CN114642714A - 一种抗肿瘤中药组合物提取物、制备方法及其在抑制乳腺癌肺转移中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种抗肿瘤中药组合物提取物、制备方法及其在抑制乳腺癌肺转移中的应用,本发明中药组合物提取物能够显著抑制乳腺癌肿瘤细胞的肺转移;此外,其还能够通过协同诱导细胞凋亡抑制细胞活力,增强乳腺癌细胞放射治疗的敏感性。
Description
技术领域
本发明属于医药领域,具体涉及一种抗肿瘤中药组合物提取物、制备方法及其在抑制乳腺癌肺转移中的应用。
背景技术
乳腺癌是乳腺上皮细胞在多种致癌因子的作用下,发生增殖失控的现象。疾病早期常表现为***肿块、***溢液、腋窝***肿大等症状,晚期可因癌细胞发生远处转移,出现多器官病变,直接威胁患者的生命。肺是乳腺癌常见的转移部位,常表现为双侧多发性结节。患者可出现咳嗽、呼吸困难、咯血、胸痛等症状。本发明提供一种既能抑制乳腺癌细胞增殖,又能抑制乳腺癌肺转移的中药组合物提取物。
发明内容
本发明提供一种(抑制乳腺癌肺转移的)中药组合物,其特征在于所述中药组合物的配方为:按重量份计,郁金1-5份、仙鹤草1-5份、五灵脂1-5份、白矾1-5、硝石1-5、制干漆0.5-3份、麸炒枳壳3-7份、马钱子粉0.5-4份。优选为:郁金2-4份、仙鹤草2-4份、五灵脂2-4份、白矾2-4、硝石2-4份、制干漆0.5-2份、麸炒枳壳4-6份、马钱子粉1-3份。最佳为:郁金3份、仙鹤草3份、五灵脂2.5份、白矾3份、硝石3份、制干漆1份、麸炒枳壳5份、马钱子粉2份。
本发明提供一种(抑制乳腺癌肺转移的)中药组合物提取物,其特征在于所述中药组合物提取物的制备方法包括如下步骤:
(1)按配方量将制干漆、五灵脂、白矾、硝石粉碎,过80目筛后,加水超声提取1-3次,合并提取液后浓缩得稠膏a;残渣用氯仿超声提取1-3次,合并提取液后浓缩得稠膏b;
(2)按配方量取郁金、麸炒枳壳用70%乙醇渗漉,收集渗漉液和药渣,渗滤液浓得浸膏c;
(3)按配方量取仙鹤草与步骤(2)中收集的药渣混合用水煎煮1-3次,合并煎煮液浓缩得稠膏d;
(4)按配方量取马钱子粉,用水回流提取1-3次,合并提取液浓缩得稠膏e;残渣用氯仿超声提取1-3次,合并提取液后浓缩得稠膏f;
(5)合并步骤(1)-(4)获得的稠膏a-f,用水复溶后挥干,即得所述中药组合物提取物。
步骤(1)、(4)中所述超声提取采用本领域常规的超声提取设备,每次超声提取时间为15-30min。提取次数为1-3次,提取溶剂的用量优选药材质量的4-6倍(更优选5倍);步骤(1)-(4)中提取溶剂(包括渗漉、煎煮、回流、超声)的用量本领域技术人员可以根据药材的物化性质进行合理选择,优选药材质量的4-6倍(更优选5倍);提取时间、次数本领域技术人员可以根据药材的物化性质进行合理选择,提取时间优选15-120min,次数优选1-3次。
本发明的另一实施方案提供上述中药组合物提取物的制备方法,其特征在于包括如下步骤:
(1)按配方量将制干漆、五灵脂、白矾、硝石粉碎,过80目筛后,加水超声提取1-3次,合并提取液后浓缩得稠膏a;残渣用氯仿超声提取1-3次,合并提取液后浓缩得稠膏b;
(2)按配方量取郁金、麸炒枳壳用70%乙醇渗漉,收集渗漉液和药渣,渗滤液浓得浸膏c;
(3)按配方量取仙鹤草与步骤(2)中收集的药渣混合用水煎煮1-3次,合并煎煮液浓缩得稠膏d;
(4)按配方量取马钱子粉,用水回流提取1-3次,合并提取液浓缩得稠膏e;残渣用氯仿超声提取1-3次,合并提取液后浓缩得稠膏f;
(5)合并步骤(1)-(4)获得的稠膏a-f,用水复溶后挥干,即得所述中药组合物提取物。
本发明的另一实施方案提供上述中药组合物和/或中药组合物提取物在制备乳腺癌放射治疗增敏药物中的应用。
本发明的另一实施方案提供上述中药组合物和/或中药组合物提取物在制备对X射线诱导细胞凋亡增敏作用药物中的应用。尤其是在制备对X射线诱导MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞凋亡增敏作用药物中的应用。
本发明的另一实施方案提供上述中药组合物和/或中药组合物提取物在制备抑制乳腺癌肺转移的药物中的应用。
本发明的另一实施方案提供一种抑制乳腺癌肺转移的药物,其特征在于所述药物以上述中药组合物和/或中药组合物提取物作为有效成分。还包括药学上可接受的辅料。该药物的剂型选自固体制剂、液体制剂或半固体制剂。
与现有技术相比,本发明的优点在于:(1)中药组合物提取物和含药血清均能够显著抑制乳腺癌细胞,且对三阴乳腺癌细胞的增殖抑制作用优于其他分型乳腺癌细胞。(2)中药组合物提取物对MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞迁移和侵袭具有一定的抑制作用。(3)小鼠肿瘤肺转移模型研究证明,中药组合物提取物能够显著抑制肿瘤细胞的肺转移。(4)通过对放射治疗增敏作用的考察发现,中药组合物提取物能够通过协同诱导细胞凋亡抑制细胞活力,增强乳腺癌细胞放射治疗的敏感性。
附图说明
图1是各乳腺癌细胞中ERα和HER2的蛋白表达图;
图2是中药组合物提取物对不同分型乳腺癌细胞的抑制作用(x±s,n=5)图;a:中药组合物作用72h后的抑制率;b:中药组合物作用96h后的抑制率;给药浓度:从左至右依次增加,分别为7.8125、15.625、31.25、62.5、125、250、500、1000μg/mL;
图3是中药组合物提取物含药血清对不同分型乳腺癌细胞的抑制作用(x±s,n=5)图;
图4是中药组合物提取物对乳腺癌细胞克隆形成的影响(x±s,n=3)图;a,MDA-MB-231细胞;b,MDA-MB-468细胞;
图5是中药组合物提取物对不同两种乳腺癌细胞迁移的抑制作用(x±s,n=3)图;
图6是中药组合物提取物对不同两种乳腺癌细胞侵袭的抑制作用(x±s,n=3)图;
图7是4T1裸鼠移植瘤肺转移灶的HE染色(100×)图;a:Blank;b:control;
图8是4T1裸鼠移植瘤肺横切面转移灶的HE染色(x±s,n=6)图;a:HE染色图,b:肺横切面转移灶结节定量;与control组比较*p<0.05,**p<0.01;
图9是中药组合物提取物对X线照射后MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞增殖抑制的增敏作用(x±s,n=3)图;
图10是中药组合物提取物对X线照射后MDA-MB-468细胞凋亡的增敏作用(x±s,n=3)图;
图11是中药组合物提取物对X线照射后MDA-MB-231细胞凋亡的增敏作用(x±s,n=3)图。
具体实施方式
实施例1本发明所述中药组合物提取物的制备
配方:重量份(本实施例中每份代表20g),郁金3份、仙鹤草3份、五灵脂2.5份、白矾3份、硝石3份、制干漆1份、麸炒枳壳5份、马钱子粉2份。
(1)按配方量将制干漆、五灵脂、白矾、硝石粉碎,过80目筛后,加5倍质量的水超声提取2次,每次30min,合并提取液后浓缩得稠膏a;残渣用5倍质量的氯仿超声提取2次,每次30min,合并提取液后浓缩得稠膏b;
(2)按配方量取郁金、麸炒枳壳用5倍质量的体积分数为70%乙醇渗漉提取,收集渗漉液和药渣,渗滤液浓得浸膏c;
(3)按配方量取仙鹤草与步骤(2)中收集的药渣混合用5倍质量的水煎煮2次,合并煎煮液浓缩得稠膏d;
(4)按配方量取马钱子粉,用5倍质量的水回流提取2次,每次提取2h,合并提取液浓缩得稠膏e;残渣用5倍质量的氯仿超声提取2次,每次30min,合并提取液后浓缩得稠膏f;
(5)合并步骤(1)-(4)获得的稠膏a-f,用水复溶后挥干,即得本发明所述中药组合物提取物。
实施例2中药组合物提取物对不同分型乳腺癌的靶向作用研究
3.1对不同分型乳腺癌细胞靶向作用研究
3.1.1 ERα和HER2表达量检测
培养乳腺癌细胞MCF-7、T47D、SK-BR-3、MDA-MB-453、BT-474、MDA-MB-361、MDA-MB-231和MDA-MB-468,采用westernblotting考察细胞中ERα,HER2的表达情况,确定细胞的分型。
3.1.2中药组合物提取物储备液及含药血清的制备
(1)储备液的制备:精密称取实施例1制备的中药组合物提取物,DMSO溶解,制备1g/ml的母液,备用。
(2)含药血清的制备:
取10只左右雄性8周龄大鼠(200g左右),其中5只留做空白血清组,另外5只用于含药血清组。给药前禁食时间约12-16h。给予大鼠0.767g/d灌胃给药,每天1次,连续7d。末次灌胃1h后,动物***吸入麻醉,心脏或腹主动脉采血,在保证无菌条件下,4℃静置8h,5000r/min离心10min制备血清。经56℃,30min灭活处理后,再以0.22μm微孔膜过滤除菌,置-80℃保存备用;空白血清组:给予等体积生理盐水。
3.1.3细胞活力实验
培养乳腺癌细胞MCF-7、T47D(ERα+/HER2-);SK-BR-3、BT-474(ERα-/HER2+);MDA-MB-453、MDA-MB-361(ERα+/HER2+)和MDA-MB-231(ERα-/HER2-)、MDA-MB-468(ER-/HER2-)以及正常乳腺上皮细胞MCF-10A,将上述细胞接种于96孔板中,分别加入不同浓度中药组合物提取物和含药血清进行药物干预72h和96h,采用CCK-8法检测细胞活力,比较中药组合物提取物对这些不同类型乳腺癌细胞活力影响的差异。
中药组合物提取物给药浓度:终浓度为1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125μg/mL。
含药血清的给药浓度:不同体积分数的含药血清(终体积分数为5%,10%,15%),以空白血清(终体积分数为5%,10%,15%)为对照。
3.1.4平板克隆实验
培养上述乳腺癌细胞,分别加入不同浓度中药组合物提取物进行干预7-14d,计算不同浓度中药组合物提取物处理后克隆大小及数量的差异。考察中药组合物提取物对乳腺癌细胞集落形成的影响。
3.1.5Transwell小室实验
培养上述乳腺癌细胞,分别加入不同浓度中药组合物提取物进行干预,分别作用96h后,然后将细胞消化,接种于无基质胶(考察迁移)或有基质胶(考察侵袭)的transwell小室中,考察中药组合物提取物对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响。
3.2中药组合物提取物体内抑瘤作用评价
(1)小鼠原位乳腺肿瘤模型:选取不同分型的人乳腺癌细胞株SK-BR-3和MDA-MB-231,采用裸鼠移植瘤模型考察中药组合物提取物对在体肿瘤的抑制作用。将细胞培养于细胞工厂中,待细胞处于对数生长期时将细胞消化、收集,悬浮于生理盐水中制成2.0×108个/mL的细胞悬液,各取200μL细胞悬液,以皮下注射的方式接种于裸鼠的第二对***脂肪垫下,当肿瘤体积达到100mm3时,将裸鼠按照瘤体积随机分为五组,每组6只,分别为control组、PX-S组(375mg/kg)、PX-M组(750mg/kg)、PX-L组(1500mg/kg)、Paclitaxel(20mg/kg)。具体动物分组给药表见表1。在此期间,监测肿瘤体积变化,隔日测量小鼠体重以监测小鼠健康状况。给药结束后,处死小鼠,计算肿瘤抑制率。考察对在体乳腺癌生长的抑制作用。
表1中药组合物提取物对人乳腺癌细胞荷瘤裸鼠移植模型作用研究动物分组表
注:N动物只数,i.g灌胃,i.p腹腔注射,PX中药组合物提取物,Pac紫杉醇
给药结束后,颈椎脱臼处死小鼠,剥离肿瘤组织、肝脏、脾脏、肾脏,称重并计算抑瘤率和脏器系数。将剥离的肿瘤组织和脏器用生理盐水洗去表面残留的血迹,分别保存于4%多聚甲醛溶液和-80℃冰箱中备用。抑瘤率、脏器指数和相对肿瘤体积分别按下列公式进行计算。
抑瘤率(%)=(对照组瘤重-给药组瘤重)/对照组瘤重×100%
脏器系数=脏器重量/体重
相对肿瘤体积=Vn/V0,n:给药天数;0:给药当天
(2)小鼠尾静脉注射肿瘤转移模型:培养4T1小鼠乳腺癌细胞,待生长期时将细胞消化、收集,悬浮于生理盐水中制成2×107个/mL的细胞悬液。取200μL细胞悬液,以尾静脉注射的方式接种balb/c小鼠。接种一周后,将小鼠随机分为5组,每组6只,分别为control组、PX-S组(375mg/kg)、PX-M组(750mg/kg)、PX-L组(1500mg/kg)、Paclitaxel(20mg/kg)。另设置一组未接种肿瘤也不进行给药的健康小鼠为空白对照组。具体动物分组给药表见表2。在此期间,隔日测量小鼠体重以监测小鼠健康状况。给药结束后,颈椎脱臼处死小鼠,剥离肺脏、肝脏、脾脏、肾脏,称重,拍照,观察各个部位的转移灶情况,并计算脏器系数。将剥离脏器用生理盐水洗去表面残留的血迹,分别保存于4%多聚甲醛溶液和-80℃冰箱中备用。脏器指数按下列公式进行计算:
脏器系数=脏器重量/体重
表2中药组合物提取物对乳腺癌肺移植模型作用研究动物分组表
注:N动物只数,i.g灌胃,i.p腹腔注射,PX中药组合物提取物,Pac紫杉醇
3.3统计学处理
采用SPSS18.0统计软件对数据进行分析。结果用均数±标准差(x±s)表示。组间比较采用方差分析中的两两t检验,P<0.05表示差异有显著性,P<0.01表示差异有非常显著性。
4.实验结果
4.1乳腺癌细胞中ERα和HER2表达量
培养乳腺癌细胞MCF-7、T47D、SK-BR-3、MDA-MB-453、BT-474、MDA-MB-361、MDA-MB-231和MDA-MB-468,考察细胞中ERα,HER2的表达情况。Westernblotting结果如图1所示,ERα阳性乳腺癌细胞为T47D、MCF-7、MDA-MB-361和MDA-MB-453,HER2高表达细胞为SK-BR-3和BT474、MDA-MB-453和MDA-MB-361,除此之外,MDA-MB-231和MDA-MB-468为ERα和HER2均阴性的细胞。此结果与文献报道一致。基于此,用以上不同分型细胞进行以下实验。
4.2中药组合物提取物对乳腺癌细胞活力的影响
采用细胞活力实验考察中药组合物提取物对乳腺癌细胞增殖的抑制作用,如图2所示,中药组合物提取物对乳腺癌细胞增殖均具有一定的抑制作用,其中对两种三阴乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞具有显著的抑制作用,并优于其他分型的乳腺癌细胞。此外,中药组合物提取物对正常乳腺细胞MCF-10A未显示出显著的抑制作用。
4.3中药组合物提取物含药血清对乳腺癌细胞活力的影响
采用细胞活力实验考察中药组合物提取物含药血清对乳腺癌细胞增殖的抑制作用,如图3所示,中药组合物含药血清对两种三阴乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞具有显著的抑制作用,并优于其他分型的乳腺癌细胞和正常乳腺细胞。以上结果说明中药组合物提取物能够显著抑制三阴乳腺癌细胞的增殖,并具有很强的特异性。
从上述研究结果中我们可以看出,中药组合物提取物和含药血清对三阴乳腺癌细胞具有显著的抑制作用。因此,在接下来的实验中以三阴乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞为靶细胞进行深入的研究。
4.4中药组合物提取物对乳腺癌细胞克隆形成的影响
采用平板克隆形成实验考察中药组合物提取物对MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞克隆形成的影响,如图4所示,通过14d连续培养所得结果可以看出,相比于空白对照组,给药组克隆形成的数量显著降低,并且单个克隆中的细胞数量也明显减少。说明中药组合物提取物可以有效抑制两种细胞的克隆形成。
4.5中药组合物提取物对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响
采用小室迁移实验,考察中药组合物提取物对MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞迁移能力的影响。由图5可见,随着给药浓度的增加,迁移至Millicell小室下方的细胞数目逐渐减少,表明中药组合物提取物能够抑制乳腺癌细胞发生迁移。
采用小室侵袭实验,考察中药组合物提取物对MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞侵袭能力的影响。由图6可见,随着给药浓度的增加,侵袭至Millicell小室下方的细胞数目逐渐减少,表明中药组合物提取物能够抑制乳腺癌细胞的侵袭。
4.6中药组合物提取物对小鼠乳腺癌肺转移的抑制作用
通过建立小鼠乳腺癌细胞4T1尾静脉注射肿瘤转移模型考察中药组合物提取物对乳腺癌转移的影响。实验结果显示,将4T1细胞接种小鼠15天后,6只control组小鼠全部出现肺转移瘤,将肺组织进行HE染色后,显微镜下观察可见肺内有肿瘤细胞转移灶,转移瘤细胞排列紧密、核大深染、核膜清晰、核仁明显,***相多见,病理组织学诊断为浸润性癌巢。而6只空白对照组小鼠均未见肺转移瘤,说明造模成功(图7)。与control组相比,375mg/kg、750mg/kg和1500mg/kg中药组合物提取物分别处理14天后,小鼠肺转移结节数量大大减少,大剂量时甚至优于阳性对照组,并具有统计学差异(图8)。
按照本实施例中记载的方法,测试平消胶囊(由申请人公司生产的市售产品)对小鼠乳腺癌肺转移的抑制作用,结果表明,与control组相比,375mg/kg、750mg/kg和1500mg/kg平消胶囊分别处理14天后,小鼠肺转移结节数量有所减少,但是减少的程度不如中药组合物提取物,大剂量时低于阳性对照组。
实施例3中药组合物提取物增敏作用研究
3.1中药组合物提取物对X射线抑制细胞活力增敏作用研究
MDA-MB-231细胞和MDA-MB-468细胞消化后制成单细胞悬液,计数后分别接种于96孔板中,于细胞培养箱中培养过夜。待细胞贴壁后加入中药组合物提取物,终浓度分别为1mg/mL和0.5mg/mL,孵育24h后换入新鲜的完全培养基,将细胞进行电离辐射处理,照射剂量为8Gry。照射后放回培养箱继续培养48h。48h后,CCK8法检测各组细胞的活力变化。
3.2中药组合物提取物对X射线诱导细胞凋亡增敏作用研究
MDA-MB-231细胞和MDA-MB-468细胞消化后制成单细胞悬液,计数后分别接种于6孔板中,于细胞培养箱中培养过夜。待细胞贴壁后加入中药组合物提取物,终浓度分别为1mg/mL和0.5mg/mL,孵育24h后换入新鲜的完全培养基,将细胞进行电离辐射处理,照射剂量为8Gry。照射后放回培养箱继续培养48h。48h后,流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况。
3.3统计学处理
采用SPSS18.0统计软件对数据进行分析。结果用均数±标准差(x±s)表示。组间比较采用方差分析中的两两t检验,P<0.05表示差异有显著性,P<0.01表示差异有非常显著性。
4.实验结果
4.1中药组合物提取物对X射线辐照的MDA-MB-231细胞和MDA-MB-468细胞存活的影响
为了考察中药组合物提取物对X射线照射治疗的增敏作用,本研究检测了中药组合物提取物预处理细胞24h,8Gry射线照射细胞后的抑制率。实验结果如图9所示,与单纯放射治疗组相比,0.5mg/mL和1.0mg/mL中药组合物提取物预处理的细胞经8Gry射线照射后MDA-MB-468细胞存活率均显著降低;1.0mg/mL中药组合物提取物预处理的细胞经8Gry射线照射后MDA-MB-231细胞存活率显著降低。表明中药组合物提取物能够增敏X射线辐照的杀伤作用。
4.2中药组合物提取物对X射线辐照的MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞凋亡的影响
为了考察中药组合物提取物对X射线照射治疗的增敏作用,本研究检测了中药组合物提取物预处理细胞,8Gry射线照射细胞后的凋亡率。用0.5mg/mL和1.0mg/mL中药组合物提取物处理MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞24h后,换液培养48h,流式细胞仪检测凋亡。对于MDA-MB-231细胞,与对照组相比,0.5mg/mL和1.0mg/mL中药组合物提取物组凋亡率由3.39%增加至5.17%和6.11%。用0.5mg/mL和1.0mg/mL中药组合物提取物处理MDA-MB-468细胞24h后,进行8Gy强度的照射,换液培养48h,流式细胞仪检测凋亡。与仅进行8Gry照射的组相比,中药组合物提取物预处理组凋亡率由3.97%上升至11.33%和18.04%。与Control组、中药组合物提取物组相比,中药组合物提取物联合X射线照射组的细胞凋亡率明显升高,其差异具有统计学意义(图10)。
对于MDA-MB-468细胞,与对照组相比,0.5mg/mL和1.0mg/mL中药组合物提取物组凋亡率由4.16%增加至10.66%和15.94%。用0.5mg/mL和1.0mg/mL中药组合物提取物处理MDA-MB-468细胞24h后,进行8Gry强度的照射,换液培养48h,流式细胞仪检测凋亡。与仅进行8Gry照射的组相比,中药组合物提取物预处理组凋亡率由5.41%上升至25.21%和28.51%。与Control组、中药组合物提取物组相比,中药组合物提取物联合X射线照射组的细胞凋亡率明显更高,其差异具有统计学意义(图11)。中药组合物提取物联合X射线照射后MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞的凋亡率明显提高,说明中药组合物提取物能够增敏乳腺癌对放射治疗的敏感性。
Claims (10)
1.一种中药组合物,其特征在于所述中药组合物的配方为:按重量份计,郁金1-5份、仙鹤草1-5份、五灵脂1-5份、白矾1-5、硝石1-5、制干漆0.5-3份、麸炒枳壳3-7份、马钱子粉0.5-4份;优选为:郁金2-4份、仙鹤草2-4份、五灵脂2-4份、白矾2-4、硝石2-4份、制干漆0.5-2份、麸炒枳壳4-6份、马钱子粉1-3份;最佳为:郁金3份、仙鹤草3份、五灵脂2.5份、白矾3份、硝石3份、制干漆1份、麸炒枳壳5份、马钱子粉2份。
2.一种权利要求1所述中药组合物提取物,其特征在于所述中药组合物提取物的制备方法包括如下步骤:
(1)按配方量将制干漆、五灵脂、白矾、硝石粉碎,过80目筛后,加水超声提取1-3次,合并提取液后浓缩得稠膏a;残渣用氯仿超声提取1-3次,合并提取液后浓缩得稠膏b;
(2)按配方量取郁金、麸炒枳壳用70%乙醇渗漉,收集渗漉液和药渣,渗滤液浓得浸膏c;
(3)按配方量取仙鹤草与步骤(2)中收集的药渣混合用水煎煮1-3次,合并煎煮液浓缩得稠膏d;
(4)按配方量取马钱子粉,用水回流提取1-3次,合并提取液浓缩得稠膏e;残渣用氯仿超声提取1-3次,合并提取液后浓缩得稠膏f;
(5)合并步骤(1)-(4)获得的稠膏a-f,用水复溶后挥干,即得所述中药组合物提取物。
3.权利要求2所述的中药组合物提取物,其特征在于步骤(1)-(4)中每次超声提取时间为15-30min,提取溶剂的用量优选药材质量的4-6倍(更优选5倍)。
4.权利要求2-3任一项所述的中药组合物提取物的制备方法,其特征在于包括如下步骤:
(1)按配方量将制干漆、五灵脂、白矾、硝石粉碎,过80目筛后,加水超声提取1-3次,合并提取液后浓缩得稠膏a;残渣用氯仿超声提取1-3次,合并提取液后浓缩得稠膏b;
(2)按配方量取郁金、麸炒枳壳用70%乙醇渗漉,收集渗漉液和药渣,渗滤液浓得浸膏c;
(3)按配方量取仙鹤草与步骤(2)中收集的药渣混合用水煎煮1-3次,合并煎煮液浓缩得稠膏d;
(4)按配方量取马钱子粉,用水回流提取1-3次,合并提取液浓缩得稠膏e;残渣用氯仿超声提取1-3次,合并提取液后浓缩得稠膏f;
(5)合并步骤(1)-(4)获得的稠膏a-f,用水复溶后挥干,即得所述中药组合物提取物。
5.权利要求1所述的中药组合物和/或权利要求2-3任一项所述的中药组合物提取物在制备乳腺癌放射治疗增敏药物中的应用。
6.一种抑制乳腺癌肺转移的药物,其特征在于所述药物以权利要求1所述的中药组合物和/或权利要求2-3任一项所述的中药组合物提取物作为有效成分。
7.权利要求6所述的药物,其特征在于还包括药学上可接受的辅料。
8.权利要求6-7任一项所述的药物,其特征在于该药物的剂型选自固体制剂、液体制剂或半固体制剂。
9.权利要求1所述的中药组合物和/或权利要求2-3任一项所述的中药组合物提取物在制备对X射线诱导细胞凋亡增敏作用药物中的应用;尤其是在制备对X射线诱导MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞凋亡增敏作用药物中的应用。
10.权利要求1所述的中药组合物和/或权利要求2-3任一项所述的中药组合物提取物在制备抑制乳腺癌肺转移的药物中的应用。
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