CN114689415A - 一种稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒及制备方法，按照配比要求，将100mmol/L的缓冲体系、防腐剂和0.01‑0.06g/L的丝氨酸加入混合容器中，并调节pH值至9.0±0.2，并在加入10‑100mmol/L的还原剂搅拌静置和过滤后，加入对应的第二原料进行搅拌，得到第一试剂；按照配比要求，将获取的缓冲体系50mmol/L、稳定剂1‑100g/L和防腐剂的pH值调节至7.6±0.2，并加入对应的第四原料进行混合，得到第二试剂，提高试剂盒的长效期稳定性。
Description
技术领域
本发明涉及医学检测技术领域，尤其涉及一种稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒及制备方法。
背景技术
同型半胱氨酸(HCY)是一种含硫氨基酸，其本身不直接参与人体蛋白质合成，是一种人体代谢中间产物。目前同型半胱氨酸检测方法有很多中，其中包括高效液相色谱法(HPLC)、荧光偏振免疫分析法(FPIA)、酶联免疫分析法 (ELISA)、氨基酸分析测定法、离子色谱法、电化学、酶循环法等。
临床上酶循环法是目前检测同型半胱氨酸的主流方法之一，其检测原理为同型半胱氨酸在胱硫醚β-合成酶催化下和丝氨酸反应生产L-胱硫醚，L-胱硫醚在胱硫醚β-裂解酶作用下又生成同型半胱氨酸、丙酮酸和氨。该循环反应生成的丙酮酸可用乳酸脱氢酶(LDH)和还原性辅酶I(NADH)检测到，NADH转变成NAD+的速率与同型半胱氨酸的含量成正比，测定NADH降低速率可以得到同型半胱氨酸含量。目前常规酶循环法试剂盒普遍存在试剂长效期不稳定现象。
发明内容
本发明的目的在于提供一种稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒及制备方法，提高试剂盒的长效期稳定性。
为实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
将获取的多种第一原料的pH进行调节，并在搅拌静置和过滤后，加入对应的第二原料进行搅拌，得到第一试剂；
将获取的多种第三原料的pH值调节至7.6±0.2，并加入对应的第四原料进行混合，得到第二试剂。
其中，将获取的多种第一原料的pH进行调节，并在搅拌静置和过滤后，加入对应的第二原料进行搅拌，得到第一试剂，包括：
按照配比要求，将100mmol/L的缓冲体系、防腐剂和0.01-0.06g/L的丝氨酸加入混合容器中，并调节pH值至9.0±0.2；
向所述混合容器中加入10-100mmol/L的还原剂；
在搅拌静置和过滤后，加入对应的第二原料进行搅拌，得到第一试剂。
其中，在搅拌静置和过滤后，加入对应的第二原料进行搅拌，得到第一试剂，包括：
在设定的搅拌时间和搅拌速度下，对所述混合容器进行搅拌；
将搅拌完成后的所述混合容器置于2-8度平衡24h，并利用不锈钢过滤器及滤膜过滤；
向过滤后的所述混合容器中加入所述第二原料，搅拌得到所述第一试剂。
第二方面，本发明提供了一种稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒，如第一方面所述的一种稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒的制备方法应用于一种稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒，
所述稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂包括第一原料和第二原料，所述第二试剂包括第三原料和第三原料；
所述第一原料包括缓冲体系100mmol/L、防腐剂和丝氨酸0.01-0.06g/L和还原剂10-100mmol/L；所述第二原料包括NADH 0.1-0.5g/L和LDH 10-50ku/L；
所述第三原料包括缓冲体系50mmol/L、稳定剂1-100g/L和防腐剂；所述第四原料包括胱硫醚β-合成酶1-10KU/L、胱硫醚β-裂解酶1-10KU/L、激活剂 0.001-0.01g/L。
其中，所述还原剂为TCEP、GPC、EGTA一种或多种，其中，所述TCEP、所述GPC和所述EGTA一种或多种按摩尔浓度比1：0.8-1.2:2-2.5混合。
其中，所述的稳定剂为乙二醇、β-甲基糊精、葡聚糖70、D-海藻糖、PEG6000 中的一种或多种。
其中，所述缓冲体系为HEPES、三乙醇胺、TRIS-HCL、TES中的一种或多种。
本发明的一种稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒及制备方法，按照配比要求，将100mmol/L的缓冲体系、防腐剂和0.01-0.06g/L的丝氨酸加入混合容器中，并调节pH值至9.0±0.2，并在加入10-100mmol/L的还原剂搅拌静置和过滤后，加入对应的第二原料进行搅拌，得到第一试剂；按照配比要求，将获取的缓冲体系50mmol/L、稳定剂1-100g/L和防腐剂的pH值调节至7.6±0.2，并加入对应的第四原料进行混合，得到第二试剂，提高试剂盒的长效期稳定性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明提供的一种稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒的制备方法的步骤示意图。
图2是本发明提供的一种稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒与进口试剂盒临床相关性比较。
图3为本发明提供的一种稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒与对比试剂盒的质控品长效期监测曲线图。
图4为本发明提供的一种稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒与比对试剂盒的热稳定性曲线图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。
请参阅图1，本发明提供一种稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
S101、将获取的多种第一原料的pH进行调节，并在搅拌静置和过滤后，加入对应的第二原料进行搅拌，得到第一试剂。
具体的，按照配比要求，将100mmol/L的缓冲体系、防腐剂和0.01-0.06g/L 的丝氨酸加入混合容器中，并调节pH值至9.0±0.2；向所述混合容器中加入 10-100mmol/L的还原剂；在设定的搅拌时间和搅拌速度下，对所述混合容器进行搅拌；接着，将搅拌完成后的所述混合容器置于2-8度平衡至少24h，并利用不锈钢过滤器及滤膜过滤，最后向过滤后的所述混合容器中加入NADH 0.1-0.5g/L，LDH 10-50ku/L进行搅拌混合，得到第一试剂，其中，所述的还原剂为TCEP、GPC、EGTA的混合物。本发明还原剂组合比其他更为稳定，且使用PH范围更广。
将上述还原剂混合物按摩尔浓度比1：0.8-1.2:2-2.5混合。还原剂浓度规定在10-100mmol/L以下是因为检测过程中，HCY还原型态被氧化所需理论还原剂浓度不宜过高，过高的还原剂会影响后续的反应，从而影响临床测试结果。而过低还原剂浓度则导致氧化不充分，临床测试偏低。本发明所述还原剂浓度指 TCEP浓度，GPC和EGTA浓度根据上述比例与TCEP混合稳定性更佳。
S102、将获取的多种第三原料的pH值调节至7.6±0.2，并加入对应的第四原料进行混合，得到第二试剂。
具体的，根据配方要求，向另一个混合容器中依次加入缓冲体系50mmol/L、稳定剂1-100g/L、防腐剂，并调节PH值至7.60±0.20，继续依次加入胱硫醚β -合成酶1-10KU/L、胱硫醚β-裂解酶1-10KU/L、激活剂0.001-0.01g/L，得到第二试剂。所述激活剂为5-磷酸吡哆醛，合理使用激活剂后能有效降低胱硫醚β- 合成酶/裂解酶使用浓度，降低成本；激活剂与稳定剂共同作用下能有效改善胱硫醚β-合成酶/裂解酶随时间推移而出现的活性降低现象，有效延长了试剂长效期稳定性。
本发明提供一种稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒，所述的一种稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒的制备方法应用于一种稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒，所述稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂包括第一原料和第二原料，所述第二试剂包括第三原料和第三原料；
所述第一原料包括缓冲体系100mmol/L、防腐剂和丝氨酸0.01-0.06g/L和还原剂10-100mmol/L；所述第二原料包括NADH 0.1-0.5g/L和LDH 10-50ku/L；
所述第三原料包括缓冲体系50mmol/L、稳定剂1-100g/L和防腐剂；所述第四原料包括胱硫醚β-合成酶1-10KU/L、胱硫醚β-裂解酶1-10KU/L、激活剂0.001-0.01g/L。
在本实施方式中，所述还原剂为TCEP、GPC、EGTA一种或多种，其中，所述TCEP、所述GPC和所述EGTA一种或多种按摩尔浓度比1：0.8-1.2:2-2.5 混合。所述的稳定剂为乙二醇、β-甲基糊精、葡聚糖70、D-海藻糖、PEG6000 中的一种或多种。所述缓冲体系为HEPES、三乙醇胺、TRIS-HCL、TES中的一种或多种。
实施例1
一种稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒包括试剂1和试剂2，试剂1的组分为三乙醇胺：100mmol/L，叠氮钠：1g/L，TCEP：50mmol/L，GPC：40mmol/L， EGTA：100mmol/L:丝氨酸：0.05g/L，NADH：0.3g/L，LDH：30KU/L，Brj-35:2g/L；试剂2的组分为三乙醇胺：50mmol/L，乙二醇：100g/L，5-磷酸吡哆醛：0.008g/L，胱硫醚β-合成酶:5KU/L，胱硫醚β-裂解酶：5KU/L。
实施例2
一种稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒包括试剂1和试剂2，试剂1组分为三乙醇胺：100mmol/L，叠氮钠：1g/L，TCEP：100mmol/L，GPC：80mmol/L， EGTA：200mmol/L:丝氨酸：0.06g/L，NADH：0.5g/L，LDH：50KU/L，Brj-35:2.5g/L；试剂2的组分为三乙醇胺：50mmol/L，乙二醇：80g/L，5-磷酸吡哆醛：0.01g/L，胱硫醚β-合成酶:10KU/L，胱硫醚β-裂解酶：10KU/L。
实施例3
一种稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒包括试剂1和试剂2，试剂1组分为三乙醇胺：100mmol/L，叠氮钠：1g/L，TCEP：20mmol/L，GPC：10mmol/L，EGTA：25mmol/L:丝氨酸：0.01g/L，NADH：0.1g/L，LDH：10KU/L，Brj-35:2g/L；试剂2的组分为三乙醇胺：50mmol/L，乙二醇：100g/L，5-磷酸吡哆醛：0.001g/L，胱硫醚β-合成酶:2KU/L，胱硫醚β-裂解酶：2KU/L。
对比例1
市售的进口同型半胱氨酸检测试剂盒
对比例2
市售的普通国产同型半胱氨酸检测试剂盒
对比例3
与实施例相比其还原剂为单一TCEP：50mmol/L。
对比例4
与实施例相比其还原剂为TCEP和EDTA混合物，分别为TCEP：50mmol/L， EDTA：10mmol/L。
对比例5
与实施例相比其还原剂为TCEP、巯基乙酸、EDTA混合物，分别为：TCEP： 50mmol/L，巯基乙酸：10mmol/L，EDTA：10mmol/L。
对比例6
与实施例相比其还原剂为TCEP、DTT、巯基乙醇混合物，复合还原剂浓度为：20mmol/L。
将本发明实施例1(也可以本发明其他实施例)与对比例1同时测试40例临床血清中同型半胱氨酸的含量，检测结果如表1所示，然后以对比例1检测结果为纵坐标，以实施例1检测结果为横坐标，做回归分析，两者相关性如图2 所示。
表1实施例1与对比例1临床相关性
从表1和图1可知：实施例1和对比例1试剂盒血清测试线性相关系数为： 0.9983，回归方程：Y＝0.996x-0.0175，R2＝0.997，线性关系良好，表明本发明实施例1试剂盒与进口对比例试剂盒相关性强，说明本发明的试剂盒可替代市售常规试剂盒。
将本发明实施例1(也可以是本发明其他实施例)与对比例2-6同时进行2-8 度长效期稳定性监测，监测每个月质控测试情况，质控测试值如表2，长效期测试曲线如图3所示。
表2实施例1与对比例2-6长效期稳定性质控测试结果
| 实施例1 | 对比例2 | 对比例3 | 对比例4 | 对比例5 | 对比例6 | |
| 1 | 10 | 10.2 | 10.1 | 9.8 | 9.8 | 9.8 |
| 2 | 9.8 | 10.1 | 9.9 | 9.7 | 9.6 | 10 |
| 3 | 10.1 | 9.8 | 9.8 | 9.9 | 9.8 | 10.2 |
| 4 | 9.7 | 9.7 | 10.2 | 10.1 | 9.8 | 9.6 |
| 5 | 9.9 | 9.9 | 10.0 | 9.6 | 9.7 | 9.8 |
| 6 | 10.2 | 9.4 | 9.8 | 9.7 | 9.6 | 10.2 |
| 7 | 9.8 | 7.4 | 9.2 | 9.8 | 9.9 | 9.8 |
| 8 | 9.6 | 6.3 | 8.5 | 9.3 | 9.6 | 9.7 |
| 9 | 9.7 | 5.4 | 7.4 | 9.2 | 9.5 | 9.2 |
| 10 | 9.7 | 4.5 | 6.5 | 8.2 | 8.7 | 8.9 |
| 11 | 9.8 | 3.6 | 5.8 | 7.8 | 8.2 | 8.6 |
| 12 | 9.8 | 3.0 | 4.7 | 7.3 | 8.1 | 8.4 |
| 13 | 9.7 | 2.8 | 4.2 | 6.9 | 7.8 | 7.6 |
| 14 | 9.6 | 2.0 | 3.0 | 6.5 | 7.2 | 7.1 |
从表2和图3可知：本发明检测试剂盒长效期稳定性明显优于其他市售检测试剂长效期稳定性。
将本发明实施例1(也可以是本发明其他实施例)检测试剂盒与对比例2-6 检测试剂盒同时37度负荷稳定性监测，每天监测质控变化，每天质控变化数据如表3，稳定性曲线如图4。
表3实施例1与对比例2-6热稳定性质控测试数据
| 实施例1 | 对比例2 | 对比例3 | 对比例4 | 对比例5 | 对比例6 | |
| 1 | 10 | 9.8 | 9.9 | 9.8 | 9.8 | 9.8 |
| 2 | 9.8 | 9.7 | 10.1 | 9.9 | 9.6 | 10 |
| 3 | 10.1 | 9.6 | 9.8 | 9.7 | 9.8 | 10.2 |
| 4 | 9.7 | 9.5 | 9.6 | 9.6 | 9.8 | 9.6 |
| 5 | 9.9 | 9.3 | 9.4 | 9.3 | 9.7 | 9.8 |
| 6 | 10.2 | 9.4 | 9.2 | 9.4 | 9.6 | 10.2 |
| 7 | 9.8 | 8.6 | 9.5 | 9.6 | 9.5 | 9.8 |
从表3和图4可知：本发明检测试剂盒与其他市售检测试剂盒热稳定性差异不明显。
本发明测试血清中同型半胱氨酸检测方法为：方法：速率法，主/副波长：340nm/405nm，样本/试剂1/试剂2：13/240/65，校准方式：两点定标，反应方向：负反应。具体实施如下表4。
表4同型半胱氨酸检测试剂检测方法
本发明的一种稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒及制备方法，按照配比要求，将100mmol/L的缓冲体系、防腐剂和0.01-0.06g/L的丝氨酸加入混合容器中，并调节pH值至9.0±0.2，并在加入10-100mmol/L的还原剂搅拌静置和过滤后，加入对应的第二原料进行搅拌，得到第一试剂；按照配比要求，将获取的缓冲体系50mmol/L、稳定剂1-100g/L和防腐剂的pH值调节至7.6±0.2，并加入对应的第四原料进行混合，得到第二试剂，提高试剂盒的长效期稳定性。
以上所揭露的仅为本发明一种较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于发明所涵盖的范围。
Claims (7)
1.一种稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将获取的多种第一原料的pH进行调节，并在搅拌静置和过滤后，加入对应的第二原料进行搅拌，得到第一试剂；
将获取的多种第三原料的pH值调节至7.6±0.2，并加入对应的第四原料进行混合，得到第二试剂。
2.如权利要求1所述的稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒的制备方法，其特征在于，将获取的多种第一原料的pH进行调节，并在搅拌静置和过滤后，加入对应的第二原料进行搅拌，得到第一试剂，包括：
按照配比要求，将100mmol/L的缓冲体系、防腐剂和0.01-0.06g/L的丝氨酸加入混合容器中，并调节pH值至9.0±0.2；
向所述混合容器中加入10-100mmol/L的还原剂；
在搅拌静置和过滤后，加入对应的第二原料进行搅拌，得到第一试剂。
3.如权利要求2所述的稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒的制备方法，其特征在于，在搅拌静置和过滤后，加入对应的第二原料进行搅拌，得到第一试剂，包括：
在设定的搅拌时间和搅拌速度下，对所述混合容器进行搅拌；
将搅拌完成后的所述混合容器置于2-8度平衡24h，并利用不锈钢过滤器及滤膜过滤；
向过滤后的所述混合容器中加入所述第二原料，搅拌得到所述第一试剂。
4.一种稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒，如权利要求1至权利要求3任一项所述的一种稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒的制备方法应用于一种稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，
所述稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂包括第一原料和第二原料，所述第二试剂包括第三原料和第三原料；
所述第一原料包括缓冲体系100mmol/L、防腐剂和丝氨酸0.01-0.06g/L和还原剂10-100mmol/L；所述第二原料包括NADH 0.1-0.5g/L和LDH 10-50ku/L；
所述第三原料包括缓冲体系50mmol/L、稳定剂1-100g/L和防腐剂；所述第四原料包括胱硫醚β-合成酶1-10KU/L、胱硫醚β-裂解酶1-10KU/L、激活剂0.001-0.01g/L。
5.如权利要求4所述的稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，
所述还原剂为TCEP、GPC、EGTA一种或多种，其中，所述TCEP、所述GPC和所述EGTA一种或多种按摩尔浓度比1：0.8-1.2:2-2.5混合。
6.如权利要求4所述的稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，
所述的稳定剂为乙二醇、β-甲基糊精、葡聚糖70、D-海藻糖、PEG6000中的一种或多种。
7.如权利要求4所述的稳定性好的同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，
所述缓冲体系为HEPES、三乙醇胺、TRIS-HCL、TES中的一种或多种。
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Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030138872A1 (en) * | 1999-11-02 | 2003-07-24 | Glenn Kawasaki | Enzymatic cycling assays for homocysteine and cystathionine |
| CN105181970A (zh) * | 2015-08-28 | 2015-12-23 | 宁波瑞源生物科技有限公司 | 一种稳定的同型半胱氨酸检测试剂盒 |
| CN105296596A (zh) * | 2015-11-17 | 2016-02-03 | 山东博科生物产业有限公司 | 一种稳定性强的酶法同型半胱氨酸检测试剂盒 |
| CN106248666A (zh) * | 2016-10-06 | 2016-12-21 | 济南天舜生物技术有限公司 | 一种稳定性强的同型半胱氨酸（hcy）检测试剂 |
| WO2017155100A1 (en) * | 2016-03-11 | 2017-09-14 | Okinawa Institute Of Science And Technology School Corporation | A method, an apparatus, a system and a kit for determining the extent of aging |
-
2020
- 2020-12-31 CN CN202011624844.5A patent/CN114689415A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030138872A1 (en) * | 1999-11-02 | 2003-07-24 | Glenn Kawasaki | Enzymatic cycling assays for homocysteine and cystathionine |
| CN105181970A (zh) * | 2015-08-28 | 2015-12-23 | 宁波瑞源生物科技有限公司 | 一种稳定的同型半胱氨酸检测试剂盒 |
| CN105296596A (zh) * | 2015-11-17 | 2016-02-03 | 山东博科生物产业有限公司 | 一种稳定性强的酶法同型半胱氨酸检测试剂盒 |
| WO2017155100A1 (en) * | 2016-03-11 | 2017-09-14 | Okinawa Institute Of Science And Technology School Corporation | A method, an apparatus, a system and a kit for determining the extent of aging |
| CN106248666A (zh) * | 2016-10-06 | 2016-12-21 | 济南天舜生物技术有限公司 | 一种稳定性强的同型半胱氨酸（hcy）检测试剂 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| DA COSTA, KERRY-ANN等: "Choline deficiency in mice and humans is associated with increased plasma homocysteine concentration after a methionine load", 《AMERICAN JOURNAL OF CLINICAL NUTRITION》, vol. 81, no. 2, 31 December 2005 (2005-12-31), pages 440 - 444 * |
| 张保华: "高盐胁迫及甜菜碱、牛磺酸干预对同型半胱氨酸代谢影响", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库》, 15 April 2019 (2019-04-15), pages 1 - 3 * |
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