CN114568693A - 一种赤小豆提取物及其在对抗肥胖中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种赤小豆提取物及其在对抗肥胖中的应用,属于减肥食品技术领域。食用本发明水提法制备的赤小豆提取物,可对高脂饮食小鼠肠道菌群有重要影响,通过赤小豆提取物调控高脂饮食小鼠体内肠道菌群,降低体脂率,控制体重;同时为HFD诱导的相关疾病的防控及其机制研究提供理论参考。
Description
技术领域
本发明属于减肥食品技术领域,具体涉及一种赤小豆提取物在对抗肥胖中的应用。
背景技术
随着经济的发展,人们生活水平的提高,生活方式和饮食结构发生改变, HFD(高脂饮食)的摄入量逐年增加。但过量的HFD可增加肥胖及相关疾病的发生几率,例如脑损伤、心血管疾病、非酒精性脂肪肝及结肠癌等,所以建立有效预防及治疗措施是目前有待解决的问题。
但现有的治疗方法以药物为主,随着长时间摄入会引起不同的副作用。
因此,如何提供一种赤小豆提取物及其在对抗肥胖中的应用是本领域亟待解决的问题。
发明内容
本发明公开了一种赤小豆提取物及其在对抗肥胖中的应用。
赤小豆具有抗氧化、降糖和降脂等作用,具有发展成为改善代谢异常的功能性食品的潜力。因此,本实验拟以赤小豆提取物作用的HFD小鼠为研究对象,通过检测小鼠体脂率和肠道菌群等指标的变化,探讨赤小豆提取物对HFD小鼠肠道菌群的影响,以期为HFD诱导的相关疾病的防控及其机制研究提供理论参考。
为了实现上述目的,本发明采用如下技术方案:
一种赤小豆提取物,其制备步骤如下:
将赤小豆与蒸馏水按100g/L的比例浸泡6-12h,沸水煮豆1-2h,转小火煮豆至豆沙状即可,得赤小豆提取物。
优选的,所述沸水煮豆的功率为2200瓦;
优选的,所述小火煮豆的功率为800-1000瓦;
一种减肥代餐产品,包括:70%餐食和30%赤小豆提取物;
优选的,步骤如下:
将赤小豆与蒸馏水按100g/L的比例浸泡12-24h,小火煮至豆沙状,得赤小豆提取物,趁热将赤小豆提取物按比例加入餐食中,烘干后,得减肥食品;
优选的,所述烘干的温度为75℃;
优选的,所述烘干的时间为12h。
综上所述,本发明公开了一种赤小豆提取物及其在对抗肥胖中的应用。食用本发明水提法制备的赤小豆提取物,可对高脂饮食小鼠肠道菌群F/B比值下降等重要影响,通过赤小豆提取物调控高脂饮食小鼠体内肠道菌群,降低体脂率,控制体重;同时为HFD诱导的相关疾病的防控及其机制研究提供理论参考。
附图说明
图1:实验技术路线;
图2:小鼠的体脂率;ND为正常饲料组,HD为高脂饲料组,NDABTE为赤小豆饲料组,;HDABTE为赤小豆+高脂饲料组;
图3:小鼠的Lee’s指数;ND为正常饲料组,HD为高脂饲料组,NDABTE为赤小豆饲料组,HDABTE为赤小豆+高脂饲料组;
图4:各样品OTU个数分布图;ND1-3为正常饲料组,HD1-3为高脂饲料组, NDABTE1-3为赤小豆饲料组,HDABTE1-3为赤小豆+高脂饲料组;
图5 :OTU丰度Venn图;ND为正常饲料组,HD为高脂饲料组,NDABTE为赤小豆饲料组,HDABTE为赤小豆+高脂饲料组;
图6 :ND的LDA评分图;
图7 :ND和NDABTE的LDA评分图;
图8 :HDABTE和ND的LDA评分图;
图9:四组样品科水平--物种丰度聚类热图。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实验动物与饲料
表1实验动物与饲料
实验试剂
表2实验试剂
实验仪器及设备
表3实验仪器及设备
数据统计分析
本实验中,数值用平均数±标准误(mean±SEM)表示,体重、体脂率和 Lee’s指数用GraphPad Prism 5统计分析软件进行分析;组间差异显著性采用 one-way analysis ofvariance(ANOVA),Dunnett's进行多重比较检验;OTU使用 Usearch软件对Reads在97.0%的相似度水平下进行聚类、获得;以Silva为参考数据库使用朴素贝叶斯分类器对特征序列进行分类学注释;p<0.05表示差异具有统计学意义。
实施例1
赤小豆提取物的提取(水提法):购买的赤小豆用清水清洗干净,将赤小豆与蒸馏水按300g:3L比例浸泡12h,小火煮制至豆沙状,获得赤小豆提取物;随后,趁热将赤小豆提取物按比例加入全价饲料中,置于75℃鼓风干燥机中烘干12h后,保存在-20℃备用。
28只、6周龄ICR雄鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司,饲养于恒温湿(温度22±1℃,湿度50-60%)、12h/12h昼夜交替的(每天上午7:00开灯,下午19:00关灯)环境。将小鼠随机分为4组,每组7只,适应一周后,开始正式实验,分别为正常饲料组(NormalDiet,ND)、高脂饲料组(20.5%HFD,HD)、赤小豆饲料组(30%ABTE,NDABTE,实验第1周到第6周饲喂正常饲料;第7 周到第10周饲喂赤小豆饲料)和赤小豆+高脂饲料组(20.5%HFD+30%ABTE, HDABTE,实验第1周到第6周饲喂高脂饲料;第7周到第10周饲喂高脂+赤小豆饲料)。实验共进行10周,期间小鼠自由采食饮水,每天记录食物消耗量,每周定时称量体重。技术路线如图1所示。结果如表4所示。
表4小鼠的体重(g)
注:第一周表示实验进行第1周,第二周表示实验进行第2周,……,第十周实验进行第10周
如表4结果所示,与ND组相比,各组间体重均没有显著变化(p>0.05)。
实施例2样品采集
(1)实验进行至10周末,每组小鼠各固定3只,在无菌鼠笼内采集新鲜粪样,置于无菌1.5mL PE管中;每个待测样品200mg左右,收集后立即置于液氮速冻后,保存于-80℃保存待测。
(2)小鼠禁食12h后对小鼠进行称重并测量其体长,计算小鼠Lee’s指数。
(3)小鼠眼球采血,分离血清;颈椎脱臼处死后,在冰浴上将小鼠的颅骨打开,快速分离下丘脑组织;同时分离小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肾脏(双侧),称重并计算脏器指数;剥离出每组小鼠腹腔内及睾丸等组织附近的脂肪,称量脂肪组织的湿重,计算体脂率。
体脂率=[脂肪质量(g)/体重(g)]×100%
结果如图2、图3所示。如图2结果显示,HD组的体脂率显著高于ND组 (p<0.05),但是NDABTE组和HDABTE组的体脂率与ND组相比没有显著性差异;如图3结果所示,HD组的Lee’s指数显著高于ND组(p<0.01),但是NDABTE 组和HDABTE组的Lee’s指数与ND组相比没有显著性差异。
实施例3 16S rDNA基因测序
用新鲜粪便样提取总DNA,16S rDNA基因高通量测序分析小鼠肠道菌群种类及其含量。以微生物16S rDNA的基因为靶点,使用Power Soil DNA分离试剂盒(PowerDNAIsolation Kit)从小鼠粪便样品中提取DNA,利用提供的Power Bead管进行20min打珠;样品经两步PCR扩增后,进行质量控制。
具体实验步骤如下:
首先,第一阶段PCR采用细菌16S rRNA引物515F和806R(16S区V 4引物),循环条件为95℃3min,98℃20s,60℃15s,72℃20s循环25次;在72℃下延伸5min;第二阶段PCR循环条件为95℃3min,然后在95℃30s, 55℃30s,72℃30s下循环15次,在72℃下延伸5min;样品与磁珠按照1:1.5 混匀后进行磁珠筛选片段,25μL洗脱;将纯化后的产物进行Nanodrop 2000定量后,按照质量比1:1进行混样;1.8%的琼脂糖凝胶,120V 40min电泳后,切目的片段,并回收。然后,基于高通量测序(Illumina HiSeq测序平台),利用双末端测序(PE 250)的方法,构建小片段文库进行测序;序列以97%的识别阈值聚类,使用USEARCH/UCHIME进行嵌合体去除;所得到的OTU序列利用Silva 参考文件在Mothur中进行分类(置信阈值为80%),去除真核生物、古菌、线粒体和质体序列以及在结构域水平上未分类的序列;使用FastQC对样品序列数进行质量检查,裁剪低质量区域,只保留Q 30(>90%)的序列。最后,使用BBmerge对序列进行拼接。结果如表5所示。
表5样品测序结果统计
注:GC(%)表示样品G和C类型碱基占总碱基的百分比;Q20(%)表示质量值大于等于20的碱基占总碱基数的百分比;Q30(%)表示质量值大于等于 30的碱基占总碱基数的百分比;有效率(%)表示有效序列数占原始序列数的百分比。
实施例4生物信息学分析
16S rDNA高通量测序可获得样品的的生物信息学分析:(1)OTU(OperationalTaxonomic Unit,OTU),又称为分类操作单元,是人为给某一个分类单元(品系,种,属,分组等)设置的标志,使用Usearch软件对样品序列在97.0%的相似度水平下进行聚类,得到相应样品的OTU的个数,表示样品一定的丰富度。 (2)菌群分类学组成分析:在界、门、纲、目、科、属和种等不同层次进行分类;通过LEfSe分析,即Line Discriminant Analysis(LDA)Effect Size,从门到属不同水平一起比较评分,纵坐标是有显著性差异的不同的物种水平菌群,横坐标直观的显示其评分值,评分值与差异大小呈正相关,表示组别之间的菌群结构组成的差异。
菌群OTU丰度:
根据图4结果可知,12个样本整体OTU数目差别不大,即各组在OTU丰富度上无显著差异。
Venn图是展示样品之间共有、特有的OTU数目,表示样品间OTU的重合情况。由图5可以看出:HD和ND共有的OTU数目为435个,NDABTE和ND共有的OTU数目为441个,HDABTE和ND共有的OTU数目为425个,其中,HDABTE 和ND共有OTU分类最少。HD和ND特有的OTU数目分别为15和10,NDABTE 和ND特有的OTU数目分别为14和4,HDABTE和ND特有的OTU数目分别为 13和20,HD、NDABTE两组特有的OTU数目比ND多,HDABTE的特有的OTU 数目比ND少。三组特有的OTU数目仅NDABTE组比ND组多。
不同分类水平上菌群的变化:
本实验中所有检测到的OTU共有13个门,23个纲,48个目,77个科,162 个属,177个种(见表6);其中HDABTE在纲和属水平上检测到的物种数略低于其他三组,但各组间均没有显著变化。
表6样品各等级物种统计表
表7四组样品门水平占高丰度的组成
注:F/B Ratio表示厚壁菌门与拟杆菌门的比值
LEfSe分析:
LEfSe分析即Line Discriminant Analysis(LDA)Effect Size,从门到属不同水平一起比较评分,纵坐标是有显著性差异的不同物种水平菌群,横坐标直观地显示其评分值,评分值与差异大小呈正相关。
从LEfSe分析结果可知(图6),ND组拟杆菌属和普雷沃氏菌科与HD组有显著性差异。NDABTE与ND相比(图7)共有17个显著性差异菌。NDABTE组肠杆菌科、变形菌门显著多于ND组;而ND组疣微菌门、拟杆菌属、乳杆菌属、理研菌属显著多于NDABTE组。HDABTE与ND相比(图8)共有14个显著性差异菌。ND组理研菌属、普雷沃氏菌科、链球菌科显著多于HDABTE组,而HDABTE 组微球菌、放线菌科、拟杆菌目显著多于ND组。
讨论:
本实验中OTU丰度和Venn图的结果显示,三种处理均在一定程度上影响了肠道菌群的分类。由OTU个数分布图可知,各组的OTU数目差别不大,表明HFD、30%ABTE和HFD+30%ABTE三种处理对肠道菌群在群落丰富度水平上没有显著的扰乱情况;Venn图结果显示了HFD、30%ABTE和HFD+30%ABTE三组间特有的 OTU数目,表明不同处理在一定程度上影响了小鼠肠道菌群的分类。
肠道菌群的主要成分是厚壁菌门和拟杆菌门,其次是变形菌门和放线菌门。有研究显示HFD小鼠饲喂1%和5%赤小豆提取物13周后,HD组肠道中拟杆菌门下降、而HDABTE组中拟杆菌门增加,另有研究发现拟杆菌门与胆汁酸代谢、胆固醇代谢及肠道的正常生理功能维护有关,拟杆菌产生的小型短链脂肪酸是一种对大鼠脑组织有重要影响的代谢产物。本实验中表7的门水平结果显示,在所有处理组中,拟杆菌门是第一丰度菌,其中HDABTE组的拟杆菌门所占百分比明显增加,而HD组和NDABTE组下降,与相关文献一致,提示赤小豆提取物可提高拟杆菌门的丰富度,对改善机体健康有积极影响。
本实验根据LEfSe分析结果发现,与ND组相比,HD组拟杆菌属、普雷沃氏菌科丰度明显下降,表示HD明显降低了小鼠肠道菌群的丰度;而HDABTE组增加了拟杆菌目含量,表示赤小豆提取物对HFD引起的拟杆菌目的丰度降低可能有恢复作用,对维持肠道内正常菌群丰度有积极的作用。
本实验以HFD诱导ICR雄鼠为实验动物,通过16S r DNA基因测序分析肠道菌群的变化,探讨赤小豆提取物对高脂饮食小鼠肠道菌群的影响。实验结果显示,与ND组相比,HD组体脂率显著上升;厚壁菌门与拟杆菌门的比率及乳酸杆菌和嗜黏蛋白阿克曼菌的比例有明显变化,表明HFD可扰乱肠道菌群平衡,而赤小豆提取物对改善HFD导致的小鼠肠道菌群失衡有重要影响,提示可通过增加饮食中赤小豆提取物的含量,调控小鼠体内肠道菌群,降低体脂率进而减轻体重。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述,每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处,各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
对所公开的实施例的上述说明,使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对上述实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的,本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下,在其它实施例中实现。因此,本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例,而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
Claims (7)
1.一种赤小豆提取物,其特征在于,其制备步骤如下:
将赤小豆与蒸馏水按100g/L的比例浸泡6-12h,沸水煮豆1-2h,转小火煮豆至豆沙状即可,得赤小豆提取物。
2.如权利要求1所述的一种赤小豆提取物,其特征在于,所述沸水煮豆的功率为2200瓦。
3.如权利要求1所述的一种赤小豆提取物,其特征在于,所述小火煮豆的功率为800-1000瓦。
4.一种减肥代餐产品,其特征在于,包括:70%餐食和30%赤小豆提取物。
5.如权利要求4所述的减肥食品的制备方法,其特征在于,步骤如下:
将赤小豆与蒸馏水按100g/L的比例浸泡6-12h,小火煮至豆沙状,得赤小豆提取物,趁热将赤小豆提取物按比例加入餐食中,烘干后,得减肥食品。
6.如权利要求5所述的减肥食品的制备方法,其特征在于,所述烘干的温度为75-95℃。
7.如权利要求5所述的减肥食品的制备方法,其特征在于,所述烘干的时间为8-12h。
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CN113080449A (zh) * | 2021-05-14 | 2021-07-09 | 刘爱华 | 一种降糖、降脂、降血粘的纯天然植物固体代餐包 |
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Title |
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张雪梅等: "红小豆加工利用研究进展", 南方农业, vol. 13, no. 7, pages 206 - 55 * |
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