CN114671921A - 一种大规模寡聚核苷酸氨解方法 - Google Patents
一种大规模寡聚核苷酸氨解方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114671921A CN114671921A CN202210488847.3A CN202210488847A CN114671921A CN 114671921 A CN114671921 A CN 114671921A CN 202210488847 A CN202210488847 A CN 202210488847A CN 114671921 A CN114671921 A CN 114671921A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- oligonucleotide
- cutting
- cutting fluid
- nucleotide
- production
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 title claims abstract description 34
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 238000005915 ammonolysis reaction Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 31
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 31
- 239000002173 cutting fluid Substances 0.000 claims abstract description 25
- WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N propylamine Chemical compound CCCN WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims abstract description 18
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 claims abstract description 13
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 claims abstract description 11
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 claims abstract description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 10
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 238000007098 aminolysis reaction Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 4
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims abstract description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims abstract description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 19
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 19
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 14
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 11
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 claims description 11
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 11
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 7
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 238000007664 blowing Methods 0.000 claims description 4
- 239000007789 gas Substances 0.000 claims description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 21
- 239000000047 product Substances 0.000 abstract description 6
- 239000002699 waste material Substances 0.000 abstract description 5
- 238000011084 recovery Methods 0.000 abstract description 4
- 239000012043 crude product Substances 0.000 abstract description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 abstract description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 6
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 6
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 238000001668 nucleic acid synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
本发明涉及寡聚核苷酸技术领域，公开了一种大规模寡聚核苷酸氨解方法，所述的大规模寡聚核苷酸氨解方法包括：S1、进行寡核苷酸位置信息的编辑并合成序列。S2、将合成载体置于合成仪器上，制备获得对应序列的核苷酸。S3、配制切割液，所述的切割液配制方法包括：冷冻氨水和/或正丙胺、超纯水的混合物，置低温的条件下保存。S4、将核苷酸与切割液混合进行切割反应获得寡聚核苷酸。在氨解过程中切割液的体积以及切割时间大大减小；生产步骤简单、缩减了生产步骤，提高了整体产率，且保证了寡聚核苷酸粗产品质量；粗产品的回收率高；切割液的减少也极大地降低了生产废液的产生，降低了生产成本，也降低了生产环境污染的问题。
Description
技术领域
本发明涉及寡聚核苷酸技术领域，具体涉及一种大规模寡聚核苷酸氨解方法。
背景技术
目前寡聚核苷酸合成结束后的切割工艺根据所合成的规模来定，使用通量仪器合成规模小于1umol的可使用单管氨解或者氨解锅氨解，所使用的切割液以及切割时间也是根据工艺来确定。随着药规级别核酸市场的需求以及对克级别核酸的需求日益增大，大规模合成核酸目前已成为药用级别研究方向的主流。
但是鉴于目前市面上核酸合成以及切割工艺的不完善性，切割结束后的切割液比较多、以及切割时间比较漫长，造成浪费、生产成本高，并且切割时间以及切割方法会对产品质量有一定的影响。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供一种大规模寡聚核苷酸氨解方法，所述的大规模寡聚核苷酸氨解方法包括：
S1、进行寡核苷酸位置信息的编辑并合成序列；
S2、将合成载体置于合成仪器上，制备获得对应序列的核苷酸；
S3、配制切割液，所述的切割液配制方法包括：冷冻氨水和/或正丙胺、超纯水的混合物，置低温的条件下保存；
S4、将核苷酸与切割液混合进行切割反应获得寡聚核苷酸。
优选的：所述核苷酸序列负载于载体方法为：A、C、G、T亚磷酰胺单体溶解于乙腈，分别置于合成仪单独的对应合成通道，合成结束后取下载体柱，载体柱进行干燥，从载体柱中分离获得核苷酸。
优选的：所述载体柱干燥方法为使用氩气吹干载体柱，或者将载体柱放置真空干燥箱20℃-50℃条件下1-3h。
优选的：所述A、C、G、T亚磷酰胺单体溶解于乙腈的浓度为0.1M。
优选的：所述切割液为正丙胺、超纯水、冷冻氨水混合溶液。
优选的：正丙胺、超纯水、冷冻氨水体积比为1-5:1-5:3-15。
优选的：正丙胺、超纯水、冷冻氨水体积比为1:1:3。
优选的：所述切割液与核苷酸体积比值为100-200:1。
优选的：所述切割液与核苷酸体积比值为300:1。
优选的：所述切割反应温度为65℃的条件下氨解3h。
本发明的技术效果和优点：在氨解过程中切割液的体积以及切割时间大大减小；切割液制备简单，适合大规模生产，生产成本低；生产步骤简单、缩减了生产步骤，提高了整体产率，且保证了寡聚核苷酸粗产品质量；粗产品的回收率高；切割液的减少也极大地降低了生产废液的产生，降低了生产成本，也降低了生产环境污染的问题。
附图说明
图1为本发明提出的一种大规模寡聚核苷酸氨解方法的流程图。
图2为本发明中的寡聚核苷酸的MS图谱结果。
图3为本发明中的寡聚核苷酸的MS图谱。
图4为本发明实施例1的分析图谱。
图5为本发明实施例2的分析图谱。
图6为本发明实施例3的分析图谱。
图7为本发明实施例4的分析图谱。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。本发明的实施例是为了示例和描述起见而给出的，而并不是无遗漏的或者将本发明限于所公开的形式。很多修改和变化对于本领域的普通技术人员而言是显而易见的。选择和描述实施例是为了更好说明本发明的原理和实际应用，并且使本领域的普通技术人员能够理解本发明从而设计适于特定用途的带有各种修改的各种实施例。
参考图1，在本实施例中提出了一种大规模寡聚核苷酸氨解方法，用于大规模制备核苷酸并进行切割氨解，所述的大规模寡聚核苷酸氨解方法包括：
S1、进行寡核苷酸位置信息的编辑并合成序列。核苷酸原料可以通过购买获得。
S2、将合成载体置于合成仪器上，制备获得对应序列的核苷酸。可以通过自动化合成仪进行合成，A、C、G、T亚磷酰胺单体溶解于乙腈，分别置于合成仪单独的对应合成通道。从合成仪中拿出载体柱，对载体柱进行干燥。
S3、配制切割液。所述的切割液配制方法包括：正丙胺、超纯水、冷冻氨水混合，并进行搅拌完全溶解。摇匀置低温的条件下保存。
S4、将核苷酸与切割液混合进行切割反应，获得寡聚核苷酸。
本发明一种大规模寡聚核苷酸氨解方法，在氨解过程中切割液的体积以及切割时间大大减小；切割制备简单，适合大规模生产，生产成本低；生产步骤简单、缩减了生产步骤，提高了整体产率，且保证了寡聚核苷酸粗产品质量；粗产品的回收率高；切割液的减少也极大地降低了生产废液的产生，降低了生产成本，也降低了生产环境污染的问题。
下面将结合实施例、对照例及实验数据对本申请的一种大规模寡聚核苷酸氨解方法进行详细说明。
实施例1
S1、先进行核苷酸的合成，其中所述核苷酸序列(GTGGAATTCTCGGGTGCCAAGGC，亚磷酰胺单体购自兆维)的位置信息编辑完毕之后。
S2、将核苷酸序列上载于AKTA Oligopilot plus 100型核酸自动化合成仪。A、C、G、T亚磷酰胺单体溶解于乙腈，浓度为0.1M，分别置于合成仪单独的对应合成通道，合成规模为100μmol，载体厂家为Cytiva。核苷酸合成结束后模式为DMT OFF形式，从合成仪上拿出载体柱，氩气吹干载体，放置真空干燥箱30℃条件下干燥1h。
S3、将20mL的正丙胺+20mL超纯水+160mL冷冻新鲜氨水依次混合制备成切割液，摇匀置于2-8℃的条件下保存。
S4、将S2中制备核苷酸置于防爆耐压瓶中，加入30mL的S3中的切割液，65℃的条件下氨解3h获得寡聚核苷酸。
实施例2
S1、先进行核苷酸的合成，其中所述核苷酸序列(GTGGAATTCTCGGGTGCCAAGGC，亚磷酰胺单体购自兆维)的位置信息编辑完毕之后。
S2、将核苷酸序列上载于AKTA Oligopilot plus 100型核酸自动化合成仪。A、C、G、T亚磷酰胺单体溶解于乙腈，浓度为0.1M，分别置于合成仪单独的对应合成通道，合成规模为100μmol，载体厂家为Cytiva。核苷酸合成结束后模式为DMT OFF形式，从合成仪上拿出载体柱，氩气吹干载体，放置真空干燥箱50℃条件下干燥3h。
S3、将S2中制备核苷酸置于防爆耐压瓶中，加入100mL的冷冻新鲜氨水，70℃的条件下氨解4h获得寡聚核苷酸。
实施例3
S1、先进行核苷酸的合成，其中所述核苷酸序列(GTGGAATTCTCGGGTGCCAAGGC，亚磷酰胺单体购自兆维)的位置信息编辑完毕之后。
S2、将核苷酸序列上载于AKTA Oligopilot plus 100型核酸自动化合成仪。A、C、G、T亚磷酰胺单体溶解于乙腈，浓度为0.1M，分别置于合成仪单独的对应合成通道，合成规模为100μmol，载体厂家为Cytiva。核苷酸合成结束后模式为DMT OFF形式，从合成仪上拿出载体柱，氩气吹干载体，放置真空干燥箱40℃条件下干燥2h。
S3、60mL冰甲醇+20mL冰氨水，制备成切割液，摇匀至于2-8℃的条件下保存。
S4、将S2中制备核苷酸置于防爆耐压瓶中，加入100mL切割液，常温下切割12h获得寡聚核苷酸。
以上四种氨解方式以及氨解回收率将通过以下图谱进行显示。为了保证测量的准确度，每批次样品测量体积固定为5uL，每批次样品体积为120mL。
注：总收率计算公式如下：
OD＝测量值*原液体积/(测量体积*3)
切割收率为
有MS图谱结果可知，L＝4.75。
| 序号 | 测量体积(ul) | 测量值 | 体积 | 总OD值 | 总收率％ | 操作人 | 审核人 |
| 1 | 5 | 1.778 | 120000 | 14224.00 | 65.00 | ZJK | CP |
| 2 | 5 | 1.2308 | 120000 | 9846.40 | 45.00 | ZJK | CP |
| 3 | 5 | 1.34 | 120000 | 10720.00 | 49.00 | ZJK | CP |
| 4 | 5 | 1.356 | 120000 | 10848.00 | 49.60 | ZJK | CP |
因原液浓度很高，测量体积都会较小.四个实施例得出的结果如下表：
根据上表和图谱分析可知实施例1、2、3、4中的分析可知，实施例1切割液的体积最少，产生的废液体积也最小，对环境的污染程度最小；切割温度最低、切割时间最少，并且未对产品质量有影响；每批次样品的切割使用的氨水体积相对较小，节省了物料成本；实施例2和实施例3条件下的图谱说明该条件下的切割对产物的影响并没有太大的区别，实施例4条件下的图谱相对其他实验来说不是特别完美，可能该条件下的切割反应比较剧烈。
显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域及相关领域的普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都应属于本发明保护的范围。本发明中未具体描述和解释说明的结构、装置以及操作方法，如无特别说明和限定，均按照本领域的常规手段进行实施。
Claims (10)
1.一种大规模寡聚核苷酸氨解方法，其特征在于，所述的大规模寡聚核苷酸氨解方法包括：
S1、进行寡核苷酸位置信息的编辑并合成序列；
S2、将合成载体置于合成仪器上，制备获得对应序列的核苷酸；
S3、配制切割液，所述的切割液配制方法包括：冷冻氨水和/或正丙胺、超纯水的混合物，置低温的条件下保存；
S4、将核苷酸与切割液混合进行切割反应获得寡聚核苷酸。
2.根据权利要求1所述的一种大规模寡聚核苷酸氨解方法，其特征在于，所述核苷酸序列负载于载体方法为：将A、C、G、T亚磷酰胺单体溶解于乙腈，分别置于合成仪单独的对应合成通道，合成结束后取下载体柱，载体柱进行干燥。
3.根据权利要求2所述的一种大规模寡聚核苷酸氨解方法，其特征在于，所述载体柱干燥方法为使用氩气吹干载体柱，或者将载体柱放置真空干燥箱20℃-50℃条件下1-3h。
4.根据权利要求2所述的一种大规模寡聚核苷酸氨解方法，其特征在于，所述A、C、G、T亚磷酰胺单体溶解于乙腈的浓度为0.1M。
5.根据权利要求1所述的一种大规模寡聚核苷酸氨解方法，其特征在于，所述切割液为正丙胺、超纯水、冷冻氨水混合溶液。
6.根据权利要求5所述的一种大规模寡聚核苷酸氨解方法，其特征在于，正丙胺、超纯水、冷冻氨水体积比为1-5:1-5:3-15。
7.根据权利要求5所述的一种大规模寡聚核苷酸氨解方法，其特征在于，正丙胺、超纯水、冷冻氨水体积比为1:1:3。
8.根据权利要求1所述的一种大规模寡聚核苷酸氨解方法，其特征在于，所述切割液与核苷酸体积比值为100-200:1。
9.根据权利要求8所述的一种大规模寡聚核苷酸氨解方法，其特征在于，所述切割液与核苷酸体积比值为300:1。
10.根据权利要求1所述的一种大规模寡聚核苷酸氨解方法，其特征在于，所述切割反应温度为65℃的条件下氨解3h。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210488847.3A CN114671921A (zh) | 2022-05-06 | 2022-05-06 | 一种大规模寡聚核苷酸氨解方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210488847.3A CN114671921A (zh) | 2022-05-06 | 2022-05-06 | 一种大规模寡聚核苷酸氨解方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114671921A true CN114671921A (zh) | 2022-06-28 |
Family
ID=82080708
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210488847.3A Pending CN114671921A (zh) | 2022-05-06 | 2022-05-06 | 一种大规模寡聚核苷酸氨解方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114671921A (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1985001051A1 (en) * | 1983-09-02 | 1985-03-14 | Molecular Biosystems, Inc. | Oligonucleotide polymeric support system |
| US4965349A (en) * | 1987-12-24 | 1990-10-23 | Applied Biosystems, Inc. | Method of synthesizing oligonucleotides labeled with ammonia-labile groups on solid phase supports |
| US5348868A (en) * | 1992-04-24 | 1994-09-20 | Beckman Instruments, Inc. | Methods and reagents for cleaving and deprotecting oligonucleotides |
| CN106256831A (zh) * | 2015-06-18 | 2016-12-28 | 日东电工株式会社 | 切掉rna寡核苷酸的方法 |
| CN111704644A (zh) * | 2020-08-18 | 2020-09-25 | 苏州金唯智生物科技有限公司 | 一种氨解液及氨解方法 |
| CN113004359A (zh) * | 2021-02-25 | 2021-06-22 | 通用生物***（安徽）有限公司 | 一种寡核苷酸快速脱保护基团纯化引物的方法 |
-
2022
- 2022-05-06 CN CN202210488847.3A patent/CN114671921A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1985001051A1 (en) * | 1983-09-02 | 1985-03-14 | Molecular Biosystems, Inc. | Oligonucleotide polymeric support system |
| US4965349A (en) * | 1987-12-24 | 1990-10-23 | Applied Biosystems, Inc. | Method of synthesizing oligonucleotides labeled with ammonia-labile groups on solid phase supports |
| US5348868A (en) * | 1992-04-24 | 1994-09-20 | Beckman Instruments, Inc. | Methods and reagents for cleaving and deprotecting oligonucleotides |
| CN106256831A (zh) * | 2015-06-18 | 2016-12-28 | 日东电工株式会社 | 切掉rna寡核苷酸的方法 |
| CN111704644A (zh) * | 2020-08-18 | 2020-09-25 | 苏州金唯智生物科技有限公司 | 一种氨解液及氨解方法 |
| CN113004359A (zh) * | 2021-02-25 | 2021-06-22 | 通用生物***（安徽）有限公司 | 一种寡核苷酸快速脱保护基团纯化引物的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Uszczyńska et al. | Application of click chemistry to the production of DNA microarrays | |
| CN111196876B (zh) | 具有核酸筛分功能的孔径可调的Co基MOF材料的合成方法及其应用 | |
| EP3674419A1 (en) | Probe and method applying the same for enriching target region in high-throughput sequencing | |
| CN107603971B (zh) | 一种原位杂交探针的制备方法 | |
| CN109234433B (zh) | 一种冬瓜籽型基因的snp分子标记及其应用 | |
| ES2535702T3 (es) | Procedimiento para la preparación de una solución de metanosulfonato de alquilo | |
| CN104789687A (zh) | 用于多基因捕获测序的探针制备方法 | |
| CN114671921A (zh) | 一种大规模寡聚核苷酸氨解方法 | |
| CN114107453A (zh) | 一种检测微卫星不稳定的试剂盒 | |
| CN107227346B (zh) | 一种低成本的cbfb基因断裂快速检测探针及其制备方法和应用 | |
| CN100400507C (zh) | ***的合成方法 | |
| CN106397080A (zh) | ɑ,β‑不饱和酮的一种制备方法 | |
| CN106167825B (zh) | 一种黄颡鱼生长特性相关的微卫星标记及其检测和应用 | |
| CN108440596A (zh) | 一种半富马酸替诺福韦艾拉酚胺的新型制备工艺 | |
| CN109811075B (zh) | 一种鉴定大白菜品种真实性的方法及其专用snp引物组合 | |
| US11685915B2 (en) | Method of collecting nucleic acid | |
| CN106834493B (zh) | 一种低成本的aml1-eto融合基因快速检测探针及其制备方法和应用 | |
| CN108588196B (zh) | 一种防止pcr形成气溶胶污染的方法 | |
| CN109913575A (zh) | 一种鉴定辣椒cms雄性不育恢复基因的kasp分子标记、试剂盒及其应用 | |
| CN115261504A (zh) | 一种与梨花粉败育性状相关联分子标记及其筛选方法 | |
| AU597024B2 (en) | Process for the preparation of hydroxylamines and products thereby obtained | |
| CN113621014A (zh) | 一种固相合成dna的氨解预处理液及氨解方法 | |
| Ravikumar et al. | Development of siRNA for therapeutics: efficient synthesis of phosphorothioate RNA utilizing phenylacetyl disulfide (PADS) | |
| CN112779324A (zh) | 用于单细胞检测和分析的方法及其应用 | |
| CN117887812B (zh) | 高通量测序质控用文库及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |