CN114631025A - 侧向流动免疫化学中的定量分析物检测 - Google Patents

侧向流动免疫化学中的定量分析物检测 Download PDF

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Abstract

提供一种侧向流动免疫化学测试***和方法。***可包括具有至少两条对照线和至少一条测试样品线的测试器基片。具有未知量分析物的测试样品可沉积在所述测试器基片上并且所述测试样品可沿所述测试器基片移动，以接触所述至少两条对照线和所述至少一条测试样品线。可使用测量装置来将所述至少一条测试样品线与所述至少两条对照线进行比较，以给出所述测试样品中存在的分析物的量的定量值。

Description

侧向流动免疫化学中的定量分析物检测
相关申请的交叉引用
本申请要求于2019年8月29日提交的美国临时申请序列号62/893,235的权益，所述美国临时申请的全部内容(包括任何附图、表格和附图)特此通过引用的方式并入本文中。
背景技术
侧向流动免疫化学已经存在近40年，并广泛用于即时检验、家庭快速测试和临床环境中。最早的实际用途之一是一步妊娠测试(参见例如美国专利号4,774,192)。由于色谱、流动和材料的限制，此技术在相关领域中仅限于简单地报告蛋白质或其他分析物的存在或不存在。当目视读取时，最好的方法是与对照线(例如，促***(LH))进行比较，以确定样品是否比对照线更强或更弱。随着相机技术的进步，已经开发出基于像素和/或相机技术的读取器，但是这种读取器兼容性不佳且价格昂贵。
现有侧向流动免疫化学测试器使用一种对照并将样品与对照进行比较，而不管测试器中使用的技术类型如何。此类测试方法的一些示例可见于美国专利号6,528,323(Thayer等人)、美国专利号8,354,270(Polito等人)、美国专利号9,207,241(Lambotte等人)、美国专利号9,557,329(Lee)和美国专利申请公开号2003/0119203(Wei等人)。此类测试器和测试方法将样品与对照线进行比较以确定分析物的存在(例如，如果样品线比标准线浅＝不存在，否则＝存在)。
发明内容
鉴于现有技术的侧向流动免疫化学测试器和测试方法的局限性，本领域需要改进的侧向流动免疫化学测试器/读取器和测试方法。
本发明的实施例提供解决相关技术***和方法的缺点和限制的新颖和侧向流动免疫化学测试***和方法。***可包括具有至少两个对照(已知值)区的测试器基片，每个对照区可产生对应于分析物的已知值的对照指示线，一个对照区比另一个具有更低的已知值。分析物可与可用测量装置测量的标记物缀合。也可存在至少一个测试样品区，该测试样品区当与测试样品中的缀合分析物接触时可产生测试样品线。可将具有未知量的缀合分析物的测试样品沉积在测试器基片上，诸如例如在与测试器基片接触的样品孔中。测试样品可通过毛细作用迁移穿过测试器基片，直到它到达至少两个对照区和至少一个测试样品区，由此产生至少两条对照线和至少一条测试样品线。读取器、仪表或其他测量装置可用于将至少一条测试样品线与至少两条已知值对照线进行比较，这些已知值对照线用作或可提供一种标准，将测试样品线与该标准进行比较，以量化测试样品中存在的分析物的量。本发明的***和方法的实施例价格低廉并提供准确且可重复的结果。
附图说明
为了能够更精确地理解上述发明，将参考附图所示的具体实施例对以上简要描述的本发明进行更具体的描述。本文呈现的附图可能不按比例绘制，并且对附图中的尺寸或以下描述的任何提及都特定于所公开的实施例。将允许本发明用于其预期目的的这些尺寸的任何变化都被认为处于本发明的范围内。因此，理解这些附图仅描绘了本发明的典型实施例并因此不应被视为对范围的限制，将通过使用附图以附加的特异性和细节来描述和解释本发明，其中：
图1示出具有两个对照区的测试条的一个实施例，其中，一个对照区比另一对照区具有更高的分析物结合值，并且在对照区之间存在测试样品区。
图2A和图2B示出具有三个单独的观察窗的盒的实施例，测试器基片可固定在该盒中。图2A示出盒的盖，并且图2B示出盒的可连接至盖的底座。
图3A和图3B示出图2A和图2B中的盒的替代视图。图3A示出盖的内部，并且图3B示出底座的内部。
图4A和图4B示出具有单个观察窗的盒的替代实施例。图4A示出用于接收样品的孔和观察窗的俯视图。图4B示出样品被放置在盒的孔中。
图5示出测量装置的代表性非限制性示例，所述测量装置可用于测量结合到两个或更多个对照区和一个或多个测试样品区的分析物。
图6A、图6B、图6C和图6D示出盒的替代实施例，测试条的实施例可固定在该盒中。图6A是准备好使用的盒的透视图。图6B是盒的横截面的侧视图。图6C示出带有测试条实施例的盒的盖的内部的俯视图。图6D示出盒的可连接至盖的底座的内部，带有测试条的实施例。
具体实施方式
本发明的实施例提供解决相关技术***和方法的缺点的新颖侧向流动免疫化学测试***和方法。在使用颜色和/或强度作为指标的侧向流动免疫化学测试中，可能难以在不同的测试中重现结果，因为颜色可能略亮或略深，或者强度可能因测试而异。因此，相关技术中的测试通常提供二元结果，指示分析物的存在或不存在，但不提供定量结果。先前，当使用胶体金(在侧向流动化学测试中使用的最常见的颜色和/或强度标记物)作为分析物的颜色和/或强度标记物时，特别难以产生可重复、一致的结果。本发明的实施例通过使用标准或已知值对照线与测试样品线进行比较来解决这一挑战。
在以下描述中，使用了与本发明的实施例相关的多个术语。为了提供对说明书和权利要求(包括给予这些术语的范围)的清晰且一致的理解，提供以下定义。
如本文所用，术语“近侧端部”或“近侧方向”指的是最接近或靠近其中测试样品可沉积在测试器基片上的开口或“孔”的一端。
如本文所用，术语“远侧端部”或“远侧方向”是指最靠近吸收器的一端或距测试样品沉积在测试条上的位置最远的一端。
当术语“大约”或“约”在本文中与数值一起使用时，可以认为，所述值可介于所述数值的95％至所述数值的105％的范围内，即所述值可以是所陈述值的+/-5％。例如，“约1kg”是指从0.95kg到1.05kg。
本发明使用的实施例可包括测试器基片100，测试样品160可在该测试器基片100上被吸收或吸取以迁移、流动或以其他方式移动跨过或穿过测试器基片。测试器基片可具有至少两个对照区，其中，每个对照区中的分析物结合值是被准确已知的。低对照区110可具有第一已知分析物结合值(例如，20纳克每毫升(ng/m1))，并且高对照区120可具有不同于且高于低对照区的已知分析物结合值的分析物结合值(例如，100ng/m1)。尽管不是必需的，但可选择第一和第二已知分析物结合值，使得任何测试样品都预期(或可能或非常可能)提供介于高已知分析物结合值与低已知分析物结合值之间的结果。沉积在测试器基片上的测试样品可迁移或移动穿过测试器基片，以使得该测试样品遇到低对照区、高对照区和测试样品区。
在实施例中，***可包括读取器、仪表或其他测量装置300和测试器基片100(例如，测试条、测试盒或类似的测试器基片)。测试器基片可包括至少三个区，这些区产生至少三条线。在一个实施例中，一条线是低对照区110，其中，可形成低对照线115并且该低对照线115用于建立“低”标准(基于较低的已知分析物结合值)；一条线是用于测试样品的测试样品区160，该测试样品区160基于缀合分析物160的量产生测试样品线135，以及结合到测试样品区160的用于获得测试样品值136的相关联标记物；一条线用于高对照区120，其中，形成高对照线125并该高对照线125用于建立“高”标准(基于较高的已知分析物结合值)。通过与缀合分析物接触在其中形成的三个区和所得线可平行或近似平行，但实施例不限于此。高标准和低标准可各自通过包括或具有预定、已知、特定量的分析物结合物质105(诸如例如，抗体或抗原)的对照区来确定，使得期望量的缀合分析物(诸如例如缀合抗原或缀合抗体)将结合到分析物结合物质。在一个实施例中，分析物结合物质与可与其结合的缀合分析物的比率为约1∶1。例如，缀合抗体∶结合抗原或缀合抗原∶结合抗体的比率通常为1∶1。当然，可使用其他比率(例如，2∶1、1∶2、3∶1、1∶3或任何其他比率，包括非整数比率)。
在另一实施例中，测试样品区130可具有一定量的分析物结合物质105(诸如例如，抗体或抗原)，该分析物结合物质105通过具有比测量任何合理期望的样品中的分析物所需的分析物结合值更高的分析物结合值而在可以结合到该分析物结合物质105的缀合分析物160的量方面实际上不受限制。如果待测分析物是抗原，则区上可各自有抗体，如果待测分析物是抗体，则区上可各自有抗原。
在一个实施例中，测试***可包括盒200，该盒200可至少包括测试器基片100，在该测试器基片100上各种区设置在底座250(可成形为外壳)内，诸如例如图1所示，在该底座250中可固定有测试器基片，例如图2A、图2B、图3A、图3B、图6C和图6D所示。在一个实施例中，外壳将测试器基片100固定在其中的精确位置，以便于精确测量分别形成在低对照区110、高对照区120和测试样品区130内的低对照线115、高对照线125和测试样品线135。图2A和图2B中示出盖210和底座250的一个示例。图6C和图6D示出用于盒的替代实施例的盖210和底座250。盖可在近侧端部5处具有开口或孔215，测试样品可放置在其中，并且***被配置为使得孔允许与测试器基片100直接接触，使得其中的测试样品(当存在时)直接接触测试器基片。在一个实施例中，盖具有内部座或狭槽225，测试器基片100可合适地安置在其中，以抑制盒中的移动。图3A和图6C示出外壳中的内部狭槽的示例。盖还可具有一个或多个窗220，通过这些窗可看到或通过测量装置300访问对照区和测试样品区。图2A、图3A和图6A示出具有三个窗的盒200的实施例。图4A和图4B示出具有单个窗的盒的替代实施例。底座250可附接到盖210以将测试器基片围绕和固定在内部狭槽中的适当位置。在具体实施例中，盖210可与底座卡扣在一起。在另一具体实施例中，盒可与测量装置300协同接合以将一个或多个窗正确对齐中，以便测量装置访问和测量或读取其上的高对照线120、低对照线115和测试样品线135。
***可还包括在远侧端部处并与测试器基片100接触的吸收器101。在一个实施例中，吸收器是测试器基片的部分或并入作为测试器基片的部分。在另一实施例中，吸收器是与测试器基片分离的元件。吸收器101可与测试器基片直接物理接触。吸收器可包括可吸取、吸收、吸入、浸入或以其他方式“驱动”或迫使测试样品160移动跨过或穿过测试器基片的任何材料、物质或装置。当测试样品160沉积在孔215中时，毛细作用导致测试样品最初被测试器基片100吸收，以使得测试样品迁移穿过测试器基片直到到达吸收器。吸收器可吸取或吸收朝向测试器基片的远侧端部10迁移的测试样品，从而驱动跨过测试器基片的毛细流动并促使测试样品在近侧端部5到远侧端部10的方向上移动跨过测试器基片。
在一个实施例中，***可被配置为使得测试样品160接触具有低分析物结合值的低对照区，以产生可测量以确定“低”标准的低对照线115，然后该测试样品160接触测试样品区130，在此产生测试样品线，可测量该测试样品线以获得测试样品值136，然后最终，测试样品接触具有高分析物结合值的高对照区，以产生可测量以确定“高”标准的“高”标准线。在替代实施例中，***可颠倒和被配置为使得测试样品首先接触具有高分析物结合值的高对照区以产生“高”标准线，然后接触在其中产生测试样品线的测试样品区，最后接触具有低分析物结合值的低对照区以形成“低”标准线。这种颠倒配置对于竞争性分析物结合物质可能是有利的，其中，反应导致颜色和/或强度随着结合的分析物的量的增加而变弱或不那么明显。通常，预期在测试期间/之后具有较浅颜色和/或较低强度的标准线可最接近孔215，而预期在测试期间/之后具有较深颜色和/或较高强度的另一条标准线可最接近吸收器101。如果分析物测试使得颜色和/或强度随着分析物量的增加而加深/加强，则低标准线可最靠近孔，替代地，如果分析物测试使得颜色和/或强度随着存在的分析物量的减少而减淡/减弱(例如，与竞争性结合一样)，则高标准线可最接近孔。
***还可包括读取或测量装置300。在测试样品被放置在测试器基片上(诸如例如，在孔中)并已经接触低对照区、测试样品区之后并且可能在测试样品已经达到高标准线之后，测试器基片100(单独使用或作为盒200)可用测量装置进行检查，例如，测试器基片可放置在测量装置(例如，反射率测量装置)中或以其他方式与测量装置(例如，反射率测量装置)协同接合，所述测量装置可计算每个对照线和测试样品线135的反射率值，又名分析物结合值。可将测量装置编程为具有等待时段(例如，5至15分钟或10至15分钟或10至20分钟)，或两个所列值中的任何一个之间的等待时段。等待时段可使对照和测试样品线的颜色和/或强度停止变化并稳定下来。在预定等待时段之后，测量装置然后可通过与外推曲线的“高”标准线和“低”标准线进行比较来确定测试样品线中存在的分析物的定量。
测试样品线与“高”标准线和“低”标准线的比较可使用第一算法来完成，该第一算法可由读取装置的处理器(例如，微处理器)运行(第一算法可以存储(例如，作为代码)在读取装置的存储介质(例如，(非暂时性)机器可读介质)上)。处理器和/或存储介质可替代地位于外部装置上(可被认为是***的一部分或可被认为与***分离)，该外部装置在确定存在的分析物的量时与读取装置可操作地通信。可通过从多个不同浓度的分析物样品中获得测量结果(已知每个测量结果都具有非常高的准确度)来校准测量装置300。可使用与第一算法相同或不同的第二算法确定外推曲线。在一个实施例中，外推曲线是直线，表示“高”标准和“低”标准与其已知的分析物结合值之间的线性关系。在替代实施例中，外推曲线是曲线，表示“高”标准与“低”标准之间的非线性关系。外推曲线可与第一算法结合使用，以确定测试样品中存在的分析物的定量。替代地，外推曲线可在没有第一算法的情况下使用，或与可能与第二算法相同或不同的第三算法结合使用，以确定测试样品中存在的分析物的定量。
有利地，可考虑和/或调整不同测试器基片之间的“高”标准线和/或“低”标准线之间的变化，因此可抑制测试器基片之间的变化，以免影响定量确定存在于特定测试样品值中的分析物的量的准确性。这是因为已知“高”标准线和“低”标准线的颜色和/或强度之间的关系将保持不变，并且可与外推曲线拟合或比较，从而使测试样品值也能够与外推曲线拟合或比较。因此，对于任何给定的一组测量结果，外推曲线将是相同的，并且测量结果仍然是可重复且准确的。
在一个实施例中，可使用算法(诸如例如，上述第二算法)和多个(例如，2个、3个、4个、5个或更多个)已知量的校准来获得用于使用测量装置300计算测试样品线135的测试样品值136的外推曲线。例如，可假设直线外推，直到某个水平(高或低)，此时斜率可能会减少或降低10％(或斜率的另一特定增加)或变为具有特定拐点的曲线(二阶导数)。然后，在另一水平曲线再次改变，并且在另一水平(如果使用多于两个的已知量)它可再次改变，并且可根据需要重复。本领域技术人员将能够确定用于计算外推曲线的适当方法。
在实施例中，测量装置300是一次性反射率计。术语“一次性”在其正常上下文中使用，表示预期测量装置仅使用一次或使用一小段时间(例如，仅与随仪表提供的测试器基片一起使用)并使用低价且一次性的材料制造。
一次性反射率计的处理器可使用算法(诸如例如，上述第二算法)和外推曲线预先校准。此数据可例如作为软件或代码存储在仪表的存储介质上。此外，一次性反射率计可以是***或套件的一部分，该***或套件包括一组或预定数量的测试器基片，作为测试条或盒(例如，10个、15个、20个、25个、30个、40个、50个、60个、70个、80个、90个、100个、200个等)。反射率计可针对设置有反射率计的那些测试器基片进行校准。在一个实施例中，可专门校准特定“批次”测试器基片的不同一次性反射率计(即，每个套件可包括一次性反射率计和设定数量的测试器基片，专门校准这些测试器基片的一次性反射率计)。使用套件中包括的测试器基片后，可丢弃一次性反射率计。
在某些实施例中，除了用于基于高对照线125和低对照线110的读数计算测试样品线135的测试样品值136的算法之外，测量装置300(例如，一次性反射率计)可还可使用查找表进行预编程以校正剂量反应的变化，因为水平会变得更高或更低。相对于直线，该操作可基于例如曲线或复合曲线，以用于增加或减少分析物的量。
尽管比色法和分光光度法吸光度技术已用于其他类型的测试(例如，葡萄糖测试)，但在相关领域中尚未将其应用于侧向流动抗体/抗原免疫化学的方法。除了其他原因，由于测量装置上发生的颜色变化，以前认为比色法和分光光度法吸光度在侧向流动抗体/抗原免疫化学中的应用是不可能的。
本发明的实施例通过使用在同一测试器基片100上建立“高”标准和“低”标准的可被同时测量的两条对照线(除测试样品线135外)解决了这一挑战。可使用算法和/或外推曲线来比较测量结果并增加/确保测试之间的准确性和可重复性。在一个特定实施例中，测量装置已经被预先专门校准，以与作为套件的一部分的特定一组测试器基片一起使用。
使用本发明的***和方法的实施例的分析物测试可基于常规结合(其中，较深的颜色表示较高量的分析物)或竞争性结合(其中，较浅的颜色表示较高量的分析物)。由于能够在具有相应已知分析物值的对照线中产生测量响应，因此本发明的实施例使用至少两条对照线(例如，恰好两条对照线)。对照线有利地提供具有表示特定已知量的分析物的可测量响应的标准。测试线(和/或测试区)不必处于对照线(和/或对照区)之间，但在一些实施例中可以如此。理想情况下，可使用简单、便宜且准确的测量装置来测量响应。诸如例如仪表/读取器等测量装置可基于反射光度法，但实施例不限于此。如果与分析物(或其他部分(moiety))缀合或结合的标记物是视觉标记物(例如，胶体金、胶乳)、磁性标记物、荧光标记物或适合于标识所涉及的分析物的结合结果的任何其他装置，例如，如果分析物是抗原或抗体，则如本文所讨论的使用至少两条对照线的技术可能是有效的。标记物可与作为分析物本身的部分(moiety)结合或与分析物结合(例如，缀合物或缀合物的一部分)，只要可比较颜色即可。尽管本文使用了术语“分析物结合”，但在每种情况下，这可以是“部分结合(moiety-binding)”，其中，部分(moiety)是分析物本身或与分析物结合(例如，缀合物或缀合物的一部分)。
通过在同一测试器基片上产生具有已知部分结合值(moiety-binding value)的至少两条对照线作为测试样品线，并且在反应中的稳定点(或随着反应的速率，或遵循绘图截距)测量由这些线产生的结果，产生两个已知的读数，然后可以准确地确定测试样品中的分析物的定量。优选但不是必须的，测试样品中的分析物的定量介于“低”110与“高”120对照区中的分析物的相应量之间。换言之，缀合分析物160的可测量量优选地介于源自“高”对照线和“低”对照线的高标准与低标准之间。
当(例如，通过仪表或读数装置)产生计算出的“标准”或“外推”曲线时，可将校准扩展到标准值之上和/或之下，以准确绘制均小于低标准的值和/或高于高标准的值的值。如果高标准和低标准产生直线校准，则尤其准确。然而，即使高标准和低标准不产生直线校准，测量装置(读取器或仪表)也可预先校准以用于特定的一组、批次或一组测试器基片100。在一个实施例中，可通过用多个已知值的分析物结合物质样品进行预测试来校准测量装置，以产生准确的非线性校准曲线，使得可从编程的校准曲线以良好的准确度预测高于“高”对照线和/或低于“低”对照线的标准值。
分光光度法或比色法的相同基本标准可用于视觉读数(例如，测试样品的颜色强度对于测试样品中的分析物的定量值，就像低标准和/或高标准的颜色强度对于所述标准的值，但实施例不一定限于此)。与任何磁性、荧光或其他类型的测量结果(包括视觉)类似，可生成标准曲线(可称为外推曲线)，这使得测量装置(仪表/读数器)能够在实际测试期间被自动校准。此外，因为测试样品线是在与高对照线和低对照线相同的介质或测试器基片100上生成的，所以它可基于同时执行并同时使用相同的化学物质(使用相同的仪表/读数器)的两次或更多次对照线测量或读取来一致地产生准确的结果。换言之，本发明的实施例可通过提供对每个测试器基片唯一的高对照和低对照来调整测试器基片100之间的变化，该高对照和低对照可与外推曲线进行比较以计算从同一的测试器基片(例如，缀合物)获得的准确测试样品值。
如果不使用酶联免疫吸附试验(ELISA)或聚合酶链反应(PCR)(这两者都费力、耗时且非常昂贵)，则现有侧向流动免疫化学测试器和测试方法通常无法产生准确和可重复的结果。本发明的实施例使用快速且低价的***/方法提供准确的、可重复的、定量的结果。
尽管本文详细讨论基于颜色变化的测试，但本发明的实施例可替代地用于基于磁性标记物、荧光标记物或适合于标识所涉及分析物的结合结果的任何其他装置的测试(无论分析物是抗原或抗体)。相同的原理适用，但读取装置/仪表将需要被配置为读取/分析适当的属性(磁性、荧光等)。
本发明的一些实施例的一些方面可与美国专利号6,574,425(Weiss等人)和美国专利号6,952,263(Weiss等人)中公开的装置相同，这两个专利均特此以全文引用的方式并入本文。
本发明包括但不限于以下示例性实施例。
实施例1.一种测试器基片，被配置为获得测试样品中的分析物的定量，所述测试器基片包括：
至少一个测试样品区，包括与作为所述分析物的部分(moiety)结合或与所述分析物结合的部分结合物质(moiety-binding substance)；以及
至少两个对照区，每个对照区包括已知不同量的所述部分结合物质(moiety-binding substance)，并且被配置为使得当与所述测试样品中的所述分析物接触时与所述测试样品中的对应已知量的所述部分(moiety)结合，使得获得结合到每个对照区的部分(moiety)的量的量度提供标准，能够将对于所获得的结合到所述测试样品区的部分(moiety)的所述量的量度与所述标准进行比较，以确定所述测试样品中的所述分析物的定量。
实施例2.根据实施例1所述的测试器基片，其中，所述部分(moiety)与视觉标记物、磁性标记物或荧光标记物缀合，所述视觉标记物、磁性标记物或荧光标记物使得当所述部分(moiety)结合到所述至少一个测试样品区时形成测试样品线，并使得在所述至少两个对照区中的每个对照区中形成对照线。
实施例3.根据实施例1至2中任一项所述的测试器基片，其中，测量所述线，以获得在所述至少一个测试区和所述至少两个对照区中的每个对照区处结合的所述分析物的所述定量。
实施例4.根据实施例2至3中任一项所述的测试器基片，包括所述标记物与所述分析物之间的1∶1比率。
实施例5.根据实施例2至4中任一项所述的测试器基片，其中，所述测量装置被配置为利用比色法或分光光度法来测量所述标记物。
实施例6.根据实施例1至5中任一项所述的测试器基片，其中，所述测试样品中的所述分析物首先接触所述至少两个对照区中具有较高量的部分结合物质(moiety-bindingsubstance)的对照区。
实施例7.根据实施例2至6中任一项所述的测试器基片，其中，测量存在于所述至少一个测试样品区和所述至少两个对照区中的每个对照区中的标记物的量，以获得在所述至少一个测试区和所述至少两个对照区中的每个对照区处结合的部分(moiety)的所述定量。
实施例8.一种用于获得测试样品中的分析物的定量的套件，所述套件包括：
至少一个测试器基片，具有：
至少一个测试样品区，包括部分结合物质(moiety-binding substance)；以及
至少两个对照区，每个对照区包括已知不同量的所述部分结合物质(moiety-binding substance)，
使得当所述分析物接触所述至少一个测试样品区中的所述部分结合物质(moiety-binding substance)时，形成测试样品线，并且当所述分析物接触所述至少两个对照区中的所述部分结合物质(moiety-binding substance)时，在每个对照区中形成对照区线；以及
测量装置，可访问校准曲线，所述测量装置测量所述对照区线中的每个对照区线并将测量结果与所述校准曲线进行比较，以确定所述校准曲线上对应于存在于所述相应对照区中的每个对照区中的已知量的部分结合物质(moiety-binding substance)的高标准和低标准，并且所述测量装置测量所述测试样品线并将所述测试样品线与所述高标准和所述低标准进行比较，以确定结合到所述测试样品区中的所述部分结合物质(moiety-binding substance)的部分(moiety)的量。
实施例9.根据实施例8所述的套件，还包括预定数量的测试器基片，
其中，所述测量装置被配置为测量所述预定数量的测试器基片。
实施例10.根据实施例8至9中任一项所述的套件，其中，所述测试器基片中的每个测试器基片被固定在盒中。
实施例11.根据实施例10所述的套件，其中，所述盒与所述测量装置协同接合。
实施例12.根据实施例8至11中任一项所述的套件，其中，所述分析物与视觉标记物、磁性标记物或荧光标记物缀合。
实施例13.一种用于确定测试样品中的分析物的量的方法，包括：
将所述测试样品沉积到根据实施例1至7中任一项所述的测试器基片(或根据实施例8至12中任一项所述的套件的至少一个测试器基片)上；
使所述测试样品接触所述至少两个对照区中的第一对照区，以形成第一对照线；
使所述测试样品接触所述至少一个测试样品区，以形成测试样品线；
使所述测试样品接触所述至少两个对照区中的第二对照区，以形成第二对照线；
利用测量装置测量所述第一对照线、所述测试样品线和所述第二对照线；
将所述第一对照线和所述第二对照线拟合到编程到所述测量装置中的校准曲线；以及
将所述测试样品线的测量结果与所述拟合的第一对照线和所述拟合的第二对照线进行比较，以确定结合到所述测试样品区的部分(moiety)的量，从而给出所述测试样品中的所述分析物的量。
实施例14.根据实施例13的方法，其中，所述部分(moiety)与形成所述测试样品线、所述第一对照线和所述第二对照线的视觉标记物、磁性标记物或荧光标记物缀合，并且
其中，所述方法还包括通过所述测量装置测量存在于所述测试样品线、所述第一对照线和所述第二对照线处的标记物的量。
实施例15.根据实施例13至14中任一项所述的方法，其中，所述测试器基片被固定在盒中，并且
其中，所述方法还包括使所述盒与所述测量装置协同接合。
实施例16.根据实施例13至15中任一项所述的方法，其中，所述测量装置利用比色法或分光光度法来测量所述测试样品线、所述第一对照线和所述第二对照线。
实施例17.根据实施例13至16中任一项的方法，其中，所述第一对照区处的部分结合物质(moiety-binding substance)的量大于所述第二对照区处的部分结合物质(moiety-binding substance)的量。
可从以下示例获得对本发明的实施例及其许多优点的更好理解，这些示例以说明的方式给出。以下实施例示出本发明的一些方法、应用、实施例和变型。当然，它们不应被认为是对本发明的限制。可对本发明进行许多改变和修改。
示例1
用于测试维生素D的侧向流动免疫化学测试器基片(例如，测试条或测试盒)包括“低”标准线和“高”标准线，测试样品线设置在“低”标准线与“高”标准线之间。应当注意，维生素D的测试基于竞争性结合，这意味着(类似于许多药物或小分子测试)，颜色反应随着分析物的量的增加而变弱。“高”标准线包括已知量的100ng/ml的维生素D，“低”标准线包括已知量的20ng/ml的维生素D。在对照线上捕获的抗体对与维生素D抗体相同的缀合物结合的特定量的物质起反应。胶体金用作颜色标记物，每条抗体捕获对照线(提供高标准、测试样品和低标准的测量值)将捕获其比例量和代表性量的有色颗粒。通过测量两条对照线的反射率，可以临床实验室精度计算存在于测试样品线中的维生素D的准确定量。
示例2
针对20个侧向流动免疫化学测试盒校准一次性反射率计(使用算法)，以测试样品中的维生素D。每个测试盒包括在测量时提供低标准值的低对照线和在测量时提供高标准值的高对照线，测试样品线设置在它们之间。高对照线包括已知量的100ng/ml的维生素D，低对照线用于已知量的20ng/ml维生素D。在测试期间，测试盒可放置成使得高对照线比低对照线更靠近盒的孔，使得低对照线比高对照线更靠近吸收器。每个测试盒可用于进行一次测试以确定样品中存在的维生素D的定量。一次性反射率计可在使用20个测试盒后丢弃。
示例3
用于测试D-二聚体(一种确定凝血功能的蛋白质)的侧向流动免疫化学测试器基片(例如，测试条或测试盒)包括提供低标准值的低对照线和提供高标准值的高对照线，测试样品线设置在它们之间。应当注意，D-二聚体的测试并不基于竞争性结合，因此随着缀合分析物的量的增加，颜色反应会变得更强，在本示例中，这归因于每条线处捕获的金的量。高标准线包括已知量的300ng/ml(替代地可以是330ng/ml)的D-二聚体，而低标准线包括已知量的100ng/ml的D-二聚体。通过测量两个对照的反射率，并将结果与外推曲线进行比较/拟合，可以临床实验室精度计算测试样品中存在的D-二聚体的确切定量(通过测量测试样品线)。
示例4
针对20个侧向流动免疫化学测试盒校准一次性反射率计(使用算法)，以测试D-二聚体。每个测试盒包括提供低标准的对照线和提供高标准的对照线，测试样品线设置在它们之间。高标准的对照线用于已知量的300ng/ml(替代地可以是330ng/ml)的D-二聚体，而低标准的对照线用于已知量的100ng/ml的D-二聚体。在测试期间，测试盒可定位成使得高标准对照线比低标准对照线更靠近吸收器，使得低标准对照线比高标准线更靠近盒中的孔。每个测试盒可进行一次测试以确定样品中存在的D-二聚体的定量。一次性反射率计可在使用20个测试盒后丢弃。
应当理解，本文所描述的示例和实施例仅用于说明性目的，并且向本领域技术人员建议这些示例和实施例的各种修改或变化并将这些修改或变化包括在本申请的精神和范围内。
本文提及或引用的所有专利、专利申请、临时申请和出版物的全部内容(包括所有图和表)在不与本说明书的明确教导相抵触的范围内通过引用的方式并入本文中。

Claims (20)

1.一种测试器基片，被配置为获得测试样品中的分析物的定量，所述测试器基片包括：
至少一个测试样品区，包括与作为所述分析物的部分结合或与所述分析物结合的部分结合物质；以及
至少两个对照区，每个对照区包括已知不同量的所述部分结合物质，并且被配置为使得当与所述测试样品中的所述分析物接触时与所述测试样品中的对应已知量的所述部分结合，使得获得结合到每个对照区的部分的量的量度提供标准，能够将对于所获得的结合到所述测试样品区的部分的所述量的量度与所述标准进行比较，以确定所述测试样品中的所述分析物的定量。
2.根据权利要求1所述的测试器基片，其中，所述部分与视觉标记物、磁性标记物或荧光标记物缀合，所述视觉标记物、磁性标记物或荧光标记物使得当所述部分结合到所述至少一个测试样品区时形成测试样品线，并使得在所述至少两个对照区中的每个对照区中形成对照线。
3.根据权利要求2所述的测试器基片，其中，测量所述线，以获得在所述至少一个测试区和所述至少两个对照区中的每个对照区处结合的所述分析物的所述定量。
4.根据权利要求3所述的测试器基片，还包括所述标记物与所述分析物之间的1∶1比率。
5.根据权利要求3所述的测试器基片，其中，所述测量装置被配置为利用比色法或分光光度法来测量所述标记物。
6.根据权利要求3所述的测试器基片，其中，所述测试样品中的所述分析物首先接触所述至少两个对照区中具有较高量的部分结合物质的对照区。
7.根据权利要求2所述的测试器基片，其中，测量存在于所述至少一个测试样品区和所述至少两个对照区中的每个对照区中的标记物的量，以获得在所述至少一个测试区和所述至少两个对照区中的每个对照区处结合的部分的所述定量。
8.根据权利要求7所述的测试器基片，还包括所述标记物与分析物之间的1∶1比率。
9.根据权利要求7所述的测试器基片，其中，所述测量装置被配置为利用比色法或分光光度法来测量所述标记物。
10.根据权利要求7所述的测试器基片，其中，所述测试样品中的所述分析物首先接触所述至少两个对照区中具有较高量的部分结合物质的对照区。
11.一种用于获得测试样品中的分析物的定量的套件，所述套件包括：
至少一个测试器基片，具有：
至少一个测试样品区，包括部分结合物质；以及
至少两个对照区，每个对照区包括已知不同量的所述部分结合物质，
使得当所述分析物接触所述至少一个测试样品区中的所述部分结合物质时，形成测试样品线，并且当所述分析物接触所述至少两个对照区中的所述部分结合物质时，在每个对照区中形成对照区线；以及
测量装置，能够访问校准曲线，所述测量装置测量所述对照区线中的每个对照区线并将测量结果与所述校准曲线进行比较，以确定所述校准曲线上对应于存在于所述相应对照区中的每个对照区中的已知量的部分结合物质的高标准和低标准，并且所述测量装置测量所述测试样品线并将所述测试样品线与所述高标准和所述低标准进行比较，以确定结合到所述测试样品区中的所述部分结合物质的部分的量。
12.根据权利要求11所述的套件，包括预定数量的测试器基片，
其中，所述测量装置被配置为测量所述预定数量的测试器基片。
13.根据权利要求11所述的套件，其中，所述测试器基片中的每个测试器基片被固定在盒中。
14.根据权利要求13所述的套件，其中，所述盒与所述测量装置协同接合。
15.根据权利要求12所述的套件，其中，所述分析物与视觉标记物、磁性标记物或荧光标记物缀合。
16.一种用于确定测试样品中的分析物的量的方法，包括：
将所述测试样品沉积到根据权利要求1所述的测试器基片上；
使所述测试样品接触所述至少两个对照区中的第一对照区，以形成第一对照线；
使所述测试样品接触所述至少一个测试样品区，以形成测试样品线；
使所述测试样品接触所述至少两个对照区中的第二对照区，以形成第二对照线；
利用测量装置测量所述第一对照线、所述测试样品线和所述第二对照线；
将所述第一对照线和所述第二对照线拟合到编程到所述测量装置中的校准曲线；以及
将所述测试样品线的测量结果与所述拟合的第一对照线和所述拟合的第二对照线进行比较，以确定结合到所述测试样品区的部分的量，从而给出所述测试样品中的所述分析物的量。
17.根据权利要求16所述的方法，其中，所述部分与形成所述测试样品线、所述第一对照线和所述第二对照线的视觉标记物、磁性标记物或荧光标记物缀合，并且
其中，所述方法还包括通过所述测量装置测量存在于所述测试样品线、所述第一对照线和所述第二对照线处的标记物的量。
18.根据权利要求17所述的方法，其中，所述测试器基片被固定在盒中，并且
其中，所述方法还包括使所述盒与所述测量装置协同接合。
19.根据权利要求17所述的方法，其中，所述测量装置利用比色法或分光光度法来测量所述测试样品线、所述第一对照线和所述第二对照线。
20.根据权利要求19所述的方法，其中，所述第一对照区处的部分结合物质的量大于所述第二对照区处的部分结合物质的量。
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