CN114807259B - 一种用于发酵生产谷氨酸的种子培养基和发酵培养基 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于发酵生产谷氨酸的种子培养基和发酵培养基,其中,种子培养基包括基础种子培养基溶质和芸苔素内酯;发酵培养基包括基础发酵培养基溶质和芸苔素内酯。在种子培养基中添加芸苔素内酯,缩短了种子培养周期;在发酵培养基中添加芸苔素内酯,能够提高产酸能力和耗糖速率,提高糖酸转化率和产酸量。
Description
技术领域:
本发明涉及微生物发酵技术领域,特别是涉及一种用于发酵生产谷氨酸的种子培养基和发酵培养基。
背景技术:
谷氨酸是分子内含有一个氨基和两个羧基的酸性氨基酸,又名α-氨基戊二酸,为无色晶体,有鲜味,微溶于水,易溶于盐酸溶液,分子量147.1,等电点3.22。
谷氨酸目前的生产方法是发酵法生产,微生物合成谷氨酸途径是葡萄糖经过糖酵解途径(EMP)和磷酸己糖支路(HMP)生成丙酮酸,丙酮酸脱梭生成乙酞辅酶A;然后在醛缩酶的催化下,草酰乙酸和乙酰辅酶A合成柠檬酸,进一步生成异柠檬酸和α-酮戊二酸,α-酮戊二酸在谷氨酸脱氢酶及NH4+存在下生成谷氨酸,菌体内合成的谷氨酸透过细胞膜,便能在发酵液中积累大量的谷氨酸。理论上不考虑微生物生长以及呼吸消耗,由一份子六碳的葡萄糖最终产生一分子五碳的谷氨酸,理论糖酸转化率为81.7%。
经过50多年的发展,发酵法生产谷氨酸技术取得了巨大的进步,但我国目前生产谷氨酸的产酸率仅在17 20%,转化率仅在65 67%,与谷氨酸理论转化率81.7%相比还有较大提升空间。
发明内容:
本发明的第一个目的在于提供一种用于发酵生产谷氨酸,能够缩短种子培养周期的种子培养基。
本发明的第二个目的在于提供一种用于发酵生产谷氨酸,能够缩短发酵周期、提高产酸量和糖酸转化率的发酵培养基。
本发明的第一个目的由如下技术方案实施:一种用于发酵生产谷氨酸的种子培养基,其包括基础种子培养基溶质,其还包括有芸苔素内酯。
进一步,所述芸苔素内酯的浓度为10-20ug/L。
进一步,所述种子培养基中的基础种子培养基溶质的浓度为:葡萄糖40-50g/L、玉米浆30-50g/L、豆粕水解液10-30g/L、氯化钾1-2g/L、硫酸镁1-2g/L、丁二酸2-4g/L,消泡剂0.3-0.5mL/L、生物素0.3-0.5mg/L、硫酸亚铁1-2mg/L、硫酸锰1-2mg/L。
进一步,所述玉米浆的浓度为18-25波美度。
进一步,所述豆粕水解液的总氮含量为20~50g/L。
本发明种子培养基能够促进菌体细胞***,打破菌体细胞休眠,缩短延滞期,进而缩短了种子培养周期。
本发明的第二个目的由如下技术方案实施:一种用于发酵生产谷氨酸的发酵培养基,其包括基础发酵培养基溶质,其还包括有芸苔素内酯。
进一步,所述芸苔素内酯的浓度为50-200ug/L。
进一步,所述发酵培养基中的基础发酵培养基溶质的浓度为:葡萄糖20-30g/L、玉米浆70-80g/L、豆粕水解液30-40g/L、甜菜碱0.5-1g/L、磷酸二氢钾1-2g/L、硫酸镁1-2g/L、消泡剂0.3-0.5mL/L、生物素0.1-0.2mg/L、VB1 0.3-0.5mg/L、硫酸亚铁0.1-0.5mg/L、硫酸锰0.1-0.5mg/L。
进一步,所述玉米浆的浓度为18-25波美度。
进一步,所述豆粕水解液的总氮含量为20~50g/L。
本发明发酵培养基能够促进菌体细胞***和生长,缩短发酵菌体生长的周期,进而缩短了发酵周期;同时,本发明发酵培养基能够延缓菌体在发酵中后期的衰老,使得发酵中后期菌体依然保持着较高的活力,进而提高了产酸能力和耗糖速率,提高了发酵的产酸量和糖酸转化率。
本发明的优点:
在种子培养基中添加芸苔素内酯,一方面能够打破种子的休眠,促进细胞生长,减少了使谷氨酸菌体在种子培养基中培养的延滞期;另一方面能够促进细胞***和生长;进而缩短种子培养周期;
在发酵培养基中添加芸苔素内酯,能够促进菌体细胞***和生长,缩短发酵周期;同时能够延缓菌体的衰老时间,提高了发酵中后期菌体的活性,进而提高产酸能力和耗糖速率,提高糖酸转化率和产酸量。
具体实施方式:
下面结合具体实施例,对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1:一种用于发酵生产谷氨酸的种子培养基,种子培养基中的溶质及其浓度为:芸苔素内酯10ug/L、葡萄糖40g/L、玉米浆30g/L、豆粕水解液10g/L、氯化钾1g/L、硫酸镁1g/L、丁二酸2g/L,消泡剂0.3mL/L、生物素0.3mg/L、硫酸亚铁1mg/L、硫酸锰1mg/L。本发明种子培养基能够促进菌体细胞***,打破菌体细胞休眠,缩短延滞期,进而缩短了种子培养周期。
本实施例中,所述玉米浆的浓度为18-25波美度。
本实施例中,所述豆粕水解液的总氮含量为20~50g/L。
实施例2:一种用于发酵生产谷氨酸的种子培养基,种子培养基中的溶质及其浓度为:芸苔素内酯15ug/L、葡萄糖45g/L、玉米浆40g/L、豆粕水解液20g/L、氯化钾1.5g/L、硫酸镁1.5g/L、丁二酸3g/L,消泡剂0.4mL/L、生物素0.4mg/L、硫酸亚铁1.5mg/L、硫酸锰1.5mg/L。本发明种子培养基能够促进菌体细胞***,打破菌体细胞休眠,缩短延滞期,进而缩短了种子培养周期。
本实施例中,所述玉米浆的浓度为18-25波美度。
本实施例中,所述豆粕水解液的总氮含量为20~50g/L。
实施例3:一种用于发酵生产谷氨酸的种子培养基,种子培养基中的溶质及其浓度为:芸苔素内酯20ug/L、葡萄糖50g/L、玉米浆50g/L、豆粕水解液30g/L、氯化钾2g/L、硫酸镁2g/L、丁二酸4g/L,消泡剂0.5mL/L、生物素0.5mg/L、硫酸亚铁2mg/L、硫酸锰2mg/L。本发明种子培养基能够促进菌体细胞***,打破菌体细胞休眠,缩短延滞期,进而缩短了种子培养周期。
本实施例中,所述玉米浆的浓度为18-25波美度。
本实施例中,所述豆粕水解液的总氮含量为20~50g/L。
实施例4:一种用于发酵生产谷氨酸的种子培养基,种子培养基中的溶质及其浓度为:芸苔素内酯10ug/L、葡萄糖45g/L、玉米浆50g/L、豆粕水解液15g/L、氯化钾1g/L、硫酸镁1g/L、丁二酸3g/L,消泡剂0.4mL/L、生物素0.4mg/L、硫酸亚铁2mg/L、硫酸锰2mg/L。本发明种子培养基能够促进菌体细胞***,打破菌体细胞休眠,缩短延滞期,进而缩短了种子培养周期。
本实施例中,所述玉米浆的浓度为18-25波美度。
本实施例中,所述豆粕水解液的总氮含量为20~50g/L。
实施例5:一种用于发酵生产谷氨酸的发酵培养基,发酵培养基中的溶质及其浓度为:芸苔素内酯50ug/L、葡萄糖20g/L、玉米浆70g/L、豆粕水解液40g/L、甜菜碱0.5g/L、磷酸二氢钾2g/L、硫酸镁2g/L、消泡剂0.3mL/L、生物素0.2mg/L、VB1 0.5mg/L、硫酸亚铁0.5mg/L、硫酸锰0.5mg/L。本发明发酵培养基能够促进菌体细胞***和生长,缩短发酵菌体生长的周期,进而缩短了发酵周期;同时,本发明发酵培养基能够延缓菌体在发酵中后期的衰老,使得发酵中后期菌体依然保持着较高的活力,进而提高了产酸能力和耗糖速率,提高了发酵的产酸量和糖酸转化率。
本实施例中,所述玉米浆的浓度为18-25波美度。
本实施例中,所述豆粕水解液的总氮含量为20~50g/L。
实施例6:一种用于发酵生产谷氨酸的发酵培养基,发酵培养基中的溶质及其浓度为:芸苔素内酯100ug/L、葡萄糖25g/L、玉米浆75g/L、豆粕水解液35g/L、甜菜碱0.8g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、硫酸镁1.5g/L、消泡剂0.4mL/L、生物素0.15mg/L、VB10.4mg/L、硫酸亚铁0.3mg/L、硫酸锰0.3mg/L。本发明发酵培养基能够促进菌体细胞***和生长,缩短发酵菌体生长的周期,进而缩短了发酵周期;同时,本发明发酵培养基能够延缓菌体在发酵中后期的衰老,使得发酵中后期菌体依然保持着较高的活力,进而提高了产酸能力和耗糖速率,提高了发酵的产酸量和糖酸转化率。
本实施例中,所述玉米浆的浓度为18-25波美度。
本实施例中,所述豆粕水解液的总氮含量为20~50g/L。
实施例7:一种用于发酵生产谷氨酸的发酵培养基,发酵培养基中的溶质及其浓度为:芸苔素内酯200ug/L、葡萄糖30g/L、玉米浆80g/L、豆粕水解液30g/L、甜菜碱1g/L、磷酸二氢钾1g/L、硫酸镁1g/L、消泡剂0.5mL/L、生物素0.1mg/L、VB1 0.3mg/L、硫酸亚铁0.1mg/L、硫酸锰0.1mg/L。本发明发酵培养基能够促进菌体细胞***和生长,缩短发酵菌体生长的周期,进而缩短了发酵周期;同时,本发明发酵培养基能够延缓菌体在发酵中后期的衰老,使得发酵中后期菌体依然保持着较高的活力,进而提高了产酸能力和耗糖速率,提高了发酵的产酸量和糖酸转化率。
本实施例中,所述玉米浆的浓度为18-25波美度。
本实施例中,所述豆粕水解液的总氮含量为20~50g/L。
实施例8:一种用于发酵生产谷氨酸的发酵培养基,发酵培养基中的溶质及其浓度为:芸苔素内酯150ug/L、葡萄糖30g/L、玉米浆80g/L、豆粕水解液35g/L、甜菜碱1g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、硫酸镁1g/L、消泡剂0.5mL/L、生物素0.1mg/L、VB1 0.3mg/L、硫酸亚铁0.2mg/L、硫酸锰0.2mg/L。本发明发酵培养基能够促进菌体细胞***和生长,缩短发酵菌体生长的周期,进而缩短了发酵周期;同时,本发明发酵培养基能够延缓菌体在发酵中后期的衰老,使得发酵中后期菌体依然保持着较高的活力,进而提高了产酸能力和耗糖速率,提高了发酵的产酸量和糖酸转化率。
本实施例中,所述玉米浆的浓度为18-25波美度。
本实施例中,所述豆粕水解液的总氮含量为20~50g/L。
实施例9:利用实施例1提供的种子培养基和实施例5提供的发酵培养基,发酵生产谷氨酸的方法:
以谷氨酸棒杆菌MHZ-0112-8为生产菌株,2015年12月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,邮编100101),保藏编号为CGMCC No.11941。同时,该菌株的相关信息已在专利申请号:201610119402.2,专利名称:重组菌株及其应用的发明专利中公开。
种子液制备:
1.斜面培养
斜面培养基中的溶质及其浓度为:鱼蛋白胨10g/L,酵母粉5g/L,NaCl10g/L,琼脂15-20g/L,葡萄糖5g/L。
斜面培养条件:将保存于甘油管中的菌种于斜面培养基上活化,放在生化培养箱中,温度33℃培养,200rpm,振荡培养24h,菌落完全长出后,斜面培养结束。
2、一级种子培养
一级种子培养基中的溶质及其浓度为:葡萄糖25g/L、豆粕提取物20g/L、酵母粉15g/L、尿素5g/L、硫酸镁0.5g/L。
一级种子培养条件:在斜面培养基上挑选菌落生长占优势的菌体,用接种环取一环转接于装有300mL的1000mL的三角摇瓶中,放在生化培养箱中,33℃,200rpm,振荡培养12h,OD5620.5(稀释25倍,分光度计显数),即OD12.5,一级种子培养完成。
3、二级种子培养
二级种子培养基采用实施例1提供的种子培养基,将配置好的二级种子培养基放到10L发酵罐中实消灭菌,灭菌温度124℃,灭菌时间20min,灭菌后体积在5.7L左右。
二级种子培养条件为:将一级种子300mL接种于10L发酵罐中,定容6L,接种量5%。罐压0.05Mpa,通气量10L/min,搅拌200rpm,pH7.0;温度控制33℃,溶氧低于控制下限时,通过依次循环调节罐压(每次提高0.01Mpa,罐压上限0.1Mpa)、通气量(每次提高2L/min,风量上限20L/min)、搅拌(每次提高20rpm,搅拌上限800rpm),溶氧维持30-50%;OD562 0.8(稀释50倍,分光光度计显数)即OD40,二级种子培养完成。
发酵液制备:
发酵培养基采用实施例5提供的发酵培养基。将配置好的发酵培养基放到50L发酵罐中实消灭菌,灭菌温度124℃,灭菌时间20min,灭菌后体积在12.8L左右。
接种:将培养好的二级种子用灭菌后的5L移种瓶移出3.2L,然后接到50L发酵罐中,定容16L。
发酵条件为:
初始条件:罐压0.05Mpa,通气量10L/min,搅拌200rpm,pH7.0;温度控制33℃;
溶氧控制:溶氧低于控制下限时,通过依次循环调节罐压、通气量、搅拌,溶氧维持30-60%;
过程残糖控制:流加糖65%,过程控制残糖0-0.5%,根据OD增长逐步提高流加糖速率。
实施例10:发酵生产谷氨酸的方法与实施例9相同,不同之处在于:将实施例9中发酵培养基中的芸苔素内酯浓度变为100ug/L。
实施例11:发酵生产谷氨酸的方法与实施例9相同,不同之处在于:将实施例9中发酵培养基中的芸苔素内酯浓度变为200ug/L。
实施例12:发酵生产谷氨酸的方法与实施例9相同,不同之处在于:将实施例9中的种子培养基替换为实施例2提供的种子培养基;将实施例9中的发酵培养基替换为实施例6提供的发酵培养基。
实施例13:发酵生产谷氨酸的方法与实施例9相同,不同之处在于:将实施例9中的种子培养基替换为实施例3提供的种子培养基;将实施例9中的发酵培养基替换为实施例7提供的发酵培养基。
实施例14:发酵生产谷氨酸的方法与实施例9相同,不同之处在于:将实施例9中的种子培养基替换为实施例4提供的种子培养基;将实施例9中的发酵培养基替换为实施例8提供的发酵培养基。
对比例1:发酵生产谷氨酸的方法与实施例9相同,不同之处在于:本对比例采用的种子培养基与实施例9种子培养基不同之处在于没有添加芸苔素内酯;本对比例采用的发酵培养基与实施例9发酵培养基不同之处在于没有添加芸苔素内酯。
对比例2:发酵生产谷氨酸的方法与实施例9相同,不同之处在于:本对比例采用的种子培养基与实施例9种子培养基不同之处在于将芸苔素内酯替换为胺鲜酯;本对比例采用的发酵培养基与实施例9发酵培养基不同之处在于将芸苔素内酯替换为胺鲜酯。
对比例3:发酵生产谷氨酸的方法与实施例9相同,不同之处在于:本对比例采用的种子培养基与实施例9种子培养基不同之处在于将芸苔素内酯替换为多效唑;本对比例采用的发酵培养基与实施例9发酵培养基不同之处在于将芸苔素内酯替换为多效唑。
实施例9-14及对比例1-3方法均重复进行三次实验,检测并计算每次实验的指标值,然后计算得到表1和表2中相关指标的平均值。
表1实施例9-14及对比例1-3的培养谷氨酸棒杆菌种子液的指标
实验项目 | 种子液的OD值 | 种子生长周期h |
实施例9 | 40 | 21.8 |
实施例10 | 40 | 22.0 |
实施例11 | 40 | 21.9 |
实施例12 | 40 | 22 |
实施例13 | 40 | 21.8 |
实施例14 | 40 | 21.8 |
对比例1 | 40 | 28 |
对比例2 | 40 | 28 |
对比例3 | 40 | 28 |
从表1数据可以看出,采用对比例1-3的种子培养基培养谷氨酸棒杆菌,种子液直到OD值为40时,所需要的种子生长周期为28h,明显高于采用本发明实施例9-14中种子培养基培养谷氨酸棒杆菌种子液直到OD值为40时,所需要的种子生长周期;由此可见,本发明在种子培养基中添加芸苔素内脂可有效的促进谷氨酸棒杆菌***,促进菌体生长,缩短了谷氨酸棒杆菌种子的生长周期。
对比例2-3发酵方法种子液直到OD值为40时,所需要的种子生长周期与对比例1发酵方法种子液直到OD值为40时,所需要的种子生长周期相当,说明植物生长调节剂胺鲜酯和多效唑对谷氨酸菌体性能无影响。
在种子培养基中添加芸苔素内酯,一方面能够打破种子的休眠,促进细胞生长,减少了使谷氨酸菌体在种子培养基中培养的延滞期;另一方面能够促进细胞***和生长;进而缩短种子培养周期。
表2实施例9-14及对比例1-3的发酵指标
项目 | 产酸率% | 转化率% | 发酵周期h |
实施例9 | 20 | 68 | 34 |
实施例10 | 22 | 70.5 | 34 |
实施例11 | 21.2 | 69 | 34 |
实施例12 | 22 | 70.5 | 34 |
实施例13 | 21.2 | 69 | 34 |
实施例14 | 21.6 | 69.6 | 34 |
对比例1 | 19 | 66 | 38 |
对比例2 | 19.2 | 66.4 | 38 |
对比例3 | 18.8 | 65.6 | 38 |
从表2数据可以看出,采用对比例1-3发酵方法的产酸率为18.8%-19.2%,转化率为65.6%-66.4%,明显低于采用本发明实施例9-14中的发酵方法的产酸率和转化率;采用对比例1-3中发酵方法得到谷氨酸发酵液的发酵周期为38h,明显高于采用本发明实施例9-14中的发酵方法得到谷氨酸发酵液的发酵周期。
对比例2-3发酵方法的产酸率和转化率与对比例1发酵方法的产酸率和转化率基本相当,说明植物生长调节剂胺鲜酯和多效唑对谷氨酸菌体性能无影响。
在发酵培养基中添加芸苔素内酯,能够促进菌体细胞***和生长,缩短发酵周期;同时能够延缓菌体的衰老时间,提高了发酵中后期菌体的活性,进而提高产酸能力和耗糖速率,提高糖酸转化率和产酸量。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种用于发酵生产谷氨酸的种子培养基,其包括基础种子培养基溶质,其特征在于,其还包括有芸苔素内酯;
所述芸苔素内酯的浓度为10-20ug/L;
所述种子培养基中的基础种子培养基溶质的浓度为:葡萄糖40-50g/L,玉米浆30-50g/L、豆粕水解液10-30g/L,氯化钾1-2g/L、硫酸镁1-2g/L、丁二酸2-4g/L、硫酸亚铁1-2mg/L、硫酸锰1-2mg/L,消泡剂0.3-0.5mL/L,生物素0.3-0.5mg/L。
2.根据权利要求1所述的一种用于发酵生产谷氨酸的种子培养基,其特征在于,所述玉米浆的浓度为18-25波美度。
3.根据权利要求1所述的一种用于发酵生产谷氨酸的种子培养基,其特征在于,所述豆粕水解液的总氮含量为20~50g/L。
4.一种用于发酵生产谷氨酸的发酵培养基,其包括基础发酵培养基溶质,其特征在于,其还包括有芸苔素内酯;
所述芸苔素内酯的浓度为50-200ug/L;
所述发酵培养基中的基础发酵培养基溶质的浓度为:葡萄糖20-30g/L,玉米浆70-80g/L、豆粕水解液30-40g/L,甜菜碱0.5-1g/L、磷酸二氢钾1-2g/L、硫酸镁1-2g/L、硫酸亚铁0.1-0.5mg/L、硫酸锰0.1-0.5mg/L,消泡剂0.3-0.5mL/L,生物素0.1-0.2mg/L、VB10.3-0.5mg/L。
5.根据权利要求4所述的一种用于发酵生产谷氨酸的发酵培养基,其特征在于,所述玉米浆的浓度为18-25波美度。
6.根据权利要求4所述的一种用于发酵生产谷氨酸的发酵培养基,其特征在于,所述豆粕水解液的总氮含量为20~50g/L。
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