CN114585719A - 包含蛋白酶的自动盘碟洗涤剂组合物 - Google Patents
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Abstract
一种不含磷酸盐的自动盘碟洗涤清洁组合物,包含蛋白酶,其中所述蛋白酶与SEQ ID NO:1的氨基酸序列或与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少80%,优选地至少85%,更优选地至少90%并且特别是至少96%的同一性,并且其中所述蛋白酶包含选自由以下组成的组的氨基酸取代:(i)选自由以下组成的组的至少两个氨基酸取代:X198G/A/K/L/Q/R/T/V/S/L、X207Q、X211Q/N和X212Q,其与选自由以下组成的组的至少三个氨基酸取代组合:X039E、X074D、X099R、X126A、X127E和X128G;或(ii)X039E‑X074D‑X099R‑X116R‑X126A‑X127E‑X128G‑X211Q;X039E‑X074D‑X099R‑X126A‑X127E‑X128G‑X211N;X039E‑X074D‑X099R‑X126A‑X127E‑X128G‑X211Q;X039E‑X074D‑X099R‑X126A‑X127E‑X128G‑X207Q;或(iii)(i)和(ii)的任意蛋白酶,其还包含选自X242D和X256E的至少一个氨基酸取代;或(iv)X039E‑X074D‑X099R‑X126A‑X127E‑X128G‑X256E;使用SEQ ID NO:2编号。
Description
技术领域
本发明涉及洗涤剂领域。具体地,本发明涉及一种不含磷酸盐的自动盘碟洗涤剂组合物,其包含特定蛋白酶。相对于包含常规蛋白酶的组合物,所述组合物在多种条件下提供改善的清洁。
背景技术
人们一直期望改善自动盘碟洗涤的性能。盘碟洗涤机存在多个程序,使用者可以从所述程序中选择。程序在温度、循环数和循环长度上变化。蛋白酶可能易受温度影响。设计用于耐受高温的蛋白酶通常具有缓慢的动力学速率,因为温度稳健性通常由结构刚度驱动。
自动盘碟洗涤产品可被设计成在某些应用条件下具有最佳性能,例如组合物可被设计成在长时间热循环中具有最佳性能,然而在长时间热循环中具有最佳性能的组合物在短时间冷循环中可能不具有最佳性能,反之亦然。
本发明的目的是提供一种不含磷酸盐的自动盘碟洗涤组合物,其在多个程序中提供更好的清洁,包括长时间热程序和短时间冷程序。
发明内容
根据本发明的第一方面,提供了一种不含磷酸盐的自动盘碟洗涤清洁组合物。所述组合物包含特定蛋白酶。所述组合物在以下循环中呈现改善的性能:热循环(主洗涤温度高于40℃,优选地高于45℃)、长时间循环(主洗涤长于15分钟)和短时间循环(主洗涤持续小于15分钟,优选地小于12分钟,并且特别是小于10分钟),即使当盘碟严重脏污时也是如此。
根据本发明的第二方面,提供了一种在长时间热循环中进行自动盘碟洗涤的方法。
本发明的第一方面的公开内容加以必要的变更而应用于本发明的第二方面。
具体实施方式
本发明涵盖自动盘碟洗涤清洁组合物。所述组合物不含磷酸盐并且包含新的蛋白酶。所述组合物可在宽泛范围的盘碟洗涤机程序(包括具有长时间热循环的程序)中,特别是对蛋和焦糖布丁提供良好的清洁。
所谓“热”循环在本文中被理解为其中主循环在高于40℃、优选地高于45℃的温度下执行的盘碟洗涤程序。
所谓“长时间”循环在本文中被理解为其中主循环具有至少15分钟、优选地至少20分钟并且更优选地至少25分钟的持续时间的盘碟洗涤程序。
所谓“短时间”循环在本文中被理解为其中主循环具有小于15分钟、优选地小于12分钟,优选地小于10分钟的持续时间的盘碟洗涤程序。
本发明的组合物包含变体蛋白酶,该变体蛋白酶相对于参考蛋白酶(SEQ ID NO:1或2的蛋白酶)具有限定的同一性百分比。
本发明的组合物的蛋白酶在本文中有时称为“本发明的蛋白酶”。具有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中任一个的蛋白酶在本文中有时称为“参考蛋白酶”或“亲本蛋白酶”。
两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的相关性由参数“序列同一性”描述。
术语“变体”是指相对于参考蛋白酶在一个或多个(例如,若干个)位置处包含突变(即,取代、***和/或缺失)的蛋白酶。取代是指占据某一位置的氨基酸被另一不同的氨基酸替换;缺失是指占据某一位置的氨基酸的移除;并且***是指邻近占据某一位置的氨基酸并紧接在该氨基酸之后添加氨基酸。本发明的变体与参考蛋白酶具有至少80%,优选地至少85%,更优选地至少90%并且特别是96%的同一性。
在优选实施方案中,变体呈现与SEQ ID NO:1的蛋白酶具有至少90%,更优选地至少96%的同一性。SEQ ID NO:1对应于吉氏芽孢杆菌分支(B.gibsonii-clade)枯草杆菌蛋白酶Bgi02446。在其它实施方案中,变体呈现与SEQ ID NO:2的蛋白酶具有至少90%,更优选地至少96%的同一性。SEQ ID NO:2对应于迟缓芽孢杆菌(B.lentus)枯草杆菌蛋白酶。
术语“野生型”蛋白酶是指由天然存在的微生物诸如存在于自然界中的细菌、酵母或丝状真菌表达的蛋白酶。
酶相关术语
氨基酸修饰的命名
在描述本文的酶变体时,使用以下命名法以便于参考:原始氨基酸:位置:取代的氨基酸。
根据该命名法,例如在第195位用谷氨酸取代甘氨酸被显示为G195E。同一位置处甘氨酸的缺失被示出为G195*,并且另外的氨基酸残基诸如赖氨酸的***被示出为G195GK。在特定酶与其他酶相比包含“缺失”并在该位置进行***的情况下,这表示为*36D以在第36位***天冬氨酸。多个突变由破折号“-”分开,即:S99G-V102N,表示在位置99和102中分别用丝氨酸和缬氨酸取代甘氨酸和天冬酰胺的突变。在某一位置(例如,102)的氨基酸可被选自一组氨基酸(例如由N和I组成的组)的另一氨基酸取代的情况下,这将由V102N,I表示。“X”表示任意氨基酸。
在所有情况下,采用公认的IUPAC单字母或三字母氨基酸缩写。
蛋白酶氨基酸编号
本专利中所用编号是与所示序列相对且不是BPN’编号。
氨基酸同一性
两个氨基酸序列之间的相关性由参数“同一性”描述。就本发明目的而言,两个氨基酸序列的比对通过使用来自EMBOSS软件包(http://emboss.org),版本2.8.0的Needle程序进行确定。Needle程序执行Needleman,S.B.和Wunsch,C.D.在(1970)J.Mol.Biol.48,443-453中所述的全局比对算法。使用的取代矩阵为BLOSUM62,空位开放罚分为10,并且空位延伸罚分为0.5。
本文所用的酶的氨基酸序列(“本发明序列”)与不同氨基酸序列(“外来序列”)之间的同一性程度被计算为两个序列的比对中的精确匹配数除以“本发明序列”的长度或“外来序列”的长度,取最短者。结果以同一性百分比表示。当“本发明序列”和“外来序列”在重叠的相同位置具有相同的氨基酸残基时,发生精确匹配。序列的长度是序列中氨基酸残基的数目。
术语“基于琥珀酸盐的化合物”和“基于琥珀酸的化合物”在本文中可互换使用。
如本文所用,当用于权利要求中时,冠词诸如“一种”和“一个”被理解为是指一个或多个受权利要求保护或描述的物质。
除非另外指明,否则所有组分或组合物水平均是就该组分或组合物的活性部分而言,且不包括可能存在于此类组分或组合物的可商购获得的来源中的杂质,例如残余溶剂或副产物。
除非另外指明,否则所有百分比和比率均按重量计算。除非另外指明,否则所有百分比和比率均基于总组合物计算。
本发明的蛋白酶与SEQ ID NO:1的氨基酸序列或与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少80%,优选地至少85%,更优选地至少90%并且特别是至少96%的同一性。所述蛋白酶包含选自任意组i)至iv)的取代。
(i)选自由以下组成的组的至少一个,优选地至少两个氨基酸取代:X198G/A/K/L/Q/R/T/V/S/L、X207Q、X211Q/N和X212Q,其与选自由以下组成的组的至少三个氨基酸取代,优选地至少四个,优选地至少五个并且尤其是六个氨基酸取代组合:X039E、X074D、X099R、X126A、X127E和X128G;或
(ii)X039E-X074D-X099R-X116R-X126A-X127E-X128G-X211Q;
X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X211N;
X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X211Q;
X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X207Q;或
(iii)组(i)和(ii)的任意蛋白酶,其还包含选自X242D和X256E的至少一个氨基酸取代,优选地所述氨基酸取代X256E;或
(iv)X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X256E;
使用SEQ ID NO:2编号。
来自组i)的优选变体选自包含选自由以下组成的组的氨基酸取代的变体:
1)X198G/A/K/L/Q/R/T/V/S/L-X211Q,其与选自由以下组成的组的取代组合:
a.X039E-X074D-X099R
b.X039E-X074D-X126A
c.X039E-X074D-X127E
d.X039E-X074D-X128G
e.X074D-X099R-X126A
f.X074D-X099R-X127E
g.X074D-X099R-X128G
h.X074D-X126A-X127E
i.X074D-X127E-X128G
j.X099R-X126A-X127E
k.X099R-X127E-X128G
l.X126A-X127E-X128G
m.X039E-X074D-X099R-X126A
n.X039E-X074D-X099R-X127E
o.X039E-X074D-X099R-X128G
p.X039E-X126A-X127E-X128G
q.X074D-X099R-X126A-X127E
r.X074D-X099R-X127E-X128G
s.X074D-X126A-X127E-X128G
t.X099R-X126A-X127E-X128G
u.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E
v.X039E-X074D-X099R-X126A-X128G
w.X039E-X099R-X126A-X127E-X128G
x.X039E-X074D-X126A-X127E-X128G
y.X074D-X099R-X126A-X127E-X128G;和
z.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G
2)X198G/A/K/L/Q/R/T/V/S/L-X212Q,其与选自由以下组成的组的取代组合:
a.X039E-X074D-X099R
b.X039E-X074D-X126A
c.X039E-X074D-X127E
d.X039E-X074D-X128G
e.X074D-X099R-X126A
f.X074D-X099R-X127E
g.X074D-X099R-X128G
h.X074D-X126A-X127E
i.X074D-X127E-X128G
j.X099R-X126A-X127E
k.X099R-X127E-X128G
l.X126A-X127E-X128G
m.X039E-X074D-X099R-X126A
n.X039E-X074D-X099R-X127E
o.X039E-X074D-X099R-X128G
p.X039E-X126A-X127E-X128G
q.X074D-X099R-X126A-X127E
r.X074D-X099R-X127E-X128G
s.X074D-X126A-X127E-X128G
t.X099R-X126A-X127E-X128G
u.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E
v.X039E-X074D-X099R-X126A-X128G
w.X039E-X099R-X126A-X127E-X128G
x.X039E-X074D-X126A-X127E-X128G
y.X074D-X099R-X126A-X127E-X128G;和
z.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G
3)X211Q/N-X212Q,其与选自由以下组成的组的取代组合:
a.X039E-X074D-X099R
b.X039E-X074D-X126A
c.X039E-X074D-X127E
d.X039E-X074D-X128G
e.X074D-X099R-X126A
f.X074D-X099R-X127E
g.X074D-X099R-X128G
h.X074D-X126A-X127E
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r.X074D-X099R-X127E-X128G
s.X074D-X126A-X127E-X128G
t.X099R-X126A-X127E-X128G
u.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E
v.X039E-X074D-X099R-X126A-X128G
w.X039E-X099R-X126A-X127E-X128G
x.X039E-X074D-X126A-X127E-X128G
y.X074D-X099R-X126A-X127E-X128G;和
z.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G
4)X198G/A/K/L/Q/R/T/V/S/L-X211Q-X212Q,其与选自由以下组成的组的取代组合:
a.X039E-X074D-X099R
b.X039E-X074D-X126A
c.X039E-X074D-X127E
d.X039E-X074D-X128G
e.X074D-X099R-X126A
f.X074D-X099R-X127E
g.X074D-X099R-X128G
h.X074D-X126A-X127E
i.X074D-X127E-X128G
j.X099R-X126A-X127E
k.X099R-X127E-X128G
l.X126A-X127E-X128G
m.X039E-X074D-X099R-X126A
n.X039E-X074D-X099R-X127E
o.X039E-X074D-X099R-X128G
p.X039E-X126A-X127E-X128G
q.X074D-X099R-X126A-X127E
r.X074D-X099R-X127E-X128G
s.X074D-X126A-X127E-X128G
t.X099R-X126A-X127E-X128G
u.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E
v.X039E-X074D-X099R-X126A-X128G
w.X039E-X099R-X126A-X127E-X128G
x.X039E-X074D-X126A-X127E-X128G
y.X074D-X099R-X126A-X127E-X128G;和
z.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G
5)X207Q-X211Q/N,其与选自由以下组成的组的取代组合:
a.X039E-X074D-X099R
b.X039E-X074D-X126A
c.X039E-X074D-X127E
d.X039E-X074D-X128G
e.X074D-X099R-X126A
f.X074D-X099R-X127E
g.X074D-X099R-X128G
h.X074D-X126A-X127E
i.X074D-X127E-X128G
j.X099R-X126A-X127E
k.X099R-X127E-X128G
l.X126A-X127E-X128G
m.X039E-X074D-X099R-X126A
n.X039E-X074D-X099R-X127E
o.X039E-X074D-X099R-X128G
p.X039E-X126A-X127E-X128G
q.X074D-X099R-X126A-X127E
r.X074D-X099R-X127E-X128G
s.X074D-X126A-X127E-X128G
t.X099R-X126A-X127E-X128G
u.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E
v.X039E-X074D-X099R-X126A-X128G
w.X039E-X099R-X126A-X127E-X128G
x.X039E-X074D-X126A-X127E-X128G
y.X074D-X099R-X126A-X127E-X128G;和
z.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G
6)X207Q-X212Q,其与选自由以下组成的组的取代组合:
a.X039E-X074D-X099R
b.X039E-X074D-X126A
c.X039E-X074D-X127E
d.X039E-X074D-X128G
e.X074D-X099R-X126A
f.X074D-X099R-X127E
g.X074D-X099R-X128G
h.X074D-X126A-X127E
i.X074D-X127E-X128G
j.X099R-X126A-X127E
k.X099R-X127E-X128G
l.X126A-X127E-X128G
m.X039E-X074D-X099R-X126A
n.X039E-X074D-X099R-X127E
o.X039E-X074D-X099R-X128G
p.X039E-X126A-X127E-X128G
q.X074D-X099R-X126A-X127E
r.X074D-X099R-X127E-X128G
s.X074D-X126A-X127E-X128G
t.X099R-X126A-X127E-X128G
u.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E
v.X039E-X074D-X099R-X126A-X128G
w.X039E-X099R-X126A-X127E-X128G
x.X039E-X074D-X126A-X127E-X128G
y.X074D-X099R-X126A-X127E-X128G;和
z.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G
7)X207Q-X211Q/N-X212Q,其与选自由以下组成的组的取代组合:
a.X039E-X074D-X099R
b.X039E-X074D-X126A
c.X039E-X074D-X127E
d.X039E-X074D-X128G
e.X074D-X099R-X126A
f.X074D-X099R-X127E
g.X074D-X099R-X128G
h.X074D-X126A-X127E
i.X074D-X127E-X128G
j.X099R-X126A-X127E
k.X099R-X127E-X128G
l.X126A-X127E-X128G
m.X039E-X074D-X099R-X126A
n.X039E-X074D-X099R-X127E
o.X039E-X074D-X099R-X128G
p.X039E-X126A-X127E-X128G
q.X074D-X099R-X126A-X127E
r.X074D-X099R-X127E-X128G
s.X074D-X126A-X127E-X128G
t.X099R-X126A-X127E-X128G
u.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E
v.X039E-X074D-X099R-X126A-X128G
w.X039E-X099R-X126A-X127E-X128G
x.X039E-X074D-X126A-X127E-X128G
y.X074D-X099R-X126A-X127E-X128G;和
z.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G.
特别优选的取代选自由以下组成的组:
a.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198G-X211Q
b.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198A-X211Q
c.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198G-X212Q
d.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X211Q-X212Q
e.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198A-X211Q-X212Q
f.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198G-X211Q-X212Q
g.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X211N
h.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X211N-X212Q
i.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X211N-X212Q-X256E
j.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X211N-X256E
k.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X211Q
l.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X211Q-X212Q-X256E
m.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X211Q-X256E
n.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198A-X211Q-X256E
o.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198G-X211Q-X256E
p.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198K-X211Q-X212Q
q.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198L-X211Q-X212Q
r.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198Q-X211Q-X212Q
s.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198R-X211Q-X212Q
t.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198T-X211Q-X212Q
u.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198V-X211Q-X212Q
v.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X212Q-X256E
w.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X256E
x.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X207Q
y.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X207Q-X211N
z.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X207Q-X211N-X212Q
aa.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X207Q-X211N-X212Q-X256E
bb.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X207Q-X211N-X256E
cc.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X207Q-X211Q
dd.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X207Q-X211Q-X212Q
ee.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X207Q-X211Q-X212Q-X256E
ff.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X207Q-X212Q
gg.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X207Q-X212Q-X256E
hh.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X207Q-X256E
ii.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198S-X211Q
jj.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198L-X211Q
kk.X039E-X074D-X099R-X116R-X126A-X127E-X128G-X211Q-X242D-X256E
优选地,本发明的蛋白酶与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少80%,优选地至少85%,更优选地至少90%,更优选地至少95%并且特别是至少96%的同一性,并且其中蛋白酶包含选自任意组i)至iv)的氨基酸取代:
(i)选自由以下组成的组的至少一个,优选地至少两个氨基酸取代:N198G/A/K/L/Q/R/T/V/S/L、R207Q、M211Q/N和N212Q,其与选自由以下组成的组的至少三个氨基酸取代组合:S039E、N074D、S099R、S126A、D127E和F128G;或
(ii)S039E-N074D-S099R-N116R-S126A-D127E-F128G-M211Q
S039E-N074D-S099R-N126A-S127E-F128G-M211N;
S039E-N074D-S099R-N126A-S127E-F128G-M211Q;
S039E-N074D-S099R-N126A-S127E-F128G-M207Q;或
(iii)(i)和(ii)的任意变体,其还包含选自N242D和Q256E的至少一个氨基酸取代;或
(iv)S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-Q256E。
或
优选地,本发明的蛋白酶与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少80%,优选地至少85%,更优选地至少90%,更优选地至少95%并且特别是至少96%的同一性,并且其中蛋白酶包含选自以下的氨基酸取代:
(i)选自由以下组成的组的至少两个氨基酸取代:N198G/A/K/L/Q/R/T/V/S/L、T207Q、L211Q/N和N212Q,其与选自由以下组成的组的至少三个氨基酸取代组合:P039E、N074D、S099R、S126A、P127E和S128G;或
(ii)P039E-N074D-S099R-G116R-S126A-P127E-S128G-L211Q;
P039E-N074D-S099R-G126A-P127E-S128G-L211N;
P039E-N074D-S099R-G126A-P127E-S128G-L211Q;
P039E-N074D-S099R-G126A-P127E-S128G-T207Q或
(iii)(i)和(ii)的任意变体,其还包含选自N242D和L256E的至少一个氨基酸取代;或
(iv)P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-L256E
使用SEQ ID NO:2编号。
优选地,本发明的蛋白酶与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少80%,优选地至少85%,更优选地至少90%,更优选地至少95%并且特别是至少96%的同一性,并且其中蛋白酶包含选自以下的氨基酸取代:
N198G/A/K/L/Q/R/T/V/S/L-M211Q,其与选自由以下组成的组的取代组合:
a.S039E-N074D-S099R
b.S039E-N074D-S126A
c.S039E-N074D-D127E
d.S039E-N074D-F128G
e.N074D-S099R-S126A
f.N074D-S099R-D127E
g.N074D-S099R-F128G
h.N074D-S126A-D127E
i.N074D-D127E-F128G
j.S099R-S126A-D127E
k.S099R-D127E-F128G
l.S126A-D127E-F128G
m.S039E-N074D-S099R-S126A
n.S039E-N074D-S099R-D127E
o.S039E-N074D-S099R-F128G
p.S039E-S126A-D127E-F128G
q.N074D-S099R-S126A-D127E
r.N074D-S099R-D127E-F128G
s.N074D-S126A-D127E-F128G
t.S099R-S126A-D127E-F128G
u.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E
v.S039E-N074D-S099R-S126A-F128G
w.S039E-S099R-S126A-D127E-F128G
x.S039E-N074D-S126A-D127E-F128G
y.N074D-S099R-S126A-D127E-F128G;和
z.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G
优选地,本发明的蛋白酶与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少80%,优选地至少85%,更优选地至少90%,更优选地至少95%并且特别是至少96%的同一性,并且其中蛋白酶包含选自以下的氨基酸取代:
N198G/A/K/L/Q/R/T/V/S/L-L211Q,其与选自由以下组成的组的取代组合:
a.P039E-N074D-S099R
b.P039E-N074D-S126A
c.P039E-N074D-P127E
d.P039E-N074D-S128G
e.N074D-S099R-S126A
f.N074D-S099R-P127E
g.N074D-S099R-S128G
h.N074D-S126A-P127E
i.N074D-P127E-S128G
j.S099R-S126A-P127E
k.S099R-P127E-S128G
l.S126A-P127E-S128G
m.P039E-N074D-S099R-S126A
n.P039E-N074D-S099R-P127E
o.P039E-N074D-S099R-S128G
p.P039E-S126A-P127E-S128G
q.N074D-S099R-S126A-P127E
r.N074D-S099R-P127E-S128G
s.N074D-S126A-P127E-S128G
t.S099R-S126A-P127E-S128G
u.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E
v.P039E-N074D-S099R-S126A-S128G
w.P039E-S099R-S126A-P127E-S128G
x.P039E-N074D-S126A-P127E-S128G
y.N074D-S099R-S126A-P127E-S128G;和
z.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G
优选地,本发明的蛋白酶与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少80%,优选地至少85%,更优选地至少90%,更优选地至少95%并且特别是至少96%的同一性,并且其中蛋白酶包含选自以下的氨基酸取代:
N198G/A/K/L/Q/R/T/V/S/L-N212Q,其与选自由以下组成的组的取代组合:
a.S039E-N074D-S099R
b.S039E-N074D-S126A
c.S039E-N074D-D127E
d.S039E-N074D-F128G
e.N074D-S099R-S126A
f.N074D-S099R-D127E
g.N074D-S099R-F128G
h.N074D-S126A-D127E
i.N074D-D127E-F128G
j.S099R-S126A-D127E
k.S099R-D127E-F128G
l.S126A-D127E-F128G
m.S039E-N074D-S099R-S126A
n.S039E-N074D-S099R-D127E
o.S039E-N074D-S099R-F128G
p.S039E-S126A-D127E-F128G
q.N074D-S099R-S126A-D127E
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优选地,本发明的蛋白酶与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少80%,优选地至少85%,更优选地至少90%,更优选地至少95%并且特别是至少96%的同一性,并且其中蛋白酶包含选自以下的氨基酸取代:
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a.S039E-N074D-S099R
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y.N074D-S099R-S126A-D127E-F128G;和
z.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G
优选地,本发明的蛋白酶与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少80%,优选地至少85%,更优选地至少90%,更优选地至少95%并且特别是至少96%的同一性,并且其中蛋白酶包含选自以下的氨基酸取代:
T207Q-L211Q/N-N212Q,其与选自由以下组成的组的取代组合:
a.P039E-N074D-S099R
b.P039E-N074D-S126A
c.P039E-N074D-P127E
d.P039E-N074D-S128G
e.N074D-S099R-S126A
f.N074D-S099R-P127E
g.N074D-S099R-S128G
h.N074D-S126A-P127E
i.N074D-P127E-S128G
j.S099R-S126A-P127E
k.S099R-P127E-S128G
l.S126A-P127E-S128G
m.P039E-N074D-S099R-S126A
n.P039E-N074D-S099R-P127E
o.P039E-N074D-S099R-S128G
p.P039E-S126A-P127E-S128G
q.N074D-S099R-S126A-P127E
r.N074D-S099R-P127E-S128G
s.N074D-S126A-P127E-S128G
t.S099R-S126A-P127E-S128G
u.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E
v.P039E-N074D-S099R-S126A-S128G
w.P039E-S099R-S126A-P127E-S128G
x.P039E-N074D-S126A-P127E-S128G
y.N074D-S099R-S126A-P127E-S128G;和
z.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G
根据本发明的优选蛋白酶还包含至少一个氨基酸取代,所述至少一个氨基酸取代选自X242D和X256E,更优选地选自X256E。
优选地,本发明的蛋白酶与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少80%,优选地至少85%,更优选地至少90%,更优选地至少95%并且特别是至少96%的同一性,并且其中蛋白酶包含选自由以下组成的组的氨基酸取代:
a.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-N198G-M211Q
b.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-N198A-M211Q
c.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-N198G-N212Q
d.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-M211Q-N212Q
e.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-N198A-M211Q-N212Q
f.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-N198G-M211Q-N212Q
g.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-M211N
h.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-M211N-N212Q
i.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-M211N-N212Q-Q256E
j.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-M211N-Q256E
k.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-M211Q
l.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-M211Q-N212Q-Q256E
m.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-M211Q-Q256E
n.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-N198A-M211Q-Q256E
o.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-N198G-M211Q-Q256E
p.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-N198K-M211Q-N212Q
q.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-N198L-M211Q-N212Q
r.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-N198Q-M211Q-N212Q
s.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-N198R-M211Q-N212Q
t.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-N198T-M211Q-N212Q
u.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-N198V-M211Q-N212Q
v.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-N212Q-Q256E
w.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-Q256E
x.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-R207Q
y.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-R207Q-M211N
z.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-R207Q-M211N-N212Q
aa.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-R207Q-M211N-N212Q-Q256E
bb.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-R207Q-M211N-Q256E
cc.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-R207Q-M211Q
dd.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-R207Q-M211Q-N212Q
ee.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-R207Q-M211Q-N212Q-Q256E
ff.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-R207Q-N212Q
gg.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-R207Q-N212Q-Q256E
hh.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-R207Q-Q256E
ii.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-N198S-M211Q
jj.S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-N198L-M211Q
kk.S039E-N074D-S099R-N116R-S126A-D127E-F128G-M211Q-N242D-Q256E
优选地,本发明的蛋白酶与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少80%,优选地至少85%,更优选地至少90%,更优选地至少95%并且特别是至少96%的同一性,并且蛋白酶包含选自以下的氨基酸取代:
a.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-N198G-L211Q
b.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-N198A-L211Q
c.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-N198G-N212Q
d.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-L211Q-N212Q
e.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-N198A-L211Q-N212Q
f.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-N198G-L211Q-N212Q
g.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-L211N
h.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-L211N-N212Q
i.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-L211N-N212Q-L256E
j.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-L211N-L256E
k.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-L211Q
l.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-L211Q-N212Q-L256E
m.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-L211Q-L256E
n.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-N198A-L211Q-L256E
o.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-N198G-L211Q-L256E
p.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-N198K-L211Q-N212Q
q.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-N198L-L211Q-N212Q
r.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-N198Q-L211Q-N212Q
s.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-N198R-L211Q-N212Q
t.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-N198T-L211Q-N212Q
u.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-N198V-L211Q-N212Q
v.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-N212Q-L256E
w.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-L256E
x.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-T207Q
y.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-T207Q-L211N
z.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-T207Q-L211N-N212Q
aa.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-T207Q-L211N-N212Q-L256E
bb.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-T207Q-L211N-L256E
cc.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-T207Q-L211Q
dd.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-T207Q-L211Q-N212Q
ee.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-T207Q-L211Q-N212Q-L256E
ff.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-T207Q-N212Q
gg.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-T207Q-N212Q-L256E
hh.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-T207Q-L256E
ii.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-N198S-L211Q
jj.P039E-N074D-S099R-S126A-P127E-S128G-N198L-L211Q
kk.P039E-N074D-S099R-G116R-S126A-P127E-S128G-L211Q-N242D-L256E
本发明的组合物中蛋白酶的优选含量包括每克组合物约0.04mg至约7mg、更优选地约0.05mg至约4mg活性蛋白酶。
自动盘碟洗涤清洁组合物
自动盘碟洗涤清洁组合物可为任何物理形式。它可以是散粉、凝胶或以单位剂型存在。优选地,它是单位剂型,单位剂型包括压片和水溶性包装。本发明的自动盘碟洗涤清洁组合物优选地以单位剂型存在,并且它可以是任何物理形式,包括固体、液体和凝胶形式。本发明的组合物非常适于以多隔室包装的形式存在,更具体地以包含具有不同物理形式的组合物的隔室的多隔室包装的形式存在,例如一个隔室包含固体形式的组合物并且另一个隔室包含液体形式的组合物。所述组合物优选地被水溶性薄膜如聚乙烯醇包封。特别优选的是被封装在聚乙烯醇膜中的单位剂型的组合物,所述聚乙烯醇膜具有小于100μm、优选地为20μm至90μm的厚度。本发明的洗涤剂组合物的重量为约8克至约25克,优选地为约10克至约20克。该重量范围与盘碟洗涤机的分配器十分契合。虽然该范围相当于少量洗涤剂,但洗涤剂也以提供上文提及的全部有益效果的方式配制。
所述组合物优选地不含磷酸盐。所谓“不含磷酸盐”在本文中被理解为所述组合物包含按所述组合物的重量计少于1%、优选地少于0.1%的磷酸盐。
络合剂体系
出于本发明的目的,“络合剂”是能够结合多价离子诸如钙、镁、铅、铜、锌、镉、汞、锰、铁、铝和其他阳离子多价离子以形成水溶性络合物的化合物。所述络合剂对于Ca2+具有至少3的对数稳定常数([log K])。该稳定常数log K在25℃的温度下、在离子强度为0.1的溶液中测定。
本发明的组合物优选地包含按组合物的重量计10%至50%的络合剂体系。络合剂体系包含选自由以下组成的组的一种或多种络合剂:甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、柠檬酸、谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)、亚氨基二琥珀酸(IDS)、羧甲基菊粉、L-天冬氨酸N,N-二乙酸四钠盐(ASDA)以及它们的混合物。优选地,络合剂体系包含按组合物的重量计至少10%的MGDA。络合剂体系可以另外包含选自由以下组成的组的络合剂:柠檬酸、(GLDA)、(IDS)、羧甲基菊粉、L-天冬氨酸N,N-二乙酸四钠盐(ASDA)以及它们的混合物优选地,络合剂体系包含按组合物的重量计至少10%的MGDA和按组合物的重量计至少10%的柠檬酸。出于本发明的目的,当提及络合剂时,术语“酸”包括酸及其盐。
在一个优选的实施方案中,所述组合物包含按组合物的重量计至少15%,更优选地20%至40%的MGDA,更优选MGDA的三钠盐。包含这种高含量MGDA的组合物在硬水中以及在长时间和/或热循环中表现良好。
本发明的络合剂体系还可包含柠檬酸。
聚合物分散剂
聚合物分散剂可以按所述组合物的重量计约0.1%至约20%、优选地0.2%至约15%、更优选地0.3至%的任意合适的量使用。
聚合物分散剂能够在自动盘碟洗涤过程中混悬钙或碳酸钙。
在25℃下,聚合物分散剂具有介于30至250mg Ca/g聚合物分散剂、优选地介于35至200mg Ca/g聚合物分散剂、更优选地40至150mg Ca/g聚合物分散剂范围内的钙结合能力。为了确定聚合物是否为本发明意义上的聚合物分散剂,根据以下说明进行以下钙结合能力测定:
钙结合能力测试方法
本文提及的钙结合能力经由滴定、使用pH/离子计如Meettler ToledoSevenMultiTM台式计和PerfectIONTM复合钙离子电极来测定。为了测量结合能力,将适用于烧杯或洗涤仪罐的加热搅拌装置设定为25℃,并且根据制造商说明书校准具有仪表的离子电极。电极校准的标准浓度应包括测试浓度,并且应在25℃下测量。通过将3.67g CaCl2-2H2O添加到1L去离子水中来制备1000mg/g Ca的原液,然后进行稀释以制备三种各100mL的工作溶液,分别包含100mg/g、10mg/g和1mg/g浓度的钙。将100mg Ca/g工作溶液用作在25℃下进行的滴定期间的初始浓度。通过向每种工作溶液中添加2.5g/L NaCl来调节每种工作溶液的离子强度。将100mL的100mg Ca/g工作溶液加热并搅拌,直至其达到25℃。在溶液达到25℃时,使用离子电极进行钙离子浓度的初始读数。然后将测试聚合物逐渐地添加到钙工作溶液中(以0.01g/L的间隔),并且在每次增量添加后搅拌5分钟后再测量。当溶液达到1mg/g钙时,停止滴定。使用剩余的两种钙浓度工作溶液重复滴定过程。测试聚合物的结合能力被计算为相对于所添加的测试聚合物的克/L所测量的钙浓度的线性斜率。
当溶解于pH大于6的水性溶液中时,聚合物分散剂优选地具有净负电荷。
聚合物分散剂还可具有磺化羧酸酯或酰胺,以在较低pH下增加负电荷,并且改善它们在硬水中的分散特性。优选的聚合物分散剂为磺化/羧化聚合物,即包含磺化单体和羧化单体的聚合物。
优选地,所述聚合物分散剂为多元羧酸的磺化衍生物,并且可包含两种、三种、四种或更多种不同的单体单元。优选的共聚物包含:
至少一个衍生自具有通式(III)的羧酸单体的结构单元:
其中R1至R3独立地选自氢、甲基、具有2至12个碳原子的直链或支链的饱和烷基基团、具有2至12个碳原子的直链或支链的单不饱和或多不饱和的烯基基团、如前述被–NH2或-OH、或–COOH、或COOR4取代的烷基或烯基基团,其中R4选自氢、碱金属或具有2至12个碳的直链或支链的、饱和或不饱和的烷基或烯基基团;
优选的羧酸单体包括下列中的一种或多种:丙烯酸、马来酸、马来酸酐、衣康酸、柠康酸、2-苯基丙烯酸、肉桂酸、巴豆酸、富马酸、甲基丙烯酸、2-乙基丙烯酸、亚甲基丙二酸或山梨酸。丙烯酸和甲基丙烯酸是更优选的。
任选地,一个或多个衍生自至少一种具有通式(IV)的非离子单体的结构单元:
其中R5至R7独立地选自氢、甲基、苯基或含有1至6个碳原子的羟烷基基团,并且可以是环状结构的一部分,X为选自-CH2-、-COO-、-CONH-或-CONR8-的任选地存在的间隔基团,并且R8选自具有1至22个碳原子的直链或支链的饱和烷基基团或具有6至22个碳原子的不饱和、优选芳族的基团。
优选的非离子单体包括下列中的一种或多种:丁烯、异丁烯、戊烯、2-甲基戊-1-烯、3-甲基戊-1-烯、2,4,4-三甲基戊-1-烯、2,4,4-三甲基戊-2-烯、环戊烯、甲基环戊烯、2-甲基-3-甲基-环戊烯、己烯、2,3-二甲基己-1-烯、2,4-二甲基己-1-烯、2,5-二甲基己-1-烯、3,5-二甲基己-1-烯、4,4-二甲基己-1-烯、环己烯、甲基环己烯、环庚烯、具有10个或更多个碳原子的α-烯烃诸如癸-1-烯、十二碳-1-烯、十六碳-1-烯、十八碳-1-烯和二十二碳-1-烯,优选的芳族单体为苯乙烯、α-甲基苯乙烯、3-甲基苯乙烯、4-十二烷基苯乙烯、2-乙基-4-苄基苯乙烯、4-环己基苯乙烯、4-丙基苯乙烯、1-乙烯基萘、2-乙烯基萘;优选的羧酸酯单体为(甲基)丙烯酸甲酯、(甲基)丙烯酸乙酯、(甲基)丙烯酸丙酯、(甲基)丙烯酸叔丁酯、(甲基)丙烯酸戊酯、(甲基)丙烯酸己酯、(甲基)丙烯酸2-乙基己酯、(甲基)丙烯酸辛酯、(甲基)丙烯酸月桂酯、(甲基)丙烯酸硬脂酯和(甲基)丙烯酸二十二烷基酯;优选的酰胺为N-甲基丙烯酰胺、N-乙基丙烯酰胺、N-叔丁基丙烯酰胺、N-2-乙基己基丙烯酰胺、N-辛基丙烯酰胺、N-月桂基丙烯酰胺、N-硬脂基丙烯酰胺、N-二十二烷基丙烯酰胺。
以及至少一个衍生自至少一种具有通式(V)和(VI)的磺酸单体的结构单元:
其中R7为包含至少一个sp2键的基团,A为O、N、P、S、酰胺基或酯键,B为单环或多环芳族基团或脂族基团,每个t独立地为0或1,并且M+为阳离子。在一个方面,R7为C2至C6烯烃。在另一方面,R7为乙烯、丁烯或丙烯。
优选的磺化单体包括下列中的一种或多种:1-丙烯酰胺-1-丙磺酸、2-丙烯酰胺-2-丙磺酸、2-丙烯酰胺-2-甲基-1-丙磺酸、2-甲基丙烯酰胺-2-甲基-1-丙磺酸、3-甲基丙烯酰胺-2-羟基-丙磺酸、烯丙基磺酸、甲基烯丙基磺酸、烯丙氧基苯磺酸、甲基烯丙氧基苯磺酸、2-羟基-3-(2-丙烯氧基)丙磺酸、2-甲基-2-丙烯-1-磺酸、苯乙烯磺酸、乙烯基磺酸、3-磺基丙基、甲基丙烯酸3-磺基丙酯、磺基甲基丙烯酰胺、磺基甲基甲基丙烯酰胺、以及所述酸的混合物或它们的水溶性盐。
优选地,所述聚合物包含以下含量的单体:按所述聚合物的重量计约40%至约90%、优选地约60%至约90%的一种或多种羧酸单体;按所述聚合物的重量计约5%至约50%、优选地约10%至约40%的一种或多种磺酸单体;以及任选地按所述聚合物的重量计约1%至约30%、优选地约2%至约20%的一种或多种非离子单体。特别优选的聚合物包含按所述聚合物的重量计约70%至约80%的至少一种羧酸单体,以及按所述聚合物的重量计约20%至约30%的至少一种磺酸单体。
在所述聚合物中,羧酸基团或磺酸基团中的全部或一些可以中和形式存在,即,一些或全部酸基团中的羧酸基团和/或磺酸基团的酸性氢原子可用金属离子、优选地碱金属离子并且具体地用钠离子替代。
羧酸优选地为(甲基)丙烯酸。磺酸单体优选地为2-丙烯酰胺-2-丙磺酸(AMPS)。
优选的可商购获得的聚合物包括:由Alco Chemical提供的Alcosperse 240、Aquatreat AR 540和Aquatreat MPS;由Rohm&Haas提供的Acumer 3100、Acumer 2000、Acusol 587G和Acusol 588G;由BF Goodrich提供的Goodrich K-798、K-775和K-797;以及由ISP technologies Inc提供的ACP 1042。特别优选的聚合物是由Rohm&Haas提供的Acusol 587G和Acusol 588G。
合适的聚合物分散剂包括低分子量的阴离子羧酸聚合物。它们可以是重均分子量小于或等于约200000g/mol、或小于或等于约75000g/mol、或小于或等于约50000g/mol、或约3000g/mol至约50000g/mol、优选地约5000g/mol至约45000g/mol的均聚物或共聚物。聚合物分散剂可以是聚丙烯酸酯的低分子量均聚物,其平均分子量为1000至20000,具体地2000至10000,并且具体地优选3000至5000。
聚合物分散剂可以是分子量小于70000的丙烯酸与甲基丙烯酸的共聚物、丙烯酸和/或甲基丙烯酸与马来酸的共聚物、以及丙烯酸和/或甲基丙烯酸与富马酸的共聚物。其分子量在2000g/mol至80000g/mol并且更优选地20000g/mol至50000g/mol并且具体地30000g/mol至40000g/mol的范围内,并且(甲基)丙烯酸酯与马来酸酯或延胡索酸酯链段的比率为30:1至1:2。
聚合物分散剂可以是分子量为3000至100000或者4000至20000的丙烯酰胺和丙烯酸酯的共聚物,并且也可使用按聚合物分散剂的重量计小于50%或者小于20%的丙烯酰胺含量。另选地,此类聚合物分散剂可具有按所述聚合物的重量计4000至20000的分子量和0%至15%的丙烯酰胺含量。
适用于本文的聚合物分散剂还包括衣康酸均聚物和共聚物。
另选地,聚合物分散剂可选自由烷氧基化聚亚烷基亚胺、烷氧基化聚羧酸酯、聚乙二醇、苯乙烯共聚物、硫酸纤维素酯、羧化多糖、两亲性接枝共聚物以及它们的混合物组成的组。
漂白体系
本发明的组合物优选地包含漂白体系,该漂白体系包含高含量的漂白剂,优选过碳酸盐与漂白活化剂或漂白催化剂或两者的组合。优选地,所述漂白活化剂为TAED,并且所述漂白催化剂为锰漂白催化剂。
漂白剂
本发明的组合物优选地包含按所述组合物的重量计约10%至约20%、更优选地约12%至约18%的漂白剂,优选过碳酸盐。
无机漂白剂和有机漂白剂适用于本文。无机漂白剂包括过氧化氢合物盐,诸如过硼酸盐、过碳酸盐、过磷酸盐、过硫酸盐和过硅酸盐。无机过氧化氢合物盐通常为碱金属盐。无机过氧化氢合物盐可作为结晶固体包含在内,而无需另外的保护。另选地,盐可为经涂覆的。合适的涂料包含硫酸钠、碳酸钠、硅酸钠以及它们的混合物。所述涂料可作为混合物施加到表面或依次施加成层。
碱金属过碳酸盐、具体地过碳酸钠是优选用于本文的漂白剂。过碳酸盐最优选地以涂覆形式掺入到产品中,这提供了产品内的稳定性。
过氧单过硫酸钾是可用于本文的另一种无机过氧化氢合物盐。
典型的有机漂白剂是有机过氧酸,尤其是十二烷二过氧酸、十四烷二过氧酸和十六烷二过氧酸。单过壬二酸和二过壬二酸、单过十三烷二酸和二过十三烷二酸也适用于本文。二酰基和四酰基过氧化物例如过氧化二苯甲酰和过氧化二月桂酰是可用于本发明上下文的其他有机过氧化物。
其他典型的有机漂白剂包括过氧酸,具体示例是烷基过氧酸和芳基过氧酸。优选的代表是(a)过氧苯甲酸及其环取代的衍生物,诸如烷基过氧苯甲酸,以及过氧-α-萘甲酸和单过邻苯二甲酸镁,(b)脂族或取代的脂族过氧酸,诸如过氧月桂酸、过氧硬脂酸、ε-邻苯二甲酰亚胺过氧己酸[邻苯二甲酰亚氨基过氧己酸(PAP)]、邻羧基苯甲酰胺基过氧己酸、N-壬烯酰胺基过己二酸和N-壬烯酰胺基过琥珀酸盐,以及(c)脂族和芳脂族过氧二羧酸,诸如1,12-二过氧羧酸、1,9-二过氧壬二酸、二过氧癸二酸、二过氧十三烷二酸、二过氧邻苯二甲酸、2-癸基二过氧丁烷-1,4-二酸、N,N-对苯二甲酰二(6-氨基过己酸)。
漂白活化剂
漂白活化剂通常是能在60℃和更低的温度下在清洁过程中增强漂白作用的有机过酸前体。适用于本文的漂白活化剂包括在过水解条件下提供优选具有1至12个碳原子、具体地2至10个碳原子的脂族过氧羧酸和/或任选取代的过苯甲酸的化合物。合适的物质具有指定碳原子数的O-酰基和/或N-酰基基团和/或任选取代的苯甲酰基基团。优选的是聚酰化亚烷基二胺、具体地四乙酰基乙二胺(TAED),酰化三嗪衍生物、具体地1,5-二乙酰基-2,4-二氧代六氢-1,3,5-三嗪(DADHT),酰化甘脲、具体地四乙酰基甘脲(TAGU),N-酰基酰亚胺、具体地N-壬酰基琥珀酰亚胺(NOSI),酰化酚磺酸盐、具体地正壬酰基或异壬酰基氧基苯磺酸盐(正-或异-NOBS)、癸酰氧基苯甲酸(DOBA),羧酸酐具体地邻苯二甲酸酐,酰化多元醇、具体地甘油三乙酸酯、乙二醇二乙酸酯和2,5-二乙酰氧基-2,5-二氢呋喃,以及乙酰柠檬酸三乙酯(TEAC)。如果存在的话,本发明的组合物包含按所述组合物的重量计0.01%至5%、优选地0.2%至2%的漂白活化剂,优选TAED。
漂白催化剂
本文的组合物优选地包含漂白催化剂,优选含金属的漂白催化剂。更优选地,所述含金属的漂白催化剂是含过渡金属的漂白催化剂,尤其是含锰或钴的漂白催化剂。
优选用于本文的漂白催化剂包括锰三氮杂环壬烷及相关络合物;Co、Cu、Mn和Fe联吡啶胺及相关络合物;以及五胺乙酸钴(III)及相关络合物。可用于本文的特别优选的漂白催化剂是1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me-TACN)和1,2,4,7-四甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me/Me-TACN)。可用于本文的特别优选的组合物包含1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me-TACN)和/或1,2,4,7-四甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me/Me-TACN)。
优选地,本发明的组合物包含按组合物的重量计0.001%至0.5%、更优选地0.002%至0.1%、更优选地0.005%至0.075%的漂白催化剂。优选地,所述漂白催化剂为锰漂白催化剂。
无机助洗剂
本发明的组合物优选地包含无机助洗剂。合适的无机助洗剂选自由碳酸盐、硅酸盐以及它们的混合物组成的组。特别优选用于本文的是碳酸钠。优选地,本发明的组合物包含按所述组合物的重量计5%至60%、更优选地10%至50%并且特别是15%至45%的碳酸钠。
表面活性剂
适用于本文的表面活性剂包括非离子表面活性剂,优选地,所述组合物不含任何其他表面活性剂。传统上,非离子表面活性剂已在自动盘碟洗涤中被用于表面改性目的,具体地用于片材,以避免成膜和斑染并改善光泽度。据发现,非离子表面活性剂还可有助于防止污垢再沉积。
优选地,本发明的组合物包含非离子表面活性剂或非离子表面活性剂体系,更优选地,所述非离子表面活性剂或非离子表面活性剂体系具有介于40℃和70℃之间、优选地介于45℃和65℃之间的相转化温度,如在蒸馏水中以1%的浓度测得。所谓“非离子表面活性剂体系”在本文中是指两种或更多种非离子表面活性剂的混合物。优选用于本文的是非离子表面活性剂体系。与单一非离子表面活性剂相比,非离子表面活性剂体系似乎具有改善的清洁和修整特性以及在产品中更好的稳定性。
相转化温度是这样的温度,在低于该温度时,表面活性剂或其混合物作为油溶胀的胶束优先分配到水相中,并且在高于该温度时,则作为水溶胀的反相胶束优先分配到油相中。相转化温度可通过识别在哪个温度下发生浑浊而目视确定。
非离子表面活性剂或体系的相转化温度可如下测定:制备在蒸馏水中包含按所述溶液的重量计1%的对应表面活性剂或混合物的溶液。在相转化温度分析之前轻轻搅拌溶液,以确保该过程在化学平衡下发生。通过在75mm密封玻璃试管中浸入溶液,在热稳定浴中获取相转化温度。为了确保不存在渗漏,在相转化温度测量之前和之后称量试管的重量。温度以小于1℃/分钟的速率逐渐升高,直到温度达到低于预估的相转化温度几度。相转化温度在第一浊度标志下目视确定。
合适的非离子表面活性剂包括:i)乙氧基化非离子表面活性剂,其通过具有6至20个碳原子的一羟基链烷醇或烷基酚与优选每摩尔醇或烷基酚至少12摩尔、尤其优选至少16摩尔并且还更优选至少20摩尔的环氧乙烷的反应制备;ii)具有6至20个碳原子和至少一个乙氧基和丙氧基基团的醇烷氧基化表面活性剂。优选可用于本文的是表面活性剂i)和ii)的混合物。
其他合适的非离子表面活性剂是由下式表示的环氧封端的聚(烷氧基化)醇:
R1O[CH2CH(CH3)O]x[CH2CH2O]y[CH2CH(OH)R2] (I)
其中R1为具有4至18个碳原子的直链或支链的脂族烃基;R2为具有2至26个碳原子的直链或支链的脂族烃基;x为平均值为0.5至1.5、更优选地约1的整数;并且y为值为至少15、更优选地至少20的整数。
优选地,式I的表面活性剂在末端环氧化物单元[CH2CH(OH)R2]中具有至少约10个碳原子。根据本发明,式I的合适表面活性剂是Olin Corporation的POLY-SLF-18B非离子表面活性剂,如1994年10月13日由Olin Corporation公布的WO 94/22800中所述。
酶
其他蛋白酶
除本发明的蛋白酶之外,本发明的组合物还可包含蛋白酶。两种或更多种蛋白酶的混合物可有助于在较宽的温度、循环持续时间和/或底物范围内增强清洁,并且提供优异的光泽有益效果,尤其是当与抗再沉积剂和/或磺化聚合物结合使用时。
与本发明的变体蛋白酶组合使用的合适蛋白酶包括金属蛋白酶和丝氨酸蛋白酶,所述丝氨酸蛋白酶包括中性或碱性微生物丝氨酸蛋白酶,诸如枯草杆菌蛋白酶(EC3.4.21.62)。合适的蛋白酶包括动物源、植物源或微生物源的那些。在一个方面,此类合适的蛋白酶可为微生物源。合适的蛋白酶包括前述合适蛋白酶的经化学修饰或基因修饰的突变体。在一个方面,合适的蛋白酶可为丝氨酸蛋白酶,诸如碱性微生物蛋白酶或/和胰蛋白酶型蛋白酶。合适的中性或碱性蛋白酶的示例包括:
(a)枯草杆菌蛋白酶(EC 3.4.21.62),特别是WO2004067737、WO2015091989、WO2015091990、WO2015024739、WO2015143360、US 6,312,936 B1、US 5,679,630、US 4,760,025、DE102006022216A1、DE102006022224A1、WO2015089447、WO2015089441、WO2016066756、WO2016066757、WO2016069557、WO2016069563、WO2016069569中描述的来源于芽孢杆菌(诸如芽孢杆菌属、迟缓芽孢杆菌(B.lentus)、嗜碱芽孢杆菌(B.alkalophilus)、枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)、短小芽孢杆菌(B.pumilus)、吉氏芽孢杆菌(B.gibsonii)和秋叶氏芽孢杆菌(B.akibaii))的那些。
(b)胰蛋白酶型或胰凝乳蛋白酶型蛋白酶,诸如胰蛋白酶(例如源自猪或牛的胰蛋白酶),包括WO 89/06270中所述的镰孢菌蛋白酶和WO 05/052161和WO 05/052146中所述的来源于纤维单胞菌属(Cellumonas)的胰凝乳蛋白酶。
(c)金属蛋白酶,特别是WO 07/044993A2中所述的来源于解淀粉芽孢杆菌的那些;WO2014194032、WO2014194054和WO2014194117中所述的来源于芽孢杆菌属、短芽胞杆菌属(Brevibacillus)、热放线菌属(Thermoactinomyces)、杆菌属(Geobacillus)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、赖氨酸芽胞杆菌属(Lysinibacillus)或链霉菌属菌种的那些;WO2015193488中所述的来源于Kribella alluminosa的那些;以及WO2016075078中所述的来源于链霉菌属和溶杆菌属(Lysobacter)的那些。
(d)与在WO92/17577(Novozymes A/S)中所述的来自芽孢杆菌属TY145,NCIMB40339的枯草杆菌酶具有至少90%的同一性的蛋白酶,包括WO2015024739和WO2016066757中所述的该芽孢杆菌TY145枯草杆菌酶的变体。
特别优选的用于本发明组合物的另外的蛋白酶是亲本蛋白酶的变体,其中亲本蛋白酶表现出与SEQ ID NO:2具有至少90%,优选地至少95%,更优选地至少98%,甚至更优选地至少99%并且特别是100%的同一性,并且变体包含在相对于SEQ ID NO:2的一个或多个、或两个或更多个、或三个或更多个以下位置中的取代:
S3V、S9R、A13V、A15T、G20*、L21F、I35V、N60D、V66A、N74D、S85N/R、S97SE、S97AD、S97D/G、S99G/M/D/E、S101A、V102E/I、G116V/R、S126F/L、P127Q、S128A、S154D、G157S、Y161A、R164S、A188P、V199I、Q200C/E/I/K/T/V/W/L、Y203W、N212D、M216S/F、A222V、Q239R/F、T249R、N255D和L256E/N/Q/D
优选的蛋白酶包括与SEQ ID NO:2具有至少90%,优选地至少95%的同一性的那些,其包含以下突变:
S9R+A13V+A15T+l35V+N60D+Q239F;或
S9R+A15T+G20*+L21F+N60D+Q239N;或
S9R+A15T+V66A+S97G+A222V+Q239R+N255D;或
S9R+A15T+V66A+N74D+Q239R;或
S9R+A15T+V66A+N212D+Q239R;或
S99SE;或
S99AD;或
N74D+S85R+G116R+S126L+P127Q+S128A;或
N74D+S85R+G116R+S126L+P127Q+S128A+S182D+V238R;或
G116V+S126L+P127Q+S128A;或
S99M+G116V+S126L+P127Q+S128A。
合适的可商购获得的另外的蛋白酶包括以如下商品名由Novozymes A/S(Denmark)出售的那些: LiquanaseSavinaseSavinase Evity、Progress 系列(包括BlazeBlazeBlaze Pro)和以如下商品名由Dupont出售的那些: PurafectPurafect和Purafect以商品名和由Solvay Enzymes出售的那些;以及可从Henkel/Kemira获得的那些,即BLAP(序列示于US US 5,352,604的图29中,具有下列突变S99D+S101 R+S103A+V104I+G159S,下文称为BLAP)、BLAP R(具有S3T+V4I+V199M+V205I+L217D的BLAP)、BLAP X(具有S3T+V4I+V205I的BLAP)和BLAP F49(具有S3T+V4I+A194P+V199M+V205I+L217D的BLAP);以及来自Kao的KAP(具有突变A230V+S256G+S259N的嗜碱芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶)。
本发明产品中蛋白酶的优选含量包括约0.05mg至约10mg、更优选地约0.5mg至约7mg并且特别是约1mg至约6mg活性蛋白酶/g组合物。
淀粉酶
优选地,本发明的组合物可包含淀粉酶。合适的α-淀粉酶包括源自细菌或真菌的那些。包括经化学修饰或基因修饰的突变体(变体)。优选的碱性α-淀粉酶来源于芽孢杆菌(Bacillus)的菌株,诸如地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、嗜热脂肪芽胞杆菌(Bacillus stearothermophilus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)或其他芽孢杆菌属(Bacillus sp.),诸如芽孢杆菌属NCBI 12289、NCBI 12512、NCBI12513、DSM 9375(USP 7,153,818)DSM 12368、DSMZ号12649、KSM AP1378(WO 97/00324)、KSM K36或KSM K38(EP 1,022,334)。优选的淀粉酶包括:
变体α-淀粉酶,其中变体α-淀粉酶包含选自由以下组成的组的氨基酸取代:
i)在位置91处的突变和/或在处于α-淀粉酶TIM桶结构的基部的氨基酸残基处的突变,所述氨基酸残基被限定为残基6、7、40、96、98、100、229、230、231、262、263、285、286、287、288、322、323、324、325、362、363和364;
ii)在位置172处的突变和在位置288或324中的突变;和iii)Y364L
编号参考SEQ ID NO:3。
其它优选的淀粉酶包括:
(a)在WO 96/23873、WO00/60060、WO06/002643和WO2017/192657中描述的变体,特别是相对于WO06/002643中如SEQ ID NO.12所列的AA560酶在以下位置具有一个或多个取代的变体:
26、30、33、82、37、106、118、128、133、149、150、160、178、182、186、193、202、214、231、246、256、257、258、269、270、272、283、295、296、298、299、303、304、305、311、314、315、318、319、339、345、361、378、383、419、421、437、441、444、445、446、447、450、461、471、482、484,这些变体优选地还包含D183*和G184*缺失。
(b)表现出与WO06/002643中的SEQ ID No.4具有至少90%同一性的变体,来自芽孢杆菌属SP722的野生型酶,特别是在第183和184位具有缺失的变体,以及WO2000/60060、WO2011/100410和WO2013/003659中描述的变体,所述文献以引用方式并入本文。
(c)表现出与来自芽孢杆菌属707的野生型酶(US 6,093,562中的SEQ ID NO:7)具有至少95%同一性的变体,特别是包含以下突变中的一个或多个突变的那些:M202、M208、S255、R172和/或M261。优选地,所述淀粉酶包含M202L、M202V、M202S、M202T、M202I、M202Q、M202W、S255N和/或R172Q中的一个或多个。尤其优选的是包含M202L或M202T突变的那些。
(d)在WO 09/149130中描述的变体,优选表现出与WO 09/149130中的SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2(来自嗜热脂肪芽孢杆菌(Geobacillus Stearophermophilus)的野生型酶或其截短型式)至少90%的同一性的那些。
(e)表现出与WO2016091688中的SEQ ID NO:1具有至少89%同一性的变体,特别是在位置H183+G184处包含缺失并且还在第405位、第421位、第422位和/或第428位处包含一个或多个突变的那些。
(f)表现出与来自解凝乳类芽孢杆菌YK9的“PcuAmylα-淀粉酶”(WO2014099523中的SEQ ID NO:3)具有至少60%的氨基酸序列同一性的变体。
(g)表现出与来自噬细胞菌属(Cytophaga sp.)的“CspAmy2淀粉酶”(WO2014164777中的SEQ ID NO:1)具有至少60%的氨基酸序列同一性的变体。
(h)表现出与来自枯草芽孢杆菌的AmyE(WO2009149271中的SEQ ID NO:1)具有至少85%同一性的变体。
(i)表现出与来自芽孢杆菌属KSM-K38的野生型淀粉酶(登录号AB051102)具有至少90%同一性的变体。
(j)表现出与来自芽孢杆菌属的AAI10(WO2016180748中的SEQ ID NO:7)的成熟氨基酸序列具有至少90%,优选地至少95%,优选地至少98%同一性的变体。
(k)表现出与脂环酸芽孢杆菌属(Alicyclobacillus sp.)淀粉酶(WO2016180748中的SEQ ID NO:8)的成熟氨基酸序列具有至少80%同一性的变体。
优选地,淀粉酶为工程化酶,其中易于漂白氧化的氨基酸中的一个或多个已被不太易于氧化的氨基酸取代。具体地,优选的是甲硫氨酸残基被任何其他氨基酸取代。具体地,优选的是最易于氧化的甲硫氨酸被取代。优选地,在等同于WO06/002643中如SEQ IDNO.12所列在AA560中202的位置中的甲硫氨酸被取代。优选地,该位置处的甲硫氨酸被苏氨酸或亮氨酸、优选亮氨酸取代。
合适的可商购获得的α-淀粉酶包括 TERMAMYL STAINZYME 和(Novozymes A/S,Bagsvaerd,Denmark)、AT9000Biozym Biotech Trading GmbH Wehlistrasse 27b A-1200 Wien Austria、OPTISIZE HTPREFERENZ系列(包括PREFERENZ和PREFERENZ)、PURASTAR(DuPont.,Palo Alto,California)和(Kao,14-10Nihonbashi Kayabacho,1-chome,Chuo-ku Tokyo 103-8210,Japan)。在一个方面,合适的淀粉酶包括 和STAINZYME以及它们的混合物。
优选地,本发明的组合物包含至少0.01mg、优选地约0.05mg至约10mg、更优选地约0.1mg至约6mg、特别是约0.2mg至约5mg活性淀粉酶/g组合物。
优选地,本发明组合物的蛋白酶和/或淀粉酶为颗粒形式,所述颗粒包含按所述颗粒的重量计大于29%的硫酸钠,并且/或者硫酸钠和活性酶(蛋白酶和/或淀粉酶)的重量比介于3:1和100:1之间,或优选地介于4:1和30:1之间,或更优选地介于5:1和20:1之间。
晶体生长抑制剂
晶体生长抑制剂是可与碳酸钙晶体结合并防止物质(诸如霰石和方解石)进一步生长的材料。
有效的晶体生长抑制剂的示例包括膦酸盐、聚膦酸盐、菊粉衍生物、聚衣康酸均聚物和环状聚羧酸盐。
合适的晶体生长抑制剂可选自HEDP(1-羟基亚乙基1,1-二膦酸)、羧甲基菊粉(CMI)、三羧酸和环状羧酸盐。出于本发明的目的,术语羧酸盐涵盖阴离子形式和质子化羧酸形式两者。
环状羧酸盐包含至少两个,优选三个或优选至少四个羧酸根基团,并且环状结构基于单环或双环烷烃或杂环。合适的环状结构包括环丙烷、环丁烷、环己烷或环戊烷或环庚烷、双环庚烷或双环辛烷和/或四氢呋喃。一种优选的晶体生长抑制剂是环戊烷四羧酸盐。
在环的3D结构的同一侧或“顺式”位置上具有至少75%,优选100%羧酸根基团的环状羧酸盐优选地用于本文中。
优选的是,位于环的同一侧的两个羧酸根基团在直接相邻或“邻位”的位置。
优选的晶体生长抑制剂包括HEDP、三羧酸、四氢呋喃四羧酸(THFTCA)和环戊烷四羧酸(CPTCA)。THFTCA优选地为2c,3t,4t,5c-构型,并且CPTCA为顺式,顺式,顺式,顺式-构型。可用于本文的尤其优选的晶体生长抑制剂是HEDP。
晶体生长抑制剂的量按组合物的重量计优选为约0.01%至约10%,具体地为约0.02%至约5%,并且具体地为0.05%至3%。
金属护理剂
金属护理剂可防止或减少金属(包括铝、不锈钢和有色金属,诸如银和铜)的失泽、腐蚀或氧化。优选地,本发明的组合物包含按产品的重量计0.1%至5%、更优选0.2%至4%并且尤其是0.3%至3%的金属护理剂,优选地,该金属护理剂为苯并***(BTA)。
玻璃护理剂
玻璃护理剂可在盘碟洗涤过程中保护玻璃物品的外观。优选地,本发明的组合物包含按组合物的重量计0.1%至5%、更优选0.2%至4%并且尤其是0.3%至3%的金属护理剂,优选地,该玻璃护理剂为含锌材料,尤其是水锌矿。其他合适的玻璃护理剂为聚乙烯亚胺(PEI)。尤其优选的PEI为由BASF提供的FG。
本发明的自动盘碟洗涤组合物优选具有在20℃下以1%重量/体积水溶液在蒸馏水中测得的约9至约12、更优选约10至小于约11.5并且尤其是约10.5至约11.5的pH。
本发明的自动盘碟洗涤组合物在pH为9.5下优选具有约10至约20、更优选约12至约18的储备碱度,如在20℃下以100克产品在NaOH中测得的。
本发明的优选的自动盘碟洗涤组合物包含:
i)按组合物的重量计10%至20%的漂白剂,优选过碳酸钠;
ii)TAED;
iii)任选但优选按组合物的重量计5%至50%的无机助洗剂,优选碳酸钠;
iv)任选但优选按组合物的重量计2%至10%的非离子表面活性剂;
v)其它任选成分,包括:晶体生长抑制剂(优选HEDP)和玻璃护理剂。
本发明的优选的自动盘碟洗涤组合物包含:
i)按组合物的重量计10%至20%的漂白剂,优选过碳酸钠;
ii)锰漂白催化剂,优选选自由以下组成的组的漂白催化剂:1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me-TACN)和1,2,4,7-四甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me/Me-TACN)和任选地TAED;
iii)任选但优选按组合物的重量计5%至50%的碳酸钠;
iv)任选但优选按重量计1%至10%的硅酸钠;
v)任选但优选按组合物的重量计2%至10%的非离子表面活性剂;
vi)任选但优选玻璃护理剂。
本发明的组合物的蛋白酶也可用于衣物洗涤剂中。
实施例
实施例1
评估本发明的蛋白酶变体相对于亲本蛋白酶BG46+S039E-S099R-S126A-D127E-F128G(描述于EP 3 502 244 A1,表2,第22页,第40行)的活性、蛋黄去除和焦糖布丁去除。
蛋白酶活性
通过测量AAPF-pNA合成肽底物的水解来测试BG46枯草杆菌蛋白酶变体的蛋白酶活性。
对于AAPF测定,使用的试剂溶液为:100mM Tris pH 8.6、10mM CalCl2、0.005%-80(Tris/Ca缓冲液)和160mM处于DMSO中的suc-AAPF-pNA(suc-AAPF-pNA储备溶液)(Sigma:S-7388)。为了制备工作溶液,将1mL suc-AAPF-pNA储备溶液添加至100mLTris/Ca缓冲液并混合。将酶样品添加至含有1mg/mL suc-AAPF-pNA工作溶液的微量滴定板(MTP),并且使用SpectraMax读板机在RT下以动力学模式在405nm处测定3-5min内的活性。蛋白酶活性以mOD/min表示。
Tris-EDTA中的稳定性测定
通过在应力缓冲液中稀释BG46枯草杆菌蛋白酶变体并且在热温育步骤之前和之后使用上述AAPF测定测量变体的蛋白水解活性来测量本文所述变体的稳定性。选择热温育步骤的温度和持续时间,使得参考蛋白酶显示出约15-30%的残余活性。将样品在384孔热循环仪中在57℃下温育5min。在Tris-EDTA(50mM Tris pH9;5mM EDTA;0.005%吐温80)缓冲条件下测量稳定性。通过将枯草杆菌蛋白酶变体的残余活性除以亲本蛋白酶BG46+S039E-S099R-S126A-D127E-F128G的残余活性来获得稳定性PI。
自动盘碟洗涤清洁测定
焦糖布丁污渍:通过使用如本文所述由CFT,Vlaardingen,Netherlands制造并标记为DM10c的定制三聚氰胺盘碟洗涤机监测器(瓷砖),测试BG46枯草杆菌蛋白酶变体对焦糖布丁污渍的清洁性能。该研究中使用的DM10c瓷砖使用与用于制备可商购获得的DM10监测器(焦糖布丁Debic.com产品)相同的污渍制备,但是在140℃而不是150℃下烘焙2小时。
将DM10c三聚氰胺瓷砖用作封盖,并紧紧压在微量滴定板(MTP)上。将3g/L的ADW洗涤剂组合物调节至374ppm的水硬度,并将每个酶样品添加至MTP,然后将三聚氰胺瓷砖封盖附接到MTP。MTP的体积容量以及因此添加到其中的溶液的体积可以变化,其中应将最小体积的溶液添加到MTP中,该最小体积的溶液使得溶液和污渍表面之间能够接触。在该实施例中,将300μL体积的含洗涤剂的酶添加到铝96孔MTP的每个孔中。除非另外指明,否则将MTP在Infors热振荡器中在40℃下以250rpm温育45min。温育后,将瓷砖从MTP取走,用自来水简单冲洗并风干。
通过拍摄板的照片并使用定制软件测量每个污渍区域的RGB值来定量污渍去除。通过将RGB值用于下式来计算经洗涤的瓷砖的污垢去除百分比(%SRI)值:
%SRI=(ΔE/ΔE初始)*100
其中ΔE=SQR((R后-R前)2+(G后-G前)2+(B后-B前)2)
其中ΔE初始=SQR((R白-R前)2+(G白-G前)2+(B白-B前)2)
通过从每个样品值减去空白对照(无酶)的值获得清洁性能(下文称为“减去了空白的清洁”)。对于每种条件和BG46枯草杆菌蛋白酶变体,通过将减去空白的清洁除以相同浓度下的亲本蛋白酶的清洁来计算性能指数(PI)。亲本蛋白酶PI的值由亲本蛋白酶的标准曲线确定,该标准曲线包括在测试中并且拟合到朗缪尔拟合或希尔S曲线拟合。
蛋黄污渍:在预冲洗或未冲洗的样本上测量了BG46枯草杆菌蛋白酶变体对蛋黄微样本(PAS-38,Center for Testmaterials BV,Vlaardingen,Netherlands)的清洁性能。为了制备冲洗的PAS38样本,将pH 11的180μl 10mM CAPS缓冲液添加至含有PAS38微样本的MTP。将板密封并在iEMS培养箱中在60℃和1100rpm振荡下温育30min。在该温育之后,去除缓冲液,并且用去离子水冲洗样本以去除任意残余缓冲液。然后在用于性能测定之前将板风干。在添加酶之前,用处于374ppm水硬度的3g/l ADW洗涤剂溶液填充微样本板,其中最终酶浓度介于0.05与10ppm之间。
在40℃下将PAS-38样本与洗涤剂和酶温育30分钟之后,将等分试样转移到空MTP,并且使用SpectraMax读板机在405nm处读取吸光度。通过从每个样品值减去空白对照(无酶)的值获得吸光度结果(下文称为“减去了空白的吸光度”)。对于每种条件和BG46枯草杆菌蛋白酶变体,通过将减去空白的吸光度除以相同浓度下的BG46+S039E-S099R-S126A-D127E-F128G亲本蛋白酶的吸光度来计算性能指数(PI)。
自动盘碟洗涤清洁组合物
如下所列使用各种清洁组合物。使用以下组合物以括号中所示的最终浓度进行自动盘碟洗涤(ADW)清洁测定:GSM-B洗涤剂(3g/L)(GSM-B不含磷酸盐的ADW洗涤剂,无酶购自WFK Testgewebe GmbH,Brüggen,Deutschland(www.testgewebe.de),组成示于表1)和MGDA洗涤剂(3g/L)(组成示于表2)。
实施例2
自动盘碟洗涤中的蛋白酶清洁性能
表1:自动盘碟洗涤(ADW)组合物
以下ADW组合物不含酶。
过碳酸盐 过碳酸钠
含磺酸基团的聚合物 Acusol 588
漂白催化剂 MnTACN(1,4,7-三氮杂环壬烷锰)
表2:蛋白酶的添加
组合物A | ADW清洁组合物+32mg活性参考蛋白酶 |
组合物B | ADW清洁组合物+32mg本发明的活性蛋白酶A |
组合物C | ADW清洁组合物+32mg本发明的活性蛋白酶B |
参考蛋白酶不在本发明的范围内。它是野生型吉氏芽孢杆菌(B.gibsonii)BG46蛋白酶SEQ ID NO:1的变体,其具有以下突变:A37T-S39E-I43V-A47V-P54T-T56Y-I80V-N85S-E87D-S99R-T114Q-S126A-D127E-F128G-N242D,如EP3502244B1,表2,第21页,第44至44行中所述。
蛋白酶A是本发明的变体。它是野生型吉氏芽孢杆菌(B.gibsonii)BG46蛋白酶SEQID NO:1的变体,其具有以下突变:S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-N198A-M211Q-N212Q
蛋白酶B是本发明的变体。它是野生型吉氏芽孢杆菌(B.gibsonii)BG46蛋白酶SEQID NO:1的变体,其具有以下突变:S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-N198G-M211Q
清洁性能方法:使用Miele型号GSL2来进行混合蛋白酶清洁
对由Center For Testmaterials(CFT)BV.Stoomloggerweg 11,3133 KTVlaardingen,the Netherlands供应的混合蛋白酶瓷砖(DM22、DM23)评估如表1中所述的自动盘碟洗涤(ADW)清洁组合物的ADW清洁性能。将表2中描述的一个剂量的洗涤剂组合物16.21g(组合的固体和液体组分)和酶添加剂在每个循环的分配器抽屉的开口处添加到每个自动盘碟洗涤机。
在Miele自动洗碗机型号GSL2中,在45℃(8min保持时间,55℃冲洗),21gpg水硬度下洗涤混合蛋白酶CFT瓷砖。如表3中所述,将碎石污垢作为混合污垢组合物添加到每个处理中。
在关闭机器门之前,将CFT瓷砖添加到机器(每个瓷砖的两个平行测定,即每次处理两个内部平行测定)。然后启动机器,随着分配器抽屉打开,将包含酶添加物的洗涤剂组合物与50g混合污垢罐一起投到每个机器。再重复三次以产生每次处理四个外部平行测定和两个内部平行测定。
表3.碎石污垢–混合污垢组合物
在本文提供的混合蛋白酶瓷砖上的每个示例性ADW组合物的清洁性能数据是从包含每个处理的四个外部平行测定和两个内部平行测定产生的八个平行测定的平均值。将组合物A(含有参考蛋白酶)的清洁性能视为参考,并与组合物B(本发明的蛋白酶A)和组合物C(本发明的蛋白酶B)相比。使用图像分析来分析污渍,其中下文所呈现的结果计算为污渍去除百分比,其中:0=无去除,100=完全去除。即污渍去除指数(SRI)。
下表4中所示的结果表示为污渍去除指数。
表4:组合物A相对于组合物B和C在混合蛋白酶污渍上的清洁性能
清洁性能(SRI) | 组合物A | 组合物B | 组合物C |
DM22双蛋黄 | 15.9 | *22.3 | *22.8 |
DM23 1.5X蛋黄 | 29.9 | *41.6 | *41.1 |
*数据的统计评估显示组合物A与组合物B和C之间的95%置信度的显著差异
蛋白酶清洁是洗涤后ADW清洁的量度。从以上表4中的结果可以看出,与包含参考蛋白酶的组合物A相比,包含本发明的蛋白酶A的组合物B和包含本发明的蛋白酶B的组合物C两者的蛋白质清洁显著改善。
实施例3
自动盘碟洗涤中的蛋白酶清洁性能
表1:自动盘碟洗涤(ADW)组合物
以下ADW组合物不含酶。
表2:蛋白酶和淀粉酶的添加
ExcellaseTM由DuPont供应
蛋白酶A是本发明的变体。它是野生型吉氏芽孢杆菌(B.gibsonii)BG46蛋白酶SEQID NO:1的变体,其具有以下突变:S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-N198A-M211Q-N212Q
蛋白酶B是本发明的变体。它是野生型吉氏芽孢杆菌(B.gibsonii)BG46蛋白酶SEQID NO:1的变体,其具有以下突变:S039E-N074D-S099R-S126A-D127E-F128G-N198G-M211Q
清洁性能方法:使用Miele型号GSL2来进行混合蛋白酶清洁
对由Center For Testmaterials(CFT)BV.Stoomloggerweg 11,3133 KTVlaardingen,the Netherlands供应的混合蛋白酶瓷砖(DM22、DM32、DM33、DM93)评估如表1中所述的自动盘碟洗涤(ADW)洗涤剂组合物的ADW清洁性能。将表2中描述的一个剂量的洗涤剂组合物17.32g(组合的固体和液体组分)和酶添加剂在每个循环的分配器抽屉的开口处添加到每个自动盘碟洗涤机。
在Miele自动洗碗机型号GSL2中,在45℃(8min保持时间,55℃冲洗),21gpg水硬度下洗涤混合蛋白酶CFT瓷砖。如表3中所述,将碎石污垢作为混合污垢组合物添加到每个处理中。
在关闭机器门之前,将CFT瓷砖添加到机器(每个瓷砖的两个平行测定,即每次处理两个内部平行测定)。然后启动机器,随着分配器抽屉打开,将包含酶添加物的洗涤剂组合物与50g混合污垢罐一起投到每个机器。再重复三次以产生每次处理四个外部平行测定和两个内部平行测定。
表3.碎石污垢–混合污垢组合物
在本文提供的混合蛋白酶瓷砖上的每个示例性ADW组合物的清洁性能数据是从包含每个处理的四个外部平行测定和两个内部平行测定产生的八个平行测定的平均值。将组合物A(含有BlazeTM和Plus)的清洁性能视为参考1并将组合物B(含有ExcellaseTM和Plus)视为参考2,并与组合物C(本发明的蛋白酶A+Plus)和组合物D(本发明的蛋白酶B+Plus)相比。使用图像分析来分析污渍,其中下文所呈现的结果计算为污渍去除百分比,其中:0=无去除,100=完全去除。即污渍去除指数(SRI)。
下表4中所示的结果表示为污渍去除指数。
表4:组合物A相对于组合物C和D在混合蛋白酶污渍上的清洁性能
*数据的统计评估显示组合物A与组合物C和D之间的95%置信度的显著差异
表5:组合物B相对于组合物C和D在混合蛋白酶污渍上的清洁性能
清洁性能(SRI) | 组合物B | 组合物C | 组合物D |
DM22双蛋黄 | 14.7 | *26.3 | *27.8 |
DM32双蛋黄和牛奶 | 32.0 | *59.4 | *59.4 |
DM33 1.5X蛋黄和牛奶 | 48.4 | *97.7 | *97.9 |
DM93双切碎肉 | 46.8 | *56.5 | *57.5 |
*数据的统计评估显示组合物B与组合物C和D之间的95%置信度的显著差异
蛋白酶清洁是洗涤后ADW清洁的量度。从以上表4和表5中的结果可以看出,与包含蛋白酶的组合物A和包含ExcellaseTM蛋白酶的组合物B相比,包含本发明的蛋白酶A的组合物C和包含本发明的蛋白酶B的组合物D两者的蛋白质清洁显著改善。包含ExcellaseTM和的两种组合物不属于本发明。
本文所公开的量纲和值不应理解为严格限于所引用的精确数值。相反,除非另外指明,否则每个此类量纲旨在表示所述值以及围绕该值功能上等同的范围。例如,公开为“40mm”的量纲旨在表示“约40mm”。
Claims (15)
1.一种不含磷酸盐的自动盘碟洗涤清洁组合物,其包含蛋白酶,其中所述蛋白酶与SEQID NO:1的氨基酸序列或与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少80%,优选地至少85%,更优选地至少90%并且特别是至少96%的同一性,并且其中所述蛋白酶包含选自由以下组成的组的氨基酸取代:
(i)选自由以下组成的组的至少两个氨基酸取代:X198G/A/K/L/Q/R/T/V/S/L、X207Q、X211Q/N和X212Q,其与选自由以下组成的组的至少三个氨基酸取代组合:X039E、X074D、X099R、X126A、X127E和X128G;或
(ii)X039E-X074D-X099R-X116R-X126A-X127E-X128G-X211Q;
X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X211N;
X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X211Q;
X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X207Q;或
(iii)(i)和(ii)的任意蛋白酶,其还包含选自X242D和X256E的至少一个氨基酸取代;或
(iv)X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X256E;
使用SEQ ID NO:2编号。
2.根据权利要求1所述的组合物,其中所述蛋白酶包含选自以下的氨基酸取代:
X198G/A/K/L/Q/R/T/V/S/L-X211Q,其与选自由以下组成的组的取代组合:
a.X039E-X074D-X099R
b.X039E-X074D-X126A
c.X039E-X074D-X127E
d.X039E-X074D-X128G
e.X074D-X099R-X126A
f.X074D-X099R-X127E
g.X074D-X099R-X128G
h.X074D-X126A-X127E
i.X074D-X127E-X128G
j.X099R-X126A-X127E
k.X099R-X127E-X128G
l.X126A-X127E-X128G
m.X039E-X074D-X099R-X126A
n.X039E-X074D-X099R-X127E
o.X039E-X074D-X099R-X128G
p.X039E-X126A-X127E-X128G
q.X074D-X099R-X126A-X127E
r.X074D-X099R-X127E-X128G
s.X074D-X126A-X127E-X128G
t.X099R-X126A-X127E-X128G
u.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E
v.X039E-X074D-X099R-X126A-X128G
w.X039E-X099R-X126A-X127E-X128G
x.X039E-X074D-X126A-X127E-X128G
y.X074D-X099R-X126A-X127E-X128G;和
z.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G。
3.根据权利要求1所述的组合物,其中所述蛋白酶包含选自以下的氨基酸取代:
X198G/A/K/L/Q/R/T/V/S/L-X212Q,其与选自由以下组成的组的取代组合:
a.X039E-X074D-X099R
b.X039E-X074D-X126A
c.X039E-X074D-X127E
d.X039E-X074D-X128G
e.X074D-X099R-X126A
f.X074D-X099R-X127E
g.X074D-X099R-X128G
h.X074D-X126A-X127E
i.X074D-X127E-X128G
j.X099R-X126A-X127E
k.X099R-X127E-X128G
l.X126A-X127E-X128G
m.X039E-X074D-X099R-X126A
n.X039E-X074D-X099R-X127E
o.X039E-X074D-X099R-X128G
p.X039E-X126A-X127E-X128G
q.X074D-X099R-X126A-X127E
r.X074D-X099R-X127E-X128G
s.X074D-X126A-X127E-X128G
t.X099R-X126A-X127E-X128G
u.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E
v.X039E-X074D-X099R-X126A-X128G
w.X039E-X099R-X126A-X127E-X128G
x.X039E-X074D-X126A-X127E-X128G
y.X074D-X099R-X126A-X127E-X128G;和
z.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G。
4.根据权利要求1所述的组合物,其中所述蛋白酶包含选自以下的氨基酸取代:
X211Q/N-X212Q,其与选自由以下组成的组的取代组合:
a.X039E-X074D-X099R
b.X039E-X074D-X126A
c.X039E-X074D-X127E
d.X039E-X074D-X128G
e.X074D-X099R-X126A
f.X074D-X099R-X127E
g.X074D-X099R-X128G
h.X074D-X126A-X127E
i.X074D-X127E-X128G
j.X099R-X126A-X127E
k.X099R-X127E-X128G
l.X126A-X127E-X128G
m.X039E-X074D-X099R-X126A
n.X039E-X074D-X099R-X127E
o.X039E-X074D-X099R-X128G
p.X039E-X126A-X127E-X128G
q.X074D-X099R-X126A-X127E
r.X074D-X099R-X127E-X128G
s.X074D-X126A-X127E-X128G
t.X099R-X126A-X127E-X128G
u.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E
v.X039E-X074D-X099R-X126A-X128G
w.X039E-X099R-X126A-X127E-X128G
x.X039E-X074D-X126A-X127E-X128G
y.X074D-X099R-X126A-X127E-X128G;和
z.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G。
5.根据权利要求1所述的组合物,其中所述蛋白酶包含选自以下的氨基酸取代:
X198G/A/K/L/Q/R/T/V/S/L-X211Q-X212Q,其与选自由以下组成的组的取代组合:
a.X039E-X074D-X099R
b.X039E-X074D-X126A
c.X039E-X074D-X127E
d.X039E-X074D-X128G
e.X074D-X099R-X126A
f.X074D-X099R-X127E
g.X074D-X099R-X128G
h.X074D-X126A-X127E
i.X074D-X127E-X128G
j.X099R-X126A-X127E
k.X099R-X127E-X128G
l.X126A-X127E-X128G
m.X039E-X074D-X099R-X126A
n.X039E-X074D-X099R-X127E
o.X039E-X074D-X099R-X128G
p.X039E-X126A-X127E-X128G
q.X074D-X099R-X126A-X127E
r.X074D-X099R-X127E-X128G
s.X074D-X126A-X127E-X128G
t.X099R-X126A-X127E-X128G
u.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E
v.X039E-X074D-X099R-X126A-X128G
w.X039E-X099R-X126A-X127E-X128G
x.X039E-X074D-X126A-X127E-X128G
y.X074D-X099R-X126A-X127E-X128G;和
z.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G。
6.根据权利要求1所述的组合物,其中所述蛋白酶包含选自以下的氨基酸取代:
X207Q-X211Q/N,其与选自由以下组成的组的取代组合:
a.X039E-X074D-X099R
b.X039E-X074D-X126A
c.X039E-X074D-X127E
d.X039E-X074D-X128G
e.X074D-X099R-X126A
f.X074D-X099R-X127E
g.X074D-X099R-X128G
h.X074D-X126A-X127E
i.X074D-X127E-X128G
j.X099R-X126A-X127E
k.X099R-X127E-X128G
l.X126A-X127E-X128G
m.X039E-X074D-X099R-X126A
n.X039E-X074D-X099R-X127E
o.X039E-X074D-X099R-X128G
p.X039E-X126A-X127E-X128G
q.X074D-X099R-X126A-X127E
r.X074D-X099R-X127E-X128G
s.X074D-X126A-X127E-X128G
t.X099R-X126A-X127E-X128G
u.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E
v.X039E-X074D-X099R-X126A-X128G
w.X039E-X099R-X126A-X127E-X128G
x.X039E-X074D-X126A-X127E-X128G
y.X074D-X099R-X126A-X127E-X128G;和
z.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G。
7.根据权利要求1所述的组合物,其中所述蛋白酶包含氨基酸取代X207Q-X212Q,其与选自由以下组成的组的取代组合:
a.X039E-X074D-X099R
b.X039E-X074D-X126A
c.X039E-X074D-X127E
d.X039E-X074D-X128G
e.X074D-X099R-X126A
f.X074D-X099R-X127E
g.X074D-X099R-X128G
h.X074D-X126A-X127E
i.X074D-X127E-X128G
j.X099R-X126A-X127E
k.X099R-X127E-X128G
l.X126A-X127E-X128G
m.X039E-X074D-X099R-X126A
n.X039E-X074D-X099R-X127E
o.X039E-X074D-X099R-X128G
p.X039E-X126A-X127E-X128G
q.X074D-X099R-X126A-X127E
r.X074D-X099R-X127E-X128G
s.X074D-X126A-X127E-X128G
t.X099R-X126A-X127E-X128G
u.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E
v.X039E-X074D-X099R-X126A-X128G
w.X039E-X099R-X126A-X127E-X128G
x.X039E-X074D-X126A-X127E-X128G
y.X074D-X099R-X126A-X127E-X128G;和
z.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G。
8.根据权利要求1所述的组合物,其中所述蛋白酶包含选自X207Q-X211Q/N-X212Q的氨基酸取代,其与选自由以下组成的组的取代组合:
a.X039E-X074D-X099R
b.X039E-X074D-X126A
c.X039E-X074D-X127E
d.X039E-X074D-X128G
e.X074D-X099R-X126A
f.X074D-X099R-X127E
g.X074D-X099R-X128G
h.X074D-X126A-X127E
i.X074D-X127E-X128G
j.X099R-X126A-X127E
k.X099R-X127E-X128G
l.X126A-X127E-X128G
m.X039E-X074D-X099R-X126A
n.X039E-X074D-X099R-X127E
o.X039E-X074D-X099R-X128G
p.X039E-X126A-X127E-X128G
q.X074D-X099R-X126A-X127E
r.X074D-X099R-X127E-X128G
s.X074D-X126A-X127E-X128G
t.X099R-X126A-X127E-X128G
u.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E
v.X039E-X074D-X099R-X126A-X128G
w.X039E-X099R-X126A-X127E-X128G
x.X039E-X074D-X126A-X127E-X128G
y.X074D-X099R-X126A-X127E-X128G;和
z.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G。
9.根据权利要求1所述的组合物,其中所述蛋白酶包含选自由以下组成的组的氨基酸取代:
a.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198G-X211Q
b.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198A-X211Q
c.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198G-X212Q
d.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X211Q-X212Q
e.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198A-X211Q-X212Q
f.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198G-X211Q-X212Q
g.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X211N
h.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X211N-X212Q
i.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X211N-X212Q-X256E
j.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X211N-X256E
k.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X211Q
l.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X211Q-X212Q-X256E
m.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X211Q-X256E
n.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198A-X211Q-X256E
o.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198G-X211Q-X256E
p.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198K-X211Q-X212Q
q.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198L-X211Q-X212Q
s.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198Q-X211Q-X212Q
t.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198R-X211Q-X212Q
u.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198T-X211Q-X212Q
v.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198V-X211Q-X212Q
w.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X212Q-X256E
x.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X256E
y.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X207Q
z.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X207Q-X211N
aa.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X207Q-X211N-X212Q
bb.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X207Q-X211N-X212Q-X256E
cc.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X207Q-X211N-X256E
dd.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X207Q-X211Q
ee.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X207Q-X211Q-X212Q
ff.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X207Q-X211Q-X212Q-X256E
gg.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X207Q-X212Q
hh.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X207Q-X212Q-X256E
ii.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X207Q-X256E
jj.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198S-X211Q
kk.X039E-X074D-X099R-X126A-X127E-X128G-X198L-X211Q。
10.根据前述权利要求中任一项所述的组合物,其中所述蛋白酶与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少80%,优选地至少85%,更优选地至少90%,更优选地至少95%并且特别是至少96%的同一性,并且在位置39、74、99、116、126、127、128、198、207、211、212、242和256中的起始氨基酸X分别为S、N、S、N、S、D、F、N、R、M、N、N和Q;或者
其中所述蛋白酶与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少80%,优选地至少85%,更优选地至少90%,更优选地至少95%并且特别是至少96%的同一性,并且在位置39、74、99、116、126、127、128、198、207、211、212、242和256中的起始氨基酸X分别为P、N、S、G、S、P、S、N、T、L、N、N和L。
11.根据前述权利要求中任一项所述的组合物,其包含变体α-淀粉酶,其中所述变体α-淀粉酶包含选自由以下组成的组的一个或多个氨基酸取代:
i)在位置91处的突变和/或在处于α-淀粉酶TIM桶结构的基部的氨基酸残基处的突变,所述氨基酸残基被限定为残基6、7、40、96、98、100、229、230、231、262、263、285、286、287、288、322、323、324、325、362、363和364;
ii)在位置172处的突变和在位置288或324中的突变;和
iii)Y364L,编号参考SEQ ID NO:3。
12.根据前述权利要求中任一项所述的组合物,其包含按所述组合物的重量计10%至50%的有机络合剂体系。
13.根据前述权利要求中任一项所述的组合物,其包含漂白体系,其中所述漂白体系包含按所述组合物的重量计超过10%的漂白剂和漂白活化剂和/或漂白催化剂。
14.根据前述权利要求所述的组合物,其中所述漂白催化剂是选自由以下组成的组的锰漂白催化剂:1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me-TACN)、1,2,4,7-四甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me/Me-TACN)以及它们的混合物。
15.一种在盘碟洗涤机中洗涤脏污盘碟的方法,所述方法包括以下步骤:
i)提供所述脏污盘碟;
ii)使用长时间热程序,使主洗涤循环在至少40℃的温度下持续超过15分钟;
iii)用根据前述权利要求中任一项所述的清洁组合物处理所述盘碟;以及
iv)任选地,冲洗所述盘碟。
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