CN114717295B - 液相芯片法杂交缓冲液、配制方法及液相芯片检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于液相芯片领域，公开了一种液相芯片法杂交缓冲液，具体是一种适用于液相芯片法多重核酸检测的杂交缓冲液，并提供配制方法和利用该杂交缓冲液进行液相芯片检测的方法，该液相芯片法杂交缓冲液成分简单，容易配制，在针对低温不析出晶体的要求上改进后，调整了传统液相芯片法杂交缓冲液中TMAC的浓度，并加入了液相芯片法杂交缓冲液中未用过的氯化铵，意外地发现了该液相芯片法杂交缓冲液在针对多重PCR样本的检测中能降低背景信号，提高杂交反应灵敏度。

Description

液相芯片法杂交缓冲液、配制方法及液相芯片检测方法
技术领域
本发明涉及一种液相芯片法杂交缓冲液、配制方法及液相芯片检测方法，属于液相芯片领域。
背景技术
液相芯片又称悬浮阵列或流式荧光技术，其基本检测原理是以悬浮微球作为液相反应载体，以流式细胞术作为分析手段，通过红、绿两束激光检测微球编码荧光并报告分子荧光来达到定性和定量检测的目的。仅凭掺入不同比例的红色和橙色两种荧光染料，就可将微球分为100种以上不同的颜色，形成编码微球阵列，从而对多指标实现一次性高通量高密度分析。因此液相芯片技术在核酸、蛋白质等生物大分子的大规模检测中具有巨大的应用潜力。
使用液相芯片法进行核酸检测的流程包括：（1）核酸提取；（2）PCR扩增反应；（3）探针微球与PCR产物的杂交反应；（4）报告荧光分子孵育；（5）流式细胞仪或液相芯片仪上机检测。
在应用于多靶标核酸分子的检测中，多种靶基因在经过多重PCR扩增后，扩增产物与嫁接有不同寡核苷酸探针的编码微球之间的杂交反应效率对检测灵敏度具有重要影响。杂交效率除了与探针和靶标序列之间碱基互补配对的特异性有关外，还取决于杂交反应环境，即杂交缓冲液。
目前绝大多数文献资料中，液相芯片检测中所使用的杂交缓冲液配方源于液相芯片法的发明厂商，配方中包括4.5M 四甲基氯化铵（TMAC）、0.15% SDS（十二烷基硫酸钠）、75mM Tris（三羟甲基氨基甲烷）和6mM EDTA（乙二胺四乙酸）配制而成的1.5×杂交缓冲液，50μl杂交反应体系中包含1.5×杂交缓冲液33μl、Tris-EDTA（pH = 8）缓冲液12μl以及PCR产物5μl。
该配方存在以下缺点：一、配制过程中加入的SDS在缓冲液中极难溶解。二、杂交缓冲液总离子浓度较高，在温度低于10℃的环境下容易产生结晶析出，造成使用困难。
目前尚未有针对液相芯片法杂交缓冲液进行筛选优化的相关报道，杂交检测灵敏度还有待进一步提高。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明提供一种液相芯片法杂交缓冲液，具体是一种适用于液相芯片法多重核酸检测的杂交缓冲液，并提供配制方法和利用该杂交缓冲液进行液相芯片检测的方法，该液相芯片法杂交缓冲液配制方法简单，且能够在低温下使用。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
第一方面，本申请提供一种液相芯片法杂交缓冲液，溶质仅含有氯化铵和四甲基氯化铵。
本申请提供的液相芯片法杂交缓冲液容易配制，低温下不易析出晶体，另外还具有提高杂交反应灵敏度的效果。
进一步地，所述的液相芯片法杂交缓冲液的溶液为水。
进一步地，应用于液相芯片杂交反应时，所述四甲基氯化铵在体系中的最终浓度为1mol/L-2mol/L。发明人也尝试过使用更高浓度的TMAC（＞2M，1M=1mol/L），但由于TMAC粘度较大，杂交后磁性分离会造成大量微球损失，影响微球荧光计数统计分析。
进一步地，应用于液相芯片杂交反应时，所述四甲基氯化铵在体系中的最终浓度为1mol/L-1.75mol/L。
进一步地，应用于液相芯片杂交反应时，所述四甲基氯化铵在体系中的最终浓度为1.5mol/L-1.75mol/L。最优选为1.75M，能使结果具有最低的背景信号。
进一步地，应用于液相芯片杂交反应时，所述氯化铵在体系中的最终浓度为0.25mol/L-1mol/L。发明人也尝试过使用没有TMAC的2M NH4Cl做实验，结果背景信号尚可，但对于某些指标得到的阳性结果差，因此TMAC和NH4Cl两种成分缺一不可。
进一步地，应用于液相芯片杂交反应时，所述氯化铵在体系中的最终浓度为0.25mol/L-0.5mol/L。最优选为0.25M，能使结果具有最低的背景信号。
进一步地，所述液相芯片法杂交缓冲液为浓缩液。
进一步地，所述液相芯片法杂交缓冲液杂交缓冲液为1.5×浓缩液。
第二方面，本申请提供一种液相芯片法杂交缓冲液的配制方法，步骤包括：将氯化铵溶解于纯净水中，得到氯化铵溶液；将所述氯化铵溶液与四甲基氯化铵溶液混合，得到溶质仅含有氯化铵和四甲基氯化铵的液相芯片法杂交缓冲液。配制过程简单，得到的液相芯片法杂交缓冲液低温下不易析出晶体，另外还具有提高杂交反应灵敏度的效果。
第三方面，本申请提供一种液相芯片检测方法，步骤包括：核酸提取-PCR扩增反应-探针微球与PCR产物的杂交反应-报告荧光分子孵育-用流式细胞仪或液相芯片仪检测，所述探针微球与PCR产物的杂交反应的步骤包括：
将第一方面所述的液相芯片法杂交缓冲液与探针微球溶液混合，然后加入PCR产物，混合均匀得到杂交反应体系，将所述杂交反应体系放入分子杂交设备中杂交。该液相芯片检测方法中应用了溶质仅含有氯化铵和四甲基氯化铵的液相芯片法杂交缓冲液，能够提高反应灵敏度。其中分子杂交设备为PCR仪或分子杂交炉。
本发明的有益效果是：本发明的液相芯片法杂交缓冲液成分简单，容易配制，在针对低温不析出晶体的要求上改进后，调整了传统液相芯片法杂交缓冲液中TMAC的浓度，并加入了液相芯片法杂交缓冲液中未用过的氯化铵，意外地发现了该液相芯片法杂交缓冲液在针对多重PCR样本的检测中能降低背景信号，能够提高杂交反应灵敏度。
附图说明
图1是对比组合1中使用常规杂交缓冲液和本发明杂交缓冲液测试空白样本产生的背景信号柱状图。
图2是对比组合1中使用常规杂交缓冲液和本发明杂交缓冲液测试低模板浓度样本产生的柱状图。
图3是对比组合1中使用常规杂交缓冲液和本发明杂交缓冲液测试高模板浓度样本产生的柱状图。
图4是对比组合1中使用常规杂交缓冲液和本发明杂交缓冲液测试低模板浓度样本信号与背景信号的比值的柱状图。
图5是对比组合2中使用三种杂交缓冲液测试空白样本产生的背景信号柱状图。
图6是对比组合2中使用三种杂交缓冲液测试低模板浓度样本产生的柱状图。
图7是对比组合2中使用三种杂交缓冲液测试高模板浓度样本产生的柱状图。
图8是对比组合2中使用三种杂交缓冲液测试低模板浓度样本信号与背景信号的比值的柱状图。
图9是对比组合3中使用C、D、E、F四组杂交缓冲液测试空白样本产生的背景信号柱状图。
图10是对比组合3中使用C、D、E、F四组杂交缓冲液测试低模板浓度样本产生的柱状图。
图11是对比组合3中使用C、D、E、F四组杂交缓冲液测试低模板浓度样本信号与背景信号的比值的柱状图。
图12是对比组合4中使用本发明杂交缓冲液在pH值调至5、6、7、8时测试空白样本产生的背景信号柱状图。
图13是对比组合4中使用本发明杂交缓冲液在pH值调至5、6、7、8时测试低模板浓度样本产生的柱状图。
图14是对比组合4中使用本发明杂交缓冲液在pH值调至5、6、7、8时测试高模板浓度样本产生的柱状图。
图15是对比组合5中使用含不同浓度SDS的杂交缓冲液测试空白样本产生的背景信号柱状图。
图16是对比组合5中使用含不同浓度SDS的杂交缓冲液测试低模板浓度样本信号与背景信号的比值的柱状图。
图17是对比组合5中使用含不同浓度SDS的杂交缓冲液测试高模板浓度样本信号与背景信号的比值的柱状图。
图18是对比组合5中在流式细胞仪测试中在FSC/SSC二维坐标系中进行微球框选时，未加入SDS的测试组微球集中区域结果图。
图19是对比组合5中在流式细胞仪测试中在FSC/SSC二维坐标系中进行微球框选时，含0.05%SDS的测试组微球集中区域结果图。
图20是对比组合5中在流式细胞仪测试中在FSC/SSC二维坐标系中进行微球框选时，含0.1%SDS的测试组微球集中区域结果图。
图21是对比组合6中使用J、K、L、M四组杂交缓冲液测试空白样本产生的背景信号柱状图。
图22是对比组合6中使用J、K、L、M四组杂交缓冲液测试低模板浓度样本产生的柱状图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
下面通过具体实施方式结合附图对本发明作进一步详细说明。
现有文献中筛选优化的缓冲液多数是PCR缓冲液，即上文使用液相芯片法进行核酸检测的流程中，流程（2）PCR扩增反应用到PCR缓冲液，而本发明针对的是流程（3）探针微球与PCR产物的杂交反应时用到的杂交缓冲液。
需要注意的是，杂交反应过程中所用到的缓冲液与PCR反应中用到的缓冲液在成分、使用目的和作用效果等方面截然不同。PCR缓冲液中成分主要包括Tris-HCl、KCl、MgCl2等，部分商家会根据使用需要另外添加其他成分，如加入(NH4)2SO4等用于提高PCR反应的特异性。PCR缓冲液的作用是给DNA聚合酶提供一个最适合酶催反应的条件，以保障PCR扩增的顺利进行。而杂交反应是PCR产物与微球表面单链DNA探针结合的过程，该过程没有酶的参与，反应体系仅包含缓冲液、探针微球、PCR产物三种成分。杂交反应的目的是使微球上的DNA探针与靶基因经PCR扩增后携带生物素的双链产物片段一对一结合，以便于后续与亲和素修饰的报告分子连接。
发明人在面对常规含有4.5M TMAC、0.15% SDS、75mM Tris和6mM EDTA的1.5×杂交缓冲液难以配制，低温（10℃）下容易结晶的问题时，调整了TMAC的浓度，并加入一些新的（对于液相芯片法杂交缓冲液而言）物质改变常规配方中的一些组分，当只含有TMAC和氯化铵时，在容易配制，低温下不结晶的基础上，意外地发现了该搭配能降低液相芯片法检测时的背景信号，提高信噪比，能够提高杂交反应的灵敏度。
其后进行了进一步的实验，探明在杂交反应体系中，TMAC的最终浓度在1M-2M，氯化铵的最终浓度在0.25M-0.75M时，能够使背景信号处于最低区间。并筛选出最优组合为TMAC的最终浓度为1.75M，氯化铵的最终浓度为0.25M。
以下采用液相芯片法检测15重PCR产物来体现常规杂交缓冲液和本发明的杂交缓冲液的性能区别。
其中15重PCR产物包括病毒组合15重PCR产物和空白15重PCR产物。病毒组合15重PCR产物为针对15种呼吸道病毒基因位点序列设计的15个质粒样本在同一反应管内经过45个PCR循环扩增得到的PCR产物，以下实验中以此作为样本。15种呼吸道病毒包括甲型流感亚型H1N1、H3N2、H7N9；甲型流感大类INVA；乙型流感大类INVB；鼻病毒HRV；人合胞病毒RSV；人偏肺病毒HMPV；腺病毒HADV；四种常见人类冠状病毒OC43、NL63、229E、HKU1；新型冠状病毒两个基因位点ORF1ab和N基因。空白15重PCR产物为加入与质粒等量体积的无酶水进行15重PCR扩增后得到的产物。多重PCR反应体系体积均为20μl，后续液相芯片法杂交反应中只取其中5μl作为样本。
样本包括空白样本、低模板浓度样本和高模板浓度样本。空白样本为在空白15重PCR产物中取样得到的样本。低模板浓度样本为PCR反应管内加入的15种质粒浓度均在n*101copies水平的样本。高模板浓度样本为15种质粒浓度均在n*103copies水平的样本。
对比组合1——对比使用本发明杂交缓冲液与常规杂交缓冲液在检测15重PCR产物时的效果差异：
常规的1.5×杂交缓冲液包含4.5M TMAC、75mM Tris、0.15% SDS以及6mM EDTA。具体配制方法如下：称取75mg SDS加入0.65ml纯净水、3.75ml Tris（1M）、0.6ml EDTA（0.5M）以及45ml TMAC（5M），在室温下超声涡旋混合均匀，得到体积为50mL的1.5×常规杂交缓冲液。
本实施例中的液相芯片法杂交缓冲液在体系中的最终浓度下（1×）包含1.5MTMAC和0.5M NH4Cl。按本发明的配制方法配制杂交缓冲液：称取5.35g NH4Cl 溶于20 ml纯净水中得到5M NH4Cl 溶液。将22.5ml TMAC（5M）、7.5ml NH4Cl溶液（5M）与20mL纯净水在室温下混合均匀，得到体积为50mL的1.5×TMAC+ NH4Cl杂交缓冲液。
杂交反应过程为：
杂交反应体系配制：A组、常规杂交反应体系：将15种探针微球（2000球/种）溶于12μl TE缓冲液中，加入33μl 1.5×常规杂交缓冲液，加入5μl 15重PCR产物，涡旋混匀。B组、本发明杂交反应体系：将15种探针微球（2000球/种）溶于12μl TE缓冲液中，加入33μl 1.5×TMAC+NH4Cl杂交缓冲液，加入5μl 15重PCR产物，涡旋混匀。
将A、B两组杂交反应管放入PCR仪，在95℃反应5min，然后在60℃反应10min。
将杂交反应管从PCR仪拿下后放置在磁力架上1min，吸去上清液。
同时加入7mg/ml SA-PE(R-藻红蛋白标记链霉亲和素)的PBS溶液50μl，涡旋混匀，室温放置20min后用流式细胞仪进行检测。
使用贝克曼CytoFlex流式细胞仪在相同配置参数下测试两组杂交产物中各编码微球上的PE通道中位数（PE-median）信号值（荧光相对强度，无量纲）如表1所示，将表1数据统计分析处理得到柱状图对比如图1至图4。其中，图1至图3分别表示使用常规杂交缓冲液和本发明杂交缓冲液与空白样本、低模板浓度样本、高模板浓度样本的15重PCR扩增产物杂交后，用流式细胞仪测试信号值差异的结果；图4表示使用两种杂交缓冲液与低模板浓度样本杂交得到的阳性信号与背景信号的比值。
表1
Figure 642021DEST_PATH_IMAGE002
与常规杂交缓冲液相比，使用本发明杂交缓冲液测试得到的背景信号（由空白样本产生）更低且阳性信号更高，低模板浓度下两组杂交反应体系阳新信号差距更明显。将低模板浓度各指标阳性信号与对应背景信号相除得到阳性/阴性比值对比如图4，本发明杂交缓冲液结果明显好于常规杂交缓冲液。
对比组合2——对比杂交缓冲液中分别使用NaCl、KCl与NH4Cl在检测15重PCR产物时的效果差异：
TMAC的作用是减少多条核酸链杂交退火温度差异，提高杂交反应的特异性，发明人在优化常规杂交缓冲液时保留了该组分。发明人推测NH4Cl中NH4 +能够中和磷酸基团的负电荷，降低DNA链之间的排斥力，增加探针与PCR产物之间的杂交效率，提高杂交反应灵敏度。
本实施例用到的15重PCR产物、杂交过程、检测过程均与对比组合1相同，区别在于杂交缓冲液的配制。三种杂交缓冲液稀释至1×时的成分分别为1.75M TMAC+0.25M NaCl、1.75M TMAC+0.25M KCl以及1.75M TMAC+0.25M NH4Cl 。配制方法如下：
称取5.844g NaCl溶于20ml纯净水配制5M NaCl溶液；称取7.455g KCl溶于20ml纯净水配制5M KCl溶液；称取5.35g NH4Cl溶于20 ml纯净水得到5M NH4Cl溶液。
分别将43.75ml TMAC（5M）与6.25ml NaCl（5M）、KCl（5M）、NH4Cl（5M）混匀即得到三种2.5×杂交缓冲液，组成浓度分别为4.375M TMAC与0.625M NaCl，4.375M TMAC与0.625MKCl以及4.375M TMAC与0.625M NH4Cl。
分别用这三种杂交缓冲液与15重PCR产物5μl杂交，经流式细胞仪测试得到三组样品背景、低模板浓度阳性与高模板浓度阳性信号数据如表2所示。将表2数据归纳整理得到图5至图8的柱状图。图5至图7分别表示使用含相同摩尔浓度NaCl或KCl或NH4Cl的杂交缓冲液与空白样本、低模板浓度样本、高模板浓度样本的15重PCR扩增产物杂交后，流式细胞仪测试信号值差异的结果；图8表示使用三种杂交缓冲液与低模板浓度样本杂交得到的阳性信号与背景信号的比值。
表2
Figure 995642DEST_PATH_IMAGE004
结合数据与柱状图结果可以看出，在TMAC和三种离子摩尔浓度相同的情况下，含NH4Cl的杂交缓冲液得到背景信号更低，阳性信号更高。钾离子和钠离子都能够中和磷酸基团的负电荷，但结果表明NH4Cl能取得更好的效果，其原因有待进一步研究。
对比组合3——对比不同TMAC和NH4Cl摩尔浓度配比的杂交缓冲液在检测15重PCR产物时的效果差异：
本实施例用到的15重PCR产物以及杂交与检测过程与对比组合1相同，区别在于杂交缓冲液的组成成分。共配制四种杂交缓冲液，在液相芯片杂交反应体系中最终摩尔浓度区别如下：C组、2M NH4Cl；D组、1M TMAC+1M NH4Cl；E组、1.5M TMAC+0.5M NH4Cl；F组、2MTMAC。配制时制成四种2.5×杂交缓冲液各20ml。
C组：称取5.35g NH4Cl溶于20 ml纯净水。
D组：10ml TMAC（5M）与10ml NH4Cl（5M）涡旋混匀。
E组：15ml TMAC（5M）与5ml NH4Cl（5M）涡旋混匀。
F组：20ml TMAC（5M）。
分别用上述四种杂交缓冲液与15重PCR产物杂交，经流式细胞仪测试后得到背景与低模板浓度阳性信号对比如图9和图10，将低模板浓度阳性与背景信号比值对比如图11。从图中可以看出，四种TMAC和NH4Cl摩尔浓度配比下，杂交缓冲液中没有NH4Cl的2M TMAC组整体背景最高且阳性信号最低。没有TMAC的2M NH4Cl组背景信号尚可，但对于某些指标（如H3N2、RSV、HMPV等）得到的阳性结果稍差，因此TMAC和NH4Cl两种成分缺一不可。
对比组合4——对比使用1.5M TMAC+ 0.5M NH4Cl杂交缓冲液时，杂交反应pH值对背景与阳性信号的影响：
用到的15重PCR产物以及杂交与检测过程与对比组合1相同，杂交缓冲液组分与对比组合3中E组相同，区别在于杂交体系配置完成后使用1M HCl或1M NaOH将体系pH值调至5、6、7、8。未做调整前，杂交反应pH值由pH计测量得到为7.24。在四种pH值下进行与15重PCR产物的杂交反应，测试结果如图12至图14所示。由柱状图对比可以看出，在pH为5-8的范围内，杂交测试得到的背景信号与阳性信号几乎无差别，因此本发明杂交缓冲液在pH为5-8范围内均可正常使用。
对比组合5——在杂交缓冲液中添加不同浓度的SDS，探究其对背景与阳性信号的影响：
用到的15重PCR产物以及杂交与检测过程与对比组合1相同，未添加SDS的杂交缓冲液的一组的组分与对比组合3中E组相同，即反应体系中最终杂交缓冲液摩尔浓度配比为1.5M TMAC+0.5M NH4Cl。另外两组分别向该（与对比组合3中E组相同）杂交缓冲液中加入浓度为0.05%与0.1%的SDS，其中杂交反应体系中SDS终浓度0.1%即与常规杂交缓冲液配方中用到的SDS浓度一致。
三种杂交缓冲液分别为：G组、1.5M TMAC+0.5M NH4Cl；H组、1.5M TMAC+0.5M NH4Cl+0.05%SDS；I组、1.5M TMAC+0.5M NH4Cl+0.1%SDS，经流式细胞仪测试得到三组样品的背景、低模板浓度阳性与高模板浓度阳性信号数据如表3所示。
表3
Figure 56483DEST_PATH_IMAGE006
从表3数据可以看出，加入SDS后各指标背景信号明显上升，同时阳性信号也略有上升。但计算阳性信号与背景信号的比值并绘制得到柱状图15至图17后，可以看出添加SDS后各指标阴阳性比值（即信噪比）明显降低。图15表示含不同浓度SDS的杂交缓冲液应用于15重PCR产物杂交测试的背景信号值差异；图16和图17表示使用含不同浓度SDS的杂交缓冲液与低模板浓度和高模板浓度样本杂交得到的阳性信号与背景信号的比值。
同时在流式细胞仪测试中我们发现，SDS的加入会显著影响微球状态。如图18至图20所示，在FSC/SSC二维坐标系中进行微球框选时，未加入SDS的测试组微球较为集中的区域占比高达98.04%，而加入SDS后，用同样大小的选框只能计数到76.28%和71.26%的微球，表明出现微球团聚现象，这将严重影响杂交测试结果与微球的计数统计分析，因此本发明的杂交缓冲液中不宜添加SDS成分。
对比组合6——在杂交缓冲液中添加DMSO的可行性：
因二甲基亚砜（DMSO）能够降低DNA的二级结构，因此本实施例中尝试在1.5M TMAC+0.5M NH4Cl杂交缓冲液中加入2%-10%的DMSO。本实施例用到的15重PCR产物以及杂交与检测过程与对比组合1相同，杂交缓冲液组分分别为：J组、1.5M TMAC+0.5M NH4Cl；K组 1.5MTMAC+0.5M NH4Cl+2%DMSO；L组1.5M TMAC+0.5M NH4Cl+6%DMSO；M组、1.5M TMAC+0.5M NH4Cl+10%DMSO。经流式细胞仪测试得到三组样品的背景与低模板浓度阳性信号数据如表4所示。
表4
Figure 317700DEST_PATH_IMAGE008
将数据整理得到如图21和图22所示的柱状图。从数据与柱状图中可以看出，除OC43外，加入DMSO对多数指标的背景信号无明显影响，但阳性信号会随着DMSO浓度的增加呈现明显的递减趋势。推测DMSO虽然能够减少DNA二级结构的形成，但也会降低探针与产物之间形成双链结合的稳定性，因此DMSO不适合加入到本发明的杂交缓冲液中。
本发明的液相芯片法多重核酸检测杂交缓冲液成分简单、配制方便、成本低廉，用于探针微球与多重PCR产物之间杂交反应的效果与目前使用范围最广的常规杂交缓冲液相比，背景信号更低且阳性信号更高，即提高杂交反应效率的同时减少了核酸分子之间的非特异性结合，有利于基于液相芯片法进行多靶标核酸检测灵敏度的提高。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施方式”“某些实施方式”“示意性实施方式”“示例”“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合所述实施方式或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施方式或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施方式或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施方式或示例中以合适的方式结合。
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种液相芯片法杂交缓冲液，其特征在于，在pH为5-8的范围内使用，溶质为氯化铵和四甲基氯化铵，溶剂为水，所述四甲基氯化铵在体系中的工作浓度为1mol/L-2mol/L，所述氯化铵在体系中的工作浓度为0.25mol/L-1mol/L。
2.根据权利要求1所述的液相芯片法杂交缓冲液，其特征在于，应用于液相芯片杂交反应时，所述四甲基氯化铵在体系中的工作浓度为1mol/L-1.75mol/L。
3.根据权利要求2所述的液相芯片法杂交缓冲液，其特征在于，应用于液相芯片杂交反应时，所述四甲基氯化铵在体系中的工作浓度为1.5mol/L-1.75mol/L。
4.根据权利要求1所述的液相芯片法杂交缓冲液，其特征在于，应用于液相芯片杂交反应时，所述氯化铵在体系中的工作浓度为0.25mol/L-0.5mol/L。
5.根据权利要求1所述的液相芯片法杂交缓冲液，其特征在于，所述液相芯片法杂交缓冲液为浓缩液。
6.一种如权利要求1至5任一项所述的液相芯片法杂交缓冲液的配制方法，其特征在于，步骤包括：将氯化铵溶解于纯净水中，得到氯化铵溶液；将所述氯化铵溶液与四甲基氯化铵溶液混合，得到如权利要求1至5任一项所述的液相芯片法杂交缓冲液。
7.一种非疾病诊断目的的液相芯片检测方法，步骤包括：核酸提取-PCR扩增反应-探针微球与PCR产物的杂交反应-报告荧光分子孵育-用流式细胞仪或液相芯片仪检测，其特征在于，所述探针微球与PCR产物的杂交反应的步骤包括：
将权利要求1至5任一项所述的液相芯片法杂交缓冲液与探针微球溶液混合，然后加入PCR产物，混合均匀得到杂交反应体系，将所述杂交反应体系放入分子杂交设备中杂交。
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