、季节的改变而有所波动。总体而言，紫胶红色素A、B的含量最高，占总含量80% ~ 90%，其余组分占10% ~ 20%。我国食品添加剂使用标准规定紫胶红色素在食品中最大使用量为0.5 g/kg，可用在果酱、可可制品、巧克力和巧克力制品（包括代可可脂巧克力及制品）、糖果、培烤食品馅料及表面用挂浆（仅限风味派馅料）、复合调味料、果蔬汁（浆）类饮料、碳酸饮料、风味饮料（仅限果味饮料）、配制酒中。与具有致癌、致畸等潜在风险的人工合成色素相比,天然色素有着更高的安全性和稳定性，但如果超剂量、超范围的使用，也可能对人体健康造成危害。
此外，红茶和红糖均原产于中国，其应用有着悠久的历史，分别含有茶多酚、茶色素、生物碱和维生素、氨基酸等成分，具有抗炎、保护心脑血管、抗氧化、促进生长等药理作用，被公认为是绿色健康的食品，深受广大群众的喜爱。色泽是影响消费者购买红茶和红糖的因素之一，色泽明亮艳丽、眼观效果好的红茶和红糖往往被更多的选择。因日常使用量较大，过去存在使用人工合成色素对红茶和红糖进行伪造的乱象，但随着有关部门监管日益严格，不法商人便开始尝试利用天然色素来取代人工合成色素加入红茶和品质相对较差的赤砂糖中，企图将陈茶变“新茶”，次糖变“好糖”，从而牟取更高的利润。我国食品添加剂使用标准中明确规定红茶和红糖当中不能添加任何添加剂成分，包括天然色素。当前国内外关于红茶和红糖中紫胶红色素的检测方法尚为空白，因此，为满足监管的要求，建立红茶和红糖中紫胶红色素准确、快速、灵敏的检测方法具有重要意义。
目前，色素检测方法主要有高效液相色谱法、高效液相色谱-串联质谱法等，上述方法研究集中在人工合成色素方面，而关于天然色素紫胶红检测还鲜见报道。伊冠东等建立了果汁中紫胶红色素A的荧光光谱测定方法，该方法仅对单组分单基质进行研究，且易受到复杂食品基质中金属离子影响而发生荧光猝灭现象；梅梅等建立了果汁中4种紫胶红色素UPLC/TUV检测方法，该方法仅针对单基质果汁样品进行研究，且选用低波段286 nm作为检测波长，目标物容易受多种类食品复杂基质干扰；此外完全按该方法进行试验，发现紫胶红色素各组分峰型，灵敏度和回收率均较差，组分A、B、C、E的加标回收率分别在10%、0%、6%、20%左右，难以满足多种类别食品的检测要求。
本发明建立了固相萃取结合高效液相色谱法同时测定食品中的紫胶红色素A、B、C、D、E含量。该方法在普通液相仪器上7 min即可实现紫胶红色素各组分的完全分离，具有良好的抗干扰能力，灵敏度和准确度高，重现性好，可满足多类食品中天然色素紫胶红日常检测要求，为食品生产企业、监管部门和进出口检测部门提供方法依据。
发明内容
本发明的目的在于提供一种食品中天然色素紫胶红含量的固相萃取-高效液相色谱检测方法，用于弥补和解决目前尚无满足我国食品添加剂使用标准所规定的多类食品中紫胶红色素含量检测方法不足，同时也填补了红茶和红糖中紫胶红色素的检测方法监管领域空白，使得该方法在相关领域有着极强的适用性和实用性，完全能满足我国相关法律法规的限量要求和禁用检出限要求。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
该方法是一种能够实现食品中天然色素紫胶红色素的分离检测方法，所述的检测方法包括：
本发明的一种食品中动物源天然色素含量检测方法，其包括如下步骤：
（1）制备标准储备液和标准工作液，所述标准储备液为1000 mg/L，标准工作液为将紫胶红色素的标准储备液采用逐级稀释法用纯水配制浓度为0.05mg/L、0.1 mg/L、0.5mg/L、1.0 mg/L、5.0 mg/L、10.0 mg/L、100.0 mg/L的系列标准工作溶液；
（2）制备待测样品溶液：若食品样品为糖果、培烤食品馅料、巧克力、果酱、调味料、红茶、红糖等固体类样品，则样品置于50 mL比色管中，加入30 mL 0.02%氨水溶液，混匀，60℃条件下超声30 min，用0.02%氨水溶液稀释定容至50 mL，混匀，12000 r/min离心3 min，取上清液10 mL，加入2滴乙酸，混匀，12000 r/min离心3 min，待过柱；若食品样品为果蔬汁、碳酸饮料、风味饮料、配制酒等液体类样品，则样品置于50 mL比色管中，用纯水稀释定容至50 mL，混匀，室温条件下超声10 min，取上清液10 mL，加入2滴乙酸，混匀，12000 r/min离心3 min，待过柱；先后用3 mL甲醇/乙酸（99/1，v/v）溶液和3 mL纯水/乙酸（99/1，v/v）溶液活化PWAX小柱，将上述10 mL样品溶液转移至PWAX小柱（红茶、红糖样品为转移至自填聚酰胺小柱），保持流出液流速为每分钟1~2滴，待上柱液全部流出后，用3 mL纯水/乙酸（99/1，v/v）溶液和3 mL甲醇/乙酸（99/1，v/v）溶液淋洗，弃去淋洗液，用3 mL甲醇/1.6%氨水（70/30，v/v）溶液洗脱，将洗脱液氮吹至近干，加入纯水定容至1.0 mL，混匀，以0.45 μm水相滤膜过滤，滤液供液相色谱测定。
（3）所用仪器为高效液相色谱仪，检测器为光电二极管阵列检测器；色谱柱为C18柱，柱温为35℃，检测波长484 nm；流动相A为甲醇，流动相B为0.02mol/L乙酸铵溶液(含0.009%的磷酸)；流速：1 mL/min；进样量：20 μL；梯度洗脱程序：0 ~ 1.0min，2%A；1.0 ~3.0min，2 %A ~ 20%A；3.0 ~ 6.5min，20%A ~ 55%A；6.5 ~ 7.1min，55%A ~ 2%A；7.1 ~10.0min，2%A。
（4）标准曲线的绘制：将紫胶红色素的系列混合标准工作溶液注入高效液相色谱仪中，在步骤（3）的色谱条件下进行梯度洗脱和检测，以保留时间定性，根据浓度所测峰面积的大小与其浓度的对应关系绘制标准曲线。
（5）结果分析：取（2）中滤液注入高效液相色谱仪中，在步骤（3）的色谱条件下进行梯度洗脱和检测，测得滤液中目标物的峰面积，以保留时间定性，根据（4）中制作的标准曲线定量，计算出待测样品中紫胶红色素的含量。
与现有技术相比较，本发明具有以下突出优点：
1. 本发明填补了多类别食品中天然色素紫胶红含量检测领域空白，所研究的食品基质不仅完全涵盖了我国食品添加剂使用标准中规定的果酱、可可制品、巧克力和巧克力制品（包括代可可脂巧克力及制品）、糖果、培烤食品馅料及表面用挂浆（仅限风味派馅料）、复合调味料、果蔬汁（浆）类饮料、碳酸饮料、风味饮料（仅限果味饮料）、配制酒等，同时涵盖了食品领域安全问题突出的红糖和红茶等食品基质，完全可满足我国现有法律法规规定以及食品突发安全检测所要求的食品基质范围，适用性广，而现有技术仅针对果汁这一单一食品基质，技术局限性明显。该方法能有效降低食品基体成分的干扰，灵敏度高，重现性好，适用于食品中紫胶红色素的日常检测和监管要求。
2. 本发明涉及了紫胶红色素A、B、C、D、E 五种组分的检测技术，现有检测技术或者仅针对紫胶红色素A，或仅针对紫胶红色素A、B、C、E 四种组分，紫胶红色素包括了A、B、C、D、E 五种组分，虽然其中D组分占比不高，但从学术和方法学的严谨性和方法的适用性出发，有必要开发紫胶红色素A、B、C、D、E 五种组分的检测技术。
3. 本发明选择了高波段的次强吸收峰484 nm作为定量波长，不同于现有文献选择低波段的286 nm作为定量波长，低波长286nm下多种食品基质样品包括果汁干扰严重影响紫胶红色素的准确定量，484 nm作为定量波长下无需过固相萃取柱即可完全满足我国食品添加剂规范所规定所有食品基质的检测要求，样品基质干扰现象消失。
4. 本发明通过选择合适类型C18柱（50 mm长的C18短柱）为固定相，不断探索并优化各种流动相组成和比例，在常规普通液相仪器即可实现超高效液相仪器色谱分离效果，相较于普通液相体系，7min即可实现紫胶红色素各组分的完全分离，方法简单快速，同时获得更加良好的峰型和灵敏度。在大批量样品筛查时这点尤为重要，可以极大的减少溶剂消耗，操作人无需频繁的配制流动相，无需运行多台仪器，等待大批量样品任务的运行完成，极大成倍地降低耗材、时间、仪器和人工成本，使用常规液相色谱仪和较常规液相色谱柱节约成本1/2以上的色谱短柱，使得本发明更易于推广和普及。
5. 本发明采用甲醇配制紫胶红色素标准储备液，配制系列标准工作溶液时采用了纯水进行配制，不同于现有技术采用超纯水配制标准储备液，采用乙腈/水（1/1，V/V）将储备液稀释成系列标准工作溶液。经实验发现，按照现有技术采用超纯水配制1000 mg/L的标准储备液时标准品完全无法溶解，同时采用乙腈/水（1/1，V/V）将储备液稀释成系列标准工作溶液会造成紫胶红各组分峰型变差，灵敏度降低。本发明采用纯甲醇溶剂配制标准储备液，其对紫胶红色素标准品具有很好的溶解性，同时采用纯水配制系列标准工作溶液可以获得良好的目标物峰型和灵敏度,，同时标准溶液配制溶剂为纯水，不需要配制复杂如乙腈/水（1/1，V/V）的溶剂体系，操作简单易行。但需要注意的是，将标准储备液放置冰箱中0℃~4 ℃保存时会有少许析晶现象发生，而在室温下则无此现象，这可能由于温度降低，标准品在甲醇溶剂中溶解度降低导致。因此在配制系列标准溶液时需要对冰箱中拿出的标准储备液进行超声10min处理，并冷却至室温，然后再用纯水稀释成一系列的标准工作溶液。
6. 本发明对多类别食品前处理技术进行了多维度深层次的探索，最终优化出最佳的多类食品中多种紫胶红色素组分提取工艺，回收率效果和初步净化效果令人满意。对液体食品基质样品，采用纯水进行超声辅助萃取处理，在液体基质样品中，紫胶红色素各组分加标回收率为90.1% ~ 102.6%，加标回收效果良好。由于紫胶红色素在酸性条件下稳定，吸附能力较强，碱性条件下易脱附，实验进一步考查固体基质样品中紫胶红色素各组分在不同比例氨水溶液条件下（0%、0.02%、0.04%、0.4%、0.8%）加标回收率。结果表明，0%氨水条件下，巧克力、糖果中紫胶红色素各组分加标回收率为90.5% ~ 103.2%，蛋黄派夹心、果酱、调味料、红糖、红茶中紫胶红色素A、B加标回收率较差为76.1~80.5%，C、D、E为90.6% ~102.5%。随着氨水比例增大至0.02%以后，紫胶红色素A、B加标回收率上升至83.4% ~90.1%，但C、D、E色谱峰消失。因此本发明选用0.02%氨水溶液作为固体基质样品提取溶剂。实验还进一步考查60 ℃下紫胶红色素各组分加标回收率效果。结果表明，紫胶红色素各组分加标回收率提升至91.6% ~ 103.4%，这进一步表明紫胶红色素本身具有良好的热稳定性。此外，实验进一步考查沉淀剂沉淀和酸化沉淀对样品上柱溶液初步净化效果，以及紫胶红色素加标回收率的影响。结果表明，分别加入2 mL乙酸锌溶液和亚铁***溶液、2滴乙酸溶液后，均能明显提升净化效果，上柱溶液澄清，无浑浊现象；但是添加2mL乙酸锌溶液和亚铁***溶液后，紫胶红色素A、B的加标回收率为10.8% ~ 11.9%，C、D、E色谱峰消失；而加入2滴乙酸溶液后，紫胶红色素各组分回收率为92.5% ~ 107.4%，回收率效果良好。因此本发明最终对液体基质样品采用纯水溶剂室温条件下超声处理，对固体基质样品采用0.02%氨水溶液加热60 ℃超声萃取，同时对上柱液加入2滴乙酸进行酸化沉淀净化处理。在上述优化提取条件下，各样品基质中紫胶红色素各组分加标回收率效果和初步净化效果均令人满意。
7. 本发明采用了固相萃取技术对多类食品基质样品实现紫胶红色素浓缩富集净化功能，有效保证了该发明方法的抗干扰能力和灵敏度要求。不同于已有技术选择的HLB固相萃取柱，本发明对在HLB、PWAX、PWCX、PWA-2、PEP、PEP-2、PSA等7种固相萃取柱上紫胶红色素各组分富集净化以及回收率效果进行了对比考察，最终对我国食品添加剂规范规定的所有食品基质采用具有优异性能的PWAX固相萃取柱，各方面效果完全满足方法学要求，同时完全按照现有技术进行HLB柱过柱实验，紫胶红各组分A、B、C、E的加标回收率分别在10%、0%、6%、20%左右，远不能满足多类别复杂食品基质的检测要求。 此外，由于红糖和红茶样品基质成分复杂，干扰较为严重，选择采用抗干扰能力更强的自填聚酰胺固相萃取柱，抗干扰能力和回收率效果均完全满足方法学要求，同时自填聚酰胺固相萃取柱成本较商品化固相萃取柱更低，大批量样品筛查操作成本更加低廉，聚酰胺固相萃取柱填充材料简单易得，使得本发明更易于推广和普及。
8. 本发明所使用的分析仪器为高效液相色谱仪配备光电二极管阵列检测器，相对于液质联用仪，超高效液相色谱仪等造价高昂的仪器，更加易于方法普及和推广应用，同时又能克服荧光光谱仪诸如无法识别紫胶红多种组分，紫胶红色素的荧光容易受到复杂食品基质中金属离子的影响而发生猝灭现象，同时稳定性、重现性较差等缺点。
附图说明
图1为本发明的食品中动物源天然色素含量检测方法的标准溶液高效液相色谱分离图。
具体实施方式
以下结合具体实施例说明书附图对本发明作进一步详细说明。但本发明的保护范围不限于以下实施例。
实施例1
本实施案例在以本发明上述技术为前提下进行实施，现给出详细实施方式和具体的操作过程，来说明本发明：
1 试剂和材料
除特别说明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
1.1甲醇：色谱纯。
1.2氨水
1.3乙酸铵
1.4乙酸
1.5 PWAX固相萃取柱：60 mg/ 3mL
1.6 聚酰胺固相萃取柱：自填柱，500 mg/6 mL
1.7标准品：紫胶红色素标准品（CAS No.60687-93-6，纯度100%）。
1.8标准储备液配制：准确称取紫胶红色素标准品10 mg，用甲醇溶解并定容至10mL，配制成浓度为1000 mg/L的标准储备液，置于冰箱中0 ℃ ~ 4 ℃保存。
1.9 标准工作溶液配制：临用时将标准储备液（1.8）从冰箱中取出，超声10 min后冷却至室温，用纯水稀释成一系列的标准工作溶液。
仪器和设备
2.1高效液相色谱仪：配有光电二极管阵列检测器。
2.2电子天平：感量为0.0001 g。
2.3超声波清洗机。
2.4离心机：转速不低于15000 r/min。
2.5固相萃取装置。
2.6氮气吹干仪。
2.7涡旋混合器。
2.8具塞比色管：50mL。
方法
3.1高效液相色谱条件
a)色谱柱：C18柱（4.6×50mm，3.0 μm）；
b）流动相：流动相A为甲醇，流动相B为纯水；梯度洗脱程序：0 ~ 1.0min，2%A；1.0~ 3.0min，2 %A ~ 20%A；3.0 ~ 6.5min，20%A ~ 55%A；6.5 ~ 7.1min，55%A ~ 2%A；7.1 ~10.0min，2%A；
c）流速：1.0 mL/min；
d）柱温：35℃；
e)进样量：20 μL；
f）光电二极管阵列检测器的检测条件：检测波长484 nm
3.2 标准曲线绘制
分别取标准工作溶液（1.9），按照3.1的色谱条件进行色谱测定。以各分析物的峰面积（Y）对相应的质量浓度（X，mg /L） 进行线性回归绘制标准曲线，得到线性回归方程。
样品测试步骤
4.1样品前处理
4.1.1 固体样品（糖果、培烤食品馅料、巧克力、果酱、调味料、红茶、红糖等）
称取5 g样品，精确至0.01 g，置于50 mL比色管中，加入30 mL 0.02%氨水溶液，混匀，60 ℃条件下超声30 min，用0.02%氨水溶液稀释定容至50 mL，混匀，12000 r/min离心3min，取上清液10 mL，加入2滴乙酸，混匀，12000 r/min离心3 min，待过柱。
4.1.2 液体样品（果蔬汁、碳酸饮料、风味饮料、配制酒等）
称取5 g样品，精确至0.01 g，置于50 mL比色管中，用纯水稀释定容至50 mL，混匀，室温条件下超声10 min，取上清液10 mL，加入2滴乙酸，混匀，12000 r/min离心3 min，待过柱。
4.1.3 过柱
先后用3 mL甲醇/乙酸（99/1，v/v）溶液和3 mL纯水/乙酸（99/1，v/v）溶液活化PWAX小柱，将上述10 mL样品溶液转移至PWAX小柱（红茶、红糖样品为转移至自填聚酰胺小柱），保持流出液流速为每分钟1~2滴，待上柱液全部流出后，用3 mL纯水/乙酸（99/1，v/v）溶液和3 mL甲醇/乙酸（99/1，v/v）溶液淋洗，弃去淋洗液，用3 mL甲醇/1.6%氨水（70/30，v/v）溶液洗脱，将洗脱液氮吹至近干，加入纯水定容至1.0 mL，混匀，以0.45 μm水相滤膜过滤，滤液供分析用。
4.2试液测定
在相同色谱条件下，将制备的试样溶液进行色谱测定，以保留时间定性，以外标法定量。
分析结果的表述
试样中紫胶红色素的含量按下式（1）计算：
Figure 375454DEST_PATH_IMAGE001
………………… （1）
式中：
X——试样中紫胶红色素的含量，mg/kg；
c——标准工作曲线中查得的试样溶液中紫胶红色素某组分的浓度，单位为微克每毫升（mg/L）；
V——提取液定容体积，单位为毫升（mL）；
V 2 ——最终定容体积，单位为毫升（mL）；
m——试样的质量，单位为克（g）；
V 1 ——分取体积，单位为毫升（mL）。
以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。
方法学考察，其中包括线性、检测限、定量限、回收率、精密度
6.1线性、检测限、定量限：配制紫胶红色素质量浓度为0.05 ~ 100.0 mg/L之间的系列标准工作溶液，以峰面积对质量浓度（单位mg/L）进行线性回归，线性方程、相关系数、线性范围、检出限及定量限见表1。结果表明，紫胶红色素各组分在线性范围内线性关系良好，相关系数r均＞0.999。以信噪比（S/N）=3和（S/N）=10得到方法检出限和定量限，紫胶红色素各组分检出限范围为0.016 ~ 1.6 mg/kg，定量限范围为0.052 ~ 5.4 mg/kg，方法定量限完全能满足我国食品添加剂使用标准对食品中紫胶红色素的限量要求。
表1 紫胶红色素的线性方程、相关系数、线性范围、检出限及定量限
Table 1 Linear equations, correlation coefficients (r), linearranges, limits of detection (LODs) and limits ofquantification （LOQs）oflaccaic acids
Figure 823753DEST_PATH_IMAGE002
采用面积归一化法确定紫胶红色素中各组分的相对含量，得到紫胶红A、B、C、D、E五种组分的相对含量分别为58.56%、22.67%、12.97%、0.87%、4.92% 。
6.2回收率和精密度：在优化的测试条件下，取空白食品基质样品进行加标回收率测试，加标水平分别为0.1、0.6、1.0、5.0、6.0、10.0和50.0 mg/kg，每个水平重复分析3次，结果见表2。从表2中可知，该方法加标回收率范围为85.0%~107.7%，RSDs为0.2%~4.3%。结果表明，该方法具有良好的准确度和精密度，适用于食品中天然色素紫胶红的日常分析检测。
表2食品中紫胶红色素加标回收率和相对标准偏差（n＝3）
Table 2 Recoveries and relative standard deviations (RSDs) of laccaicacids infoods (n=3）
Figure 869069DEST_PATH_IMAGE003
/>
Figure 296902DEST_PATH_IMAGE004
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (6)

1.一种食品中动物源天然色素含量检测方法，其特征在于, 所述的动物源天然色素为紫胶红色素；所述的检测方法包括：
（1）制备标准储备液和标准工作液，所述标准储备液为1000 mg/L，标准工作液为将紫胶红色素的标准储备液采用逐级稀释法用纯水配制浓度为0.05mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L、5.0 mg/L、10.0 mg/L、100.0 mg/L的系列标准工作溶液；
（2）制备待测样品溶液：若食品样品为糖果、培烤食品馅料、巧克力、果酱、调味料、红茶、红糖固体类样品，则样品置于50 mL比色管中，加入30 mL 0.02%氨水溶液，混匀，60 ℃条件下超声30 min，用0.02%氨水溶液稀释定容至50 mL，混匀，12000 r/min离心3 min，取上清液10 mL，加入2滴乙酸，混匀，12000 r/min离心3 min，待过柱；若食品样品为果蔬汁、碳酸饮料、风味饮料、配制酒液体类样品，则样品置于50 mL比色管中，用纯水稀释定容至50mL，混匀，室温条件下超声10 min，取上清液10 mL，加入2滴乙酸，混匀，12000 r/min离心3min，待过柱；先后用99/1、v/v 3 mL甲醇/乙酸溶液和99/1、v/v 3 mL纯水/乙酸溶液活化PWAX小柱，将上述10 mL样品溶液转移至PWAX小柱，红茶、红糖样品为转移至自填聚酰胺小柱，保持流出液流速为每分钟1~2滴，待上柱液全部流出后，用99/1、v/v 3 mL纯水/乙酸溶液和99/1、v/v 3 mL甲醇/乙酸溶液淋洗，弃去淋洗液，用70/30，v/v 3 mL甲醇/1.6%氨水溶液洗脱，将洗脱液氮吹至近干，加入纯水定容至1.0 mL，混匀，以0.45 μm水相滤膜过滤，滤液供液相色谱测定；
（3）所用仪器为高效液相色谱仪，检测器为光电二极管阵列检测器；色谱柱为C18柱，柱温为35℃，检测波长484 nm；流动相A为甲醇，流动相B为含0.009%的磷酸0.02mol/L乙酸铵溶液；流速：1 mL/min；进样量：20 μL；梯度洗脱程序：0 ~ 1.0min，2%A；1.0 ~ 3.0min，2 %A~ 20%A；3.0 ~ 6.5min，20%A ~ 55%A；6.5 ~ 7.1min，55%A ~ 2%A；7.1 ~ 10.0min，2%A；
（4）标准曲线的绘制：将紫胶红色素的系列混合标准工作溶液注入高效液相色谱仪中，在步骤（3）的色谱条件下进行梯度洗脱和检测，以保留时间定性，根据浓度所测峰面积的大小与其浓度的对应关系绘制标准曲线；
（5）结果分析：取（2）中滤液注入高效液相色谱仪中，在步骤（3）的色谱条件下进行梯度洗脱和检测，测得滤液中目标物的峰面积，以保留时间定性，根据（4）中制作的标准曲线定量，计算出待测样品中紫胶红色素的含量。
2. 根据权利要求1所述一种食品中动物源天然色素含量检测方法，其特征在于，步骤（1）中所述标准储备液的配制具体步骤为：准确称取紫胶红色素标准品10 mg，用甲醇溶解并定容至10 mL，配制成浓度为1000 mg/L的标准储备液；（1）中所述标准工作溶液的配制具体步骤为：临用时将储备液从冰箱中取出，超声10 min后冷却至室温，采用逐级稀释法用纯水配制浓度为0.05mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L、5.0 mg/L、10.0 mg/L、100.0 mg/L的系列标准工作溶液；
标准储备液置于冰箱中于0 ℃ ~ 4 ℃温度下保存。
3. 根据权利要求1所述一种食品中动物源天然色素含量检测方法，其特征在于，步骤（2）中所述待测样品溶液的制备具体步骤为：若食品样品为糖果、培烤食品馅料、巧克力、果酱、调味料固体类样品，则称取5 g样品，精确至0.01 g，样品置于50 mL比色管中，加入30mL 0.02%氨水溶液，混匀，60 ℃条件下超声30 min，用0.02%氨水溶液稀释定容至50 mL，混匀，12000 r/min离心3 min，取上清液10 mL，加入2滴乙酸，混匀，12000 r/min离心3 min，待过柱；若食品样品为果蔬汁、碳酸饮料、风味饮料、配制酒液体类样品，则称取5 g样品，精确至0.01 g，样品置于50 mL比色管中，用纯水稀释定容至50 mL，混匀，室温条件下超声10min，取上清液10 mL，加入2滴乙酸，混匀，12000 r/min离心3 min，待过柱；先后用99/1，v/v3 mL甲醇/乙酸溶液和99/1，v/v 3 mL纯水/乙酸溶液活化PWAX小柱，将上述10 mL样品溶液转移至PWAX小柱，保持流出液流速为每分钟1~2滴，待上柱液全部流出后，用99/1，v/v 3 mL纯水/乙酸溶液和99/1，v/v 3 mL甲醇/乙酸溶液淋洗，弃去淋洗液，用70/30，v/v 3 mL甲醇/1.6%氨水溶液洗脱，将洗脱液氮吹至近干，加入纯水定容至1.0 mL，混匀，以0.45 μm水相滤膜过滤，滤液供液相色谱测定；
若食品样品为茶叶、红糖固体类样品，则称取5 g样品，精确至0.01 g，样品置于50 mL比色管中，加入30 mL 0.02%氨水溶液，混匀，60 ℃条件下超声30 min，用0.02%氨水溶液稀释定容至50 mL，混匀，12000 r/min离心3 min，取上清液10 mL，加入2滴乙酸，混匀，12000r/min离心3 min，待过柱；先后用99/1，v/v 3 mL甲醇/乙酸溶液和3 mL 1%乙酸溶液淋洗PA小柱，将上述10 mL样品溶液转移至PA小柱，保持流出液流速为每分钟1~2滴，待上柱液全部流出后，用3 mL1%乙酸溶液和99/1，v/v 3 mL甲醇/乙酸溶液淋洗，弃去淋洗液，用70/30，v/v3 mL甲醇/1.6%氨水溶液洗脱，将洗脱液氮吹至近干，加入纯水定容至1.0 mL，混匀，以0.45 μm水相滤膜过滤，滤液供分析用。
4. 根据权利要求1所述一种食品中动物源天然色素含量检测方法，其特征在于，步骤（3）中所述C18色谱柱规格为4.6 mm×50 mm内径，颗粒粒径3μm。
5.根据权利要求1所述一种食品中动物源天然色素含量检测方法，其特征在于，步骤（4）中所述标准曲线系数不小于0.999。
6.根据权利要求1所述一种食品中动物源天然色素含量检测方法，其特征在于，所述食品为果酱、可可制品、巧克力和巧克力制品、糖果、培烤食品风味派馅料及表面用挂浆、复合调味料、果蔬汁类饮料、碳酸饮料、果味风味饮料、配制酒、红茶、红糖。
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